JP5254517B2 - 新規抗体、イムノアッセイおよび前立腺癌検出方法 - Google Patents
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Description
本発明は、1本鎖で、完全な(すなわち、内部で開裂していない)形態の前立腺特異抗原(PSAまたはhK3)に対して特異的である、高い親和性の免疫試薬に関する。本発明はまた、1本鎖で、完全な(内部で開裂していない)形態の遊離で複合体でないPSA(遊離SCINT PSA)の特異的決定のための、前記免疫試薬を使用する分析的に高感度なイムノアッセイによって、あるいは、他の形態の前立腺カリクレイン、PSAまたはhK2の種々の比率を形成するか、またはこれらとたとえばロジスティック回帰および/または人工的なニューロネットワークを用いるなどの他の手段とを組み合わせることにより他の形態の前立腺カリクレイン、PSAまたはhK2を測定するイムノアッセイを、前記イムノアッセイから得られる結果と組み合わせることによって、無症候性の健常な男性または良性の前立腺状態と前立腺癌とを区別することに関する。本発明は、臨床的症状(たとえば、下位尿路症状 (lower urinary tract symptoms、LUTS))を呈している男性における良性状態と癌とを区別する際だけでなく、無症候性被験者のスクリーニングの際にも、前立腺癌の検出に使用される。さらに、本発明は、癌の再発を初期段階で検出するための改良された手段を提供したり、疾患の種々段階における治療応答性を監視するための改良された手段を提供するためだけでなく、前立腺癌の段階付けまたは等級付けを改良するためにも用いられる。イムノアッセイ決定のための適当な生物学的標本は、主として、血清、血漿または全血サンプルであるが、本発明は尿や精液サンプルなどの他の生物学的体液にも適用できる。
本発明の背景、およびとくに、実施に関する追加的詳細を提供する事例を説明するために本明細書で使用される文献および他の資料は、参考文献により取り込まれる。
本発明の目的は、ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、成熟型および/またはチモーゲン型の前立腺特異抗原(SCINT PSA)を含有するサンプルを用いて、該抗原の決定を可能にすることである。
i)良性前立腺過形成(BPH)患者および/または前立腺癌(PCa)でない健康な男性被験者からPCa患者を、
ii) 無痛性PCaの患者から攻撃性PCaの患者を、および/または、
iii) PCaの前立腺外延長患者および/またはリンパ節もしくは骨髄への転移進展を有する患者から臨床的に局在化されたおよび/または場所的に限られたPCaの患者を、
識別する方法に関する。
a)ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、遊離型および/または複合体型前立腺特異抗原(SCINT PSA)を決定し、
b)決定されたSCINT PSAの関数であるマーカー値を確立し、ついで
c)確立されたマーカー値を該患者の識別に使用する
工程からなる。
表1 免疫感作および融合の結果のまとめ。
表2 抗体特性のまとめ。
表3 5μg/Lより低いPSA−T範囲における単一のまたは組み合わせたパラメーターを用いる、癌および非癌の識別。統計分析はノンパラメトリックなマン−ウィットニー−U検定法(Mann-Whitney-U test)を用いて実施した。
表4 10μg/Lより低いPSA−T範囲における単一のまたは組み合わせたパラメーターを用いる、癌および非癌の識別。統計分析はノンパラメトリックなマン−ウィットニー−U検定法を用いて実施した。
表5 PSA−Tの濃度に関する制限なしで単一または組み合わせパラメーターを用いる、癌および非癌の識別。統計分析はノンパラメトリックなマン−ウィットニー−U検定法を用いて実施した。
遊離PSAの様々な形態の性質に向けた分析手法の設計および開発により、前立腺癌の診断に対する新たな特有の情報が加えられた。抗プロPSA抗体はチモーゲン型タンパク質の特異的でかつ高感度の測定を可能にする。LNCaP PSAの高い免疫原性の性質にもかかわらず、本発明者らは、PSA−チモーゲンに対して特異的な、または強い優先性を有する抗体、たとえば、PSA−プロペプチド全体またはこのペプチドの一部分を特異的に認識する抗体を産生することができなかった。このプロジェクトの目的は、転移性癌細胞株LNCaPにより生産される様々なPSA形態に対する抗PSA抗体を開発することであり、また、酵素的に不活性な(それゆえに、ACT、AMGまたはAPIなどの様々なセルビンタイプの複合体リガンドと共有結合を形成できない、たとえば、PSA−チモーゲン型(すなわち、プロPSA)、酵素的に不活性な1本鎖の成熟型、様々な内部開裂型、またはまだ同定されていない理由で血清中に非複合体型で留まっているその他の不活性型)様々なPSA分画の濃度の特異的検出および定量を提供するイムノアッセイにおいて、これらの抗体を採用することである。
1.1本鎖の、完全な(すなわち、内部で開裂していない)成熟型および/またはチモーゲン型PSAを特異的にかつ高親和性で認識するが、内部で開裂した2本鎖または多重鎖型は認識しないモノクローナル抗体の開発および生産。
2.1本鎖の、完全な(すなわち、内部で開製していない)成熟型および/またはチモーゲン型のものを選択的に認識する抗体を用い、そして遊離の非複合体型PSAを認識した抗体と組み合わせて、1本鎖の、完全な(すなわち、内部で開裂していない)成熟型および/またはチモーゲン型の遊離で非複合体型のPSA(遊離の1本鎖INTact非複合型PSAまたは遊離SCINT−PSA)を測定する、高感度ツーサイトイムノアッセイ(two-site immunoassay)の最適化。このアッセイは血清、血漿、または全血だけでなくその他の生物学的体液にも適用できる。
3.当初は3μg/Lまたはそれより大きい総PSA濃度を示した、50〜66歳の自覚症状のない男性から採取した血清または血漿サンプルの研究母集団(N=281)に対する本アッセイの適用。PCの診断は、六分割生検(sextant biopsy)に基づいていた。PCから非癌を分離するための、本アッセイ単独の、または他の形態のカリクレイン(PSAまたはhK2)と組み合わせた実施を検討し、確立されているほかの診断方法と比較した。
4.1本鎖の、完全な(すなわち、成熟型およびチモーゲン型)、遊離型でも複合体型でも生じるPSAを測定するための高感度ツーサイトイムノアッセイの設計。これは、1本鎖の、完全な(すなわち、内部で開製していない)成熟型およびチモーゲン型を選択的に認識する抗体を用いて達成される。これらの抗体は、遊離型および複合体型PSAをともに等しい親和性で認識する、独立して結合する抗体と組み合わせられる。このアッセイは、血清、血漿または全血だけでなく、他の生物学的体液にも適用できる。
5.遊離型PSAであるか複合体型PSAであるかにかかわらず、内部で開裂したPSA形態(すなわち、ニックの入ったPSAまたはPSA−N)を選択的に測定する高感度ツーサイトイムノアッセイの設計。このアッセイ設計は、まず、1本鎖の、完全な(すなわち、内部で開裂していない)成熟型およびチモーゲン型のものを選択的に認識する抗体を、大過剰使用する。これは、第一の遮断抗体により定義されるエピトープと重複するエピトープでPSAと結合する他の抗体による完全な1本鎖PSAの結合を、阻害または遮断するために実施される。そのような重複する抗体(検出または捕捉用に使用される)を添加したのち、第二抗体に対するサンドイッチパートナーとして適した、独立して結合する第三抗体が免疫反応を完結させるために添加される。本アッセイの設計により、遊離型または複合体型のいずれで生じるかにかかわらず、Lys145−Lys146の部位で内部開裂しているPSAのみがもっぱら測定される。
遊離SCINT−PSAまたはPSA−Nの総PSAに対する比率
遊離PSAの総濃度で割って得られる遊離SCINT−PSAの比に遊離PSAの総濃度で割って得られる総PSAの比を乗じたもの
遊離PSAの総濃度で割って得られる遊離SCINT−PSAの比に総PSAを乗じたもの
あるいは、
様々な測定されるパラメーターのロジスティック回帰分析のレシーバーオペテイティングチャラクタリスティクス(receiver operating characteristics)(ROC)分析への使用、
人工ニューロネットワークなどの様々な人工知能アプローチの使用
方法および材料
試薬および器具
フロイントの完全および不完全アジュバンドはシグマケミカル社(Sigma Chemical Co.)(セントルイス、MO)から得た。細胞培養96ウェルプレートはヌンク(Nunc)(デンマーク)から、ローラーボトルはコーニング(Corning)(NY)から、またセリンバイオリアクター(Celline bioreactors)はインテグラ(Integra)(ドイツ)から得た。グルタマックス−1(Glutamax-1)を備えたオプチメム1(Optimem 1)およびHATサプリメント(ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン)はライフ テクノロジーズ(Life Technologies)(ギブコ(Gibco)BRL,スコットランド)の製品である。熱不活化ウシ胎仔血清(FBS)はヒクロン(Hyclone)(ローガン(Logan)、UT)から得た。Sp2/0マウスミエローマ細胞はATCC(ロックビル、MD)から得た。合成−7〜+7プロPSAペプチドはハンス リルジャ博士(ルンド大学、マルモ(Malmoe)、スウェーデン)から得た。1234デルフィア プレート(Delfia Plate)蛍光光度計、デルフィア Eu−標識キット、ウサギ抗マウスIgG、抗PSA Mab H117、抗PSA Mab 2E9またはストレプトアビジンをコートしたマイクロタイトレーションプレート、デルフィア アッセイ緩衝液、洗浄液および増強液は、パーキンエルマー ライフ サイエンシーズ(PerkinElmer Life Sciences)(ツルク、フィンランド)からのものである。ハイトラップ プロテインG(HiTrap Protein G)アフィニティーカラム、スペロース(Superose)12HR 10/30 FPLC ゲルろ通用カラム、PBE94ポリバッファー(Polybuffer)交換器および等電点電気泳動用ポリバッファー(Polybuffer)96はアマシャム ファルマシア バイオテク(Amersham Pharmacia Biotech)AB(ウプサラ(Uppsala)、スウェーデン)から得た。アミノ末端配列分析は、オンライン アプライド バイオシステムズ(Applied Biosystems)モデル120Aフェニルチオヒダントイン アミノ酸分析器(パーキンエルマー、ノーウォーク(Norwalk)、CT)に接続したアプライド バイオシステムズ モデル477Aパルス液体シークエンサーで実施した。モノクローナル抗体5A10、2E9、2H11、3C1、4H5および2C1は以前に特徴付けされている。MAb66および10はO.ニルソン(Nilsson)博士(カンAGダイアグノティクス(CanAg Diagnostics)、ゲテボルグ(Goeteborg)、スウェーデン)から贈呈された。MAb H117,H179,H164およびH50はアボット(アボットラボラトリーズ(Abbott laboratories)、アボットパーク、IL)から得た。抗体E73はエリザベス パウス(Elisabeth Paus)博士(ラジウム病院(The Radium Hospital)、オスロ、ノルウェー)から贈呈された。
遊離型PSAに対する抗体を開発するために、3種類の免疫原構造を使用した。LNCa PSAは、使用済み細胞培養培地からアフィニティークロマトグラフィーにより以前に精製されていた。タンパク質の約半分は1本鎖の成熟PSAで、半分は−5または−7チモーゲン型であった。第二の免疫原構造は、PSAのプロ配列とそのアミノ末端配列の最初の7つのアミノ酸とを含む14アミノ酸合成ペプチド(APLILSRIVGGWEC)からなっていた。このペプチドは、イムジェクト イムノーゲン EDC コンジュゲーション キット(Imject Immunogen EDC Conjugation Kit)(ピアース(Pierce)、IL)を用いて、KLHおよびBSAとカップリングさせた。使用される第三の免疫原は、プロ配列から2つのアミノ酸が変更されている成熟型のhK2(fXahK2)であった。プロ配列における点突然変異により、hK2はプロ配列の自己活性化および開裂ができなくなる。第二および第三の免疫原構造は、抗プロPSA抗体を産生させるために、免疫感作で使用した。該ペプチドおよびhK2に関する免疫感作および融合は、LNCa PSAのためにつぎに記載されているのと本質的に同様に実施した。
表1は、行った免疫感作をまとめてある。フロイント完全アジュバンド(シグマ)で乳化した種々の量の免疫原を用いる腹腔内注射により、Balb/cマウスを免疫感作した。ブースター量を3〜4週間間隔で与えた。全免疫感作期間は2〜10ヵ月にわたる。最終ブースターはマウスを死亡させる3日前に投与した。以前に記載されたように、脾臓のリンパ系細胞をミエローマ細胞Sp2/0と1:1の比で融合させた。融合細胞は、20%のウシ胎仔血清およびHATサプリメントを含むオプチメンの細胞培養96ウェルプレートにおいて回収した。
いくつかの異なったスクリーニング法を使用した。すべての方法に共通な点は、精漿から得られるPSAとは幾分異なって、LNCaP細胞により製造されるPSAを検出する抗体を認識するために設計されたということである。4つのスクリーニング法が図1a〜1dに示されている。すべての方法において、ハイブリドーマ上清は、ウサギ抗マウス抗体でコートしたマイクロタイトレーションウェル(方法1、2および4)中、またはストレプトアビジンおよびビオチン化合成ペプチドでコートしたマイクロタイトレーションウェル(方法3)中、+4℃で一晩インキュベーションした。インキュベーションののち、プレートを4回洗浄した。結合した抗体の検出は図1a〜1dに記載されているように実施した。シグナル発生のため、デルフィア増強液を200μl/ウェルで使用した。シグナルは1234デルフィア蛍光光度計で測定した。
精製タンパク質。ベイセネン(Vaeisaenen)らにより記載されているように、LNCaP PSAを製造し、精製した。異なるpI値に基づいて分離する等電点電気泳動を用いて、LNCaPプロPSAおよび成熟型PSAを分離した。pH勾配は8.5〜6であり、使用した緩衝液は0.025Mエタノールアミン−CH3COOH pH8.5およびポリバッファー(Polybuffer) pH6(希釈、1:10)であった。等電点電気泳動はC10/40カラムに充填した30mlのポリバッファー交換ゲルおよびエクタエクスプローラー(AEKTAexplorer)100システム(アマシャム ファルマシア バイオテク AB、ウプサラ、スウェーデン)を用いて実施した。流速は0.3ml/分であり、3.6ml分画を集めた。分画を集める前に、1/10量の2M トリス−HCl pH8を各分画管に加えた。各分画について、プロステイタス(Prostatus)PSA遊離/総(free/total) キット(パーキンエルマー ライフ サイエンシーズ、ツルク、フィンランド)を用いて、PSA濃度を測定した。1つのピーク領域由来のPSA含有分画をプールし、アミノ末端配列決定に付した。
PSA分子上の結合部位を決定するために、以前に特徴付けられたMAbを、検討対象のMAbとの考えられる全ての組み合わせで、サンドイッチ法で使用した。
連続するエピトープを認識する抗体の特異的結合部位を決定するために、全PSA配列と重複している合成15マーペプチドを使用した。ユーロピウム標識化MAbを、ピイロネン(Piironen)らにより記載されているように、ストレプトアビジンプレートに結合させたビオチン化ペプチドと一緒にインキュベーションした。
適当なパートナー抗体を用い、PSA、hK2およびPSA−ACT複合体を用いて、新規MAbの特異性を決定した。加えて、ザングら記載の精漿から精製したPSAのプールA、B、C、DおよびEを用いて、かつベイセイネンら記載のLNCaP PSAから精製したプロPSAを用いて、様々なPSA形態との結合を決定した。
2E9またはH117を捕捉抗体として用い、かつ精漿から精製したPSAまたは精製hK2を用い、以前に記載されたようにして、Eu標識MAbの親和定数を決定した。親和性はスキャッチャード法を用いて計算した。
ツーサイトイムノアッセイプロトコルは、遊離型SCINT−PSAの特異的決定のために開発されたものである。この設計は、(i)PSAにおけるペプチド配列aa136〜144を含有するエピトープにマッピングされたMab 5C3と、(ii)ペプチド配列aa84〜91を含有するエピトープにマッピングされ、以前に特徴付けられた遊離の特異的Mab(5A10)との組み合わせで用いた。Mab 5C3のビオチン化調製物を、200μLアッセイバッファー(Assay Buffer)中Mab200ngを用い、室温で60分間インキュベーションすることより、ストレプトアビジンでコートしたプレートに固定した。結合しなかったビオチン化Mabを除去する洗浄工程につづき、1ウェルあたり、標準品またはサンプル50μLを添加し、ついでデルフィア緩衝液100μLを添加し、連続振とう下、室温で60分間インキュベーションした。2回洗浄したのち、1ウェルあたり、100ngのEu標識Mab 5A10を含有するデルフィアアッセイバッファー100μLを添加し、連続振とう下、室温で60分間インキュベーションした。最終洗浄(6×)につづいて、1ウェルあたり、200μLのデルフィア増強溶液(Delfia Enhancement solution)を添加した。5分間振とうしたのち、シグナルを1232デルフィアプレート蛍光光度計で測定した。未知サンプルの濃度は、組換えバキュロウィルス産生プロPSAの標準シリーズ(0.05〜200μg/LのPSA)から計算した。
研究母集団は、スウェーデン、ゴーゼンブルグ(Gothenburg)地域で母集団ベースの前立腺癌スクリーニング研究に参加し、当初は3μg/Lより高い総PSA濃度を示した、51〜66歳の291人の男性からなっていた(ベッカー、Urology 2000;55:694-699)。DRE、TRUSおよびTRUS誘導六分割生検(TRUS guided sextant biopsy)を実施する前に、追加的な血清およびEDTA血漿サンプルを採取した。静脈穿刺後3時間以内に実施される(血清)凝固と遠心分離ののち、サンプルを70℃で凍結した。本研究のために、本発明者らは、イムノアッセイ実施直前に解凍したEDTA血漿サンプルを用いた。六分割生検により、被験者291人中79人の男性に前立腺癌が認められた。
記述統計は中間、高いおよび低いの4分位(quartiles)(25および75パーセンタイル)として与えられた。PSA−T、PSA−F、遊離SCINT−PSA、PSA−N、hK2、hK2/PSA−F、PSA−F/PSA−T、遊離SCINT−PSA/PSA−F、遊離SCINT−PSA/PSA−T、PSA−N/PSA−T、(遊離SCINT−PSA/PSA−F)×PSA−T、(遊離SCINT−PSA/PSA−F)×PSA−T×hK2、(遊離SCINT−PSA/PSA−F)/(PSA−F/PSA−T)において統計的有意差(p<0.05)があるか否かを試験するために、2つの患者群(癌および非癌)のあいだで、マン−ウィットニーノンパラメトリック検定法を実施した。この解析は、PSA−T範囲を基礎にして選択された様々なサブグループに対してだけでなく、全患者試料に対しても実施した。
免疫感作およびスクリーニング
本発明者らの目的は、癌に特異的に存在するPSAの様々な分子形態を認識する新規抗体を見出すことであった。非常に高い陽性のシグナルを与え、または精液由来のPSAに比べてLNCaP由来の検討されるべきPSA形態を特異的に認識する抗体を製造し、さらに特徴付けをした。表1では、実施された免疫感作、PSA陽性の細胞株の数および各融合からさらに特徴付けられたMAbがまとめられている。最終的に特徴付けのなされたMAbはすべて、LNCaP PSAを免疫原として使用した融合に由来するものであった。ペプチド融合由来の細胞株のうちあるものは、合成ペプチドに対して陽性であったが、さらなるテストにより、抗体はPSA分子全体を認識していないことが示された。また、抗PSA陽性細胞株のあるものはfXahK2融合から取得されが、これら抗体はLNCaP PSAと精漿由来のPSAとを区別できなかったので、それ以上特徴付けを行わなかった。
エピトープマッピング。新規MAbのPSA分子上の結合部位を明らかにするため、様々な抗体組み合わせで該MAbを試験した。その結果に基づき、2−Dエピトープマップを構築した(図2)。新規抗PSA MAbの結合部位を、以前特徴付けされたMAbに関連して提示する。
典型的な標準曲線が図5に示されている。分析的検出限界(バックグラウンド+2SD)は0.05μg/L以下であり、標準曲線は、使用した最高標準点(50μg/L)に至るまで直線的に上昇した。分析内および分析間での変動は、0.2〜50μg/Lの濃度範囲にわたって、それぞれ6および8パーセント未満であった。
遊離SCINT−PSA、PSA−F、PSA−TおよびhK2の様々な測定パラメーターの中間濃度(ならびに25および75パーセンタイル)、ならびにそれらを組合せて様々な割合またはアルゴリズムとしたものが、全検討母集団、PSA−Tが10以下の患者およびPSAが5以下の患者について表1〜3に示されている。癌と非癌とのあいだの統計解析は、マン−ホイットニーのノンパラメトリックU−検定法を用いて実施した。
本発明の1つの目的は、転移癌細胞株LNCaPにより産生される各種形態のPSAに対する抗PSA抗体を製造し、そしてこれらの抗体を、精漿PSAで免疫感作して得られる以前に特徴付けられた多数の抗体と比較することであった。本発明者らは、検出用の特異的イムノアッセイを開発するために、遊離PSAの様々なアイソフォームに対する新規な抗PSA抗体を取得することを望んだ。1つの目標は、抗プロPSA抗体を開発することであった。LNCaP PSAを免疫原として使用する免疫感作に加えて、アミノ酸−7〜+7からなる合成ペプチドをキャリアータンパク質にコンジュゲートさせ、免疫感作に使用した。また、hK2、fXahK2の変異形態を免疫感作に使用した。この形態は、プロペプチドを失うことにより生じるチモーゲンタンパク質の自己活性化を阻害する変異型プロペプチドを含む。hK2とPSAとは79%のアミノ酸同一性を有するので、抗PSA特異的抗体はfXahK2融合から生じると期待された。
Claims (12)
- ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、成熟型および/またはチモーゲン型の前立腺特異抗原(SCINT PSA)と結合する抗体であって、非開裂型のPSAでの免疫感作により得られ、そして完全な形態のものと内部で開裂した形態のものとの異なる反応性によって選択され、アミノ酸リジン145とリジン146とのあいだで開裂したニックの入ったPSA(PSA−N)と結合しない抗体(該PSA−Nは、SCINT PSAの内部でペプチド結合開裂して2本鎖または多重鎖のPSAとなることにより形成される)であることを特徴とする抗体。
- ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、成熟型および/またはチモーゲン型のヒト前立腺特異抗原(SCINT PSA)(該SCINT PSAは遊離型および/または複合体型で生じ得る)のサンプル中での量的測定のためのイムノアッセイ方法であって、該SCINT PSAに結合するが、アミノ酸リジン145とリジン146とのあいだで開裂したニックの入ったPSA(PSA−N)とは結合しない抗体が使用されることを特徴とするイムノアッセイ方法。
- アミノ酸リジン145とリジン146とのあいだで開裂したニックの入ったPSA(PSA−N)(該PSA−Nは遊離型および/または複合体型で生じ得る)を測定するイムノアッセイ方法であって、
a)ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、成熟型および/またはチモーゲン型のヒト前立腺特異抗原(SCINT PSA)に結合するが、PSA−Nとは結合しない第1抗体をサンプル中に過剰に添加し、サンプル中に存在するSCINT PSAと結合させ、かつその後
b)SCINT PSAに第1抗体により定義されるエピトープと重複するエピトープで結合し、かつPSN−Nとも結合するが、該第1抗体にすでに結合しているPSAには結合できない第2抗体を該サンプル中に添加し、PSA−Nにのみ結合させ、
それによりPSA−Nの測定を可能とする
ことを特徴とするイムノアッセイ方法。
- 遊離のSCINT PSAを測定するイムノアッセイ方法であって、遊離のすなわち複合体を形成していないSCINT PSAの測定を可能にするために、遊離のすなわち複合体を形成していない前立腺特異抗原(PSA−F)に対して特異的な抗体の使用を追加的に含むサンドイッチイムノアッセイ方法であることを特徴とする請求項2記載のイムノアッセイ方法。
- 良性前立腺過形成(BPH)患者および/または前立腺癌(PCa)でない健康な男性被験者から前立腺癌(PCa)患者を識別するために有用なマーカー値を取得する方法であって、
a)ヒトの1本鎖で、完全な、すなわち内部で開裂していない、成熟型および/またはチモーゲン型のヒト前立腺特異抗原(SCINT PSA)を、請求項1記載の抗体を用いて測定し、そして
b)測定されたSCINT PSAの濃度の関数からマーカー値を確立する
工程からなることを特徴とする方法。
- 工程a)が請求項2にしたがってSCINT PSAを測定することからなることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 工程a)が請求項4にしたがって遊離の、すなわち複合体を形成していないSCINT PSAを測定することからなることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 良性前立腺過形成(BPH)患者および/または前立腺癌(PCa)でない健康な男性被験者からPCa患者を識別するために有用なマーカー値を取得する方法であって、
a)遊離および/または複合体を形成した、リジン145とリジン146との間で開裂したニックの入ったPSA(PSA−N)を、請求項1記載の抗体を用いて測定し、そして
b)測定されたPSA−Nの濃度の関数からマーカー値を確立する
工程からなることを特徴とする方法。
- 工程a)が請求項3にしたがってPSA−Nを測定することからなることを特徴とする請求項8記載の方法。
- 前記関数が他の形態のPSAおよび/またはヒト腺カリクレイン2(hK2)の濃度の関数でもあることを特徴とする請求項5〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記他の形態のPSAおよび/またはhK2が、
総PSA(PSA−T)、
非複合体型、すなわち遊離のPSA(PSA−F)、
ニックの入ったPSA(PSA−N)および
ヒト腺カリクレイン2(hK2)
からなる群から選択されることを特徴とする請求項10記載の方法。
- 前記測定されたSCINT PSAの濃度の関数または測定されたPSA−Nの濃度の関数が、SCINT PSAの濃度またはPSA−Nの濃度それ自体;またはSCINT PSAの濃度および/またはPSA−Nの濃度と遊離SCINT−PSA、遊離PSA−N、総遊離PSA、総PSAおよびhK2からなる群より選択される他のパラメーターとの組合せであることを特徴とする請求項10または11記載の方法。
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