JP4813174B2 - 冬野菜スプラウトからの機能性抽出物の製造およびその用途 - Google Patents
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Description
(1)下記工程:
(a)冬野菜種子を暗条件下にて発芽させ、次いで、明条件下にて発芽温度よりも低い温度においてスプラウトを得ること;
(b)得られたスプラウトを抽出すること
を特徴とする機能性抽出物の製造方法;
(2)下記工程:
(a)冬野菜種子を暗条件下にて20℃〜30℃で3日〜14日間発芽させ、次いで、明条件下にて0℃〜20℃未満で3日〜14日間置くことによりスプラウトを得ること;
(b)得られたスプラウトを抽出すること
を特徴とする、請求項1記載の機能性抽出物の製造方法;
(3)(1)または(2)記載の方法により得られる機能性抽出物;
(4)不凍活性を有するものである(3)記載の抽出物;
(5)カルシウム結合活性を有するものである(3)記載の抽出物;
(6)鉄結合活性を有するものである(3)記載の抽出物;
(7)(3)〜(6)のいずれかに記載の抽出物を含む食品;
(8)冷凍食品である(7)記載の食品;
(9)(3)〜(6)のいずれかに記載の抽出物を含むサプリメント;
(10)(3)〜(6)のいずれかに記載の抽出物を含む生体材料凍結保護剤;
(11)(3)〜(6)のいずれかに記載の抽出物を含む化粧品;
(12)(3)〜(6)のいずれかに記載の抽出物を含む飼料
を提供するものである。
冬野菜種子を暗条件下にて発芽させ、次いで、明条件下にて発芽温度よりも低い温度においてスプラウトを得ること;
(b)得られたスプラウトを抽出すること
を特徴とする機能性抽出物の製造方法
を提供する。
低温度制御が可能な位相査顕微鏡(Olympus、L600A)を使用し、ガラスシャーレを−20℃に保持し、その上に1μlの試料を置き、100℃/分で−40℃に温度を低下させる。その後、100℃/分で−5℃にし、そこから5℃/分で氷の結晶を溶解させる。結晶を単一にさせた後、1℃/分で温度を低下させ、氷を再結晶化し、写真を取り込んだ。ブランクとしてはMilliQを使用し、標準としては、AFP I(市販されている魚由来の不凍タンパク質、A/F Protein Inc., MA、 USA)を使用した。また熱ヒステレシス(Thermal hysteresis、℃)の測定は、オスモメーターで測定した。
タンパク質量はBradford法により測定した。
NaHCO3水溶液とCaCl2水溶液との反応からCaCO3が析出する反応:
NaHCO3+CaCl2→CaCO3+HCl+NaCl
を利用して、カルシウム結晶化抑制効果を判定した。
すなわち、20mM、pH8.7に調整した炭酸水素ナトリウム水溶液(1.5ml)に、実施例1で調製した粗抽出液を30μl添加し、スターラーで十分に攪拌した。その後、20mM、pH8.7に調整した塩化カルシウム水溶液(1.5ml)を添加し、25℃において反応させた。反応過程中、波長570nmにおける吸光度を経時的に測定した。
種々の発芽およびスプラウト成長条件を用いて得られた本発明の機能性抽出物を最終タンパク質濃度として100μg/ml含むもの、対照として10mMトリス緩衝液(pH8.0)を添加したものについてカルシウム結晶化抑制効果を試験した。
0.5mM EDTA(pH7.0)により鉄分を除去した試料(30μl)と塩化鉄(III)溶液(6mM、270μl)を混合し、20℃で5分間置いた後、NaOH水溶液(1.0M、270μl)を添加し、遠心分離(6000rpm、5分)して、上清の褐色度を肉眼で観察することにより鉄結合タンパク質の存在および鉄結合活性を測定した。
2.82gの小松菜種子から、様々な条件にて発芽段階およびスプラウト成長段階を行い、20mM酢酸ナトリウム緩衝液 pH4.5を用いて減圧抽出して抽出物を得た。発芽段階およびスプラウト成長段階に使用した媒体は水(100ml)のみであった。なお、種子は底面積292.5cm2の容器底に敷いた厚さ1.0cmのスポンジと脱脂綿上に撒いた。表1の結果からわかるように、発芽段階を暗条件下で行い、次いで、スプラウト成長段階を明条件下で行った場合に、十分な熱ヒステレシス値が得られ、抽出物中に不凍活性が存在すること、および十分なタンパク濃度が得られることがわかった。行った実験のうち、暗条件下25℃で1週間発芽段階を行い、次いで明条件下18℃で1週間スプラウト成長段階を行った場合に、熱ヒステレシス値およびタンパク濃度が最大となった。
2.82gの小松菜種子を用い、媒体(100ml)として水だけ、塩化カルシウム0.1%(w/v)水溶液、塩化鉄(III)0.1%(w/v)水溶液、ならびに塩化カルシウムおよび塩化鉄(III)をそれぞれ0.1%(w/v)含有する水溶液を用いて発芽段階およびスプラウト成長段階を行い、20mM酢酸ナトリウム緩衝液 pH4.5を用いて減圧抽出して抽出物を得た。なお、種子は底面積292.5cm2の容器底に敷いた厚さ0.5cmのスポンジと脱脂綿上に撒いた。
発芽段階およびスプラウト成長段階の詳細は以下のとおりである:
水だけの系(媒体は水100ml)
暗条件下25℃1週間発芽、明条件18℃1週間スプラウト成長
塩化カルシウム添加系(媒体は塩化カルシウム0.1%(w/v)水溶液100ml)
暗条件下25℃1週間発芽、明条件18℃1週間スプラウト成長
塩化鉄添加系(媒体は塩化鉄0.1%(w/v)水溶液100ml)
暗条件下25℃1週間発芽、明条件18℃1週間スプラウト成長
塩化カルシウムおよび塩化鉄添加系(媒体は塩化カルシウムおよび塩化鉄(III)をそれぞれ0.1%(w/v)含有する水溶液100ml)
暗条件下25℃10日間発芽、明条件18℃10日間スプラウト成長
上記の方法にて、各抽出液の不凍活性(抽出物のタンパク濃度を100μg/mlとして氷結晶の構造を観察)、カルシウム結合活性、および鉄結合活性を調べた。水だけの系、および塩化カルシウム添加系で得られた抽出液は不凍活性およびカルシウム結合活性を有していた。塩化鉄添加系、ならびに塩化カルシウムおよび塩化鉄添加系で得られた抽出物は不凍活性およびカルシウム結合活性に加えて鉄結合活性を有していた。
また、塩化カルシウム添加系、塩化鉄添加系、塩化カルシウムおよび塩化鉄添加系では、水だけの系と比較して、スプラウトの長さが約2倍となり、単位面積あたりのスプラウト量および活性量が増加することがわかった。
この実験で得られた抽出物の不凍活性を図1に示す。いずれの系で得られた抽出液も、不凍活性を有していたことがわかる。
この実験で得られた抽出物のカルシウム結合活性を測定した結果を図2に示す。対照として用いたTris−HCl(10mM、pH8.0)以外は、いずれの系の抽出液においても強いカルシウム吸収活性が見られた。なお、今回の実験で得られた抽出カスについてもカルシウム吸収活性が見られた(データ示さず)。抽出カスを再抽出することにより、カルシウム吸収活性を有する抽出液をさらに得ても良いと考えられる。
この実験で得られた抽出物のカルシウム結合活性を測定した結果を図3に示す。水だけの系および塩化カルシウム添加系にて得られた抽出液には鉄結合活性は見られなかったが、塩化鉄添加系、塩化カルシウムおよび塩化鉄添加系にて得られた抽出物には鉄結合活性が見られた。
また、この実験で得られた抽出物の不凍活性は、60℃で30分加熱処理した後であっても約50%残存していた。
このように、本発明によれば、冬野菜種子から、目的に応じた複数の活性を有する機能性抽出液が容易に得られることがわかった。しかも、種子を材料として用いるので、季節を問わずに機能性抽出物を製造でき、スペースを有効利用できるので単位面積あたり得られる活性も多い。
Claims (12)
- 下記工程:
(a)小松菜種子を暗条件下にて発芽させ、次いで、明条件下にて発芽温度よりも低い温度においてスプラウトを成長させること;
(b)得られたスプラウトを抽出すること
を特徴とする、不凍活性を有する機能性抽出物の製造方法。 - 下記工程:
(a)小松菜種子を暗条件下にて20℃〜30℃で3日〜14日間発芽させ、次いで、明条件下にて0℃〜20℃未満で3日〜14日間置くことによりスプラウトを得ること;
(b)得られたスプラウトを抽出すること
を特徴とする、請求項1記載の不凍活性を有する機能性抽出物の製造方法。 - 工程(a)において、カルシウム分および/または鉄分を添加した水性媒体を用いて発芽および成長を行う、請求項1または2記載の製造方法。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の方法により得られる、不凍活性を有する機能性抽出物。
- カルシウム結合活性を有するものである請求項4記載の抽出物。
- 鉄結合活性を有するものである請求項4記載の抽出物。
- 請求項4〜6のいずれか1項記載の抽出物を含む食品。
- 冷凍食品である請求項7記載の食品。
- 請求項4〜6のいずれか1項記載の抽出物を含むサプリメント。
- 請求項4〜6のいずれか1項記載の抽出物を含む生体材料凍結保護剤。
- 請求項4〜6のいずれか1項記載の抽出物を含む化粧品。
- 請求項4〜6のいずれか1項記載の抽出物を含む飼料。
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