JP3507079B2 - 前立腺特異的抗原（ｐｓａ）及びヒトの腺のカリクレイン（ｈｇｋ−１）濃度を包含する比率を測定することによる前立腺がん（ｃａｐ）の早期検出 - Google Patents
前立腺特異的抗原（ｐｓａ）及びヒトの腺のカリクレイン（ｈｇｋ−１）濃度を包含する比率を測定することによる前立腺がん（ｃａｐ）の早期検出Info
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、前立腺特異的抗原（PSA）及びヒトの腺の
カリクレイン（hGK−１）を用いることによる前立腺が
ん（CAP）の早期検出のためのバイオアフィニティ検出
方法に関する。
カリクレイン（hGK−１）を用いることによる前立腺が
ん（CAP）の早期検出のためのバイオアフィニティ検出
方法に関する。
発明の序論及び背景
本発明の背景を解明するために本明細書において用い
られた刊行物及び他の資料及び特に実施に関する追加の
細部を提供する事例は参照により組み込まれる。
られた刊行物及び他の資料及び特に実施に関する追加の
細部を提供する事例は参照により組み込まれる。
前立腺特異的抗原（PSA）は、前立腺の上皮細胞によ
り分泌される豊富な33kDa糖タンパク質である（Brawer
「Acta Oncol」30:p.161〜8,1991年）。PSAの血清中の
濃度は通常非常に低いが、前立腺がん（CAP）患者にお
いては、しばしば正常（すなわち、４μg/）より増加
することが公知である。したがって、血清PSAを測定す
る免疫検出方法は、病気の進行及び前立腺除去後のCAP
の再発を監視するために定期的に用いられている（Braw
er他「Vrology」５（補）:p.11〜6,1989年,Oesterling
「J Urol」145:p.907〜23,1991年）。しかしながら、が
ん検出のためのPSA検出方法の特異性は、正常より高い
レベルが良性前立腺過形成（BPH）のすべての患者の30
〜50％にも見い出されるという事実により限定される
（Stamey他，「New Eng J Med」317:p.909〜16,1987年,
Hudson他「J Urol」142:p.1011〜7,1989年）。４〜20μ
g/の間のPSAの血清濃度はBPH患者及び限られた、もし
かすると治癒できるCAPの臓器を可能性を与える患者に
おいて特に普通である。これは前立腺がんの早期診断に
おけるPSA検出方法の有用性を減じる。
り分泌される豊富な33kDa糖タンパク質である（Brawer
「Acta Oncol」30:p.161〜8,1991年）。PSAの血清中の
濃度は通常非常に低いが、前立腺がん（CAP）患者にお
いては、しばしば正常（すなわち、４μg/）より増加
することが公知である。したがって、血清PSAを測定す
る免疫検出方法は、病気の進行及び前立腺除去後のCAP
の再発を監視するために定期的に用いられている（Braw
er他「Vrology」５（補）:p.11〜6,1989年,Oesterling
「J Urol」145:p.907〜23,1991年）。しかしながら、が
ん検出のためのPSA検出方法の特異性は、正常より高い
レベルが良性前立腺過形成（BPH）のすべての患者の30
〜50％にも見い出されるという事実により限定される
（Stamey他，「New Eng J Med」317:p.909〜16,1987年,
Hudson他「J Urol」142:p.1011〜7,1989年）。４〜20μ
g/の間のPSAの血清濃度はBPH患者及び限られた、もし
かすると治癒できるCAPの臓器を可能性を与える患者に
おいて特に普通である。これは前立腺がんの早期診断に
おけるPSA検出方法の有用性を減じる。
PSAは腺のカリクレインファミリーのセリンプロテア
ーゼであって、血清中で主としてセリンプロテアーゼ阻
害α−１−アンチキモトリプシン（ACT）と複合体とし
て現われる（Lilja他「Clin Chem」37:p.1618〜25,1991
年）。大過剰のACTにもかかわらず、少量のPSAは遊離の
非複合体形で血清中において循環する（Lilja他,1991
年）。ほとんどの市販のPSA検出方法は、総PSA分画（PS
A−Ｔ）を構成する遊離PSA及びPSA−ACT複合体の両方を
検出する。しかしながら、すべての検出方法は等しい有
効性を有するその２つの形を検出しない（Stamey他「J
Urol」152:p.1〜5,1994年）。PSA−ACT複合体形の割合
は、CAP患者の血清においてBPHのそれに比較して高いと
いうことが立証されたので、これはCAPを検出する能力
に影響を与えるかもしれない（Stenman他「Cancer Re
s」51:p.222〜6,1991年,Christensson他「J Urol」150:
p.100〜5,1993年）。これはBPHにおいてより、CAPにお
ける遊離：総PSA比が低いという発見と矛盾しない（Chr
istensson他,1993年）。報告データは、異なるPSA形の
特異的測定がCAPの早期診断を改良することも示してい
る。
ーゼであって、血清中で主としてセリンプロテアーゼ阻
害α−１−アンチキモトリプシン（ACT）と複合体とし
て現われる（Lilja他「Clin Chem」37:p.1618〜25,1991
年）。大過剰のACTにもかかわらず、少量のPSAは遊離の
非複合体形で血清中において循環する（Lilja他,1991
年）。ほとんどの市販のPSA検出方法は、総PSA分画（PS
A−Ｔ）を構成する遊離PSA及びPSA−ACT複合体の両方を
検出する。しかしながら、すべての検出方法は等しい有
効性を有するその２つの形を検出しない（Stamey他「J
Urol」152:p.1〜5,1994年）。PSA−ACT複合体形の割合
は、CAP患者の血清においてBPHのそれに比較して高いと
いうことが立証されたので、これはCAPを検出する能力
に影響を与えるかもしれない（Stenman他「Cancer Re
s」51:p.222〜6,1991年,Christensson他「J Urol」150:
p.100〜5,1993年）。これはBPHにおいてより、CAPにお
ける遊離：総PSA比が低いという発見と矛盾しない（Chr
istensson他,1993年）。報告データは、異なるPSA形の
特異的測定がCAPの早期診断を改良することも示してい
る。
大量のPSAがヒト前立腺の腺の上皮により産生され、
精液の中に分泌される。低濃度のPSAは通常一般的な循
環において見い出される。PSAの血清濃度は前立腺の種
々の病気の状態、特にCAPにおいて増加する。免疫検出
方法によるPSA測定は、主に腫瘍容積との高い相関性の
ため、CAPの監視において卓越したマーカーである。米
国がん学会は、最近、CAPの早期検出を改良するために
デジタル直腸検査と兼備したPSAの測定を、50才を超え
た男性に適用すべきであると勧めた（Kramer他「Ann In
tern Med」119:p.914〜23,1993年）。しかしながら、血
清中のPSA測定の診断可能性は、PSAレベルがBPHの多く
の患者においても上昇するという事実により限定され
る。血清PSA測定の診断特異性を高めるためにいくらか
の改良が示唆された。
精液の中に分泌される。低濃度のPSAは通常一般的な循
環において見い出される。PSAの血清濃度は前立腺の種
々の病気の状態、特にCAPにおいて増加する。免疫検出
方法によるPSA測定は、主に腫瘍容積との高い相関性の
ため、CAPの監視において卓越したマーカーである。米
国がん学会は、最近、CAPの早期検出を改良するために
デジタル直腸検査と兼備したPSAの測定を、50才を超え
た男性に適用すべきであると勧めた（Kramer他「Ann In
tern Med」119:p.914〜23,1993年）。しかしながら、血
清中のPSA測定の診断可能性は、PSAレベルがBPHの多く
の患者においても上昇するという事実により限定され
る。血清PSA測定の診断特異性を高めるためにいくらか
の改良が示唆された。
PSA mRNAの配列の５′末端を測定するように設計され
た実験は、前立腺は他の高度に同様な遺伝子（hGK−Ｉ
と同定された）を発現することを明らかにした（Chapde
laine他「FEBS Lett」236:p.205〜8,1988年）。PSA及び
hGK−１の両方がすべての組織カリクレインにより共有
される遺伝子構造を有する。それらの配列の85％は類似
であって、それらのイントロンは79〜86％類似で、それ
らのプロモーター領域は91％類似である（Lundwall「Bi
ochem Biophys Res Commun」161:p.1151〜9,1989年,Rei
gman他「Biochem Biophys Commun」159:p.95〜102,1989
年Schiedlich他「Clin Exp Pharmacol Physiol」15:p.3
39〜44,1988年）。PSAと予想されたhGK−１タンパク質
との間の類似性はまさに断言され、PSA及びKLKI（カリ
クレイン１）とhGK−１及びKLKIのいずれかの間の類似
性よりも高い。hGK−１の前立腺の発現は分泌上皮細胞
に限定されていることが立証され、hGK−１及びPSA mRN
Aのそれぞれの前立腺レベルにより示されたPSAのものよ
りも10〜50％低いかもしれない（Young他「Biochemist
y」31:p.818〜24,1992年）。現在まで、前立腺はhGK−
１遺伝子発現の唯一の同定された場所である。したがっ
て、hGK−１遺伝子がPSA遺伝子と同じ前立腺上皮細胞に
発現されているけれども、予想されたhGK−１タンパク
質はイン−ビボと特徴づけられたままである。しかしな
がら、hGK−１のコード配列は、成熟糖タンパク質の237
残基を生ずるであろう261アミノ酸プレタンパク質を予
測する。
た実験は、前立腺は他の高度に同様な遺伝子（hGK−Ｉ
と同定された）を発現することを明らかにした（Chapde
laine他「FEBS Lett」236:p.205〜8,1988年）。PSA及び
hGK−１の両方がすべての組織カリクレインにより共有
される遺伝子構造を有する。それらの配列の85％は類似
であって、それらのイントロンは79〜86％類似で、それ
らのプロモーター領域は91％類似である（Lundwall「Bi
ochem Biophys Res Commun」161:p.1151〜9,1989年,Rei
gman他「Biochem Biophys Commun」159:p.95〜102,1989
年Schiedlich他「Clin Exp Pharmacol Physiol」15:p.3
39〜44,1988年）。PSAと予想されたhGK−１タンパク質
との間の類似性はまさに断言され、PSA及びKLKI（カリ
クレイン１）とhGK−１及びKLKIのいずれかの間の類似
性よりも高い。hGK−１の前立腺の発現は分泌上皮細胞
に限定されていることが立証され、hGK−１及びPSA mRN
Aのそれぞれの前立腺レベルにより示されたPSAのものよ
りも10〜50％低いかもしれない（Young他「Biochemist
y」31:p.818〜24,1992年）。現在まで、前立腺はhGK−
１遺伝子発現の唯一の同定された場所である。したがっ
て、hGK−１遺伝子がPSA遺伝子と同じ前立腺上皮細胞に
発現されているけれども、予想されたhGK−１タンパク
質はイン−ビボと特徴づけられたままである。しかしな
がら、hGK−１のコード配列は、成熟糖タンパク質の237
残基を生ずるであろう261アミノ酸プレタンパク質を予
測する。
PSAは33kDaの糖タンパク質であって、その成熟タンパ
ク質は237アミノ酸から成る（Lundwall及びLilja「FEBA
Lett」214:p.317〜22,1987年,Riegman他「Biochem Bio
phys Res Commun」155:p.181〜8,1988年,Henttu他「Bio
chem Biophys Res Commun」160:p.903〜10,1989年）。
成熟PSAのアミノ酸配列も精製タンパク質の分析により
確認された（Schaller他「Eur J Biochem」170:p.111〜
20,1987年,Watt他「Proc Natl Acad Sci USA」83:p.316
6〜70,1986年）。hGK−１アミノ酸配列は１つのアスパ
ラギン連結糖タンパク質部位を、しかしながら、PSAと
比較した時に異なった位置に予想する。hGK−１タンパ
ク質は、なお、単離及び特徴づけられるべきままであ
る。
ク質は237アミノ酸から成る（Lundwall及びLilja「FEBA
Lett」214:p.317〜22,1987年,Riegman他「Biochem Bio
phys Res Commun」155:p.181〜8,1988年,Henttu他「Bio
chem Biophys Res Commun」160:p.903〜10,1989年）。
成熟PSAのアミノ酸配列も精製タンパク質の分析により
確認された（Schaller他「Eur J Biochem」170:p.111〜
20,1987年,Watt他「Proc Natl Acad Sci USA」83:p.316
6〜70,1986年）。hGK−１アミノ酸配列は１つのアスパ
ラギン連結糖タンパク質部位を、しかしながら、PSAと
比較した時に異なった位置に予想する。hGK−１タンパ
ク質は、なお、単離及び特徴づけられるべきままであ
る。
PSA及び推定のhGK−１タンパク質の特定の構造的特徴
を図１に示す（Henttu他「Ann Med」26:p.165〜71,1994
年）。PSA及びhGK−１の三次元構造は、両タンパク質が
カリクレインの折りたたみに含まれる10個のシステイン
残基を保持しているので、非常に類似しているようであ
る。PSA及びhGK−１ポリペプチド鎖には、15個の連続的
なアミノ酸が等しい６つの領域がある。したがって、PS
A及びhGK−１は両タンパク質中に暴露された、抗原エピ
トープを共有していることは、これらの領域もこのタン
パク質中に親水性領域を広げるので、非常にありそうな
ことである（Henttu他,1989年）。
を図１に示す（Henttu他「Ann Med」26:p.165〜71,1994
年）。PSA及びhGK−１の三次元構造は、両タンパク質が
カリクレインの折りたたみに含まれる10個のシステイン
残基を保持しているので、非常に類似しているようであ
る。PSA及びhGK−１ポリペプチド鎖には、15個の連続的
なアミノ酸が等しい６つの領域がある。したがって、PS
A及びhGK−１は両タンパク質中に暴露された、抗原エピ
トープを共有していることは、これらの領域もこのタン
パク質中に親水性領域を広げるので、非常にありそうな
ことである（Henttu他,1989年）。
本発明においては、我々はインビトロで組換えhGK−
１及びPSAを産生した。前記発現されたタンパク質の構
造が確認された。両タンパク質についてのエピトープ地
図を、PSAに対して前もって生じさせ、特徴づけたモノ
クローナル抗体の広い選択を用いて構築した。モノクロ
ーナル抗体は、PSAのみを認識するモノクローナル抗体
に加えて、PSA及びhGK−１の両方に共通な抗原エピトー
プを共有することを確認した。確認されたモノクローナ
ル抗体を、総PSA＋hGK−１及び総PSAのみを測定する検
出方法を設計するのに用いた。CAP及びBHP患者からの血
清試料を遊離PSA、総PSA、総PSA＋hGK−１及びPSA−ACT
の濃度を測定するのに用いた。その結果の臨床的確認を
行なった。さらに、血清試料中のhGK−１のみの濃度を
測定するための別の検出方法を設計した。これはPSA及
びhGK−１の両方を検出する検出方法により検出されるP
SAを防ぐために、PSA特異的モノクローナル抗体を有す
る血清を前もってインキュベートすることにより達成さ
れる。タンパク分解活性PSAは、インビトロでα−１−
アンチキモトリプシン（ACT）、α−２−マクログロブ
リン、プロテインＣ−阻害剤及び妊娠性血漿タンパク質
とゆっくりと安定な複合体を形成する。1991年（Lilja
他,1991年）には、ACTと複合体を形成するPSAは血漿中
のPSAの主要な形であることが明らかになった。遊離の
非−複合体形成PSAに特異的な免疫測定検出方法をこの
形で生じる平均15〜20％の総PSA濃度を評価するのに用
いた。この研究で報告された、PSA−Ｔ（すなわち、総P
SA）、PSA−ACT（すなわち、ACTと複合を形成したPSA）
及びPSA−Ｆ（すなわち、遊離PSA）の２部位の免疫測定
検出方法は、後で、PSA−F/PSA−Ｔの比率（BPHよりもC
APで小さい）またはPSA−ACT/PSA−Ｔの比率（BPHより
もCAPで大きい）が２つの群の患者の間の識別を改良す
ることを証明する（Christensson他,1993年,Lilja他国
際特許出願公開92/01936号公報）のに用いられた。別々
の発見は、当初のPSA−F/PSA−Ｔの比率の測定により得
られたCAP及びBPHの間の増加した識別性の所見を後で確
認した。本発明により、異なった形のPSAに加えてhGK−
１の測定が可能になった時、CAP及びBPH患者からの血清
試料を、これらの２つの患者の群の識別において、hGK
−１または異なった形のPSAといっしょのhGK−１の有用
性について分析した。
１及びPSAを産生した。前記発現されたタンパク質の構
造が確認された。両タンパク質についてのエピトープ地
図を、PSAに対して前もって生じさせ、特徴づけたモノ
クローナル抗体の広い選択を用いて構築した。モノクロ
ーナル抗体は、PSAのみを認識するモノクローナル抗体
に加えて、PSA及びhGK−１の両方に共通な抗原エピトー
プを共有することを確認した。確認されたモノクローナ
ル抗体を、総PSA＋hGK−１及び総PSAのみを測定する検
出方法を設計するのに用いた。CAP及びBHP患者からの血
清試料を遊離PSA、総PSA、総PSA＋hGK−１及びPSA−ACT
の濃度を測定するのに用いた。その結果の臨床的確認を
行なった。さらに、血清試料中のhGK−１のみの濃度を
測定するための別の検出方法を設計した。これはPSA及
びhGK−１の両方を検出する検出方法により検出されるP
SAを防ぐために、PSA特異的モノクローナル抗体を有す
る血清を前もってインキュベートすることにより達成さ
れる。タンパク分解活性PSAは、インビトロでα−１−
アンチキモトリプシン（ACT）、α−２−マクログロブ
リン、プロテインＣ−阻害剤及び妊娠性血漿タンパク質
とゆっくりと安定な複合体を形成する。1991年（Lilja
他,1991年）には、ACTと複合体を形成するPSAは血漿中
のPSAの主要な形であることが明らかになった。遊離の
非−複合体形成PSAに特異的な免疫測定検出方法をこの
形で生じる平均15〜20％の総PSA濃度を評価するのに用
いた。この研究で報告された、PSA−Ｔ（すなわち、総P
SA）、PSA−ACT（すなわち、ACTと複合を形成したPSA）
及びPSA−Ｆ（すなわち、遊離PSA）の２部位の免疫測定
検出方法は、後で、PSA−F/PSA−Ｔの比率（BPHよりもC
APで小さい）またはPSA−ACT/PSA−Ｔの比率（BPHより
もCAPで大きい）が２つの群の患者の間の識別を改良す
ることを証明する（Christensson他,1993年,Lilja他国
際特許出願公開92/01936号公報）のに用いられた。別々
の発見は、当初のPSA−F/PSA−Ｔの比率の測定により得
られたCAP及びBPHの間の増加した識別性の所見を後で確
認した。本発明により、異なった形のPSAに加えてhGK−
１の測定が可能になった時、CAP及びBPH患者からの血清
試料を、これらの２つの患者の群の識別において、hGK
−１または異なった形のPSAといっしょのhGK−１の有用
性について分析した。
発明の概要
本発明により、始めて、ヒト血清における、hGK−１
タンパク質の発生及び濃度が測定された。選択されたモ
ノクローナル抗体の特異性のため、hGK−１＋PSA−Ｔの
両方の濃度またはPSA−Ｔのみの濃度のいずれかを測定
するのに２部位免疫測定検出方法を用いた。他の２部位
免疫測定検出方法をPSA−Ｆの濃度を測定するのに用い
た。４番目の２部位免疫測定検出方法をPSA−ACT（α−
１−アンチキモトリプシンと複合体を形成したPSA）の
濃度を測定するのに用いた。PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−
１）またはPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の比率の測
定による本発明により、CAPの早期検出と効率的なCAPと
BPHの間の識別が得られた。バイオアフィニティ検出方
法は、抗体の使用に基づく免疫検出方法として実施する
ことができる。代替的にバイオアフィニティ検出方法
は、一般的に構築された当該抗体に対して特異的なバイ
オアフィニティ成分（すなわち、抗体断片）を用いるこ
とにより実施できる（Marks他「J Biol Chem」267:p.16
007〜10,1992年,Wenter他「Annu Rev Immunol」12:p.43
3〜55,1994年,Owens及びYoung「J Immunol Methods」16
8:p.149〜165,1994年）。
タンパク質の発生及び濃度が測定された。選択されたモ
ノクローナル抗体の特異性のため、hGK−１＋PSA−Ｔの
両方の濃度またはPSA−Ｔのみの濃度のいずれかを測定
するのに２部位免疫測定検出方法を用いた。他の２部位
免疫測定検出方法をPSA−Ｆの濃度を測定するのに用い
た。４番目の２部位免疫測定検出方法をPSA−ACT（α−
１−アンチキモトリプシンと複合体を形成したPSA）の
濃度を測定するのに用いた。PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−
１）またはPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の比率の測
定による本発明により、CAPの早期検出と効率的なCAPと
BPHの間の識別が得られた。バイオアフィニティ検出方
法は、抗体の使用に基づく免疫検出方法として実施する
ことができる。代替的にバイオアフィニティ検出方法
は、一般的に構築された当該抗体に対して特異的なバイ
オアフィニティ成分（すなわち、抗体断片）を用いるこ
とにより実施できる（Marks他「J Biol Chem」267:p.16
007〜10,1992年,Wenter他「Annu Rev Immunol」12:p.43
3〜55,1994年,Owens及びYoung「J Immunol Methods」16
8:p.149〜165,1994年）。
PSA−Ｔ＋hGK−１の合計は、PSA及びhGK−１の両方に
共通のエピトープを認識する抗体または抗体断片を用い
ることにより同時に測定することができる。代替的に、
PSA−Ｔ及びhGK−１の量を、前記合計を算出した後で別
々に測定する。CAP及びBPHの間の識別についての新しい
比率〔すなわち、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）またはP
SA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）〕の臨床的な有用性は、
PSA−F/PSA−ＴまたはPSA−ACT/PSA−Ｔのそれぞれの比
率の測定における有用性と比較した時、同様であるかま
たはことによると増加する。したがって、本発明によっ
て測定する時、比率PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）も、B
PHでよりもCAPで小さいと同時に比率PSA−ACT/PSA−Ｔ
＋hGK−１）はBPHでよりもCAPで大きい。
共通のエピトープを認識する抗体または抗体断片を用い
ることにより同時に測定することができる。代替的に、
PSA−Ｔ及びhGK−１の量を、前記合計を算出した後で別
々に測定する。CAP及びBPHの間の識別についての新しい
比率〔すなわち、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）またはP
SA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）〕の臨床的な有用性は、
PSA−F/PSA−ＴまたはPSA−ACT/PSA−Ｔのそれぞれの比
率の測定における有用性と比較した時、同様であるかま
たはことによると増加する。したがって、本発明によっ
て測定する時、比率PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）も、B
PHでよりもCAPで小さいと同時に比率PSA−ACT/PSA−Ｔ
＋hGK−１）はBPHでよりもCAPで大きい。
図面の簡単な説明
図１はPSA及びhGK−１酵素の特定の構造特性を示す。
成熟PSAとhGK−１ポリペプチド鎖の間で異なるアミノ酸
をhGK−１図中に黒丸で示した。５つのジスルフィド結
合の位置（円の内の文字Ｃで示す）と活性部位残基（円
の内の文字）は、セリンプロテアーゼの典型的な構造に
基づく。PSAの基質特異性（すなわち、セリン183）及び
hGK−１の基質特異性（すなわち、アスパラギン183）を
測定するのに包含されると考えられる活性部位残基を四
角の内の文字で示す。グリコシル化部位（すなわち、PS
A中のアスパラギン45及びhGK−１中のアスパラギン78）
を分枝構造で示す。図はビルハルツ（Bilhartz）他
（「Urology」38:p.95〜102,1991年）のものを修飾する
ものであって、ポリペプチド鎖の三次元折りたたみを図
解する意図はなかった。
成熟PSAとhGK−１ポリペプチド鎖の間で異なるアミノ酸
をhGK−１図中に黒丸で示した。５つのジスルフィド結
合の位置（円の内の文字Ｃで示す）と活性部位残基（円
の内の文字）は、セリンプロテアーゼの典型的な構造に
基づく。PSAの基質特異性（すなわち、セリン183）及び
hGK−１の基質特異性（すなわち、アスパラギン183）を
測定するのに包含されると考えられる活性部位残基を四
角の内の文字で示す。グリコシル化部位（すなわち、PS
A中のアスパラギン45及びhGK−１中のアスパラギン78）
を分枝構造で示す。図はビルハルツ（Bilhartz）他
（「Urology」38:p.95〜102,1991年）のものを修飾する
ものであって、ポリペプチド鎖の三次元折りたたみを図
解する意図はなかった。
図２は、0.1μg/mlのB1＋B6モノクローナル抗体を用
いるタンパク質のECLウエスタンブロット検出を図解す
る。図は当初の実験データにしたがって描かれている。
いるタンパク質のECLウエスタンブロット検出を図解す
る。図は当初の実験データにしたがって描かれている。
レーン1:精液血漿からの精製PSA
レーン2:組換えPSA
レーン3:組換えhGK−１
図３は、PSA,PSA−ACT及びhGK−１についてのエピト
ープ地図を示す。重なり合っている円はサンドイッチを
形成しないことを表わす。接触している円はサンドイッ
チ形成の阻害を表わす。分離した円は独立したエピトー
プを表わす。
ープ地図を示す。重なり合っている円はサンドイッチを
形成しないことを表わす。接触している円はサンドイッ
チ形成の阻害を表わす。分離した円は独立したエピトー
プを表わす。
図4A〜4CはhGK−１及びその複合体の特異的検出のた
めのバイオアフィニティー検出方法（免疫検出方法）の
設計を図解する。
めのバイオアフィニティー検出方法（免疫検出方法）の
設計を図解する。
図4Aは阻止反応を示す。PSA,hGK−１及びそれらの複
合体を含有する試料をPSAのみを特異的に認識する過剰
のMab A5と反応させる。これは、連続する免疫反応にお
けるPSAの関与をまさに阻止するのに役立つ。この阻止
段階はストレプトアビジンを被覆したウェル中で行なわ
れる。
合体を含有する試料をPSAのみを特異的に認識する過剰
のMab A5と反応させる。これは、連続する免疫反応にお
けるPSAの関与をまさに阻止するのに役立つ。この阻止
段階はストレプトアビジンを被覆したウェル中で行なわ
れる。
図4BはhGK−１の特異的捕獲を示す。ビオチニル化Mab
B6〔PSA及びhGK−１（及びそれらの複合体）を等しく
よく認識する〕を、hGK−１をストレプトアビジン表面
に捕獲するために加える。Mab B6とPSAの間の反応はMab
A5の存在により阻止されている。インキュベーション
の完了後、ウェルを洗浄する。これはPSAとその複合体
を完全に除去する。
B6〔PSA及びhGK−１（及びそれらの複合体）を等しく
よく認識する〕を、hGK−１をストレプトアビジン表面
に捕獲するために加える。Mab B6とPSAの間の反応はMab
A5の存在により阻止されている。インキュベーション
の完了後、ウェルを洗浄する。これはPSAとその複合体
を完全に除去する。
図4CはhGK−１の検出を示す。過剰の標識化抗体Mab B
1（PSA及びhGK−１の両方並びにそれらの複合体を認識
する）を加えて、Mab B6を介して、ストレプトアビジン
表面に結合しているhGK−１を検出する。
1（PSA及びhGK−１の両方並びにそれらの複合体を認識
する）を加えて、Mab B6を介して、ストレプトアビジン
表面に結合しているhGK−１を検出する。
図５は、４つの異なった検出方法について得られた比
率の組み合せ、PSA−F/（hGK−１＋PSA−Ｔ）,PSA−F/P
SA−T,PSA−C/（hGK−１＋PSA−Ｔ）及びPSA−C/PSA−
Ｔを用いて、CAP患者からCAPでない男性患者（BPH＋正
常）を区別するための受信機運用特性を示す。曲線（AV
C）の下の面積を算定し、比較する。試料の数:BPH＋正
常＝57,CAP＝32。PSA−Ｔカットオフ １〜20μg/。
率の組み合せ、PSA−F/（hGK−１＋PSA−Ｔ）,PSA−F/P
SA−T,PSA−C/（hGK−１＋PSA−Ｔ）及びPSA−C/PSA−
Ｔを用いて、CAP患者からCAPでない男性患者（BPH＋正
常）を区別するための受信機運用特性を示す。曲線（AV
C）の下の面積を算定し、比較する。試料の数:BPH＋正
常＝57,CAP＝32。PSA−Ｔカットオフ １〜20μg/。
発明の詳細な説明
1.組換えタンパク質の産生
材 料
PSAをコードするDNAはpGEM（Lundwall及びLilja,1987
年）中のPSA cDNAクローンに由来した。hGK−1 cDNAを
ヤング他（1992年）に記載のようにクローン化し、プラ
スミドベクターpuc19に結合した。ベクターである、pSF
V1,pSFV3,pSFV3−lacZ及びpSFV−Helper2は、P.リルジ
ストローム（Liljestrｍ及びGaroff「Biotechnolog
y」9:p.1356〜61,1991年）からの贈り物であった。PCR
プライマーである５′−PSAV3:5′−TAT GGA TCC CAT G
TG GGT CCC GGT TGT C−３′,3′−PSA:3′−TAT GGA T
CC TTA GGG GTT GGC CAC GAT GGT G−５′,5′−hGK−1
V3:5′−TAT GGA TCC CAT GTG GGA CCT GGT TCT C−
３′,3′−hGK−1:3′−TAT GGA TTC TTA GGG GTT GGC
TGC GAT GGT−５′並びに配列化プライマーであるSP1及
びSP2（Liljestrｍ及びGaroff,1991）,5′−PSAM:5′
−AGC CTC CTG AAG AAT CG−３′,3′−PSAM:3′−TGA
CCT TCA CAG CAT CCG−５′,5′−hGK1M:5′−CCT TAG
ACC AGA TGA AG−３′及び３′−hGK1M:3′−GAC CTT C
AC AAC ATC TG−５′をアプライド・バイオシステムズ
のオリゴヌクレオチド合成機で合成した。分子生物学試
薬及び酵素は、アプリジーン（Appligene）、ベーリン
ガー・マンハイム（Boehringer Mannheim）、ファルマ
シア・バイオテク（Pharmacia Biotech）またはプロメ
ガ（Promega）から得た。配列決定はPRISMシクエナーゼ
ターミネーター（Applied Biosystems,フォスターシ
ティー，カリフォルニア州）を用いて行った。ウエスタ
ンブロット試薬はアマ−シャム（Amersham）（Buckingh
amshire,英国）からであった。
年）中のPSA cDNAクローンに由来した。hGK−1 cDNAを
ヤング他（1992年）に記載のようにクローン化し、プラ
スミドベクターpuc19に結合した。ベクターである、pSF
V1,pSFV3,pSFV3−lacZ及びpSFV−Helper2は、P.リルジ
ストローム（Liljestrｍ及びGaroff「Biotechnolog
y」9:p.1356〜61,1991年）からの贈り物であった。PCR
プライマーである５′−PSAV3:5′−TAT GGA TCC CAT G
TG GGT CCC GGT TGT C−３′,3′−PSA:3′−TAT GGA T
CC TTA GGG GTT GGC CAC GAT GGT G−５′,5′−hGK−1
V3:5′−TAT GGA TCC CAT GTG GGA CCT GGT TCT C−
３′,3′−hGK−1:3′−TAT GGA TTC TTA GGG GTT GGC
TGC GAT GGT−５′並びに配列化プライマーであるSP1及
びSP2（Liljestrｍ及びGaroff,1991）,5′−PSAM:5′
−AGC CTC CTG AAG AAT CG−３′,3′−PSAM:3′−TGA
CCT TCA CAG CAT CCG−５′,5′−hGK1M:5′−CCT TAG
ACC AGA TGA AG−３′及び３′−hGK1M:3′−GAC CTT C
AC AAC ATC TG−５′をアプライド・バイオシステムズ
のオリゴヌクレオチド合成機で合成した。分子生物学試
薬及び酵素は、アプリジーン（Appligene）、ベーリン
ガー・マンハイム（Boehringer Mannheim）、ファルマ
シア・バイオテク（Pharmacia Biotech）またはプロメ
ガ（Promega）から得た。配列決定はPRISMシクエナーゼ
ターミネーター（Applied Biosystems,フォスターシ
ティー，カリフォルニア州）を用いて行った。ウエスタ
ンブロット試薬はアマ−シャム（Amersham）（Buckingh
amshire,英国）からであった。
装 置
寒天ゲル電気泳動をアプリジーン（Appligene）から
の装置で行なった。PCRをミニサイクラー（Mini Cycle
r）（SDS,Falkenberg,スェーデン）を用いて行なった。
配列ゲルをアプライド・バイオシステムズからの373DNA
シクエンサーを用いて行い、そして分析した。エレクト
ロポーレーションはジーン・パルサー（Gene Pulser）
（Bio−Rad,リッチモンド，カリフォルニア州）を用い
て行なった。ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルア
ミド・ゲル電気泳動（SDS−PAGE）はバイオ・ラド（Bio
−Rad）からのミニ・プロティーン（Mini PROTEAN）II
システムを用いて行なった。タンパク質のウェスタンブ
ロットは、ケム・エン・テク（Kem En Tec）からのセミ
・ドライ・ブロッター（Semi Dry Blotter）IIを用いて
行なった。
の装置で行なった。PCRをミニサイクラー（Mini Cycle
r）（SDS,Falkenberg,スェーデン）を用いて行なった。
配列ゲルをアプライド・バイオシステムズからの373DNA
シクエンサーを用いて行い、そして分析した。エレクト
ロポーレーションはジーン・パルサー（Gene Pulser）
（Bio−Rad,リッチモンド，カリフォルニア州）を用い
て行なった。ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルア
ミド・ゲル電気泳動（SDS−PAGE）はバイオ・ラド（Bio
−Rad）からのミニ・プロティーン（Mini PROTEAN）II
システムを用いて行なった。タンパク質のウェスタンブ
ロットは、ケム・エン・テク（Kem En Tec）からのセミ
・ドライ・ブロッター（Semi Dry Blotter）IIを用いて
行なった。
pSFV3−PSA及びpSFV3−hGK1の構築
DNAを用いる作業は、そうでないように述べてなけれ
ば、サムブロック他（「A Laboratory Mannual」1989
年，第２版,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spri
ng Harbor,ニューヨーク州）により記載された慣用技術
を用いて行なった。作業において用いられた細菌の細胞
は大腸菌DH5alfaであった。コンピテント細胞は、バイ
オラド・ジーン・パルサーの手引きに記載されたように
調製した。プレプロPSAをコードするDNAを５′PSAV3及
び３′−PSAプライマーを有するpGEM−PSAから、並びに
プレプロhGK1をコードするDNAを、５′−hGK1V3及び
３′−hGK1プライマーを有するpUC19−hGKIからPfu DAN
ポリメラーゼを用いてポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を
用いて増幅した（Strotagene,LaJolla,カリフォルニア
州）。反応は最初の94℃で50秒間の５サイクルの変性、
58℃で１分間のアニール及び72℃で２分間の重合、それ
に続く94℃で50秒の25サイクルの連続する変性、64℃で
１分間のアニール及び72℃で２分間の重合から成った。
すべてのプライマーは断片をベクターに結合するのに用
いられたBamH1制限部位を含有していた。BamH1を用いて
断片を切断後、それらをジェットソルブ（Jet Sorb）
（Genomed GmbH,Bad Oeynhausen,ドイツ国）を用いて寒
天ゲルから単離し、精製し、puc18中に結合した。その
断片をBamH1を用いてpuc18から切断して取り出し、前と
同じように精製し、次にpSFV3中に結合した。最終構築
物のヌクレオチド配列はDNA配列分析により確かめた。
配列反応に用いられたプライマーはSP1,SP2,5′−PSAM,
3′−PSAM,5′−hGK1M及び３′−hGK1Mであった。
ば、サムブロック他（「A Laboratory Mannual」1989
年，第２版,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spri
ng Harbor,ニューヨーク州）により記載された慣用技術
を用いて行なった。作業において用いられた細菌の細胞
は大腸菌DH5alfaであった。コンピテント細胞は、バイ
オラド・ジーン・パルサーの手引きに記載されたように
調製した。プレプロPSAをコードするDNAを５′PSAV3及
び３′−PSAプライマーを有するpGEM−PSAから、並びに
プレプロhGK1をコードするDNAを、５′−hGK1V3及び
３′−hGK1プライマーを有するpUC19−hGKIからPfu DAN
ポリメラーゼを用いてポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を
用いて増幅した（Strotagene,LaJolla,カリフォルニア
州）。反応は最初の94℃で50秒間の５サイクルの変性、
58℃で１分間のアニール及び72℃で２分間の重合、それ
に続く94℃で50秒の25サイクルの連続する変性、64℃で
１分間のアニール及び72℃で２分間の重合から成った。
すべてのプライマーは断片をベクターに結合するのに用
いられたBamH1制限部位を含有していた。BamH1を用いて
断片を切断後、それらをジェットソルブ（Jet Sorb）
（Genomed GmbH,Bad Oeynhausen,ドイツ国）を用いて寒
天ゲルから単離し、精製し、puc18中に結合した。その
断片をBamH1を用いてpuc18から切断して取り出し、前と
同じように精製し、次にpSFV3中に結合した。最終構築
物のヌクレオチド配列はDNA配列分析により確かめた。
配列反応に用いられたプライマーはSP1,SP2,5′−PSAM,
3′−PSAM,5′−hGK1M及び３′−hGK1Mであった。
組換えPSA及びhGK−１の発現
タンパク質の発現はセムリキ・フォレスト・ウイルス
（Semliki Forest Virus）発現システム（Berglund他
「Biotechnolgy」11:p.916〜920,1993年）を用いて行な
われた。用いられたプロトコルはSFV1Helper2遺伝子発
現システムの使用者の手引き（Life Technologies,Gibc
o BRL）からであった。ベクターを最初にSpe Iを用いて
直鎖状にした。さらに1mMのATP,CTP及びUTP,0.5mMのGT
P,1mMのm7G（５′）ppp（５′）Ｇ並びに50単位のRNasi
nを含有する、SP6緩衝液中で、1.5μｇの直鎖状ベクタ
ーから30単位のSP6ポリメラーゼを用いて、総量50μｌ
のmRNAを生じさせた。反応混合物を37℃で２時間インキ
ュベートした。エレクトロポーレーションによりmRNAの
半分をBHK−21細胞に転移させた。BHK−21細胞を2mMの
グルタミン、100U/mlのペニシリン、100μg/mlのストレ
プトマイシン、非必須アミノ酸（ICN Biomedicals,Cost
a Mesa,カリフォルニア州）及び５％の牛の胎児の血清
を補足したHEM（Gibco BRL）中で増殖させた。細胞をト
リプシン−EDTAを用いて分離し、Mg2+及びCa2+を含有し
ないPBSで洗浄し、約10×７細胞/mlの濃度まで懸濁し
た。エレクトロポーレーションは、0.8mlの細胞混合物
を用いて、0.4cmのキュベット中で850V/25μＦで２回パ
ルスを与えることにより行なった。エレクトロポーレー
ション後、細胞を20mlの培地に懸濁させ、培養びんに移
した。発現タンパク質を含有する上清を48時間または72
時間後に回収した。我々の手元にある発現システムの機
能は、pSFV3−lacZを用いるβ−ガラクトシダーゼの発
現に並行して、PSA及びhGK1の発現のすべての段階を行
なうことによってチェックした（Liljestrｍ及びGaro
ff,1991年）。
（Semliki Forest Virus）発現システム（Berglund他
「Biotechnolgy」11:p.916〜920,1993年）を用いて行な
われた。用いられたプロトコルはSFV1Helper2遺伝子発
現システムの使用者の手引き（Life Technologies,Gibc
o BRL）からであった。ベクターを最初にSpe Iを用いて
直鎖状にした。さらに1mMのATP,CTP及びUTP,0.5mMのGT
P,1mMのm7G（５′）ppp（５′）Ｇ並びに50単位のRNasi
nを含有する、SP6緩衝液中で、1.5μｇの直鎖状ベクタ
ーから30単位のSP6ポリメラーゼを用いて、総量50μｌ
のmRNAを生じさせた。反応混合物を37℃で２時間インキ
ュベートした。エレクトロポーレーションによりmRNAの
半分をBHK−21細胞に転移させた。BHK−21細胞を2mMの
グルタミン、100U/mlのペニシリン、100μg/mlのストレ
プトマイシン、非必須アミノ酸（ICN Biomedicals,Cost
a Mesa,カリフォルニア州）及び５％の牛の胎児の血清
を補足したHEM（Gibco BRL）中で増殖させた。細胞をト
リプシン−EDTAを用いて分離し、Mg2+及びCa2+を含有し
ないPBSで洗浄し、約10×７細胞/mlの濃度まで懸濁し
た。エレクトロポーレーションは、0.8mlの細胞混合物
を用いて、0.4cmのキュベット中で850V/25μＦで２回パ
ルスを与えることにより行なった。エレクトロポーレー
ション後、細胞を20mlの培地に懸濁させ、培養びんに移
した。発現タンパク質を含有する上清を48時間または72
時間後に回収した。我々の手元にある発現システムの機
能は、pSFV3−lacZを用いるβ−ガラクトシダーゼの発
現に並行して、PSA及びhGK1の発現のすべての段階を行
なうことによってチェックした（Liljestrｍ及びGaro
ff,1991年）。
電気泳動及び免疫ブロット
タンパク質のサイズ分離は12％のポリアクリルアミド
ゲルを用いて、ミニ−プロティーン電気泳動細胞説明書
中に記載されたように、SDS−PAGE作業で行なった。発
現タンパク質のサイズを、SDS−PAGEのための分子量マ
ーカー（Pharmacia,ウプサラ，スエーデン）を用い、製
造者の示唆したプロトコルを用いてECL−ウエスタンブ
ロット（Amersham,Buckinghamshire,英国）により確か
めた。ビオチニル化モノクローナル抗体B1及びB6並びに
ストレプトアビジン−ホースラディシュ・ペルオキシダ
ーゼの0.1μg/mlの混合物を用いて検出を行なった。
ゲルを用いて、ミニ−プロティーン電気泳動細胞説明書
中に記載されたように、SDS−PAGE作業で行なった。発
現タンパク質のサイズを、SDS−PAGEのための分子量マ
ーカー（Pharmacia,ウプサラ，スエーデン）を用い、製
造者の示唆したプロトコルを用いてECL−ウエスタンブ
ロット（Amersham,Buckinghamshire,英国）により確か
めた。ビオチニル化モノクローナル抗体B1及びB6並びに
ストレプトアビジン−ホースラディシュ・ペルオキシダ
ーゼの0.1μg/mlの混合物を用いて検出を行なった。
産出したタンパク質の確認
ベクター構築の間に塩基置換が生じなかったことを確
認するために、プレプロ形のタンパク質をコードするヌ
クレオチド配列及びpSFV3に挿入されたDNAの方向づけ
を、ヌクレオチド配列決定により確かめた。pSFV3−PSA
は261aaプレプロPSAをコードし、pSFV3−hGK1は261aaプ
レプロhGK1をコードする。両構築物はタンパク質の最初
に余分のMet−Asp−Proをコードしている配列を含有し
ていた。hGK−１をコードするヌクレオチド配列は、前
に報告されたゲノム配列（Schedlich他「DNA」6:p.429
〜437,1987年）とヌクレオチド600（Ｇ−＞Ａ）及び663
（Ｇ−＞Ｔ）（開始コドンと関連する）で異なる。これ
らの変化はcDNA配列において前に報告されたものと異っ
ている（Riegman他「Molecular and Cellular Endocrin
ology」76:p.181〜190,1991年,Young他,1992年）。その
変化は、アミノ酸配列に影響を与えず、アミノ酸配列は
以前に報告されたもの（Schedlich他,1987年）と同一で
ある。
認するために、プレプロ形のタンパク質をコードするヌ
クレオチド配列及びpSFV3に挿入されたDNAの方向づけ
を、ヌクレオチド配列決定により確かめた。pSFV3−PSA
は261aaプレプロPSAをコードし、pSFV3−hGK1は261aaプ
レプロhGK1をコードする。両構築物はタンパク質の最初
に余分のMet−Asp−Proをコードしている配列を含有し
ていた。hGK−１をコードするヌクレオチド配列は、前
に報告されたゲノム配列（Schedlich他「DNA」6:p.429
〜437,1987年）とヌクレオチド600（Ｇ−＞Ａ）及び663
（Ｇ−＞Ｔ）（開始コドンと関連する）で異なる。これ
らの変化はcDNA配列において前に報告されたものと異っ
ている（Riegman他「Molecular and Cellular Endocrin
ology」76:p.181〜190,1991年,Young他,1992年）。その
変化は、アミノ酸配列に影響を与えず、アミノ酸配列は
以前に報告されたもの（Schedlich他,1987年）と同一で
ある。
組換えPSA及びhGK−１のサイズ
タンパク質のサイズをSDS−PAGE後、モノクローナル
抗体B1及びB6を用いてウェスタンブロットにより決定し
た。組換えPSA及びhGK−１のサイズは精液血漿から精製
したPSAのサイズと同一であった（図２）。
抗体B1及びB6を用いてウェスタンブロットにより決定し
た。組換えPSA及びhGK−１のサイズは精液血漿から精製
したPSAのサイズと同一であった（図２）。
2.エピトープ地図の作製
前に記載された手順（Pettersson他「Clin Chem」印
刷中）を用いるエピトープ地図の作製研究を、入手可能
なモノクローナル抗PSA抗体のすべての可能な組み合せ
の免疫検出能の分析によって実施した：すなわち、抗体
として精製されたPSA（精液から単離された）または組
換えにより生産したPSAもしくはhGK−１のいずれかを用
いることにより、１方のMabをミクロ滴定ウェルに固定
し、他方をEu−キレートで標識した。最初の定量試験の
後（結合無し対検出可能な結合）、前に報告された手順
（Pettersson他「Clin Chem」印刷中）にしたがって、r
hGK−１を認識するPSA−Mabについて、アフィニティ常
数を決定した。データを表１に示す。PSA,PSA−ACT及び
hGK−１についてのエピトープを認識するモノクローナ
ル抗体についてのそれぞれのエピトープ地図を図３に示
す。６つの試験したモノクローナル抗−PSA抗体（B1,B
2,B3,B4,B6及びB7）は、精液から精製したrhGK−1,rPSA
及びPSAと等しく反応性であることを見い出した。１つ
の追加のモノクローナル抗体（B5）もrhGK−１を認識し
たが、hGK−１についての親和性はPSAについての親和性
より著るしく低かった。全体として、７つの試験したモ
ノクローナル抗−PSA抗体（A1〜A7）が、PSAに特有でrh
GK−１を共有しないエピトープを認識した。これらのエ
ピトープは遊離PSA及びPSA−ACTの両方で暴露されてお
り、５つ（C1〜C5）は遊離PSAのみに暴露されているPSA
に独特なエピトープを認識し、７つ（B1〜B7）は、hGK
−１に共通である、遊離PSA及びPSA−ACTの両方につい
て利用できるエピトープを認識した。モノクローナル抗
体の特異性を表１に示す。
刷中）を用いるエピトープ地図の作製研究を、入手可能
なモノクローナル抗PSA抗体のすべての可能な組み合せ
の免疫検出能の分析によって実施した：すなわち、抗体
として精製されたPSA（精液から単離された）または組
換えにより生産したPSAもしくはhGK−１のいずれかを用
いることにより、１方のMabをミクロ滴定ウェルに固定
し、他方をEu−キレートで標識した。最初の定量試験の
後（結合無し対検出可能な結合）、前に報告された手順
（Pettersson他「Clin Chem」印刷中）にしたがって、r
hGK−１を認識するPSA−Mabについて、アフィニティ常
数を決定した。データを表１に示す。PSA,PSA−ACT及び
hGK−１についてのエピトープを認識するモノクローナ
ル抗体についてのそれぞれのエピトープ地図を図３に示
す。６つの試験したモノクローナル抗−PSA抗体（B1,B
2,B3,B4,B6及びB7）は、精液から精製したrhGK−1,rPSA
及びPSAと等しく反応性であることを見い出した。１つ
の追加のモノクローナル抗体（B5）もrhGK−１を認識し
たが、hGK−１についての親和性はPSAについての親和性
より著るしく低かった。全体として、７つの試験したモ
ノクローナル抗−PSA抗体（A1〜A7）が、PSAに特有でrh
GK−１を共有しないエピトープを認識した。これらのエ
ピトープは遊離PSA及びPSA−ACTの両方で暴露されてお
り、５つ（C1〜C5）は遊離PSAのみに暴露されているPSA
に独特なエピトープを認識し、７つ（B1〜B7）は、hGK
−１に共通である、遊離PSA及びPSA−ACTの両方につい
て利用できるエピトープを認識した。モノクローナル抗
体の特異性を表１に示す。
3.選択されたモノクローナル抗体の組み合せを用いる、
PSA−F,PSA−T,PSA−Ｔ＋hGK−１及びPSA−ACTの特異的
測定のための検出方法 PSA及びhGK−１エピトープ地図及びアフィニティ常数
の決定から得られた情報に基づき、２つの免疫蛍光測定
検出方法を構築した。固相上のモノクローナル抗体B1と
トレーサーとしてのモノクローナル抗体B6の組み合せは
PSA及びhGK−１（PSA−Ｔ＋hGK−１）を共検出する。固
相上のモノクローナル抗体A1とトレーサーとしてのモノ
クローナル抗体B1の組み合せは、遊離PSA及びPSA−ACT
（PSA−Ｔ）の両方の特異的測定を提供するが、hGK−１
を共検出しない。固相上のモノクローナル抗体B1及びト
レーサーとしてのモノクローナル抗体C2を用いて、追加
の検出方法を遊離PSA（PSAF）の特異的測定について最
高に活用した。この検出方法はhGK−１を共検出しなか
った。PSAの遊離形を特異的に検出するすべてのモノク
ローナル抗体がhGK−１を認識することができなかった
ので、PSAの遊離形を特異的に検出し、hGK−１をも共検
出する検出方法を設計することはできなかった。さら
に、固相上のモノクローナル抗体及びトレーサーとして
のモノクローナル抗体Ｄを用いることにより、PSA−ACT
のみを測定する別個の検出方法を作った。以前に出版さ
れた手順（Lilja他,1991年,Pettersson他「Clin Chem」
印刷中）にしたがって、検出方法の手順を整えた。
PSA−F,PSA−T,PSA−Ｔ＋hGK−１及びPSA−ACTの特異的
測定のための検出方法 PSA及びhGK−１エピトープ地図及びアフィニティ常数
の決定から得られた情報に基づき、２つの免疫蛍光測定
検出方法を構築した。固相上のモノクローナル抗体B1と
トレーサーとしてのモノクローナル抗体B6の組み合せは
PSA及びhGK−１（PSA−Ｔ＋hGK−１）を共検出する。固
相上のモノクローナル抗体A1とトレーサーとしてのモノ
クローナル抗体B1の組み合せは、遊離PSA及びPSA−ACT
（PSA−Ｔ）の両方の特異的測定を提供するが、hGK−１
を共検出しない。固相上のモノクローナル抗体B1及びト
レーサーとしてのモノクローナル抗体C2を用いて、追加
の検出方法を遊離PSA（PSAF）の特異的測定について最
高に活用した。この検出方法はhGK−１を共検出しなか
った。PSAの遊離形を特異的に検出するすべてのモノク
ローナル抗体がhGK−１を認識することができなかった
ので、PSAの遊離形を特異的に検出し、hGK−１をも共検
出する検出方法を設計することはできなかった。さら
に、固相上のモノクローナル抗体及びトレーサーとして
のモノクローナル抗体Ｄを用いることにより、PSA−ACT
のみを測定する別個の検出方法を作った。以前に出版さ
れた手順（Lilja他,1991年,Pettersson他「Clin Chem」
印刷中）にしたがって、検出方法の手順を整えた。
追加の検出方法をhGK−１の特異的測定のために設計
した。直接及び排他的にhGK−１を認識するがPSAを認識
しないだろうモノクローナル抗体を入手できなかったの
で、この検出方法は遊離形のPSA及びPSA−ACTの両方の
認識をすっかり及び特異的に阻止する別個の段階を用い
る。これは過剰のモノクローナル抗体A5の添加により達
成され、それは遊離形のPSA及びPSA−ACTの両方を認識
するが、hGK−１と交差反応しない。これは、阻止段階
なしでPSAとhGK−１を等しくよく測定する、連続する免
疫蛍光測定検出方法（捕獲抗体としてのビオチニル化モ
ノクローナル抗体B6/トレーサーとしての標識化モノク
ローナル抗体B1）においてPSAが反応するのを阻止す
る。これはA5及びB6エピトープの間の重なりによる（図
３）。この検出方法の詳細な実施の例は図4A〜図4Cに記
載されている。hGK−１のための対照検出方法、すなわ
ちPSA＋hGK−１検出方法を、PSA阻止モノクローナル抗
体A5を用いる段階を除く以外は、同一の方法で実施し
た。
した。直接及び排他的にhGK−１を認識するがPSAを認識
しないだろうモノクローナル抗体を入手できなかったの
で、この検出方法は遊離形のPSA及びPSA−ACTの両方の
認識をすっかり及び特異的に阻止する別個の段階を用い
る。これは過剰のモノクローナル抗体A5の添加により達
成され、それは遊離形のPSA及びPSA−ACTの両方を認識
するが、hGK−１と交差反応しない。これは、阻止段階
なしでPSAとhGK−１を等しくよく測定する、連続する免
疫蛍光測定検出方法（捕獲抗体としてのビオチニル化モ
ノクローナル抗体B6/トレーサーとしての標識化モノク
ローナル抗体B1）においてPSAが反応するのを阻止す
る。これはA5及びB6エピトープの間の重なりによる（図
３）。この検出方法の詳細な実施の例は図4A〜図4Cに記
載されている。hGK−１のための対照検出方法、すなわ
ちPSA＋hGK−１検出方法を、PSA阻止モノクローナル抗
体A5を用いる段階を除く以外は、同一の方法で実施し
た。
4.比率PSA−F/PSA−T,PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）ま
たはPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の測定による臨床
的なBPH及びCAPの間の識別 正常な男性の被験者及びBPHにかかっており、CAPの証
拠のない患者からの57血清試料及び証明されたCAPを有
する患者からの32の処置前の試料をPSA−F,PSA−T,PSA
−Ｔ＋hGK−１及びPSA−ACTについての検出方法で試験
した（表２）。それぞれの比率、すなわち、PSA−F/PSA
−T,PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）,PSA−ACT/PSA−Ｔ及
びPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）をすべての試料につ
いて算定した。受信機運用特性（ROC）分析を上述の４
つの異なった検出方法の組み合せについて得られた比率
を用いて、CAPからBPHの識別のために算定した（図
５）。曲線の下の面積は、それぞれ、PSA−F/PSA−Ｔの
比率を用いると0.80、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を
用いると0.83、PSA−ACT/PSA−Ｔを用いると0.69、PSA
−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を用いると0.63であった。
したがって、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の間の比率
が最も性能よく、PSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の間
の比率が患者の群の間で最も低い識別を示した。この結
果によると、比率を算定するのに用いられた、PSA−Ｆ
またはPSA−ACTの測定と合わせて用いたとき、PSA−Ｔ
＋hGK−１の測定のための検出方法は、CAPからのBPHの
識別及びCAPの早期検出に有用であることが明らかであ
る。
たはPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の測定による臨床
的なBPH及びCAPの間の識別 正常な男性の被験者及びBPHにかかっており、CAPの証
拠のない患者からの57血清試料及び証明されたCAPを有
する患者からの32の処置前の試料をPSA−F,PSA−T,PSA
−Ｔ＋hGK−１及びPSA−ACTについての検出方法で試験
した（表２）。それぞれの比率、すなわち、PSA−F/PSA
−T,PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）,PSA−ACT/PSA−Ｔ及
びPSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）をすべての試料につ
いて算定した。受信機運用特性（ROC）分析を上述の４
つの異なった検出方法の組み合せについて得られた比率
を用いて、CAPからBPHの識別のために算定した（図
５）。曲線の下の面積は、それぞれ、PSA−F/PSA−Ｔの
比率を用いると0.80、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を
用いると0.83、PSA−ACT/PSA−Ｔを用いると0.69、PSA
−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を用いると0.63であった。
したがって、PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の間の比率
が最も性能よく、PSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）の間
の比率が患者の群の間で最も低い識別を示した。この結
果によると、比率を算定するのに用いられた、PSA−Ｆ
またはPSA−ACTの測定と合わせて用いたとき、PSA−Ｔ
＋hGK−１の測定のための検出方法は、CAPからのBPHの
識別及びCAPの早期検出に有用であることが明らかであ
る。
5.血清中のhGK−１濃度の測定
正常、BPH及びCAPの標本の混合物からなり、証明され
た臨床的裏付けデータのない243試料をhGK−１検出方法
で分析し（図４）、その結果を、hGK−１と交差反応し
ない阻止モノクローナル抗−PSA抗体A5を除外した、PSA
＋hGK−１検出方法と比較した。試料をそのPSA−Ｔ濃度
を基礎とする４つの異なるカテゴリーに分類した。PSA
−Ｔ＋hGK−１濃度の平均値並びにhGK−１検出方法によ
り測定された時に試料中に含有されていたhGK−１の平
均割合（％）を算定した。この結果によると、試料に含
有されたhGK−１の割合はPSA−Ｔの割合に比例して１〜
３％変化するが、PSA−Ｔ濃度が高い方では多少の％増
加が認められる。
た臨床的裏付けデータのない243試料をhGK−１検出方法
で分析し（図４）、その結果を、hGK−１と交差反応し
ない阻止モノクローナル抗−PSA抗体A5を除外した、PSA
＋hGK−１検出方法と比較した。試料をそのPSA−Ｔ濃度
を基礎とする４つの異なるカテゴリーに分類した。PSA
−Ｔ＋hGK−１濃度の平均値並びにhGK−１検出方法によ
り測定された時に試料中に含有されていたhGK−１の平
均割合（％）を算定した。この結果によると、試料に含
有されたhGK−１の割合はPSA−Ｔの割合に比例して１〜
３％変化するが、PSA−Ｔ濃度が高い方では多少の％増
加が認められる。
本明細書には非常に少ししか開示していないが、本発
明の方法には、多様な態様の形が入ることは明らかであ
ろう。当業者には、本発明の精神から離れない他の態様
が存在することは明らかであろう。したがって、本明細
書に記載された態様は例示であって、限定と解すべきで
はない。
明の方法には、多様な態様の形が入ることは明らかであ
ろう。当業者には、本発明の精神から離れない他の態様
が存在することは明らかであろう。したがって、本明細
書に記載された態様は例示であって、限定と解すべきで
はない。
配列表
（１）一般的情報
（iii）配列の数:8
（２）配列番号:1についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:28塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:1:
（２）配列番号:2についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:31塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:2:
（２）配列番号:3についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:28塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:3:
（２）配列番号:4についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:30塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:4:
（２）配列番号:5についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:17塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:5:
（２）配列番号:6についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:18塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:6:
（２）配列番号:7についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:17塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:7:
（２）配列番号:8についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:17塩基対
（Ｂ）配列の型：核酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類:cDNA
（iii）ハイポセティカル:No
（iv）アンチセンス:No
（vi）起源：
（Ａ）生物名：ホモ サピエンス
（xi）配列番号:8:
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 リルヤ，ハンス
スウェーデン国，エス−236 34 ヘル
ビッケン，ホーレンデアベーゲン 28
(72)発明者 ルンドワール，オーケ
スウェーデン国，エス−223 55 リン
ド，メーランボングスベーゲン ５
(72)発明者 ロブグレン，ヤニタ
フィンランド国，エフイーエン−20810
ティルキ，バルタオジャンティー 34
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/574
G01N 33/53
Claims (7)
- 【請求項１】前立腺がん（CAP）の早期検出のための前
立腺特異的抗原（PSA）のバイオアフィニティ検出方法
であって、 前記検出方法は、体液試料中の −総PSA（PSA−Ｔ）の濃度及び遊離形のPSA（PSA−Ｆ）
の濃度の測定、または −総PSA（PSA−Ｔ）の濃度及びα−１−アンチキモトリ
プシンと複合体を形成したPSA（PSA−ACT）の濃度のい
ずれかの測定を含んで成り、 PSA−ＴはPSA−Ｆ及びPSA−ACTの合計であり、前記方法
は、さらに体液試料中のヒトの腺のカリクレインであ
る、hGK−１の濃度の測定を含み、PSA−Ｔ及びhGK−１
の濃度は１回の単一の検出方法または別々の検出方法で
測定することができ、PSA−Ｔ及びhGK−１の濃度の合計
を、 ａ）PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）及び／または ｂ）PSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）である 比率を決定するのに用いる、前記検出方法。 - 【請求項２】比率PSA−F/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を、良
性前立腺過形成（BPH）にかかっている患者または前立
腺のがん（CAP）にかかっていない正常な男性被験者か
ら、CAPにかかっている患者を識別するのに用いる、請
求項１に記載のバイオアフィニティ検出方法。 - 【請求項３】比率PSA−ACT/（PSA−Ｔ＋hGK−１）を、
良性前立腺過形成（BPH）にかかっている患者または前
立腺のがん（CAP）にかかっていない正常な男性被験者
から、CAPにかかっている患者を識別するのに用いる、
請求項１に記載のバイオアフィニティ検出方法。 - 【請求項４】PSA−Ｔ及びhGK−１の濃度の合計を、PSA
及びhGK−１の両方に関する共通のエピトープを認識す
る抗体または遺伝子的に構築された抗体断片を用いるこ
とにより同時に測定する、請求項１に記載のバイオアフ
ィニティ検出方法。 - 【請求項５】少なくとも２つの異なったモノクローナル
抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体とポリ
クローナル抗体との組み合せまたは遺伝子的に構築され
た抗体断片を用いる非−競合バイオアフィニティ検出方
法を用いる、請求項４に記載のバイオアフィニティ検出
方法。 - 【請求項６】PSA−Ｔ及びhGK−１を別個に測定し、その
後PSA−Ｔ及びhGK−１の量の合計を算定する、請求項１
に記載のバイオアフィニティ検出方法。 - 【請求項７】非−競合検出方法において２つの異なった
モノクローナル抗体または抗体断片及び、PSA−Ｔと非
−競合検出方法で用いられる２つのモノクローナル抗体
または抗体断片との反応を阻止する第３のモノクローナ
ル抗体または抗体断片を用いることによって、hGK−１
の濃度を測定する、請求項６に記載のバイオアフィニテ
ィ検出方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/394,033 US5614372A (en) | 1995-02-24 | 1995-02-24 | Early detection of prostate cancer (CAP) by employing prostate specific antigen (PSA) and human glandular kallikrein (hGK-1) |
| US08/394,033 | 1995-02-24 | ||
| PCT/FI1996/000081 WO1996026442A1 (en) | 1995-02-24 | 1996-02-14 | Early detection of prostate cancer (cap) by determining a ratio involving prostate specific antigen (psa) and human glandular kallikrein (hgk-1) concentrations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11503515A JPH11503515A (ja) | 1999-03-26 |
| JP3507079B2 true JP3507079B2 (ja) | 2004-03-15 |
Family
ID=23557277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52542396A Expired - Lifetime JP3507079B2 (ja) | 1995-02-24 | 1996-02-14 | 前立腺特異的抗原（ｐｓａ）及びヒトの腺のカリクレイン（ｈｇｋ−１）濃度を包含する比率を測定することによる前立腺がん（ｃａｐ）の早期検出 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5614372A (ja) |
| EP (1) | EP0811164B1 (ja) |
| JP (1) | JP3507079B2 (ja) |
| DE (1) | DE69618447T2 (ja) |
| ES (1) | ES2171219T3 (ja) |
| WO (1) | WO1996026442A1 (ja) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6103237A (en) * | 1993-07-22 | 2000-08-15 | Hybritech Incorporated | Stable variant hK2 polypeptide |
| US20040259113A1 (en) * | 1993-07-22 | 2004-12-23 | Mayo Foundation For Medical Education And Research, Hybritech Incorporated | Method for detection of metastatic prostate cancer |
| AU699748B2 (en) * | 1994-05-10 | 1998-12-10 | Hybritech Incorporated | Recombinant HK2 polypeptide |
| US6479263B1 (en) | 1996-11-14 | 2002-11-12 | Baylor College Of Medicine | Method for detection of micrometastatic prostate cancer |
| US6309816B1 (en) * | 1997-04-16 | 2001-10-30 | Horus Therapeutics, Inc. | Methods for diagnosing cancer by measuring creatine kinase |
| AU8259798A (en) | 1997-06-20 | 1999-01-04 | George G Klee | Method for detection of breast cancer |
| US6194152B1 (en) | 1997-08-20 | 2001-02-27 | Dendreon Corporation | Prostate tumor polynucleotide compositions and methods of detection thereof |
| US6060308A (en) | 1997-09-04 | 2000-05-09 | Connaught Laboratories Limited | RNA respiratory syncytial virus vaccines |
| WO1999038011A1 (en) | 1998-01-21 | 1999-07-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Circulating insulin-like growth factor-i and prostate cancer risk |
| FI980488A (fi) * | 1998-03-04 | 1999-09-05 | Arctic Partners Oy Ab | Uusi diagnostinen menetelmä |
| US6352834B1 (en) | 1998-07-17 | 2002-03-05 | University Of Iowa Research Foundation | Prostate cancer assays and related methods |
| US7226731B1 (en) | 1998-07-24 | 2007-06-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | PB 39, a gene dysregulated in prostate cancer, and uses thereof |
| WO2000005376A1 (en) * | 1998-07-24 | 2000-02-03 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Pb 39, a gene dysregulated in prostate cancer, and uses thereof |
| FI990382A0 (fi) * | 1999-02-23 | 1999-02-23 | Arctic Partners Oy Ab | Uusi diagnostinen menetelmä |
| US6448086B1 (en) * | 2000-01-18 | 2002-09-10 | Diagnostic Systems Laboratories, Inc. | Insulin-like growth factor system and cancer |
| WO2001077682A1 (fr) * | 2000-04-10 | 2001-10-18 | Institut Bioorganicheskoi Khimii Imeni Akademikov M.M. Shemyakina I Ju. A. Ovchinnikova Rossiisskoi Akademii Nauk | Anticorps diriges contre le facteur hldf, procedes de fabrication correspondants, peptides avec des capacites antigeniques et a hydrolyse hk et procede de diagnostic de l'etat anaplasique de cellules humaines |
| EP1299727B1 (en) | 2000-07-12 | 2009-04-22 | Agensys, Inc. | Novel tumor antigen useful in diagnosis and therapy of bladder, ovary, lung and kidney cancers |
| US20030055114A1 (en) * | 2001-09-20 | 2003-03-20 | Charles Young | Methods and compositions for inhibiting the proliferation of prostate cancer cells |
| WO2004016733A2 (en) * | 2002-08-16 | 2004-02-26 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 251p5g2 useful in treatment and detection of cancer |
| US7361474B2 (en) * | 2003-02-24 | 2008-04-22 | United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Serum macrophage migration inhibitory factor (MIF) as marker for prostate cancer |
| US20050037447A1 (en) * | 2003-07-08 | 2005-02-17 | Yong-Chuan Wong | Protein markers for human benign prostatic hyperplasia (BPH) |
| JP5305361B2 (ja) | 2007-05-04 | 2013-10-02 | オプコ・ダイアグノスティクス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 流体コネクタおよびマイクロ流体システム |
| DE202010018623U1 (de) | 2009-02-02 | 2018-12-07 | Opko Diagnostics, Llc | Strukturen zur Steuerung der Lichtwechselwirkung mit mikrofluidischen Vorrichtungen |
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| MY192513A (en) | 2014-03-28 | 2022-08-24 | Opko Diagnostics Llc | Compositions and methods related to diagnosis of prostate cancer |
| ES2867798T3 (es) | 2015-03-27 | 2021-10-20 | Opko Diagnostics Llc | Estándares del antígeno prostático y usos de estos |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE160228C (ja) * | 1900-01-01 | |||
| GB196845A (en) * | 1922-07-03 | 1923-05-03 | Alexander Hayes | Improvements in means for connecting the ends of hose to unions, couplings, or analogous parts |
| US4446122A (en) * | 1979-12-28 | 1984-05-01 | Research Corporation | Purified human prostate antigen |
| US4690890A (en) * | 1984-04-04 | 1987-09-01 | Cetus Corporation | Process for simultaneously detecting multiple antigens using dual sandwich immunometric assay |
| JPH0690203B2 (ja) * | 1985-08-23 | 1994-11-14 | 中外製薬株式会社 | 前立腺特異抗原とα▲下１▼−アンチトリプシン複合体の定量方法 |
| SE9002480D0 (sv) * | 1990-07-23 | 1990-07-23 | Hans Lilja | Assay of free and complexed prostate-specific antigen |
| US5516639A (en) * | 1993-07-22 | 1996-05-14 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Antibodies specific for human prostate glandular kallkrein |
| AU699748B2 (en) * | 1994-05-10 | 1998-12-10 | Hybritech Incorporated | Recombinant HK2 polypeptide |
-
1995
- 1995-02-24 US US08/394,033 patent/US5614372A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
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