CZ300505B6 - Vakcinacní prípravek - Google Patents
Vakcinacní prípravek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ300505B6 CZ300505B6 CZ20013195A CZ20013195A CZ300505B6 CZ 300505 B6 CZ300505 B6 CZ 300505B6 CZ 20013195 A CZ20013195 A CZ 20013195A CZ 20013195 A CZ20013195 A CZ 20013195A CZ 300505 B6 CZ300505 B6 CZ 300505B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- xaa
- seq
- gly
- leu
- name
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 23
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 abstract description 20
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 abstract description 11
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 abstract description 4
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 84
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 84
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 60
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 25
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 23
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 101710147327 Calcineurin B homologous protein 1 Proteins 0.000 description 15
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 15
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 15
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 13
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 5
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 5
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- IWAVRIPRTCJAQO-HSHDSVGOSA-N Thr-Pro-Trp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O IWAVRIPRTCJAQO-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 3
- HIINQLBHPIQYHN-JTQLQIEISA-N Tyr-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HIINQLBHPIQYHN-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- WOAQYWUEUYMVGK-ULQDDVLXSA-N Tyr-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WOAQYWUEUYMVGK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 3
- SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N Tyr-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 2
- TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N Ala-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- NOGFDULFCFXBHB-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N NOGFDULFCFXBHB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N Gly-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 2
- -1 IDS Species 0.000 description 2
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 2
- FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N Ile-Leu-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N Ile-Tyr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 2
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N Pro-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N 0.000 description 2
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- LDMUNXDDIDAPJH-VMBFOHBNSA-N Trp-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N LDMUNXDDIDAPJH-VMBFOHBNSA-N 0.000 description 2
- NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N Tyr-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N 0.000 description 2
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N (2S,3S)-2-[[[(2S)-1-[(2S,3S)-2-amino-3-methyl-1-oxopentyl]-2-pyrrolidinyl]-oxomethyl]amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N (4-hydroxyphenyl) [4-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)phenyl] hydrogen phosphate Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OP(O)(=O)OC1=CC=C(C2C3=CC=CC=C3C(=O)O2)C=C1 ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N Ala-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N 0.000 description 1
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N Ala-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 1
- PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N Arg-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N Arg-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FFEUXEAKYRCACT-PEDHHIEDSA-N Arg-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(O)=O FFEUXEAKYRCACT-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- DRDWXKWUSIKKOB-PJODQICGSA-N Arg-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DRDWXKWUSIKKOB-PJODQICGSA-N 0.000 description 1
- YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N Arg-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)=CNC2=C1 YHZQOSXDTFRZKU-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- LTZIRYMWOJHRCH-GUDRVLHUSA-N Asn-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LTZIRYMWOJHRCH-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 1
- BYLSYQASFJJBCL-DCAQKATOSA-N Asn-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BYLSYQASFJJBCL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RTXQQDVBACBSCW-CFMVVWHZSA-N Asp-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RTXQQDVBACBSCW-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 102100028717 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Human genes 0.000 description 1
- 101710095312 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- OCQUNKSFDYDXBG-QXEWZRGKSA-N Gly-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OCQUNKSFDYDXBG-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N Gly-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- KCTIFOCXAIUQQK-QXEWZRGKSA-N Ile-Pro-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O KCTIFOCXAIUQQK-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BAJIJEGGUYXZGC-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N BAJIJEGGUYXZGC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N Leu-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N Leu-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N Leu-Val-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NLOZZWJNIKKYSC-WDSOQIARSA-N Lys-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 NLOZZWJNIKKYSC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- JYXBNQOKPRQNQS-YTFOTSKYSA-N Lys-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JYXBNQOKPRQNQS-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N Lys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N Lys-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- MJQFZGOIVBDIMZ-WHOFXGATSA-N Phe-Ile-Gly Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)O MJQFZGOIVBDIMZ-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- KBVJZCVLQWCJQN-KKUMJFAQSA-N Phe-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KBVJZCVLQWCJQN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 244000126010 Pithecellobium dulce Species 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N Pro-Thr-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RMJZWERKFFNNNS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O GSCVDSBEYVGMJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N Thr-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YCQXZDHDSUHUSG-FJHTZYQYSA-N Trp-Thr-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)=CNC2=C1 YCQXZDHDSUHUSG-FJHTZYQYSA-N 0.000 description 1
- RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N Tyr-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N Val-Gly-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000006229 carbon black Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108010032806 molgramostim Proteins 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Information Retrieval, Db Structures And Fs Structures Therefor (AREA)
Abstract
Vakcinacní prípravek obsahující peptidy SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 11 a SEQ ID NO: 18, kde koncové skupiny techto sekvencí jsou volné karboxylové skupiny nebo aminoskupiny, amidové skupiny, acetylové skupiny nebo jejich soli, spolecne s farmaceuticky prijatelným redidlem a prípadne s adjuvans, nosicovou látkou a/nebo vehikulem a prípadne další imunostimulacní slouceninou nebo slouceninami. Rešení využívá nových a modifikovaných peptidu schopných indukovat HIV-1 specifickou imunitní odpoved bez pusobení proti aktivite cytotoxických T lymfocytu, címž se získá úcinná profylaktická a terapeutická vakcína proti HIV.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká vakcinačního přípravku na bází nových a modifikovaných peptidů. S řešením podle předmětného vynálezu souvisí nové peptidy založené na konzervativních oblastech HIV gag p24, antigeny ve volné formě nebo ve formě navázané na nosič obsahujících alespoň jeden z uvedených peptidů, soupravy pro imunotesty a také způsob detekce protilátek indukovaných humánním virem selhání imunity (HIV) nebo HlV-specifickými peptidy používající tyto antigeny.
Dosavadní stav techniky
V této oblasti zdravotnictví je nezbytně nutné dostat pod kontrolu epidemii infekce HIV, a tudíž jedním z hlavních cílů výzkumu AIDS je vývoj vakcíny proti HIV. Obecně by vakcíny měly aktivovat buňky prezentující antigen, překonat genetickou restrikci reakce T lymfocytů a podpořit vznik T a B paměťových buněk. Variabilita virové populace vytváří další překážky pro získání účinné HIV vakcíny. Ve stále pokračujících pokusech vyvinout vakcínu proti AIDS zatím nebyl oznámen zásadní zvrat. Obecně se uznává, že pro vývoj účinné profylaktické a terapeutické vakcíny je rozhodující indukce antigen-specifické imunity a imunity zprostředkované buňkami. Pro ochranu imunity k HIV jsou potřebné všechny tři složky imunitního systému včetně neutralizačních protilátek, buněk CD8+CTL a pomahačských (cytotoxických) buněk T-l (THl). Je známo, že CTL mohou odstranit z krve jiné virové infekce (Ada, Immunol. Cell Biol., 72, 447—454, 1994) a že CTL mohou lyžovat infikované cíle časně v průběhu infekce před produkcí dalších generací viru a jejich uvolněním buněčnou lýzou (Ada a kol., výše). Středem pozornosti byla selekce anti genů, a také návrh a hodnocení různých adjuvans. V rozmanitých in vitro a in vivo studiích se používaly všechny antigeny, od surových proteinů k různým syntetickým peptidům, hlavně zgpl60 a do určitého stupně také zp24. Velký počet studií byl prováděn se smyčkou V3 z gpl20. Byly indukovány odpovědi jak B, tak T lymfocytů, ale na základě in vitro studie bylo publikováno, že peptid z konzervativní oblasti gp41 vykázal zesílení infekce (Bell S. J„ a kol., Clin. Ex Immunol., 87 (1), 37-45, leden 1992).
Přirozeně se vyskytující sekvence HIV v uvažovaných vakcínách nejsou schopné stimulovat trvalou imunitní reakci díky základní schopnosti virů ukrýt se tak, že změní výskyt epitopů přítomných na povrchu infikovaných buněk. Imunitní systém je oklamán a věří, že konkrétní aminokyselinová sekvence je důležitá, ale ve skutečnosti jsou důležité aminokyseliny schovány.
Nedávná studie protilátkových titrů proti proteinu gag p24 ukázala, že pomalá progrese vývoje k AIDS je spojena s vysokými titry, zatímco rychlá progrese vývoje k AIDS se sdružuje s titry nízkými. Bylo ukázáno, že u osob s nízkým titrem protilátky p24 se rozvíjel AIDS významně rychleji, než u osob s vysokými titry protilátky p24 (Zwart G., a kol., Virology, 201, 285-93, červen 1994), což indikuje, že p24 může mít významnou úlohu v kontrole rozvoje AIDS.
Nové peptidy HIV p24 byly popsány v publikované mezinárodní patentové přihlášce WO91/13360, kde jsou peptidy používány v metodě rozlišující mezi falešně a správně diagnostikovanými HlV-pozitivními vzorky séra.
Autoři Johnson R. P. a kol. (Journal of Immunology, díl 147, 5, 1512-1521, 1. září, 1991) analyzovali jemnou specificitu mezi gag-speciílckými CTL-reakcemi u tří HIV-1 séropozitivních osob, bylo zjištěno, že gag-specifické CTL-reakce byly zprostředkovány lymfocyty CD3+CD8+, které na svém povrchu mají pouze molekuly HLA třídy I.
- 1 CZ 300505 B6
Evropský patent EP-A 0 356 007 popisuje antigenní determinanty, týká se zejména syntetických polypeptidových sekvencí, které se vztahují k proteinům vyskytujícím se v HIV-1 a které mohou být použity jako základ pro potenciální vakcínu proti AIDS.
Autoři Rosenberg E. S. a kol. (Science, díl 278, 144 7-1450, 21. listopad, 1997) popisují, že pro virus specifické CD4+ T pomahačské lymfocyty jsou rozhodující pro udržování účinné imunity ucelé řady chronických virových infekcí, ale jsou charakteristicky nedetekovatelné u chronické infekce lidským virem selhání imunity typu 1 (HIV-1). HIV-1 specifická proliferativní odpověd1 na p24 byla nepřímo úměrná množství viru. Autoři uzavřeli, že HIV-1 specifické pomahačské buňky budou pravděpodobně důležité pro imunoterapeutické zásahy a vývoj vakcín.
Patenty EP 0 230 222, EP 0 270 114, DE 3711016a GB 2 188 639, všechny F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, se týkají rekombinantní exprese a purifikace proteinu nebo fúzních proteinů HTLVIII Gag/Env genu. Proteiny obsahující nativní sekvence mohou být purifikovány do homogenity a použity jako základ pro diagnostické testy pro detekci protilátek proti virům sdruženým s AIDS. Protein gag/env může být také formulován pro použití jako vakcína na ochranu proti AIDS pomocí profytaktické imunizace.
Z diagnostického a terapeutického hlediska jsou hlavní problémy s použitím p24 jako částí testu nebo léčby spojeny s vysokým počtem epitopů pro p24, které stimulují produkci velkého množství protilátek se slabou specifickou, což při opakovaných upomínacích dávkách potenciálních mutovaných sekvencí může vyvolat vznik protilátek (Autoantibodies to alfa/beta T-cell receptors in HIV infection; dysregulation and mimicry. Lake D. F., a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 23, 10849-53, 8. listopad, 1994). Dále bylo publikováno, že titr protilátky p24 nedosahuje stejně vysoké hladiny jako titr pro obalové proteiny (gpl20 a gp41). Normálně jsou protilátky proti p24 tvořeny ve velmi časné fázi infekce, ale po počátečním infekčním období je titr dosti rychle stabilizován. Později se titr p24 postupně snižuje, zatímco pro gpl60 platí opak. Tato zjištění se mohou také vztahovat k nedávným publikacím uvádějícím, že přirozeně se vyskytující varianty HIV-1 gag působí proti cytotoxické aktivitě T lymfocytů (Klenerman, a kol., Nature, 2:369 (6479), 355, 2. červen, 1994). To může být jeden z důvodů, proč je pozorována rychlá stabilizace titru p24 a proč později začíná klesat.
Podstata vynálezu
Vynález se týká vakcinačního přípravku, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje peptidy SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 11 a SEQ ID NO: 18, kde koncové skupiny těchto sekvencí jsou volné karboxylové skupiny nebo aminoskupiny, amidové skupiny, acetylové skupiny nebo jejich soli, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem a případně s adjuvans, nosičovou látkou a/nebo vehikulem a případně další imunostimulační sloučeninou nebo imunostimulačními sloučeninami.
Ve výhodném provedení tohoto vakcinačního přípravku podle předmětného vynálezu jsou peptidy rozpuštěny ve slaném vodném roztoku a případnou imunostimulační sloučeninou je granulovaný makrofágový růstový faktor.
Podle dalšího provedení podle předmětného vynálezu tato kompozice obsahuje adjuvans vybraný ze skupiny zahrnující Monofosforyl Lipid A (MPL®), Freundovo úplné nebo neúplné adjuvans a hydroxid hlinitý.
Na základě zjištění podle dosavadního stavu techniky se autoři předmětného vynálezu rozhodli zkoumat možnost návrhu přípravy syntetických peptidů, které mohou napodobit epitop p24 bez působení proti aktivitě cytotoxických T lymfocytů, aby se vyhovělo potřebě účinné profylaktické a terapeutické vakcíny.
-2 CZ 300505 B6
Výchozí práce byla založena na epitopu, který byl publikován autory Korber B. a kol. (Human Retroviruses and AIDS, 1997, vyd. Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, NM). Aminokyselinová sekvence tohoto epitopu (203-222) byla:
KAL GPGATLEEMMTACQGVG RRMRTK SIKD LSSS R R
G V R V
S AR
S E
Q Q
Jednopísmenné, a také třípísmenné kódy definující aminokyseliny v sekvencích uváděných v tomto popisu jsou používány podle mezinárodních standardů a uváděny v učebnicích (například Lehninger A. L., Princ iples of Biochemistry, Worth Publishers lne., New York, 1982). Aminokyseliny uvedené pod hlavní sekvencí představují přirozené varianty této sekvence.
Výchozí studie sekvence obsahující tento modifikovaný epitop byla prováděna na sekvenci:
ANPDCKQILKSLGPGATLEEXXTACQGV G-NH2
I____I kde X označuje kyselinu 2-aminohexanovou a cysteinové zbytky jsou v oxidovaném stavu, tj. tvoří vnitrořetězcový disulfidový můstek. Výsledky (nepublikováno) ze studie používající tento peptid jako část diagnostické soupravy ukázaly, že specifická byla 87% (n=279) na předem vybraném panelu afrických sér. Citlivost byla překvapivě 100% na panelu HIV-1 pozitivních sér včetně sér HIV-1 subtypu O, který se zcela liší od jiných subtypů.
Aby se zlepšila specifická, tj. definovaly aminokyseliny, které přispívají k čisté protilátkové odpovědi bez zkřížené reakce, byla aplikována podobná studie na významně kratší a dále modifi20 kovaný peptid:
LIWGATCQEHXTACQGVG-NHa
1_ I kde X má výše uvedený význam a cysteinové zbytky tvoří vnitrořetězcový disulfidový můstek.
Výsledky z této studie ukázaly, že specifická testu se zvýšila na 96 % (n=293), což je podobné 25 specifické získané v testu, který nepoužíval peptid p24. Při specifické 87 % v testu používajícím první peptid, je pravděpodobné, že kdyby byl peptid použit jako uvažovaná vakcína, indukoval by imunitní reakci na více než jeden epitop, protože by byl rozpoznáván nespecifickými protilátkami. Ale druhý uvedený peptid prokázal, že peptidová sekvence vyvolává imunitní reakci, která je unikátní pro HIV-1. Tudíž, je-li sekvence založená na této sekvenci použita jako antigen v uvažované vakcíně, posiluje s největší pravděpodobností unikátní imunitní odpověď na HIV-1.
Aby se dále zvýšil počet epitopů T lymfocytů a snížila se pravděpodobnost vyvinutí únikových (escape) mutant, byly tři další peptidové sekvence založeny na následujících třech sekvencích ze zbytků 264-284, 253-271 a 166-186, vdaném pořadí (publikovaných v Human Retroviruses and AIDS, 1997, A Compilation and Analysis ofNucleic Aeid and Amino Aeid Sequences. Vyd. Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos):
-3CZ 300505 B6
RWI ILGLNKIVRMYS
KGVVM MK C
D Μ V V Q
P T S I L D V G E
X G
S A
NNPPIPVGEIYKRWI S Q A V KDMLRKGM GGSN KV DV
H G T
A
P
PEVIPMFSALSEGAT RITTTLTE AD I
L N A L V
M L
Aby se zjistily unikátní sekvence, které jsou specifické pro syntetizováno několik modifikovaných peptidů.
P Q D L N T
S Y N I Y M
Η V I
A V
HIV-1 a citlivé na HIV-1, bylo
Peptidy podle vynálezu pocházejí ze čtyř odlišných konzervativních oblastí jádrového proteinu p24 z HIV-1, jak bylo popsáno výše, s vlastnostmi zachovávajícími jedinečnost (senzitivitu a specificitu) epitopu HIV-1. Kromě toho nové peptidy podle vynálezu nemají antagonistický účinek k rozpoznávání cytotoxickými T lymfocyty (CTL) a mají alespoň jeden potenciální CTL epitop.
Peptidy podle vynálezu, které splňují uvedená kritéria, jsou vybírány z následujících skupin:
Xaaj Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Ala Xaa8 Xaa9 Gin Thr Pro Trp Xaai4 Xaa15 Xaa16 Xaai7 Xaai8 Val Xaa2o (sekv. id. č. 1)
-4CZ 300505 B6 kde aminokyseliny řetězce mohou mít následující význam:
Xaa v poloze 1 peptidového derivátu je Lys nebo Arg, Xaa v poloze 2 je Ala, Gly, Ser nebo Arg,
Xaa v poloze 3 je Leu nebo Met,
Xaa v poloze 4 je Gly nebo Arg,
Xaa v poloze 5 je Pro, Thr, Val, Ser, Gin nebo Ala,
Xaa v poloze 6 je Gly, Ala, Lys, Arg, Gin nebo Glu,
Xaa v poloze 8 je Thr nebo Ser,
Xaa v poloze 9 je Leu nebo Ile,
Xaa v poloze 14 Xaa v poloze 15 Xaa v poloze 16 je Thr, Ser nebo je Ala nebo Ser, je Cys nebo Ser,
Val,
Xaavpoloze 17 je Gin nebo Leu
Xaa v poloze 18 je Gly, Glu nebo Arg,
Xaa v poloze 20 je Gly nebo Arg, kdy peptid obsahuje alespoň devět po sobě jdoucích aminokyselin sekvence ze sekv. id. ě. 1, Xaa! Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly] n Xaai2 Xaa13 Tyr Xaa15 Pro Xaai7 Xaaie Ile Leu Xaa21 Xaa22 (sekv. id. č. 4) kde aminokyseliny řetězce mají následující význam:
| Xaa | v | poloze | 1 | je Arg, | Lys, | Asp | nebo | žádná |
| Xaa | v | poloze | 2 | je Trp, | Gly, | Lys | nebo | Arg, |
| Xaa | v | poloze | 3 | je Ile, | Leu, | Val | nebo | Met |
| Xaa | v | poloze | 4 | je Ile, | Val nebo | Leu | ||
| Xaa | v | poloze | 5 | je Leu, | Met, | Val | nebo | Pro |
| Xaa | v | poloze | 12 | : je Arg, | r Lys | |||
| Xaa | v | poloze | 13 | je Met | nebo | Leu, | ř |
Xaa v poloze 15 je Ser, Cys nebo Gin,
Xaa v poloze 17 je Thr, Val, Ile, Ser nebo Ala,
Xaa v poloze 18 je Ser, Gly nebo Thr,
Xaa v poloze 21 je Asp, Glu, Cys nebo Gly,
Xaa v poloze 22 je Gly nebo Žádná,
-5CZ 300505 Bó kde sekvence ze sekv. e. č. 4 obsahuje alespoň šest po sobě jdoucích aminokyselin an-0. 1,2 nebo 3,
Xaa2 Xaa2 Xaa3 Pro Ile Pro Xaa? Xaa$ Xaa9 Xaa10 Xaan Xaal2 (Gly]n Xaa13 Xaa14 Xaa. 15 Xaa3g Xaai7 Xaaie Xaais Xaa2o Xaa2? Xaa22 Xaa23 Xaa24 (sekv. id. č. 9) kde Xaa v poloze 1 je Asn, Ser, Gly, His, Ala, Pro, Arg nebo žádná
Xaa v poloze 2 je Asn, Ala nebo Lys
Xaa v poloze 3 je Pro, Gin, Gly, Ile nebo Le.u
Xaa v poloze 7 je Val nebo Ala
Xaa v poloze 8 je Gly nebo Lys
Xaa v poloze 9 je Glu, Asp, Lys, Phe nebo Thr
Xaa v poloze 10 je Ile, Met, Val nebo Leu
Xaa v poloze 11 je Tyr, Leu nebo žádná
Xaa v poloze 12 je Ser nebo žádná
Xaa v poloze 13 je Arg nebo žádná
Xaa v poloze 14 je Asp, Arg, Trp, Ala nebo žádná
Xaa v poloze 15 je Ile nebo žádná
Xaa v poloze 16 je Tyr nebo žádná
Xaa v poloze 17 je Lys nebo Arg
Xaa v poloze 18 je Arg, Lys nebo Asp
Xaa v poloze 19 je Trp nebo Gly
Xaa v poloze 20 je Ile, Met, Val, Gin nebo Ala
Xaa v poloze 21 je Ile, Val· nebo Ala
Xaa v poloze 22 je Leu, Met nebo Val
Xaa v poloze 23 je Gly nebo Cys
Xaa v poloze 24 je Leu nebo žádná kde sekvence ze sekv. id. č. 9 obsahuje alespoň šest po sobě jdoucích aminokyselin an - 1. 2 nebo 3,
Xaa! Xaa2 Ile Ile Xaa5 Xaafi Xaa? Xaa8 Xaa9 Leu Xaan [Gly]n [Arg](n XaaL3 Xaa^ Xaaxs Xas^ Xaai7 Xaai8 Xaaig Xaa2o Xaa23 Xaa22 Xaa23
Xaa24 Xaa25 (sekv. id. č. 15)
-6 CZ 300505 B6 kde Xaa v poloze 1 je Pro, Lys, Arg nebo žádná
Xaa v poloze 2 je Glu, Arg, Phe nebo Lys
Xaa v poloze 5 je Pro nebo Thr
Xaa v poloze 6 je Met, Thr nebo Nleu
Xaa v poloze 7 je Phe nebo Leu
Xaa v poloze 8 je Ser, Thr, Ala nebo Met
Xaa v poloze 9 je Ala, Glu nebo Leu
Xaa v poloze 11 je Ser nebo žádná
Xaa v poloze 12 je Ala, Arg nebo žádná
Xaa v poloze 13 je Ile, Leu nebo žádná
Xaa v poloze 14 je Ser, Ala, Leu nebo žádná
Xaa v poloze 15 je Tyr, Glu nebo Asp
Xaa v poloze 16 je Gly nebo Asp
Xaa v poloze 17 je Ala nebo Leu
Xaa v poloze 18 je Thr, Ile, Val, Leu nebo Asn,
Xaa v poloze 19 je Pro, Thr nebo Ser
Xaa v poloze 20 je Tyr, Phe, Nleu, His nebo Gin
Xaa v poloze 21 je Asp, Asn, Leu nebo Ala
Xaa v poloze 22 je Leu, Ile, Val nebo Asn
Xaa v poloze 23 je Asn, Tyr, Cys nebo Gly
Xaa v poloze 24 je Thr, Met, Ile, Ala, Val nebo žádná
Xaa v poloze 25 je Gly nebo Žádná, kde sekvence ze sekv. id. č. 15 obsahuje alespoň šest po sobě jdoucích aminokyselin, n = 1, 2 nebo 3 a m = 0, 1,2 nebo 3, koncové skupiny sekvencí mohou být volné karboxylové skupiny nebo aminoskupiny, amidy, acylové skupiny, acetylové skupiny nebo jejich soli, dva nebo více zbytků Cys mohou tvořit část vnitrořetězcové nebo meziřetězcové disulfídové io vazby, můstek -S-fCFDp-S-nebo -(CH2)P- kde p = 1 až 8, volitelně s vloženým jedním S a/nebo jsou uvedené peptidové sekvence imobitizovány na pevném podkladu.
Nové peptidové sekvence jsou schopné posloužit jako dobrý antigen v případech, kdy antigen obsahuje alespoň jeden peptid vybraný ze skupiny sekvencí sekv. id. č. 1, sekv. id. č. 4, sekv.
id. č. 9 nebo sekv. id. č. 15. Antigenicita může být upravována pomocí nastavení poměru nebo koncentrací různých peptidů nebo úpravou velikosti peptidů například dimerizací nebo polymerizací a/nebo imobilizací na pevné fázi. Antigen obsahuje dvě nebo více polypeptidových sekvencí podle vynálezu, které jsou buď spojeny můstkem, například di sulfidovým můstkem mezi zbytky Cys řetězců nebo můstky jako je například alkylenová skupina obsahující jeden až osm atomů uhlíku s možným vložením jednoho nebo více heteroatomů jako O, S nebo N, nebo jsou výhodně nespojeny. Řetězce mohou být imobilizovány na pevné fázi v monomemí, dimemí
-7 CZ 300505 B6 nebo oligomemí formě. Další aminokyseliny mohou být přidány ke koncům, aby se získalo „ramen ko“ usnadňující imobilizaci.
Všechny aminokyseliny v peptidech podle vynálezu mohou být buď v D-, nebo v I.-formě, ačkoliv jejich výhodná přirozeně se vyskytující L-forma.
C- a N-koncovč části peptidových sekvencí se mohou lišit od přirozených sekvencí modifikací koncové NH2-skupíny a/nebo COOH-skupiny, mohou být například acylovány, acetylovány, amidovány nebo modifikovány za vzniku vazebného místa pro nosič nebo jinou molekulu.
Peptidy podle vynálezu se skládají ze 6 až 50 aminokyselin, výhodně z 10 až 3 aminokyselin. Pokrývají všechny přirozené varianty aminokyselin v identifikovaných polohách.
Polypeptidový antigen podle vynálezu je buď ve volné formě, nebo vázaný na nosič. Nosič nebo pevná fáze, ke kterým je peptid volitelně navázán, mohou být vybrány z celé rady známých nosičů. Měly by být vybírány s ohledem na zamýšlené použití i mobilizovaného peptidu jako diagnostického antigenu nebo jako imunizující složky ve vakcíně.
Příklady nosičů, které mohou být použity pro např. diagnostické účely, jsou magnetické perličky nebo latexové perličky z kopolymerů, jako jsou například styrendivínylbenzen, hydroxylovaný styrendivinylbenzen, polystyren, karboxylovaný polystyren, perličky z karbonové černi, neaktivované nebo polystyrenem či póly viny leh loridem aktivované sklo, epoxidem aktivované porézní magnetické sklo, želatinové nebo póly sacharidové částice nebo jiné proteinové částice, červené krvinky, mono— nebo polyklonální protilátky nebo fab fragmenty těchto protilátek.
Podle dalšího provedení mohou antigeny tvořit část vakcíny eventuálně kombinované s nosiči, adjuvans nebo kombinované s dalšími imunostimulačními prvky, jako je například virus „ptačího moru nesoucí env. gen, Příklady nosičů a/nebo adjuvans pro vakcinační účely jsou jiné proteiny, jako je například lidský nebo bovinní sérový albumin a hemocyanin přílipky, lmunostimulační látky mohou být rozděleny do tří skupina: adjuvans, nosiče antigenů a vehikula. Příklady adjuvans zahrnují hydroxid hlinitý, soli hliníku, saponin, muramyldi- a tripeptidy, monofosforyllipid A, B. pertissis a různé cytokiny včetně Thl cytokinů IL—12 a IL—1. Pro přenesení procházejících proteinů přes buněčné membrány do cytosolu může být použito velké množství proteinových toxinů, které jsou použitelné při vývoji CTL vakeín. Nosiče zahrnují bakteriální toxoidy, jako jsou například inaktivovaný tetanický a cholerový toxin, geneticky detoxifikované bakteriální toxiny, jako je například tepelně labilní enterotoxin zE. coli, mastné kyseliny, živé vektory, jako jsou například polio chiméry a hybridní proteiny, které tvoří částice, například kvasinkové retrotransposonové hybridní částice TY a částice HBcAg. Vehikula, která jsou často se vyskytující složky moderních vakeín, se skládají z emulze minerálního oleje, Freundova kompletního (úplného) a nekompletního (neúplného) adjuvans, emulzí rostlinných olejů, neiontových blokových kopolymerových surfaktantů, skvalenu nebo skvalenu, lipozomů a biologicky degradovatelných mikrosfér. Dvě nová adjuvans, která mají významný potenciál pro vývoj nových vakeín, zahrnují mikroemulzi typu olej ve vodě (MF59) a polymerové mikročástice. Může být použita každá látka, která může zesílit imunogenicitu antigenu, a několik dalších alternativ nosičů nebo adjuvans je uvedeno v lékopise LSA nebo Evropském lékopise.
Vhodná formulace antigenu pro imunostimulační použití může také zahrnovat interferony, jako je například INF-γ, antivirové chemokiny nebo chemopoetické růstové faktory, jako je například granulocytový a makrofágový růstový faktor.
Další přístup pro zvýšení stimulace a absorpce například ve střevě je podávání peptidů podle vynálezu s malými primery jako jsou di- tri- nebo tetra-peptidy. Tyto peptidy mohou být podávány jako přídavek k peptidům podle vynálezu nebo v kombinaci s nimi. Výhodně jsou peptidy podávány spolu s tripeptidem YGG, skládající se z aminokyselin v D- nebo L-formě, výhodně v D-formě.
- 8 CZ 300505 B6
Nedávné postupy pro neparenterální podávání vakcín, například přes sliznice, zahrnují: technologii fúze genů pro vytvoření netoxických derivátů slizničních adjuvans, geneticky inaktívované antigeny s delecí esenciálního genu, společnou expresi (koexpresi) antigenu a specifického cyto5 kinu, kteráje důležitá v modulaci a kontrole slizniční imunitní reakce a samotný genetický materiál, který by umožnil vychytávání DNA nebo RNA a jejich endogenní expresi v buňkách příjemce.
Jedním z postupů pro rozvinutí trvalé reakce, kdy je vyžadována imunita zprostředkovaná buň10 kami, je vakcinace plazmidovou DNA kódující jeden nebo více specifických antigenů.
Aby chránily proti infekci HIV, měly by vakcíny indukovat jak slizniční, tak systémovou imunitní reakcí a měly by být podávány každým obvyklým způsobem, parenterálně nebo neparenterálně, jako například subkutánně, intrakutánně, intravenózně, intramuskulámě, perorálně, přes sliznice nebo intranazálně.
Vakcína představující postatu řešení podle předmětného vynálezu obsahuje antigeny: RALGPAATLQTPWTASLGVG - NH2 (sekv. id. č- 3)
RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG - NH2 (sekv. id. č. 6)
RAI PI PAGTLLSGGGRAIYKRTAILG- NH2 (sekv. id. č. II) a
rfiipniftalsggrrallygatpyaig-nh2 (sekv. id. č. 18) ,
Jedna se sekvencí obsahuje B buněčný epitop a aktivuje humorální imunitní systém, zatímco další sekvence se podílejí na epitopech CTL a pro dosažení zesílené vazby jsou navrženy změny aminokyselin provedené v rámci epitopu CTL. Další změny aminokyselin byly prováděny, aby se usnadnila syntéza peptidu a/nebo zvýšila rozpustnost peptidu.
Poznatky podle předmětného vynálezu je možno využít pro detekci protilátek indukovaných HIV-1 nebo HIV-1 specifickými peptidy nebo proteiny ve vzorku tělesné tekutiny s použitím uvedených antigenů, a pro vytvoření soupravy pro provádění imunotestu navrženého pro tuto detekci a protilátky schopné selektivní reakce s uvedenými antigeny.
Příprava peptidů
Peptidy podle vynálezu mohou být připravovány jakoukoliv známou metodou produkce lineární sekvence aminokyselin, jako jsou například technika rekombinantní DNA. Sekvence nukleové kyseliny, která kóduje peptid podle vynálezu nebo multimer uvedených peptidů, je zavedena do expresního vektoru. Vhodné expresní vektory jsou například plazmidy, kozmidy, viry a YAC (kvasinkový syntetický chromozom), které obsahují nezbytné kontrolní oblasti pro replikaci a exprexi. Expresní vektor může být stimulován k expresi v buňce příjemce. Vhodné hostitelské buňky jsou například bakterie, buňky kvasinek a savčí buňky.Tyto techniky jsou v oboru dobře známy a byly popsány například auto ty Sambrook a kol. (Molecular Cloning, A laboratory
Manual, Cold Spring Harbor Laboralory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold
-9CZ 300505 B6
Spring Harbor, 1989). Dalšími dobře známými technikami jsou degradace nebo syntéza kondenzací jednoho aminokyselinového zbytku s jiným zbytkem v tekuté fázi nebo výhodně na pevné fázi (pryskyřice), například takzvanou Merrifieldovou syntézou. (Viz například Barany a Merrifíeld v Peptides, Anály sis, Synthesis, Biology, díl 2, E. Gross a Meinhofer, vyd., Aead. Press, N.Y., 1980, Kneib-Coronier a Mul len, Int. J. Peptide Protein Res., 30, 705-739, 1987, a Fields a Noble, lni. J. Peptide Protein Res., 35, 161-214, 1990).
V případě, zeje potřebný spojený nebo cyklický peptid, je aminokyselinová sekvence, když jsou syntetizovány příslušné lineární aminokyselinové sekvence, vystavena chemické oxidaci, aby se dva cysteinové zbytky vjedné peptidové sekvenci nebo mezi dvěma peptidovými sekvencemi spojily nebo vytvořily kruh, (viz Akaji a kol., Tetrahedron Letter, 33, 8, 1073-1076, 1992). Obecný popis syntézy
Všechny peptidové deriváty připravené v příkladech uvedených níže byly syntetizovány na přístroji MiIligen 9050 Peptide Synthesizer s použitím standardního programu. Použitá pryskyřice byla Tenta Gel P RAM s teoretickou náloží 0,20 meq/g (RAPP POLYMERE GmbH, Tubíngen). Konečný produkt syntézy byl přes noc sušen ve vakuu. Peptid byl pak odštěpen od pryskyřice ošetřením s 90% kyselinou trífluoroctovou v přítomnosti 5% ethandithiolu a 5 % vody jako lapačů kyseliny (1,5 hodiny při teplotě místnosti). Pak byla pryskyřice filtrována a promyta na filtru další kyselinou trífluoroctovou (100%) (2 x 20 ml). Spojené filtráty byly odpařeny ve vakuu (vodní lázeň při teplotě místnosti) a zbytek byl triturován 200 ml ethyletheru a precipitovaný produkt byl odfiltrován. Pevná látka byla okamžitě rozpuštěna na filtru 100 ml ledové kyseliny octové a přidána do 1,5 1 20% kyseliny octové v methanolu a ošetřena 0,lM roztokem jódu v methanolu, dokud nezůstávala zbarvena slabě hnědě. Pak bylo přidáno 15 g iontoměniče Dowex 1 x 8 ve formě acetátu (Bio-Rad, Richmond, CA) a směs byla filtrována. Filtrát byl evaporován a zbytek byl z kyseliny octové lyofilizován. Produkt pak byl purifikován kapalinovou chromatografií s převráceným poměrem fází na koloně naplněné Kromasil(R) 100 - 5 C8 (EKA Nobel, Surte, Švédsko) ve vhodném systému obsahujícím acetonitril ve vodném roztoku 0,1% kyseliny trifluoroctové. Vzorky sbírané z kolony byly analyzovány analytickou vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) (Beckman System Gold, USA) v přístroji vybaveném kolonou KromasillR) 100-5 C8 (EKA Nobel, Surte, Švédsko). France obsahující čistou látku byly spojeny, rozpouštědlo bylo evaporováno a produkt byl z kyseliny octové lyofilizován. Na konečném produktu byla provedena finální analýza HPLC a struktura peptidů byla potvrzena analýzou aminokyselin a hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Všechny aminokyseliny použité během syntézy byly L-aminokyseliny a byly chráněny fluorenylmethoxy-karbonylovou skupinou na α-aminoskupině. Postranní řetězce byly chráněny takto:
Cys (Trt), Gin (Trt), Glu (OtBu), Thr (tBu).
Zkratky v závorkách jsou :
Trt= trifenylmethyl t-Bu = terč. butyl
OtBu = terč. Butylester
Deriváty aminokyselin byly dodány firmou Bachem AG, Švýcarsko.
-10CZ 300505 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava K A L G P G A T L Q T P W T A C Q G V G - NH2 (sekv.
5 id. č. 2)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): 87 % io
Příklad 2
Příprava RALGPAATLQTPWTASLGVG (sekv. id. C. 3)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného 15 popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): více než 95 %
Molekulová hmotnost (volná báze): 1966 Vzorec molekuly: CgaH^Chs^
Příklad 3
Příprava W I I PGLNPLVGGGKLYSPTSILCG - NH2 {sekv. id. č. 5)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného 25 popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDl—MS),
Čistota (HPLC): 95 %
Hmotnostní spektrální analýza: teoretická molekulová hmotnost: 2454,9 Experimentální molekulová hmotnost: 2454,8 ES+
Příklad 4
Příprava RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG (sekv. id. č. 6)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného 35 popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS),
Čistota (HPLC): více než 95 %
Molekulová hmotnost (volná báze): 2552 Vzorec molekuly: Ct 19^95()29¾
- 11 CZ 300505 B6
Příklad 5
Příprava KILLGLNPLVGGGRLYSPTS I LG (sekv. id. č. 7), RLLLGLNPL VG GGRLYSPTTILG {sekv. id. č. 8) aNIPIPVGDIYGGGDIYKRWQAL C L (sekv. id. č. 24)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Příklad 6
Příprava R Ν I PI PVGDIYGGGDIYKRWQALCL (sekv. id. č. 10)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI—MS).
Čistota (HPLC): 85 %
Hmotnostní spektrální analýza: teoretická molekulová hmotnost: 2817,3
Experimentální molekulová hmotnost: 2813,7 ES+
Příklad 7
Příprava RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRWAILG (sekv. id. č, 11)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): více než 95 %
Molekulová hmotnost (volná báze): 2707
Vzorec molekuly: C125H208O29N38
Příklad 8
Příprava A L P I PAGFIYGGGRIYKRWQALG (sekv. id. č. 12) , KIPIPVGFIGGGWIYKRWAILG (sekv. id. č. 13) aKIPIPVGTLLSGGGRIYKRWAILG (sekv. id, č, 14)
Peptidy byly syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
- 12CZ 300505 B6
Příklad 9
Příprava KFI IPNlFSALGGAISYDLNTNlLNCI (sekv. id. č, 16)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. NI v sekvenci je norleucin. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): více než 80 %
Hmotnostní spektrální analýza: teoretická molekulová hmotnost: 2783,3
Experimentální molekulová hmotnost: 2783,3 ES+
Příklad 10
Příprava KFI I PN1FSALSGGGAI SYDLNTFLNC I G (sekv. id. č. 17)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. NI v sekvenci je norleucin. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): více než 80 %
Hmotnostní spektrální analýza: teoretická molekulová hmotnost: 2932,4
Experimentální molekulová hmotnost: 2931,8 ES+
Příklad 11
Příprava R F I I PNI FTALSGGRRALLYGATPYAI G (sekv. id. Č. 18)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu z odpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. N1 v sekvenci je norleucin. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
Čistota (HPLC): více než 95 %
Molekulová hmotnost (volná báze): 2894
Vzorec molekuly: C137H217O32N37
Příklad 12
Příprava ΚΙ I PNI FSALGGGRLLYGATPYAIG (sekv. id. č. 19), RIIPNlFTALSGGGRLLYGATP Y A I G (sekv. id. č. 20) aWI IPN1FSALGGAISYDL N T Ni L N C I (sekv. id. Č. 25)
Peptid byl syntetizován ve formě amidu zodpovídajících výchozích látek podle všeobecného popisu syntézy. Čistota byla určena analýzou HPLC a struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin hmotnostní spektrometrií (LDI-MS).
- 13 CZ 300505 B6
Příklad 13
Dimerizace prostřednictvím disulfidového můstku
Peptidové sekvence z příkladů 1 a 3 byly spojeny oxidací do formy dipeptidu, kde cysteinové zbytky vytvořily disulfidový můstek. Můstek byl vytvořen těmito způsoby:
A) Oxidace s I2. Stejná množství peptidů byla rozpuštěna v kyselině octové/methanolu (1:4) a byl přidán 0,lM I2 v methanolu za vzniku směsi dimerů.
nebo
B) Oxidace prostřednictvím [Cys(Spy)16]-sekv. id. č. 2. 2,3 mM Peptidů ze sekv. id. č. 2 rozpuštěného v 2M AcOH (vod.) a 2-propanolu (1:1) bylo ošetřeno 2,2-dithiodipyridinen (3 ekv) za vzniku [Cys(Spy),6]-sekv. id. ě. 2. Stejná množství [Cys(Spy)16]-sekv. id. č. 2 a peptidů ze sekv. id. č. 5 bylo rozpuštěno v lOmM NH4Oac (vod. pH = 6,5) a methanolu (5:2) za vzniku dimerů ze sekv. id. č. 21.
Čistota peptidů byla určována analýzou HPLC a peptidová struktura byla potvrzena analýzou aminokyselin. Obsah peptidů (aminokyselinová volná báze) byl 80 %.
Čistota (HPLC): 92%.
Příklad 14
Byla připravena vakcína obsahující peptidy ze sekv. id. č. 3, 6, 11 a 18. Lyofilizované peptidy byly rozpuštěny ve sterilní vodě v konečné koncentraci 4 mg/ml. Konečná koncentrace soli byla 0,9%. Byl také připraven preparát faktoru stimulujícího kolonie granulocytů a makrofágů (GM-CSF), podle pokynů výrobce pro použití, v konečné koncentraci 0,3 mg/ml. Tyto dva roztoky byly podávány intrakutánně. Typická dávka pro injekci byla 100 μΐ.
Příklad 15
Roztok nebo suspenze antigenu byla smíchána se stejnou částí Freundova adjuvans od firmy Behring, úplného nebo neúplného, a pak jemně emulgována nasátím a prudkým vytlačením z injekční stříkačky nebo pomocí homoge ni zátoru. Emulze by měla zůstat stabilní alespoň 30 minut. Emulze antigenu—adjuvans jsou nejlépe i nj i kovány subkutánně jako depotní přípravek.
Příklad 16
Údaje o toxicitě
Dipeptid z příkladu 13 byl nareděn v 0,9% NaCI na testovanou koncentraci roztoku 4 mg/ml. Peptid byl podáván injekcí samicím myší NMFI v dávce 100 pg na 1 kg tělesné hmotnosti. Nebyly pozorovány žádné toxikologické účinky a peptid byl považován za netoxický.
Studie toxicity byly prováděny na myších a laboratorních potkanech s peptidovým přípravkem vakcíny z příkladu 14. Myši byly vybrány do studie, aby poskytly komparativní data z druhého obecně používaného druhu hlodavců. Testovaná látka byla směs čtyř peptidů dodávaných v jedné lahvičce obsahující lyofilizovaný materiál pro rekonstituci fyziologickým roztokem z hladiny dávek byly vyjádřeny jako celkové množství peptidů. Jednotlivé peptidy byly přítomné v poměru 1:1:1:1 a poskytující dávku každého peptidů 0,0075 mg/kg tělesné hmotnosti, které jsou až
- 14CZ 300505 B6
500 x vyšší než dávka určená pro člověka. Testovaná zvířata byla rozdělena do čtyř skupin, v každé bylo po deseti zvířat (pět samců a pět samic), kontrolní skupina dostala fyziologický roztok a skupiny dostaly nízkou, střední a vysokou dávku. Testovací přípravek byl podáván jednou intravenózní infúzí do ocasní žíly při rychlosti podávání 3 ml/minutu. Zvířata byla utracena 15. a 16. den intraperitoneální injekcí pentobarbítalu sodného.
Výsledky těchto studií ukázaly, že hladiny dávky podávané myším a laboratorním potkanům nevyvolaly žádné vedlejší reakce, až do dávky přesahující 3 mg/kg.
io
Příklad 17
Imunotest pro detekci protilátek indukovaných HIV-1
Reagencie s magnetickými částicemi byly připraveny podle protokolu doporučovaného výrobcem. Výrobce magnetických perliček Dynabeads, které byly použity, je Dynal AS. Magnetické částice potažené ligandem byly nazvány Reagencie 1. Peptid podle vynálezu byl kovalentně spojen s předem aktivovaným povrchem magnetických částic. Je také možné peptid absorboval na povrch magnetických částic fyzikálně. Koncentrace částic v Reagencii 1 byla v rozmezí od 1 mg/ml do 15 mg/ml. Velikost částic kolísala mezi 0,2 až 15 gm. Koncentrace peptidů byla v rozmezí od 0,01 mg/mg částic od 1 mg/mg částic.
Reagencie s protilátkou proti lidskému Ig konjugovanou s alkalickou fosfatázou (AP) byla připravena podle doporučeného protokolu firmy Dako AS. Reagencie byla nazvána Reagencie 2.
Roztok substrátu fenolftaleinmonofosfátu byl připraven podle doporučeného protokolu firmy Fluka AG. Tento protokol je v oboru standardním postupem. Roztok substrátu byl nazván Reagencie 3.
Promývací a inkubační pufr, který byl použit, je standardní pufr 0,05M tris-báze s následujícími dalšími složkami: Tween 20 (0,01 až 0,1%), glycerol (0,1 až 10%) a chlorid sodný (0,2 až 0,1%).
Postup testu zahrnuje inkubaci, kdy byla v každé jamce smíchána 1 kapka Reagencie 1 s 2 kapkami promývaeího pufru. Po smíchání bylo přidáno 30 μΐ vzorku a roztok byl inkubován 5 minut. Magnetické částice byly vychytány magnetem a tekutina odstraněna před oddělením od magnetu. Pak byly jamky dvakrát promyty 4 kapkami promývaeího roztoku před inkubací s Reagencii 2. Byla přidána 1 kapka Reagencie 2 s 2 kapkami promývaeího pufru a roztok byl inkubován 5 minut. Magnetické částice byly vychytány magnetem a tekutina odstraněna před oddělením od magnetu. Pak bylo opakováno promývání před inkubací s Reagencii 3. Do každé jamky byly přidány 2 kapky Reagencie 3 a roztok byl inkubován 3 minuty. Výsledky byly odečítány proti bílému pozadí. Roztoky s pozitivními výsledky měly červenou barvu (3+ = silně červené), zatímco roztoky s negativními výsledky měly barvu jasně žlutohnědou, jak bylo dosaženo u negativních kontrol.
Souprava pro imunotest může být použita pro detakci protilátek, indukovaných buď virem HIV, nebo HÍV-specifickými peptidy či proteiny, například peptidy podle předkládaného vynálezu.
Výše uvedené příklady vynálezu pouze ilustrují. Rozumí se, že odborník může modifikovat peptidy, antigeny a vakcíny v tomto textu popsané bez odkladu od původní vynálezeeké myšlenky a rozsahu tohoto vynálezu, jak je uveden dále v patentových nárocích.
Polypeptidy podle vynálezu mohou být použity v kombinací alespoň jednoho peptidu vybraného z každé skupiny sekvencí, sekv. id. č. 1, sekv. id. č. 4, sekv. id. č. 9 a sekv. id. č. 15, ke tvorbě antigenů a účinné látky profylaktické nebo terapeutické vakcíny určené k poskytnutí ochrany proti lidskému viru selhání imunity' typu 1 (HIV-1). Vakcína může obsahovat sloučeniny mající
-15CZ 300505 B6 blahodárný účinek na ochranu nebo stimulaci imunitního systému příjemce (člověka nebo obratlovce), například interleukiny, interferony, růstové faktory pro granulocyty a makrofágy, hemopoetické růstové faktory apod. Vakcinační přípravek dále obsahuje adjuvans nebo vehikulum, výhodněji je adjuvans nebo vehikulum Monophosphoryl Lipid A (MPL <R), eventuálně s oxidem hlinitým, Freundovo adjuvans (úplné nebo neúplné) nebo hydroxid hlinitý. Optimální množství adjuvans/vehikula závisí na zvoleném typu.
Formulace peptidů nebo vakcíny mohou být před uskladněním lyofilizovány. Vakcína může být výhodně uskladněna při nízké teplotě vampulích obsahujících jednu nebo více jednotkových io dávek připravených k použití. Typická jednotková dávka peptidů podle vynálezu je v rozmezí koncentrace 1 pg až 1 mg/kg tělesné hmotnosti, výhodně 2 pg až 0,15 mg/kg tělesné hmotnosti.
Odborníci si jsou vědomi toho, že vhodná dávka závisí na tělesné hmotnosti pacienta, typu nemoci, závažnosti stavu, způsobu podání a několika dalších faktorech. Vakcína může být podávána až dvanáctkrát a injekcí, typicky je podávána třikrát. Při přípravě injekčního roztoku jsou peptidy rozpuštěny ve sterilním roztoku chloridu sodného v konečné koncentraci 1 mg/ml peptidů a 0,9 % chloridu sodného. Typicky je objem injekce 100 až 200 μΐ (2 x 100 μΐ). Peptid je výhodně podáván spolu s vhodným adjuvans a/nebo růstovým faktorem pro granulocyty s makrofágy, například Leucomax(fi) od firmy Shering Plough. Vhodné podávání může být intrakutánní, subkutánní, intravenózní, perorální, intramuskulární, intranazální, přes sliznice nebo každým vhodným způsobem. Aby se udržela ochrana, může být nutné podávání upomínací dávky. Odborník rozumí, že vakcinační přípravky podle vynálezu jsou použitelné nejenom při prevenci infekce, ale také při léčení infekce.
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE O SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (v) TYP FRAGMENTU: vnitřní (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 2 je Ala, Gly, Ser nebo Arg (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 3 je Leu nebo Met) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 4 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 4 je Gly nebo Arg
- 16CZ 300505 B6 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 5 je Pro, Thr, Val, Ser, Gin 5 nebo Ala (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 6 io (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 6 je Gly, Ala, Lys, Arg, Gin nebo Glu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 15 (B) POLOHA: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 8 je Thr, nebo Ser (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 20 (B) POLOHA: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 9 je Leu nebo Ile (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 25 (B) POLOHA: 14 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 14 je Thr, Ser nebo Val (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 30 (B) POLOHA: 15 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 15 je Ala nebo Ser (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 16 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 16 je Cys nebo Ser, volitelně Cys tvoří část d i sulfidové vazby (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 17 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 17 je Gin nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 18 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 18 je Gly, Glu nebo Arg (ix) ZNAKY:
so (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 20 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 20 je Gly nebo Arg (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
- 17CZ 300505 B6
Xaaj Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaag Xaa6 Ala Xaa8 Xaa9 Gin Thr Pro Trp Xaai4 15 10
Xaai5 Xaaie Xaai7 Xaai8 Val Xaa20 15 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché io (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne 15 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 16 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Volitelně Cys v poloze 16 tvoří část disulfidové vazby (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
Lys Ala Leu Gly Pro Gly Ala Thr Leu Gin Thr Pro Trp Thr Ala 15 10 15
Cys Gin Gly Val Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 40 (B) POLOHA: 16 (D) DALŠÍ INFORMACE; /poznámka = „Volitelně Cys v poloze 16 tvoří část disulfidové vazby
- 18 CZ 300505 B6 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
Arg Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Gin Thr Pro Trp Thr Ala 15 10 15
Ser Leu Gly Val Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 23-24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka ~ „Xaa v poloze 1 je Arg, Lys, Asp nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 2 je Trp, Gly, Lys nebo Arg (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka - „Xaa v poloze 3 je Ile, Leu, Val nebo Mat (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 4 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 4 je „Xaa v poloze je Ile, Val nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 5 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 5 je Leu, Mat, Val nebo Pro (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 12 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 12 je Arg, nebo Lys (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 13
- 19CZ 300505 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 13 je Met nebo Leu (ix) (ix)
ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 15 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 15 je Ser, Cys nebo Gin, volitelně Cys tvoří část disulfidové vazby
ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 17 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 17 je Thr, Val, Ile, Ser nebo Ala (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 18 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 18 je Ser, Gly nebo Trh, (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 21 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 21 je Asp, Glu, Cys nebo Gly, volitelně Cys tvoří část disulfidové vazby (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 22 (D) DALŠÍ rNFORMACE: /poznámka ~ „Xaa v poloze 22 je Gly nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 11..12 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „volitelně vložený Gly-můstek z 0, 1,2 nebo 3 zbytků (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
Xaax Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Gly Leu Asn Pro Leu Val [Gly] n Xaa12 Xaax3 15 10
Tyr XaaX5 Pro Xaai7 XaaiS Ile Leu Xaa2i Xaa22 15 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne
-20CZ 300505 B6 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Volitelně Cys v poloze 23 tvoří část disulfidového můstku (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
Trp Ile Ile Pro Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Lys Leu 15 10 15
Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Cys Gly ío 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
Arg Trp Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg 15 10 15
Leu Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 23 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí 35 (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ; ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
Lys Ile Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu 15 10 15
Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Gly
-21 CZ 300505 B6 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
(i) CHAJOKKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 23 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
Arg Leu Leu Leu Gly Leu Asn Pro Leu Val Gly Gly Gly Arg Leu 15 10 15
Tyr Ser Pro Thr Thr Ile Leu Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22-26 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 1 je Asn, Ser, Gly Nis, Ala, Pro, Arg nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 2 je Asn, Ala nebo Lys (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 3 je Pro, Gin, Gly, Ile nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 7 je Val nebo Ala
-22 CZ 300505 B6 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 8 (D) DALŠÍ rNFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 8 je Gly nebo Lys (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 9 je Glu, Asp, Lys, Phe nebo io Thr (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 10 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 10 je Ile, Met, Val nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 11 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 11 je Tyr, Leu nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 25 (B) POLOHA: 12 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 12 je Ser nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 30 (B) POLOHA: 13 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 13 je Arg nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 14 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 14 je Asp, Arg, Trp, Ala nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 15 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka - „Xaa v poloze 15 je Ile nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 16 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 16 je Tyr nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 17 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 17 je Arg nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo
-23CZ 300505 B6 (B) POLOHA: 18 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 18 je Arg, Lys nebo Asp (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 19 (D) DALŠÍ INFORMACE; /poznámka = „Xaa v poloze 19 je Trp nebo Gly (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 20 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 20 je Ile, Met, Val, Gin nebo Ala (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 21 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 21 je Ile, Val nebo Ala (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 22 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 22 je Leu, Met nebo Val (ix) ZNAKY;
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 23 je Gly nebo Cys (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 24 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 24 je Leu nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 12..13 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „volitelně vložený Gly-můstek z 1, 2 nebo 3 zbytků (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
Xaai Xaa2 Xaa3 Pro Ile Pro Xaa7 Xaa8 Xaa3 Xaaio Xaan Xaai2 [Gly] n 15 10
Xaai3 Xaax4 Xaa^s Xaaig Xaai7 Xaais Xaa 19 Xaa2o Xaa2i Xaa22 Xaa23 Xaa24 15 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 25 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí
-24CZ 300505 B6 (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 24 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Cys v poloze 24 tvoří část disulfidové vazby (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10:
Arg Asn Ile Pro Ile Pro Val Gly Asp Ile Tyr Gly Gly Gly Asp 15 10 15
Ile Tyr Lys Arg Tyr Gin Ala Leu Cys Leu 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 26 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 11:
Arg Ala Ile Pro Ile Pro Ala Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly 15 10 15
Arg Ala Ile Tyr Lys Arg Trp Ala Ile Leu Gly 20 25 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 12:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 23 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid 40 (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 12:
-25CZ 300505 B6
Ala Leu Pro Ile Pro Ala Gly Phe Ile Tyr Gly Gly Gly Arg Ile 15 10 15
Tyr Lys Arg Trp Gin Ala Leu Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 13:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché io (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne 15 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 13:
Lys Ile Pro Ile Pro Val Gly Phe Ile Gly Gly Gly Trp Ile Tyr 15 10 15
Lys Arg Trp Ala Ile Leu Gly (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 14:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 14:
Lys Ile Pro Ile Pro Val Gly Thr Leu Leu Ser Gly Gly Gly Arg 15 10 15
Ile Tyr Lys Arg Trp Ala Ile Leu Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 15:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24-28 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí
-26 CZ 300505 B6 (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 1 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 1 je Pro, Lys, Arg nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 2 je Glu, Arg, Phe nebo Lys (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 3 (D) DALŠÍ ÍNFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 5 je Pro nebo Thr (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 3 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 6 je Met, Thr nebo Nle (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 7 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 7 je Phe nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 8 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 8 je Ser, Thr, Ala nebo Met (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 9 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 9 je Ala, Glu nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 11 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 11 je Ser nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 12 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 12 je Ala, Arg nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 13 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 13 je Ile, Leu nebo žádná
-27CZ 300505 B6 (ix) ZNAKY;
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ; modifikované místo (B) POLOHA: 14 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 14 je Ser, Ala, Leu nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 15 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 15 je Tyr, Glu nebo Asp io (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 16 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 16 je Gly nebo Asp 15 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 17 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 17 je Ala nebo Leu (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 18 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 18 je Thr, Ile, Val, Leu nebo 25 Asn (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 19 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 19 je Pro, Thr nebo Ser (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA; 20 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 20 je Tyr, Phe, Nle, His nebo
Gin (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 40 (B) POLOHA: 21 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 21 je Asp, Asn, Leu nebo Ala (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 45 (B) POLOHA: 22 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 22 je Leu, Ile, Val nebo Asn (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 50 (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 23 je Asn, Tyr, Cys nebo Gly (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 55 (B) POLOHA: 24
-28 CZ 300505 B6 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 24 je Thr, Met, Ile, Ala, Val nebo žádná (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 25 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Xaa v poloze 25 je Gly nebo žádná (ix) ZNAKY:
io (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „volitelně Cys v poloze 23 tvoří část disulfidové vazby is (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 11.12 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „volitelně je můstek Gly-Arg vložen mezi Xaa 11 a 12, kde n = 1, 2 a 3, a m nezávisle na nje 0, 1,2 nebo 3 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 15:
Xaax Xaa2 Ile Ile Xaas Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Leu Xaan [Gly]„ [Arg}a 15 10
Xaai2 Xaaxj Xaa^ Xaais Xaax$ Xaai? Xaaxg Xaax9 Xaa2o Xaa2i Xaa22 Xaa23 15 20
Xaa24 Xaa25 25 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 16:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 25 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo 40 (B) POLOHA: 24 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Cys v poloze 24 volitelně tvoří část d i sulfidové vazby (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 16:
-29QZ 300505 B6
Lys Phe lle lle Pro Nle Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala Xle Ser 15 10 15
Tyr Asp Leu Asn Thr Nle Leu Asn Cys lle 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 17:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 28 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché io (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne 15 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 26 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Cys v poloze 26 volitelně tvoří část disulfidové vazby (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 17:
Lys Phe lle lle Pro Nle Phe Ser Ala Leu Ser Gly Gly Gly Ala 15 10 15 lle Ser Tyr Asp Leu Asn Thr Phe Leu Asn Cys lle Gly 20 25 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 18:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 27 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 18:
Arg Phe lle lle Pro Nle Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Arg Arg 15 10 15
Ala Leu Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr Ala lle Gly 20 25
-30CZ 300505 B6 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 19:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid o (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 19:
Lys Ile Ile Pro Nle Phe Ser Ala Leu Gly Gly Gly Arg Leu Leu 15 10 15
Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr Ala Ile Gly 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 20:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 25 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 20:
Arg Ile Ile Pro Nle Phe Thr Ala Leu Ser Gly Gly Gly Arg Leu 15 10 15
Leu Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr Ala Ile Gly 20 25 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 21:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 44 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo
-31 CZ 300505 B6 (B) POLOHA: disulfidová vazba mezi polohou 16 v sek v. id. č. 2 a polohou 23 v sekv. id. č. 5 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 22:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina io (C) TYP VLÁKNA: dvojité (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: dimemí peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: disulfidová vazba mezi polohou 16 v sekv, id. č. 2 a polohou 16 v sekv. id. č. 2 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „ (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 23:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 48 aminokyselin (B) TYP; aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojité (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: dimerní peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: disulfidová vazba mezí polohou 23 v sekv. id. č. 5 a polohou 23 v sekv. id. č. 5 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 24:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ; ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo
-32 CZ 300505 B6 (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Cys v poloze 23 může tvořit část disulfidového můstku (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 24:
Asn Ile Pro Ile Pro Val Gly Asp Ile Tyr Gly Gly Gly Asp Ile 15 10 15
Tyr Lys Arg Tyr Gin Ala Leu Cys Leu 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 25:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: obojí (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: ne (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: modifikované místo (B) POLOHA: 23 (D) DALŠÍ INFORMACE: /poznámka = „Cys v poloze 23 volitelně tvoří část disulfidové vazby (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 25:
Trp Ile Ile Pro Nle Phe Ser Ala Leu Gly Gly Ala Ile Ser Tyr 15 10 15
Asp Leu Asn Thr Nle Leu Asn Cys Ile 20
-33CZ 300505 B6
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Vakcinační přípravek, v y z n a č uj í c í se tím, že obsahuje peptidy SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 11 a SEQ ID NO: 18, kde koncové skupiny těchto sekvencí jsou volné karboxylové skupiny nebo aminoskupiny, amidové skupiny, acetylové skupiny nebo jejich soli, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem a případně s adjuvans, nosičovou látkou a/nebo vehikulem a případně další aminostimulační sloučeninou nebo imunostimulačními sloučeninami.
- 2. Vakcinační přípravek podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že peptidy jsou rozpuštěny ve slaném vodném roztoku a případnou imunostimulační sloučeninou je granulocytový makrofágový růstový faktor.
- 3. Vakcinační přípravek podle nároku 1 nebo nároku 2, v y z n a č uj í c í se tím, že tato kombinace obsahuje adjuvans vybraný ze skupiny zahrnující Monofosforyl Lipid A, Freundovo úplné nebo neúplné adjuvans a hydroxid hlinitý.Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO19991078A NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013195A3 CZ20013195A3 (cs) | 2002-02-13 |
| CZ300505B6 true CZ300505B6 (cs) | 2009-06-03 |
Family
ID=19903050
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013195A CZ300505B6 (cs) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | Vakcinacní prípravek |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6706859B1 (cs) |
| EP (1) | EP1159298B1 (cs) |
| JP (5) | JP2002541069A (cs) |
| CN (4) | CN101328208A (cs) |
| AT (1) | ATE397014T1 (cs) |
| AU (1) | AU771827B2 (cs) |
| BR (1) | BR0008741A (cs) |
| CA (1) | CA2363947C (cs) |
| CY (1) | CY1108299T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ300505B6 (cs) |
| DE (1) | DE60039036D1 (cs) |
| DK (1) | DK1159298T3 (cs) |
| EA (1) | EA004802B9 (cs) |
| ES (1) | ES2307496T4 (cs) |
| HK (1) | HK1044778B (cs) |
| HU (1) | HU229282B1 (cs) |
| ID (1) | ID30497A (cs) |
| NO (1) | NO311807B1 (cs) |
| NZ (4) | NZ525751A (cs) |
| PT (1) | PT1159298E (cs) |
| SK (1) | SK287382B6 (cs) |
| WO (1) | WO2000052040A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200107072B (cs) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2398816A1 (en) | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Duke University | Human immunodeficiency virus vaccine |
| NO314587B1 (no) * | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV regulatoriske- og hjelpepeptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkaltav HIV |
| NO314588B1 (no) | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV |
| KR20080106467A (ko) | 2006-03-10 | 2008-12-05 | 펩트셀 리미티드 | Ｈｉｖ 조절 또는 보조 단백질의 펩타이드, 그 조성물 및 이용 방법 |
| CA2735724C (en) | 2008-06-19 | 2018-07-24 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| MX2012000372A (es) | 2009-07-06 | 2012-02-28 | Variation Biotechnologies Inc | Metodos para preparar vesiculas y formulaciones producidas a partir de las mismas. |
| US9907746B2 (en) | 2009-07-06 | 2018-03-06 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| EP2550362B1 (en) | 2010-03-25 | 2017-01-04 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| JP6119030B2 (ja) | 2010-07-06 | 2017-04-26 | ヴァリエーション バイオテクノロジーズ インコーポレイテッド | インフルエンザを治療するための組成物及び方法 |
| WO2012072088A1 (en) * | 2010-12-02 | 2012-06-07 | Bionor Immuno As | Peptide scaffold design |
| EP2663327A4 (en) | 2011-01-13 | 2015-12-02 | Variation Biotechnologies Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
| PT2691530T (pt) | 2011-06-10 | 2018-05-10 | Univ Oregon Health & Science | Glicoproteínas e vectores recombinantes cmv |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| AU2013208693B2 (en) | 2012-01-12 | 2017-12-07 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| CA2894467A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | Variation Biotechnologies Inc. | Methods for preparing thermostable compositions comprising a lipid component and thermolabile therapeutic agents |
| CA2874936A1 (en) | 2012-06-06 | 2013-12-12 | Bionor Immuno As | Vaccine |
| CA2874923C (en) * | 2012-06-06 | 2021-08-31 | Bionor Immuno As | Peptides derived from viral proteins for use as immunogens and dosage reactants |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| WO2015007337A1 (en) | 2013-07-19 | 2015-01-22 | Bionor Immuno As | Method for the vaccination against hiv |
| EP3033106A1 (en) * | 2013-08-14 | 2016-06-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Immunoadjuvant compositions and uses thereof |
| US20150065381A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-05 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel hiv-1 immunogens |
| EP2873423B1 (en) | 2013-10-07 | 2017-05-31 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| WO2015086738A2 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Bionor Immuno As | Hiv vaccine |
| WO2015110659A1 (en) * | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Methods of immunization with a vaccine inducing a humoral immune response and with a vaccine inducing a cellular immune response |
| US10143737B2 (en) | 2014-01-27 | 2018-12-04 | Bionor Pharma Asa | Method for the vaccination against HIV |
| AU2015208032B2 (en) * | 2014-01-27 | 2020-07-30 | Bionor Immuno As | Dosage regimen for HIV vaccine |
| DK3126373T3 (da) * | 2014-04-03 | 2020-05-04 | Amgen Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af amg 416 |
| JP2017523166A (ja) | 2014-07-11 | 2017-08-17 | ビオノール イミュノ エーエスＢｉｏｎｏｒ Ｉｍｍｕｎｏ Ａｓ | ヒト免疫不全ウイルスｉ（ｈｉｖ）の病理学的影響を減少及び／若しくは遅延させるか又は後天性免疫不全症候群（ａｉｄｓ）を発症するリスクを低減させる方法 |
| EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP3072901A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-09-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| JP2018515603A (ja) | 2015-05-04 | 2018-06-14 | ビオノル・イムノ・アクシェセルスカプＢｉｏｎｏｒ Ｉｍｍｕｎｏ ＡＳ | Ｈｉｖワクチン用の投薬レジメン |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994028871A1 (en) * | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Endocon, Inc. | Implant stimulated cellular immunity |
| WO1996027013A1 (fr) * | 1995-02-27 | 1996-09-06 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale-Inserm | Vih-1 de groupe o, fragments desdits virus, ainsi que leurs applications |
| WO1998040744A1 (de) * | 1997-03-10 | 1998-09-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur simultanen bestimmung von hiv-antigenen und hiv-antikörpern |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0230222A1 (en) | 1986-01-06 | 1987-07-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Expression of HTLV-III gag-Gene |
| US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| GB8629116D0 (en) | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
| NZ226026A (en) | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
| US4888290A (en) * | 1987-11-06 | 1989-12-19 | Coulter Corporation | Monoclonal antibody specific to HIV antigens |
| EP0356007A3 (en) * | 1988-07-22 | 1991-07-03 | Medical Research Council | Antigenic determinants |
| KR940000755B1 (ko) * | 1990-02-16 | 1994-01-29 | 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 | Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드 |
| SE468168B (sv) | 1990-02-20 | 1992-11-16 | Replico Medical Ab | Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov |
| US5288514A (en) * | 1992-09-14 | 1994-02-22 | The Regents Of The University Of California | Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support |
| FR2703252B1 (fr) * | 1993-03-31 | 1996-09-06 | Fernand Narbey Torossian | Complexe immunomodulateur anti SIDA. |
| AU685521B2 (en) * | 1993-10-19 | 1998-01-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Peptide capable of inducing immune response against HIV and aids preventive or remedy containing the peptide |
-
1999
- 1999-03-04 NO NO19991078A patent/NO311807B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-03-02 HU HU0200265A patent/HU229282B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 BR BR0008741-6A patent/BR0008741A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 AT AT00911492T patent/ATE397014T1/de active
- 2000-03-02 CN CNA2008100921330A patent/CN101328208A/zh active Pending
- 2000-03-02 JP JP2000602264A patent/JP2002541069A/ja active Pending
- 2000-03-02 DE DE60039036T patent/DE60039036D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 US US09/674,674 patent/US6706859B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 CZ CZ20013195A patent/CZ300505B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 SK SK1240-2001A patent/SK287382B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 ID IDW00200102137A patent/ID30497A/id unknown
- 2000-03-02 NZ NZ525751A patent/NZ525751A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 ES ES00911492T patent/ES2307496T4/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 CA CA002363947A patent/CA2363947C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 PT PT00911492T patent/PT1159298E/pt unknown
- 2000-03-02 CN CNA2008100921326A patent/CN101328210A/zh active Pending
- 2000-03-02 WO PCT/NO2000/000075 patent/WO2000052040A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 NZ NZ525752A patent/NZ525752A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 EP EP00911492A patent/EP1159298B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 CN CNA2008100921311A patent/CN101328209A/zh active Pending
- 2000-03-02 CN CNB008057354A patent/CN100387617C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 NZ NZ525753A patent/NZ525753A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 AU AU33358/00A patent/AU771827B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 EA EA200100943A patent/EA004802B9/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 NZ NZ514619A patent/NZ514619A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 DK DK00911492T patent/DK1159298T3/da active
-
2001
- 2001-08-27 ZA ZA200107072A patent/ZA200107072B/xx unknown
-
2002
- 2002-08-27 HK HK02106292.0A patent/HK1044778B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-09-11 US US10/659,324 patent/US7311915B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-10-01 US US11/865,109 patent/US7709004B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-10-01 US US11/865,106 patent/US7709003B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-28 CY CY20081100922T patent/CY1108299T1/el unknown
-
2010
- 2010-12-09 JP JP2010275025A patent/JP5313998B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-10-31 JP JP2012240131A patent/JP5695012B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-31 JP JP2012239940A patent/JP5695010B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-12-02 JP JP2013249096A patent/JP5814331B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994028871A1 (en) * | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Endocon, Inc. | Implant stimulated cellular immunity |
| WO1996027013A1 (fr) * | 1995-02-27 | 1996-09-06 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale-Inserm | Vih-1 de groupe o, fragments desdits virus, ainsi que leurs applications |
| WO1998040744A1 (de) * | 1997-03-10 | 1998-09-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur simultanen bestimmung von hiv-antigenen und hiv-antikörpern |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Lole K.S. et al.: "Full-length human immunodeficiency virus type 1 genomes from subtype C-infected seroconverters in India, with evidence of intersubtype recombination", J. Virol., vol. 73(1), 152 - 160, 1999 * |
| Rodney E.P.et al.: "Human immunodeficiency virus genetic variation that can escape cytoxic T cell recognition", Nature, vol. 354(12), 453 - 459, 1991 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5814331B2 (ja) | Ｈｉｖペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びｈｉｖによって誘発された抗体を検出する方法 | |
| US7612168B2 (en) | Modified HIV peptides, antigens, compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV | |
| AU2001282706A1 (en) | HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines | |
| SK4012003A3 (en) | Regulatory and auxiliary HIV peptides, antigens, vaccine compositions, an immunoassay kit and method of detecting antibodies induced by HIV | |
| AU2004200155C1 (en) | HIV peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20180302 |