JP4938688B2 - セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードするポリヌクレオチド - Google Patents
セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードするポリヌクレオチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP4938688B2 JP4938688B2 JP2007550536A JP2007550536A JP4938688B2 JP 4938688 B2 JP4938688 B2 JP 4938688B2 JP 2007550536 A JP2007550536 A JP 2007550536A JP 2007550536 A JP2007550536 A JP 2007550536A JP 4938688 B2 JP4938688 B2 JP 4938688B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- seq
- sequence
- polynucleotide
- cellobiohydrolase activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 0 CN*N1CC1 Chemical compound CN*N1CC1 0.000 description 2
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01091—Cellulose 1,4-beta-cellobiosidase (3.2.1.91)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
セルロースは、β−1,4−結合により共有結合される単純糖グルコースのポリマーである。多くの微生物は、β−結合されたグルカンを加水分解する酵素である。それらの酵素は、エンドグルカナーゼ、セロビオヒドロラーゼ及びβ−グルコシダーゼを包含する。エンドグルカナーゼは、セロビオヒドロラーゼにより攻撃するために、ランダム位置でセルロースポリマーを消化し、それを開環する。セロビオヒドロラーゼは、セルロースポリマーの末端からセロビオースの分子を連続的に開放する。
セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド及び前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを供給することが本発明の目的である。
本発明は、
(a)配列番号2の成熟ポリペプチドと、少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成るポリペプチド;
(b)(i)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、(ii)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列を含んで成るゲノムDNA配列、又は(iii)(i)又は(ii)の相補的鎖に対して、少なくとも中位の高い緊縮条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及び
(c)配列番号2の成熟ポリペプチドの1又は複数のアミノ酸の保存的置換、欠失、及び/又は挿入を含んで成る変異体から成る群から選択された、セロビオヒドロラーゼ活性を有する単離されたポリペプチドに関する。
(a)配列番号2の成熟ポリペプチドと、少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成るポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;
(b)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列と少なくとも60%の同一性を有するポリヌクレオチド;及び
(c)(i)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、(ii)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列を含んで成るゲノムDNA配列、又は(iii)(i)又は(ii)の相補的鎖に対して、少なくとも中位の高い緊縮条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドから成る群から選択された、セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。
本発明はまた、前記ポリヌクレオチドを含んで成る、核酸構造体、組換え発現ベクター、及び組換え宿主細胞にも関する。
本発明はさらに、配列番号2のアミノ酸1〜17を含んで成るか又はそれらから成るシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列に操作可能的に結合されるタンパク質をコードする、前記ヌクレオチド配列に対して外来性である遺伝子を含んで成る核酸構造体にも関する。
セロビオヒドロラーゼ活性:
用語“セロビオヒドロラーゼ活性”とは、セルロース、セロラトリオース又はいずれかのβ−1,4−結合されたグルコース含有ポリマーにおける1,4−β−D−グルコシド結合の加水分解を触媒し、鎖の還元端からセルビオースを開放する1,4−D−グルカンセルビオヒドロラーゼ(E.C.3.2.1.91)活性として、本明細書において定義される。本発明に関しては、セロビオヒドロラーゼ活性は、Lever など., 1972, Anal. Biochem. 47: 273-279のPHBAH方法により測定される場合、セルロースからの水溶性還元糖の開放により決定される。
用語“ファミリー6グルコシドヒドロラーゼ”又は“ファミリーGH6”又は“Cel6”とは、Henrissat B., 1991, A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acid sequence similarities, Biochem. J. 280: 309-316, 及びHenrissat and Bairoch, 1996, Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases, Biochem. J. 316: 695-696によれば、グリコシドヒドロラーゼファミリー6内にあるポリペプチドとして本明細書において定義される。
用語“単離されたポリペプチド”とは、本明細書において使用される場合、SDS−PAGEにより決定される場合、少なくとも20%の純度、好ましくは40%の純度、より好ましくは少なくとも60%の純度、さらにより好ましくは少なくとも80%の純度、最も好ましくは少なくとも90%の純度、及びさらなる最も好ましくは少なくとも95%の純度であるポリペプチドを言及する。
用語“実質的に純粋なポリペプチド”とは、本明細書において、多くとも10%、好ましくは多くとも8%、より好ましくは多くとも6%、より好ましくは多くとも5%、より好ましくは多くとも4%、多くとも3%、さらにより好ましくは多くとも2%、最も好ましくは多くとも1%及びさらに最も好ましくは多くとも0.5%(重量による)の天然において結合される他のポリペプチド材料を含むポリペプチド調製物を示す。従って、好ましくは、実質的に純粋なポリペプチドは、調製物の存在する合計ポリペプチド材料の少なくとも92%の純度、好ましくは少なくとも94%の純度、好ましくは少なくとも95%の純度、好ましくは少なくとも96%の純度、好ましくは少なくとも97%の純度、好ましくは少なくとも98%の純度、さらに好ましくは少なくとも99%の純度、最も好ましくは少なくとも99.5%の純度、及びさらに最も好ましくは少なくとも100%(重量による)の純度である。
本明細書においては、用語“実質的に純粋なポリペプチド”とは、用語“単離されたポリペプチド”及び“単離された形でのポリペプチド”と同じ意味である。
用語“成熟ポリペプチド”とは、翻訳及びいずれかの後−翻訳修飾、例えばN−末端プロセッシング、C−末端切断、グルコシル化、等に続いて、その最終形で存在する、セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドとして、本明細書において定義される。
2種のアミノ酸配列間の又は2種のヌクレオチド配列間の関連性が、パラメーター“同一性”により記載される。
本発明に関しては、2種のアミノ酸配列間の同一性の程度は、PAM250残基重量表及び次の複数の一列整列パラメーターと共にLASERGENE(TM) MEGALIGN(TM) ソフトウエアー (DNASTAR, Inc., Madison, WI)を用いて、Clustal 方法 (Higgins, 1989, CABIOS 5: 151- 153)により定義される:ギャップペナルティー=10及びギャップ長ペナルティー=10。対様一列整列パラメーターは、Ktuple=1、ギャップペナルティー=3、窓=5及びダイアゴナル=5。
用語“相同配列”とは、本発明のチエラビア・テレストリス(Thielavia terrestris)セロビオヒドロラーゼを用いて、tfasty調査(Pearson, W.R., 1999, in Bioinformatics Methods and Protocols, S. Misener and S. A. Krawetz, ed., pp. 185-219)により0.001以下のE値(又は予測評点)を付与する予測されるタンパク質として本明細書において定義される。
用語“ポリペプチドフラグメント”とは本明細書においては、配列番号2、又はその相同配列の成熟ポリペプチドのアミノ及び/又はカルボキシル末端から欠失された1又は複数のアミノ酸を有するポリペプチドとして定義され、ここで前記フラグメントはセロビオヒドロラーゼ活性を有する。好ましい観点においては、フラグメントは、配列番号2、又はその相同配列の成熟ペプチドの少なくとも390個のアミノ酸残基、より好ましくは少なくとも415個のアミノ酸残基、及び最も好ましくは少なくとも440個のアミノ酸残基を含む。
用語“サブ配列”とは本明細書においては、配列番号1、又はその相同配列の成熟ポリペプチドコード配列の5’及び/又は3’末端から欠失される1又は複数のヌクレオチドを有するヌクレオチド配列として定義され、ここで前記サブ配列はセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドフラグメントをコードする。好ましい観点においては、サブ配列は、配列番号1、又はその相同配列の成熟ポリペプチドコード配列の少なくとも1170個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも1245個のヌクレオチド、及び最も好ましくは少なくとも1320個のヌクレオチドを含む。
本明細書においては、用語“対立遺伝子変異体”とは、同じ染色体遺伝子座を占める遺伝子の複数の他の形のいずれかを示す。対立遺伝子変動は、天然においては、突然変異を通して発生し、そして集団内の多形現象をもたらすことができる。遺伝子突然変異はサイレントであり得るか(コードされるポリペプチドの変化が存在しない)、又は変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子によりコードされるポリペプチドである。
用語“単離されたポリヌクレオチド”とは、本明細書において使用される場合、アガロース電気泳動により決定される場合、少なくとも20%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、さらに好ましくは少なくとも80%、最も好ましくは少なくとも90%及びさらに最も好ましくは少なくとも95%の純度であるポリヌクレオチドを言及する。
用語“実質的に純粋なポリペプチド”とは、本明細書において使用される場合、他の外来性の又は所望しないヌクレオチドを有さず、そして遺伝子構築されたタンパク質生成システム内での使用のために適切な形で存在するポリヌクレオチド調製物を言及する。従って、実質的に純粋なポリヌクレオチドは、それが天然において結合される他のポリヌクレオチド材料を、多くとも10重量%、好ましくは多くとも8重量%、より好ましくは多くとも6重量%、より好ましくは多くとも5重量%、より好ましくは多くとも4重量%、より好ましくは多くとも3重量%、さらにより好ましくは多くとも2重量%、最も好ましくは多くとも1重量%、及びさらに最も好ましくは多くとも0.5重量%含む。しかしながら、実質的に純粋なポリヌクレオチドは、天然に存在する5’及び3’未翻訳領域、例えばプロモーター及びターミネーターを含むことができる。
用語“成熟ポリペプチドコード配列”とは、セロビオヒドロラーゼ活性を有する成熟ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列として、本明細書において定義される。
用語“cDNA”とは、本発明において使用される場合、真核細胞に由来する成熟のスプライスされたmRNA分子から逆転写により調製され得るDNA分子を包含する。cDNAは、その対応するゲノムDNAに通常存在するイントロン配列を欠いている。初期一次RNA転写体は、mRNAに対する前駆体であり、そしてそれは、成熟のスプライスされたmRNAとして出現する前、一連のプロセッシング現象を通して進行する。この現象は、スプライシングと呼ばれる工程によるイントロン配列の除去を包含する。従って、cDNAがmRNAに由来する場合、それはイントロン配列を欠いている。
本明細書において使用される場合、用語“核酸構造体”とは、天然に存在する遺伝子から単離され、又は他方では、天然に存在しない態様で核酸のセグメントを含むように修飾されている、一本鎖又は二本鎖核酸分子として定義される。用語“核酸構造体”とは、核酸構造体が本発明のコード配列の発現のために必要とされるすべての制御配列を含む場合、用語“発現カセット”と同じ意味である。
用語“制御配列”とは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現のために必要であるか、又はそのために好都合であるすべての成分を包含するよう定義される。個々の制御配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列に対して生来であっても又は外来性であっても良く、又はお互いに対して生来であっても又は外来性であっても良い。そのような制御配列は、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモーター、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネーターを包含するが、但しそれらだけには限定されない。最少で、制御配列は、プロモーター、及び転写及び翻訳停止シグナルを包含する。制御配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列のコード領域と制御配列との連結を促進する特定の制限部位を導入するためにリンカーを提供され得る。
用語“作用可能に連結される”とは、制御配列が、ポリペプチドのコード配列の発現を指図するようポリヌクレオチド配列のコード配列に対する位置で適切に配置されている配置として本明細書において定義される。
本明細書において使用される場合、用語“コード配列”とは、そのタンパク質生成物のアミノ酸配列を直接的に特定するヌクレオチド配列を包含する。コード配列の境界は一般的に、ATG開始コドン又は他の開始コドン、例えばGTG及びTTGにより通常開始し、そして停止コドン、例えばTAA、TAG及びTGAで終結する読取枠により決定される。コード配列は、DNA、cDNA、又は組換えヌクレオチド配列であり得る。
用語“発現”とは、ポリペプチドの生成に包含されるいずれかの段階、例えば転写、後−転写修飾、翻訳、後−翻訳修飾及び分泌(但し、それらだけには制限されない)を包含する。
本明細書においては、用語“発現ベクター”とは、本発明のポリペプチドとコードするポリヌクレオチドを含んで成り、そしてその発現を提供する追加のヌクレオチドに作用可能に連結される線状又は環状DNA分子を包含する。
用語“宿主細胞”とは、本明細書において使用される場合、本発明のポリヌクレオチドを含んで成る核酸構造体による形質転換、トランスフェクション、トランスダクション及び同様のものに対して感受性であるいずれかの細胞型を包含する。
用語“修飾”とは本明細書において、配列番号2又はその相同配列の成熟ポリペプチドから成るポリペプチドのいずれかの化学的修飾、及びそのようなポリペプチドをコードするDNAの遺伝子操作を意味する。前記修飾は、アミノ酸の置換、欠失及び/又は挿入、及びアミノ酸側鎖の置換であり得る。
本明細書において使用される場合、用語“人工変異体”とは、配列番号1又はその相同配列の成熟ポリペプチドコード配列の修飾されたヌクレオチド配列を発現する生物により生成されるセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。修飾されたヌクレオチド配列は、配列番号1又はその相同配列のヌクレオチド配列の修飾により、ヒト介在を通して得られる。
セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド:
第1の観点においては、本発明は、配列番号2の成熟ポリペプチドに対して、少なくとも60%、好ましくは少なくとも65%、より好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも75%、より好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%、及びさらに最も好ましくは少なくとも97%、98%又は99%の程度の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成る、セロビオヒドロラーゼ活性を有する単離されたポリペプチド(この後、“相同ポリペプチド”)に関する。好ましい観点においては、相同ポリペプチドは、配列番号2の成熟ポリペプチドとは、10個のアミノ酸、好ましくは5個のアミノ酸、より好ましくは4個のアミノ酸、さらにより好ましくは3個のアミノ酸、最も好ましくは2個のアミノ酸、及びさらに最も好ましくは1個のアミノ酸で異なるアミノ酸配列を有する。
本発明のポリペプチドは、いずれかの属の微生物から得られる。本発明のためには、用語“〜から得られる”とは、所定の源に関して本明細書において使用される場合、ヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドが前記源により、又はその源からのヌクレオチド配列が挿入されている細胞により生成されることを意味する。好ましい態様においては、所定の源から得られるポリペプチドは細胞外に分泌される。
前述の種に関しては、本発明は完全及び不完全状態の両者、及び他の分類学的同等物、例えばアナモルフを、それらが知られている種の名称にかかわらず、包含することが理解されるであろう。当業者は適切な同等物の正体を容易に理解するであろう。
本発明はまた、セロビオヒドロラーゼ活性を有する本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで成るか又はそれらから成る単離されたポリヌクレオチドにも関する。
本発明はまた、制御配列と適合できる条件下で、適切な宿主細胞におけるコード配列の発現を指図する1又は複数の制御配列に作用可能に連結される本発明の単離されたポリヌクレオチドを含んで成る核酸構造体にも関する。
糸状菌宿主細胞のための好ましいリーダーは、アスペルギラス・オリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギラス・ニジュランストリオースリン酸イソメラーゼについての遺伝子から得られる。
酵母宿主細胞のための有用なポリアデニル化配列は、Guo and Sherman, 1995, Molecular Cellular Biology 15: 5983-5990により記載されている。
酵母宿主細胞のための有用なシグナルペプチドは、サッカロミセス・セレビシアエα−因子及びサッカロミセス・セレビシアエインバーターゼについての遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード領域は、Romanos など., 1992, 前記により記載される。
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド、プロモーター、及び転写及び翻訳停止シグナルを含んで成る組換え発現ベクターにも関する。上記の種々の核酸及び制御配列は、1又は複数の便利な制限部位でポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の挿入又は置換を可能にするためにそれらの部位を含むことができる組換え発現ベクターを生成するために一緒に連結され得る。他方では、本発明のヌクレオチド配列は、前記ヌクレオチド配列又は前記配列を含んで成る核酸構造体を、発現のための適切なベクター中に挿入することによって発現され得る。発現ベクターを創造する場合、そのコード配列はベクターに位置し、その結果、コード配列は発現のための適切な制御配列により作用可能に連結される。
酵母宿主細胞への使用のための複製の起点の例は、複製の2ミクロン起点、すなわちARS1, ARS4, ARS1及びCEN3の組み合わせ、及びARS4及びCEN6の組み合わせである。
本発明はまた、ポリペプチドの組換え生成において都合良く使用される、本発明のポリヌクレオチドを含んで成る組換え宿主にも関する。本発明のポリヌクレオチドを含んで成るベクターは、そのベクターが染色体組み込み体として、又は前記のような自己複製染色体外ベクターとして維持されるように、宿主細胞中に導入される。用語“宿主細胞”とは、複製の間に生じる突然変異のために、親細胞と同一ではない親細胞のいずれかの子孫を包含する。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子及びその源に、かなりの程度依存するであろう。
好ましい態様においては、宿主細胞は菌類細胞である“菌類”とは、本明細書において使用される場合、門アスコミコタ(Ascomycota)、バシジオミコタ(Basidiomycota)、キトリジオミコタ(Chytridiomycota)及びヅイゴミコタ(Zygomycota)(Hawksworth など., Ainsworth and Bisby’s Dictionary of the Fungi, 8th edition, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, UKにより定義される)、及びオーミコタ(Oomycota)(Hawksworth など., 1995, 前記、171ページに引用される)、並びに栄養胞子菌(Hawksworh など., 1995, 前記)を包含する。
本発明はまた、(a)その野生型において、前記ポリペプチドの生成の助けと成る条件下でポリペプチドを生成することができる細胞を培養し;そして(b)前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、本発明のポリペプチドの生成方法にも関する。好ましい観点においては、細胞は、チエラビア属のものである。より好ましい観点においては、細胞は、チエラビア・テレストリスのものである。
好ましい観点においては、配列番号2の成熟ポリペプチドはアミノ酸18〜481である。
得られるポリペプチドは、当業界において知られている方法により回収され得る。例えば、ポリペプチドは、従来の方法、例えば遠心分離、濾過、抽出、噴霧−乾燥、蒸発又は沈殿(但し、それらだけには限定されない)により、栄養培地から回収され得る。
本発明はまた、ポリペプチドを、回収できる量で発現し、そして生成するために、本発明のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列により形質転換されているトランスジェニック植物、その植物部分又は植物細胞にも関する。ポリペプチドは、植物又は植物部分から回収され得る。他方では、組換えポリペプチドを含む植物又は植物部分は、食物又は飼料の品質を改良し、例えば栄養価値、嗜好性及び流動性質を改良するために、又は抗栄養因子を破壊するために使用され得る。
本発明のポリペプチドを発現するトランスジェニック植物又は植物細胞は、当業界において知られている方法に従って構成され得る。手短には、植物又は植物細胞は、本発明のポリペプチドをコードする、1又は複数の発現構造体を、植物宿主ゲノム又はクロロプラストゲノム中に導入し、そして得られる修飾された植物又は植物細胞をトランスジェニック植物又は植物細胞中に成長せしめることによって構成される。
発現構造体の選択マーカー遺伝子及びいずれか他の部分は、当業界において入手できるそれらから選択され得る。
本発明はまた、同じ条件下で培養される場合、親細胞よりもポリペプチドを低く生成する変異体細胞をもたらす、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列又はその一部を破壊するか又は削除することを含んで成る、親細胞の変異体の生成方法にも関する。
興味ある生成物の培養及び精製のために使用される方法は、当業界において知られている方法により行われ得る。
もう1つの観点においては、本発明は、本発明の方法により生成される、セロビオヒドロラーゼ活性を実質的に有さないタンパク質生成物に関する。
本発明はまた、本発明のポリペプチドを含んで成る組成物にも関する。好ましくは、組成物はそのようなポリペプチドにおいて富化される。用語“富化される”とは、組成物中のセロビオヒドロラーゼ活性が、少なくとも1.1の富化因子、高められていることを示す。
本発明のポリペプチド組成物の好ましい使用の例は下記に与えられる。本発明のポリペプチド組成物の用量、及び組成物が使用される他の条件は、当業界において知られている方法に基づいて決定され得る。
本発明はまた、セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド、又はその組成物の次の使用方法にも向けられる。
バイオマスの単糖類、二糖類及び多糖類への分解:
セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド、及び本発明の宿主細胞は、エタノール、プラスチック、又は他の生成物又は中間体の製造のためのバイオマスからの化学的又は発酵供給原料として単糖類、二糖類及び多糖類の生成に使用され得る。セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドは、除去される細胞を伴って又はそれを伴わないでの粗発酵ブイヨンの形で、又は半精製された又は精製された酵素調製物の形で存在することができる。他方では、本発明の宿主細胞は、バイオマスによる発酵工程においてポリペプチドの源として使用され得る。
(1)ランダムに、可溶性及び不溶性1,4−β−グルカン基質に対して作用する、“エンド−1,4−β−グルカナーゼ”又は1,4−β−D−グルカン−4−グルカノヒドロラーゼ(EC3.2.1.4);
(3)セロビオース及び可溶性セロデキストリン、並びに一連のグルコシドからD−グルコース単位を開放するよう作用する“β−D−グルコシダーゼ”又はβ−D−グルコヒドロラーゼ(EC3.2.1.21)。
本発明のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドは、バイオマス基質のセルロース成分をさらに分解するために、上記酵素と共に使用され得る(例えば、Brigham など, 1995, in Handbook on Bioethanol (Charles E. Wyman, editor), pp.119-141, Taylor & Francis,Washington D.C.; Lee, 1997, Journal of Biotechnology 56: 1-24を参照のこと)。
本発明のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドは、洗剤組成物に添加され得、そして従って、洗剤組成物の成分に成ることができる。
本発明の洗剤組成物は、手動又は機械洗濯用洗剤組成物、例えば染色された布の前処理のために適切な洗濯用添加剤組成物及びすすぎ用布ソフトナー組成物として配合され得、又は一般的な家庭用硬質表面洗浄操作における使用のための洗剤組成物として配合され得、又は手動又は機械皿洗い操作のために配合され得る。
一般的に、選択された酵素の性質は、選択された洗剤と適合できるべきであり(すなわち、他の酵素及び非酵素の成分、等とのpH−最適適合性)、そして酵素は効果的な量で存在すべきである。
好ましい市販のプロテアーゼ酵素は、AlcalaseTM, SavinaseTM, PrimaseTM, DuralaseTM, EsperaseTM及びKannaseTM (Novozymes A/S), MaxataseTM, MaxacalTM, MaxapemTM, ProperaseTM, PurafectTM, Purafect OxPTM, FN2TM及びFN3TM (Genencor International Inc.) を包含する。
好ましい市販のリパーゼ酵素は、LipolaseTM 及びLipolase UltraTM (Novozymes A/S) を包含する。
有用なアミラーゼの例は、WO94/02597号、WO94/18314号、WO96/23873号及びWO/43424号に記載される変異体、特に1又は複数の次の位置での置換を有する変異体である:15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 181, 188, 190, 197, 202, 208, 209, 243, 264, 304, 305, 391, 408及び444。
市販のアミラーゼは、DuramylTM, TermamaylTM, FungamylTM 及びBAMTM (Novozymes A/S), RapidaseTM 及びPurastarTM (Genencor International Inc.)である。
市販のセルラーゼは、CelluzymeTM 及びCarezymeTM (Novozymes A/S), ClazinaseTM 及びPuradex HATM (Genencor International Inc.) 及びKAC−500 (B)TM (Kao Corporation) を包含する。
洗剤酵素は、1又は複数の酵素を含む別々の添加剤を添加することにより、又はそれらの酵素のすべてを含んで成る組合された添加剤を添加することにより洗剤組成物に包含され得る。本発明の洗剤添加剤、すなわち別々の添加剤又は組合された添加剤が、例えば粒質物、液体、スラリー、等として配合され得る。好ましくは洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非−ダスチング粒質物、液体、特に安定された液体又はスラリーである。
洗剤組成物は、非イオン性、例えば半−極性及び/又はアニオン性及び/又はカチオン性及び/又は両性イオンであり得る1又は複数の界面活性剤を含んで成る。界面活性剤は典型的には、0.1〜60重量%のレベルで存在する。
本発明の酵素はさらに、WO97/07202号(引例として本明細書に組み込まれる)に開示される洗剤配合物に導入され得る。
本発明のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドはまた、バイオポリッシュ剤として布の処理において、及び毛羽、ピリング、きめの変性及びストーンウォッシングを低めるために、本明細書に記載されるように、他のグリコヒドロラーゼ及び関連する酵素と組合しても使用され得る(N. K. Lange, in P. Suominen, T. Reinikainen (Eds.), Trichoderma reesei Cellulases and Other Hydrolases, Foundation for Biotechnical and Industrial Fermentation Research, Helsinki, 1993, pp. 263-272)。
本発明はまた、配列番号2のアミノ酸1〜17を含んで成るか又はそれらから成るシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列に操作可能的に結合されるタンパク質をコードする。好ましい観点においては、ヌクレオチド配列は、配列番号1のヌクレオチド1〜51から成る。
本発明はまた、(a)そのような組換え宿主細胞を、タンパク質の生成のために適切な条件で培養し;そして(b)タンパク質を回収することを含んで成るタンパク質の生成方法にも関する。
前記遺伝子は、いずれかの原核、真核生物又は他の源から得られる。
本発明は次の例により、さらに記載されるが、それらは本発明の範囲を制限するものではない。
緩衝液及び基質として使用される化学物質は、少なくとも試薬品種の市販の製品であった。
SDS−PAGEゲル、充填緩衝液及び走行緩衝液は、Invitrogen/Novex(Carlsbad, CA)からであった。配列決定品種の修飾されたトリプシンは、Princeton Separations (Aldelphia, NJ)からであった。BioSafe Commassie Blue G250タンパク質は、BioRad Laboratories (Hercules, CA)からであった。
アスペルギラス・オリザエJal250株(WO99/61651号)が、セロビオヒドロラーゼ活性を有するチエラビア・テレストリスポリペプチドの発現のために使用された。チエラビア・テレストリスNRRL株8126を、ファミリー6Aタンパク質のための遺伝子源として使用した。
PDAプレートは、1L当たり、39gのジャガイモデキストロース寒天から構成された。
NNCYP培地は、1L当たり、5.0gのNH4NO3、0.5gのMgSO4・7H2O、0.3gのCaCl2、2.5gのクエン酸、1.0gのBacto Peptone, 5.0gの酵母抽出物、1mlのCOVE微量金属溶液、及び約5.4の最終pHを達成するのに十分なK2HPO4から構成された。
COVE微量金属溶液は、1L当たり、0.04gのNa2B4O7・10H2O, 0.4gのCuSO4・5H2O, 1.2gのFeSO4・7H2O, 0.7gのMnSO4・H2O,0.8gのNa2MoO2・2H2O及び10gのZnSO4・7H2Oから構成された。
MDU2BP培地は、1L当たり、45gのマルトース、1gのMgSO4・7H2O、1gのNaCl、2gのK2HSO4、12gのKH2PO4、2gのウレア、及び500μlのAMG微量金属から構成され;pHは5.0に調節され、そして次に、0.22μmの濾過ユニットによりフィルター殺菌された。
SOC培地は、1L当たり、2%トリプトン、0.5%酵母抽出物、10mMのNaCl、2.5mMのKCl、10mMのMgCl2、及び10mMのMgSO4から構成され;オートクレーブにより殺菌され、そして次に、フィルター殺菌されたグルコースが添加され、20mMにされた。
2X YT培地プレートは、1L当たり、16gのトリプトン、10gの酵母抽出物、5gのNaCl,及び15gのBacto寒天から構成され、オートクレーブにより殺菌された。
YP培地は、IL当たり、10gの酵母抽出物及び20gのバクトペプトン(Difco)から構成された。
微量金属溶液は、1L当たり、216gのFeCl3・6H2O、58gのZnSO4・7H2O、27gのMnSO4・H2O、10gのCuSO4・5H2O、2.4gのH3BO3及び336gのクエン酸から構成された。
PDA上で増殖されたチエラビア・テレストリスNRRL8126の新鮮なプレートからの3種のアガロースプラグを、1.5%グルコースにより補充されたNNCYP培地100ml中に接種し、そして軌道シェーカー上で42℃及び200rpmで25時間インキュベートした。この培養物50mlを用いて、1L当たり0.4%グルコース及び52gの粉末セルロースにより補充されたNNCYP培地1.8Lを接種し、そして42℃でインキュベートした。pHを、必要により、15%水酸化アンモニウム又は5Nのリン酸により5.0に調節した。
チエラビア・テレストリスNRRL8126の24時間の液体培養物(250mlのフラスコ中、50mlのNNCYPmod+1%グルコース、45℃、200rpm)からの2mlアリコートを用いて、2%Sigmacell-20により補充されたNNCYPmod培地100mlを含む500mlのフラスコに播種した。この培養物を45℃、200rpmで3日間インキュベートした。ガラス繊維プレフィルター(Nalgene, Rochester NY)を備えたブフナー漏斗を通しての濾過により収穫し、10mMのトリス−HCl−1mMのEDTA, pH8(TE)により2度、洗浄し、そして液体窒素によりすばやく凍結した。
cDNAライブラリーを創造するために、CloneMinerTM Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA)を用いて、制限酵素クローニングの使用を必要とせず、それによりキメラ性クローン及びサイズ偏向の数を低める指向的ライブラリーを創造した。
5 ' -TCGTCGGGGACAACTTTGTACAAAAAAGTTGG-3 '(配列番号3)
3 ' - CCCCTGTTGAAACATGTTTTTTCAACCp- 5 '(配列番号4)。
第1ライブラリーは、5.4×106個の独立したクローンを有することが示され、そして第2ライブラリーは、9×106個の独立したクローンを有することが示された。
両ライブラリーからのアリコートを混合し、そして1ml当たり50μgのカナマイシンにより補充された25×25cmのLBプレート上にプレートした。個々のコロニーを、Genetix QPix Robot (Genetix Inc., Boston, MA)の助けを伴って、1ml当たり50μgのカナマイシンにより補充されたLB100μlを含む96ウェルプレート上に整列した。45個の96ウェルプレートを、合計4320の個々のクリーンのために得た。プレートを、200rpmで振盪しながら、37℃で一晩インキュベートした。インキュベーションの後、100μlの無菌50%グリセロールを個々のウェルに添加した。
5'-GTAAAACGACGGCCAG-3'(配列番号5)。
塩基命名、品質値割り当て、及びベクタートリミングを、PHRED/PHRAP ソフトウェアー(University of Washington, Seattle, WA)の助けを伴って実施した。ESTのクラスター分析を、Parcel Transcript Assembler v. 2.6.2. (Paracel, Inc., Pasadena, CA)により行った。ESTクラスターの分析は、395個の独立したクラスターの存在を示した。
ファミリー6セロビオヒドロラーゼ(Cel6A)をコードするcDNAクローンをまず、ヒューミコラ・インソレンスからのファミリー6Aタンパク質(NR 34811679)に対するその相同性により同定した。その分析は、2つのタンパク質が、120個のアミノ酸(360個の塩基対)範囲に対して、タンパク質レベルで50%同一であったことを示した。この初期同定の後、クローンTter11C9を元の凍結されたストックプレートから再生し、そして1ml当たり50μgのカナマイシンにより補充されたLBプレート上に画線培養した。
5'- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN-3'(配列番号6)、ここでV=G, A, C及びN=G, A, C, T。
発現ベクターpAILo1を、アスペルギラス・ニガー中性α−アミラーゼ及びアスペルギラス・オリザエトリオースリン酸イソメラーゼ(NAZ−tplプロモーター)、アスペルギラス・ニガーアミログルコシダーゼターミネーター配列(AMGターミネーター)、及びアスペルギラス・ニジュランスアセトアミダーゼ遺伝子(andS)のための遺伝子からのプロモーターのハイブリッドを含んで成る、pBANe6(アメリカ特許第6,461,837号)を修飾することにより構成した。すべての突然へに誘発段階は、記載のようにしてBlg−DyeTMターミネーター化学を用いて、配列決定により確かめられた。pBANe6の修飾を、まずandS選択マーカーから位置2051, 2722及び3397bpでの3個のNcoI制限部位を、特定部位の突然変異誘発により削除することにより行った。
AMDS3NcoMut (2050):
5'-GTGCCCCATGATACGCCTCCGG-3' (配列番号7);
AMDS2NcoMut (2721):
5'-GAGTCGTATTTCCAAGGCTCCTGACC-3' (配列番号8)
AMDS1NcoMut (3396):
5'-GGAGGCCATGAAGTGGACCAACGG-3' (配列番号9)
AMGターミネーター配列を突然変異誘発するための上方プライマー:
5'-CACCGTGAAAGCCATGCTCTTTCCTTCGTGTAGAAGACCAGACAG-3'(配列番号10);
AMGターミネーター配列を突然変異誘発するための下方プライマー:
5'-CTGGTCTTCTACACGAAGGAAAGAGCATGGCTTTCACGGTGTCTG-3'(配列番号11)。
NA2−tpiプロモーターを突然変異誘発するための上方プライマー:
5'-CTATATACACAACTGGATTTACCATGGGCCCGCGGCCGCAGATC-3'(配列番号12):
NA2−tpiプロモーターを突然変異誘発するための下方プライマー:
5'-GATCTGCGGCCGCGGGCCCATGGTAAATCCAGTTGTGTATATAG-3'(配列番号13)。
下記に示される2種の合成オリゴヌクレオチドプライマーを、ファミリーGH6Aセロビオヒドロラーゼをコードするチエラビア・テレストリスEST Tter11C9からの十分な長さの読み取り枠をPCR増幅するよう企画した。In-Fusion Cloning Kit (BD Biosciences, Palo Alto, CA)を用いて、前記フラグメントをpAILo2中にクローン化した:
In−Fusion前方向プライマー:
5'- ACTGGATTACCATGGCTCAGAAGCTCCTTCT-3'(配列番号14);
In−Fusion逆方向プライマー:
5'-TCACCTCTAGTTAATTAAAAGGGCGGGTTGGCGT-3'(配列番号15)。
下線部分はコード配列を表す。残る配列は、pAILo2の挿入部位に比較して、配列本体を含む。
アスペルギラス・オリザエJal250(WO99/61651号)プロトプラストを、Christensen など., 1988, Bio/Technology 6: 1419-1422の方法に従って調製した。5μgのpAILo21を用いて、アスペルギラス・オリザエJAl250プロトプラストを形質転換した。pAILo2をベクター対照として用いた。
60kDaのタンパク質バンド(例8)を、例1に記載のようにして、トリプシンによりゲル内消化した。回収されたペプチドを、タンパク質確証のためにペプチド質量フィンガープリンティング分析により分析した。フライト質量分光計のMaldiTM−LR時間(Waters Micromass(商標)MS Technologies, Milford, MA)を使用した。再結晶化されたα−シアノ−4−ヒドロキシ桂皮酸を、mg量のα−シアノ−4−ヒドロキシ桂皮酸(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)を、100%アセト二トリル(E.M. Science, Gibbstown, NJ)により洗浄することにより調製し、そして十分に混合し、そして遠心分離し、マトリックスペレットを形成した。
発現プラスミドpSMai155(WO05/074647号)におけるトリコダーマ・レセイセロビオヒドロラーゼI遺伝子(CBHI)プロモーターを、トリコダーマ・レセイCBHIIプロモーターにより置換し、プラスミドpCW076をもたらした。トリコダーマ・レセイセロビオヒドロラーゼII遺伝子(CBHII)プロモーターを、SalI及びNcoIによる消化により、プラスミドpEJG114(WO05/074647号)から単離した。pSMai155からのCBHIプロモーターの除去を、SalI及びNcoIによる消化により、プラスミドpEJG114(WO05/074607号)から単離した。pSMai155からのCBHIプロモーターの除去を、SalI及びNcoIによる消化により達成した。CBHII DNAフラグメント及び線状化されたpSMai155プラスミド(CBHIプロモーターを有さない)の両者を、Dark ReaderTM (Clare Chemical Research, Dolores, CO)の助けによる可視化した。
逆方向プライマー:5'-CAGTCACCTCTAGTTAATTAATTAGAAGGGCGGG-3'(配列番号17)。
50pモルの上記個々のプライマーを、50ngのpAILo21, dATP, dTTP, dGTP及びdCTPの10mMのブレンド1μl、5μlの1OX AmpliTaq(R) DNA Polymerase Buffer I (Perkin-Elmer/Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA)、及び5単位のAmpliTaq(商標)DNA Polymerase (Perkin-Elmer/Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA)(50μlの最終体積)から成るPCR反応に使用した。次のようにプログラムされたEppendorf Mastercycler 5333 (Eppendorf Scientific, Inc., Westbury, NY)を用いて、DNAフラグメントを増幅した:95℃で3分間、1サイクル;及び95℃で45秒、55℃で60秒及び72℃で1分30秒、30サイクル。
次に、濾液を、二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動にゆだね、チエラビア・テレストリスCel6Aセロビオヒドロラーゼの発現を確かめた(例11を参照のこと)。
二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動。例10に記載されるトリコダーマ・レセイSaMe-D8の2L発酵からの濾液1mlを、4℃で飽和トリクロロ酢酸(TCA)100μlを添加し、そして氷上で10分間インキュベートし、続いて9mlの氷冷却されたアセトンを添加し、そしてさらに、氷上で20分間インキュベートすることにより沈殿した。沈殿された溶液を、10,000×gで4℃で10分間、遠心分離し、上清液を捨て、そしてペレットを、氷冷却されたアセトンにより2度すすぎ、そして空気乾燥した。乾燥されたペレットを、0.2mlの等電点電気泳動(IEF)サンプル緩衝液(9.0Mのウレア、3.1%(wt/v)の3−[(3−コラシドプロピル)ジメチル−アンモニウム]−1−プロパンスルホネート(CHAPS, Pierce Chemical Co. Rockford, IL)、1%(v/v)両性電解質、pH4〜7、50mMのジチオトレイトール(DTT)及び蒸留水中、0.005%ブロモフェノールブルー)に溶解した。
次の生物学的材料を、Agriculture Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL),1815 University Street, Peoria, Illinois に、ブタペスト条件に基づいて寄託し、そして次の受託番号を付与された:
寄託物:E.coll pTter6A
受託番号:NRRL B-30802
寄託日:2004年12月17日
種々の文献が本明細書に引用されており、それらの開示は引用により本明細書に組み込まれている。
Claims (19)
- (a)配列番号2の成熟ポリペプチドと、少なくとも90%、更に少なくとも95%、最も好ましくは少なくとも97%の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成るポリペプチド;
(b)(i)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、(ii)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列を含んで成るゲノムDNA配列、又は(iii)前記(i)若しくは(ii)の相補的鎖に対して、高い緊縮条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及び
(c)配列番号2の成熟ポリペプチドの1又は複数のアミノ酸の保存的置換、欠失、及び/又は挿入を含んで成る変異体から成る群から選択された、セロビオヒドロラーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。 - 配列番号2のアミノ酸配列又はセロビオヒドロラーゼ活性を有するそのフラグメントを含んで成るか又はそれらから成る請求項1に記載のポリペプチド。
- 配列番号2成熟ポリペプチドを含んで成るか又はから成る請求項1に記載のポリペプチド。
- E. コリNRRL B−30802に含まれるプラスミドpTter6Aに含まれるポリヌクレオチドによりコードされる請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記成熟ポリペプチドが、配列番号2のアミノ酸18〜481であるか、又は前記成熟ポリペプチドコード配列が、配列番号1のヌクレオチド52〜1443である請求項1〜4のいずれか1項記載のポリペプチド。
- 請求項1〜5のいずれか1項記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで成る単離されたポリヌクレオチド。
- 発現宿主におけるポリペプチドの生成を指図する1又は複数の制御配列に作用可能に連結されている請求項6記載のポリヌクレオチドを含んで成る核酸構造体又は発現ベクター。
- 請求項7に記載の核酸構造体を含んで成る組換え宿主細胞。
- 請求項1〜5のいずれか1項記載のポリペプチドの製造方法であって、(a)その野生型において、前記ポリペプチドの生成の助けになる条件下で、前記ポリペプチドを生成できる細胞を培養し;そして(b)前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
- 請求項1〜5のいずれか1項記載のポリペプチドの製造方法であって、(a)前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで成る核酸構造体を含んで成る宿主細胞を、前記ポリペプチドの生成の助けに成る条件下で培養し;そして(b)前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
- (a)(i)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、(ii)配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列を含んで成るゲノムDNA配列、又は(iii)前記(i)若しくは(ii)の相補的鎖と、DNA集団とを、高い緊縮条件下で、ハイブリダイズせしめ;そして
(b)セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする前記ハイブリダイズするポリヌクレオチドを単離する;
ことにより得られる単離されたポリヌクレオチド。 - 前記成熟ポリペプチドコード配列が、配列番号1のヌクレオチド52〜1443である請求項11に記載の単離されたポリヌクレオチド。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチドの製造方法において、
(a)請求項1〜5のいずれか1項に記載のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んで成るトランスジェニック植物又は植物細胞を、前記ポリペプチドの生成の助けと成る条件下で培養し;そして
(b)前記ポリペプチドを回収する;
ことを含んで成る方法。 - 請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにより形質転換されている、トランスジェニック植物、植物の一部又は植物細胞。
- 請求項1〜5のいずれか1項記載のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド、及び界面活性剤を含んで成る洗剤組成物。
- セルロース−及びヘミセルロース−含有バイオマスの分解又は転換方法であって、有効量の請求項1〜5のいずれか1項に記載のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドにより、前記バイオマスを処理し、そして分解されたバイオマスを回収することを含んで成る方法。
- 有効量のエンド−1,4−β−グルカナーゼ及びβ−D−グルコシダーゼによりバイオマスを処理することをさらに含んで成る請求項16に記載の方法。
- セルロース−及びヘミセルロース−含有バイオマスの分解又は転換方法であって、請求項1〜5のいずれか1項に記載のセロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドによりバイオマスを処理し、そして分解されたバイオマスを回収することを含んで成る方法。
- 有効量のエンド−1,4−β−グルカナーゼ及びβ−D−グルコシダーゼによりバイオマスを処理することをさらに含んで成る請求項18に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US64227405P | 2005-01-06 | 2005-01-06 | |
US60/642,274 | 2005-01-06 | ||
PCT/US2006/000659 WO2006074435A2 (en) | 2005-01-06 | 2006-01-06 | Polypeptides having cellobiohydrlase activity and polynucleotides encoding same |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008526236A JP2008526236A (ja) | 2008-07-24 |
JP2008526236A5 JP2008526236A5 (ja) | 2009-02-19 |
JP4938688B2 true JP4938688B2 (ja) | 2012-05-23 |
Family
ID=36263844
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007550536A Expired - Fee Related JP4938688B2 (ja) | 2005-01-06 | 2006-01-06 | セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードするポリヌクレオチド |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7220565B2 (ja) |
EP (1) | EP1836299B2 (ja) |
JP (1) | JP4938688B2 (ja) |
CN (1) | CN101137750B (ja) |
AT (1) | ATE492633T1 (ja) |
CA (1) | CA2593246C (ja) |
DE (1) | DE602006019050D1 (ja) |
DK (1) | DK1836299T4 (ja) |
ES (1) | ES2358243T5 (ja) |
MX (1) | MX2007008050A (ja) |
WO (1) | WO2006074435A2 (ja) |
Families Citing this family (107)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7883872B2 (en) * | 1996-10-10 | 2011-02-08 | Dyadic International (Usa), Inc. | Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose |
KR100618495B1 (ko) * | 1998-10-06 | 2006-08-31 | 마크 아론 에말파브 | 섬유상의 진균성 숙주 영역에서의 형질전환 시스템:크리소스포륨속에서 |
WO2008073914A2 (en) | 2006-12-10 | 2008-06-19 | Dyadic International Inc. | Expression and high-throughput screening of complex expressed dna libraries in filamentous fungi |
US9862956B2 (en) | 2006-12-10 | 2018-01-09 | Danisco Us Inc. | Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi |
NZ593692A (en) | 2007-03-29 | 2012-08-31 | Yissum Res Dev Co | Transgenic plants containing soluble cell wall polysaccharides |
US7923236B2 (en) * | 2007-08-02 | 2011-04-12 | Dyadic International (Usa), Inc. | Fungal enzymes |
EP2197893B1 (en) * | 2007-09-07 | 2013-07-24 | Dyadic International, Inc. | Novel fungal enzymes |
CN101874109B (zh) | 2007-09-28 | 2013-07-10 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
US7927856B2 (en) * | 2008-08-15 | 2011-04-19 | Academia Sinica | Thermophilic endo-glucanase and uses thereof |
WO2010121009A1 (en) * | 2009-04-16 | 2010-10-21 | Codexis, Inc. | Inha promoters |
US8278507B2 (en) | 2009-06-02 | 2012-10-02 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
CN102597228A (zh) * | 2009-10-23 | 2012-07-18 | 诺维信股份有限公司 | 纤维二糖水解酶变体及编码其的多核苷酸 |
CN102666847B (zh) * | 2009-10-29 | 2015-12-09 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
EP3222716B1 (en) | 2009-11-06 | 2020-08-19 | Novozymes, Inc. | Composition for saccharification of cellulosic material |
WO2011057086A1 (en) * | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
FI122937B (fi) | 2009-12-30 | 2012-09-14 | Roal Oy | Menetelmä selluloosamateriaalin käsittelemiseksi sekä tässä käyttökelpoiset CBH II/Cel6A entsyymit |
CN103108951A (zh) | 2010-06-30 | 2013-05-15 | 诺维信公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
WO2012012590A2 (en) | 2010-07-23 | 2012-01-26 | Novozymes A/S | Processes for producing fermentation products |
WO2012030845A2 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
US20130212746A1 (en) | 2010-08-30 | 2013-08-15 | Novoyzmes A/S | Polypeptides Having Hemicellulolytic Activity And Polynucleotides Encoding Same |
WO2012030844A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030849A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
US9187742B2 (en) | 2010-08-30 | 2015-11-17 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US9303074B2 (en) | 2010-08-30 | 2016-04-05 | Novoyzmes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US9212354B2 (en) | 2010-11-04 | 2015-12-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same |
US9139823B2 (en) | 2010-11-12 | 2015-09-22 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
CN103620028B (zh) | 2011-01-26 | 2017-05-03 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
WO2012103350A1 (en) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
MX337919B (es) | 2011-01-26 | 2016-03-28 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de celobiohidrolasa y polinucleotidos que codifican los mismos. |
CN105838698B (zh) | 2011-01-26 | 2019-10-11 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸 |
WO2012113340A1 (en) | 2011-02-23 | 2012-08-30 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2683830A1 (en) | 2011-03-09 | 2014-01-15 | Novozymes A/S | Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
WO2012122477A1 (en) | 2011-03-10 | 2012-09-13 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
SG192098A1 (en) | 2011-03-17 | 2013-08-30 | Danisco Us Inc | Method for reducing viscosity in saccharification process |
EP2691519A1 (en) | 2011-03-31 | 2014-02-05 | Novozymes, Inc. | Cellulose binding domain variants and polynucleotides encoding same |
WO2012135659A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Novozymes A/S | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
MX2013012325A (es) | 2011-04-28 | 2013-11-01 | Novozymes Inc | Polipeptidos que tienen actividad de endoglucanasa y polinucleotidos que codifican los mismos. |
MX2013011827A (es) | 2011-04-29 | 2014-01-08 | Novozymes Inc | Metodos para mejorar la degradacion o conversion de material celulosico. |
US20140147895A1 (en) | 2011-07-22 | 2014-05-29 | Novozymes A/S | Processes for Pretreating Cellulosic Material and Improving Hydrolysis Thereof |
EP3091073B2 (en) | 2011-08-04 | 2023-03-08 | Novozymes Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
CA2838758A1 (en) | 2011-08-04 | 2013-02-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP2742129B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
US9493790B2 (en) | 2011-08-24 | 2016-11-15 | Novozymes, Inc. | Methods for producing multiple recombinant polypeptides in a filamentous fungal host cell |
CN103748226A (zh) | 2011-08-24 | 2014-04-23 | 诺维信股份有限公司 | 获得丝状真菌宿主细胞的阳性转化体的方法 |
US20140308705A1 (en) | 2011-09-20 | 2014-10-16 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same |
BR112014007651A2 (pt) | 2011-09-30 | 2017-04-11 | Novozymes Inc | polipeptídeo quimérico isolado, polinucleotídeo isolado, métodos para produzir um polipeptídeo quimérico e um produto de fermentação, para degradar ou converter um material celulósico, e para fermentar um material celulósico, planta, parte de planta ou célula de planta transgênica, e, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células |
PT2771508T (pt) | 2011-10-27 | 2022-03-23 | Buckman Laboratories Int Inc | Método e composição para tratamento enzimático de fibras para fabrico de papel e produtos de papel fabricados com elas |
CA2851855A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Bp Corporation North America Inc. | Use of plant promoters in filamentous fungi |
CA2851308A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Bp Corporation North America Inc. | Use of mammalian promoters in filamentous fungi |
DK2773656T3 (da) | 2011-10-31 | 2019-09-09 | Novozymes Inc | Polypeptider med cellulolyseforbedrende aktivitet og polynukleotider, som koder for dem |
BR112014011902A2 (pt) | 2011-11-18 | 2017-05-16 | Novozymes As | polipeptídeo e polinucleotídeo isolados, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo, e para produzir um mutante de uma célula parental, processos para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico ou material contendo xilano, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico ou material contendo xilano, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
CA2855451A1 (en) | 2011-11-21 | 2013-08-15 | Novozymes, Inc. | Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same |
EP3342860A1 (en) | 2011-11-22 | 2018-07-04 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
DK2785732T3 (en) | 2011-12-01 | 2017-06-19 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
WO2013087027A1 (en) | 2011-12-16 | 2013-06-20 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013096369A1 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Novozymes A/S | Processes and compositions for increasing the digestibility of cellulosic materials |
WO2013091547A1 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having catalase activity and polynucleotides encoding same |
CA2878019A1 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Novozymes, Inc. | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
WO2013096652A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Novozymes, Inc. | Methods for determining the degradation of a biomass material |
CN104245926B (zh) | 2012-04-27 | 2021-05-07 | 诺维信股份有限公司 | Gh61多肽变体以及编码其的多核苷酸 |
WO2013166312A1 (en) * | 2012-05-02 | 2013-11-07 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Biofuel production enzymes and uses thereof |
US8975058B2 (en) * | 2012-05-24 | 2015-03-10 | Roal Oy | Endoglucanases for treatment of cellulosic material |
BR112015005884A2 (pt) | 2012-09-19 | 2017-08-08 | Novozymes Inc E Novozymes As | processos para degradação de um material celulósico, para produção de um produto da fermentação, e de fermentação de um material celulósico, composição, e, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células |
WO2014058896A1 (en) | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2014066141A2 (en) | 2012-10-24 | 2014-05-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US20150376590A1 (en) | 2012-11-02 | 2015-12-31 | Bp Corporation North America Inc. | Thermotolerant Beta-Glucosidase Variants |
EP2931885A1 (en) | 2012-12-14 | 2015-10-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2014099798A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancinc activity and polynucleotides encoding same |
US8753860B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-06-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8778640B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-07-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8771994B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-07-08 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8778641B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-07-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8759040B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-06-24 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8993275B2 (en) * | 2013-02-12 | 2015-03-31 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
CN105164254B (zh) | 2013-03-08 | 2019-06-28 | 诺维信公司 | 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸 |
WO2014145768A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bp Corporation North America Inc. | Use of non-fungal 5' utrs in filamentous fungi |
WO2014155566A1 (ja) | 2013-03-27 | 2014-10-02 | 本田技研工業株式会社 | 耐熱性セロビオハイドロラーゼ |
EP2994529B1 (en) | 2013-05-10 | 2018-11-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
CA2919157A1 (en) | 2013-09-04 | 2015-03-12 | Novozymes A/S | Processes for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material |
MY186318A (en) | 2014-01-07 | 2021-07-08 | Novozymes As | Process for degrading mannan-containing cellulosic materials |
DK3186373T3 (da) | 2014-08-28 | 2021-03-22 | Renescience As | Solubilisering af kommunalt fast affald med enzymsammensætning |
BR112017004251A2 (pt) | 2014-09-05 | 2017-12-12 | Novozymes As | variantes de módulos de ligação a carboidrato e polinucleotídeos que os codificam |
ES2896153T3 (es) | 2014-09-23 | 2022-02-24 | Novozymes As | Procedimientos para producir etanol y organismos de fermentación |
DK3262165T3 (da) | 2015-02-24 | 2020-08-24 | Novozymes As | Cellobiohydrolasevarianter og polynukleotider, som koder for dem |
EP3067428A1 (en) | 2015-03-12 | 2016-09-14 | BETA RENEWABLES S.p.A. | A process for producing a hydrolyzed mixture from a pre-treated ligno-cellulosic slurry comprising a slurry liquid and slurry solids |
WO2016145363A1 (en) | 2015-03-12 | 2016-09-15 | Novozymes A/S | Multi-stage enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass employing an oxidoreductase with an aa9 polypeptide |
EP3268485A1 (en) | 2015-03-12 | 2018-01-17 | Novozymes A/S | Enzymatic hydrolysis with hemicellulolytic enzymes |
TN2017000318A1 (en) | 2015-03-12 | 2019-01-16 | Beta Renewable Spa | Multi-stage enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass |
US10519520B2 (en) | 2015-05-27 | 2019-12-31 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
WO2017019491A1 (en) | 2015-07-24 | 2017-02-02 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
CN108138153A (zh) | 2015-07-24 | 2018-06-08 | 诺维信股份有限公司 | 具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
CN107949637A (zh) | 2015-09-04 | 2018-04-20 | 诺维信公司 | 抑制酶组合物的aa9溶解性多糖单加氧酶催化的失活的方法 |
CN108350044B (zh) | 2015-09-22 | 2022-05-24 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
WO2017070219A1 (en) | 2015-10-20 | 2017-04-27 | Novozymes A/S | Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same |
CN114054481A (zh) | 2015-11-02 | 2022-02-18 | 雷内科学有限公司 | 用混合酶溶解城市固体废物 |
DK3393983T3 (da) | 2015-12-23 | 2023-12-18 | Envirozyme Llc | Fremgangsmåder til forøgelse af slams afvandingsevne med enzymbehandling |
EP3423577B1 (en) | 2016-03-02 | 2024-05-08 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
EP3433358B1 (en) | 2016-03-24 | 2022-07-06 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
WO2017205535A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2018026868A1 (en) | 2016-08-01 | 2018-02-08 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2018085370A1 (en) | 2016-11-02 | 2018-05-11 | Novozymes A/S | Processes for reducing production of primeverose during enzymatic saccharification of lignocellulosic material |
CN107607642B (zh) * | 2017-09-06 | 2020-12-29 | 上海烟草集团有限责任公司 | 一种鉴定烟草中蛋白与蛋白组的多维液相色谱质谱联用法 |
WO2019074828A1 (en) | 2017-10-09 | 2019-04-18 | Danisco Us Inc | CELLOBIOSE DEHYDROGENASE VARIANTS AND METHODS OF USE |
WO2019201765A1 (en) | 2018-04-20 | 2019-10-24 | Renescience A/S | Method for determining chemical compounds in waste |
BR112021011384A2 (pt) | 2018-12-12 | 2022-05-17 | Novozymes As | Polipeptídeo isolado, composição de enzimas, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, planta, parte da planta ou célula da planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e de fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico |
AU2021375268A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-06-01 | Renescience A/S | Method for sanitizing waste |
JP2023547177A (ja) | 2020-11-04 | 2023-11-09 | レネサイエンス エー/エス | プロセス水の再循環を含む廃棄物の酵素処理及び/又は微生物処理のための方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0639597B2 (ja) * | 1989-10-19 | 1994-05-25 | ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | 劣化抵抗洗浄剤組成物 |
JPH08126492A (ja) * | 1994-11-02 | 1996-05-21 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 新規セルラーゼ成分nce2およびそれを用いた育種法 |
WO1999001544A1 (en) * | 1997-07-04 | 1999-01-14 | Novo Nordisk A/S | FAMILY 6 ENDO-1,4-β-GLUCANASE VARIANTS AND CLEANING COMPOSIT IONS CONTAINING THEM |
WO2000039288A1 (fr) * | 1998-12-24 | 2000-07-06 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Polypeptides |
WO2003000941A2 (en) * | 2001-06-26 | 2003-01-03 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase i activity and polynucleotides encoding same |
US7348168B2 (en) * | 2002-12-20 | 2008-03-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase II activity and polynucleotides encoding same |
-
2006
- 2006-01-06 CN CN200680007263.9A patent/CN101137750B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-01-06 DK DK06733650.3T patent/DK1836299T4/da active
- 2006-01-06 JP JP2007550536A patent/JP4938688B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-01-06 EP EP06733650.3A patent/EP1836299B2/en not_active Not-in-force
- 2006-01-06 AT AT06733650T patent/ATE492633T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-01-06 WO PCT/US2006/000659 patent/WO2006074435A2/en active Application Filing
- 2006-01-06 US US11/327,821 patent/US7220565B2/en active Active
- 2006-01-06 MX MX2007008050A patent/MX2007008050A/es active IP Right Grant
- 2006-01-06 DE DE602006019050T patent/DE602006019050D1/de active Active
- 2006-01-06 ES ES06733650.3T patent/ES2358243T5/es active Active
- 2006-01-06 CA CA2593246A patent/CA2593246C/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK1836299T3 (da) | 2011-04-04 |
EP1836299B2 (en) | 2014-03-12 |
CN101137750B (zh) | 2014-05-21 |
US7220565B2 (en) | 2007-05-22 |
WO2006074435A2 (en) | 2006-07-13 |
JP2008526236A (ja) | 2008-07-24 |
ES2358243T5 (es) | 2014-06-09 |
EP1836299B1 (en) | 2010-12-22 |
DK1836299T4 (da) | 2014-03-31 |
EP1836299A2 (en) | 2007-09-26 |
CN101137750A (zh) | 2008-03-05 |
ATE492633T1 (de) | 2011-01-15 |
CA2593246A1 (en) | 2006-07-13 |
ES2358243T3 (es) | 2011-05-06 |
MX2007008050A (es) | 2007-08-21 |
CA2593246C (en) | 2016-06-21 |
DE602006019050D1 (de) | 2011-02-03 |
US20060218671A1 (en) | 2006-09-28 |
WO2006074435A3 (en) | 2006-08-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4938688B2 (ja) | セロビオヒドロラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードするポリヌクレオチド | |
US8318458B2 (en) | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same | |
US8119857B2 (en) | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same | |
DK2617826T3 (en) | Variants of glucosidhydrolase | |
US8080386B2 (en) | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081226 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20081226 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110920 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111216 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120124 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120223 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150302 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |