JP4867164B2 - 軽度うつ病もしくはうつ状態の改善または予防剤 - Google Patents
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(1)ジフシを配合したことを特徴とする、モノアミン再取り込み阻害剤。
(2)ジフシを配合したことを特徴とする、軽度のうつ病もしくはうつ状態の改善または予防剤。
(3)ジフシを配合したことを特徴とする、疲労感の改善または予防剤。
(4)ジフシを配合したことを特徴とする、イライラ感の改善または予防剤。
(5)ジフシを配合したことを特徴とする、不安感の改善または予防剤。
(6)ジフシを配合したことを特徴とする、抑うつ感もしくは憂うつ感の改善または予防剤。
である。
実施例1で得られたジフシエキスについて、下記の試験法によりモノアミン再取り込み阻害活性を評価する試験を行った。
7〜10週齢の雄性Crj:CD (SD) IGSラット(日本チャールス・リバー株式会社)の脳を摘出した後、氷冷条件下にて、前頭皮質、視床下部および線条体を素早く分割した。氷冷条件下にて各脳部位より血管を除去した後、それぞれ0.32mol/Lスクロースにてホモジナイズし、1000×g、4℃条件下の遠心分離により粗核画分を分離した。得られた上清より、20000×g、4℃条件下の遠心分離により粗シナプトソームを調製した(用時調整)。
ドパミン再取り込み阻害反応試験に用いる緩衝液は、118mmol/LのNaCl、4.7mmol/LのKCl、1.2mmol/LのMgSO4、1.2mmol/LのKH2PO4、25.0mmol/LのNaHCO3、1.27mmol/LのCaCl2、11.0mmol/Lのグルコース、0.1mmol/Lのパージリン、1.14mmol/Lのアスコルビン酸、0.067mmol/LのEDTA2Naをモノアミン再取り込み阻害反応試験時に最終反応濃度となるように調製した。ノルアドレナリン再取り込み阻害反応試験に用いる緩衝液は、119mmol/LのNaCl、4.8mmol/LのKCl、1.2mmol/LのMgSO4、2.0mmol/LのCaCl2、10.0mmol/Lのグルコース、0.1mmol/Lのパージリン、5.68mmol/Lのアスコルビン酸、25mmol/LのTrisをモノアミン再取り込み阻害反応試験時に最終反応濃度となるように調製した。緩衝液は氷冷条件下にて、95%酸素および5%二酸化炭素混合ガスを通気した(用時調製)。
粗シナプトソーム標本は、前頭皮質、視床下部および線条体より調製された粗シナプトソームを、モノアミン再取り込み阻害反応試験時に湿組織重量換算として400〜800倍になるように緩衝液にて希釈し、調製した(用時調製)。
[3H]ノルアドレナリン、[3H]ドパミン溶液は、モノアミン再取り込み阻害反応試験時に5nmol/Lの濃度になるように緩衝液にて希釈し、調製した(用時調製)。
エキスは、実施例1にて製造したジフシエキスを用い、乾燥原生薬重量換算として初回25g/Lの濃度になるように25%DMSO溶液に溶解した。その後、モノアミン再取り込み阻害反応試験時に0.25 v/v%のDMSO、10mg/L、30mg/L、100mg/Lの最終濃度になるように希釈した。
マイクロチューブに50μLのエキス溶液および350μLの粗シナプトソーム標本を添加し、混和した後に、25℃、15分間の前反応処置を行った。その後、100μLの[3H]標識モノアミン溶液を添加し、25℃、2時間の反応処置を行った。総取り込み量を算出するために、エキス溶液を添加せず、緩衝液を添加したマイクロチューブを用意した。非特異的取り込み量を算出するために、エキスあるいは緩衝液を添加せず、ノルアドレナリン再取り込み阻害反応時には最終濃度1μmol/Lに成るようにデシプラミン塩酸塩を、ドパミン再取り込み阻害反応時には最終濃度10μmol/Lに成るようにドパミン塩酸塩を添加したマイクロチューブを用意した。さらに、ノルアドレナリン再取り込み阻害反応試験では、エキスおよびデシプラミンの両溶液を添加したマイクロチューブを用意した。各濃度3点測定にて反応試験を行うために、同内容のマイクロチューブを3本用意した。
上記の反応後、速やかに0.3v/v%ポリエチレンイミンに湿潤したガラス濾紙を用いて、吸引ろ過した。濾紙は0.9w/v% NaClよりなる生理食塩水1mLを用いて、2回洗浄し、45〜50℃にて60分以上乾燥した。濾紙上の[3H]標識モノアミンの放射活性は常法の液体シンチレーションおよびシンチレーションカウンターを用いて測定した。
総取り込み量から非特異的取り込み量を差し引き、特異的取り込み量とした。エキスのモノアミン再取り込み阻害率は、エキス添加による特異的取り込み量の減少率を阻害率とした。試験結果を表1に示した。
実施例1で得られたジフシエキスについて、下記の試験法により抗うつ効果あるいは抗不安効果および抗イライラ効果を評価する試験を実施した。
試験時に6〜9週齢の雄性Crj : CD-1 (ICR) マウス(日本チャールス・リバー株式会社)を用いた。動物は、入手日を含めて少なくとも5日以上、飼料、水分自由摂取条件下にて、飼育した。飼育条件は室温 23±3℃、湿度 50±20 %、照明時間 12時間、換気回数 10回以上/時間、8〜12匹/ケージとした。
レセルピン溶液は、日本薬局方レセルピン注射液(アポプロン注1mg、第一製薬株式会社)を用い、日本薬局方注射用水(光製薬株式会社)にて、2.5mg/10mLの濃度になるように希釈して、調製した(用時調製)。
エキス溶液は、実施例1にて製造したジフシエキスを用い、乾燥原生薬重量換算として初回3.2g/10mLの濃度になるように1w/v%POE(60)硬化ヒマシ油(ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油-60)水溶液に懸濁した。その後、0.4g/10mL、0.8g/10mLおよび1.6g/10mLの濃度になるように希釈し、調製した。
レセルピンはノルアドレナリン作動性神経系の機能を低下させることにより低体温を誘発し、この低体温はノルアドレナリン再取り込み阻害作用を有する抗うつ薬によって抑制されることが広く知られている(Willner P.:Animal models of depression: an overview、Pharmacol.Ther.、45(3)、425-455、1990)
マウスを小型ケージ(175mm×275mm×H 130mm)に2匹/ケージづつ入れた。レセルピン溶液は、午後3〜7時にマウス体重1kgあたり10mLの容量になるように腹腔内投与した。翌日、エキス溶液を体温測定の1および4時間前の2回、マウス体重1kgあたり10mLの容量になるように経口投与した。体温は最終エキス投与の1間後に測定した。体温測定は、電子体温計(測定精度±0.05℃)を用い、直腸温度(測定部位:肛門より1.5cm)を測定することにより数値を得た。正常群にはそれぞれの溶媒のみを投与した。0g/kg投与(ジフシ未投与)群にはレセルピン溶液および溶媒を投与した。1群あたりの例数(匹数)は10例とし、試験結果は平均値(標準誤差)で表示した。有意差検定はStudentのt-検定を用い、危険率5%未満(P<0.05)にて有意とした。試験結果を表2に示した。なお、表中「*」は、対0g/kg投与群p<0.05を示す。
ガラス玉覆い隠し行動試験(抗不安効果および抗イライラ効果の評価)
ガラス玉覆い隠し行動試験は不安感やイライラ感を改善する代表的な薬物であるジアゼパムやフルボキサミンの薬理作用を評価することが可能である試験方法として広く知られている(Chaki S et al,the Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,304,2,818-828,2003)。
Claims (6)
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、ノルアドレナリン又はドパミン再取り込み阻害剤。
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、軽度のうつ病もしくはうつ状態の改善または予防剤。
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、疲労感の改善または予防剤。
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、イライラ感の改善または予防剤。
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、不安感の改善または予防剤。
- ジフシのエタノール溶液による抽出物を配合したことを特徴とする、抑うつ感または憂うつ感の改善あるいは予防用組成物。
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