JP2002538818A - 前立腺腫瘍組織におけるヒトカリクレイン２とプロテアーゼインヒビター−６の新規な複合体および該複合体の利用方法 - Google Patents
前立腺腫瘍組織におけるヒトカリクレイン２とプロテアーゼインヒビター−６の新規な複合体および該複合体の利用方法Info
- Publication number
- JP2002538818A JP2002538818A JP2000605726A JP2000605726A JP2002538818A JP 2002538818 A JP2002538818 A JP 2002538818A JP 2000605726 A JP2000605726 A JP 2000605726A JP 2000605726 A JP2000605726 A JP 2000605726A JP 2002538818 A JP2002538818 A JP 2002538818A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- complex
- antibody
- sample
- reagent
- tissue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6445—Kallikreins (3.4.21.34; 3.4.21.35)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/803—Stabe free radicals, e.g. spin immunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/828—Cancer
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
本発明は、ｈＫ２とＰＩ−６の新規な複合体と該新規な複合体の利用方法を提供する。本発明のｈＫ２とＰＩ−６の新規な複合体は、前立腺癌の組織において亢進したレベルで存在する。したがって、本発明のｈＫ２とＰＩ−６の複合体は前立腺癌を検出するための血清マーカーとして利用できる。前記複合体は前立腺癌の組織を検出するための免疫組織化学的マーカーとしても利用できる。本発明によると、本発明のｈＫ２とＰＩ−６の複合体は、免疫組織化学的な手法により患者の組織の試料において、および／または試験管内のイムノアッセイ法の手法により患者の液体の試料において検出される。前立腺癌の存在を検出するための診断用キットおよび診断方法も提供される。
Description
【０００１】
発明の背景 本発明は、一般的には前立腺に、具体的には、前立腺において形成される、ヒ
トカリクレイン２（ｈＫ２）とプロテアーゼインヒビター−６（ＰＩ−６）の複
合体および該複合体の利用方法に関する。
トカリクレイン２（ｈＫ２）とプロテアーゼインヒビター−６（ＰＩ−６）の複
合体および該複合体の利用方法に関する。
【０００２】
本明細書では、参照文献の番号はかっこ書きで示される。本発明に関する先行
技術をより完全に記載するために、参照により前記文献に開示された全内容が本
明細書に取り込まれている。前記参照文献の書誌的事項は、本明細書の最後、請
求の範囲の前に列記される。
技術をより完全に記載するために、参照により前記文献に開示された全内容が本
明細書に取り込まれている。前記参照文献の書誌的事項は、本明細書の最後、請
求の範囲の前に列記される。
【０００３】 ヒトカリクレインのファミリーの３つのメンバーがこれまでに同定されており
、ｈＫ１、ｈＫ２およびｈＫ３と命名されている（１）。その全てが配列同一性
の高いセリンプロテアーゼである。前記カリクレインのうちの２つ、ｈＫ２およ
びｈＫ３は、ほとんど前立腺のみに存在する（（２）に詳細に総説されている）
。ｈＫ３は、より一般的には前立腺特異抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆ
ｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ、ＰＳＡ）として知られており、前立腺の血清マーカーと
して利用されている。最近ではｈＫ２は、前立腺癌のマーカーとしての可能性と
、前立腺癌の生物学において役割を果たしている可能性とについての研究の焦点
になってきた（２）。
、ｈＫ１、ｈＫ２およびｈＫ３と命名されている（１）。その全てが配列同一性
の高いセリンプロテアーゼである。前記カリクレインのうちの２つ、ｈＫ２およ
びｈＫ３は、ほとんど前立腺のみに存在する（（２）に詳細に総説されている）
。ｈＫ３は、より一般的には前立腺特異抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆ
ｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ、ＰＳＡ）として知られており、前立腺の血清マーカーと
して利用されている。最近ではｈＫ２は、前立腺癌のマーカーとしての可能性と
、前立腺癌の生物学において役割を果たしている可能性とについての研究の焦点
になってきた（２）。
【０００４】 ｈＫ２は、前立腺の組織に局在すること（３、４）、配列同一性が８０％ある
こと（５、６）およびアンドロゲンにより調節されること（７、８）のような多
くの点でＰＳＡと似ている。生化学的な観点からは、ｈＫ２は強いトリプシン様
活性を示すのに対して、ＰＳＡは弱いキモトリプシン様活性を示す点でｈＫ２と
ＰＳＡは異なる。しかし、本当のカリクレインとは異なり、ｈＫ２はほとんどキ
ニノゲナーゼ様活性がなく（９、１０）、前立腺で発現するキニノゲナーゼとし
て主に機能するわけではないらしい。
こと（５、６）およびアンドロゲンにより調節されること（７、８）のような多
くの点でＰＳＡと似ている。生化学的な観点からは、ｈＫ２は強いトリプシン様
活性を示すのに対して、ＰＳＡは弱いキモトリプシン様活性を示す点でｈＫ２と
ＰＳＡは異なる。しかし、本当のカリクレインとは異なり、ｈＫ２はほとんどキ
ニノゲナーゼ様活性がなく（９、１０）、前立腺で発現するキニノゲナーゼとし
て主に機能するわけではないらしい。
【０００５】 ｈＫ２の生理的な役割は未確定であるが、いくつかの活性は記載されている。
ｈＫ２はＰＳＡの酵素前駆体型（ｐＰＳＡ）を活性化すること（１１−１３）お
よびｈＫ２の酵素前駆体型を活性化すること（自己活性化、１４）が示された。
この点で、ｈＫ２は他のヒト組織カリクレインであるｈＫ１およびＰＳＡと比べ
て独特である。ｈＫ２によるｐＰＳＡの活性化は、ＰＳＡ活性の調節にｈＫ２が
役割を果たす可能性があることを示唆するため、特に興味深い。
ｈＫ２はＰＳＡの酵素前駆体型（ｐＰＳＡ）を活性化すること（１１−１３）お
よびｈＫ２の酵素前駆体型を活性化すること（自己活性化、１４）が示された。
この点で、ｈＫ２は他のヒト組織カリクレインであるｈＫ１およびＰＳＡと比べ
て独特である。ｈＫ２によるｐＰＳＡの活性化は、ＰＳＡ活性の調節にｈＫ２が
役割を果たす可能性があることを示唆するため、特に興味深い。
【０００６】 ｈＫ２特異的なモノクローナル抗体を用いた免疫組織化学的な研究により、ｈ
Ｋ２が正常組織に比べて前立腺癌腫でより高く発現することが示された（１５）
。これはＰＳＡの逆であり、ＰＳＡは正常組織に比べてより未分化な癌化上皮で
より低く発現する傾向がある。
Ｋ２が正常組織に比べて前立腺癌腫でより高く発現することが示された（１５）
。これはＰＳＡの逆であり、ＰＳＡは正常組織に比べてより未分化な癌化上皮で
より低く発現する傾向がある。
【０００７】 ｈＫ２は、ウロキナーゼ型プラズミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）の２本
鎖の活性型を生成するために、Ｌｙｓ１５８で一本鎖のｕＰＡを切断することに
よりｕＰＡを活性化することが示されている（１２、１６）。ｈＫ２はＰＡＩ−
１と試験管内で迅速に複合体を形成することと、ｈＫ２は複合体形成の間に約６
モルのＰＡＩ−１を不活性化することが最近報告された（１７）。したがって、
前立腺癌におけるｈＫ２レベルの亢進はウロキナーゼの活性化により、あるいは
ウロキナーゼの主要なインヒビターであるＰＡＩ−１の不活性化により、生物学
的な役割を果たす可能性がある。
鎖の活性型を生成するために、Ｌｙｓ１５８で一本鎖のｕＰＡを切断することに
よりｕＰＡを活性化することが示されている（１２、１６）。ｈＫ２はＰＡＩ−
１と試験管内で迅速に複合体を形成することと、ｈＫ２は複合体形成の間に約６
モルのＰＡＩ−１を不活性化することが最近報告された（１７）。したがって、
前立腺癌におけるｈＫ２レベルの亢進はウロキナーゼの活性化により、あるいは
ウロキナーゼの主要なインヒビターであるＰＡＩ−１の不活性化により、生物学
的な役割を果たす可能性がある。
【０００８】 生理学的にはｈＫ２は、血清中でのＡＣＴとの複合体（１８）または精漿中で
のＰＣＩとの複合体（１９）として同定された。しかし、ｈＫ２が前立腺におい
て何らかの組織特異的な複合体を形成するかどうかはこれまで知られていなかっ
た。そこで前立腺、特に前立腺癌におけるｈＫ２の役割を研究する必要性がある
。
のＰＣＩとの複合体（１９）として同定された。しかし、ｈＫ２が前立腺におい
て何らかの組織特異的な複合体を形成するかどうかはこれまで知られていなかっ
た。そこで前立腺、特に前立腺癌におけるｈＫ２の役割を研究する必要性がある
。
【０００９】 発明の概要 本発明は、前立腺の組織の抽出物におけるＰＩ−６として知られるセリンプロ
テアーゼインヒビターとｈＫ２とからなる複合体の発見を基礎とする。ＰＩ−６
は最初に胎盤の組織において報告され、トロンビンと試験管内で複合体が形成で
きることから、胎盤トロンビンインヒビターと呼ばれた（２０）。ＰＩ−６は、
細胞質に局在することから、細胞質アンチプロテアーゼ（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉ
ｃ ａｎｔｉｐｒｏｔｅａｓｅ、ＣＡＰ）とも呼ばれる（２１）。ＰＩ−６は上
皮および内皮細胞に発現し、腎臓、心臓、骨格筋および血小板を含む多数のヒト
組織および細胞で記載されている（２２−２４）。前立腺では報告されていない
。これまでの全ての場合においてＰＩ−６は細胞質に局在するらしい。
テアーゼインヒビターとｈＫ２とからなる複合体の発見を基礎とする。ＰＩ−６
は最初に胎盤の組織において報告され、トロンビンと試験管内で複合体が形成で
きることから、胎盤トロンビンインヒビターと呼ばれた（２０）。ＰＩ−６は、
細胞質に局在することから、細胞質アンチプロテアーゼ（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉ
ｃ ａｎｔｉｐｒｏｔｅａｓｅ、ＣＡＰ）とも呼ばれる（２１）。ＰＩ−６は上
皮および内皮細胞に発現し、腎臓、心臓、骨格筋および血小板を含む多数のヒト
組織および細胞で記載されている（２２−２４）。前立腺では報告されていない
。これまでの全ての場合においてＰＩ−６は細胞質に局在するらしい。
【００１０】 前立腺におけるｈＫ２とＰＩ−６の複合体（ｈＫ２／ＰＩ−６複合体）の発見
は、１）ＰＩ−６自体がこれまで前立腺の組織において未報告のセリンプロテア
ーゼインヒビターファミリーの新規でかつ比較的最近になって記載されたメンバ
ーである点、２）ＰＩ−６は細胞内にあると考えられていることから、細胞外に
あると考えられるｈＫ２との複合体形成のためには、新規な経路があるかあるい
はおそらく発癌の過程で変化した経路があるかのいずれかであることが示唆され
る点、という少なくとも２つの大きな点で、ｈＫ２とＡＣＴとの複合体およびｈ
Ｋ２とＰＣＩとの複合体についてのこれまでの報告に比べて独自性がある。
は、１）ＰＩ−６自体がこれまで前立腺の組織において未報告のセリンプロテア
ーゼインヒビターファミリーの新規でかつ比較的最近になって記載されたメンバ
ーである点、２）ＰＩ−６は細胞内にあると考えられていることから、細胞外に
あると考えられるｈＫ２との複合体形成のためには、新規な経路があるかあるい
はおそらく発癌の過程で変化した経路があるかのいずれかであることが示唆され
る点、という少なくとも２つの大きな点で、ｈＫ２とＡＣＴとの複合体およびｈ
Ｋ２とＰＣＩとの複合体についてのこれまでの報告に比べて独自性がある。
【００１１】 理論に縛られることは望むところではないが、前立腺のＰＩ−６がｈＫ２と複
合体を形成するという発見は、ＰＩ−６が前立腺において何らかの役割を果たす
かもしれないことを示唆する。ＰＩ−６は、ｈＫ２の調節について生物学的な意
義があり、前立腺癌の生物学において役割を果たすかもしれない、ｈＫ２の組織
特異的なインヒビターに該当する。
合体を形成するという発見は、ＰＩ−６が前立腺において何らかの役割を果たす
かもしれないことを示唆する。ＰＩ−６は、ｈＫ２の調節について生物学的な意
義があり、前立腺癌の生物学において役割を果たすかもしれない、ｈＫ２の組織
特異的なインヒビターに該当する。
【００１２】 ｈＫ２／ＰＩ−６複合体は良性または正常な前立腺の組織に比べて前立腺癌で
亢進していることが、本発明の発見である。ＰＩ−６のレベルは前立腺癌におい
て亢進していることも、本発明の発見である。そこで、ｈＫ２またはＰＩ−６単
独のレベルおよび前記複合体の両方が、前立腺癌の新規なマーカーかもしれない
。
亢進していることが、本発明の発見である。ＰＩ−６のレベルは前立腺癌におい
て亢進していることも、本発明の発見である。そこで、ｈＫ２またはＰＩ−６単
独のレベルおよび前記複合体の両方が、前立腺癌の新規なマーカーかもしれない
。
【００１３】 したがって本発明の１つの局面は、ＰＩ−６とｈＫ２とからなる単離され実質
的に精製された複合体を提供する。該複合体に含まれるｈＫ２は完全な（ｉｎｔ
ａｃｔ）ｈＫ２でもｈＫ２の断片でもかまわない。本発明の複合体は、前立腺腫
瘍の組織においてレベルが亢進している。
的に精製された複合体を提供する。該複合体に含まれるｈＫ２は完全な（ｉｎｔ
ａｃｔ）ｈＫ２でもｈＫ２の断片でもかまわない。本発明の複合体は、前立腺腫
瘍の組織においてレベルが亢進している。
【００１４】 本発明の別の局面は、ＰＩ−６とｈＫ２からなる複合体と特異的に免疫反応す
る抗体を提供する。該抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもか
まわない。
る抗体を提供する。該抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもか
まわない。
【００１５】 本発明の更なる局面は、試料中のＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体を検出、
測定する方法を提供する。この方法は、（ａ）検出されるべき複合体と特異的に
結合するある量の試薬とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを含む三重複合体が形成でき
る条件下で、前記試薬を前記試料と反応させる（ｃｏｎｔａｃｔ）こと、（ｂ）
前記三重複合体の存在を検出しまたは前記三重複合体の量を測定すること、とい
うステップを含む。
測定する方法を提供する。この方法は、（ａ）検出されるべき複合体と特異的に
結合するある量の試薬とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを含む三重複合体が形成でき
る条件下で、前記試薬を前記試料と反応させる（ｃｏｎｔａｃｔ）こと、（ｂ）
前記三重複合体の存在を検出しまたは前記三重複合体の量を測定すること、とい
うステップを含む。
【００１６】 好ましい実施態様では、前記試薬は抗体を含む。検出されるべき試料は、哺乳
類の組織の試料、特に前立腺の組織の試料か、それとも血清、精漿、尿および血
液を含むがこれらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料かでもよい。
類の組織の試料、特に前立腺の組織の試料か、それとも血清、精漿、尿および血
液を含むがこれらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料かでもよい。
【００１７】 本発明のさらに別の局面は、生物学的な液体の試料におけるｈＫ２／ＰＩ−６
複合体を検出するためのイムノアッセイ法を提供する。該イムノアッセイ法は、
（ａ）ｈＫ２／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識する第１の抗体および前
記複合体の別のエピトープを認識する第２の抗体を準備すること、（ｂ）第１の
抗体が前記複合体と結合し、第１の抗体およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体を含む第
１の複合体が形成できる条件下で、第１の抗体を試料と反応させること、（ｃ）
第１の抗体、第２の抗体およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体を含む第２の複合体が形
成できる条件下で、第２の抗体を前記第１の複合体と反応させること、（ｄ）試
料中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体の測定値として前記第２の複合体を検出、測定す
ること、というステップからなる。
複合体を検出するためのイムノアッセイ法を提供する。該イムノアッセイ法は、
（ａ）ｈＫ２／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識する第１の抗体および前
記複合体の別のエピトープを認識する第２の抗体を準備すること、（ｂ）第１の
抗体が前記複合体と結合し、第１の抗体およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体を含む第
１の複合体が形成できる条件下で、第１の抗体を試料と反応させること、（ｃ）
第１の抗体、第２の抗体およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体を含む第２の複合体が形
成できる条件下で、第２の抗体を前記第１の複合体と反応させること、（ｄ）試
料中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体の測定値として前記第２の複合体を検出、測定す
ること、というステップからなる。
【００１８】 本発明の実施態様によると、第１の抗体および第２の抗体は、ｈＫ２／ＰＩ−
６複合体と特異的に免疫反応する抗体である。第１の抗体と第２の抗体のうちの
一方はｈＫ２に対する抗体で、他方はＰＩ−６に対する抗体とすることが代替策
である。
６複合体と特異的に免疫反応する抗体である。第１の抗体と第２の抗体のうちの
一方はｈＫ２に対する抗体で、他方はＰＩ−６に対する抗体とすることが代替策
である。
【００１９】 本発明の更なる局面は、試料中のｈＫ２とＰＩ−６とからなる複合体を検出、
測定するための診断用キットを提供することである。該キットは前記複合体と特
異的に結合する既知量の試薬を含み、該試薬は検出可能に標識されあるいは検出
可能な標識と結合する。
測定するための診断用キットを提供することである。該キットは前記複合体と特
異的に結合する既知量の試薬を含み、該試薬は検出可能に標識されあるいは検出
可能な標識と結合する。
【００２０】 本発明の実施態様によると、前記試料はヒトの生理的な液体またはヒトの前立
腺の組織の試料であり、前記試薬は前記複合体と特異的に結合する抗体を含む。
腺の組織の試料であり、前記試薬は前記複合体と特異的に結合する抗体を含む。
【００２１】 本発明は、試料中のｈＫ２とＰＩ−６とからなる複合体を検出、測定するため
の診断用キットを提供する。該キットは、前記複合体と特異的に結合する既知量
の第１の試薬であって、検出可能に標識されあるいは検出可能な標識と結合する
第１の試薬と、前記複合体と特異的に結合する既知量の第２の試薬であって、固
相の支持体に結合する第２の試薬とを含む。
の診断用キットを提供する。該キットは、前記複合体と特異的に結合する既知量
の第１の試薬であって、検出可能に標識されあるいは検出可能な標識と結合する
第１の試薬と、前記複合体と特異的に結合する既知量の第２の試薬であって、固
相の支持体に結合する第２の試薬とを含む。
【００２２】 本発明の実施態様によると、第１の試薬は前記複合体と特異的に免疫反応する
抗体を含み、第２の試薬は前記複合体と特異的に免疫反応する抗体を含む。第１
と第２の試薬のうちの一方はｈＫ２と特異的に免疫反応する抗体を含み、他方は
ＰＩ−６と特異的に免疫反応する抗体を含むとすることが代替策である。
抗体を含み、第２の試薬は前記複合体と特異的に免疫反応する抗体を含む。第１
と第２の試薬のうちの一方はｈＫ２と特異的に免疫反応する抗体を含み、他方は
ＰＩ−６と特異的に免疫反応する抗体を含むとすることが代替策である。
【００２３】 本発明は、前立腺癌の有無を決定するための診断方法であって、（ａ）ＰＩ−
６とｈＫ２とからなる複合体と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６とｈＫ
２とを含む三重複合体が形成できるのに十分な条件下で、前記複合体を含むヒト
由来の試料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の前記三重複合体の
量を測定し、該三重複合体の量を前記ヒトでの前立腺癌の有無と関係づけること
を含む、診断方法を提供する。
６とｈＫ２とからなる複合体と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６とｈＫ
２とを含む三重複合体が形成できるのに十分な条件下で、前記複合体を含むヒト
由来の試料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の前記三重複合体の
量を測定し、該三重複合体の量を前記ヒトでの前立腺癌の有無と関係づけること
を含む、診断方法を提供する。
【００２４】 本発明の実施態様によると、前記試料は生理的な液体の試料または前立腺の組
織の試料である。前記試薬は抗体を含む。
織の試料である。前記試薬は抗体を含む。
【００２５】 本発明は前立腺癌の有無を決定するための診断方法を提供する。その方法は、
（ａ）ＰＩ−６と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６を含む二重複合体が
形成できるのに十分な条件下で、ＰＩ−６を含むヒト由来の試料であって、前立
腺の組織の試料、血清、精漿、尿および血液からなるグループから選択される試
料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の複合体の量を測定し、該複
合体の量を前記ヒトでの前立腺癌の有無と関係づけることを含む。
（ａ）ＰＩ−６と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６を含む二重複合体が
形成できるのに十分な条件下で、ＰＩ−６を含むヒト由来の試料であって、前立
腺の組織の試料、血清、精漿、尿および血液からなるグループから選択される試
料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の複合体の量を測定し、該複
合体の量を前記ヒトでの前立腺癌の有無と関係づけることを含む。
【００２６】 本発明の実施態様によると、前記試料は前立腺の組織の試料で、前記試薬は抗
体を含む。
体を含む。
【００２７】 本発明は添付された請求の範囲において完全な射程が確定され、以下の好まし
い実施態様において説明される。
い実施態様において説明される。
【００２８】 上記およびその他の本発明の特長とその実現方法は、以下の説明を添付図面と
ともに参照することによって、より明解となり最も良く理解されるであろう。こ
れらの図面は本発明の典型的な実施態様のみを表すのであり、したがってその射
程を限定するものではない。これらの図面は具体性と詳細を付け加えるのに役立
つ。
ともに参照することによって、より明解となり最も良く理解されるであろう。こ
れらの図面は本発明の典型的な実施態様のみを表すのであり、したがってその射
程を限定するものではない。これらの図面は具体性と詳細を付け加えるのに役立
つ。
【００２９】 発明の詳細な説明 本発明の１つの局面は、ＰＩ−６とｈＫ２とからなり、単離され実質的に精製
された複合体を提供することである。ここで用いられる「実質的に精製された（
ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」という用語は、ＰＩ−６と
ｈＫ２とからなる複合体であって、自然状態で会合（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）し
ている他のタンパク質、脂肪、炭水化物等の物質が実質的に除去されている複合
体を指す。本発明の実質的に精製されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体は、非還元的条
件下でのポリアクリルアミドゲルで単一の主要なバンドになる。前記複合体はＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥ技術により測定された約６４ｋＤａの分子量を有する。特定の会
合状態(ｆｏｒｍ)のｈＫ２の純度はアミノ末端のアミノ酸配列分析によっても測
定できる。
された複合体を提供することである。ここで用いられる「実質的に精製された（
ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」という用語は、ＰＩ−６と
ｈＫ２とからなる複合体であって、自然状態で会合（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）し
ている他のタンパク質、脂肪、炭水化物等の物質が実質的に除去されている複合
体を指す。本発明の実質的に精製されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体は、非還元的条
件下でのポリアクリルアミドゲルで単一の主要なバンドになる。前記複合体はＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥ技術により測定された約６４ｋＤａの分子量を有する。特定の会
合状態(ｆｏｒｍ)のｈＫ２の純度はアミノ末端のアミノ酸配列分析によっても測
定できる。
【００３０】 本発明の目的のためには、ｈＫ２という用語は完全なｈＫ２ポリペプチドとｈ
Ｋ２ポリペプチドの断片とを含む。例えば、本発明の１の実施態様において、ｈ
Ｋ２とＰＩ−６との複合体に含まれるｈＫ２ポリペプチドは、ｈＫ２ポリペプチ
ド配列の１４５番目のアルギニンで切断された（ｃｌｉｐｐｅｄ）ものであって
もよい。切断されたｈＫ２を含むｈＫ２／ＰＩ−６複合体が還元条件下でのポリ
アクリルアミドゲルを経て精製されるとき、前記複合体はＰＩ−６に共有結合し
たｈＫ２断片とＰＩ−６とを含む。ＰＩ−６と共有結合しない切断された断片は
、還元および変性条件下で前記複合体から分離される。例えば、１の実施態様で
は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体はｈＫ２の１４５−２３７番のアミノ酸配列の断片
とＰＩ−６とからなる。前記複合体は還元条件下のポリアクリルアミドゲル技術
により測定された約５０ｋＤａの分子量を有する。本発明の複合体に含まれるｈ
Ｋ２は該ｈＫ２配列の他の部位で切断されてもかまわないことを理解すべきであ
る。そこで、本発明の目的のためには、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体に用いられるｈ
Ｋ２という用語は、切断された断片が前記複合体のＰＩ−６と共有結合する限り
において、完全なｈＫ２のどの位置で切断されたｈＫ２断片でも含まれる。
Ｋ２ポリペプチドの断片とを含む。例えば、本発明の１の実施態様において、ｈ
Ｋ２とＰＩ−６との複合体に含まれるｈＫ２ポリペプチドは、ｈＫ２ポリペプチ
ド配列の１４５番目のアルギニンで切断された（ｃｌｉｐｐｅｄ）ものであって
もよい。切断されたｈＫ２を含むｈＫ２／ＰＩ−６複合体が還元条件下でのポリ
アクリルアミドゲルを経て精製されるとき、前記複合体はＰＩ−６に共有結合し
たｈＫ２断片とＰＩ−６とを含む。ＰＩ−６と共有結合しない切断された断片は
、還元および変性条件下で前記複合体から分離される。例えば、１の実施態様で
は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体はｈＫ２の１４５−２３７番のアミノ酸配列の断片
とＰＩ−６とからなる。前記複合体は還元条件下のポリアクリルアミドゲル技術
により測定された約５０ｋＤａの分子量を有する。本発明の複合体に含まれるｈ
Ｋ２は該ｈＫ２配列の他の部位で切断されてもかまわないことを理解すべきであ
る。そこで、本発明の目的のためには、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体に用いられるｈ
Ｋ２という用語は、切断された断片が前記複合体のＰＩ−６と共有結合する限り
において、完全なｈＫ２のどの位置で切断されたｈＫ２断片でも含まれる。
【００３１】 ＰＩ−６は前立腺腫瘍に存在することが本発明の発見である。ｈＫ２／ＰＩ−
６複合体は亢進したレベルで前立腺腫瘍に存在することも本発明の発見である。
ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の量が正常または良性の組織に存在する複合体の量より
も高いとき、前記複合体のレベルは亢進しているとする。
６複合体は亢進したレベルで前立腺腫瘍に存在することも本発明の発見である。
ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の量が正常または良性の組織に存在する複合体の量より
も高いとき、前記複合体のレベルは亢進しているとする。
【００３２】 本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体は、ここで説明される方法、すなわち、精製
されあるいはほぼ精製されたタンパク質の試験管内での調製によって、そしてタ
ンパク質精製の分野の当業者に知られた他のいかなる方法によっても、前立腺の
組織から単離することができる。精製されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体は抗体作成
に用いられる。したがって、本発明の１の局面は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複
合体と特異的に免疫反応し結合する抗体を提供する。ここで用いられる「特異的
に免疫反応する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ）
」あるいは「特異的な」という用語は、本発明の抗体が本発明のｈＫ２／ＰＩ−
６複合体のみを認識し結合し、遊離ｈＫ２や遊離ＰＩ−６とは結合しないことを
指す。
されあるいはほぼ精製されたタンパク質の試験管内での調製によって、そしてタ
ンパク質精製の分野の当業者に知られた他のいかなる方法によっても、前立腺の
組織から単離することができる。精製されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体は抗体作成
に用いられる。したがって、本発明の１の局面は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複
合体と特異的に免疫反応し結合する抗体を提供する。ここで用いられる「特異的
に免疫反応する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ）
」あるいは「特異的な」という用語は、本発明の抗体が本発明のｈＫ２／ＰＩ−
６複合体のみを認識し結合し、遊離ｈＫ２や遊離ＰＩ−６とは結合しないことを
指す。
【００３３】 異なるエピトープ特異性を有するモノクローナル抗体の混合物から本質的にな
る抗体が、個別のモノクローナル抗体調製物とともに提供される。モノクローナ
ル抗体は、本発明の複合体または本発明の複合体の部分を含む抗原から、当業者
に周知の方法により作成される（Ｅ．ハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）ら、抗体：実験
マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
）、コールド・スプリング・ハーバー研究所、１９８８年）。一般には、この方
法は、例えば適合するミエローマの株細胞と融合された初代培養の脾臓細胞から
抗体産生融合細胞株を作成すること、および該融合細胞を大量培養においてか、
あるいは使用されたミエローマ細胞株が由来しまたは適合する動物種においてか
のいずれかで増殖させることに関する。かかる抗体は、動物への接種により産生
されたものと比較すると多くの利点を有するが、それは、かかる抗体の特異性と
感度が高く、免疫学的にみて比較的「純度が高い」からである。免疫学的に活性
のある抗体断片、例えば、ｆ（ａｂ）断片は、本発明の射程内にあり、部分的に
ヒト化したモノクローナル抗体も同様である。
る抗体が、個別のモノクローナル抗体調製物とともに提供される。モノクローナ
ル抗体は、本発明の複合体または本発明の複合体の部分を含む抗原から、当業者
に周知の方法により作成される（Ｅ．ハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）ら、抗体：実験
マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
）、コールド・スプリング・ハーバー研究所、１９８８年）。一般には、この方
法は、例えば適合するミエローマの株細胞と融合された初代培養の脾臓細胞から
抗体産生融合細胞株を作成すること、および該融合細胞を大量培養においてか、
あるいは使用されたミエローマ細胞株が由来しまたは適合する動物種においてか
のいずれかで増殖させることに関する。かかる抗体は、動物への接種により産生
されたものと比較すると多くの利点を有するが、それは、かかる抗体の特異性と
感度が高く、免疫学的にみて比較的「純度が高い」からである。免疫学的に活性
のある抗体断片、例えば、ｆ（ａｂ）断片は、本発明の射程内にあり、部分的に
ヒト化したモノクローナル抗体も同様である。
【００３４】 所望の場合には、ポリクローナル抗体は、例えば抗体が作成されたポリペプチ
ドまたはペプチドが結合するマトリクスに結合し溶出することにより、さらに精
製することが可能である。当業者は免疫学の分野においてポリクローナル抗体お
よびモノクローナル抗体の精製および／または濃縮のための様々な共通技術のこ
とを知っている。（例えば、引用により取り込まれたコリガン（Ｃｏｌｉｇａｎ
）ら、免疫学の最新のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ユニット９、ワイリーインターサイエンス（Ｗｉ
ｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９１年、を参照せよ。）
ドまたはペプチドが結合するマトリクスに結合し溶出することにより、さらに精
製することが可能である。当業者は免疫学の分野においてポリクローナル抗体お
よびモノクローナル抗体の精製および／または濃縮のための様々な共通技術のこ
とを知っている。（例えば、引用により取り込まれたコリガン（Ｃｏｌｉｇａｎ
）ら、免疫学の最新のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ユニット９、ワイリーインターサイエンス（Ｗｉ
ｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９１年、を参照せよ。）
【００３５】 本発明において用いられる「抗体」という用語は、完全な分子とともに、Ｆａ
ｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖのような、その断片を含む。これらの抗体断片は
、その抗原または受容体と選択的に結合できる能力を保持し、以下の通り定義さ
れる。 （１）Ｆａｂとは、抗体分子の１価の抗原結合断片を含み、完全な１本の軽鎖と
１本の重鎖の部分とができるように抗体全体を酵素パパインで消化して作成でき
るものをいう。 （２）Ｆａｂ’とは、完全な軽鎖１本と１本の重鎖の部分とができるように抗体
全体をペプシンで処理した後、還元して得られる抗体分子の断片をいう。――抗
体１分子あたり２個のＦａｂ’断片が得られる。 （３）Ｆ（ａｂ’）２とは、抗体全体を酵素ペプシンで処理し、その後還元処理
はしないで得られる抗体の断片をいう。――Ｆ（ａｂ’）２は２個のＦａｂ’断
片が２本のジスルフィド結合でつながった２量体である。 （４）Ｆｖとは、軽鎖の可変部と重鎖の可変部とを含み、２本の鎖として発現さ
れる遺伝子工学的に作成された断片をいう。 （５）１本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＳＣＡ）と
は、遺伝的に融合した１本鎖分子として、適当なポリペプチドリンカーにより連
結された軽鎖の可変部と重鎖の可変部とを含む、遺伝子工学的に作成された分子
をいう。
ｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖのような、その断片を含む。これらの抗体断片は
、その抗原または受容体と選択的に結合できる能力を保持し、以下の通り定義さ
れる。 （１）Ｆａｂとは、抗体分子の１価の抗原結合断片を含み、完全な１本の軽鎖と
１本の重鎖の部分とができるように抗体全体を酵素パパインで消化して作成でき
るものをいう。 （２）Ｆａｂ’とは、完全な軽鎖１本と１本の重鎖の部分とができるように抗体
全体をペプシンで処理した後、還元して得られる抗体分子の断片をいう。――抗
体１分子あたり２個のＦａｂ’断片が得られる。 （３）Ｆ（ａｂ’）２とは、抗体全体を酵素ペプシンで処理し、その後還元処理
はしないで得られる抗体の断片をいう。――Ｆ（ａｂ’）２は２個のＦａｂ’断
片が２本のジスルフィド結合でつながった２量体である。 （４）Ｆｖとは、軽鎖の可変部と重鎖の可変部とを含み、２本の鎖として発現さ
れる遺伝子工学的に作成された断片をいう。 （５）１本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＳＣＡ）と
は、遺伝的に融合した１本鎖分子として、適当なポリペプチドリンカーにより連
結された軽鎖の可変部と重鎖の可変部とを含む、遺伝子工学的に作成された分子
をいう。
【００３６】 これらの断片の作成方法は当業者に知られている。（例えば、引用によりここ
に取り込まれたハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）とレーン（Ｌａｎｅ）、抗体：実験マ
ニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）
、コールド・スプリング・ハーバー研究所、ニューヨーク、１９８８年、を参照
せよ。）
に取り込まれたハーロー（Ｈａｒｌｏｗ）とレーン（Ｌａｎｅ）、抗体：実験マ
ニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）
、コールド・スプリング・ハーバー研究所、ニューヨーク、１９８８年、を参照
せよ。）
【００３７】 本発明で用いられる「エピトープ」という用語は、抗体の抗原結合部位（ｐａ
ｒａｔｏｐｅ）が結合する抗原上のいかなる抗原決定基を意味する。エピトープ
の決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖のような化学的に活性のある分子表面
の原子団からなり、通常は、特異的な三次元構造上の特長とともに特異的な荷電
状態の特長を有する。
ｒａｔｏｐｅ）が結合する抗原上のいかなる抗原決定基を意味する。エピトープ
の決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖のような化学的に活性のある分子表面
の原子団からなり、通常は、特異的な三次元構造上の特長とともに特異的な荷電
状態の特長を有する。
【００３８】 本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体は前立腺癌の組織において亢進していること
から、前記複合体は前立腺癌を検出するための血清マーカーとして利用できる。
前記複合体は、前立腺癌の組織を検出するための免疫組織化学的なマーカーとし
ても利用できる。本発明によると、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体は患者の組
織の試料中に免疫組織化学的な手法により検出でき、および／または患者の液体
の試料中に試験管内イムノアッセイ法により検出できる。本発明の複合体を患者
の試料中で測定することは、著しい診断上の有用性があるうえ、前立腺癌患者の
指標となり、または癌の進行と関連する可能性がある。
から、前記複合体は前立腺癌を検出するための血清マーカーとして利用できる。
前記複合体は、前立腺癌の組織を検出するための免疫組織化学的なマーカーとし
ても利用できる。本発明によると、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体は患者の組
織の試料中に免疫組織化学的な手法により検出でき、および／または患者の液体
の試料中に試験管内イムノアッセイ法により検出できる。本発明の複合体を患者
の試料中で測定することは、著しい診断上の有用性があるうえ、前立腺癌患者の
指標となり、または癌の進行と関連する可能性がある。
【００３９】 患者の組織標本における抗原検出のための免疫組織化学的方法は当業者に周知
であり、ここで詳細に説明する必要はない。例えば、抗原の免疫組織化学的検出
法は、テーラー（Ｔａｙｌｏｒ）、アーカイブ オブ パソロジー アンド ラ
ボラトリー メディシン（Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．）１０２
巻１１３頁（１９７８年）に一般的に説明されている。簡単には、本発明の文脈
においては、前立腺に関する問題ありと疑われた患者から得られた組織標本は、
本発明の複合体を認識する抗体、好ましくはモノクローナル抗体と反応させられ
る。その後、該抗体と結合した部位は、標準的な免疫組織化学的な手法で前記組
織標本を選択的に染色することにより、決定される。
であり、ここで詳細に説明する必要はない。例えば、抗原の免疫組織化学的検出
法は、テーラー（Ｔａｙｌｏｒ）、アーカイブ オブ パソロジー アンド ラ
ボラトリー メディシン（Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．）１０２
巻１１３頁（１９７８年）に一般的に説明されている。簡単には、本発明の文脈
においては、前立腺に関する問題ありと疑われた患者から得られた組織標本は、
本発明の複合体を認識する抗体、好ましくはモノクローナル抗体と反応させられ
る。その後、該抗体と結合した部位は、標準的な免疫組織化学的な手法で前記組
織標本を選択的に染色することにより、決定される。
【００４０】 別の実施態様においては、組織標本で本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体を検出
、測定するするために、ｈＫ２またはＰＩ−６のいずれかに特異的な抗体が用い
られる。この実施態様によると、免疫組織化学的な手法は、（ａ）遊離ｈＫ２に
特異的な第１の抗体と、ＰＩ−６に特異的な第２の抗体と、本発明のｈＫ２／Ｐ
Ｉ−６複合体を認識し結合する第３の抗体とを準備すること、（ｂ）全ての遊離
ｈＫ２およびＰＩ−６がそれぞれ第１および第２の抗体でブロックされる条件下
で、第１および第２の抗体を組織標本と反応させること、（ｃ）組織標本に含ま
れる前記複合体と第３の抗体が結合でき、第３の抗体とｈＫ２／ＰＩ−６複合体
とを含む三重複合体が形成する条件下で、第３の抗体を組織標本と反応させるこ
と、および（ｄ）前記三重複合体の存在を検出し、前記三重複合体の量を測定す
ること、というステップを含む。
、測定するするために、ｈＫ２またはＰＩ−６のいずれかに特異的な抗体が用い
られる。この実施態様によると、免疫組織化学的な手法は、（ａ）遊離ｈＫ２に
特異的な第１の抗体と、ＰＩ−６に特異的な第２の抗体と、本発明のｈＫ２／Ｐ
Ｉ−６複合体を認識し結合する第３の抗体とを準備すること、（ｂ）全ての遊離
ｈＫ２およびＰＩ−６がそれぞれ第１および第２の抗体でブロックされる条件下
で、第１および第２の抗体を組織標本と反応させること、（ｃ）組織標本に含ま
れる前記複合体と第３の抗体が結合でき、第３の抗体とｈＫ２／ＰＩ−６複合体
とを含む三重複合体が形成する条件下で、第３の抗体を組織標本と反応させるこ
と、および（ｄ）前記三重複合体の存在を検出し、前記三重複合体の量を測定す
ること、というステップを含む。
【００４１】 本発明の実施態様によると、前記第３の抗体は、遊離ｈＫ２だけでなく本発明
のｈＫ２／ＰＩ−６複合体をも認識、結合する抗ｈＫ２抗体であってもよい。前
記第３の抗体は、遊離ＰＩ−６だけでなくｈＫ２／ＰＩ−６複合体をも認識し結
合する抗ＰＩ−６抗体であるとすることが代替策である。
のｈＫ２／ＰＩ−６複合体をも認識、結合する抗ｈＫ２抗体であってもよい。前
記第３の抗体は、遊離ＰＩ−６だけでなくｈＫ２／ＰＩ−６複合体をも認識し結
合する抗ＰＩ−６抗体であるとすることが代替策である。
【００４２】 前立腺の組織の試料のように、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体が試料中で最多量の（
ｄｏｍｉｎａｎｔ）ｈＫ２複合体である場合には、遊離ｈＫ２を認識する抗体と
、遊離ｈＫ２およびｈＫ２複合体の両方を認識する抗体とだけが、ｈＫ２／ＰＩ
−６複合体を検出する目的で利用できることを理解すべきである。この場合には
、ＰＩ−６に対する抗体を利用する必要はない。
ｄｏｍｉｎａｎｔ）ｈＫ２複合体である場合には、遊離ｈＫ２を認識する抗体と
、遊離ｈＫ２およびｈＫ２複合体の両方を認識する抗体とだけが、ｈＫ２／ＰＩ
−６複合体を検出する目的で利用できることを理解すべきである。この場合には
、ＰＩ−６に対する抗体を利用する必要はない。
【００４３】 ｈＫ２またはＰＩ−６に対する抗体は、ここに説明された方法および当業者に
共通に知られている方法により、ｈＫ２またはＰＩ−６を抗原に用いて作成でき
る。遊離ｈＫ２または遊離ＰＩ−６のみを認識する抗体は、ｈＫ２とＰＩ−６と
の複合体形成によりブロックされるエピトープを認識する抗体である。遊離ｈＫ
２または遊離ＰＩ−６およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体の両方を認識する抗体は、
ｈＫ２とＰＩ−６との複合体形成によりブロックされないエピトープを認識する
抗体である。ｈＫ２またはＰＩ−６の抗体の特長は、ウェスタンブロット法また
は当業者に知られたいかなる他の方法によっても決定される。
共通に知られている方法により、ｈＫ２またはＰＩ−６を抗原に用いて作成でき
る。遊離ｈＫ２または遊離ＰＩ−６のみを認識する抗体は、ｈＫ２とＰＩ−６と
の複合体形成によりブロックされるエピトープを認識する抗体である。遊離ｈＫ
２または遊離ＰＩ−６およびｈＫ２／ＰＩ−６複合体の両方を認識する抗体は、
ｈＫ２とＰＩ−６との複合体形成によりブロックされないエピトープを認識する
抗体である。ｈＫ２またはＰＩ−６の抗体の特長は、ウェスタンブロット法また
は当業者に知られたいかなる他の方法によっても決定される。
【００４４】 本発明の１の実施態様においては、組織標本とは、患者の前立腺から得られた
組織標本をいう。前立腺の組織は、正常な前立腺の組織でも、癌化した前立腺の
組織でも、良性の前立腺の過形成組織でもかまわない。
組織標本をいう。前立腺の組織は、正常な前立腺の組織でも、癌化した前立腺の
組織でも、良性の前立腺の過形成組織でもかまわない。
【００４５】 イムノアッセイ法により患者の液体の試料中の抗原物質を試験管内で検出する
一般的な方法もまた当業者に周知であり、ここで繰り返すことを要しない。例え
ば、イムノアッセイ法は、パターソン（Ｐａｔｅｒｓｏｎ）ら、インターナショ
ナル ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．）３７巻６５９頁
（１９８６年）およびブーシェル（Ｂｕｒｃｈｅｌｌ）ら、インターナショナル
ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．）３４巻７６３頁（１
９８４年）に一般的に説明されている。本発明の１の実施態様によると、生物学
的な試料中で本発明の複合体を検出するためのイムノアッセイ法は、（ａ）検出
されるべきｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異的に結合するある量の試薬とｈＫ２／
ＰＩ−６複合体とを含む三重複合体が形成できる条件下で、前記試薬を試料と反
応させること、（ｂ）前記試料中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体の量の測定値として
、前記三重複合体の存在を検出し、前記三重複合体の量を測定すること、という
ステップを含む。
一般的な方法もまた当業者に周知であり、ここで繰り返すことを要しない。例え
ば、イムノアッセイ法は、パターソン（Ｐａｔｅｒｓｏｎ）ら、インターナショ
ナル ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．）３７巻６５９頁
（１９８６年）およびブーシェル（Ｂｕｒｃｈｅｌｌ）ら、インターナショナル
ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．）３４巻７６３頁（１
９８４年）に一般的に説明されている。本発明の１の実施態様によると、生物学
的な試料中で本発明の複合体を検出するためのイムノアッセイ法は、（ａ）検出
されるべきｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異的に結合するある量の試薬とｈＫ２／
ＰＩ−６複合体とを含む三重複合体が形成できる条件下で、前記試薬を試料と反
応させること、（ｂ）前記試料中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体の量の測定値として
、前記三重複合体の存在を検出し、前記三重複合体の量を測定すること、という
ステップを含む。
【００４６】 本発明の目的のためには、前記生物学的な試料は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６
複合体を含むいかなるヒトの生理的な液体の試料であってもよい。前記ヒトの生
理的な液体の試料には、血清、精漿、尿および血液が含まれるが、これらに限定
されない。
複合体を含むいかなるヒトの生理的な液体の試料であってもよい。前記ヒトの生
理的な液体の試料には、血清、精漿、尿および血液が含まれるが、これらに限定
されない。
【００４７】 本発明の目的のためには、本発明により提供される抗原に対し要求される特異
性がある限り、モノクローナル抗体とポリクローナル抗体の両方が利用できる。
好ましくはモノクローナル抗体が利用される。
性がある限り、モノクローナル抗体とポリクローナル抗体の両方が利用できる。
好ましくはモノクローナル抗体が利用される。
【００４８】 モノクローナル抗体は、液相でも、固相の担体に結合した状態でも利用できる
。モノクローナル抗体は、多くの異なる担体に結合されて本発明のｈＫ２／ＰＩ
−６複合体の測定に利用できる。周知の担体の例には、ガラス、ポリスチレン、
ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然お
よび修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよび磁鉄鉱が含
まれる。前記担体の性質は、本発明の目的のためには可溶性でも不溶性でもかま
わない。不溶性の担体の例にはビーズとマイクロタイタープレートが含まれるが
、これらに限定されない。当業者はモノクローナル抗体用の他の適当な担体のこ
とを知っており、ルーチンの実験作業によってこれを確かめることができる。
。モノクローナル抗体は、多くの異なる担体に結合されて本発明のｈＫ２／ＰＩ
−６複合体の測定に利用できる。周知の担体の例には、ガラス、ポリスチレン、
ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然お
よび修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよび磁鉄鉱が含
まれる。前記担体の性質は、本発明の目的のためには可溶性でも不溶性でもかま
わない。不溶性の担体の例にはビーズとマイクロタイタープレートが含まれるが
、これらに限定されない。当業者はモノクローナル抗体用の他の適当な担体のこ
とを知っており、ルーチンの実験作業によってこれを確かめることができる。
【００４９】 さらに、これらのイムノアッセイ法でのモノクローナル抗体は、さまざまな方
法で検出可能に標識できる。例えば、本発明のモノクローナル抗体は低分子ハプ
テンと結合できる。これらのハプテンは第２の反応により特異的に検出できる。
例えば、アビジンと反応するビオチンまたはジニトリフェノールとピリドキサー
ルとフルオレセインのような、特異的な抗ハプテン抗体と反応できるハプテンを
利用することが普通である。さらに、本発明のモノクローナル抗体は、酵素、放
射性同位元素、蛍光物質または金属、化学発光物質または生物発光物質のような
検出可能な標識と結合されてもよい。さらに、これらの標識を所望の分子に結合
することは、当業者に共通の標準的な技術を用いてなされる。
法で検出可能に標識できる。例えば、本発明のモノクローナル抗体は低分子ハプ
テンと結合できる。これらのハプテンは第２の反応により特異的に検出できる。
例えば、アビジンと反応するビオチンまたはジニトリフェノールとピリドキサー
ルとフルオレセインのような、特異的な抗ハプテン抗体と反応できるハプテンを
利用することが普通である。さらに、本発明のモノクローナル抗体は、酵素、放
射性同位元素、蛍光物質または金属、化学発光物質または生物発光物質のような
検出可能な標識と結合されてもよい。さらに、これらの標識を所望の分子に結合
することは、当業者に共通の標準的な技術を用いてなされる。
【００５０】 前記抗体を検出可能に標識できる方法の１つは酵素と結合することである。こ
の酵素は、その後基質に曝されたときには、例えば、吸光光度または蛍光の測定
手段により検出可能な化学的な成分（ｍｏｉｅｔｙ）を生成するように、基質と
反応する（ＥＬＩＳＡシステム）。検出可能な標識として利用できる酵素の例は
、西洋ワサビペルオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカ
スヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、イーストアルコールデ
ヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオース
リン酸イソメラーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコー
スオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、
カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよ
びアセチルコリンエステラーゼである。
の酵素は、その後基質に曝されたときには、例えば、吸光光度または蛍光の測定
手段により検出可能な化学的な成分（ｍｏｉｅｔｙ）を生成するように、基質と
反応する（ＥＬＩＳＡシステム）。検出可能な標識として利用できる酵素の例は
、西洋ワサビペルオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカ
スヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、イーストアルコールデ
ヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオース
リン酸イソメラーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコー
スオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、
カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよ
びアセチルコリンエステラーゼである。
【００５１】 ＥＬＩＳＡシステムの感度を向上させるために、以上に説明された手法は、ア
ビジン−ペルオキシダーゼ複合体と反応するビオチン化抗体を用いて、修正され
てもよい。
ビジン−ペルオキシダーゼ複合体と反応するビオチン化抗体を用いて、修正され
てもよい。
【００５２】 抗原の量は抗体を放射性同位元素で標識することによっても測定できる。放射
性同位元素の存在は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターを使
用して測定できる。特に有用な同位元素は、３Ｈ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、３２Ｐ
、３５Ｓ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、３６Ｃ１、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、７５ Ｓｅ、１１１ｎ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａおよび９０Ｙである。
性同位元素の存在は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターを使
用して測定できる。特に有用な同位元素は、３Ｈ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、３２Ｐ
、３５Ｓ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、３６Ｃ１、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、７５ Ｓｅ、１１１ｎ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａおよび９０Ｙである。
【００５３】 抗原の測定は、抗体を蛍光物質で標識することによっても行うことができる。
蛍光で標識された分子が適当な波長の光に曝されるとき、色素の蛍光によってそ
の存在を検出することができる。蛍光標識物質の最も重要なものには、フルオレ
セインイソチオシアナート、ローダミン、フィコエリスリン（ｐｈｙｃｏｅｒｙ
ｔｈｒｉｎ）、フィコシアニン（ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）、アロフィコシアニ
ン（ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）、ｏ−フィタルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａ
ｌｄｅｈｙｄｅ）およびフルオレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）があ
る。
蛍光で標識された分子が適当な波長の光に曝されるとき、色素の蛍光によってそ
の存在を検出することができる。蛍光標識物質の最も重要なものには、フルオレ
セインイソチオシアナート、ローダミン、フィコエリスリン（ｐｈｙｃｏｅｒｙ
ｔｈｒｉｎ）、フィコシアニン（ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）、アロフィコシアニ
ン（ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）、ｏ−フィタルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａ
ｌｄｅｈｙｄｅ）およびフルオレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）があ
る。
【００５４】 Ｅｕ（ユーロピウム、ｅｕｒｏｐｉｕｍ）その他のランタニドのような蛍光発
光性金属原子もまた利用可能である。これらはＤＰＥＡまたはＥＤＴＡのような
金属をキレートする原子団によって所望の分子に結合させることができる。
光性金属原子もまた利用可能である。これらはＤＰＥＡまたはＥＤＴＡのような
金属をキレートする原子団によって所望の分子に結合させることができる。
【００５５】 抗体を検出可能に標識する別の方法は、化学発光物質と結合させることである
。化学発光物質でタグづけられた（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｉｓｃｅｎｔ−ｔａｇ
ｇｅｄ）免疫グロブリンの存在は、化学反応の過程で発生する発光を検出するこ
とにより測定できる。特に有用な化学発光標識物質の例は、ルミノール（ｌｕｍ
ｉｎｏｌ）、イソルミロール（ｉｓｏｌｕｍｉｎｏｌ）、芳香族アクリジニウム
エステル（ａｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾ
ール（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、リジニウム塩（ｒｉｄｉｎｉｕｍ ｓａｌｔ）お
よびシュウ酸エステル（ｏｘａｌａｔｅ ｅｓｔｅｒ）である。
。化学発光物質でタグづけられた（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｉｓｃｅｎｔ−ｔａｇ
ｇｅｄ）免疫グロブリンの存在は、化学反応の過程で発生する発光を検出するこ
とにより測定できる。特に有用な化学発光標識物質の例は、ルミノール（ｌｕｍ
ｉｎｏｌ）、イソルミロール（ｉｓｏｌｕｍｉｎｏｌ）、芳香族アクリジニウム
エステル（ａｒｏｍａｔｉｃ ａｃｒｉｄｉｎｉｕｍ ｅｓｔｅｒ）、イミダゾ
ール（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ）、リジニウム塩（ｒｉｄｉｎｉｕｍ ｓａｌｔ）お
よびシュウ酸エステル（ｏｘａｌａｔｅ ｅｓｔｅｒ）である。
【００５６】 同様に、生物発光物質もまた標識として利用可能である。生物発光は生物学的
なシステムでみられ、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を上昇させる特殊な
タイプの化学発光である。生物発光分子の存在は発光を検出することにより測定
される。標識の目的のために重要な生物発光物質は、ルシフェリン（ｌｕｃｉｆ
ｅｒｉｎ）、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）およびエクオリン（ａｑ
ｕｏｒｉｎ）である。
なシステムでみられ、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を上昇させる特殊な
タイプの化学発光である。生物発光分子の存在は発光を検出することにより測定
される。標識の目的のために重要な生物発光物質は、ルシフェリン（ｌｕｃｉｆ
ｅｒｉｎ）、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）およびエクオリン（ａｑ
ｕｏｒｉｎ）である。
【００５７】 本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体の試料中での定性的および／または定量的な
測定は、直接または間接的フォーマットのいずれかでの、競合または非競合的な
イムノアッセイ法により達成できる。かかるイムノアッセイ法の例には、ラジオ
イムノアッセイ法（ＲＩＡ）とサンドイッチ型（免疫定量的（ｉｍｍｕｎｏｍｅ
ｔｒｉｃ））アッセイ法がある。本発明のモノクローナル抗体を用いる抗原の検
出は、生理的な試料についての免疫組織化学的アッセイ法を含めた、順方向、逆
方向または同時のいずれかのモードで行われるイムノアッセイ法を利用してなさ
れる。当業者は、過度の実験作業を伴わないで、他のイムノアッセイ法を知り、
または容易に見つけることができる。
測定は、直接または間接的フォーマットのいずれかでの、競合または非競合的な
イムノアッセイ法により達成できる。かかるイムノアッセイ法の例には、ラジオ
イムノアッセイ法（ＲＩＡ）とサンドイッチ型（免疫定量的（ｉｍｍｕｎｏｍｅ
ｔｒｉｃ））アッセイ法がある。本発明のモノクローナル抗体を用いる抗原の検
出は、生理的な試料についての免疫組織化学的アッセイ法を含めた、順方向、逆
方向または同時のいずれかのモードで行われるイムノアッセイ法を利用してなさ
れる。当業者は、過度の実験作業を伴わないで、他のイムノアッセイ法を知り、
または容易に見つけることができる。
【００５８】 「免疫定量的イムノアッセイ法」または「サンドイッチ型イムノアッセイ法」
には、同時サンドイッチ型、順方向サンドイッチ型および逆方向サンドイッチ型
のイムノアッセイ法が含まれる。これらの用語は、当業者には良く理解されてい
る。当業者は、現在知られておりまたは将来開発されるその他のアッセイ法の変
法および形式においても、本発明による抗体が有用であることも認識している。
これらは本発明の射程内に含まれることが意図されている。
には、同時サンドイッチ型、順方向サンドイッチ型および逆方向サンドイッチ型
のイムノアッセイ法が含まれる。これらの用語は、当業者には良く理解されてい
る。当業者は、現在知られておりまたは将来開発されるその他のアッセイ法の変
法および形式においても、本発明による抗体が有用であることも認識している。
これらは本発明の射程内に含まれることが意図されている。
【００５９】 本発明の１の実施態様によると、遊離ｈＫ２または遊離ＰＩ−６に特異的な抗
体は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体をヒトの生理的な液体の試料中で検出ま
たは測定するための本発明のイムノアッセイ法においても利用できる。例えば、
ｈＫ２またはＰＩ−６に対する抗体は、本発明のサンドイッチ型アッセイ法にお
いて利用できる。したがって本発明の１の実施態様は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体
を検出するためのイムノアッセイ法を提供し、そのアッセイ法は、（ａ）ｈＫ２
／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識する第１の抗体と前記複合体の別のエ
ピトープを認識する第２の抗体とを準備すること、（ｂ）第１の抗体がｈＫ２／
ＰＩ−６複合体と結合し、第１の抗体と前記複合体とを含む第１の複合体が形成
できる条件下で、第１の抗体を試料と反応させること、（ｃ）第２の抗体がｈＫ
２／ＰＩ−６複合体に結合し、第１の抗体と第２の抗体と前記複合体とを含む第
２の複合体が形成できる条件下で、第２の抗体を前記第１の複合体と反応させる
こと、（ｄ）前記試料中に含まれるｈＫ２／ＰＩ−６複合体の測定値として前記
第２の複合体を検出、測定すること、というステップを含む。
体は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体をヒトの生理的な液体の試料中で検出ま
たは測定するための本発明のイムノアッセイ法においても利用できる。例えば、
ｈＫ２またはＰＩ−６に対する抗体は、本発明のサンドイッチ型アッセイ法にお
いて利用できる。したがって本発明の１の実施態様は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体
を検出するためのイムノアッセイ法を提供し、そのアッセイ法は、（ａ）ｈＫ２
／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識する第１の抗体と前記複合体の別のエ
ピトープを認識する第２の抗体とを準備すること、（ｂ）第１の抗体がｈＫ２／
ＰＩ−６複合体と結合し、第１の抗体と前記複合体とを含む第１の複合体が形成
できる条件下で、第１の抗体を試料と反応させること、（ｃ）第２の抗体がｈＫ
２／ＰＩ−６複合体に結合し、第１の抗体と第２の抗体と前記複合体とを含む第
２の複合体が形成できる条件下で、第２の抗体を前記第１の複合体と反応させる
こと、（ｄ）前記試料中に含まれるｈＫ２／ＰＩ−６複合体の測定値として前記
第２の複合体を検出、測定すること、というステップを含む。
【００６０】 前記第１および第２の抗体は、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異的に免
疫反応する抗体であってもよい。前記第１の抗体はｈＫ２に特異的な抗体であり
、前記第２の抗体はＰＩ−６に特異的な抗体であったり、その逆であるとするこ
とが代替策である。前記第１および第２の抗体のうちの一方が固相の支持体に結
合し、他方が検出させ（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ）または検出可能な標識でここで説
明される方法により標識されることが好ましい。当業者は、本発明の教示を考慮
して、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体に特異的な抗体またはｈＫ２に対する抗
体およびＰＩ−６に対する抗体を用いて、過度の実験作業を伴うことなく適当な
サンドイッチ型アッセイ法を設計することができる。
疫反応する抗体であってもよい。前記第１の抗体はｈＫ２に特異的な抗体であり
、前記第２の抗体はＰＩ−６に特異的な抗体であったり、その逆であるとするこ
とが代替策である。前記第１および第２の抗体のうちの一方が固相の支持体に結
合し、他方が検出させ（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ）または検出可能な標識でここで説
明される方法により標識されることが好ましい。当業者は、本発明の教示を考慮
して、本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体に特異的な抗体またはｈＫ２に対する抗
体およびＰＩ−６に対する抗体を用いて、過度の実験作業を伴うことなく適当な
サンドイッチ型アッセイ法を設計することができる。
【００６１】 本発明の１の局面は、ＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体を試料中に検出、測
定するための診断用キットを提供する。前記キットは、前記複合体と特異的に結
合し、検出可能に標識されまたは検出可能な標識と結合する、既知量の試薬を含
む。本発明の目的のためには、前記試料は、血清、精漿、尿および血液を含むが
これらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料であってもよい。前記試料は
患者の前立腺由来の組織標本であってもよい。前記試薬は本発明のｈＫ２／ＰＩ
−６複合体と特異的に結合する抗体であってもよい。前記試薬はモノクローナル
抗体であることが好ましいが、ポリクローナル抗体でも利用できる。
定するための診断用キットを提供する。前記キットは、前記複合体と特異的に結
合し、検出可能に標識されまたは検出可能な標識と結合する、既知量の試薬を含
む。本発明の目的のためには、前記試料は、血清、精漿、尿および血液を含むが
これらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料であってもよい。前記試料は
患者の前立腺由来の組織標本であってもよい。前記試薬は本発明のｈＫ２／ＰＩ
−６複合体と特異的に結合する抗体であってもよい。前記試薬はモノクローナル
抗体であることが好ましいが、ポリクローナル抗体でも利用できる。
【００６２】 本発明の別の実施態様では、診断用キットは２種類の既知量の試薬を含み、一
方の試薬はｈＫ２／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識し、他方の試薬はｈ
Ｋ２／ＰＩ−６複合体の別のエピトープを認識する。好ましくは、一方の試薬は
検出可能な標識で標識され、他方の試薬は固相の支持体に結合する。本発明のあ
る実施態様では、両方の試薬はそれぞれ本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異
的に免疫反応する抗体を含む。本発明の別の実施態様では、一方の試薬はｈＫ２
に特異的な抗体を含み、他方の試薬はＰＩ−６に特異的な抗体を含む。
方の試薬はｈＫ２／ＰＩ−６複合体のあるエピトープを認識し、他方の試薬はｈ
Ｋ２／ＰＩ−６複合体の別のエピトープを認識する。好ましくは、一方の試薬は
検出可能な標識で標識され、他方の試薬は固相の支持体に結合する。本発明のあ
る実施態様では、両方の試薬はそれぞれ本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異
的に免疫反応する抗体を含む。本発明の別の実施態様では、一方の試薬はｈＫ２
に特異的な抗体を含み、他方の試薬はＰＩ−６に特異的な抗体を含む。
【００６３】 本発明の別の局面は、前立腺癌の有無を決定するための診断方法を提供する。
前記方法は、（ａ）ＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体と特異的に結合する既知
量の試薬とＰＩ−６とｈＫ２とを含む三重複合体が形成できる条件下で、前記複
合体を含むヒト由来の試料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の前
記三重複合体の量を測定して前記三重複合体の量を前記ヒトにおける前立腺癌の
有無と関連づけること、というステップを含む。
前記方法は、（ａ）ＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体と特異的に結合する既知
量の試薬とＰＩ−６とｈＫ２とを含む三重複合体が形成できる条件下で、前記複
合体を含むヒト由来の試料と前記試薬を反応させること、（ｂ）前記試料中の前
記三重複合体の量を測定して前記三重複合体の量を前記ヒトにおける前立腺癌の
有無と関連づけること、というステップを含む。
【００６４】 本発明の１の実施態様では、前記試料は、血清、精漿、尿および血液を含むが
これらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料であってもよい。本発明の別
の実施態様では、前記試料は患者の前立腺由来の組織標本であってもよい。本発
明の目的のためには、前記試薬は本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体を特異的に認
識する抗体である。前記抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でも
かまわない。
これらに限定されない、ヒトの生理的な液体の試料であってもよい。本発明の別
の実施態様では、前記試料は患者の前立腺由来の組織標本であってもよい。本発
明の目的のためには、前記試薬は本発明のｈＫ２／ＰＩ−６複合体を特異的に認
識する抗体である。前記抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でも
かまわない。
【００６５】 ＰＩ−６が前立腺癌の組織に存在することが本発明の発見である。ＰＩ−６が
前立腺癌においてｈＫ２との複合体として亢進したレベルで存在することも本発
明の発見である。よって、ＰＩ−６あるいは複合体を形成する何らかの特定の会
合状態のＰＩ−６が前立腺癌との関連を示す可能性がある。したがって、ＰＩ−
６または複合体を形成するＰＩ−６の何らかの特定の会合状態を検出し定量する
ことが、前立腺その他の組織の試料に癌があることを決定するうえで重要である
。例えば、ＰＩ−６は前立腺癌の組織を検出するための免疫組織学的マーカーと
して利用できる。本発明のＰＩ−６は、ここに説明した免疫組織化学的手法によ
り、患者の組織の試料において検出できる。
前立腺癌においてｈＫ２との複合体として亢進したレベルで存在することも本発
明の発見である。よって、ＰＩ−６あるいは複合体を形成する何らかの特定の会
合状態のＰＩ−６が前立腺癌との関連を示す可能性がある。したがって、ＰＩ−
６または複合体を形成するＰＩ−６の何らかの特定の会合状態を検出し定量する
ことが、前立腺その他の組織の試料に癌があることを決定するうえで重要である
。例えば、ＰＩ−６は前立腺癌の組織を検出するための免疫組織学的マーカーと
して利用できる。本発明のＰＩ−６は、ここに説明した免疫組織化学的手法によ
り、患者の組織の試料において検出できる。
【００６６】 したがって、本発明の１の局面は、前立腺癌の有無を決定するための診断方法
であって、（ａ）ＰＩ−６と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６とを含む
二重複合体が形成できる条件下で、ＰＩ−６を含むヒト由来の試料と前記試薬を
反応させること、（ｂ）前記試料中の前記複合体の量を測定し、前記複合体の量
を前記ヒトにおける前立腺癌の有無と関連づけること、というステップを含む診
断方法を提供することである。
であって、（ａ）ＰＩ−６と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６とを含む
二重複合体が形成できる条件下で、ＰＩ−６を含むヒト由来の試料と前記試薬を
反応させること、（ｂ）前記試料中の前記複合体の量を測定し、前記複合体の量
を前記ヒトにおける前立腺癌の有無と関連づけること、というステップを含む診
断方法を提供することである。
【００６７】 本発明の目的のためには、前記試料は前立腺その他の組織であってもよい。１
の実施態様では、前記試薬はＰＩ−６に特異的な抗体を含む。
の実施態様では、前記試薬はＰＩ−６に特異的な抗体を含む。
【００６８】 以下の実施例は本発明の射程を例示することを意図するものであり、これを限
定することを意図するものではない。かかる実施例は利用されるものの典型であ
るが、当業者に知られた他の手順が代わりに用いられてもよい。実際、本分野の
通常の知識を有する者はここでの教示にもとづいて過度の実験作業を伴うことな
く更なる実施態様を容易に想到し作出することが可能である。
定することを意図するものではない。かかる実施例は利用されるものの典型であ
るが、当業者に知られた他の手順が代わりに用いられてもよい。実際、本分野の
通常の知識を有する者はここでの教示にもとづいて過度の実験作業を伴うことな
く更なる実施態様を容易に想到し作出することが可能である。
【００６９】
実施例１ 前立腺の組織におけるｈＫ２／ＰＩ−６複合体の解析 材料と方法 材料 ＰＡＩ−１はオンコジーン・リサーチ・プロダクツ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カリフォルニア州、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）か
ら入手した。ＡＣＴはエチンズ（アテネ）・リサーチ（Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ、ジョージア州、Ａｔｈｅｎｓ）から入手した。精製された組み換えｈ
Ｋ２は、過去の記載どおり、シリアンハムスター癌腫細胞株ＡＶ１２で発現され
、マウスｈＫ２特異的なモノクローナル抗体ＨＫ１Ｇ５８６．１を用いて免疫ア
フィニティ精製された（１４，２６）。ＨＫ１Ｇ５８６．１はＰＳＡとは無視で
きる程度の交差反応性しか示さないことが示されている（１８、２６）。ＰＦ１
Ｄ２１５はＰＳＡを抗原として作成されたモノクローナル抗体であるが、ｈＫ２
とも交差反応する。ＰＳＭ７７３はＰＳＡに特異的なモノクローナル抗体で、ｈ
Ｋ２とは交差反応しない。上記の抗体はハイブリテク（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ、カ
リフォルニア州、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）で開発された。
ｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カリフォルニア州、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）か
ら入手した。ＡＣＴはエチンズ（アテネ）・リサーチ（Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ、ジョージア州、Ａｔｈｅｎｓ）から入手した。精製された組み換えｈ
Ｋ２は、過去の記載どおり、シリアンハムスター癌腫細胞株ＡＶ１２で発現され
、マウスｈＫ２特異的なモノクローナル抗体ＨＫ１Ｇ５８６．１を用いて免疫ア
フィニティ精製された（１４，２６）。ＨＫ１Ｇ５８６．１はＰＳＡとは無視で
きる程度の交差反応性しか示さないことが示されている（１８、２６）。ＰＦ１
Ｄ２１５はＰＳＡを抗原として作成されたモノクローナル抗体であるが、ｈＫ２
とも交差反応する。ＰＳＭ７７３はＰＳＡに特異的なモノクローナル抗体で、ｈ
Ｋ２とは交差反応しない。上記の抗体はハイブリテク（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ、カ
リフォルニア州、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）で開発された。
【００７０】 方法 前立腺の組織の抽出とＳＤＳ ＰＡＧＥ 前立腺削除手術で摘出された組織は、液体窒素中で凍結され、粉砕され、プロ
テアーゼインヒビターのカクテル（コンプリート、べーリンガー・マンハイム）
を含むＰＢＳバッファー中でホモジネートにされた。ＳＤＳ ＰＡＧＥは４−２
０％の勾配のノベックス（Ｎｏｖｅｘ）ミニゲル上で行われた。それぞれのレー
ンには５μｇの全タンパク質を含む抽出上清溶液がロード（ｌｏａｄ）、すなわ
ち試料としてゲルに適用または負荷された。試料はウェスタンブロットにはニト
ロセルロースに、Ｎ末端配列決定にはＰＶＤＦに、エレクトロブロットされた。
一次抗体ＨＫ１Ｇ５８６．１およびＰＦ１Ｄ２１５．２は５μｇ／ｍｌで用いら
れ、２次抗体（ヤギ抗マウスＨＲＰ、１：５０，０００、ジャクソン・イミュー
ノリサーチ研究所、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ）が前
記ブロットを調べる、すなわち抗体を用いて抗原を検出する（ｐｒｏｂｅ）ため
に用いられた。免疫反応シグナルは、ＥＣＬウルトラ（アマシャム、英国、Ｂｕ
ｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ）を用いて製造者の指示書に従って検出された。
テアーゼインヒビターのカクテル（コンプリート、べーリンガー・マンハイム）
を含むＰＢＳバッファー中でホモジネートにされた。ＳＤＳ ＰＡＧＥは４−２
０％の勾配のノベックス（Ｎｏｖｅｘ）ミニゲル上で行われた。それぞれのレー
ンには５μｇの全タンパク質を含む抽出上清溶液がロード（ｌｏａｄ）、すなわ
ち試料としてゲルに適用または負荷された。試料はウェスタンブロットにはニト
ロセルロースに、Ｎ末端配列決定にはＰＶＤＦに、エレクトロブロットされた。
一次抗体ＨＫ１Ｇ５８６．１およびＰＦ１Ｄ２１５．２は５μｇ／ｍｌで用いら
れ、２次抗体（ヤギ抗マウスＨＲＰ、１：５０，０００、ジャクソン・イミュー
ノリサーチ研究所、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ）が前
記ブロットを調べる、すなわち抗体を用いて抗原を検出する（ｐｒｏｂｅ）ため
に用いられた。免疫反応シグナルは、ＥＣＬウルトラ（アマシャム、英国、Ｂｕ
ｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ）を用いて製造者の指示書に従って検出された。
【００７１】 ｈＫ２複合体の標準試料の調製 ｈＫ２とＡＣＴ、ＰＣＩ、ＰＡＩ−１との試験管内での複合体は、過去の記載
どおり、ｈＫ２を過剰のインヒビターとインキュベートして調製された（１７）
。
どおり、ｈＫ２を過剰のインヒビターとインキュベートして調製された（１７）
。
【００７２】 Ｎ末端配列解析 Ｎ末端解析はＰＥアプライド・バイオシステムズ製モデル４９２アミノ酸シー
ケンサーで行われた。ＰＶＤＦ上にブロットされたタンパク質のバンドはクーマ
シーブリリアントブルーＲ−２５０により可視化され、切り出されて前記シーケ
ンサーに適用、すなわちアプライされた。
ケンサーで行われた。ＰＶＤＦ上にブロットされたタンパク質のバンドはクーマ
シーブリリアントブルーＲ−２５０により可視化され、切り出されて前記シーケ
ンサーに適用、すなわちアプライされた。
【００７３】 内部配列決定用の試料は、まず２ｍＭ ＤＴＴで還元され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
の前にヨードアセトアミド（ｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ）でアルキル化された
。クーマジー染色されたバンドはゲルから切り出され、小片に刻まれ、５０％
アセトニトリル／０．２Ｍ 炭酸水素ナトリウムで３０分間２回洗浄し、スピー
ドバック（ｓｐｅｅｄｖａｃ）で完全に乾燥された。乾燥したゲルスライスは１
μｇのシーケンシング用トリプシン（プロメガ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む０．２
Ｍ 炭酸水素ナトリウム５０μｌで再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）さ
れた。試料は３７°Ｃで２０時間消化された。
の前にヨードアセトアミド（ｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ）でアルキル化された
。クーマジー染色されたバンドはゲルから切り出され、小片に刻まれ、５０％
アセトニトリル／０．２Ｍ 炭酸水素ナトリウムで３０分間２回洗浄し、スピー
ドバック（ｓｐｅｅｄｖａｃ）で完全に乾燥された。乾燥したゲルスライスは１
μｇのシーケンシング用トリプシン（プロメガ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む０．２
Ｍ 炭酸水素ナトリウム５０μｌで再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）さ
れた。試料は３７°Ｃで２０時間消化された。
【００７４】 結果 良性および癌性の前立腺の組織はホモジネートにされ抽出された。上清溶液は
非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供され、ウェスタンブロット法で解析された（図１）
。図１のレーン１と２は前記ｈＫ２特異的モノクローナル抗体ｈＫ１Ｇ５８６．
１で調べられ、良性の前立腺の組織と腫瘍のそれぞれにおける遊離ｈＫ２および
複合体形成したｈＫ２を示す。３３ＫのバンドはｈＫ２で、６４Ｋのバンドはｈ
Ｋ２の複合体を表す。複合体を形成するｈＫ２のレベルは腫瘍由来の抽出物のほ
うが高い。この複合体の泳動度は６４ｋＤａの分子質量を表し、これはＡＣＴお
よびＰＣＩとの既知の生理的なｈＫ２の複合体より低い（図２参照）。
非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供され、ウェスタンブロット法で解析された（図１）
。図１のレーン１と２は前記ｈＫ２特異的モノクローナル抗体ｈＫ１Ｇ５８６．
１で調べられ、良性の前立腺の組織と腫瘍のそれぞれにおける遊離ｈＫ２および
複合体形成したｈＫ２を示す。３３ＫのバンドはｈＫ２で、６４Ｋのバンドはｈ
Ｋ２の複合体を表す。複合体を形成するｈＫ２のレベルは腫瘍由来の抽出物のほ
うが高い。この複合体の泳動度は６４ｋＤａの分子質量を表し、これはＡＣＴお
よびＰＣＩとの既知の生理的なｈＫ２の複合体より低い（図２参照）。
【００７５】 レーン３と４はＰＳＡおよびＰＳＡとの複合体を検出するためにＰＳＭ７７３
で調べられた。露出時間を延長しても、検出可能なより高分子質量のＰＳＡの複
合体は全く観察されなかった。これらの抽出物中のｈＫ２およびＰＳＡのイムノ
アッセイ法測定により、良性組織と腫瘍について類似した値が得られた。ＰＳＡ
の全量はタンパク質１ｍｇあたり約１０μｇで、ｈＫ２の全量はタンパク質１ｍ
ｇあたり約０．３μｇであった。全タンパク質５μｇがそれぞれのレーンにロー
ドされた。よって、かなりのレベルのｈＫ２が前立腺の組織において複合体を形
成していて、この複合体は前立腺腫瘍では亢進している。これに対し、より高い
レベルのＰＳＡは、圧倒的に遊離の、すなわち複合体を形成しない状態にある。
図１はさらに前記の６４ｋＤａのｈＫ２の複合体が前立腺の組織の抽出物に見ら
れる主要なカリクレイン複合体であることを表す。
で調べられた。露出時間を延長しても、検出可能なより高分子質量のＰＳＡの複
合体は全く観察されなかった。これらの抽出物中のｈＫ２およびＰＳＡのイムノ
アッセイ法測定により、良性組織と腫瘍について類似した値が得られた。ＰＳＡ
の全量はタンパク質１ｍｇあたり約１０μｇで、ｈＫ２の全量はタンパク質１ｍ
ｇあたり約０．３μｇであった。全タンパク質５μｇがそれぞれのレーンにロー
ドされた。よって、かなりのレベルのｈＫ２が前立腺の組織において複合体を形
成していて、この複合体は前立腺腫瘍では亢進している。これに対し、より高い
レベルのＰＳＡは、圧倒的に遊離の、すなわち複合体を形成しない状態にある。
図１はさらに前記の６４ｋＤａのｈＫ２の複合体が前立腺の組織の抽出物に見ら
れる主要なカリクレイン複合体であることを表す。
【００７６】 ｈＫ２との複合体中のインヒビターを同定するのに十分な材料を得るために、
約５０ｇの前立腺組織が抽出された。ｈＫ２特異的なモノクローナル抗体である
ＨＫ１Ｇ５８６．１を含む免疫アフィニティカラムを通すことにより、ｈＫ２お
よびｈＫ２との複合体が抽出物から精製された。図２は、試験管内で調製された
ｈＫ２複合体の標準試料とともに泳動された、前記アフィニティーカラムから溶
出した精製ｈＫ２の会合状態のウェスタンブロットのプロフィールを示す。レー
ン１は精製された組み換えｈＫ２を示し、レーン２、３および４はそれぞれＡＣ
Ｔ、ＰＣＩおよびＰＡＩ−１とｈＫ２との複合体を含む。これらのｈＫ２複合体
の泳動度は、これらのインヒビターの分子質量の相違のために異なる。例えば、
レーン２はＡＣＴと反応、すなわちインキュベートされて９０ｋＤａの複合体を
形成するｈＫ２であり、レーン３はＰＣＩとインキュベートされて７５ｋＤａの
複合体を形成するｈＫ２であり、レーン４はＰＡＩ−１とインキュベートされて
６６ｋＤａの複合体を形成するｈＫ２である。
約５０ｇの前立腺組織が抽出された。ｈＫ２特異的なモノクローナル抗体である
ＨＫ１Ｇ５８６．１を含む免疫アフィニティカラムを通すことにより、ｈＫ２お
よびｈＫ２との複合体が抽出物から精製された。図２は、試験管内で調製された
ｈＫ２複合体の標準試料とともに泳動された、前記アフィニティーカラムから溶
出した精製ｈＫ２の会合状態のウェスタンブロットのプロフィールを示す。レー
ン１は精製された組み換えｈＫ２を示し、レーン２、３および４はそれぞれＡＣ
Ｔ、ＰＣＩおよびＰＡＩ−１とｈＫ２との複合体を含む。これらのｈＫ２複合体
の泳動度は、これらのインヒビターの分子質量の相違のために異なる。例えば、
レーン２はＡＣＴと反応、すなわちインキュベートされて９０ｋＤａの複合体を
形成するｈＫ２であり、レーン３はＰＣＩとインキュベートされて７５ｋＤａの
複合体を形成するｈＫ２であり、レーン４はＰＡＩ−１とインキュベートされて
６６ｋＤａの複合体を形成するｈＫ２である。
【００７７】 レーン５は組織から抽出された精製ｈＫ２の会合状態を示す。ＨＫ１Ｇ５８６
．１で調べると、６４ｋＤａのかすかなバンドが３３ｋＤａおよび２２ｋＤａの
強いバンドとともに検出される。２２ｋＤａはｈＫ２の試料に共通して存在し、
レーン１−４のｈＫ２の標準試料でかすかなバンドととして見られる。このバン
ドは１４５番のアルギニンでの切断によって生じたｈＫ２の断片である。よって
、ＨＫ１Ｇ５８６．１のエピトープはこの切断点のＮ末端側にあることが示され
る。
．１で調べると、６４ｋＤａのかすかなバンドが３３ｋＤａおよび２２ｋＤａの
強いバンドとともに検出される。２２ｋＤａはｈＫ２の試料に共通して存在し、
レーン１−４のｈＫ２の標準試料でかすかなバンドととして見られる。このバン
ドは１４５番のアルギニンでの切断によって生じたｈＫ２の断片である。よって
、ＨＫ１Ｇ５８６．１のエピトープはこの切断点のＮ末端側にあることが示され
る。
【００７８】 レーン６は、該レーンがＰＦ１Ｄ２１５で調べられた点を除いてレーン５と同
様である。ＰＦ１Ｄ２１５はＰＳＡの断片に対して作成されたが、ｈＫ２とも交
差反応する。レーン６はレーン４とは異なるパターンのバンドを示す。３０ｋＤ
ａとかすかな６４ｋＤａのバンドが検出されるが、１０ｋＤａと５０ｋＤａの２
つの新規なバンドが検出される。ｈＫ２とＡＣＴとの複合体と同じ位置に泳動さ
れるかすかなバンドも検出される。
様である。ＰＦ１Ｄ２１５はＰＳＡの断片に対して作成されたが、ｈＫ２とも交
差反応する。レーン６はレーン４とは異なるパターンのバンドを示す。３０ｋＤ
ａとかすかな６４ｋＤａのバンドが検出されるが、１０ｋＤａと５０ｋＤａの２
つの新規なバンドが検出される。ｈＫ２とＡＣＴとの複合体と同じ位置に泳動さ
れるかすかなバンドも検出される。
【００７９】 図２におけるバンドの正体は、同一試料のブロットをＮ末端配列決定すること
により決定された。図３では、遊離ｈＫ２を約１０μｇ含む濃縮精製された組織
由来のｈＫ２がこのレーンにロードされた。ＰＶＤＦ上のそれぞれのバンドは切
り出されて、９サイクルのＮ末端配列決定に供された。バンド１と２はｈＫ２の
断片である。バンド１は、１４６番のセリンから始まるｈＫ２の配列に相当する
ＳＬＱＸＶＳＬＨＬという配列で始まる。分子質量が１０ｋＤａであることとあ
わせると、バンド１はｈＫ２の１４６−２３７番の断片であることを示す。バン
ド２はｈＫ２のＮ末端配列で始まるので、ｈＫ２の１−１４５番の残基の断片で
あることと矛盾しない。３３ｋＤａのバンド３も前記Ｎ末端配列で始まり、完全
なｈＫ２であることと矛盾しない。
により決定された。図３では、遊離ｈＫ２を約１０μｇ含む濃縮精製された組織
由来のｈＫ２がこのレーンにロードされた。ＰＶＤＦ上のそれぞれのバンドは切
り出されて、９サイクルのＮ末端配列決定に供された。バンド１と２はｈＫ２の
断片である。バンド１は、１４６番のセリンから始まるｈＫ２の配列に相当する
ＳＬＱＸＶＳＬＨＬという配列で始まる。分子質量が１０ｋＤａであることとあ
わせると、バンド１はｈＫ２の１４６−２３７番の断片であることを示す。バン
ド２はｈＫ２のＮ末端配列で始まるので、ｈＫ２の１−１４５番の残基の断片で
あることと矛盾しない。３３ｋＤａのバンド３も前記Ｎ末端配列で始まり、完全
なｈＫ２であることと矛盾しない。
【００８０】 図２のレーン６でみられた５０ｋＤａのバンドに相当するバンド４は、ＳＬＱ
ＸＶＳＬＨＬという配列で始まる。これは、バンド１と同じ配列であり、バンド
４がインヒビターと共有結合で連結されたｈＫ２の１０ｋＤａ断片であることを
示唆する。しかし、第２の配列が存在しなかったことは、前記インヒビターのＮ
末端がブロックされていたことを示す。セルピン（ｓｅｒｐｉｎ）と共有結合を
形成するｈＫ２の活性セリンは１８９番の残基であり、前記１４５番の切断点よ
りＣ末端側である。このことは、ＰＦ１Ｄ２１５．２がｈＫ２の１４６−２３７
番の１０ｋＤａ断片を認識することおよび前記インヒビターと共有結合した１４
６−２３７番のｈＫ２からなる前記５０ｋＤａの複合体を検出することを示す、
図２のレーン６の結果と矛盾しない。
ＸＶＳＬＨＬという配列で始まる。これは、バンド１と同じ配列であり、バンド
４がインヒビターと共有結合で連結されたｈＫ２の１０ｋＤａ断片であることを
示唆する。しかし、第２の配列が存在しなかったことは、前記インヒビターのＮ
末端がブロックされていたことを示す。セルピン（ｓｅｒｐｉｎ）と共有結合を
形成するｈＫ２の活性セリンは１８９番の残基であり、前記１４５番の切断点よ
りＣ末端側である。このことは、ＰＦ１Ｄ２１５．２がｈＫ２の１４６−２３７
番の１０ｋＤａ断片を認識することおよび前記インヒビターと共有結合した１４
６−２３７番のｈＫ２からなる前記５０ｋＤａの複合体を検出することを示す、
図２のレーン６の結果と矛盾しない。
【００８１】 図２のかすかな６４ｋＤａのバンドに相当するバンド５は、ｈＫ２のＮ末端配
列を含んでいた。この分子質量は完全なｈＫ２より高いため、このバンドはブロ
ックされたインヒビターが結合した完全なｈＫ２を含む可能性がある。バンド５
のすぐ上の濃いバンドは配列決定によりヒト血清アルブミンと決定された。そし
て最後に、バンド６は完全なｈＫ２とＡＣＴとの２つの配列が含まれ、これはＡ
ＣＴに結合する完全なｈＫ２であることを示す。
列を含んでいた。この分子質量は完全なｈＫ２より高いため、このバンドはブロ
ックされたインヒビターが結合した完全なｈＫ２を含む可能性がある。バンド５
のすぐ上の濃いバンドは配列決定によりヒト血清アルブミンと決定された。そし
て最後に、バンド６は完全なｈＫ２とＡＣＴとの２つの配列が含まれ、これはＡ
ＣＴに結合する完全なｈＫ２であることを示す。
【００８２】 図３の配列は、圧倒的大多数のｈＫ２が１４５番のアルギニンで切断され、ま
たブロックされたインヒビターと結合したｈＫ２の多数（５０ｋＤａ）も切断さ
れていることを示す。各バンドのｈＫ２の相対的な百分率は、配列解析の際に測
定された全バンドのピコモルの合計にもとづいて計算された。バンド１は、この
ブロット上で配列決定されたｈＫ２全体の７３％に相当する、４８ピコモルの前
記１０ｋＤａのｈＫ２断片を含む。前記２２ｋＤａのバンド２は８４％、すなわ
ちバンド１よりも１１％多いｈＫ２を含む。増加分の２２ｋＤａのｈＫ２断片は
おそらく５０ｋＤａの切断されたｈＫ２の複合体から由来したと考えられたが、
それは、１０ｋＤａの断片だけがインヒビターと結合しているからである。要約
すると、ブロットの配列解析から、約７３％のｈＫ２は１４５番のアルギニンで
切断され、１３％は完全なｈＫ２で、約１１％はブロックされたインヒビターと
結合し、約２％はＡＣＴとの複合体である。
たブロックされたインヒビターと結合したｈＫ２の多数（５０ｋＤａ）も切断さ
れていることを示す。各バンドのｈＫ２の相対的な百分率は、配列解析の際に測
定された全バンドのピコモルの合計にもとづいて計算された。バンド１は、この
ブロット上で配列決定されたｈＫ２全体の７３％に相当する、４８ピコモルの前
記１０ｋＤａのｈＫ２断片を含む。前記２２ｋＤａのバンド２は８４％、すなわ
ちバンド１よりも１１％多いｈＫ２を含む。増加分の２２ｋＤａのｈＫ２断片は
おそらく５０ｋＤａの切断されたｈＫ２の複合体から由来したと考えられたが、
それは、１０ｋＤａの断片だけがインヒビターと結合しているからである。要約
すると、ブロットの配列解析から、約７３％のｈＫ２は１４５番のアルギニンで
切断され、１３％は完全なｈＫ２で、約１１％はブロックされたインヒビターと
結合し、約２％はＡＣＴとの複合体である。
【００８３】 ブロックされたインヒビターには完全なｈＫ２との複合体（６４ｋＤａ）およ
び切断されたｈＫ２断片との複合体（５０ｋＤａ）の両方が存在したことから、
インヒビターの正体を確証するためには、前記複合体をトリプシンで消化して内
部のペプチド断片の配列決定をする必要があった。図３と同一の精製された組織
のｈＫ２を３つのレーンで泳動し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥから５０ｋＤａのバンドを
切り出し、トリプシンで消化した。トリプシン処理された断片はキャピラリーＣ
１８逆相ＨＰＬＣマイクロブロッターにより分離され、自動的にＰＶＤＦにブロ
ットされた。５０ｋＤａのバンドのトリプシン消化物の分解能を示すクロマトグ
ラムが図４である。表示されたそれぞれのピークについて配列決定がなされた。
内部配列のデータベース検索から、５０ｋＤａ複合体に存在する他のタンパク質
はＰＩ−６であった。前記ＰＩ−６タンパク質の質量の７０％以上を含む、全部
で２４本のＰＩ−６のペプチド断片が同定された。予想どおり、ＰＩ−６のブロ
ックされたＮ末端のペプチド断片またはＰＩ−６の３４１番の活性部位の残基以
後の断片は検出されなかった。ｈＫ２の断片は２、５、１５、１８および１９番
のピークであると同定された。これは、ｈＫ２の１４５−２３７番の領域から理
論的に可能な７本のトリプシン処理断片のうちの５つに該当する。ｈＫ２の１−
１４５番の領域由来のトリプシン断片はみつからなかったが、これは、図３の５
０ｋＤａのバンドについての配列情報と矛盾しない。未同定配列は検出されなか
った。
び切断されたｈＫ２断片との複合体（５０ｋＤａ）の両方が存在したことから、
インヒビターの正体を確証するためには、前記複合体をトリプシンで消化して内
部のペプチド断片の配列決定をする必要があった。図３と同一の精製された組織
のｈＫ２を３つのレーンで泳動し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥから５０ｋＤａのバンドを
切り出し、トリプシンで消化した。トリプシン処理された断片はキャピラリーＣ
１８逆相ＨＰＬＣマイクロブロッターにより分離され、自動的にＰＶＤＦにブロ
ットされた。５０ｋＤａのバンドのトリプシン消化物の分解能を示すクロマトグ
ラムが図４である。表示されたそれぞれのピークについて配列決定がなされた。
内部配列のデータベース検索から、５０ｋＤａ複合体に存在する他のタンパク質
はＰＩ−６であった。前記ＰＩ−６タンパク質の質量の７０％以上を含む、全部
で２４本のＰＩ−６のペプチド断片が同定された。予想どおり、ＰＩ−６のブロ
ックされたＮ末端のペプチド断片またはＰＩ−６の３４１番の活性部位の残基以
後の断片は検出されなかった。ｈＫ２の断片は２、５、１５、１８および１９番
のピークであると同定された。これは、ｈＫ２の１４５−２３７番の領域から理
論的に可能な７本のトリプシン処理断片のうちの５つに該当する。ｈＫ２の１−
１４５番の領域由来のトリプシン断片はみつからなかったが、これは、図３の５
０ｋＤａのバンドについての配列情報と矛盾しない。未同定配列は検出されなか
った。
【００８４】 考察 これらの結果は、ｈＫ２と細胞質セリンプロテアーゼインヒビターＰＩ−６と
の新規な前立腺での複合体が存在することを証明する。これはｈＫ２の組織特異
的なインヒビターの最初の証拠であり、前立腺におけるｈＫ２活性と機能の調節
に関係する。前記インヒビターが、癌関連のプロテアーゼとの関連でこれまで報
告されたことのない、比較的最近発見された細胞質インヒビターである、ＰＩ−
６と同定されたことにも注目せざるを得ない。
の新規な前立腺での複合体が存在することを証明する。これはｈＫ２の組織特異
的なインヒビターの最初の証拠であり、前立腺におけるｈＫ２活性と機能の調節
に関係する。前記インヒビターが、癌関連のプロテアーゼとの関連でこれまで報
告されたことのない、比較的最近発見された細胞質インヒビターである、ＰＩ−
６と同定されたことにも注目せざるを得ない。
【００８５】 前記図３は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体が内在性のｈＫ２の約１０％に相当する
ことを示す。図１は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体が良性組織に比べて腫瘍では亢進
していることを示す。
ことを示す。図１は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体が良性組織に比べて腫瘍では亢進
していることを示す。
【００８６】 ｈＫ２は前立腺癌と高い連関があることが示されているため、ｈＫ２の組織イ
ンヒビターの発見は重要である。ｈＫ２は前立腺癌患者の血清で亢進している。
ｈＫ２は良性の組織に比べて未分化な前立腺の組織の上皮で亢進している。ｈＫ
２はｕＰＡを活性化し、ＰＡＩ−１を不活性化することが示されている。ｈＫ２
はＩＧＦＢ３を切断し不活性化するため、転移した細胞の増殖を促進する環境を
提供する。ｈＫ２はＰＳＡの活性化に関与するかもしれない。
ンヒビターの発見は重要である。ｈＫ２は前立腺癌患者の血清で亢進している。
ｈＫ２は良性の組織に比べて未分化な前立腺の組織の上皮で亢進している。ｈＫ
２はｕＰＡを活性化し、ＰＡＩ−１を不活性化することが示されている。ｈＫ２
はＩＧＦＢ３を切断し不活性化するため、転移した細胞の増殖を促進する環境を
提供する。ｈＫ２はＰＳＡの活性化に関与するかもしれない。
【００８７】 ｈＫ２とＰＩ−６の相互作用の理由は不明である。ｈＫ２はＬＮＣａＰ細胞か
ら分泌されることが示されており、細胞外プロテアーゼであると考えられている
。ｈＫ２とＰＩ−６との間の反応は、不完全な腫瘍細胞崩壊性（ｏｎｃｏｌｙｔ
ｉｃ）経路の一部としての細胞内での異常なｈＫ２活性化か、あるいは損傷また
は壊死した腫瘍組織由来のＰＩ−６の漏出かによってもたらされるのかもしれな
い。いずれの場合でも、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の存在は前立腺癌の検出のため
の貴重なマーカーとなることが証明されそうである。
ら分泌されることが示されており、細胞外プロテアーゼであると考えられている
。ｈＫ２とＰＩ−６との間の反応は、不完全な腫瘍細胞崩壊性（ｏｎｃｏｌｙｔ
ｉｃ）経路の一部としての細胞内での異常なｈＫ２活性化か、あるいは損傷また
は壊死した腫瘍組織由来のＰＩ−６の漏出かによってもたらされるのかもしれな
い。いずれの場合でも、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の存在は前立腺癌の検出のため
の貴重なマーカーとなることが証明されそうである。
【００８８】 ｈＫ２／ＰＩ−６複合体は正常な精漿には検出されなかったこと（データ示さ
ず）は特記すべきであるが、それは、このインヒビターが組織特異的で、前立腺
の腺内腔へという正常なＰＳＡとｈＫ２の分泌経路の一部ではないことを示すか
らである。ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の精漿でのレベルは前立腺癌患者では検出可
能となるのかもしれない。
ず）は特記すべきであるが、それは、このインヒビターが組織特異的で、前立腺
の腺内腔へという正常なＰＳＡとｈＫ２の分泌経路の一部ではないことを示すか
らである。ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の精漿でのレベルは前立腺癌患者では検出可
能となるのかもしれない。
【００８９】 図２と図３はこれらの組織でのｈＫ２の７５％が１４５番のアルギニンで切断
されていることを示す。ウェスタンブロットにより解析された粗抽出物中の６４
ｋＤａ複合体の正確な評価のためには、ジスルフィド結合で保持された単一の３
３ｋＤａのポリペプチドとしてｈＫ２を完全な状態で維持するために、図１のよ
うにゲルを非還元条件下で泳動することが必要である。セルピンと共有結合を形
成するｈＫ２の活性セリンは１８９番の残基で、これは１４５番の切断点のＣ末
端側である。図２のレーン５で、ＰＦ１Ｄ２１５．１は、ｈＫ２の１４６−２３
７番の１０ｋＤａの断片を認識し、ＰＩ−６に共有結合したｈＫ２の１４６−２
３７番の断片からなるＰＩ−６の５０ｋＤａの複合体を検出することが示された
。ＰＦ１Ｄ２１５は免疫アフィニティ精製されたｈＫ２にのみ用いられたが、そ
れは、このモノクローナル抗体は組織の粗抽出物中に２０ないし５０倍高いレベ
ルで含まれるＰＳＡと交差反応するからである。
されていることを示す。ウェスタンブロットにより解析された粗抽出物中の６４
ｋＤａ複合体の正確な評価のためには、ジスルフィド結合で保持された単一の３
３ｋＤａのポリペプチドとしてｈＫ２を完全な状態で維持するために、図１のよ
うにゲルを非還元条件下で泳動することが必要である。セルピンと共有結合を形
成するｈＫ２の活性セリンは１８９番の残基で、これは１４５番の切断点のＣ末
端側である。図２のレーン５で、ＰＦ１Ｄ２１５．１は、ｈＫ２の１４６−２３
７番の１０ｋＤａの断片を認識し、ＰＩ−６に共有結合したｈＫ２の１４６−２
３７番の断片からなるＰＩ−６の５０ｋＤａの複合体を検出することが示された
。ＰＦ１Ｄ２１５は免疫アフィニティ精製されたｈＫ２にのみ用いられたが、そ
れは、このモノクローナル抗体は組織の粗抽出物中に２０ないし５０倍高いレベ
ルで含まれるＰＳＡと交差反応するからである。
【００９０】 切断されたｈＫ２は不活性であることが示されていることから、ｈＫ２／ＰＩ
−６複合体は切断の前に形成された可能性が高い。同様に感受性の高い部位を１
４５番の残基に有するＰＳＡは、還元条件下でのウェスタンブロットにより、ほ
とんど切断されないことが示された（データ示さず）。
−６複合体は切断の前に形成された可能性が高い。同様に感受性の高い部位を１
４５番の残基に有するＰＳＡは、還元条件下でのウェスタンブロットにより、ほ
とんど切断されないことが示された（データ示さず）。
【００９１】 ｈＫ２は大部分が切断されているという観察は精漿と前立腺の組織の抽出物に
おいてこれまでに記載されていた（１９）。前記組織の抽出物においてはより高
い分子質量のｈＫ２の複合体は少量が検出されていたが、これらの研究ではその
正体は同定されていなかった。
おいてこれまでに記載されていた（１９）。前記組織の抽出物においてはより高
い分子質量のｈＫ２の複合体は少量が検出されていたが、これらの研究ではその
正体は同定されていなかった。
【００９２】 ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の発見は、ｈＫ２の存在によってだけでなくＰＩ−６
の同定によっても興味深い。ＰＩ−６はアンチトロンビンＩＩＩ、ＰＡＩ−１、
ＰＡＩ−２、マスピン（ｍａｓｐｉｎ）等のようなオバルブミンファミリーの他
のセルピンのメンバーと相同性がある（２０、２７）。ＰＩ−６はヒト胎盤、腎
臓、心臓、骨格筋および血小板を含む多数の組織に存在する。ＰＩ−６は細胞質
に局在することが示されているため、その最も可能性の高い生理的役割は内部で
のタンパク質分解による損傷に対しての細胞内での保護であると予想される。し
かし、いかなる特異的な役割も内在性のプロテアーゼ複合体も同定されていない
。細胞内プロテアーゼインヒビターとして機能できるが、細胞外インヒビターと
して分泌もされるＰＡＩ−２とは異なり、ＰＩ−６はもっぱら細胞内に存在する
らしい。ＰＩ−６を強制的に分泌されるためにプロモーターの改変を試みたとこ
ろ、ＰＩ−６を不活性化したが、これはおそらく糖鎖付加（ｇｌｙｃｏｓｙｌａ
ｔｉｏｎ）のためである。
の同定によっても興味深い。ＰＩ−６はアンチトロンビンＩＩＩ、ＰＡＩ−１、
ＰＡＩ−２、マスピン（ｍａｓｐｉｎ）等のようなオバルブミンファミリーの他
のセルピンのメンバーと相同性がある（２０、２７）。ＰＩ−６はヒト胎盤、腎
臓、心臓、骨格筋および血小板を含む多数の組織に存在する。ＰＩ−６は細胞質
に局在することが示されているため、その最も可能性の高い生理的役割は内部で
のタンパク質分解による損傷に対しての細胞内での保護であると予想される。し
かし、いかなる特異的な役割も内在性のプロテアーゼ複合体も同定されていない
。細胞内プロテアーゼインヒビターとして機能できるが、細胞外インヒビターと
して分泌もされるＰＡＩ−２とは異なり、ＰＩ−６はもっぱら細胞内に存在する
らしい。ＰＩ−６を強制的に分泌されるためにプロモーターの改変を試みたとこ
ろ、ＰＩ−６を不活性化したが、これはおそらく糖鎖付加（ｇｌｙｃｏｓｙｌａ
ｔｉｏｎ）のためである。
【００９３】 ＰＩ−６はトリプシン、ウロキナーゼおよび第２因子（ｆａｃｔｏｒ ＩＩ）
を強く阻害し、キモトリプシン様プロテアーゼにも阻害活性を有することが示さ
れている（２８）。しかし、本研究において、キモトリプシン様のＰＳＡは組織
の抽出物中でＰＩ−６と複合体を形成した形跡はなかった。
を強く阻害し、キモトリプシン様プロテアーゼにも阻害活性を有することが示さ
れている（２８）。しかし、本研究において、キモトリプシン様のＰＳＡは組織
の抽出物中でＰＩ−６と複合体を形成した形跡はなかった。
【００９４】 実施例２ 前立腺の組織におけるＰＩ−６の解析 ｈＫ２とＰＩ−６の両方に関して、本研究から多くの疑問が生じる。ＰＩ−６
のレベル自体は良性の組織と比較して腫瘍では変動するのか、そして、このイン
ヒビターは発癌と関連するのか。これらの疑問に答えるために、ＰＩ−６抗体が
作成され、良性または正常の組織に対する腫瘍でのＰＩ−６の発現が比較された
。この研究は、これらの知見を病変の進行段階表作成（ｓｔａｇｉｎｇ）および
患者の予後と関連づけるうえで有用である。
のレベル自体は良性の組織と比較して腫瘍では変動するのか、そして、このイン
ヒビターは発癌と関連するのか。これらの疑問に答えるために、ＰＩ−６抗体が
作成され、良性または正常の組織に対する腫瘍でのＰＩ−６の発現が比較された
。この研究は、これらの知見を病変の進行段階表作成（ｓｔａｇｉｎｇ）および
患者の予後と関連づけるうえで有用である。
【００９５】 材料と方法 ＰＩ−６の発現と精製 ＰＮＩＤで形質転換されたＢＬ２Ｉｄｅ３細胞は、ＬＢ＋カナマイシン（３０
μｇ／ｍｌ）中でＯＤ６００が０．７になるまで増殖され、１ｍＭのＩＰＴＧで
２時間誘導された。前記細胞は５０００回転１０分（ＪＡ１４）の遠心により回
収された（ＮＢ９３４７：８８）。
μｇ／ｍｌ）中でＯＤ６００が０．７になるまで増殖され、１ｍＭのＩＰＴＧで
２時間誘導された。前記細胞は５０００回転１０分（ＪＡ１４）の遠心により回
収された（ＮＢ９３４７：８８）。
【００９６】 大腸菌の培養５００ｍｌからの細胞ペレットは、プロテアーゼインヒビターカ
クテルを添加した２０ｍｌの超音波処理バッファー（３００ｎＭ ＮａＣｌ、５
０ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ８．０、２ｍＭ βメルカプトエタノール）に
再懸濁された。再懸濁された細胞は、１５秒間４回超音波処理された。上清と細
胞破砕片は９０００回転２０分（ＪＡ２０）の遠心により分離された。
クテルを添加した２０ｍｌの超音波処理バッファー（３００ｎＭ ＮａＣｌ、５
０ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ８．０、２ｍＭ βメルカプトエタノール）に
再懸濁された。再懸濁された細胞は、１５秒間４回超音波処理された。上清と細
胞破砕片は９０００回転２０分（ＪＡ２０）の遠心により分離された。
【００９７】 前記上清は、（超音波処理バッファーで）前洗浄されたコバルト樹脂と４°Ｃ
３０分間インキュベートされた。前記樹脂は２０００回転５分間（ＪＡ２０）の
遠心により回収された。前記樹脂は２０ｍｌの洗浄バッファー（３００ｍＭ Ｎ
ａＣｌ、５０ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ６．０、１０％ グリセロール、２
ｍＭ ２−メルカプトエタノール）で４°Ｃ２０分間振盪した後遠心して回収す
ることを３回繰り返して洗浄された。ＰＩ−６は４００ｍＭ イミダゾールを添
加した洗浄バッファーで２回溶出された。上清は、４°Ｃ２０分間振盪した後、
２０００回転５分間（ＪＡ２０）で遠心して回収された。
３０分間インキュベートされた。前記樹脂は２０００回転５分間（ＪＡ２０）の
遠心により回収された。前記樹脂は２０ｍｌの洗浄バッファー（３００ｍＭ Ｎ
ａＣｌ、５０ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ６．０、１０％ グリセロール、２
ｍＭ ２−メルカプトエタノール）で４°Ｃ２０分間振盪した後遠心して回収す
ることを３回繰り返して洗浄された。ＰＩ−６は４００ｍＭ イミダゾールを添
加した洗浄バッファーで２回溶出された。上清は、４°Ｃ２０分間振盪した後、
２０００回転５分間（ＪＡ２０）で遠心して回収された。
【００９８】 発現および精製段階の全ての分画はＳＤＳゲル上で確認された。発現されたＰ
Ｉ−６の大半は不溶性らしい。可溶性分画はコバルト樹脂により約９０％精製さ
れた。精製されたタンパク質は２ｍＭ βメルカプトエタノールを添加したＰＢ
Ｓに対して透析された。精製されたＰＩ−６の濃度は、凍結乾燥されたＰＩ−６
との濃度比較にもとづいて、ケミ・イメージャー分析（Ｃｈｅｍｉ Ｉｍａｇｅ
ｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ）で測定された。５００ｍｌの大腸菌培養からの収量は約
１ｍｇであった。
Ｉ−６の大半は不溶性らしい。可溶性分画はコバルト樹脂により約９０％精製さ
れた。精製されたタンパク質は２ｍＭ βメルカプトエタノールを添加したＰＢ
Ｓに対して透析された。精製されたＰＩ−６の濃度は、凍結乾燥されたＰＩ−６
との濃度比較にもとづいて、ケミ・イメージャー分析（Ｃｈｅｍｉ Ｉｍａｇｅ
ｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ）で測定された。５００ｍｌの大腸菌培養からの収量は約
１ｍｇであった。
【００９９】 超音波処理後のペレットは、１％ トリトンＸ−１００、１Ｍ ＮａＣｌおよ
び８Ｍ 尿素で順次洗浄された。不溶性分画は８Ｍ 尿素でのみ可溶性であった
。
び８Ｍ 尿素で順次洗浄された。不溶性分画は８Ｍ 尿素でのみ可溶性であった
。
【０１００】 ＰＩ−６に対する抗体の作成 抗ＰＩ−６ポリクローナル抗体（αＰＩ−６）は、当業者に共通に知られた方
法によって、ウサギに精製ＰＩ−６を注入して作成された。 ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の形成 １．用いられた材料： 精製ｈＫ２：１０ｎｇ／μｌ ＰＩ−６：大腸菌から精製された１８０ｎｇ／μｌ ２．反応液の組成： ６μｌ 精製ｈＫ２（３０ｎｇ）＋１４μｌ ＰＢＳ ６μｌ ＰＩ−６（５４０ｎｇ）＋１４μｌ ＰＢＳ ６μｌ ＰＩ−６（５４０ｎｇ）＋６μｌ 精製ｈＫ２（３０ｎｇ）＋８μｌ
ＰＢＳ
法によって、ウサギに精製ＰＩ−６を注入して作成された。 ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の形成 １．用いられた材料： 精製ｈＫ２：１０ｎｇ／μｌ ＰＩ−６：大腸菌から精製された１８０ｎｇ／μｌ ２．反応液の組成： ６μｌ 精製ｈＫ２（３０ｎｇ）＋１４μｌ ＰＢＳ ６μｌ ＰＩ−６（５４０ｎｇ）＋１４μｌ ＰＢＳ ６μｌ ＰＩ−６（５４０ｎｇ）＋６μｌ 精製ｈＫ２（３０ｎｇ）＋８μｌ
ＰＢＳ
【０１０１】 反応液は室温で１時間インキュベートされた後、２０μｌのローディングバッ
ファーが反応液のそれぞれに添加された。反応液は３分間煮沸され、それぞれ２
０μｌずつ４−２０％のＳＤＳゲルの２つのレーンにロードされた。ウェスタン
ブロット法を行った後に、ＨＫ１Ｇ５６８．１（５μｇ／ｍｌ）またはαＰＩ−
６（２μｇ／ｍｌ）が一次抗体として用いられた。両方のセットについて二次抗
体は１：５，０００に希釈された。
ファーが反応液のそれぞれに添加された。反応液は３分間煮沸され、それぞれ２
０μｌずつ４−２０％のＳＤＳゲルの２つのレーンにロードされた。ウェスタン
ブロット法を行った後に、ＨＫ１Ｇ５６８．１（５μｇ／ｍｌ）またはαＰＩ−
６（２μｇ／ｍｌ）が一次抗体として用いられた。両方のセットについて二次抗
体は１：５，０００に希釈された。
【０１０２】 結果 図５は、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体を本発明の抗ＰＩ−６抗体とｈＫ２抗体で調
べたウェスタンブロットである。この図は、精製されたＰＩ−６が精製されたｈ
Ｋ２と複合体を形成したことを示す。この複合体は、抗ＰＩ−６ポリクローナル
抗体および抗ｈＫ２モノクローナル抗体（ＨＫ１Ｇ５８６．１）の両方で認識さ
れた。ＰＩ−６は、ｈＫ２の酵素的な不活性型である酵素前駆体とは複合体を形
成しなかった（データ示さず）。
べたウェスタンブロットである。この図は、精製されたＰＩ−６が精製されたｈ
Ｋ２と複合体を形成したことを示す。この複合体は、抗ＰＩ−６ポリクローナル
抗体および抗ｈＫ２モノクローナル抗体（ＨＫ１Ｇ５８６．１）の両方で認識さ
れた。ＰＩ−６は、ｈＫ２の酵素的な不活性型である酵素前駆体とは複合体を形
成しなかった（データ示さず）。
【０１０３】 図６は、前立腺の組織の抽出物を抗ＰＩ−６で調べたウェスタンブロットを示
す。前記抗ＰＩ−６抗体は、大腸菌で発現されたＰＩ−６でウサギを免疫して作
成された。良性（Ｂ）と癌性（Ｃ）の両方の組織抽出物は、３つの異なる組織か
ら得られた。前記ウェスタンブロットは、前記抗ＰＩ−６抗体がＰＩ−６だけで
なく、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体その他の、一見してＰＩ−６を含む複合体と考え
られるものも認識したことを示す。前記ウェスタンブロットは、ｈＫ２／ＰＩ−
６複合体のレベルが良性組織に比べて癌では高いことも示す。
す。前記抗ＰＩ−６抗体は、大腸菌で発現されたＰＩ−６でウサギを免疫して作
成された。良性（Ｂ）と癌性（Ｃ）の両方の組織抽出物は、３つの異なる組織か
ら得られた。前記ウェスタンブロットは、前記抗ＰＩ−６抗体がＰＩ−６だけで
なく、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体その他の、一見してＰＩ−６を含む複合体と考え
られるものも認識したことを示す。前記ウェスタンブロットは、ｈＫ２／ＰＩ−
６複合体のレベルが良性組織に比べて癌では高いことも示す。
【０１０４】 ゲルの下部の大きなバンドは遊離ＰＩ−６の分子量と矛盾しない。このゲルは
、ＰＩ−６が前立腺の組織にかなりのレベルで存在し、いくつかの他のタンパク
質と複合体を形成しているらしいことを証明している。ｈＫ２／ＰＩ−６複合体
のレベルが良性組織より癌性組織で高いという事実は、ＰＩ−６が発癌に伴うい
くつかの過程の調節に役割を果たすかもしれないことを示す。
、ＰＩ−６が前立腺の組織にかなりのレベルで存在し、いくつかの他のタンパク
質と複合体を形成しているらしいことを証明している。ｈＫ２／ＰＩ−６複合体
のレベルが良性組織より癌性組織で高いという事実は、ＰＩ−６が発癌に伴うい
くつかの過程の調節に役割を果たすかもしれないことを示す。
【０１０５】 図７は、前立腺の組織の抽出物のウェスタンブロットを示す。レーン１はｈＫ
２の会合状態を検出するためにＨＫ１Ｇ５８６．１で調べられた。レーン１では
、図１と同様に、遊離ｈＫ２と６４ｋＤａの複合体がみられた。レーン２は抗Ｐ
Ｉ−６抗体で調べられた。レーン２では、遊離ＰＩ−６は約４２ｋＤａで検出さ
れ、等量のｈＫ２／ＰＩ−６複合体が抗ｈＫ２抗体でみられたのと同じ６４ｋＤ
ａの泳動度でみられた。
２の会合状態を検出するためにＨＫ１Ｇ５８６．１で調べられた。レーン１では
、図１と同様に、遊離ｈＫ２と６４ｋＤａの複合体がみられた。レーン２は抗Ｐ
Ｉ−６抗体で調べられた。レーン２では、遊離ＰＩ−６は約４２ｋＤａで検出さ
れ、等量のｈＫ２／ＰＩ−６複合体が抗ｈＫ２抗体でみられたのと同じ６４ｋＤ
ａの泳動度でみられた。
【０１０６】 繰り返すと、ＰＩ−６が前立腺の組織に存在することは本発明の発見である。
ＰＩ−６が癌と関連するかもしれないことも本発明の発見である。ＰＩ−６が同
定された内在性のプロテアーゼと複合体を形成するとの発見は、ＰＩ−６が促進
的か抑制的かのいずれかで（ｅｉｔｈｅｒ ｐｒｏ ｏｒ ｃｏｎ）、腫瘍細胞
崩壊性の過程に関与する可能性を示唆する。
ＰＩ−６が癌と関連するかもしれないことも本発明の発見である。ＰＩ−６が同
定された内在性のプロテアーゼと複合体を形成するとの発見は、ＰＩ−６が促進
的か抑制的かのいずれかで（ｅｉｔｈｅｒ ｐｒｏ ｏｒ ｃｏｎ）、腫瘍細胞
崩壊性の過程に関与する可能性を示唆する。
【０１０７】 以上は本発明の射程を例示するつもりであって、限定するつもりのものではな
い。実際、本技術分野における通常の知識を有する者は、ここでの開示にもとづ
き過度の実験作業を要することなく、更なる実施態様を想到し作出することが容
易にできる。
い。実際、本技術分野における通常の知識を有する者は、ここでの開示にもとづ
き過度の実験作業を要することなく、更なる実施態様を想到し作出することが容
易にできる。
【０１０８】 本発明は、その本質的特長を逸脱することなく、他の特定の様式で具現化でき
る。記載された実施態様は、すべての点で例示的であって制限的ではないと解さ
れるべきである。したがって本発明の射程は、以上の説明によってではなく、添
付された請求の範囲によって示される。該請求の範囲の均等物の意味と範囲に属
する全ての変更は前記請求の範囲の射程に包含される。
る。記載された実施態様は、すべての点で例示的であって制限的ではないと解さ
れるべきである。したがって本発明の射程は、以上の説明によってではなく、添
付された請求の範囲によって示される。該請求の範囲の均等物の意味と範囲に属
する全ての変更は前記請求の範囲の射程に包含される。
【０１０９】 参照文献 １．バーグ、Ｔ．、ブラッドショー、Ｒ．Ａ．、カルレテロ、Ｏ．Ａ．、チャオ
、Ｊ．、チャオ、Ｌ．、クレメンツ、Ｊ．Ａ．、ファーネストック、Ｍ．、フリ
ッツ、Ｈ．、ゴーチエ、Ｆ．、マクドナルズ、Ｒ．Ｊ．、マーゴリアス、Ｈ．Ｓ
．、モリス、Ｂ．Ｊ．、リチャーズ、Ｒ．Ｉ．およびスキクリ、Ａ．Ｇ．（Ｂｅ
ｒｇ、Ｔ．、Ｂｒａｄｓｈａｗ、Ｒ．Ａ．、Ｃａｒｒｅｔｅｒｏ、Ｏ．Ａ．、Ｃ
ｈａｏ、Ｊ．、Ｃｈａｏ、Ｌ．、Ｃｌｅｍｅｎｔｓ、Ｊ．Ａ．、Ｆａｈｎｅｓｔ
ｏｃｋ、Ｍ．、Ｆｒｉｔｚ、Ｈ．、Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｆ．、ＭａｃＤｏｎａｌ
ｄｓ、Ｒ．Ｊ．、Ｍａｒｇｏｌｉｕｓ、Ｈ．Ｓ．、Ｍｏｒｒｉｓ、Ｂ．Ｊ．、Ｒ
ｉｃｈａｒｄｓ、Ｒ．Ｉ．、ａｎｄ Ｓｃｉｃｌｉ、Ａ．Ｇ．）、 組織（腺）
カリクレイン遺伝子ファミリーのメンバーの共通の命名法。（Ａ ｃｏｍｍｏｎ
ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓ
ｓｕｅ （ｇｌａｎｄｕｌａｒ） ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉ
ｌｉｅｓ．）、エージェンツ アンド アクションズ サプリメンツ（Ａｇｅｎ
ｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ Ｓｕｐｐｌ．）、３８巻１９−２５頁、１９９２年。
、Ｊ．、チャオ、Ｌ．、クレメンツ、Ｊ．Ａ．、ファーネストック、Ｍ．、フリ
ッツ、Ｈ．、ゴーチエ、Ｆ．、マクドナルズ、Ｒ．Ｊ．、マーゴリアス、Ｈ．Ｓ
．、モリス、Ｂ．Ｊ．、リチャーズ、Ｒ．Ｉ．およびスキクリ、Ａ．Ｇ．（Ｂｅ
ｒｇ、Ｔ．、Ｂｒａｄｓｈａｗ、Ｒ．Ａ．、Ｃａｒｒｅｔｅｒｏ、Ｏ．Ａ．、Ｃ
ｈａｏ、Ｊ．、Ｃｈａｏ、Ｌ．、Ｃｌｅｍｅｎｔｓ、Ｊ．Ａ．、Ｆａｈｎｅｓｔ
ｏｃｋ、Ｍ．、Ｆｒｉｔｚ、Ｈ．、Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｆ．、ＭａｃＤｏｎａｌ
ｄｓ、Ｒ．Ｊ．、Ｍａｒｇｏｌｉｕｓ、Ｈ．Ｓ．、Ｍｏｒｒｉｓ、Ｂ．Ｊ．、Ｒ
ｉｃｈａｒｄｓ、Ｒ．Ｉ．、ａｎｄ Ｓｃｉｃｌｉ、Ａ．Ｇ．）、 組織（腺）
カリクレイン遺伝子ファミリーのメンバーの共通の命名法。（Ａ ｃｏｍｍｏｎ
ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓ
ｓｕｅ （ｇｌａｎｄｕｌａｒ） ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｇｅｎｅ ｆａｍｉ
ｌｉｅｓ．）、エージェンツ アンド アクションズ サプリメンツ（Ａｇｅｎ
ｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ Ｓｕｐｐｌ．）、３８巻１９−２５頁、１９９２年。
【０１１０】 ２．リッテンハウス、Ｈ．Ｇ．、フィンレー、Ｊ．Ａ．、ミコライジック、Ｓ．
Ｄ．およびパルチン、Ａ．Ｗ．（Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｆｉｎｌ
ａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．およびＰａｒｔｉｎ、Ａ．
Ｗ．）、ヒトカリクレイン２（ｈＫ２）と前立腺特異抗原（ＰＳＡ）：２つの近
縁だが別個の前立腺のカリクレイン。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２
（ｈＫ２） ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ
（ＰＳＡ）： Ｔｗｏ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ、ｂｕｔ ｄｉｓｔ
ｉｎｃｔ、ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ．）、ク
リチカル レビューズ オブ クリニカル ラボラトリー サイエンス（Ｃｒｉ
ｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ）、３５巻２７５−３６８頁、１９９８
年。
Ｄ．およびパルチン、Ａ．Ｗ．（Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｆｉｎｌ
ａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．およびＰａｒｔｉｎ、Ａ．
Ｗ．）、ヒトカリクレイン２（ｈＫ２）と前立腺特異抗原（ＰＳＡ）：２つの近
縁だが別個の前立腺のカリクレイン。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２
（ｈＫ２） ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ
（ＰＳＡ）： Ｔｗｏ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ、ｂｕｔ ｄｉｓｔ
ｉｎｃｔ、ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ．）、ク
リチカル レビューズ オブ クリニカル ラボラトリー サイエンス（Ｃｒｉ
ｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ）、３５巻２７５−３６８頁、１９９８
年。
【０１１１】 ３．シャドレーヌ、Ｐ．、パラディ、Ｇ．、トランブレー、Ｒ．およびデューブ
、Ｊ．（Ｃｈａｐｄｅｌａｉｎｅ、Ｐ．、Ｐａｒａｄｉｓ、Ｇ．、Ｔｒｅｍｂｌ
ａｙ、Ｒ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．）、前立腺特異抗原と関連したヒト腺性カ
リクレインｍＲＮＡの前立腺における高レベル発現。（Ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ
ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｏｆ ａ ｈ
ｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｍＲＮＡ ｒｅｌａｔ
ｅｄ ｔｏ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ．）、ＦＥ
ＢＳレター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．）、２３６巻２０５−２０８頁、１９８８年
。
、Ｊ．（Ｃｈａｐｄｅｌａｉｎｅ、Ｐ．、Ｐａｒａｄｉｓ、Ｇ．、Ｔｒｅｍｂｌ
ａｙ、Ｒ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．）、前立腺特異抗原と関連したヒト腺性カ
リクレインｍＲＮＡの前立腺における高レベル発現。（Ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ
ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｏｆ ａ ｈ
ｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｍＲＮＡ ｒｅｌａｔ
ｅｄ ｔｏ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ．）、ＦＥ
ＢＳレター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．）、２３６巻２０５−２０８頁、１９８８年
。
【０１１２】 ４．モリス、Ｂ．Ｊ．（Ｍｏｒｒｉｓ、Ｂ．Ｊ．）、ヒト前立腺で発現するカリ
クレイン遺伝子。（Ａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ．）、クリニカル アンド エクスペリ
メンタル ファーマコロジー アンド フィジオロジー（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐ
ｈａｒｍ．Ｐｈｙｓ．）、１６巻３４５−３５１頁、１９８９年。
クレイン遺伝子。（Ａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ．）、クリニカル アンド エクスペリ
メンタル ファーマコロジー アンド フィジオロジー（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐ
ｈａｒｍ．Ｐｈｙｓ．）、１６巻３４５−３５１頁、１９８９年。
【０１１３】 ５．ブリドン、Ｄ．およびダウエル、Ｂ．（Ｂｒｉｄｏｎ、Ｄ． ａｎｄ Ｄｏ
ｗｅｌｌ、Ｂ．）、分子モデリングを用いた前立腺特異抗原とヒト腺性カリクレ
インの構造比較。（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｐｒ
ｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｌ
ａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｕｓｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍ
ｏｄｅｌｉｎｇ．）、ウロロジー（Ｕｒｏｌｏｇｙ）、４５巻８０１−８０６頁
、１９９５年。
ｗｅｌｌ、Ｂ．）、分子モデリングを用いた前立腺特異抗原とヒト腺性カリクレ
インの構造比較。（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｐｒ
ｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｌ
ａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｕｓｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍ
ｏｄｅｌｉｎｇ．）、ウロロジー（Ｕｒｏｌｏｇｙ）、４５巻８０１−８０６頁
、１９９５年。
【０１１４】 ６．ビーヒネン、Ｍ．（Ｖｉｈｉｎｅｎ、Ｍ．）、前立腺特異抗原とヒト腺性カ
リクレインの構造のモデリング。（Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａ
ｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）、ＢＢＲＣ、２０４巻１２
５１−１２５６頁、１９９４年。
リクレインの構造のモデリング。（Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａ
ｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）、ＢＢＲＣ、２０４巻１２
５１−１２５６頁、１９９４年。
【０１１５】 ７．ヤング、Ｃ．Ｙ．、アンドリュース、Ｐ．Ｅ．、モンゴメリー、Ｂ．Ｔ．お
よびチンダル、（Ｄ．Ｊ．Ｙｏｕｎｇ、Ｃ．Ｙ．、Ａｎｄｒｅｗｓ、Ｐ．Ｅ．、
Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、Ｂ．Ｔ．、ａｎｄ Ｔｉｎｄａｌｌ、Ｄ．Ｊ．）、ヒト
前立腺特異腺性カリクレインの組織特異的およびホルモン性の調節。（Ｔｉｓｓ
ｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｌａｎｄｕｌａｒ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
、３１巻８１８−８２４頁、１９９２年。
よびチンダル、（Ｄ．Ｊ．Ｙｏｕｎｇ、Ｃ．Ｙ．、Ａｎｄｒｅｗｓ、Ｐ．Ｅ．、
Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、Ｂ．Ｔ．、ａｎｄ Ｔｉｎｄａｌｌ、Ｄ．Ｊ．）、ヒト
前立腺特異腺性カリクレインの組織特異的およびホルモン性の調節。（Ｔｉｓｓ
ｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｌａｎｄｕｌａｒ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）
、３１巻８１８−８２４頁、１９９２年。
【０１１６】 ８．クレメンツ、Ｊ．（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ、Ｊ．）、腺性カリクレインファミリ
ーの酵素：組織特異的およびホルモン性の調節。（Ｔｈｅ ｇｌａｎｄｕｌａｒ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ： ｔｉｓｓｕ
ｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒ
ｅｇｕｌａｔｉｏｎ．）、エンドクリン レビューズ（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒ
ｅｖ．）、１０巻３９３−４１９頁、１９８９年。
ーの酵素：組織特異的およびホルモン性の調節。（Ｔｈｅ ｇｌａｎｄｕｌａｒ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ： ｔｉｓｓｕ
ｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｒ
ｅｇｕｌａｔｉｏｎ．）、エンドクリン レビューズ（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒ
ｅｖ．）、１０巻３９３−４１９頁、１９８９年。
【０１１７】 ９．デペルテス、Ｄ．、マルソー、Ｆ．、フレネッテ、Ｇ．、ラズール、Ｃ．、
トランブレー、Ｒ．Ｒ．およびデューブ、Ｊ．Ｙ．（Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．
、Ｍａｒｃｅａｕ、Ｆ．、Ｆｒｅｎｅｔｔｅ、Ｇ．、Ｌａｚｕｒｅ、Ｃ．、Ｔｒ
ｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、ヒトカリクレインｈ
Ｋ２はキニノゲナーゼ活性が低く、前立腺特異抗原（ｈＫ３）は全く活性がない
。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｈＫ２ ｈａｓ ｌｏｗ ｋｉｎｉｎ
ｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｈｉｌｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ− ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ （ｈＫ３） ｈａｓ ｎｏｎｅ．）、ビオキミカ
エ ビオフィジカ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ）、
１３４３巻１０２−１０６頁、１９９７年。
トランブレー、Ｒ．Ｒ．およびデューブ、Ｊ．Ｙ．（Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．
、Ｍａｒｃｅａｕ、Ｆ．、Ｆｒｅｎｅｔｔｅ、Ｇ．、Ｌａｚｕｒｅ、Ｃ．、Ｔｒ
ｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、ヒトカリクレインｈ
Ｋ２はキニノゲナーゼ活性が低く、前立腺特異抗原（ｈＫ３）は全く活性がない
。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｈＫ２ ｈａｓ ｌｏｗ ｋｉｎｉｎ
ｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｈｉｌｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ− ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ （ｈＫ３） ｈａｓ ｎｏｎｅ．）、ビオキミカ
エ ビオフィジカ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ）、
１３４３巻１０２−１０６頁、１９９７年。
【０１１８】 １０．ブルジョワ、Ｌ．、ブリヤール、Ｌ．、ブリヤール−ブールデ、Ｍ．、デ
ペルテス、Ｄ．、ジュリアーノ、Ｍ．Ａ．、ジュリアーノ、Ｌ．、トランブレー
、Ｒ．Ｒ．、デューブ、Ｊ．Ｙ．およびゴーチエ、Ｆ．（Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ、
Ｌ．、Ｂｒｉｌｌａｒｄ−Ｂｏｕｒｄｅｔ、Ｍ．、Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．、
Ｊｕｌｉａｎｏ、Ｍ．Ａ．、Ｊｕｌｉａｎｏ、Ｌ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ
．、Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．、ａｎｄ Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｆ．）、ヒト組織カリク
レインｈＫ１およびｈＫ２の基質特異性を研究するためのセルピン由来のペプチ
ド基質。（Ｓｅｒｐｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｂｓｔｒａｔ
ｅｓ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓ
ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉ
ｎｓ ｈＫ１ ａｎｄ ｈＫ２．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７２巻２９５９０−２９５９５頁、１
９９７年。
ペルテス、Ｄ．、ジュリアーノ、Ｍ．Ａ．、ジュリアーノ、Ｌ．、トランブレー
、Ｒ．Ｒ．、デューブ、Ｊ．Ｙ．およびゴーチエ、Ｆ．（Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ、
Ｌ．、Ｂｒｉｌｌａｒｄ−Ｂｏｕｒｄｅｔ、Ｍ．、Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．、
Ｊｕｌｉａｎｏ、Ｍ．Ａ．、Ｊｕｌｉａｎｏ、Ｌ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ
．、Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．、ａｎｄ Ｇａｕｔｈｉｅｒ、Ｆ．）、ヒト組織カリク
レインｈＫ１およびｈＫ２の基質特異性を研究するためのセルピン由来のペプチ
ド基質。（Ｓｅｒｐｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｂｓｔｒａｔ
ｅｓ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓ
ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉ
ｎｓ ｈＫ１ ａｎｄ ｈＫ２．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７２巻２９５９０−２９５９５頁、１
９９７年。
【０１１９】 １１．クマール、Ａ．、ミコライジック、Ｓ．Ｄ．、ゲール、Ａ．Ｓ．、ミラー
、Ｌ．Ｓ．およびセディ、Ｍ．Ｓ．（Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙ
ｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｇｏｅｌ、Ａ．Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．、ａｎｄ Ｓａｅ
ｄｉ、Ｍ．Ｓ．）、前立腺特異抗原の前駆体型の哺乳類細胞による発現とヒトカ
リクレイン２による成熟活性型への変換。（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒ
ｏ ｆｏｒｍ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ
ｂｙ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏ
ｎ ｔｏ ｍａｔｕｒｅ、ａｃｔｉｖｅ ｆｏｒｍ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｋａｌ
ｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）、
印刷中、１９９７年。
、Ｌ．Ｓ．およびセディ、Ｍ．Ｓ．（Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙ
ｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｇｏｅｌ、Ａ．Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．、ａｎｄ Ｓａｅ
ｄｉ、Ｍ．Ｓ．）、前立腺特異抗原の前駆体型の哺乳類細胞による発現とヒトカ
リクレイン２による成熟活性型への変換。（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒ
ｏ ｆｏｒｍ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ
ｂｙ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏ
ｎ ｔｏ ｍａｔｕｒｅ、ａｃｔｉｖｅ ｆｏｒｍ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｋａｌ
ｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）、
印刷中、１９９７年。
【０１２０】 １２．タカヤマ、Ｔ．Ｋ．、フジカワ、Ｋ．およびデビィ、Ｅ．Ｗ．（Ｔａｋａ
ｙａｍａ、Ｔ．Ｋ．、Ｆｕｊｉｋａｗａ、Ｋ．、ａｎｄ Ｄａｖｉｅ、Ｅ．Ｗ．
）、前立腺特異抗原前駆体型の解析−トリプシンとヒト腺性カリクレインによる
活性化。（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｃｕｒｓ
ｏｒ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｃｔｉ
ｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄ
ｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７２巻２１５８２−２１５８８頁
、１９９７年。
ｙａｍａ、Ｔ．Ｋ．、Ｆｕｊｉｋａｗａ、Ｋ．、ａｎｄ Ｄａｖｉｅ、Ｅ．Ｗ．
）、前立腺特異抗原前駆体型の解析−トリプシンとヒト腺性カリクレインによる
活性化。（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｃｕｒｓ
ｏｒ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｃｔｉ
ｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄ
ｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７２巻２１５８２−２１５８８頁
、１９９７年。
【０１２１】 １３．ロブグレン、Ｊ．、ラヤコスキー、Ｋ．、カープ、Ｍ．、ルンドウォール
、Ａ．およびリーリャ、Ｈ．（Ｌｏｖｇｒｅｎ、Ｊ．、Ｒａｊａｋｏｓｋｉ、Ｋ
．、Ｋａｒｐ、Ｍ．、Ｌｕｎｄｗａｌｌ、Ａ．、ａｎｄ Ｌｉｌｊａ、Ｈ．）、
ヒト腺性カリクレイン２による前駆体型前立腺特異抗原の活性化。（Ａｃｔｉｖ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｚｙｍｏｇｅｎ ｆｏｒｍ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔ
ｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａ
ｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、バイオケミカル アンド バイオフィジカ
ル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．）、２３８巻５４９−５５５頁、１９９７年。
、Ａ．およびリーリャ、Ｈ．（Ｌｏｖｇｒｅｎ、Ｊ．、Ｒａｊａｋｏｓｋｉ、Ｋ
．、Ｋａｒｐ、Ｍ．、Ｌｕｎｄｗａｌｌ、Ａ．、ａｎｄ Ｌｉｌｊａ、Ｈ．）、
ヒト腺性カリクレイン２による前駆体型前立腺特異抗原の活性化。（Ａｃｔｉｖ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｚｙｍｏｇｅｎ ｆｏｒｍ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔ
ｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａ
ｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、バイオケミカル アンド バイオフィジカ
ル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．）、２３８巻５４９−５５５頁、１９９７年。
【０１２２】 １４．ミコライジック、Ｓ．Ｄ．、ミラー、Ｌ．Ｓ．、マーカー、Ｋ．Ｍ．、グ
ロウエ、Ｌ．Ｓ．、ゲール、Ａ．Ｓ．、カス、Ｍ．Ｍ．Ｊ．、クマール、Ａ．お
よびセディ、Ｍ．Ｓ．（Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ
．Ｓ．、Ｍａｒｋｅｒ、Ｋ．Ｍ．、Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｇｏｅｌ、Ａ．Ｓ
．、Ｃａｓｓ、Ｍ．Ｍ．Ｊ．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．、ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ
．）、２１７番のアラニンは前立腺特異的なヒトカリクレイン２の触媒機能と自
己活性化のために重要である。（Ａｌａ２１７ ｉｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆ
ｏｒ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｕｔｏａｃ
ｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、ヨーロピアン ジャーナル オブ バイオケミ
ストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、２４６巻４４０−４４６頁、１９
９７年。
ロウエ、Ｌ．Ｓ．、ゲール、Ａ．Ｓ．、カス、Ｍ．Ｍ．Ｊ．、クマール、Ａ．お
よびセディ、Ｍ．Ｓ．（Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ
．Ｓ．、Ｍａｒｋｅｒ、Ｋ．Ｍ．、Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｇｏｅｌ、Ａ．Ｓ
．、Ｃａｓｓ、Ｍ．Ｍ．Ｊ．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．、ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ
．）、２１７番のアラニンは前立腺特異的なヒトカリクレイン２の触媒機能と自
己活性化のために重要である。（Ａｌａ２１７ ｉｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆ
ｏｒ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｕｔｏａｃ
ｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ
ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２．）、ヨーロピアン ジャーナル オブ バイオケミ
ストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、２４６巻４４０−４４６頁、１９
９７年。
【０１２３】 １５．ダーソン、Ｍ．Ｆ．、パルチェリ、Ａ．、ロッシュ、Ｐ．、リッテンハウ
ス、Ｈ．Ｇ．、ウォルファート、Ｒ．Ｌ．、ヤング、Ｃ．Ｙ．Ｆ．、クレー、Ｇ
．Ｇ．、チンダル、Ｄ．Ｊ．およびボストウィック、Ｄ．Ｇ．（Ｄａｒｓｏｎ、
Ｍ．Ｆ．、Ｐａｒｃｅｌｌｉ、Ａ．、Ｒｏｃｈｅ、Ｐ．、Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓ
ｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．、Ｙｏｕｎｇ、Ｃ．Ｙ．Ｆ．、Ｋｌｅ
ｅ、Ｇ．Ｇ．、Ｔｉｎｄａｌｌ、Ｄ．Ｊ．、ａｎｄ Ｂｏｓｔｗｉｃｋ、Ｄ．Ｇ
．）、前立腺上皮内新生物および腺癌におけるヒト腺性カリクレイン２（ｈＫ２
）の発現：新規な前立腺癌マーカー。（Ｈｕｍａｎ Ｇｌａｎｄｕｌａｒ Ｋａ
ｌｌｉｋｒｅｉｎ ２（ｈＫ２） ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｓｔａ
ｔｉｃ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ａｎｄ ａｄ
ｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅ
ｒ ｍａｒｋｅｒ．）、ウロロジー（Ｕｒｏｌｏｇｙ）、４９巻（６号）８５７
−８６２頁、１９９７年。
ス、Ｈ．Ｇ．、ウォルファート、Ｒ．Ｌ．、ヤング、Ｃ．Ｙ．Ｆ．、クレー、Ｇ
．Ｇ．、チンダル、Ｄ．Ｊ．およびボストウィック、Ｄ．Ｇ．（Ｄａｒｓｏｎ、
Ｍ．Ｆ．、Ｐａｒｃｅｌｌｉ、Ａ．、Ｒｏｃｈｅ、Ｐ．、Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓ
ｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．、Ｙｏｕｎｇ、Ｃ．Ｙ．Ｆ．、Ｋｌｅ
ｅ、Ｇ．Ｇ．、Ｔｉｎｄａｌｌ、Ｄ．Ｊ．、ａｎｄ Ｂｏｓｔｗｉｃｋ、Ｄ．Ｇ
．）、前立腺上皮内新生物および腺癌におけるヒト腺性カリクレイン２（ｈＫ２
）の発現：新規な前立腺癌マーカー。（Ｈｕｍａｎ Ｇｌａｎｄｕｌａｒ Ｋａ
ｌｌｉｋｒｅｉｎ ２（ｈＫ２） ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｓｔａ
ｔｉｃ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ａｎｄ ａｄ
ｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅ
ｒ ｍａｒｋｅｒ．）、ウロロジー（Ｕｒｏｌｏｇｙ）、４９巻（６号）８５７
−８６２頁、１９９７年。
【０１２４】 １６．フレネッテ、Ｇ．、トランブレー、Ｒ．Ｒ．、ラズール、Ｃ．およびデュ
ーブ、Ｊ．Ｙ．（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ、Ｇ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、Ｌａ
ｚｕｒｅ、Ｃ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、前立腺カリクレイン（ｈｋ２
）は１本鎖ウロキナーゼ型プラズミノーゲンアクチベーターを活性化するが、前
立腺特異抗原（ｈｋ３）は活性化しない。（Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｋａｌｌｉｋ
ｒｅｉｎ （ｈｋ２）、ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ａｎｔｉｇｅｎ （ｈｋ３）、ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉ
ｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔ
ｏｒ．）、インターナショナル ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ． Ｊ
．Ｃａｎｃｅｒ）、７１巻８９７−８９９頁、１９９７年。
ーブ、Ｊ．Ｙ．（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ、Ｇ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、Ｌａ
ｚｕｒｅ、Ｃ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、前立腺カリクレイン（ｈｋ２
）は１本鎖ウロキナーゼ型プラズミノーゲンアクチベーターを活性化するが、前
立腺特異抗原（ｈｋ３）は活性化しない。（Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｋａｌｌｉｋ
ｒｅｉｎ （ｈｋ２）、ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ａｎｔｉｇｅｎ （ｈｋ３）、ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉ
ｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔ
ｏｒ．）、インターナショナル ジャーナル オブ キャンサー（Ｉｎｔ． Ｊ
．Ｃａｎｃｅｒ）、７１巻８９７−８９９頁、１９９７年。
【０１２５】 １７．ミコライジック、Ｓ．Ｄ．、ミラー、Ｌ．Ｓ．、クマール、Ａ．、および
セディ、Ｍ．Ｓ．（Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ
．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ．）、ヒトカリクレイン２（
ｈＫ２）はプラズミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）を
不活性化し複合体を形成する。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２（ｈＫ
２） ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｗｉｔｈ ｐｌ
ａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１ （ＰＡＩ
−１）．）、インターナショナル ジャーナル オブ キャンサー、（Ｉｎｔ
Ｊ Ｃａｎｃｅｒ）、印刷中、１９９９年。
セディ、Ｍ．Ｓ．（Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ
．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ．）、ヒトカリクレイン２（
ｈＫ２）はプラズミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）を
不活性化し複合体を形成する。（Ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ２（ｈＫ
２） ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｗｉｔｈ ｐｌ
ａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１ （ＰＡＩ
−１）．）、インターナショナル ジャーナル オブ キャンサー、（Ｉｎｔ
Ｊ Ｃａｎｃｅｒ）、印刷中、１９９９年。
【０１２６】 １８．グロウエ、Ｌ．Ｓ．、フィンレー、Ｊ．Ａ．、ミコライジック、Ｓ．Ｄ．
、プサテリ、Ｋ．Ｄ．およびウォルファート、Ｒ．Ｌ．（Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ
．、Ｆｉｎｌａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｐｕｓａｔ
ｅｒｉ、Ｋ．Ｄ．、ａｎｄ Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．）、ヒト腺性カリクレイ
ン、ｈＫ２の前駆体型およびプロテアーゼインヒビターとの複合体としての前立
腺癌腫血清中での検出。（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄ
ｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ、ｈＫ２、ａｓ ｉｔｓ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ
ｆｏｒｍ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｓｅｒｕ
ｍ．）、ジャーナル オブ アンドロロジー（Ｊ Ａｎｄｒｏｌ）、１９巻４０
７−４１１頁、１９９８年。
、プサテリ、Ｋ．Ｄ．およびウォルファート、Ｒ．Ｌ．（Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ
．、Ｆｉｎｌａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｐｕｓａｔ
ｅｒｉ、Ｋ．Ｄ．、ａｎｄ Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．）、ヒト腺性カリクレイ
ン、ｈＫ２の前駆体型およびプロテアーゼインヒビターとの複合体としての前立
腺癌腫血清中での検出。（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄ
ｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ、ｈＫ２、ａｓ ｉｔｓ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ
ｆｏｒｍ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｓｅｒｕ
ｍ．）、ジャーナル オブ アンドロロジー（Ｊ Ａｎｄｒｏｌ）、１９巻４０
７−４１１頁、１９９８年。
【０１２７】 １９．デペルテス、Ｄ．、シャドレーヌ、Ｐ．、トランブレー、Ｒ．Ｒ．、ブル
ネ、Ｃ．、バートン、Ｊ．、エベール、Ｊ．、ラズール、Ｃ．およびデューブ、
Ｊ．Ｙ．（Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．、Ｃｈａｐｄｅｌａｉｎｅ、Ｐ．、Ｔｒｅ
ｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、Ｂｒｕｎｅｔ、Ｃ．、Ｂｅｒｔｏｎ、Ｊ．、Ｈｅｂｅｒ
ｔ、Ｊ．、Ｌａｚｕｒｅ、Ｃ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、ヒト精漿にお
ける前立腺カリクレインｈＫ２、別名ｈＧＫ−１、の単離。（Ｉｓｏｌａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｈＫ２、ａｌｓｏ ｋ
ｎｏｗｎ ａｓ ｈＧＫ−１、ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｍｉｎａｌ ｐｌａｓｍ
ａ．）、ビオキミカ エ ビオフィジカ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ Ａｃｔａ）、１２４５巻３１１−３１６頁、１９９５年。
ネ、Ｃ．、バートン、Ｊ．、エベール、Ｊ．、ラズール、Ｃ．およびデューブ、
Ｊ．Ｙ．（Ｄｅｐｅｒｔｈｅｓ、Ｄ．、Ｃｈａｐｄｅｌａｉｎｅ、Ｐ．、Ｔｒｅ
ｍｂｌａｙ、Ｒ．Ｒ．、Ｂｒｕｎｅｔ、Ｃ．、Ｂｅｒｔｏｎ、Ｊ．、Ｈｅｂｅｒ
ｔ、Ｊ．、Ｌａｚｕｒｅ、Ｃ．、ａｎｄ Ｄｕｂｅ、Ｊ．Ｙ．）、ヒト精漿にお
ける前立腺カリクレインｈＫ２、別名ｈＧＫ−１、の単離。（Ｉｓｏｌａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｈＫ２、ａｌｓｏ ｋ
ｎｏｗｎ ａｓ ｈＧＫ−１、ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｍｉｎａｌ ｐｌａｓｍ
ａ．）、ビオキミカ エ ビオフィジカ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ Ａｃｔａ）、１２４５巻３１１−３１６頁、１９９５年。
【０１２８】 ２０．モーゲンシュターン、Ｋ．Ａ．、ヘンゼル、Ｗ．Ｊ．、べーカー、Ｊ．Ｂ
．、ワン、Ｓ．、パスツージィン、Ａ．およびキーシェル、Ｗ．（Ｍｏｒｇｅｎ
ｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、Ｈｅｎｚｅｌ、Ｗ．Ｊ．、Ｂａｋｅｒ、Ｊ．Ｂ．、Ｗｏ
ｎｇ、Ｓ．、Ｐａｓｔｕｓｚｙｎ、Ａ．、ａｎｄ Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、サル
腎臓上皮株細胞由来の細胞内セリンプロテアーゼインヒビターの単離と解析。（
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈ
ｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ ａ ｍｏｎｋｅｙ ｋｉｄｎｅｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉ
ａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケミスト
リー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２６８巻２１５６０−２１５６８頁、１９９
３年。
．、ワン、Ｓ．、パスツージィン、Ａ．およびキーシェル、Ｗ．（Ｍｏｒｇｅｎ
ｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、Ｈｅｎｚｅｌ、Ｗ．Ｊ．、Ｂａｋｅｒ、Ｊ．Ｂ．、Ｗｏ
ｎｇ、Ｓ．、Ｐａｓｔｕｓｚｙｎ、Ａ．、ａｎｄ Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、サル
腎臓上皮株細胞由来の細胞内セリンプロテアーゼインヒビターの単離と解析。（
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ
ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈ
ｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ ａ ｍｏｎｋｅｙ ｋｉｄｎｅｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉ
ａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケミスト
リー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２６８巻２１５６０−２１５６８頁、１９９
３年。
【０１２９】 ２１．スコット、Ｆ．Ｌ．、コーリン、Ｐ．Ｂ．、バード、Ｃ．、チェルッチ、
Ｌ．、ヘイマン、Ｊ．Ａ．およびバード、Ｐ．（Ｓｃｏｔｔ、Ｆ．Ｌ．、Ｃｏｕ
ｇｈｌｉｎ、Ｐ．Ｂ．、Ｂｉｒｄ、Ｃ．、Ｃｅｒｒｕｔｉ、Ｌ．、Ｈａｙｍａｎ
、Ｊ．Ａ．、ａｎｄ Ｂｉｒｄ、Ｐ．）、プロテイナーゼインヒビター６は分泌
されないことから、新規なタイプの細胞性セルピンであることが示唆される。（
Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ６ ｃａｎｎｏｔ ｂｅ ｓｅｃ
ｒｅｔｅｄ、ｗｈｉｃｈ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｉｔ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｔｙｐ
ｅ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｐｉｎ．）、ジャーナル オブ バイオロ
ジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻１６０５−１６１
２頁、１９９６年。
Ｌ．、ヘイマン、Ｊ．Ａ．およびバード、Ｐ．（Ｓｃｏｔｔ、Ｆ．Ｌ．、Ｃｏｕ
ｇｈｌｉｎ、Ｐ．Ｂ．、Ｂｉｒｄ、Ｃ．、Ｃｅｒｒｕｔｉ、Ｌ．、Ｈａｙｍａｎ
、Ｊ．Ａ．、ａｎｄ Ｂｉｒｄ、Ｐ．）、プロテイナーゼインヒビター６は分泌
されないことから、新規なタイプの細胞性セルピンであることが示唆される。（
Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ６ ｃａｎｎｏｔ ｂｅ ｓｅｃ
ｒｅｔｅｄ、ｗｈｉｃｈ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｉｔ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｔｙｐ
ｅ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｐｉｎ．）、ジャーナル オブ バイオロ
ジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻１６０５−１６１
２頁、１９９６年。
【０１３０】 ２２．モーゲンシュターン、Ｋ．Ａ．、スプレッシャー、Ｃ．、ホルト、Ｌ．、
フォスター、Ｄ．、グラント、Ｆ．Ｊ．、チン、Ａ．およびキーシェル、Ｗ．（
Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、Ｓｐｒｅｃｈｅｒ、Ｃ．、Ｈｏｌｔｈ、Ｌ
．、Ｆｏｓｔｅｒ、Ｄ．、Ｇｒａｎｔ、Ｆ．Ｊ．、Ｃｈｉｎｇ、Ａ．、ａｎｄ
Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、新規細胞内セリンプロテイナーゼインヒビターの相補Ｄ
ＮＡクローニングおよび反応速度論的解析：トリプシンとＸａ因子をプロテイナ
ーゼのモデルとする作用機序。（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ ｃｌｏ
ｎｉｎｇ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉ
ｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ： ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｆａｃｔｏｒ Ｘａ ａｓ ｍｏｄｅｌ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ．）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
）、３３巻３４３２−３４４１頁、１９９４年。
フォスター、Ｄ．、グラント、Ｆ．Ｊ．、チン、Ａ．およびキーシェル、Ｗ．（
Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、Ｓｐｒｅｃｈｅｒ、Ｃ．、Ｈｏｌｔｈ、Ｌ
．、Ｆｏｓｔｅｒ、Ｄ．、Ｇｒａｎｔ、Ｆ．Ｊ．、Ｃｈｉｎｇ、Ａ．、ａｎｄ
Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、新規細胞内セリンプロテイナーゼインヒビターの相補Ｄ
ＮＡクローニングおよび反応速度論的解析：トリプシンとＸａ因子をプロテイナ
ーゼのモデルとする作用機序。（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＤＮＡ ｃｌｏ
ｎｉｎｇ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉ
ｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ： ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｆａｃｔｏｒ Ｘａ ａｓ ｍｏｄｅｌ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ．）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
）、３３巻３４３２−３４４１頁、１９９４年。
【０１３１】 ２３．リーウォルド、Ｍ．、モーゲンシュターン、Ｋ．Ａ．およびシュリーフ、
Ｒ．Ｒ．（Ｒｉｅｗａｌｄ、Ｍ．、Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、ａｎｄ
Ｓｃｈｌｅｅｆ、Ｒ．Ｒ．）、ヒト血小板における細胞質アンチプロテイナー
ゼ（ＣＡＰ）の解析。ＣＡＰと内在性血小板タンパク質との相互作用の証拠。（
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｔｉｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ （Ｃ
ＡＰ） ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＡＰ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｇｅｎ
ｏｕｓ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．）、ジャーナル オブ バイオ
ロジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻７１６０−７１
６７頁、１９９６年。
Ｒ．Ｒ．（Ｒｉｅｗａｌｄ、Ｍ．、Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ、Ｋ．Ａ．、ａｎｄ
Ｓｃｈｌｅｅｆ、Ｒ．Ｒ．）、ヒト血小板における細胞質アンチプロテイナー
ゼ（ＣＡＰ）の解析。ＣＡＰと内在性血小板タンパク質との相互作用の証拠。（
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｔｉｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ （Ｃ
ＡＰ） ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＡＰ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｇｅｎ
ｏｕｓ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．）、ジャーナル オブ バイオ
ロジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻７１６０−７１
６７頁、１９９６年。
【０１３２】 ２４．コーリン、Ｐ．、スン、Ｊ．、チェルッチ、Ｌ．、セーラム、Ｈ．Ｈ．お
よびバード、Ｐ．（Ｃｏｕｇｈｌｉｎ、Ｐ．、Ｓｕｎ、Ｊ．、Ｃｅｒｒｕｔｉ、
Ｌ．、Ｓａｌｅｍ、Ｈ．Ｈ．、ａｎｄ Ｂｉｒｄ、Ｐ．）、ヒト細胞内セリンプ
ロテイナーゼインヒビターのクローニングと分子の解析。（Ｃｌｏｎｉｎｇ ａ
ｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈ
ｕｍａｎ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．）、プロシーディング オブ ナショナルアカデミー
オブ サイエンス オブ ジ ユナイテッド ステーツ オブ アメリカ（Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）、９０巻９４１７−９４２
１頁、１９９３年。
よびバード、Ｐ．（Ｃｏｕｇｈｌｉｎ、Ｐ．、Ｓｕｎ、Ｊ．、Ｃｅｒｒｕｔｉ、
Ｌ．、Ｓａｌｅｍ、Ｈ．Ｈ．、ａｎｄ Ｂｉｒｄ、Ｐ．）、ヒト細胞内セリンプ
ロテイナーゼインヒビターのクローニングと分子の解析。（Ｃｌｏｎｉｎｇ ａ
ｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈ
ｕｍａｎ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．）、プロシーディング オブ ナショナルアカデミー
オブ サイエンス オブ ジ ユナイテッド ステーツ オブ アメリカ（Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）、９０巻９４１７−９４２
１頁、１９９３年。
【０１３３】 ２５．クマール、Ａ．、ゲール、Ａ．、ヒル、Ｔ．、ミコライジック、Ｓ．、ク
ース−ライヒェル、Ｋ．およびセディ、Ｍ．（Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｇｏｅｌ、Ａ
．、Ｈｉｌｌ、Ｔ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．、Ｋ
ｕｕｓ−Ｒｅｉｃｈｅｌ、Ｋ．、ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．）、ヒト腺性カリク
レイン、ｈＫ２、の哺乳類細胞における発現。（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ、ｈＫ２、ｉｎ ｍａ
ｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．）、キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．）、５６巻５３９７−５４０２頁、１９９６年。
ース−ライヒェル、Ｋ．およびセディ、Ｍ．（Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｇｏｅｌ、Ａ
．、Ｈｉｌｌ、Ｔ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．、Ｋ
ｕｕｓ−Ｒｅｉｃｈｅｌ、Ｋ．、ａｎｄ Ｓａｅｄｉ、Ｍ．）、ヒト腺性カリク
レイン、ｈＫ２、の哺乳類細胞における発現。（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ、ｈＫ２、ｉｎ ｍａ
ｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．）、キャンサー リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．）、５６巻５３９７−５４０２頁、１９９６年。
【０１３４】 ２６．フィンレー、Ｊ．Ａ．、エバンズ、Ｃ．Ｌ．、ディ、Ｊ．Ｒ．、ペイン、
Ｊ．Ｋ．、ミコライジック、Ｓ．Ｄ．、ミラー、Ｌ．Ｓ．、クース−ライヒェル
、Ｋ．、ウォルファート、Ｒ．Ｌ．およびリッテンハウス、Ｈ．Ｇ．（Ｆｉｎｌ
ａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｅｖａｎｓ、Ｃ．Ｌ．、Ｄａｙ、Ｊ．Ｒ．、Ｐａｙｎｅ、Ｊ．
Ｋ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．，Ｋｕｕｓ
−Ｒｅｉｃｈｅｌ、Ｋ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．、ａｎｄ Ｒｉｔｔｅｎｈ
ｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．）、ヒト腺性カリクレイン（ｈＫ２）に特異的なモノクロー
ナル抗体の作成：前立腺特異抗原との交差反応が無視できる程度のｈＫ２の二重
抗体イムノアッセイ法の開発。（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｇ
ｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ （ｈＫ２）：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔ ｏｆ ａ ｄｕａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ
ｈＫ２ ｗｉｔｈ ｎｅｇｌｉｇｉｂｌｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆ
ｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ．）、ウロロジー（
Ｕｒｏｌｏｇｙ）、５１巻８０４−８０９頁、１９９８年。
Ｊ．Ｋ．、ミコライジック、Ｓ．Ｄ．、ミラー、Ｌ．Ｓ．、クース−ライヒェル
、Ｋ．、ウォルファート、Ｒ．Ｌ．およびリッテンハウス、Ｈ．Ｇ．（Ｆｉｎｌ
ａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｅｖａｎｓ、Ｃ．Ｌ．、Ｄａｙ、Ｊ．Ｒ．、Ｐａｙｎｅ、Ｊ．
Ｋ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．，Ｋｕｕｓ
−Ｒｅｉｃｈｅｌ、Ｋ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．、ａｎｄ Ｒｉｔｔｅｎｈ
ｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．）、ヒト腺性カリクレイン（ｈＫ２）に特異的なモノクロー
ナル抗体の作成：前立腺特異抗原との交差反応が無視できる程度のｈＫ２の二重
抗体イムノアッセイ法の開発。（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｇ
ｌａｎｄｕｌａｒ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ （ｈＫ２）：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔ ｏｆ ａ ｄｕａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ
ｈＫ２ ｗｉｔｈ ｎｅｇｌｉｇｉｂｌｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆ
ｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ．）、ウロロジー（
Ｕｒｏｌｏｇｙ）、５１巻８０４−８０９頁、１９９８年。
【０１３５】 ２７．スプレッシャー、Ｃ．Ａ．、モーゲンシュターン、Ｋ．Ａ．、マシューズ
、Ｓ．、ダーレン、Ｊ．Ｒ．、シュレーダー、Ｓ．Ｋ．、フォスター、Ｄ．Ｃ．
およびキーシェル、Ｗ．（Ｓｐｒｅｃｈｅｒ、Ｃ．Ａ．、Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒ
ｎ、Ｋ．Ａ．、Ｍａｔｈｅｗｅｓ、Ｓ．、Ｄａｈｌｅｎ、Ｊ．Ｒ．、Ｓｃｈｒａ
ｄｅｒ、Ｓ．Ｋ．，Ｆｏｓｔｅｒ、Ｄ．Ｃ．、ａｎｄ Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、
セリンプロテイナーゼインヒビターのオバルブミンファミリーの２つの新規なメ
ンバーの分子クローニング、発現および部分的解析。（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃ
ｌｏｎｉｎｇ、ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌ ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉ
ｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー、（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７０巻２９８５４−２９８６１頁
、１９９５年。
、Ｓ．、ダーレン、Ｊ．Ｒ．、シュレーダー、Ｓ．Ｋ．、フォスター、Ｄ．Ｃ．
およびキーシェル、Ｗ．（Ｓｐｒｅｃｈｅｒ、Ｃ．Ａ．、Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒ
ｎ、Ｋ．Ａ．、Ｍａｔｈｅｗｅｓ、Ｓ．、Ｄａｈｌｅｎ、Ｊ．Ｒ．、Ｓｃｈｒａ
ｄｅｒ、Ｓ．Ｋ．，Ｆｏｓｔｅｒ、Ｄ．Ｃ．、ａｎｄ Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ．）、
セリンプロテイナーゼインヒビターのオバルブミンファミリーの２つの新規なメ
ンバーの分子クローニング、発現および部分的解析。（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃ
ｌｏｎｉｎｇ、ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌ ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉ
ｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．）、ジャーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー、（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７０巻２９８５４−２９８６１頁
、１９９５年。
【０１３６】 ２８．リーウォルド、Ｍ．、およびシュリーフ、Ｒ．Ｒ．（Ｒｉｅｗａｌｄ、Ｍ
． ａｎｄ Ｓｃｈｌｅｅｆ、Ｒ．Ｒ．）、ヒト細胞質アンチプロテイナーゼは
、キモトリプシンおよびトリプシン−様プロテアーゼを別個の反応部位残基を用
いて迅速かつ効率的に中和する。（Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎ
ｔｉｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｔｒｙｐｓｉ
ｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｄｉｓｔｉｎｃｔ
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ．）、ジャーナル オブ バイ
オロジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻１４５２６−
１４５３２頁、１９９６年。
． ａｎｄ Ｓｃｈｌｅｅｆ、Ｒ．Ｒ．）、ヒト細胞質アンチプロテイナーゼは
、キモトリプシンおよびトリプシン−様プロテアーゼを別個の反応部位残基を用
いて迅速かつ効率的に中和する。（Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎ
ｔｉｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｔｒｙｐｓｉ
ｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｄｉｓｔｉｎｃｔ
ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ．）、ジャーナル オブ バイ
オロジカル ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７１巻１４５２６−
１４５３２頁、１９９６年。
【図１】 前立腺の組織の抽出物のウェスタンブロットである。この図は、腫瘍の組織に
おいて良性の組織に比べてｈＫ２／ＰＩ−６複合体がより高レベルであることを
示す一例である。
おいて良性の組織に比べてｈＫ２／ＰＩ−６複合体がより高レベルであることを
示す一例である。
【図２】 ｈＫ２との複合体の標準試料と前立腺の組織の抽出物のウェスタンブロットで
ある。
ある。
【図３】 前立腺の組織由来の精製ｈＫ２の会合状態のブロットのＮ末端配列である。
【図４】 ゲルから切り出された５０ｋＤａのｈＫ２／ＰＩ−６複合体のバンドを、トリ
プシン消化で精製したペプチドの逆相ＨＰＬＣ溶出プロフィールである。
プシン消化で精製したペプチドの逆相ＨＰＬＣ溶出プロフィールである。
【図５】 本発明のウサギ抗ＰＩ−６ポリクローナル抗体とｈＫ２抗体とで検出された、
試験管内で形成されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体のウェスタンブロットである。
試験管内で形成されたｈＫ２／ＰＩ−６複合体のウェスタンブロットである。
【図６】 本発明のウサギ抗ＰＩ−６ポリクローナル抗体で調べられた前立腺の組織の抽
出物のウェスタンブロットである。
出物のウェスタンブロットである。
【図７】 本発明のウサギ抗ＰＩ−６ポリクローナル抗体および抗ｈＫ２抗体で検出され
た、前立腺の組織の抽出物中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体である。
た、前立腺の組織の抽出物中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/573 33/573 Ａ 33/577 33/577 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｆターム(参考） 4B050 CC02 CC10 DD11 GG06 KK18 LL03 4B063 QA01 QA18 QQ36 QQ79 QQ95 QR48 QS33 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA14 4H045 AA11 BA41 CA41 DA55 DA76 DA89 EA51 FA71 FA72
Claims (47)
- 【請求項１】 ＰＩ−６とｈＫ２とからなる、単離され実質的に精製された
複合体。 - 【請求項２】 前記複合体はＰＩ−６と完全なｈＫ２とからなり、非還元条
件下でのポリアクリルアミドゲル技術により測定された約６４ｋＤａの分子量を
有する、請求項１に記載の複合体。 - 【請求項３】 前記複合体はＰＩ−６とｈＫ２の断片からなり、還元条件下
でのポリアクリルアミドゲル技術により測定された約５０ｋＤａの分子量を有す
る、請求項１に記載の複合体。 - 【請求項４】 前記ｈＫ２の断片は１４５番のアルギニンで切断されたｈＫ
２である、請求項３に記載の複合体。 - 【請求項５】 前立腺の組織から単離された請求項１に記載の複合体。
- 【請求項６】 前立腺腫瘍の試料で亢進したレベルで存在する請求項１に記
載の複合体。 - 【請求項７】 ＰＩ−６とｈＫ２からなる複合体と特異的に免疫反応する抗
体。 - 【請求項８】 前記抗体はポリクローナル抗体である、請求項７に記載の抗
体。 - 【請求項９】 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項７に記載の抗
体。 - 【請求項１０】 試料中のＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体を検出、測定
する方法であって、（ａ）検出されるべきｈＫ２／ＰＩ−６複合体と特異的に結
合するある量の試薬と前記ｈＫ２／ＰＩ−６複合体を含む三重複合体が形成でき
る条件下で、前記試薬を試料と反応させるステップと、（ｂ）前記三重複合体の
存在を検出し、前記三重複合体の量を測定するステップとからなる方法。 - 【請求項１１】 前記試薬は抗体である、請求項１０に記載の方法。
- 【請求項１２】 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項１１に記載
の方法。 - 【請求項１３】 前記試薬は抗体で、該抗体は固相に結合している、請求項
１０に記載の方法。 - 【請求項１４】 前記試薬は抗体で、該抗体は検出可能な標識を含み、また
は検出可能な複合体を形成するために検出可能な標識と結合する、請求項１０に
記載の方法。 - 【請求項１５】 前記試料は哺乳類の組織の試料である、請求項１０に記載
の方法。 - 【請求項１６】 前記試薬は抗体である、請求項１５に記載の方法。
- 【請求項１７】 前記（ｂ）のステップにおける前記複合体は、検出可能な
標識を含み、または検出可能な複合体を形成するために検出可能な標識と結合し
、第２の試薬により検出される、請求項１５に記載の方法。 - 【請求項１８】 前記第２の試薬は抗体である、請求項１７に記載の方法。
- 【請求項１９】 前記哺乳類の組織はヒトの前立腺の組織である、請求項１
５に記載の方法。 - 【請求項２０】 前記ヒトの前立腺の組織は前立腺癌の組織である、請求項
１９に記載の方法。 - 【請求項２１】 前記試料はヒトの生理的な液体の試料である、請求項１０
に記載の方法。 - 【請求項２２】 前記ヒトの生理的な液体は血清、精漿、尿および血液から
なるグループから選択される、請求項２１に記載の方法。 - 【請求項２３】 生物学的な液体の試料中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体を検出
するためのイムノアッセイ法であって、（ａ）ｈＫ２／ＰＩ−６複合体のあるエ
ピトープを認識する第１の抗体と、ｈＫ２／ＰＩ−６複合体の別のエピトープを
認識する第２の抗体とを準備すること、（ｂ）第１の抗体が前記複合体と結合し
、第１の抗体とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを含む第１の複合体が形成できる条件
下で、第１の抗体を前記試料と反応させること、（ｃ）第２の抗体がｈＫ２／Ｐ
Ｉ−６複合体と結合し、第１の抗体と第２の抗体とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを
含む第２の複合体が形成できる条件下で、第２の抗体を第１の複合体と反応させ
ること、（ｄ）前記試料中に含まれるｈＫ２／ＰＩ−６複合体の測定値として、
第２の複合体を検出、測定することを含む、イムノアッセイ法。 - 【請求項２４】 前記第１および第２の抗体はそれぞれｈＫ２／ＰＩ−６複
合体と特異的に免疫反応する抗体である、請求項２３に記載のイムノアッセイ法
。 - 【請求項２５】 前記第１および第２の抗体のうち、一方はｈＫ２に対する
抗体で、他方はＰＩ−６に対する抗体である、請求項２３に記載のイムノアッセ
イ法。 - 【請求項２６】 前記第１および第２の抗体のうち、一方は固相に結合し、
他方は検出可能な標識で標識された、請求項２３に記載のイムノアッセイ法。 - 【請求項２７】 試料中のＰＩ−６とｈＫ２からなる複合体を検出、測定す
るための診断キットであって、検出可能に標識されまたは検出可能な標識に結合
し、前記複合体と特異的に結合する、既知量の試薬を含むキット。 - 【請求項２８】 前記試料はヒトの生理的な液体である、請求項２７に記載
の診断用キット。 - 【請求項２９】 前記試薬は前記複合体と特異的に結合する抗体を含む、請
求項２７に記載の診断用キット。 - 【請求項３０】 前記抗体を結合させることが可能な固相を含む、請求項２
９に記載の診断用キット。 - 【請求項３１】 前記試料は哺乳類の組織の試料である、請求項２７に記載
の診断用キット。 - 【請求項３２】 前記哺乳類の組織の試料はヒトの前立腺の組織の試料であ
る、請求項３１に記載の診断用キット。 - 【請求項３３】 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項２９に記載
の診断用キット。 - 【請求項３４】 試料中のＰＩ−６とｈＫ２からなる複合体を検出、測定す
るための診断用キットであって、前記キットは、検出可能に標識されまたは検出
可能な標識と結合し、前記複合体と特異的に結合する既知量の第１の試薬と、固
相の支持体に結合し、前記複合体と特異的に結合する既知量の第２の試薬とを含
むキット。 - 【請求項３５】 前記第１の試薬は前記複合体と特異的に免疫反応する抗体
を含み、前記第２の試薬は前記複合体と特異的に免疫反応する抗体を含む、請求
項３４に記載のキット。 - 【請求項３６】 前記第１および第２の試薬のうち、一方はｈＫ２と特異的
に免疫反応する抗体を含み、他方はＰＩ−６と特異的に免疫反応する抗体を含む
、請求項３４に記載のキット。 - 【請求項３７】 前立腺癌の有無を決定するための診断方法であって、（ａ
）ＰＩ−６とｈＫ２とからなる複合体と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−
６とｈＫ２とを含む三重複合体が形成できる条件下で、前記ＰＩ−６とｈＫ２と
からなる複合体を含むヒトから得られた試料と前記試薬を反応させること、（ｂ
）前記試料中の前記三重複合体の量を決定し、該三重複合体の量を前記ヒトの前
立腺癌の有無と関連づけることを含む、診断方法。 - 【請求項３８】 前記試料は生理的な液体の試料である、請求項３７に記載
の診断方法。 - 【請求項３９】 前記試薬は抗体を含む、請求項３７に記載の診断方法。
- 【請求項４０】 前記試料は哺乳類の組織の試料である、請求項３７に記載
の診断方法。 - 【請求項４１】 前記哺乳類の組織の試料は前立腺の組織の試料である、請
求項４０に記載の診断方法。 - 【請求項４２】 前立腺癌の有無を決定するための診断方法であって、（ａ
）ＰＩ−６と特異的に結合するある量の試薬とＰＩ−６を含む二重複合体が形成
できるのに十分な条件下で、ＰＩ−６を含むヒトから得られた試料と前記試薬を
反応させること、（ｂ）前記試料中の前記複合体の量を測定し、該複合体の量を
前記ヒトでの前立腺癌の有無と関連づけることを含む、診断方法。 - 【請求項４３】 前記試料は前立腺の組織の試料である、請求項４２に記載
の診断方法。 - 【請求項４４】 前記試薬は抗体を含む、請求項４２に記載の診断方法。
- 【請求項４５】 遊離ｈＫ２と遊離ＰＩ−６とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを
含む組織標本中のｈＫ２／ＰＩ−６複合体を検出し測定するための方法であって
、（ａ）遊離ｈＫ２に特異的な第１の抗体と遊離ＰＩ−６に特異的な第２の抗体
とｈＫ２／ＰＩ−６複合体を認識し結合する第３の抗体とを準備すること、（ｂ
）遊離ｈＫ２と遊離ＰＩ−６の全てがそれぞれ第１および第２の抗体によりブロ
ックされる条件下で、第１および第２の抗体を前記組織標本と反応させること、
（ｃ）前記組織標本に含まれるｈＫ２／ＰＩ−６複合体と第３の抗体が結合して
第３の抗体とｈＫ２／ＰＩ−６複合体とを含む三重複合体が形成できる条件下で
、第３の抗体を前記組織標本と反応させること、（ｄ）前記三重複合体の存在を
検出し前記三重複合体の量を測定することを含む方法。 - 【請求項４６】 前記第３の抗体は、遊離ｈＫ２だけでなくｈＫ２／ＰＩ−
６複合体をも認識し結合するｈＫ２に対する抗体である、請求項４５に記載の方
法。 - 【請求項４７】 前記第３の抗体は、遊離ＰＩ−６だけでなくｈＫ２／ＰＩ
−６複合体をも認識、結合するＰＩ−６に対する抗体である、請求項４５に記載
の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/266,957 | 1999-03-12 | ||
| US09/266,957 US6284873B1 (en) | 1999-03-12 | 1999-03-12 | Complex of human kallikrein 2 (hK2) and protease inhibitor-6 (PI-6) in prostate tumor tissue and methods of using the complex |
| PCT/US2000/001937 WO2000055308A1 (en) | 1999-03-12 | 2000-01-26 | A NOVEL COMPLEX OF HUMAN KALLIKREIN 2 (hK2) AND PROTEASE INHIBITOR-6 (PI-6) IN PROSTATE TUMOR TISSUE AND METHODS OF USING THE COMPLEX |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002538818A true JP2002538818A (ja) | 2002-11-19 |
| JP2002538818A5 JP2002538818A5 (ja) | 2007-03-08 |
Family
ID=23016693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000605726A Pending JP2002538818A (ja) | 1999-03-12 | 2000-01-26 | 前立腺腫瘍組織におけるヒトカリクレイン２とプロテアーゼインヒビター−６の新規な複合体および該複合体の利用方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6284873B1 (ja) |
| EP (1) | EP1159411A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002538818A (ja) |
| AU (1) | AU778038B2 (ja) |
| CA (1) | CA2365540A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000055308A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009509169A (ja) * | 2005-09-19 | 2009-03-05 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | 前立腺癌のためのバイオマーカー |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2431548T3 (es) | 2003-04-04 | 2013-11-26 | Université de Lausanne | Proteínas inhibidoras de una proteasa y su uso |
| WO2004092395A2 (en) * | 2003-04-08 | 2004-10-28 | Baylor College Of Medicine | Modulators of telomere stability |
| EP1620138B1 (en) * | 2003-04-28 | 2008-08-06 | Johnson & Johnson Medical Ltd. | Pain-sensitive therapeutic wound dressings |
| GB2408207A (en) | 2003-11-24 | 2005-05-25 | Johnson & Johnson Medical Ltd | Wound dressing for the controlled release of therapeutic agents comprising also an inhibitor of a protease enzyme & a linker group cleavable by such an enzyme |
| US9347946B2 (en) * | 2010-09-23 | 2016-05-24 | Biocept, Inc. | Methods and reagents for signal amplification |
| JP7355140B2 (ja) | 2022-02-28 | 2023-10-03 | 住友ベークライト株式会社 | セリンプロテアーゼの検出用または測定用試薬 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4731326A (en) * | 1984-06-04 | 1988-03-15 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Disease diagnosis by detection of shed normal tissue antigens |
| US5730968A (en) * | 1994-03-31 | 1998-03-24 | Sterling Winthrop Inc. | Segmented chelating polymers as imaging and therapeutic agents |
-
1999
- 1999-03-12 US US09/266,957 patent/US6284873B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-26 EP EP00905737A patent/EP1159411A1/en not_active Withdrawn
- 2000-01-26 CA CA002365540A patent/CA2365540A1/en not_active Abandoned
- 2000-01-26 AU AU27376/00A patent/AU778038B2/en not_active Ceased
- 2000-01-26 WO PCT/US2000/001937 patent/WO2000055308A1/en not_active Application Discontinuation
- 2000-01-26 JP JP2000605726A patent/JP2002538818A/ja active Pending
- 2000-09-22 US US09/667,288 patent/US6472143B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-06-15 US US09/882,648 patent/US20010031860A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009509169A (ja) * | 2005-09-19 | 2009-03-05 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | 前立腺癌のためのバイオマーカー |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1159411A1 (en) | 2001-12-05 |
| US6472143B1 (en) | 2002-10-29 |
| US20010031860A1 (en) | 2001-10-18 |
| US6284873B1 (en) | 2001-09-04 |
| CA2365540A1 (en) | 2000-09-21 |
| WO2000055308A1 (en) | 2000-09-21 |
| AU2737600A (en) | 2000-10-04 |
| AU778038B2 (en) | 2004-11-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rittenhouse et al. | Human kallikrein 2 (hK2) and prostate-specific antigen (PSA): two closely related, but distinct, kallikreins in the prostate | |
| Lilja et al. | Prostate specific antigen predominantly forms a complex with alpha1‐antichymotrypsin in blood. Implications for procedures to measure prostate specific antigen in serum | |
| US7863009B2 (en) | Mutants of the factor VII-activating protease and detection methods using specific antibodies | |
| JP2001520515A (ja) | 再発性前立腺癌の検出のための方法 | |
| AU719502B2 (en) | Stable variant HK2 polypeptide | |
| US6482599B1 (en) | Forms of prostate specific antigen (PSA) specific for benign prostatic hyperplasia (BPH) and methods of using such | |
| Becker et al. | Individual prostate-specific antigen (PSA) forms as prostate tumor markers | |
| Wu et al. | Separation of enzymatically active and inactive prostate‐specific antigen (PSA) by peptide affinity chromatography | |
| Chen et al. | Addition of purified prostate specific antigen to serum from female subjects: studies on the relative inhibition by alpha 2-macroglobulin and alpha 1-antichymotrypsin | |
| CA2286090C (en) | Forms of prostate specific antigen and methods for their detection | |
| AU712917B2 (en) | Human glandular kallikrein-1 (hK2) | |
| JP2002538818A (ja) | 前立腺腫瘍組織におけるヒトカリクレイン２とプロテアーゼインヒビター−６の新規な複合体および該複合体の利用方法 | |
| US20020045198A1 (en) | Forms of prostate specific antigens and methods for their detection | |
| US7288636B2 (en) | Forms of prostate specific antigens and methods for their detection | |
| US6140468A (en) | Recombinant human prostate specific antigen | |
| JP2001503991A (ja) | 転移性前立腺癌の検出方法 | |
| US20030166036A1 (en) | Protease and an aminopeptidase associated with development of benign prostatic hyperplasia (BPH) | |
| MXPA99004504A (en) | Method for detection of metastatic prostate cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070116 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070116 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091013 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100309 |