JP5037684B2 - ドセタキセル高分子誘導体、並びにその製造方法及びその用途 - Google Patents
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Description
本発明は、ドセタキセルの高分子誘導体、並びにその製造方法及びその用途に関する。
ドセタキセルはヨーロッパイチイの針葉の抽出物をベースに半合成されたタキサン系抗がん剤の一つであり、チューブリンの重合を促進して安定な微小管を形成するとともに、その脱重合を抑制し、細胞内においては形態的に異常な微小管束を形成する。これらの作用により細胞の有糸分裂を停止させることが知られている。
タキサン系抗がん剤は一般に水溶性が低く、人体に投与するためには特殊な有機溶媒が使用されている。このような水溶性の低さを克服するために、親水性セグメントと疎水性セグメントとを有するブロック共重合体を用い、疎水性相互作用によってタキサン系抗がん剤を高分子ミセル内に封入し、水溶性を改善する方法が開発されている（特許文献１及び２）。
一方、特許文献３には、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸からなるブロック共重合体に塩酸ドキソルビシンをアミド結合させることによって薬物の水溶性を向上させることができることが示されている。
また、特許文献４には、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸からなるブロック共重合体にＳＮ−３８のフェノール性水酸基をエステル結合させた高分子誘導体が開示されている。
さらに、特許文献５には、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸からなるブロック共重合体にドセタキセルなどのタキサン類をそのアルコール性水酸基を介して結合させた高分子誘導体が開示されている。
また、特許文献４には、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸からなるブロック共重合体にＳＮ−３８のフェノール性水酸基をエステル結合させた高分子誘導体が開示されている。
さらに、特許文献５には、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸からなるブロック共重合体にドセタキセルなどのタキサン類をそのアルコール性水酸基を介して結合させた高分子誘導体が開示されている。
しかしながら、以上の従来技術の存在にもかかわらず、副作用がより軽減され、薬効がより優れたドセタキセル誘導体を製造することが求められていた。
本発明は、以上の課題に鑑みて、ドセタキセルの副作用をより軽減し、より高い薬効を発揮させる為になされたものである。
本発明は、以上の課題に鑑みて、ドセタキセルの副作用をより軽減し、より高い薬効を発揮させる為になされたものである。
本発明者らは、抗がん剤の投与直後の急激な遊離薬物濃度の上昇が副作用の発現に結びつくことから、投与後に遊離薬物量を制御する剤形である徐放性製剤は副作用低減の意味で有用であると考えた。また、ドセタキセルのようなタキサン類では、長時間腫瘍細胞に作用することで有効性を高めることが可能であると考えた。
そこで、より副作用が低く有効性に優れた抗がん剤を開発すべく鋭意努力した結果、ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整することにより、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を調整できることを見出した。また、より高含有率で薬剤を内包させた新規のドセタキセル高分子誘導体を得ることができ、本発明を完成させた。
即ち、本発明は、以下をその要旨とするものである。
（１）ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体を製造する方法であって、
ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整することにより、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を調整する工程を含んでなる方法。
（２）（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率を２８％以上とする、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数を１１以上とすることにより、得られるドセタキセル高分子誘導体から、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で放出されるドセタキセルの放出速度を、２４時間当たり２９％以下に調整する、（１）記載の方法。
（３）ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体であって、
（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率が２８％以上である、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数が１１以上である、ドセタキセル高分子誘導体。
（４）ドセタキセルの放出速度が、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で２４時間当たり２９％以下である、（３）記載のドセタキセル高分子誘導体。
（５）下記一般式（１）
（式中、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ６のアルキル基を示し、Ｌ１は連結基を示し、Ｒは水素原子又はドセタキセルの何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合した状態の分子を示し、ｎは４０〜４５０の整数を示し、ｍ＋ｘは３５〜６０の整数を示し、ｘは、ｍ＋ｘのうちの０％〜９０％を占め、ｘが存在する場合、（ＣＯＣＨＮＨ）のユニットと（ＣＯＣＨ２ＣＨＮＨ）のユニットはランダムに存在する）で表される、（３）又は（４）に記載のドセタキセル高分子誘導体。
（６）（３）〜（５）に記載のドセタキセル高分子誘導体を含有する抗がん剤。
（１）ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体を製造する方法であって、
ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整することにより、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を調整する工程を含んでなる方法。
（２）（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率を２８％以上とする、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数を１１以上とすることにより、得られるドセタキセル高分子誘導体から、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で放出されるドセタキセルの放出速度を、２４時間当たり２９％以下に調整する、（１）記載の方法。
（３）ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体であって、
（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率が２８％以上である、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数が１１以上である、ドセタキセル高分子誘導体。
（４）ドセタキセルの放出速度が、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で２４時間当たり２９％以下である、（３）記載のドセタキセル高分子誘導体。
（５）下記一般式（１）
（６）（３）〜（５）に記載のドセタキセル高分子誘導体を含有する抗がん剤。
本発明によれば、副作用がより軽減され、薬効により優れたドセタキセル高分子誘導体を製造することが可能となる。
図１ドセタキセル高分子誘導体の薬物放出性試験の結果を示すグラフである。黒丸は１４分子のドセタキセルが１分子のポリマーに結合したドセタキセル高分子誘導体（１４ＤＴＸ：実施例１）、白四角は１２分子のドセタキセルが１分子のポリマーに結合したドセタキセル高分子誘導体（１２ＤＴＸ：実施例２）、黒三角は５分子のドセタキセルが１分子のポリマーに結合したドセタキセル高分子誘導体（５ＤＴＸ：比較例１）から遊離したドセタキセル（％）を表わす。
図２図１に示す薬物放出性試験の結果に基づいて、実験開始後２４時間における薬物遊離率を、ポリマーに結合したドセタキセル量に対してプロットしたグラフである。３点から回帰直線を求めた。
図３実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）又はドセタキセル溶液をマウスへ投与した時の血中動態試験の結果を示すグラフである。黒丸はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ５０ｍｇ／ｋｇを投与した場合の血漿中総ドセタキセル濃度を表し、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸから遊離されたドセタキセル濃度を表し、黒三角はドセタキセルの１０％スクロース溶液 １０ｍｇ／ｋｇを投与した場合の血漿中ドセタキセル濃度を表す。各ポイントは３例の平均値、バーは標準偏差を表す。
図４ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の腫瘍体積の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、白三角はドセタキセルのＤＭＳＯ溶液投与群を表し、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群の腫瘍体積の変化をそれぞれ表す。黒矢印は、ドセタキセルのＤＭＳＯ溶液及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングを、白矢印は、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングをそれぞれ表す。
図５ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の体重の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、白三角はドセタキセルのＤＭＳＯ溶液投与群、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群の体重の変化をそれぞれ表す。黒矢印は、ドセタキセルのＤＭＳＯ溶液及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングを、白矢印は、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングをそれぞれ表す。
図６ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の腫瘍体積の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、矢印はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸが投与されたタイミングを示す。
図７ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の体重の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、矢印はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸが投与されたタイミングを示す。
図８健常マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ３０ｍｇ／ｋｇ）、比較例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ ２２ｍｇ／ｋｇ）、及びドセタキセル溶液（１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した際の体重の変化を比較したグラフである。白丸は対照群（無処置）を表し、黒丸は実施例１のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、黒三角は比較例１のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ投与群を表し、白四角はドセタキセル溶液投与群を表す。
図２図１に示す薬物放出性試験の結果に基づいて、実験開始後２４時間における薬物遊離率を、ポリマーに結合したドセタキセル量に対してプロットしたグラフである。３点から回帰直線を求めた。
図３実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）又はドセタキセル溶液をマウスへ投与した時の血中動態試験の結果を示すグラフである。黒丸はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ５０ｍｇ／ｋｇを投与した場合の血漿中総ドセタキセル濃度を表し、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸから遊離されたドセタキセル濃度を表し、黒三角はドセタキセルの１０％スクロース溶液 １０ｍｇ／ｋｇを投与した場合の血漿中ドセタキセル濃度を表す。各ポイントは３例の平均値、バーは標準偏差を表す。
図４ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の腫瘍体積の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、白三角はドセタキセルのＤＭＳＯ溶液投与群を表し、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群の腫瘍体積の変化をそれぞれ表す。黒矢印は、ドセタキセルのＤＭＳＯ溶液及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングを、白矢印は、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングをそれぞれ表す。
図５ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の体重の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、白三角はドセタキセルのＤＭＳＯ溶液投与群、白四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群の体重の変化をそれぞれ表す。黒矢印は、ドセタキセルのＤＭＳＯ溶液及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングを、白矢印は、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇが投与されたタイミングをそれぞれ表す。
図６ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の腫瘍体積の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、矢印はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸが投与されたタイミングを示す。
図７ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞担癌マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を投与した際の体重の変化を示したグラフである。黒丸は対照群（無処置）を表し、黒四角はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、矢印はＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸが投与されたタイミングを示す。
図８健常マウスに実施例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ３０ｍｇ／ｋｇ）、比較例１のドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ ２２ｍｇ／ｋｇ）、及びドセタキセル溶液（１５ｍｇ／ｋｇ）を投与した際の体重の変化を比較したグラフである。白丸は対照群（無処置）を表し、黒丸は実施例１のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ投与群を表し、黒三角は比較例１のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ投与群を表し、白四角はドセタキセル溶液投与群を表す。
本発明のドセタキセル高分子誘導体の製造方法は、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体を製造する方法であって、ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整することにより、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を調整する工程を含んでなる。
本発明におけるブロック共重合体は、１又は２以上のポリエチレングリコールと、１又は２以上のポリアスパラギン酸とを有するものであれば、特に制限されない。また、ポリエチレングリコール及びポリアスパラギン酸以外に、その他の１又は２以上のブロックを有していてもよいが、その場合でも、ブロック共重合体の全質量の通常９０％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９９％以上が、ポリエチレングリコール及びポリアスパラギン酸から構成されることが望ましい。
ドセタキセルをエステル結合させる基本となるブロック共重合体を製造する方法は、所望のブロック共重合体が得られる限り特に限定されないが、例としては特許文献３に記載の方法が挙げられる。即ち、例えばＭｅＯ−ＰＥＧ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２を開始剤として、脱水の有機溶媒中で、Ｎ−カルボキシ−β−ベンジル−Ｌ−アスパルテート（ＢＬＡ−ＮＣＡ）を所望の重合度（アミノ酸ユニット数、即ち、式のｍ＋ｘ）となるように添加して反応させ、アルカリ加水分解によりベンジル基を除去することにより得ることができる。
本発明において「ドセタキセル高分子誘導体」という語は、ドセタキセルの１位、７位、１０位、及び１３位の３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロシキ−３−フェニルプロピオネート中に存在する計４箇所の水酸基のいずれか１つ又は複数の水酸基が、ブロック共重合体中に存在するカルボキシル基にエステル結合した構造を意味する。ドセタキセルの複数の水酸基がブロック共重合体にエステル結合している場合、１分子のドセタキセルが同一のブロック共重合体中の複数のカルボキシル基にエステル結合しているか又は２以上のブロック共重合体がドセタキセルを介して架橋された構造となり得、いずれの構造も「ドセタキセル高分子誘導体」に含まれる。
ブロック共重合体にドセタキセルを結合させる方法は、特に制限されるものではないが、例えば、ブロック共重合体とドセタキセルを有機溶媒中でジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）等の縮合剤を用いてポリアスバラギン酸のカルボキシル基とドセタキセルの水酸基とを縮合する等の方法が挙げられる。かかる方法の具体的な操作や条件としては、例えば、後述の実施例１、２及び比較例１に記載の操作や条件が挙げられる。
本発明において「ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合」とは、ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率をいい、「ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合数」とは、ブロック共重合体１分子当たりに結合するドセタキセル分子の数をいう。
本発明者等は、ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整することにより、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を調整することが可能となるのを見出した。すなわち、ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合を高くするほど、また、ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合数を多くするほど、得られるドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの放出速度を遅くすることができ、ドセタキセル高分子誘導体の徐放性能を向上させることが可能となる。これにより、副作用がより軽減され、薬効がより優れたドセタキセル高分子誘導体を製造することが可能となる。
具体的には、ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率を、通常２８％以上、中でも３０％以上、更には３２％以上とすることが好ましい。
また、ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数を、通常１１個以上、中でも１２個以上、更には１３個以上とすることが好ましい。
なお、これらの値は通常、複数のポリマーの平均値である。
また、ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数を、通常１１個以上、中でも１２個以上、更には１３個以上とすることが好ましい。
なお、これらの値は通常、複数のポリマーの平均値である。
これにより、ドセタキセル高分子誘導体からのドセタキセルの２４時間当たりの放出速度を、通常２９％以下、中でも２３％以下、更には１５％以下とすることが可能となる。
なお、ここでいう「放出速度」は、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で測定されるドセタキセルの放出速度をいうものとする。
なお、ここでいう「放出速度」は、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で測定されるドセタキセルの放出速度をいうものとする。
ブロック共重合体に対するドセタキセルの結合割合及び／又は結合数を調整する手法は、制限されるものではないが、例えば、ブロック共重合体にドセタキセルを結合させる際に、ブロック共重合体の使用量とドセタキセルの使用量との比率を調整する手法等が挙げられる。
上述の本発明の製造方法により得られるドセタキセル高分子誘導体の一部は新規であり、かかる新規なドセタキセル高分子誘導体も本発明を構成する。
すなわち、本発明のドセタキセル高分子誘導体は、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体であって、（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率が２８％以上である、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数が１１以上であることを特徴とする。
すなわち、本発明のドセタキセル高分子誘導体は、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体であって、（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率が２８％以上である、及び／又は、（ｉｉ）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数が１１以上であることを特徴とする。
本発明のドセタキセル高分子誘導体は、好ましくは、下記一般式（１）で表される。
一般式（１）中、Ｒ１は水素原子又はＣ１〜Ｃ６のアルキル基を表し、Ｌ１は連結基を表し、Ｒは水素原子又はドセタキセルの何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合した状態の分子を示し、ｎは４０〜４５０の整数を表し、ｍ＋ｘは３５〜６０の整数を表す。但し、ｘは、ｍ＋ｘのうちの０％〜９０％を占め、ｘが存在する場合、（ＣＯＣＨＮＨ）のユニットと（ＣＯＣＨ２ＣＨＮＨ）のユニットはランダムに存在する。
一般式（１）におけるＬ１連結基は、ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸を連結しうる限り特に限定されないが、好ましくは、Ｒ５（ＣＨ２）ｐＲ６であり、Ｒ５はＯであり、Ｒ６はＮＨであり、そしてｐは１〜６の整数である。
一般式（１）において、ｎは４０〜４５０の整数であるが、６０〜４１０の整数が好ましく、特に１１０〜３４０の整数が好ましい。また、ｍ＋ｘは３５〜６０の整数であるが、特に３６〜５０の整数であることが好ましい。これらｎ、ｍ及びｘの数値は平均値である事はいうまでも無い。
本発明のドセタキセル高分子誘導体は、水中でポリエチレングリコール等の水溶性高分子を外殻とした高分子ミセルを形成してもよい。高分子ミセルを形成した場合の粒子径は、人体に投与される事を考慮すれば、１０μｍ以下であることが好ましく、５μｍ以下であることがより好ましい。特に、静脈内投与で用いる場合は、２００ｎｍ以下であることが好ましい。
本発明のドセタキセル高分子誘導体は、医薬製剤、特に抗がん剤に用いることが好ましい。本発明のドセタキセル高分子誘導体を含有する製剤としては、液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、特に凍結乾燥製剤が好ましい。いずれの場合も、製剤化のために一般に用いられる希釈剤、賦形剤、等張剤、ｐＨ調整剤等を用いることができる。
本発明のドセタキセル高分子誘導体の投与ルートとしては、特に限定されないが、皮下、静脈、動脈、局所などの非経口投与が好ましく、特に静脈内注射が好ましい。
本発明のドセタキセル高分子誘導体の投与量は、用法、患者の年齢、性別、患者の程度およびその他の条件により適宜選択される。限定されるものではないが、通常、ドセタキセル換算で、１日当たり１〜１０００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１０〜７００ｍｇ／ｍ２を投与することができる。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。尚、本明細書では、ドセタキセルを「ＤＴＸ」と記載することがある。
また、ドセタキセル高分子誘導体を、その高分子の略称に「−ＤＴＸ」を付してあらわす場合がある。例えば、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体にドセタキセルが結合した高分子誘導体を「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ」のように表す。
また、ドセタキセル高分子誘導体１分子当たりのドセタキセル結合数ｎが既知の場合は、この結合数ｎを用いて「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ｎＤＴＸ」、或いは単に「ｎＤＴＸ」と記載する場合がある。例えば、１分子当たりのドセタキセル結合数が１４のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸは、「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ」、或いは単に「１４ＤＴＸ」と記載する場合がある。
また、ドセタキセル高分子誘導体を、その高分子の略称に「−ＤＴＸ」を付してあらわす場合がある。例えば、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体にドセタキセルが結合した高分子誘導体を「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ」のように表す。
また、ドセタキセル高分子誘導体１分子当たりのドセタキセル結合数ｎが既知の場合は、この結合数ｎを用いて「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ｎＤＴＸ」、或いは単に「ｎＤＴＸ」と記載する場合がある。例えば、１分子当たりのドセタキセル結合数が１４のＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸは、「ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ」、或いは単に「１４ＤＴＸ」と記載する場合がある。
実施例１
１４ＤＴＸの合成
ドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）の合成
特許文献３に記載の方法に従って合成したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの）であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（ＰＥＧの平均分子量：１０，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０、アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）５６０ｍｇを、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（関東化学）１０ｍＬに溶解後、予め減圧乾燥を施したドセタキセル３水和物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）１．０ｇを添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）１４０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）１７７μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。この反応液を、ヘキサンと酢酸エチルとの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを１００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５倍に希釈し限外ろ過（ミリポア社製 ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行った。この限外ろ過の操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ １０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ ６７２ｍｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り１４分子と計算された。
１４ＤＴＸの合成
ドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）の合成
特許文献３に記載の方法に従って合成したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの）であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（ＰＥＧの平均分子量：１０，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０、アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）５６０ｍｇを、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（関東化学）１０ｍＬに溶解後、予め減圧乾燥を施したドセタキセル３水和物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）１．０ｇを添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）１４０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）１７７μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。この反応液を、ヘキサンと酢酸エチルとの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを１００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５倍に希釈し限外ろ過（ミリポア社製 ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行った。この限外ろ過の操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ １０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ ６７２ｍｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り１４分子と計算された。
１４ＤＴＸの放出性
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（１４ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は３５％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定した。薬物遊離率（％）はミセル調製時の２３３ｎｍにおける吸光度から求めた薬物含量を基に計算した。その結果、実験開始から３時間で３．０％、２４時間で９．０％、４８時間で１０．７％の薬物遊離が観察された。
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（１４ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は３５％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定した。薬物遊離率（％）はミセル調製時の２３３ｎｍにおける吸光度から求めた薬物含量を基に計算した。その結果、実験開始から３時間で３．０％、２４時間で９．０％、４８時間で１０．７％の薬物遊離が観察された。
実施例２
１２ＤＴＸの合成
メトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ベンジルエステル共重合体ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−Ａｃ（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの、ＰＥＧの平均分子量：１０，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０）を、臭化水素と酢酸の混合溶液（２５％ＨＢｒ／ＡｃＯＨ：国産化学）で処理しベンジルエステルを脱保護したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）１．０ｇを無水ＤＭＦ（関東化学）２０ｍＬに溶解後、ドセタキセル無水物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）を２．２ｇ添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）３４０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）４４０μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。反応液をヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを３００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５００ｍｌにし限外ろ過（ミリポア社製 ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行い１００ｍｌまで濃縮した。この操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ ２０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ １．２２ｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り１２分子と計算された。
１２ＤＴＸの合成
メトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ベンジルエステル共重合体ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−Ａｃ（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの、ＰＥＧの平均分子量：１０，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０）を、臭化水素と酢酸の混合溶液（２５％ＨＢｒ／ＡｃＯＨ：国産化学）で処理しベンジルエステルを脱保護したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）１．０ｇを無水ＤＭＦ（関東化学）２０ｍＬに溶解後、ドセタキセル無水物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）を２．２ｇ添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）３４０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）４４０μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。反応液をヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを３００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５００ｍｌにし限外ろ過（ミリポア社製 ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行い１００ｍｌまで濃縮した。この操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ ２０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ １．２２ｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り１２分子と計算された。
１２ＤＴＸの放出性
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１２ＤＴＸ（１２ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は３０％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度をＨＰＬＣで測定し、実施例１と同様に薬物遊離率（％）を求めた。その結果、実験開始から３時間で７．８％、２４時間で２４．１％、４８時間で３１．１％の薬物遊離が観察された。
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１２ＤＴＸ（１２ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は３０％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度をＨＰＬＣで測定し、実施例１と同様に薬物遊離率（％）を求めた。その結果、実験開始から３時間で７．８％、２４時間で２４．１％、４８時間で３１．１％の薬物遊離が観察された。
比較例１
５ＤＴＸの合成
特許文献３に記載の方法に従って合成したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの）、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（ＰＥＧの平均分子量：１２，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０、アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）５００ｍｇを無水ＤＭＦ（関東化学）１０ｍＬに溶解後、ドセタキセル３水和物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）を１．０５ｇ添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）１５０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）２００μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。反応液をヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを１００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５倍に希釈し限外ろ過（ミリポア社製ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行った。この限外ろ過の操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ １０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ ５２０ｍｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り５分子と計算された。
５ＤＴＸの合成
特許文献３に記載の方法に従って合成したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（但し、ポリアスパラギン酸の片末端をアセチル化したもの）、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−Ａｃ（ＰＥＧの平均分子量：１２，０００、アスパラギン酸平均残基数：４０、アスパラギン酸側鎖はカルボキシル基）５００ｍｇを無水ＤＭＦ（関東化学）１０ｍＬに溶解後、ドセタキセル３水和物（ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ Ｔａｉｗａｎ，Ｌｔｄ）を１．０５ｇ添加した。続いて、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬）１５０ｍｇ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（国産化学）２００μＬを順に添加し、室温にて一晩攪拌した。反応液をヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。このポリマーを１００ｍＬの精製水に懸濁して高分子ミセルとした。この液を精製水で５倍に希釈し限外ろ過（ミリポア社製ラボスケールＴＦＦシステム ＭＷＣＯ＝１００，０００）を行った。この限外ろ過の操作を５回繰り返し行なった後、凍結乾燥を行った。得られたポリマーを無水ＤＭＦ １０ｍＬに溶解し、ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液（体積比１：１）５００ｍＬに滴下しポリマーを晶析後、吸引ろ過した。さらにポリマーを粉末のまま同混合溶媒５００ｍＬに入れ洗浄し、吸引ろ過後、室温にて１晩減圧乾燥を行い、淡黄色粉末であるＰＥＧ−ｐＡｓｐ−ＤＴＸ ５２０ｍｇを得た。その中から１ｍｇを秤量し、精製水とエタノールの混合溶液（体積比１：１）１０ｍＬに溶解した。その溶液の２３３ｎｍにおける吸光度からドセタキセルの結合量は１ポリマー当り５分子と計算された。
５ＤＴＸの放出性
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（５ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は１２．５％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度はＨＰＬＣで測定し、実施例１と同様に薬物遊離率（％）を求めた。その結果、実験開始から１時間で２１．９％の遊離が観察された。薬物遊離率は２時間で２８．６％、２４時間で６８．０％、４８時間で７５．１％であった。
３７℃に予め加温した０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）９５０μＬに対し、上記により得られたＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（５ＤＴＸ：アスパラギン酸の総数に対する結合ドセタキセルの分子数の割合は１２．５％）ミセル５０μＬを添加し、薬物遊離実験を開始した（ＤＴＸ最終濃度１０μｇ／ｍＬ）。経時的にサンプルを５０μＬ回収し、代わりに同緩衝液で液量を補充した。回収サンプル中の遊離ＤＴＸ濃度はＨＰＬＣで測定し、実施例１と同様に薬物遊離率（％）を求めた。その結果、実験開始から１時間で２１．９％の遊離が観察された。薬物遊離率は２時間で２８．６％、２４時間で６８．０％、４８時間で７５．１％であった。
実施例１、２及び比較例１で得られた薬物遊離率の経時変化を図１に示す。また、２４時間の薬物遊離率をドセタキセルの結合量に対してプロットして求めた直線を図２に示す。
実施例３
ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸを用いたマウス血中動態試験
１）高分子ミセルの調製
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）をＤＴＸ換算で１０ｍｇ、サンプルバイアルに精秤し、精製水を１ｍＬ添加して懸濁した。一昼夜４℃で撹拌した後、バイオディスラプター（日本精機製作所Ｈｉｇｈ Ｐｏｗｅｒ Ｕｎｉｔ）を用いて、氷冷下で１０分間超音波処理し、０．２２μｍのフィルター［ミリポア、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）ＧＰ ＰＥＳ］でろ過し、ろ液を回収した。そのろ液をゲルろ過（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス、ＰＤ−１０、溶離液：１０％スクロース溶液）し、回収した高分子ミセル画分（平均粒子径１２０ｎｍ）を以下の実験に用いた。
ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸを用いたマウス血中動態試験
１）高分子ミセルの調製
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）をＤＴＸ換算で１０ｍｇ、サンプルバイアルに精秤し、精製水を１ｍＬ添加して懸濁した。一昼夜４℃で撹拌した後、バイオディスラプター（日本精機製作所Ｈｉｇｈ Ｐｏｗｅｒ Ｕｎｉｔ）を用いて、氷冷下で１０分間超音波処理し、０．２２μｍのフィルター［ミリポア、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）ＧＰ ＰＥＳ］でろ過し、ろ液を回収した。そのろ液をゲルろ過（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス、ＰＤ−１０、溶離液：１０％スクロース溶液）し、回収した高分子ミセル画分（平均粒子径１２０ｎｍ）を以下の実験に用いた。
２）動物実験
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（日本チャールス・リバー（株）、７週齢）に上記のＤＴＸ高分子ミセル（ドセタキセル換算濃度５ｍｇ／ｍＬ）をＤＴＸとして５０ｍｇ／ｋｇになるよう、エーテル麻酔下、尾静脈内投与した（ｎ＝３）。対照として、ドセタキセル溶液を１０ｍｇ／ｋｇになるよう同様に投与した（ｎ＝３）。但し、ドセタキセル溶液は、タキソテール（登録商標）注２０ｍｇ（サノフィ・アベンティス株式会社）に添付溶解液（１３％エタノール）を加えて溶解し（１０ｍｇ／ｍＬ）、１０％スクロース溶液で１０倍希釈して調製した（１ｍｇ／ｍＬ）。１時点で１匹のマウスを用い、投与後５分、１、６、２４、４８時間目にエーテル麻酔下で採血した。その血液を４℃で遠心分離後、血漿を回収し、測定まで−３０℃で保存した。
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（日本チャールス・リバー（株）、７週齢）に上記のＤＴＸ高分子ミセル（ドセタキセル換算濃度５ｍｇ／ｍＬ）をＤＴＸとして５０ｍｇ／ｋｇになるよう、エーテル麻酔下、尾静脈内投与した（ｎ＝３）。対照として、ドセタキセル溶液を１０ｍｇ／ｋｇになるよう同様に投与した（ｎ＝３）。但し、ドセタキセル溶液は、タキソテール（登録商標）注２０ｍｇ（サノフィ・アベンティス株式会社）に添付溶解液（１３％エタノール）を加えて溶解し（１０ｍｇ／ｍＬ）、１０％スクロース溶液で１０倍希釈して調製した（１ｍｇ／ｍＬ）。１時点で１匹のマウスを用い、投与後５分、１、６、２４、４８時間目にエーテル麻酔下で採血した。その血液を４℃で遠心分離後、血漿を回収し、測定まで−３０℃で保存した。
３）血漿中ＤＴＸ濃度の測定
ａ）総ＤＴＸ濃度の測定
ポリマー結合型のＤＴＸを加水分解することにより遊離型とし、総ＤＴＸを以下のように測定した。即ち、回収した血漿５０μＬに対し、５０ｍｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ３水溶液２００μＬ、３０％Ｈ２Ｏ２４００μＬ、ジクロロメタン３００μＬをこの順序で加え、室温で３時間撹拌した。続いて、遠心分離（フナコシ、チビタン、１０，０００ｒｐｍ、１分間）を室温で行い、有機相を回収した。残った水相に、再びジクロロメタン３００μＬを加え、室温で１分間激しく攪拌した。同様の遠心分離で有機相を回収し、ひとつにまとめ、遠心エバポレーターで、減圧乾固した。乾固したサンプルに１００μＬのパクリタキセル／５０％アセトリトリル（２０μｇ／ｍＬ）を添加し、溶解した。これをＨＰＬＣサンプルバイアルに充填し、以下の条件でＨＰＬＣ分析した。内部標準として用いたパクリタキセルに由来するピーク面積に対するＤＴＸのピーク面積比に基づき、サンプル中のＤＴＸ濃度を計算した。
ａ）総ＤＴＸ濃度の測定
ポリマー結合型のＤＴＸを加水分解することにより遊離型とし、総ＤＴＸを以下のように測定した。即ち、回収した血漿５０μＬに対し、５０ｍｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ３水溶液２００μＬ、３０％Ｈ２Ｏ２４００μＬ、ジクロロメタン３００μＬをこの順序で加え、室温で３時間撹拌した。続いて、遠心分離（フナコシ、チビタン、１０，０００ｒｐｍ、１分間）を室温で行い、有機相を回収した。残った水相に、再びジクロロメタン３００μＬを加え、室温で１分間激しく攪拌した。同様の遠心分離で有機相を回収し、ひとつにまとめ、遠心エバポレーターで、減圧乾固した。乾固したサンプルに１００μＬのパクリタキセル／５０％アセトリトリル（２０μｇ／ｍＬ）を添加し、溶解した。これをＨＰＬＣサンプルバイアルに充填し、以下の条件でＨＰＬＣ分析した。内部標準として用いたパクリタキセルに由来するピーク面積に対するＤＴＸのピーク面積比に基づき、サンプル中のＤＴＸ濃度を計算した。
ｂ）遊離ＤＴＸ濃度の測定
回収した血漿５０μＬに対し、定量用内部標準物質としてのパクリタキセル／５０％アセトリトリル（２０μｇ／ｍＬ）２０μＬ、酢酸エチル３００μＬをこの順序で加え、室温で１分間激しく攪拌した。続いて、遠心分離（フナコシ、チビタン、１０，０００ｒｐｍ、１分間）を室温で行い、有機相を回収した。残った水相に、再び酢酸エチル３００μＬを加え、室温で１分間激しく攪拌した。同様の遠心分離で有機相を回収し、ひとつにまとめ、遠心エバポレーターで、減圧乾固した。乾固したサンプルに１００μＬの５０％アセトリトリルを添加し、溶解した。これをＨＰＬＣサンプルバイアルに充填し、同様にＨＰＬＣ分析した。
回収した血漿５０μＬに対し、定量用内部標準物質としてのパクリタキセル／５０％アセトリトリル（２０μｇ／ｍＬ）２０μＬ、酢酸エチル３００μＬをこの順序で加え、室温で１分間激しく攪拌した。続いて、遠心分離（フナコシ、チビタン、１０，０００ｒｐｍ、１分間）を室温で行い、有機相を回収した。残った水相に、再び酢酸エチル３００μＬを加え、室温で１分間激しく攪拌した。同様の遠心分離で有機相を回収し、ひとつにまとめ、遠心エバポレーターで、減圧乾固した。乾固したサンプルに１００μＬの５０％アセトリトリルを添加し、溶解した。これをＨＰＬＣサンプルバイアルに充填し、同様にＨＰＬＣ分析した。
ｃ）分析条件
ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。特に記載がない場合、ＤＴＸに関するＨＰＬＣ分析は、すべて同条件で行った。
システム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍ
カラム：Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ（４．６φ×１５０ｍＭ）（４０℃）
移動相：水／アセトニトリル＝５５／４５
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ（２３３ｎｍ）
インジェクション体積：２０μＬ
ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。特に記載がない場合、ＤＴＸに関するＨＰＬＣ分析は、すべて同条件で行った。
システム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍ
カラム：Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ（４．６φ×１５０ｍＭ）（４０℃）
移動相：水／アセトニトリル＝５５／４５
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ（２３３ｎｍ）
インジェクション体積：２０μＬ
４）血漿中濃度時間推移の測定結果
結果を図３に示す。速やかに消失するドセタキセル溶液に対し、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸの投与後は、総ＤＴＸとして高濃度で長時間持続した。ドセタキセル高分子誘導体のミセルの場合、総ＤＴＸとして長時間高濃度で血漿中に滞留することが明らかとなった。また、高分子ミセル投与後、血漿中に遊離ＤＴＸが検出された。その遊離ＤＴＸ濃度は総ＤＴＸ濃度の１／１００程度で推移した。
結果を図３に示す。速やかに消失するドセタキセル溶液に対し、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸの投与後は、総ＤＴＸとして高濃度で長時間持続した。ドセタキセル高分子誘導体のミセルの場合、総ＤＴＸとして長時間高濃度で血漿中に滞留することが明らかとなった。また、高分子ミセル投与後、血漿中に遊離ＤＴＸが検出された。その遊離ＤＴＸ濃度は総ＤＴＸ濃度の１／１００程度で推移した。
実施例４
（ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞を用いた薬効試験）
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を用い、以下の実験を行った。ＰＣ−３細胞は、住商ファーマインターナショナル株式会社を介し、ＡＴＣＣから購入した。ＰＣ−３細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた。細胞を生理食塩水に懸濁し、雄性ヌードマウス［Ｂａｌｂ ｎｕ／ｎｕ、５週齢、日本チャールス・リバー（株）］１匹当たり３×１０６個／１００μＬになるよう背部皮下に接種した。その後１５日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が８１．６±５．０ｍｍ３（平均±ＳＥ。但しＳＥは標準誤差を表わす。以下も同様とする。）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日おきに計３回の尾静脈内投与とし、以下の４群（ｎ＝８）で腫瘍体積および体重の経時変化を測定した。（１）コントロール（無処理）、（２）ドセタキセルＤＭＳＯ溶液１５ｍｇ／ｋｇ、（３）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ、（４）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ（投与量はドセタキセル換算量ｍｇ／ｋｇ／注射）。但し、（４）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇに関しては、副作用である体重減少が見られなかったため、追加で更に４回投与を行った。腫瘍体積は電子ノギス［（株）ミツトヨ］で腫瘍の長径（ａ ｍｍ）と短径（ｂ ｍｍ）を測定し、下式に基づき、計算した。
［式Ｉ］
腫瘍体積（ｍｍ３）＝ａ×ｂ２／２
（ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞を用いた薬効試験）
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を用い、以下の実験を行った。ＰＣ−３細胞は、住商ファーマインターナショナル株式会社を介し、ＡＴＣＣから購入した。ＰＣ−３細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた。細胞を生理食塩水に懸濁し、雄性ヌードマウス［Ｂａｌｂ ｎｕ／ｎｕ、５週齢、日本チャールス・リバー（株）］１匹当たり３×１０６個／１００μＬになるよう背部皮下に接種した。その後１５日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が８１．６±５．０ｍｍ３（平均±ＳＥ。但しＳＥは標準誤差を表わす。以下も同様とする。）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日おきに計３回の尾静脈内投与とし、以下の４群（ｎ＝８）で腫瘍体積および体重の経時変化を測定した。（１）コントロール（無処理）、（２）ドセタキセルＤＭＳＯ溶液１５ｍｇ／ｋｇ、（３）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ、（４）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ（投与量はドセタキセル換算量ｍｇ／ｋｇ／注射）。但し、（４）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇに関しては、副作用である体重減少が見られなかったため、追加で更に４回投与を行った。腫瘍体積は電子ノギス［（株）ミツトヨ］で腫瘍の長径（ａ ｍｍ）と短径（ｂ ｍｍ）を測定し、下式に基づき、計算した。
［式Ｉ］
腫瘍体積（ｍｍ３）＝ａ×ｂ２／２
腫瘍体積の変化を図４に、体重の変化を図５に示す。
ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群は何れもコントロール群と比較して腫瘍の増殖を抑制した。ドセタキセルＤＭＳＯ溶液１５ｍｇ／ｋｇにおいても腫瘍の増殖を強く抑制したが、著しい体重の減少が見られた。
ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １５ｍｇ／ｋｇ投与群及びＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群は何れもコントロール群と比較して腫瘍の増殖を抑制した。ドセタキセルＤＭＳＯ溶液１５ｍｇ／ｋｇにおいても腫瘍の増殖を強く抑制したが、著しい体重の減少が見られた。
一方、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ ２０ｍｇ／ｋｇ投与群においては、３回の投与で体重の減少が見られなかったため、追加で４回投与を行ったが、追加投与後も体重の減少が見られなかった。
以上のことから、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸは、きわめて副作用が低く、優れた治療効果を有することが明らかとなった。
以上のことから、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸは、きわめて副作用が低く、優れた治療効果を有することが明らかとなった。
実施例５
（ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を用いた薬効試験）
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を用い、以下の実験を行った。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、ＤＳファーマバイオメディカル株式会社を介し、ＥＣＡＣＣから購入した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた。細胞を生理食塩水に懸濁し、雌性ヌードマウス［Ｂａｌｂ ｎｕ／ｎｕ、５週齢、日本チャールス・リバー（株）］１匹当たり３×１０６個／１００μＬになるよう背部皮下に接種した。その後２１日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が７０．８±３．７ｍｍ３（平均±ＳＥ）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日おきに計３回の尾静脈内投与とし、以下の２群（ｎ＝８）で腫瘍体積および体重を週３回測定した。（１）コントロール（無処理）、（２）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １０ｍｇ／ｋｇ（投与量はドセタキセル換算量ｍｇ／ｋｇ／注射）。腫瘍体積は実施例２と同様の方法で測定、計算した。腫瘍体積の変化を図６に、体重の変化を図７に示す。
（ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を用いた薬効試験）
実施例１で得たドセタキセル高分子誘導体（ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ）を用い、以下の実験を行った。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、ＤＳファーマバイオメディカル株式会社を介し、ＥＣＡＣＣから購入した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた。細胞を生理食塩水に懸濁し、雌性ヌードマウス［Ｂａｌｂ ｎｕ／ｎｕ、５週齢、日本チャールス・リバー（株）］１匹当たり３×１０６個／１００μＬになるよう背部皮下に接種した。その後２１日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が７０．８±３．７ｍｍ３（平均±ＳＥ）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日おきに計３回の尾静脈内投与とし、以下の２群（ｎ＝８）で腫瘍体積および体重を週３回測定した。（１）コントロール（無処理）、（２）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ １０ｍｇ／ｋｇ（投与量はドセタキセル換算量ｍｇ／ｋｇ／注射）。腫瘍体積は実施例２と同様の方法で測定、計算した。腫瘍体積の変化を図６に、体重の変化を図７に示す。
実施例６
（健常マウスを用いた体重変化試験）
雄性の健常マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、６−７週齢、日本チャールス・リバー（株））に対し、（ｉ）ドセタキセル溶液、（ｉｉ）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（実施例１）、（ｉｉｉ）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（比較例１）の３検体を４日毎に計３回尾静脈内投与し、体重の経時変化を投与後４週間に亘り比較した。ただし、ドセタキセル溶液は、タキソテール（登録商標）注２０ｍｇ（サノフィ・アベンティス株式会社）に添付溶解液（１３％エタノール）を加えて溶解し（１０ｍｇ／ｍＬ）、１０％スクロース溶液で１０倍希釈して（１ｍｇ／ｍＬ）用いた。
投与開始時の体重を１００％として計算した各投与群（ｎ＝１から２）の体重の経時変化を図８に示す。ドセタキセル溶液１５ｍｇ／ｋｇの３回投与により、投与開始時と比較して最大２４．１％（投与後１４日目）の体重減少が引き起こされた。ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（比較例１）２２ｍｇ／ｋｇの３回投与により、最大２９．８％（投与後１５日目）の体重減少が引き起こされ、溶液投与群と比較的近似した推移を示した。一方、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（実施例１）は比較例１の約１．４倍の投与量である３０ｍｇ／ｋｇの３回投与にも関わらず、無処理群と大差ない体重変化を示した。以上のことから、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸは体重減少がほとんど無く、副作用を低く抑えられることが明らかとなった。
（健常マウスを用いた体重変化試験）
雄性の健常マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、６−７週齢、日本チャールス・リバー（株））に対し、（ｉ）ドセタキセル溶液、（ｉｉ）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（実施例１）、（ｉｉｉ）ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（比較例１）の３検体を４日毎に計３回尾静脈内投与し、体重の経時変化を投与後４週間に亘り比較した。ただし、ドセタキセル溶液は、タキソテール（登録商標）注２０ｍｇ（サノフィ・アベンティス株式会社）に添付溶解液（１３％エタノール）を加えて溶解し（１０ｍｇ／ｍＬ）、１０％スクロース溶液で１０倍希釈して（１ｍｇ／ｍＬ）用いた。
投与開始時の体重を１００％として計算した各投与群（ｎ＝１から２）の体重の経時変化を図８に示す。ドセタキセル溶液１５ｍｇ／ｋｇの３回投与により、投与開始時と比較して最大２４．１％（投与後１４日目）の体重減少が引き起こされた。ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−５ＤＴＸ（比較例１）２２ｍｇ／ｋｇの３回投与により、最大２９．８％（投与後１５日目）の体重減少が引き起こされ、溶液投与群と比較的近似した推移を示した。一方、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸ（実施例１）は比較例１の約１．４倍の投与量である３０ｍｇ／ｋｇの３回投与にも関わらず、無処理群と大差ない体重変化を示した。以上のことから、ＰＥＧ−ｐＡｓｐ−１４ＤＴＸは体重減少がほとんど無く、副作用を低く抑えられることが明らかとなった。
本発明は、ドセタキセル高分子誘導体が用いられる抗がん剤等の医薬製剤等の分野で、好適に利用することができる。
Claims (6)
- ポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸とを含んでなるブロック共重合体のアスパラギン酸側鎖のカルボキシル基に、ドセタキセルが有する何れか１つ又は複数の水酸基がエステル結合してなるドセタキセル高分子誘導体であって、
（ｉ）ブロック共重合体１分子当たりのアスパラギン酸繰り返し単位の総数に対する、結合するドセタキセル分子の数の比率が２８％以上である、及び／又は、（ii）ブロック共重合体１分子当たり結合するドセタキセル分子の数が１１以上である、ドセタキセル高分子誘導体。 - ドセタキセルの放出速度が、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で２４時間当たり２９％以下である、請求項１に記載のドセタキセル高分子誘導体。
- 下記一般式（１）
で表され、
但し、（ｉ）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数のｍ＋ｘに対する比率が２８％以上に制限されている、及び／又は（ii）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数が１１以上に制限されている、請求項１に記載のドセタキセル高分子誘導体。 - 下記一般式（１）
で表され、
但し、（ｉ）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数のｍ＋ｘに対する比率が２８％以上に制限されている、及び／又は（ii）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数が１１以上に制限されていることによって、ドセタキセルの放出速度が、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で２４時間当たり２９％以下に抑制された、請求項１に記載のドセタキセル高分子誘導体。 - 下記一般式（１）
で表され、
但し、（ｉ）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数のｍ＋ｘに対する比率が２８％以上に制限されている、及び／又は（ii）Ｒのうちドセタキセル分子に対応する基の数が１１以上に制限されていることによって、ドセタキセルの放出速度が、０．１ＭのｐＨ７．４リン酸ナトリウム緩衝液中、３７℃で２４時間当たり２９％以下に抑制されており、水溶性高分子からなる外殻を有し粒径が２００ｎｍ以下である高分子ミセルの形態にして静脈内に投与した場合、抗腫瘍効果を発揮しながらも当該投与後の検体の体重減少が抑制される、請求項１に記載のドセタキセル高分子誘導体。 - 請求項１〜５の何れか１項に記載のドセタキセル高分子誘導体を含有する抗がん剤。
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