JP4718778B2 - ウエストナイルワクチン - Google Patents
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Description
発明の分野
本発明は、ウエストナイルウイルスワクチン、および同ワクチンを哺乳動物、特にウマに投与する方法に関する。
フラビウイルスとして知られるウエストナイルウイルスは、1937年にアフリカで初めて同定され、1999年に北アメリカで初めて見出された。渡り鳥が、国内および国々の間で感染を拡大する主な手段と考えられる。ウイルスは、ウイルス血症の鳥を刺したことにより感染を獲得した蚊により伝染される。ウイルスは次いで、成体の蚊の吸血の間に増幅される。感染した蚊が次いで、ヒトおよび動物における吸血時に、彼らにウイルスを伝染する。
本発明により、弱毒化、不活化、または死菌完全またはサブユニットウエストナイルウイルス、該ウイルス由来の抗原、該ウイルス由来のDNA、プラスミドウエストナイルウイルスDNA、該ウイルスの配列インサートを有するプラスミド、およびそれらの混合物から成る群から選択される免疫学的活性成分;代謝可能なオイルの免疫刺激量を好ましくは含むアジュバント;および任意に医薬上許容されるキャリアを含むワクチン組成物が提供される。
さらに、本発明の目的および態様は、以下に示す詳細な記載および請求項から明らかとなろう。
該して、新規なワクチンの設計に伴う問題は、生きたウイルスワクチンが、所定の標的宿主において十分な安全性を潜在的に欠く可能性があること、および死菌または不活化ウイルスワクチンが、十分に有効な免疫学的反応を刺激する能力を潜在的に欠く可能性があることである。共通して、アジュバントまたは免疫原性刺激化合物をワクチン組成物中に、死菌または不活化ウイルスと組み合わせて用いて、許容される効能を得る。しかし、標的宿主に対する安全性は、アジュバントの添加により損なわれることが多い。例えば、妊娠した動物は、多くの場合、アジュバントを含む死菌または不活化ウイルスワクチンを投与した後、流産を経験する割合が有意に高いことが知られている。
特に好ましいアジュバントは、SPオイルとしても呼ばれる。記載および実施例に用いられるように、「SPオイル」なる用語は、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、スクアラン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、および緩衝化塩溶液を含むオイルエマルジョンを示す。一般に、SPオイルエマルジョンは、約1〜3%v/vのブロックコポリマー、約2〜6%v/vのスクアラン、より詳細には、約3〜6%のスクアラン、および約0.1〜0.5%v/vのポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含み、残りは、緩衝化塩溶液である。
前記のごとく、キャリアを含む本発明のワクチン組成物の成分を、利用可能な方法を用いて、組み合わせてもよい。
従って、本発明により、ウマ科の動物、好ましくはウマにおけるウエストナイル脳炎の予防または緩和のための方法であって、該ウマ科の動物に、前記の安全化したワクチン組成物を投与することを含む方法も提供される。
ワクチンの調製
A/SPオイルの調製
Ames, IAのUSDA施設から得たウエストナイルウイルスのウマ単離物(ロット番号VM−2、ウマ起源、1999年ノースアメリカ単離物、VeroM細胞培養における第二継代)を、OptiMEM(LIT, Grand Island, NY)組織培養培地おけるVero細胞のマルチプル培養にて、37℃にて培養した。回収物を滴定し、次いで10%ホルマリン溶液の.1%の最終濃度への添加により不活化した。これを、37℃にて144時間以上不活化する。次いで0.1%のホルマリンをさらに添加し、37℃にてさらに144時間以上インキュベートする。
ワクチンを、1mL投与量当たり1−20体積%のSPオイル中に適当な容積の不活化ウイルス液を懸濁することにより、処方する。
試験ワクチンの筋肉内注入に対する抗体反応の評価
この評価では、ウマを無作為に4つの群に分ける:12頭のウマの第1群に、1×107TCID50(組織培養感染投与量)の投与量にて試験ワクチンを投与する。;12頭のウマの第2群に、5×107TCID50の投与量にて試験ワクチンを投与する。;5頭のウマの第3群に1×108TCID50の投与量にて試験ワクチンを投与する。;および8頭の第4群を、非ワクチン化環境コントロールとして維持する。処置したウマに、指定される群に従いワクチンの第1投与を与える。第1投与後21日にて、同じワクチンの第2投与を投与する。全てのウマを第1および第2投与の投与時点で、および第2投与の投与後28日まで毎週の間隔にて、血清に関して採血する。
2 Sigma, St. Louis, MO
3 Sigma, St. Louis, MO
4 Sigma, St. Louis, MO
表Iのデータから認めることができるように、全ての群からの処置したウマはウエストナイルウイルスに対する抗体の有意な増加を示したが、対照のウマは、低〜不在の抗体レベルを維持した。ワクチンを受けたウマにおける反応のレベルは、それらが受けたワクチンにおける抗原のレベルとは無関係であった。
フィールド条件下でのウマにおける試験ワクチンの安全性の評価
この評価では、200頭の健康な雄および雌のウマに、1mL投与量のワクチン化として筋肉内投与により投与した後、3〜4週にて第2の1mL投与量ワクチン化を行う、6×106TCID50の投与量の不活性試験ワクチンにてワクチン化する。処置したウマを、農場または厩舎に関する常套の農業的慣例を用いて飼育および給餌する。全ての処置されたウマを、獣医師により、ワクチン化後30分間、迅速な反応、唾液分泌、呼吸困難または呼吸異常、震え、または過敏症などに関して観察する。ワクチン化後2週間、ウマを毎日、いずれかの遅延性の反応、無気力、食欲不振、または注射部位の通常でない膨張に関して観察する。5〜10mLの血液サンプルを、第1ワクチン化の日(0日)にて、および第2ワクチン化後2週またはそれ以上の週にて少なくとも1回以上(36日またはそれ以上)、処置したウマから静脈穿刺により採血する。PRNT5試験を用いる血清学的アッセイが好ましい。(5 Chang, G.J.; Hunt, A.R. および Davis B., ジャーナル オブ ヴィロロジー(Journal of Virology), 74 pp 4244-5422 (2000))
フィールド条件下のウマにおける試験ワクチン(多価および単価調製物)の効能の評価
死菌ウエストナイルウイルス(WNV)を含んでいる組み合わせワクチンの、実験的WNVチャレンジに対する効能を評価した。
トータル30頭のウマを1のワクチン化群(20頭)および1の対照群(10頭)に割り当てた。ワクチン化群におけるウマには、死菌ウエストナイルウイルス(5%のSPオイルにての投与当たり5×107TCID50)、インフルエンザウイルス、脳炎ウイルス(イースタン、ウエスタン、およびベネズエラ)、鼻肺炎ウイルス(血清型1および4)、および破傷風毒を含んでいる試験ワクチンの2回投与を、3週間間隔で、筋肉内に施した。血清サンプルをプラーク低下中和試験(PRNT)により測定する抗体反応のために、周期的に回収した。第2ワクチン化後24日にて、全てのウマをWNVにて皮下にてチャレンジした。チャレンジ後、ウマを腸温およびあらゆる臨床徴候に関して、1日2回2週間、およびその後は週1回、ウイルス血症の検出に関してモニターした。ウマを、21または22DPCにて、安楽死させ、そして検死を行った。脳脊髄液(CSF)、脊髄(頚部、胸部、および腰部)、および脳(前脳、後脳、延髄、および脳幹)組織サンプルを、総合的病理に関して試験し、ウイルスの単離のために回収した。
この第2の試験からの結果により、死菌単価WNVワクチンでワクチン化したウマにおけるウイルス血症に対する有意な保護(94%の予防可能な割合)が立証される。これらの結果により、さらに、保護免疫の長期持続も立証される。
フィールド条件下のウマにおけるDNA試験ワクチンの効能の評価
この実施例により、本発明のさらなる態様の部分としての、ウエストナイルウイルス(WNV)DNAワクチンの効能が立証される。DNAワクチンは、5%のSPオイルを2mL投与量当たりに添加した100μgの精製DNA含み、実験的WNVチャレンジに対して評価した。
Claims (26)
- 免疫学的に活性な量の不活化完全もしくはサブユニットウエストナイルウイルス;アジュバントとしてのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、スクアラン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートおよび緩衝塩溶液;および任意に医薬上許容されるキャリアを含むワクチン組成物であって、ウエストナイル感染に対して最大で12ヶ月までの間有効であり、該ウエストナイルウイルスがATCC受入番号PTA−6860のVM−2株またはその継代培養株である、ワクチン組成物。
- アジュバントが、ワクチン組成物の0.1〜50%v/vを構成する、請求項1記載の組成物。
- アジュバントが、1つまたはそれ以上の湿潤剤および/または分散剤をさらに含む、請求項1記載の組成物。
- 湿潤剤および/または分散剤が、アジュバントの0.1〜25%v/vを構成する、請求項3記載の組成物。
- 湿潤剤または分散剤が、非イオン性界面活性剤から成る群から選択される、請求項4記載の組成物。
- 非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン/ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、およびポリオキシエチレンエステルから成る群から選択される、請求項5記載の組成物。
- 免疫学的活性成分が、ワクチン組成物のユニット投与量当たり、1×104TCID50〜5×108TCID50を提供するのに十分な量で存在する、請求項1ないし6のいずれか一項に記載の組成物。
- 免疫学的活性成分が、ユニット投与当たり少なくとも1×106TCID50を提供するのに十分な量で存在する、請求項7記載の組成物。
- 5×107TCID50のウイルスを含む、請求項8記載の組成物。
- 狂犬病ウイルス、イースタンウマ脳炎ウイルス、ウエスタンウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、EHV-1またはEHV-4などのウマヘルペスウイルス、エーリキア リスチシイ(Ehrlichia risticii)、ストレプトコッカス エキ(Streptococcus equi)、破傷風トキソイド、ウマインインフルエンザウイルス(EIV)、イースタン、ウエスタン、およびベネズエラ鼻肺炎ウイルスの1つまたはそれ以上に対して指向されるワクチン成分をさらに含む、請求項1ないし9のいずれか一項に記載の組成物。
- 不活化ウエストナイルウイルスのユニット投与当たり、少なくとも1×104TCID50、および4%〜10%v/vの、1〜3%のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー;2〜6%のスクアラン;および0.1〜0.5%のポリオキシエチレンソルビタンモノコレエートから成るアジュバントを含む、請求項1記載の組成物。
- 少なくとも2の投与ユニットに処方される、請求項1ないし11のいずれか一項に記載の組成物。
- 0.5〜5mlの組成物から成る1またはそれ以上の投与ユニットにて組成物が提供される、請求項1ないし12のいずれか一項に記載の組成物。
- 投与当たり50〜3,000μgの量のウエストナイルプラスミドDNAを含む、請求項1ないし12のいずれか1項記載の組成物。
- 組成物が、投与当たり100から1,000μgを構成する、請求項14記載の組成物。
- 組成物が、投与当たり100から250μgを構成する、請求項15記載の組成物。
- ユニット投与当たり少なくとも1×104TCID50の不活化ウエストナイルウイルス;および4〜10%v/vの、1〜3%のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー;2〜6%のスクアラン;および0.1〜0.5%のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートから成る代謝可能なオイルアジュバントを含むワクチン組成物であって、該ウエストナイルウイルスがATCC受入番号PTA−6860のVM−2株またはその継代培養株である、ところのワクチン組成物。
- ユニット当たり少なくとも1×106TCID50の 不活化ウエストナイルウイルス;および少なくとも1%v/vの、少なくとも1つの代謝可能なオイル;および少なくとも1つの湿潤剤または分散剤を含むアジュバントを含む、ウマ科の動物のために安全化された、および有効なウエストナイルウイルスワクチンであって、該ウエストナイルウイルスがATCC受入番号PTA−6860のVM−2株またはその継代培養株である、請求項1記載のワクチン組成物。
- 請求項1〜18のいずれか1項に規定するワクチン組成物をウマ科の動物に投与することを含む、ウマ科の動物におけるウエストナイル脳炎の予防または緩和のための方法。
- ウマ科の動物がウマである、請求項19記載の方法。
- ウマが、妊娠した雌ウマである、請求項20記載の方法。
- ワクチン組成物を非経口にて投与する、請求項21記載の方法。
- ワクチン組成物を筋肉内に投与する、請求項22記載の方法。
- 不活化 完全もしくはサブユニットウエストナイルウイルスを含む免疫学的活性成分の、ウエストナイルウイルスにより引き起こされる哺乳動物または鳥類における疾患の予防または緩和における使用のための、請求項1〜18のいずれか1項に記載するワクチン組成物の調製における使用。
- ワクチン組成物が、ウエストナイルウイルスにより引き起こされるウマ科の動物における疾患の予防または緩和における使用のためのものである、請求項24記載の使用。
- ウマ科の動物がウマである、請求項25記載の使用。
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