JP5224703B2 - 採取組織片ガラス化凍結保存用具、組織片凍結保存用プレートおよび採取組織片ガラス化凍結保存方法 - Google Patents

Description

本発明は、哺乳動物の卵巣などの生体組織を凍結保存する際に使用する採取組織片ガラス化凍結保存用具、組織片凍結保存用プレートおよび採取組織片ガラス化凍結保存方法に関する。

現在において、哺乳動物の生体細胞（例えば、精子、卵子など）の凍結保存が行われている。このような凍結保存は、特定の系統や品種の遺伝資源の保存を可能とする。また、絶滅の危機に瀕している動物種の維持にも有効である。さらに、ヒトの不妊治療においても有用である。
また、特開２００３−２８４５４６号公報（特許文献１）には、卵巣凍結法が開示されている。この卵巣凍結法は、非ヒト哺乳動物の雌個体から少なくとも卵巣を含む生殖組織を摘出し、これを１５〜０℃で保持した後にガラス化法により凍結することを特徴とするものである。
また、哺乳動物胚の凍結保存方法としては、特開２０００−１８９１５５公報（特許文献２）において、哺乳動物胚または卵子を滅菌処理した凍結ストロー、凍結バイアルまたは凍結チューブ等の凍結保存用容器の内面に、これらの胚または卵子を被包するに充分な最少量のガラス化液で貼り付け、この凍結保存用容器を密封し、そしてこの容器を液体窒素に接触させて急速に冷却することが提案されている。そして、融解方法では、前記の方法で保存した凍結保存用容器を前記液体窒素から取り出し、容器の一端部を開口し、この容器内に３３〜３９℃の希釈液を直接注入し、胚または卵子の凍結を融解希釈するものである。この方法によれば、哺乳動物胚または卵子をウイルスや細菌による感染のおそれがなく高い生存率で保存および融解希釈することのできるという優れた効果を備えている。
また、特開２００２−３１５５７３号公報（特許文献３）に示す卵凍結保存用具を本件出願人は提案している。この卵凍結保存用具は、耐寒性材料により形成された本体部と、本体部の一端に取り付けられ、可撓性かつ透明性かつ液体窒素耐性材料により形成された卵付着保持用ストリップと、該卵付着保持用ストリップを被包可能に本体部に着脱自在に取り付けられる一端が封鎖され、かつ耐寒性材料により形成された筒状部材とからなるものである。

特開２００３−２８４５４６号公報 特開２０００−１８９１５５公報 特開２００２−３１５５７３号公報

上記の特許文献１のものでは、卵巣凍結法を開示するにすぎず、組織採取および組織凍結保存のための簡便な採取用具についての開示はない。また、上記の特許文献２および特許文献３のものも組織採取および組織凍結保存に利用できるものではない。

そこで、本発明の目的は、組織片の採取が容易であり、かつ、採取した組織片を良好にガラス化凍結保存することが可能な採取組織片ガラス化凍結保存用具、組織片凍結保存用プレートおよび採取組織片ガラス化凍結保存方法を提供するものである。

上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１） 採取組織切取位置特定具と、該採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレートとを備える採取組織片ガラス化凍結保存用具であって、前記採取組織切取位置特定具は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部と、裏面に設けられ組織切断具の進行を係止するための切断具用係止部とを有する組織切取部特定部材と、前記切取部特定用開口部を被包するように前記組織切取部特定部材の表面側に押圧可能な開口部押圧部材とを備え、前記組織片凍結保存用プレートは、前記切取部特定用開口部の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び前記採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えており、かつ、前記採取組織片ガラス化凍結保存用具が、卵巣組織片ガラス化凍結保存用具である採取組織片ガラス化凍結保存用具。
また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
（２） 採取組織切取位置特定具と、該採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレートとを備える採取組織片ガラス化凍結保存用具であって、前記採取組織切取位置特定具は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部と、裏面に設けられ組織切断具の進行を係止するための切断具用係止部とを有する組織切取部特定部材と、前記切取部特定用開口部を被包するように前記組織切取部特定部材の表面側に押圧可能な開口部押圧部材とを備え、前記組織片凍結保存用プレートは、前記切取部特定用開口部の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び前記採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えており、さらに、前記採取組織切取位置特定具は、前記組織切取部特定部材を対象生体組織に押圧した状態にて、前記切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、前記組織切取部特定部材の表面側に前記開口部押圧部材を前記切取部特定用開口部を被包するように押し当て前記切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、前記組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより前記開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取り可能である採取組織片ガラス化凍結保存用具。

（３） 前記切取部特定用開口部は、矩形状であり、前記組織片凍結保存用プレートは、前記矩形状の前記開口部の幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、前記矩形状の前記開口部の長さより十分に長い長さを有するものである上記（１）または（２）に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（４） 前記切取部特定用開口部は、円もしくは楕円状であり、前記組織片凍結保存用プレートは、前記開口部の直径または短軸と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、前記開口部の直径および長軸の長さより十分に長い長さを有するものである上記（１）または（２）に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（５） 前記切断具用係止部は、前記切取部特定用開口部より前記組織切取部特定部材の端部側に設けられている上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（６） 前記切断具用係止部は、前記切取部特定用開口部付近に設けられている上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（７） 前記開口部押圧部材は、透明平板状部材である上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（８） 前記組織片凍結保存用プレートは、略矩形状の薄板プレートであり、全体にわたり冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有している上記（１）ないし（７）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（９） 前記組織片凍結保存用プレートは、銅、銅合金、アルミ、アルミ合金、金、金合金、銀、銀合金から選択された金属により形成されている上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（１０） 前記組織切取部特定部材は、前記組織切取部特定部材の表面の両側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、前記開口部押圧部材の両側部をスライド可能に収納する開口部押圧部材誘導部を備えている上記（１）ないし（９）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（１１） 前記組織切取部特定部材は、前記組織切取部特定部材の裏面の少なくとも一方の側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、前記切断具がスライド可能な切断具誘導部を備えている上記（１）ないし（１０）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
（１２） 前記切断具誘導部の先端部は、前記組織切取部特定部材の一端より突出している上記（１１）に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。

また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１３） 所定長を有する金属性板状部材であり、組織片載置部を有するとともに、少なくとも組織片載置部には、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有する組織片凍結保存用プレート。
（１４） 前記組織片凍結保存用プレートは、銅、銅合金、アルミ、アルミ合金、金、金合金、銀、銀合金から選択された金属により形成されている上記（１３）に記載の組織片凍結保存用プレート。
（１５） 前記組織片凍結保存用プレートは、略矩形状の薄板プレートであり、全体にわたり冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有している上記（１３）または（１４）に記載の組織片凍結保存用プレート。

また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１６） 上記（１）ないし（１２）のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具を用いる採取組織片ガラス化凍結保存方法であって、
前記組織切取部特定部材を対象生体組織に押圧した状態にて、前記切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、前記組織切取部特定部材の表面側に前記開口部押圧部材を前記切取部特定用開口部を被包するように押し当て前記切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、前記組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより前記開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取る組織片採取工程と、採取した組織片をガラス化液に浸漬する組織片ガラス化液浸漬工程と、ガラス化液より前記組織片を取り出し、前記組織片凍結保存用プレート上に載置する組織片載置工程と、組織片が載置された組織片凍結保存用プレートを冷却媒体タンク内に投入する投入工程とを行う採取組織片ガラス化凍結保存方法。
（１７） 前記採取組織片ガラス化凍結保存方法は、卵巣組織片ガラス化凍結保存方法もしくは肝臓組織片ガラス化凍結保存方法である上記（１６）に記載の採取組織片ガラス化凍結保存方法。

本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具は、採取組織切取位置特定具と、該採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレートとを備える。そして、採取組織切取位置特定具は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部と裏面に設けられた切断具用係止部とを有する組織切取部特定部材と、前記切取部特定用開口部を被包するように前記組織切取部特定部材の表面側に押圧可能な開口部押圧部材とを備えるので、的確な大きさおよび厚さの組織片を採取できる。さらに、組織片凍結保存用プレートは、切取部特定用開口部の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び前記採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えているので、採取した組織片をガラス化液に浸漬した後、この組織片凍結保存用プレート上に載置し、冷却媒体タンク内に投入することにより、良好にガラス化状態にて凍結させることができる。

また、本発明の組織片凍結保存用プレートは、所定長延びる金属性板状部材であり、組織片載置部を有するとともに、少なくとも組織片載置部には、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有するものである。このため、採取した組織片をガラス化液に浸漬した後、この組織片凍結保存用プレート上に載置し、冷却媒体タンク内に投入することにより、良好にガラス化状態にて凍結させることができる。

また、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存方法は、上記の本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具を用いるものであり、さらに、組織切取部特定部材を対象生体組織に押圧した状態にて、切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、組織切取部特定部材の表面側に開口部押圧部材を押圧して切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取る組織片採取工程と、採取した組織片をガラス化液に浸漬する組織片ガラス化液浸漬工程と、ガラス化液より前記組織片を取り出し、組織片凍結保存用プレート上に載置する組織片載置工程と、組織片が載置された組織片凍結保存用プレートを冷却媒体タンク内に投入する投入工程とを行うものであるので、的確な大きさおよび厚さの組織片を、良好にガラス化状態にて凍結させることができる。

本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具および採取組織片ガラス化凍結保存方法を図面に示した実施例を用いて説明する。
図１は、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具の一実施例の正面図である。
図２は、図１に示した採取組織片ガラス化凍結保存用具の採取組織切取位置特定具の背面図である。図３は、図１のＡ−Ａ線断面図である。図４は、図１のＢ−Ｂ線断面図である。図５は、図１のＣ−Ｃ線断面図である。

本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具１は、採取組織切取位置特定具１０と、採取組織切取位置特定具１０を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレート４とを備える。
そして、採取組織切取位置特定具１０は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部２２と、裏面に設けられた切断具用係止部２３とを有する組織切取部特定部材２と、切取部特定用開口部２２を被包するように組織切取部特定部材２の表面側に押圧可能な開口部押圧部材３とを備える。そして、組織片凍結保存用プレート４は、切取部特定用開口部２２の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び採取組織切取位置特定具１０を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えている。

また、本発明の組織片凍結保存用プレート４は、所定長延びる金属性板状部材であり、組織片載置部を有するとともに、少なくとも組織片載置部には、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有するものである。
そして、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具および組織片凍結保存用プレートは、牛、ヒトなどの各種の生体組織の採取組織片ガラス化凍結保存に使用できる。特に、卵巣組織片をガラス化凍結保存するのに好適である。
また、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具１では、組織切取部特定部材２を対象生体組織に押圧した状態にて、切取部特定用開口部２２の内縁に沿って切り込みを入れた後、組織切取部特定部材２の表面側に開口部押圧部材３を切取部特定用開口部２２を被包するように押し当て切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、組織切取部特定部材２の裏面に沿って切断具を移動させることにより開口部２２の形状に対応した形状の組織片を切り取ることが可能なものとなっている。

本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具１は、図１に示すように、採取組織切取位置特定具１０と、採取組織切取位置特定具１０を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレート４とを備える。なお、この実施例では、採取組織片ガラス化凍結保存用具１は、採取組織切取位置特定具１０と、組織片凍結保存用プレート４とのセットとなっているが、本発明の組織片凍結保存用プレート４は、採取組織切取位置特定具１０を用いることなく採取された組織片にも使用できる。
採取組織切取位置特定具１０は、組織切取部特定部材２と、開口部押圧部材３とを備える。

組織切取部特定部材２は、図１ないし図３に示すように、略矩形状に形成された平板状部材であり、表面および裏面は、平坦となっている。そして、組織切取部特定部材２の平面部２１の中央部には、所定幅かつ所定長延びる矩形状の切取部特定用開口部２２が設けられている。
この実施例では、切取部特定用開口部２２は、矩形状のものとなっており、後述する組織片凍結保存用プレート４は、矩形状の開口部２２の幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、矩形状の開口部２２の長さより十分に長い長さを有している。

また、組織切取部特定部材２は、裏面側であり、切取部特定用開口部２２付近でありかつ切取部特定用開口部２２よりどちらかの端部側に設けられた切断具用係止部２３を有している。このため、組織切取部特定部材２の裏面は、切断具用係止部２３部分が突出した状態となっており、その他の部分は平坦面となっている。特に、この実施例では、切断具用係止部２３は、組織切取部特定部材２の他端と切取部特定用開口部２２間であり、かつ切取部特定用開口部２２と近接する位置に設けられている。切断具用係止部２３は、切取部特定用開口部２２付近に設けられていることが好ましい。
組織切取部特定部材２の大きさとしては、矩形状の場合、長片が３０〜５０ｍｍ程度、短辺が、２０〜４０ｍｍ程度であることが好ましい。また、組織切取部特定部材２の厚さとしては、０．５〜２ｍｍ程度が好ましい。また、切断具用係止部２３の厚さとしては、０．５〜２ｍｍ程度が好ましい。また、切取部特定用開口部２２の大きさとしては、２５〜２５０ｍｍ^２程度が好ましく、矩形状の場合、各辺の長さが、５〜１５ｍｍ程度であることが好ましい。

また、組織切取部特定部材２の形成材料としては、透明もしくは半透明であることが好ましく、さらに、生体組織付着性を持たないものが望ましい。組織切取部特定部材２の形成材料としては、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレンポリプロピレン、エチレン−プロピレン共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体）、スチレン系樹脂（例えば、ポリスチレン、メタクリレート−スチレン共重合体、メタクリレート−ブチレン−スチレン共重合体）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、ポリアミド（例えば、６ナイロン，６６ナイロン）、ポリテトラフロロエチレン、エチレン−テトラフロロエチレン共重合体、テトラフロロエチレン−ヘキサフロロプロピレン共重合体、塩化三フッ化エチレン樹脂などのフッ素樹脂等が好適に使用される。

開口部押圧部材３は、透明平板状部材が用いられており、この実施例では、組織切取部特定部材２の形状に対応した矩形状のものとなっている。そして、開口部押圧部材３は、切取部特定用開口部２２を被包するように組織切取部特定部材２の表面側に押圧可能である。この実施例のように、開口部押圧部材３は、組織切取部特定部材２の外形形状に対応した形状とすることが好ましい。なお、開口部押圧部材３は、組織切取部特定部材２より若干小さいものまた若干大きいものであってもよい。
開口部押圧部材３の大きさとしては、矩形状の場合、長片が３０〜５０ｍｍ程度、短辺が、２０〜４０ｍｍ程度であることが好ましい。また、開口部押圧部材３の厚さとしては、０．５〜２ｍｍ程度が好ましい。また、開口部押圧部材３の形成材料としては、上述した組織切取部特定部材２において説明したものが好適に使用できる。

そして、組織片凍結保存用プレート４は、切取部特定用開口部２２の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び採取組織切取位置特定具１０を用いて切り取られた組織片を載置可能な平板状のものとなっている。
この実施例では、組織片凍結保存用プレート４は、切取部特定用開口部２２の一辺の長さと実質的に同じ幅を有する細長い矩形状のものとなっている。組織片凍結保存用プレート４の大きさとしては、矩形状の場合、長片が５０〜１５０ｍｍ程度、短辺が、５〜５０ｍｍ程度であることが好ましい。
そして、組織片凍結保存用プレート４は、冷却媒体が侵入可能な多数の孔４２を備えている。このように、組織片凍結保存用プレート４が、冷却媒体が侵入可能な多数の孔４２を有することにより、プレート自体の冷却が早いとともに、組織片のプレート載置側にも冷却媒体が接触可能であるため、組織片のプレート載置側からの冷却も良好となる。この両者の効果により、組織片の冷却が極めて迅速に行われる。また、組織切取部特定部材２および開口部押圧部材３を用いることにより、組織片凍結保存用プレート４の形状に対応するとともに、的確な厚さの組織片を採取することができる。これらの作用が複合することにより、ガラス化凍結保存後の解凍時における細胞の高い生存率を得ることができ、自家移植に極めて有効である。

この実施例では、組織片凍結保存用プレート４は、図１に示すように、略矩形状の薄板プレートであり、全体にわたり冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有している。孔の形状としては、図１に示すような円形のものが好ましい。孔の大きさとしては、２〜８ｍｍ^２程度が好ましく、特に、４〜７ｍｍ^２程度が好ましい。また、組織片凍結保存用プレート４の全体面積に対する孔の総面積は、３０〜７０％程度が好ましい。組織片凍結保存用プレート４は、金属性板状部材により形成されている。用いられる金属としては、特に制限されないが、銅、銅合金、アルミ、アルミ合金、金、金合金、銀、銀合金などが好適である。組織片凍結保存用プレート４は、液体窒素浸漬時における１分間換算冷却速度が−２万℃を越えるものであることが好ましい。このような冷却速度を有することにより、組織片を良好にガラス化状態にて凍結することができる。

なお、組織片凍結保存用プレートに形成される孔の形状は、図１に示すような円形タイプのものに限定されるものではなく、図２２に示す組織片凍結保存用プレート４ａのような、多角形形状（この実施例では、四角形）の孔４２ａであってもよい。
さらに、組織片凍結保存用プレートに形成される孔は、図２３に示すように、組織片が載置される領域にのみ形成されていてもよい。この実施例の組織片凍結保存用プレート４ｂでは、一端側の所定領域にのみ孔４２ｂが設けられている。孔４２ｂが形成される領域のプレートの長手方向の長さとしては、切取部特定用開口部２２の長さの２〜５倍程度であることが好ましい。孔４２ｂの大きさとしては、上述したものと同様のものが好ましく、さらには、図２２に示したような、多角形形状の孔であってもよい。

次に、本発明の他の実施例について説明する。
図６ないし図８は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の背面図である。
組織切取部特定部材２ａの角部は、図６の実施例の組織切取部特定部材２ａに示すように、面取りされた状態となっていてもよい。また、切断具用係止部の形態は、図１ないし図３に示したものに限定されるものではなく、図６に示す切断具用係止部２３ａ、２３ｂのように、組織切取部特定部材２ａの他端と切取部特定用開口部２２間であり、かつ、組織切取部特定部材２ａの両側部に設けてもよい。また、切断具用係止部２３の形状は、図６に示すように、円形状であってもよく、また、楕円形状、多角形状などであってもよい。

また、採取組織切取位置特定具の切取部特定用開口部の形状は、図１ないし図３に示したものに限定されるものではなく、図７の実施例の組織切取部特定部材２ｂの開口部２２ａのように、円形状もしく楕円形状であってもよい。そして、この実施例においても、図７に示すように、組織切取部特定部材２ｂの他端と切取部特定用開口部２２ａ間に切断具用係止部２３ｃが設けられている。
そして、このようなタイプの組織切取部特定部材２ｂが用いられる場合、組織片凍結保存用プレートとしては、開口部２２ａの直径または短軸と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、開口部２２ａの直径または長軸の長さより十分に長い長さを有するものが用いられる。

さらに、図８の実施例の組織切取部特定部材２ｃに示すように、切取部特定用開口部２２ａの形状が、円形状もしくは楕円形状であるとともに、切断具用係止部２３ａ、２３ｂが、組織切取部特定部材２ｃの他端と切取部特定用開口部２２ａ間であり、かつ、組織切取部特定部材２ｃの両側部に設けられたものであってもよい。そして、切断具用係止部２３ａ，２３ｂの形状は、円形状、楕円形状、多角形状などであってもよい。

また、上述した全ての実施例の採取組織切取位置特定具は、図９ないし図１１に示すような開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂを備えていてもよい。
図９は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の正面図である。図１０は、図９のＤ−Ｄ線断面図である。図１１は、図９に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。
この実施例における組織切取部特定部材２ｄは、表面の両側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、開口部押圧部材３の両側部をスライド可能に収納する開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂを備えている。開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、組織切取部特定部材２ｄの一端側より他端側に延びている。特に、この実施例では、開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、組織切取部特定部材２ｄの一端より他端までの全長に渡り形成されている。開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、図１０に示すように、開口部押圧部材３の両側部を収納する凹部２５ａ，２５ｂを備えており、この凹部２５ａ，２５ｂ内に開口部押圧部材３の両側部が収納されるとともに、摺動可能となっている。また、開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、凹部２５ａ，２５ｂの上方を被包しており、組織切取部特定部材２ｄからの開口部押圧部材３の離脱を規制している。

この実施例の採取組織切取位置特定具では、図１１に示すように、開口部押圧部材３の端部が、組織切取部特定部材２ｄの開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂに侵入し、かつ、切取部特定用開口部２２を開口部押圧部材３が被包しない状態とする。そして、この状態にて、摘出された生体器官（例えば、卵巣、肝臓）に、採取組織切取位置特定具を押しつけ、切取部特定用開口部２２の内縁に沿って、切断具にて切り込みを入れる。これにより、切り込みにより囲まれた生体器官部位が、開口部内に侵入する。続いて、開口部押圧部材３をスライドさせて、切取部特定用開口部２２が開口部押圧部材３にて被包された状態とする。この実施例のように、開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂを設けることにより、開口部押圧部材３の切取部特定用開口部２２上への配置作業が容易なものとなる。
そして、開口部押圧部材３を組織切取部特定部材２ｄに押圧し、その状態を維持したまま、組織切取部特定部材２ｄの下面に沿って、切断具を切断具用係止部２３方向に移動させる。これにより、切取部特定用開口部２２の形状に対応した組織片が切断される。

さらに、上述した全ての実施例の採取組織切取位置特定具は、図１２ないし図１７に示すような構成を有するものであってもよい。
図１２は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される採取組織切取位置特定具の組織切取部特定部材の正面図である。図１３は、図１２に示した採取組織切取位置特定具に使用される開口部押圧部材の正面図である。図１４は、図１２のＥ−Ｅ線断面図である。図１５は、図１２のＦ−Ｆ線断面図である。図１６および図１７は、図１２ないし図１５に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。

この実施例における組織切取部特定部材２ｅは、上述した組織切取部特定部材２ｄと同様に、表面の両側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、開口部押圧部材３ａの両側部をスライド可能に収納する開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂを備えている。開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、組織切取部特定部材２ｄの一端側より他端側に延びている。特に、この実施例では、開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、組織切取部特定部材２ｅの一端より他端までの全長に渡り形成されている。
開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、図１２，図１４および図１５に示すように、開口部押圧部材３ａの両側部を収納する凹部２５ａ，２５ｂと、組織切取部特定部材２ｅの表面側より凹部２５ａ，２５ｂに延びる段部２６ａ、２６ｂを備えている。さらに、各段部２６ａ、２６ｂの一方の端部には、所定長延びる段部欠損部２７ａ，２７ｂが形成されている。また、図１３に示すように、開口部押圧部材３ａの一方の端部には、両側部に突出部３１ａ，３１ｂを有することにより、組織切取部特定部材２ｅの段部２６ａと段部２６ｂ間の距離より広い幅を持ちかつ段部欠損部２７ａと段部欠損部２７ｂ間の距離より狭い幅を有し、所定長延びる幅広部３１と、この幅広部３１と連続するとともに、両側部に切欠部３２ａ，３２ｂを有することにより、幅が狭くなった幅狭部３２を備えている。幅狭部３２の幅は、組織切取部特定部材２ｅの段部２６ａと段部２６ｂ間の距離より短いものとなっている。そして、凹部２５ａ，２５ｂ内に開口部押圧部材３の幅広部３１の端部が収納されるとともに、凹部２５ａ，２５ｂ内かつ段部２６ａ、２６ｂ上を摺動可能となっている。また、開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂは、凹部２５ａ，２５ｂの上方を被包しており、組織切取部特定部材２ｅからの開口部押圧部材３ａの離脱を規制している。

この実施例の採取組織切取位置特定具では、図１６に示すように、開口部押圧部材３ａの幅広部３１が、組織切取部特定部材２ｅの開口部押圧部材誘導部２４ａ，２４ｂに侵入し、かつ、切取部特定用開口部２２を開口部押圧部材３ａが被包しない状態とする。そして、この状態にて、摘出された生体器官（例えば、卵巣、肝臓）に、採取組織切取位置特定具を押しつけ、切取部特定用開口部２２の内縁に沿って、切断具にて切り込みを入れる。これにより、切り込みにより囲まれた生体器官部位が、開口部内に侵入する。続いて、開口部押圧部材３ａをスライドさせて、切取部特定用開口部２２が開口部押圧部材３ａにて被包された状態とする。この実施例では、開口部押圧部材３ａは、組織切取部特定部材２ｅの表面に実質的に接触することなく、段部２６ａ、２６ｂ上をスライドする。このため、開口部押圧部材３ａは、開口部２２内に侵入した生体器官部位にも接触することなくスライドする。

そして、開口部押圧部材３ａのスライドを進行させ、開口部押圧部材３ａの幅広部３１の全体が、組織切取部特定部材２ｅの段部欠損部２７ａ，２７ｂに到達すると、図１７に示すように、幅広部３１は、組織切取部特定部材２ｅの段部欠損部２７ａ，２７ｂ内に侵入可能となり、開口部押圧部材３ａを組織切取部特定部材２ｅ側に押圧可能となる。そして、開口部押圧部材３ａを組織切取部特定部材２ｅに押圧し、その状態を維持したまま、組織切取部特定部材２ｅの下面に沿って、切断具を切断具用係止部２３方向に移動させる。これにより、切取部特定用開口部２２の形状に対応した組織片が切断される。

さらに、上述した全ての実施例の採取組織切取位置特定具は、図１８ないし図２１に示すような構成を有するものであってもよい。
図１８は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される採取組織切取位置特定具の組織切取部特定部材の背面図である。図１９は、図１８に示した組織切取部特定部材の拡大平面図である。図２０は、図１８のＧ−Ｇ線拡大断面図である。図２１は、図１８および図１９に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。
この実施例の組織切取部特定部材２ｆは、裏面の少なくとも一方の側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、切断具がスライド可能な切断具誘導部を備えている。このような誘導部を備えることにより、摘出された生体器官より組織片の切断がより容易なものとなる。特に、この実施例では、裏面の両側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、切断具がスライド可能な切断具誘導部５１ａ、５１ｂを備えている。そして、この実施例では、切断具誘導部５１ａ、５１ｂの先端部は、組織切取部特定部材２ｆの一端より突出し、切断具の誘導を容易なものとしている。

この実施例の組織切取部特定部材２ｆでは、切断具誘導部５１ａ、５１ｂは、所定長延びる平板状のものとなっており、図１８ないし図２０に示すように、先端部が自由端となっており、基端部５２ａ，５２ｂが、組織切取部特定部材２ｆの切断具用係止部２３の形成部位に対応する側部に固定されている。さらに、切断具誘導部５１ａ、５１ｂは、組織切取部特定部材２ｆの裏面に実質的に接触せず、両者間には、間隙５３ａ，５３ｂが形成されている。そして、切断具誘導部５１ａ、５１ｂの先端部は、組織切取部特定部材２ｆの一端より突出している。
この実施例の採取組織切取位置特定部材２ｆを摘出された生体器官（例えば、卵巣、肝臓）に、採取組織切取位置特定具を押しつけ、切取部特定用開口部２２の内縁に沿って、切断具にて切り込みを入れる。これにより、切り込みにより囲まれた生体器官部位が、開口部内に侵入する。続いて、開口部押圧部材３を組織切取部特定部材２ｆに押圧し、その状態を維持したまま、組織切取部特定部材２ｆの一端より突出している切断具誘導部５１ａ、５１ｂ上に切断具７を載置する。そして、切断具７を切断具誘導部５１ａ、５１ｂを切断具用係止部２３方向に移動させると、図２１（裏面側から見た図）に示すように、切断具７は、切断具誘導部５１ａ、５１ｂと組織切取部特定部材２ｆの裏面間に挟まれた状態にて、両者間を進行することにより、切取部特定用開口部２２の形状に対応した組織片が切断される。

次に、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存方法について説明する。
本発明の採取組織片ガラス化凍結保存方法は、上述した採取組織片ガラス化凍結保存用具を用いるものであり、使用する採取組織片ガラス化凍結保存用具としては、上述したいずれの実施例のものを用いてもよい。
本発明の採取組織片ガラス化凍結保存方法は、組織切取部特定部材を対象生体組織（例えば、摘出された生体器官）に押圧した状態にて、切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、組織切取部特定部材の表面側に開口部押圧部材を押圧して前記切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより、開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取る組織片採取工程と、採取した組織片をガラス化液に浸漬する組織片ガラス化液浸漬工程と、ガラス化液より組織片を取り出し、組織片凍結保存用プレート上に載置する組織片載置工程と、組織片が載置された組織片凍結保存用プレートを冷却媒体タンク内に投入する投入工程とを行うものである。

そして、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存方法は、卵巣組織片ガラス化凍結保存方法もしくは肝臓組織片ガラス化凍結保存方法に用いることが有効である。
組織片採取工程については、上述した採取組織片ガラス化凍結保存用具において説明した通りである。
組織片ガラス化液浸漬工程は、採取した組織片をガラス化液に浸漬することにより行われる。

ガラス化液としては、従来より用いられているものを使用することができる。具体的には、グリセロール、プロピレングリコール、ジメチルスルホサイド（DMSO）、エチレングリコール、ブタンジオールなどから選択される１種または２種以上の細胞膜透過性凍結保護物質と、シュークロース、トレハロース、パーコール、ポリエチレングリコール、ポリヴィニルピロリドン、ウシ血清アルブミン、フィコールなどから選択される１種または２種以上の細胞膜非透過性凍結保護物質を含有するものが好適である。
また、ガラス化液に浸漬する前に、採取した組織片の平衡液浸漬処理を行うことが好ましい。平衡液としては、細胞膜透過性凍結保護物質の低濃度溶液が好ましい。細胞膜透過性凍結保護物質としては、上述したものが使用できる。
そして、組織片ガラス化液浸漬工程が終了した後、ガラス化液より組織片を取り出し、組織片凍結保存用プレート４上に載置する組織片載置工程が行われる。組織片は、凍結保存用プレート４の孔４２が存在する部分に載置する。
そして、組織片が載置された組織片凍結保存用プレートを冷却媒体タンク内に投入する投入工程が行われる。冷却媒体としては、液体窒素が好適である。

図１は、本発明の採取組織片ガラス化凍結保存用具の一実施例の正面図である。 図２は、図１に示した採取組織片ガラス化凍結保存用具の組織切取部特定部材の背面図である。 図３は、図１のＡ−Ａ線断面図である。 図４は、図１のＢ−Ｂ線断面図である。 図５は、図１のＣ−Ｃ線断面図である。 図６は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の背面図である。 図７は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の背面図である。 図８は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の背面図である。 図９は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の正面図である。 図１０は、図９のＤ−Ｄ線断面図である。 図１１は、図９に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。 図１２は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織切取部特定部材の正面図である。 図１３は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される開口部押圧部材の正面図である。 図１４は、図１２のＥ−Ｅ線断面図である。 図１５は、図１２のＦ−Ｆ線断面図である。 図１６は、図１２ないし図１４に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。 図１７は、図１２ないし図１４に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。 図１８は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される採組織切取部特定部材の背面図である。 図１９は、図１８に示した採取組織切取位置特定具の拡大平面図である。 図２０は、図１８のＧ−Ｇ線拡大断面図である。 図２１は、図１８および図１９に示した実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具の作用を説明するための説明図である。 図２２は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織片凍結保存用プレートの正面図である。 図２３は、本発明の他の実施例の採取組織片ガラス化凍結保存用具に使用される組織片凍結保存用プレートの正面図である。

符号の説明

１ 採取組織片ガラス化凍結保存用具
２ 組織切取部特定部材
３ 開口部押圧部材
４ 組織片凍結保存用プレート
１０ 採取組織切取位置特定具

Claims (17)

1. 採取組織切取位置特定具と、該採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレートとを備える採取組織片ガラス化凍結保存用具であって、
   前記採取組織切取位置特定具は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部と、裏面に設けられ組織切断具の進行を係止するための切断具用係止部とを有する組織切取部特定部材と、前記切取部特定用開口部を被包するように前記組織切取部特定部材の表面側に押圧可能な開口部押圧部材とを備え、
   前記組織片凍結保存用プレートは、前記切取部特定用開口部の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び前記採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えており、かつ、前記採取組織片ガラス化凍結保存用具が、卵巣組織片ガラス化凍結保存用具であることを特徴とする採取組織片ガラス化凍結保存用具。
2. 採取組織切取位置特定具と、該採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を凍結保存するための組織片凍結保存用プレートとを備える採取組織片ガラス化凍結保存用具であって、
   前記採取組織切取位置特定具は、平板状でありかつ所定幅の切取部特定用開口部と、裏面に設けられ組織切断具の進行を係止するための切断具用係止部とを有する組織切取部特定部材と、前記切取部特定用開口部を被包するように前記組織切取部特定部材の表面側に押圧可能な開口部押圧部材とを備え、
   前記組織片凍結保存用プレートは、前記切取部特定用開口部の所定幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ所定長延び前記採取組織切取位置特定具を用いて切り取られた組織片を載置可能な金属性板状部材であるとともに、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を備えており、
   さらに、前記採取組織切取位置特定具は、前記組織切取部特定部材を対象生体組織に押圧した状態にて、前記切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、前記組織切取部特定部材の表面側に前記開口部押圧部材を前記切取部特定用開口部を被包するように押し当て前記切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、前記組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより前記開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取り可能であることを特徴とする採取組織片ガラス化凍結保存用具。
3. 前記切取部特定用開口部は、矩形状であり、前記組織片凍結保存用プレートは、前記矩形状の前記開口部の幅と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、前記矩形状の前記開口部の長さより十分に長い長さを有するものである請求項１または２に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
4. 前記切取部特定用開口部は、円もしくは楕円状であり、前記組織片凍結保存用プレートは、前記開口部の直径または短軸と同じもしくは若干広い幅を有し、かつ、前記開口部の直径および長軸の長さより十分に長い長さを有するものである請求項１または２に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
5. 前記切断具用係止部は、前記切取部特定用開口部より前記組織切取部特定部材の端部側に設けられている請求項１ないし４のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
6. 前記切断具用係止部は、前記切取部特定用開口部付近に設けられている請求項１ないし５のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
7. 前記開口部押圧部材は、透明平板状部材である請求項１ないし６のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
8. 前記組織片凍結保存用プレートは、略矩形状の薄板プレートであり、全体にわたり冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有している請求項１ないし７のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
9. 前記組織片凍結保存用プレートは、銅、銅合金、アルミ、アルミ合金、金、金合金、銀、銀合金から選択された金属により形成されている請求項１ないし８のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
10. 前記組織切取部特定部材は、前記組織切取部特定部材の表面の両側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、前記開口部押圧部材の両側部をスライド可能に収納する開口部押圧部材誘導部を備えている請求項１ないし９のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
11. 前記組織切取部特定部材は、前記組織切取部特定部材の裏面の少なくとも一方の側部に一端側より他端側に延びるように設けられるとともに、前記切断具がスライド可能な切断具誘導部を備えている請求項１ないし１０のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
12. 前記切断具誘導部の先端部は、前記組織切取部特定部材の一端より突出している請求項１１に記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具。
13. 所定長を有する金属性板状部材であり、組織片載置部を有するとともに、少なくとも組織片載置部には、冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有することを特徴とする組織片凍結保存用プレート。
14. 前記組織片凍結保存用プレートは、銅、銅合金、アルミ、アルミ合金、金、金合金、銀、銀合金から選択された金属により形成されている請求項１３に記載の組織片凍結保存用プレート。
15. 前記組織片凍結保存用プレートは、略矩形状の薄板プレートであり、全体にわたり冷却媒体が侵入可能な多数の孔を有している請求項１３または１４に記載の組織片凍結保存用プレート。
16. 請求項１ないし１２のいずれかに記載の採取組織片ガラス化凍結保存用具を用いる採取組織片ガラス化凍結保存方法であって、
    前記組織切取部特定部材を対象生体組織に押圧した状態にて、前記切取部特定用開口部の内縁に沿って切り込みを入れた後、前記組織切取部特定部材の表面側に前記開口部押圧部材を前記切取部特定用開口部を被包するように押し当て前記切り込まれた組織部位を押圧した状態にて、前記組織切取部特定部材の裏面に沿って切断具を移動させることにより前記開口部の形状に対応した形状の組織片を切り取る組織片採取工程と、採取した組織片をガラス化液に浸漬する組織片ガラス化液浸漬工程と、ガラス化液より前記組織片を取り出し、前記組織片凍結保存用プレート上に載置する組織片載置工程と、組織片が載置された組織片凍結保存用プレートを冷却媒体タンク内に投入する投入工程とを行うことを特徴とする採取組織片ガラス化凍結保存方法。
17. 前記採取組織片ガラス化凍結保存方法は、卵巣組織片ガラス化凍結保存方法もしくは肝臓組織片ガラス化凍結保存方法である請求項１６に記載の採取組織片ガラス化凍結保存方法。

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