JP4709452B2 - エンドトキシンの体外除去方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
（関連出願とのクロスリファレンス）
本願は１９９９年９月２９日に出願された米国仮出願番号６０／１５６６４９号に基づく優先権を主張する。
（連邦からの研究支援の認定）
適用なし
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、敗血症の治療処置のために体外吸着によって血液又は血漿からエンドトキシン及びサイトカイン誘導物質を選択的に除去する能力を有する血液処理材料に関する。
【０００３】
エンドトキシンは、グラム陰性バクテリアに由来するリポ多糖類であり、敗血症及び敗血症性ショックの主要な原因であり、５０％を越える致死率を有する。エンドトキシンは、生きたバクテリアが存在していなくても感染の後血中に存続できる。エンドトキシン分子は、高度に保存された領域を持ち、その領域は幾つかの長い脂肪酸側鎖及び２つの少なくとも負に帯電したリン酸基を持つ糖環を含むLipid-A部分で構成される。Lipid-Ａ部分は、バクテリアのタイプに依存して非常に変動する多糖鎖と連結されている。病理学的効果は、主として分子のLipid-A部分に由来する。Lipid-A部分の接近可能性は、多糖類側鎖の性質、及び塩、水、糖分子、血漿、血液、ｐＨ、界面活性剤等のような因子を含む周囲の媒介要因により大きく変動する。例えば、高塩濃度によりエンドトキシンのミセル及び他の超分子構造が誘導され、その結果、異なる活性を示す。
【０００４】
エンドトキシンは、例えばＴＮＦ−αを生産するＣＤ１４陽性白血球に対するそのサイトカイン誘導効果を測定することによりアッセイされるが、その誘導効果は、例えば、R&D System, Bad Homburg, Germanyから購入可能なキットによるエライザ技術又はＬＡＬ誘導色素生産性基質反応（Chromogenics, Moeldwagen, Sweden）により解析され得る。エンドトキシンの分子量は、多糖類側鎖及びその超分子構造に依存して、５０００ダルトンから数１００万ダルトンの範囲に及ぶ。
【０００５】
大抵の体外除去方法は、様々な基質に固定化された正に帯電した吸着物質を使用し、エンドトキシンの負に帯電したリン酸基を利用してきた。Kodama等（欧州特許第０１０７１１９号、欧州特許第０１２９７８６号）は、ポリスチレンファイバーに共有結合的に固定化されたポリカチオン性のPolymyxin Bを開示し、そのような材料のメッシュ状ファイバーを満たした装置で、血液からエンドトキシンを吸着することについて述べている。また、Otto等（欧州特許第４２４６９８号）は、血液からエンドトキシンを吸着するための、ポリ（コメタクリレート）ビーズ上に固定化されたポリカチオン性のPolymyxin Bについて開示した。Falkenhagen等（Aritficial Organs (1996) 20:420）は、ポリカチオン性のポリエチレンイミンでコートされたセルロース性のビーズ上で、血漿からエンドトキシンを吸着することについ述べている。Mitzner等 [Artificial Organs (1993) 17(9):775]は血漿からのエンドトキシンの除去のためのマクロ多孔性セルロースビーズ上に固定化したPolymyxin Bとポリエチレンイミンを記述している。Kodamaの技術を取り入れた製品は、日本において市販されている；しかし、Polymyxin Bは強い腎毒性を示すとの事実が、血液中にPolymyxin Bが浸出する危険性により、他国での登録を妨げる欠点となっていた。エンドトキシンリガンドとしてのポリエチレンイミンは、ヘパリンを強く吸着し血小板とも相互作用するという二つの不都合を有しており、インヴィボでの使用では血液凝固の問題を引き起こす。血漿タンパク質を吸着する能力は、特異的でかつ選択的なエンドトキシン吸着剤を開発するという重要な問題を引き起こす。
【０００６】
欧州出願（欧州特許第０４９４８４８号、欧州特許第０１２９７８６号, Pharmacia Upjohn）はセファロース上のアルギニンリガンドを用いたエンドトキシンの除去について開示している。インヴィトロでの試行は保証されるようであったが、更なる改善は行われなかったようである。Anspach（国際公開第９７/３３６８３号、ＤＥ１９６０９４７９）は、ポリスチレン、N,N-ジエチルアミノエタン、リジン、アルギニン、ヒスチジン又はヒスタミンなどのカチオン性リガンドのポリアミドマイクロフィルトレーション膜上への固定化について記述し、タンパク質溶液から最大約５０％の除去性を示すデータを開示した。しかしながら、利用性は血液又は血漿より低タンパク質濃度の溶液に限定された。Hoess等（国際公開第９５/０５３９３号）は、エンドトキシン吸着性を有するペプチドについて記述している。当該ペプチドは、疎水性アミノ酸と交互にされた、親水性で正に帯電するアミノ酸で構成される。血液又は血漿からのエンドトキシン吸着に対するデータは報告されなかった。Evans等（国際公開第９６/４１１８５号）は、正に帯電した中心間に特定の間隔を持つようにアミジン基をマクロ多孔性ビーズ上に固定化することについて記述している。この物質は、血漿及び他の体液からのエンドトキシンの除去に対して適していると報告されている；しかしながら、この物質は購入可能ではないようである。Otto等（欧州特許出願第０８５８８３１号）は、マクロ多孔性のポリメチルメタクリレートビーズ上に、共有結合的に固定化されたリガンドとしてアルブミンを用いた全血液からのエンドトキシンの除去について開示している。血漿中の静的な条件下でのインヴィトロのデータにより、優れたエンドトキシン吸着能が示されたが、治療への応用のような流動条件下での全血液に対して適用した場合、おそらく固定化されたアルブミンに対するエンドトキシンの弱い結合性によりエンドトキシン除去作用は非常に制限された。
【０００７】
他の研究者は、血漿からのエンドトキシンの除去に対して非選択的表面の使用を探索してきた。Ash等（Biologic DTPF-system TM; ISFA-congress, Saarbrueken/Germany, April 15-19, 1999）は、インヴィトロにおいて、微細な粉状のチャコールであってリガンドを持たず、およそ１０００ｍ２／ｇチャコール／１０ｍｌ血漿の表面積となるもので、血漿を含むエンドトキシンを処理した。高いエンドトキシン除去性が報告されたが、有益な物質を含む他の成分でどのようなものが除かれたかということについては、より詳細に報告されなかった。Tetta等（欧州特許第０７８７５００号）は、血漿からのエンドトキシンの除去に対し、正に帯電したイオン交換ビーズの使用について記述し、動物実験において９０％の除去を報告した。
【０００８】
要するに、一つのアプローチは、非常に広い吸着面積を利用することによりできるだけ簡便に多くのエンドトキシンを除去することである。しかし、非特異的結合によりある種の抗体及び血液凝固因子のような正常な血液成分の付随的な除去が生じ得る。付随的な除去は望ましくない。また、非特異的結合物質の使用は、細胞の活性化を回避するために血漿の処理に限定される。非特異的結合物質は、予期せぬ副次的な反応の潜在的危険性により全血液への使用には実用的ではないと考えられる。
【０００９】
異なるアプローチは、polymyxin B又はヒスチジンのような特異的結合リガンドの使用に基づいたKodama等、上掲又はOtto等、上掲に開示により説明される。このようなリガンドは、血液成分の付随的な除去回避するために十分な特異性を示す一方で、結合能は、その時のエンドトキシン程度により不定である。低い結合能を補うために、受け入れがたい程多量の体外血液量を必要とし、迅速なエンドトキシンの除去を達成するためには、大きな吸着チャンバーが必要であろう。polymyxin Bリガンド吸着剤に対する結合能の欠如が、吸着剤がエンドトキシンを取り除くことができたのは限られた時間のみであった動物実験において明らかにされた[Otto等（1997）Therapeutic Apheresis 1:67]。被検動物は無処理のコントロールに比べるといくらか長く生存したが、生存率には影響がなかった。
【００１０】
吸着剤としての血清アルブミンの利用が報告されている。ビーズタイプの支持物質への非共有結合的な結合が、Hirae等の欧州特許８００８６２号及びSuzuki等の欧州特許０２８９３７号によって報告されている。共有結合的に結合されたアルブミンがまた開示されている（Otto、欧州特許第８４８８３１号）。アルブミンを使用する理論的根拠は、アルブミンが既に血流中において結合及び輸送タンパク質として機能しているということである。固定化アルブミンの実用的な使用は、アルブミンが十分な結合力によりエンドトキシンと結合しないという点から制限される。
高分子量タンパク質を吸着する血液透析膜、例えば、ＡＮ６９（Gambro-Hospal）などは、それらのエンドトキシン及びサイトカイン吸着能により、敗血症関連反応の非常に低い発症率のための、良好な膜表面であると考えられる。
【００１１】
（発明の概要）
本発明により解決される課題は、一方では、多様なエンドトキシンを効率的に吸着するための十分な異質性を有すると同時に、血中の他の生理的構成成分を吸着することを避け、不適当な副次的反応を引き起こさないように、エンドトキシン一般に対して十分な特異性を有するエンドトキシン吸着リガンドを考案することである。このために、ポリカチオン性分子種が、７．２の生理的なｐＨ下において正に帯電するアミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、又はヒスチジンから、非常に高度な多分散性（重縮合度、分岐度、コイル状態に関し）を生じるように、水で希釈された溶液中での重縮合工程を使用して合成された。広く分布したオリゴペプチドは、多孔性の固体状態の媒体、例えば、塩化シアヌル、カルボニルジイミダゾール、プロムシアン（promcyan）、又は水溶性カルボジイミドのような一般的なカップリング剤を使用して活性化され、洗浄後、容器に充填され滅菌されたビーズ又は膜などの基質上に固定化され得る。意外にも、高度なオリゴペプチドの異質性は、エンドトキシンの高度な異質性と一致する結果、異なる出所からの高いエンドトキシン除去が得られる。
【００１２】
ヒト又は動物非処置体の血液からのエンドトキシンの体外除去は、固体状態の支持媒体に固定化された本発明の多分散的オリゴペプチドで構成される吸着剤と血液を接触させることにより、達成される。支持媒体は、好ましくは、血液細胞の通過を可能らなしめるのに十分な空隙率を有する膜、粒子ベッド又は繊維状マットのような多孔性物質である。特に好ましい支持物質は、ビーズ状の形態であり、容器に充填することが可能で、そのビーズは、カラム又はろ過ベッドに充填したときに、必要な空隙率を提供するのに十分なサイズを持つ。当該技術分野において既知の適当なビーズ材料の例は、以下に提示される。
【００１３】
全血液からのエンドトキシンの体外除去に関する装置は、当該技術分野の一般的な原理に従って構築され得る。そのような装置の基礎的な構成成分は、既述のような固相支持媒体上に固定化されたエンドトキシンリガンドを有する吸着剤を収容し、保持するように構築され、流入口と流出口を備える容器である。流入口と流出口は、流入口へ入る血液が流出口を通って出る前に吸着剤と接触するように吸着剤に対して配置される。好ましくは、装置の構成は、血液が装置を通過する間における吸着剤との接触を最大にするように設計される。様々なこの種の設計が当該技術分野において知られている。例えば、装置は、一端に流入口を、他端に流出口を有する吸着ビーズが充填された中空の筒状体とできる。微小管アレイのような他の装置が構築可能である。容器の幾何学的構造と容量、及びこれに収容される吸着剤のかかるあらゆるバリエーションが、公知の原理に従って設計され得る。
【００１４】
ヒト又は動物非処置体の血液からのエンドトキシンを除去する方法は、非処置体からの血液の一部を除き、本発明に係る吸着剤と血液を接触させ、これによりエンドトキシンを吸着剤に結合させた後、患者に血液を戻すことを含む。好ましくは、本方法は連続的な流れで実施される。血液が抽出され戻される患者の血管の位置は、互いに異なる位置でも、同じ位置でもよい。後者の場合、本方法の侵襲性を減ずる単一針技術（single needle techniques）が、当該技術分野において知られている。
【００１５】
処理時間は、血液中のエンドトキシン濃度、存在するエンドトキシンの型、エンドトキシンを除去するための吸着剤の能力、流速などに依存し、これら全ては当該技術分野において知られているような方法で観察し調整可能である。
本発明は、分子量の範囲が５００から５０，０００ダルトンで生理的なｐＨ（等電点＞７．２）において正に帯電する一又は複数のアミノ酸で構成される、広く分布し及び／又は高度に分岐したペプチドを提供する。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
一般に、ここで使用される用語及び語法は、当該分野で認められている意味を持ち、標準的なテキスト、定期刊行物及び当業者に知られている背景を参照することにより見いだされ得るものである。後述の定義は、本発明の脈絡における特定の使用法を明らかにするために提示される。
【００１７】
多分散度とは、ここでは、一般的な定義である、Ｍｗ/Ｍｎ（数平均分子量；Ｍｎに対する重量平均分子量；Ｍｗの割合）のみならず、分岐度のような異質性をも含むものと定義される。ここで定義される多分散度とは、多分散度が既知の標準物質と比較した場合、分岐により電荷密度が減少するにつれて、クロマトグラフィーにおける移動度（Ｒｆ）が増加するような条件下において、薄層クロマトグラフィーにより評価され得る。
【００１８】
ここで用いられる「オリゴペプチド」とは、ペプチド結合によって互いに連結された、一般には約２０残基までの１を越えるアミノ酸を含むポリマーを意味する。直鎖状のオリゴペプチドは、α−カルボキシル基及び隣接する残基のα−アミノ基との間のアミド結合によって形成されるオリゴペプチドを意味し、分岐オリゴペプチドは一又は複数の非α−アミノ基に関わるアミド結合により形成されるオリゴペプチドを意味する。
【００１９】
多分散的アルギニンリガンドの調製
５．２ｇのＬ−アルギニン（Sigma, A-5006）を、４０℃にて２６ｇの逆浸透処理水に懸濁させた。４．１６ｇのＷＳＣ.ＨＣｌ（１-エチル-３-(３-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド、Novabiochem, 01-62-011）を、室温にて２６ｇの逆浸透水に懸濁させた。これら２つの溶液を混合し、室温にて１８時間の反応時間にわたり撹拌した。
重縮合は、ｐＨ１１．５で行われた。アルギニンのグアニド基は、おおよそ１２．５のｐＫを示すため、約１０％のグアニド基が脱プロトン化され、側鎖分岐反応において利用可能である。分岐度は、反応ｐＨを調節することにより調節された。水溶性カルボジイミドビーズの使用により、Ｄ−及びＬ−アミノ酸が結果的に生じるオリゴペプチド中に存在するようにラセミ化が誘導される。
多分散度は、移動相としてＣＨＣｌ３：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０（45%のNH3溶液）を用いたシリカゲル（Kieselgel 60F, Merck）上の薄層クロマトグラフィーにより測定された。結果は表Ｉに示す。
【００２０】
【００２１】
また、前述の反応は、ｐＨ＞７．２において正に帯電しているリジンもしくはヒスチジンもしくは他のアミノ酸を使用し、又はそのようなアミノ酸の混合物の重縮合によって行うこともできる。例証されたポリアルギニンのように、多分散度は当該技術分野において理解されると思われるが、分岐ポイントとして役立つように利用可能な脱プロトン化されたアミノ基の集団を調節するために、反応ｐＨの選択によって制御することができる。
【００２２】
本発明に従い作製されたオリゴペプチドの多分散度は、当該分野で理解されている任意の方法により測定することができる。多分散度を測定するために既知のクロマトグラフィーによる方法は、既知の多分散度の標準物質と共に本発明のオリゴペプチドを評価するために使用することができる。また、多分散度は、表Ｉに示されるように薄層クロマトグラフィーにより簡便に評価でき、表Ｉでは本発明に従って作製された組成物のＲｆ値が、多分散度が既知の標準物質のＲｆ値と比較されている。本発明に適するオリゴペプチドは、４５％のＮＨ３溶液中、溶媒層としてＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０を使用して、シリカゲルの薄層クロマトグラフィーにより測定した場合、０．４又はそれ以上、好ましくは０．６又はそれ以上のＲＦ値を有するならば、十分に多分散的である。
【００２３】
基質の調節
１．活性化ビーズ：
以下に示す購入可能な活性化ビーズは、エポキシ及び／又はアズラクトンの添加による求核性環開裂により、多分散性リガンドの固定化に関して調節することができる。
Toyo Pearl HW70EC(TosoHaas)
Toyo Pearl HW65EC(TosoHaas)
Toyo Pearl AF650M(TosoHaas)
Eupergit C250L(Roehm)
Eupergit 250(Roehm)
Fractogel EMD Epoxy(M)(Merck)
Fractogel Azlactone Epoxy(S)(Merck)
Poros EP(Perkin Elmer-Biosystems)
微細な粒子は塩類溶液により繰り返し洗浄するか、２０μｍ及び５０μｍのメッシュ状ネットで各々ろ過することにより除去した。その後、ビーズは２４時間アセトン中に浸漬した。
【００２４】
２．活性化膜
血漿タンパク質の９５％を超えるふるい係数のアミノ基を持つ微少ろ過中空ファイバー（壁厚は100μｍ、内径300μｍ）及びフラットシート膜（壁厚は90μｍ）は、２０分間、室温にて、３％塩化シアヌル及び１％硫酸のエタノール溶液中、ろ過状態で室温で処理され、その後４０℃の乾燥空気で乾燥させた。活性化量は、アルカリ加水分解により０．０３５ｍｍｏｌＣｌ−／ｇ乾燥膜の値を示す塩素滴定により決定された。
【００２５】
実施例１：活性化ビーズからの吸着物質の調製
直径１４０μｍの１３ｇ（乾燥重量）の活性化ビーズ（例えばToyo Pearl HW70EC TosoHaas, Stuttgart, Germany）を、２４時間、５２ｇのアセトンに浸漬した。上述の多分散性アルギニンリガンドをビーズと混合し、穏やかに７０℃で６時間撹拌した。ビーズを、エンドトキシンを除去するためにアルカリ塩溶液／エタノール溶液でリンスし、発熱物質（pyrogen）を含まない水で洗浄し、ブフナー漏斗でろ過後、４０℃で４時間真空乾燥させた。多分散性アルギニンリガンドの量は、アルカリ加水分解及びフルオレサミン染色の後、蛍光分光分析法により９．３ｍｇ／ｇ乾燥膜と測定された。同じ反応が、上述のビーズ産物の任意のものを使用して行うことができる。
【００２６】
実施例２：インビトロでのシングルパス系におけるヒト血液からのエンドトキシンの除去
実施例１に従って調製された１０ｇのビーズを小さなポリカーボネートカラム（長さ６２ｍｍ、内径２３ｍｍ、およそ２５ｍｌの充填総容積）中に重力によって充填し、１２１℃で２０分間、オートクレーブ処理した。同様にして処理されているがリガンドとは反応させられなかった１０ｇの活性化ビーズをコントロールとして用いた。カラムの充填特性は一般的なクロマトグラフィーカラム特徴付け（G. Sofer, L. Hagel, "Handbook of Process Chromatography", Academic Press 1997, chapter 15を参照）によって、３２０のＨＥＰＴ（理論段数高さ）、１．７のピーク対称性（Ａｓ）を持つと特徴付けた。使用直前に、ビーズ充填カラムを１００ｍｌの殺菌した生理食塩水で洗浄した。ＡＣＤで処理した５００ｍｌの新鮮なヒト血液を大腸菌０５５：Ｂ５（シグマ社）から単離した３０ＥＵ／ｍｌのＬＰＳと混合し、５ｍｌ／分の流量でカラムを通過させた。アリコート２ｍｌを試験カラムの前後で採り、K. Duner, (1993) Journal of Biochem. and Biophys. Methods 26:131-142によって記載されたようにして発色リムルス試薬（Limulus Amoebocyte Lysate）試験（ＬＡＬ）を使用してＬＰＳ含量について検査した。血球数、遊離ヘモグロビン、トロンビン-アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）生成［Deppisch, R.等 (1994) Nephrol. Dial. Transplant Suppl.3:17-23］及び末端補体複合体（ＴＣＣ）活性化を生物学的適合性の評価のために測定した。その結果は図１ないし６に示す。
【００２７】
実施例３：
上述の方法に従って活性化された１２−１３ｃｍの長さの５０の中空ファイバー膜のミニモジュールを、７５ｍｌの水中５０ｍｇのポリ-Ｌ-アルギニン（Sigma P7762, Mw=42,000, Mw/Mn=1.2）で６０℃にて３０分の間、再循環濾過モードで洗浄した。膜を生理食塩水で洗浄し、アルギニン密度を、０．８ｍｇ／ｇ乾燥膜の値を付与する上述の蛍光方法に従って決定した。
【００２８】
実施例４：
実施例１に従って、多分散性リガンド溶液の代わりに３．３％のＬ-アルギニン溶液でビーズを改変した。固定化したＬ-アルギニンの量は０．４３ｍｇ／ｇ乾燥ビーズであった。
【００２９】
実施例５：
参照リガンドとして１Ｍ−エタノールアミン溶液で実施例１に従ってビーズを改変した。
【００３０】
実施例６：
１０ｍｌの水中１００ｍｇのポリ-Ｌ-アルギニン（Sigma P7762, Mw=42,000, Mn/Mw=1.2）で実施例１に従って５ｇのビーズを改変した。
【００３１】
【００３２】
これらのデータは、ここに記載したビーズ上に固定化したときに、ポリアルギニン、モノマーアルギニン、エタノールアミンのような他の既知のリガンドと比較した多分散性アルギニンオリゴマーの優れた動的吸着能を示している。
本願において引用したすべての文献は、ここの記載と矛盾しない限りにおいてその全体を出典明示によりここに取り込む。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液リポ多糖類（ＬＰＳ）のレベルを示す（詳細は実施例２を参照のこと）。ＬＰＳ含量は、発色リムルス試薬（Limulus Amoebocyte Lysate）（ＬＡＬ）試験を使用して決定された。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中のＬＰＳ含量が示されている（黒四角として示されている）。
【図２】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の白血球数を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中の白血球数が示してある（黒四角として示されている）。
【図３】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の赤血球数を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中の赤血球数が示してある（黒四角として示されている）。
【図４】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中のヘモグロビンレベルを示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液中の遊離ヘモグロビンレベルが測定された（黒四角として示されている）。
【図５】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中のトロンビン-アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）形成の程度を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液サンプルが同様に検査された（黒四角として示されている）。
【図６】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の末端補体複合体（ＴＣＣ）活性化の程度を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液サンプルが同様に検査された（黒四角として示されている）。
（関連出願とのクロスリファレンス）
本願は１９９９年９月２９日に出願された米国仮出願番号６０／１５６６４９号に基づく優先権を主張する。
（連邦からの研究支援の認定）
適用なし
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、敗血症の治療処置のために体外吸着によって血液又は血漿からエンドトキシン及びサイトカイン誘導物質を選択的に除去する能力を有する血液処理材料に関する。
【０００３】
エンドトキシンは、グラム陰性バクテリアに由来するリポ多糖類であり、敗血症及び敗血症性ショックの主要な原因であり、５０％を越える致死率を有する。エンドトキシンは、生きたバクテリアが存在していなくても感染の後血中に存続できる。エンドトキシン分子は、高度に保存された領域を持ち、その領域は幾つかの長い脂肪酸側鎖及び２つの少なくとも負に帯電したリン酸基を持つ糖環を含むLipid-A部分で構成される。Lipid-Ａ部分は、バクテリアのタイプに依存して非常に変動する多糖鎖と連結されている。病理学的効果は、主として分子のLipid-A部分に由来する。Lipid-A部分の接近可能性は、多糖類側鎖の性質、及び塩、水、糖分子、血漿、血液、ｐＨ、界面活性剤等のような因子を含む周囲の媒介要因により大きく変動する。例えば、高塩濃度によりエンドトキシンのミセル及び他の超分子構造が誘導され、その結果、異なる活性を示す。
【０００４】
エンドトキシンは、例えばＴＮＦ−αを生産するＣＤ１４陽性白血球に対するそのサイトカイン誘導効果を測定することによりアッセイされるが、その誘導効果は、例えば、R&D System, Bad Homburg, Germanyから購入可能なキットによるエライザ技術又はＬＡＬ誘導色素生産性基質反応（Chromogenics, Moeldwagen, Sweden）により解析され得る。エンドトキシンの分子量は、多糖類側鎖及びその超分子構造に依存して、５０００ダルトンから数１００万ダルトンの範囲に及ぶ。
【０００５】
大抵の体外除去方法は、様々な基質に固定化された正に帯電した吸着物質を使用し、エンドトキシンの負に帯電したリン酸基を利用してきた。Kodama等（欧州特許第０１０７１１９号、欧州特許第０１２９７８６号）は、ポリスチレンファイバーに共有結合的に固定化されたポリカチオン性のPolymyxin Bを開示し、そのような材料のメッシュ状ファイバーを満たした装置で、血液からエンドトキシンを吸着することについて述べている。また、Otto等（欧州特許第４２４６９８号）は、血液からエンドトキシンを吸着するための、ポリ（コメタクリレート）ビーズ上に固定化されたポリカチオン性のPolymyxin Bについて開示した。Falkenhagen等（Aritficial Organs (1996) 20:420）は、ポリカチオン性のポリエチレンイミンでコートされたセルロース性のビーズ上で、血漿からエンドトキシンを吸着することについ述べている。Mitzner等 [Artificial Organs (1993) 17(9):775]は血漿からのエンドトキシンの除去のためのマクロ多孔性セルロースビーズ上に固定化したPolymyxin Bとポリエチレンイミンを記述している。Kodamaの技術を取り入れた製品は、日本において市販されている；しかし、Polymyxin Bは強い腎毒性を示すとの事実が、血液中にPolymyxin Bが浸出する危険性により、他国での登録を妨げる欠点となっていた。エンドトキシンリガンドとしてのポリエチレンイミンは、ヘパリンを強く吸着し血小板とも相互作用するという二つの不都合を有しており、インヴィボでの使用では血液凝固の問題を引き起こす。血漿タンパク質を吸着する能力は、特異的でかつ選択的なエンドトキシン吸着剤を開発するという重要な問題を引き起こす。
【０００６】
欧州出願（欧州特許第０４９４８４８号、欧州特許第０１２９７８６号, Pharmacia Upjohn）はセファロース上のアルギニンリガンドを用いたエンドトキシンの除去について開示している。インヴィトロでの試行は保証されるようであったが、更なる改善は行われなかったようである。Anspach（国際公開第９７/３３６８３号、ＤＥ１９６０９４７９）は、ポリスチレン、N,N-ジエチルアミノエタン、リジン、アルギニン、ヒスチジン又はヒスタミンなどのカチオン性リガンドのポリアミドマイクロフィルトレーション膜上への固定化について記述し、タンパク質溶液から最大約５０％の除去性を示すデータを開示した。しかしながら、利用性は血液又は血漿より低タンパク質濃度の溶液に限定された。Hoess等（国際公開第９５/０５３９３号）は、エンドトキシン吸着性を有するペプチドについて記述している。当該ペプチドは、疎水性アミノ酸と交互にされた、親水性で正に帯電するアミノ酸で構成される。血液又は血漿からのエンドトキシン吸着に対するデータは報告されなかった。Evans等（国際公開第９６/４１１８５号）は、正に帯電した中心間に特定の間隔を持つようにアミジン基をマクロ多孔性ビーズ上に固定化することについて記述している。この物質は、血漿及び他の体液からのエンドトキシンの除去に対して適していると報告されている；しかしながら、この物質は購入可能ではないようである。Otto等（欧州特許出願第０８５８８３１号）は、マクロ多孔性のポリメチルメタクリレートビーズ上に、共有結合的に固定化されたリガンドとしてアルブミンを用いた全血液からのエンドトキシンの除去について開示している。血漿中の静的な条件下でのインヴィトロのデータにより、優れたエンドトキシン吸着能が示されたが、治療への応用のような流動条件下での全血液に対して適用した場合、おそらく固定化されたアルブミンに対するエンドトキシンの弱い結合性によりエンドトキシン除去作用は非常に制限された。
【０００７】
他の研究者は、血漿からのエンドトキシンの除去に対して非選択的表面の使用を探索してきた。Ash等（Biologic DTPF-system TM; ISFA-congress, Saarbrueken/Germany, April 15-19, 1999）は、インヴィトロにおいて、微細な粉状のチャコールであってリガンドを持たず、およそ１０００ｍ２／ｇチャコール／１０ｍｌ血漿の表面積となるもので、血漿を含むエンドトキシンを処理した。高いエンドトキシン除去性が報告されたが、有益な物質を含む他の成分でどのようなものが除かれたかということについては、より詳細に報告されなかった。Tetta等（欧州特許第０７８７５００号）は、血漿からのエンドトキシンの除去に対し、正に帯電したイオン交換ビーズの使用について記述し、動物実験において９０％の除去を報告した。
【０００８】
要するに、一つのアプローチは、非常に広い吸着面積を利用することによりできるだけ簡便に多くのエンドトキシンを除去することである。しかし、非特異的結合によりある種の抗体及び血液凝固因子のような正常な血液成分の付随的な除去が生じ得る。付随的な除去は望ましくない。また、非特異的結合物質の使用は、細胞の活性化を回避するために血漿の処理に限定される。非特異的結合物質は、予期せぬ副次的な反応の潜在的危険性により全血液への使用には実用的ではないと考えられる。
【０００９】
異なるアプローチは、polymyxin B又はヒスチジンのような特異的結合リガンドの使用に基づいたKodama等、上掲又はOtto等、上掲に開示により説明される。このようなリガンドは、血液成分の付随的な除去回避するために十分な特異性を示す一方で、結合能は、その時のエンドトキシン程度により不定である。低い結合能を補うために、受け入れがたい程多量の体外血液量を必要とし、迅速なエンドトキシンの除去を達成するためには、大きな吸着チャンバーが必要であろう。polymyxin Bリガンド吸着剤に対する結合能の欠如が、吸着剤がエンドトキシンを取り除くことができたのは限られた時間のみであった動物実験において明らかにされた[Otto等（1997）Therapeutic Apheresis 1:67]。被検動物は無処理のコントロールに比べるといくらか長く生存したが、生存率には影響がなかった。
【００１０】
吸着剤としての血清アルブミンの利用が報告されている。ビーズタイプの支持物質への非共有結合的な結合が、Hirae等の欧州特許８００８６２号及びSuzuki等の欧州特許０２８９３７号によって報告されている。共有結合的に結合されたアルブミンがまた開示されている（Otto、欧州特許第８４８８３１号）。アルブミンを使用する理論的根拠は、アルブミンが既に血流中において結合及び輸送タンパク質として機能しているということである。固定化アルブミンの実用的な使用は、アルブミンが十分な結合力によりエンドトキシンと結合しないという点から制限される。
高分子量タンパク質を吸着する血液透析膜、例えば、ＡＮ６９（Gambro-Hospal）などは、それらのエンドトキシン及びサイトカイン吸着能により、敗血症関連反応の非常に低い発症率のための、良好な膜表面であると考えられる。
【００１１】
（発明の概要）
本発明により解決される課題は、一方では、多様なエンドトキシンを効率的に吸着するための十分な異質性を有すると同時に、血中の他の生理的構成成分を吸着することを避け、不適当な副次的反応を引き起こさないように、エンドトキシン一般に対して十分な特異性を有するエンドトキシン吸着リガンドを考案することである。このために、ポリカチオン性分子種が、７．２の生理的なｐＨ下において正に帯電するアミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、又はヒスチジンから、非常に高度な多分散性（重縮合度、分岐度、コイル状態に関し）を生じるように、水で希釈された溶液中での重縮合工程を使用して合成された。広く分布したオリゴペプチドは、多孔性の固体状態の媒体、例えば、塩化シアヌル、カルボニルジイミダゾール、プロムシアン（promcyan）、又は水溶性カルボジイミドのような一般的なカップリング剤を使用して活性化され、洗浄後、容器に充填され滅菌されたビーズ又は膜などの基質上に固定化され得る。意外にも、高度なオリゴペプチドの異質性は、エンドトキシンの高度な異質性と一致する結果、異なる出所からの高いエンドトキシン除去が得られる。
【００１２】
ヒト又は動物非処置体の血液からのエンドトキシンの体外除去は、固体状態の支持媒体に固定化された本発明の多分散的オリゴペプチドで構成される吸着剤と血液を接触させることにより、達成される。支持媒体は、好ましくは、血液細胞の通過を可能らなしめるのに十分な空隙率を有する膜、粒子ベッド又は繊維状マットのような多孔性物質である。特に好ましい支持物質は、ビーズ状の形態であり、容器に充填することが可能で、そのビーズは、カラム又はろ過ベッドに充填したときに、必要な空隙率を提供するのに十分なサイズを持つ。当該技術分野において既知の適当なビーズ材料の例は、以下に提示される。
【００１３】
全血液からのエンドトキシンの体外除去に関する装置は、当該技術分野の一般的な原理に従って構築され得る。そのような装置の基礎的な構成成分は、既述のような固相支持媒体上に固定化されたエンドトキシンリガンドを有する吸着剤を収容し、保持するように構築され、流入口と流出口を備える容器である。流入口と流出口は、流入口へ入る血液が流出口を通って出る前に吸着剤と接触するように吸着剤に対して配置される。好ましくは、装置の構成は、血液が装置を通過する間における吸着剤との接触を最大にするように設計される。様々なこの種の設計が当該技術分野において知られている。例えば、装置は、一端に流入口を、他端に流出口を有する吸着ビーズが充填された中空の筒状体とできる。微小管アレイのような他の装置が構築可能である。容器の幾何学的構造と容量、及びこれに収容される吸着剤のかかるあらゆるバリエーションが、公知の原理に従って設計され得る。
【００１４】
ヒト又は動物非処置体の血液からのエンドトキシンを除去する方法は、非処置体からの血液の一部を除き、本発明に係る吸着剤と血液を接触させ、これによりエンドトキシンを吸着剤に結合させた後、患者に血液を戻すことを含む。好ましくは、本方法は連続的な流れで実施される。血液が抽出され戻される患者の血管の位置は、互いに異なる位置でも、同じ位置でもよい。後者の場合、本方法の侵襲性を減ずる単一針技術（single needle techniques）が、当該技術分野において知られている。
【００１５】
処理時間は、血液中のエンドトキシン濃度、存在するエンドトキシンの型、エンドトキシンを除去するための吸着剤の能力、流速などに依存し、これら全ては当該技術分野において知られているような方法で観察し調整可能である。
本発明は、分子量の範囲が５００から５０，０００ダルトンで生理的なｐＨ（等電点＞７．２）において正に帯電する一又は複数のアミノ酸で構成される、広く分布し及び／又は高度に分岐したペプチドを提供する。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
一般に、ここで使用される用語及び語法は、当該分野で認められている意味を持ち、標準的なテキスト、定期刊行物及び当業者に知られている背景を参照することにより見いだされ得るものである。後述の定義は、本発明の脈絡における特定の使用法を明らかにするために提示される。
【００１７】
多分散度とは、ここでは、一般的な定義である、Ｍｗ/Ｍｎ（数平均分子量；Ｍｎに対する重量平均分子量；Ｍｗの割合）のみならず、分岐度のような異質性をも含むものと定義される。ここで定義される多分散度とは、多分散度が既知の標準物質と比較した場合、分岐により電荷密度が減少するにつれて、クロマトグラフィーにおける移動度（Ｒｆ）が増加するような条件下において、薄層クロマトグラフィーにより評価され得る。
【００１８】
ここで用いられる「オリゴペプチド」とは、ペプチド結合によって互いに連結された、一般には約２０残基までの１を越えるアミノ酸を含むポリマーを意味する。直鎖状のオリゴペプチドは、α−カルボキシル基及び隣接する残基のα−アミノ基との間のアミド結合によって形成されるオリゴペプチドを意味し、分岐オリゴペプチドは一又は複数の非α−アミノ基に関わるアミド結合により形成されるオリゴペプチドを意味する。
【００１９】
多分散的アルギニンリガンドの調製
５．２ｇのＬ−アルギニン（Sigma, A-5006）を、４０℃にて２６ｇの逆浸透処理水に懸濁させた。４．１６ｇのＷＳＣ.ＨＣｌ（１-エチル-３-(３-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド、Novabiochem, 01-62-011）を、室温にて２６ｇの逆浸透水に懸濁させた。これら２つの溶液を混合し、室温にて１８時間の反応時間にわたり撹拌した。
重縮合は、ｐＨ１１．５で行われた。アルギニンのグアニド基は、おおよそ１２．５のｐＫを示すため、約１０％のグアニド基が脱プロトン化され、側鎖分岐反応において利用可能である。分岐度は、反応ｐＨを調節することにより調節された。水溶性カルボジイミドビーズの使用により、Ｄ−及びＬ−アミノ酸が結果的に生じるオリゴペプチド中に存在するようにラセミ化が誘導される。
多分散度は、移動相としてＣＨＣｌ３：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０（45%のNH3溶液）を用いたシリカゲル（Kieselgel 60F, Merck）上の薄層クロマトグラフィーにより測定された。結果は表Ｉに示す。
【００２０】
また、前述の反応は、ｐＨ＞７．２において正に帯電しているリジンもしくはヒスチジンもしくは他のアミノ酸を使用し、又はそのようなアミノ酸の混合物の重縮合によって行うこともできる。例証されたポリアルギニンのように、多分散度は当該技術分野において理解されると思われるが、分岐ポイントとして役立つように利用可能な脱プロトン化されたアミノ基の集団を調節するために、反応ｐＨの選択によって制御することができる。
【００２２】
本発明に従い作製されたオリゴペプチドの多分散度は、当該分野で理解されている任意の方法により測定することができる。多分散度を測定するために既知のクロマトグラフィーによる方法は、既知の多分散度の標準物質と共に本発明のオリゴペプチドを評価するために使用することができる。また、多分散度は、表Ｉに示されるように薄層クロマトグラフィーにより簡便に評価でき、表Ｉでは本発明に従って作製された組成物のＲｆ値が、多分散度が既知の標準物質のＲｆ値と比較されている。本発明に適するオリゴペプチドは、４５％のＮＨ３溶液中、溶媒層としてＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０を使用して、シリカゲルの薄層クロマトグラフィーにより測定した場合、０．４又はそれ以上、好ましくは０．６又はそれ以上のＲＦ値を有するならば、十分に多分散的である。
【００２３】
基質の調節
１．活性化ビーズ：
以下に示す購入可能な活性化ビーズは、エポキシ及び／又はアズラクトンの添加による求核性環開裂により、多分散性リガンドの固定化に関して調節することができる。
Toyo Pearl HW70EC(TosoHaas)
Toyo Pearl HW65EC(TosoHaas)
Toyo Pearl AF650M(TosoHaas)
Eupergit C250L(Roehm)
Eupergit 250(Roehm)
Fractogel EMD Epoxy(M)(Merck)
Fractogel Azlactone Epoxy(S)(Merck)
Poros EP(Perkin Elmer-Biosystems)
微細な粒子は塩類溶液により繰り返し洗浄するか、２０μｍ及び５０μｍのメッシュ状ネットで各々ろ過することにより除去した。その後、ビーズは２４時間アセトン中に浸漬した。
【００２４】
２．活性化膜
血漿タンパク質の９５％を超えるふるい係数のアミノ基を持つ微少ろ過中空ファイバー（壁厚は100μｍ、内径300μｍ）及びフラットシート膜（壁厚は90μｍ）は、２０分間、室温にて、３％塩化シアヌル及び１％硫酸のエタノール溶液中、ろ過状態で室温で処理され、その後４０℃の乾燥空気で乾燥させた。活性化量は、アルカリ加水分解により０．０３５ｍｍｏｌＣｌ−／ｇ乾燥膜の値を示す塩素滴定により決定された。
【００２５】
実施例１：活性化ビーズからの吸着物質の調製
直径１４０μｍの１３ｇ（乾燥重量）の活性化ビーズ（例えばToyo Pearl HW70EC TosoHaas, Stuttgart, Germany）を、２４時間、５２ｇのアセトンに浸漬した。上述の多分散性アルギニンリガンドをビーズと混合し、穏やかに７０℃で６時間撹拌した。ビーズを、エンドトキシンを除去するためにアルカリ塩溶液／エタノール溶液でリンスし、発熱物質（pyrogen）を含まない水で洗浄し、ブフナー漏斗でろ過後、４０℃で４時間真空乾燥させた。多分散性アルギニンリガンドの量は、アルカリ加水分解及びフルオレサミン染色の後、蛍光分光分析法により９．３ｍｇ／ｇ乾燥膜と測定された。同じ反応が、上述のビーズ産物の任意のものを使用して行うことができる。
【００２６】
実施例２：インビトロでのシングルパス系におけるヒト血液からのエンドトキシンの除去
実施例１に従って調製された１０ｇのビーズを小さなポリカーボネートカラム（長さ６２ｍｍ、内径２３ｍｍ、およそ２５ｍｌの充填総容積）中に重力によって充填し、１２１℃で２０分間、オートクレーブ処理した。同様にして処理されているがリガンドとは反応させられなかった１０ｇの活性化ビーズをコントロールとして用いた。カラムの充填特性は一般的なクロマトグラフィーカラム特徴付け（G. Sofer, L. Hagel, "Handbook of Process Chromatography", Academic Press 1997, chapter 15を参照）によって、３２０のＨＥＰＴ（理論段数高さ）、１．７のピーク対称性（Ａｓ）を持つと特徴付けた。使用直前に、ビーズ充填カラムを１００ｍｌの殺菌した生理食塩水で洗浄した。ＡＣＤで処理した５００ｍｌの新鮮なヒト血液を大腸菌０５５：Ｂ５（シグマ社）から単離した３０ＥＵ／ｍｌのＬＰＳと混合し、５ｍｌ／分の流量でカラムを通過させた。アリコート２ｍｌを試験カラムの前後で採り、K. Duner, (1993) Journal of Biochem. and Biophys. Methods 26:131-142によって記載されたようにして発色リムルス試薬（Limulus Amoebocyte Lysate）試験（ＬＡＬ）を使用してＬＰＳ含量について検査した。血球数、遊離ヘモグロビン、トロンビン-アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）生成［Deppisch, R.等 (1994) Nephrol. Dial. Transplant Suppl.3:17-23］及び末端補体複合体（ＴＣＣ）活性化を生物学的適合性の評価のために測定した。その結果は図１ないし６に示す。
【００２７】
実施例３：
上述の方法に従って活性化された１２−１３ｃｍの長さの５０の中空ファイバー膜のミニモジュールを、７５ｍｌの水中５０ｍｇのポリ-Ｌ-アルギニン（Sigma P7762, Mw=42,000, Mw/Mn=1.2）で６０℃にて３０分の間、再循環濾過モードで洗浄した。膜を生理食塩水で洗浄し、アルギニン密度を、０．８ｍｇ／ｇ乾燥膜の値を付与する上述の蛍光方法に従って決定した。
【００２８】
実施例４：
実施例１に従って、多分散性リガンド溶液の代わりに３．３％のＬ-アルギニン溶液でビーズを改変した。固定化したＬ-アルギニンの量は０．４３ｍｇ／ｇ乾燥ビーズであった。
【００２９】
実施例５：
参照リガンドとして１Ｍ−エタノールアミン溶液で実施例１に従ってビーズを改変した。
【００３０】
実施例６：
１０ｍｌの水中１００ｍｇのポリ-Ｌ-アルギニン（Sigma P7762, Mw=42,000, Mn/Mw=1.2）で実施例１に従って５ｇのビーズを改変した。
【００３１】
本願において引用したすべての文献は、ここの記載と矛盾しない限りにおいてその全体を出典明示によりここに取り込む。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液リポ多糖類（ＬＰＳ）のレベルを示す（詳細は実施例２を参照のこと）。ＬＰＳ含量は、発色リムルス試薬（Limulus Amoebocyte Lysate）（ＬＡＬ）試験を使用して決定された。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中のＬＰＳ含量が示されている（黒四角として示されている）。
【図２】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の白血球数を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中の白血球数が示してある（黒四角として示されている）。
【図３】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の赤血球数を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。また、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後のヒト血液中の赤血球数が示してある（黒四角として示されている）。
【図４】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中のヘモグロビンレベルを示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液中の遊離ヘモグロビンレベルが測定された（黒四角として示されている）。
【図５】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中のトロンビン-アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）形成の程度を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液サンプルが同様に検査された（黒四角として示されている）。
【図６】 ビーズに固定化された多分散性アルギニンオリゴマーを含むカラムを通す前（白丸）及び通した後（黒三角）の様々な時点におけるヒト血液中の末端補体複合体（ＴＣＣ）活性化の程度を示す（詳細は実施例２を参照のこと）。比較のため、多分散性アルギニンオリゴマーを含まないカラムを通した後、ヒト血液サンプルが同様に検査された（黒四角として示されている）。
Claims (20)
- ７．２の生理的なｐＨで正に帯電する一又は複数のアミノ酸からなる直鎖状又は分岐状オリゴペプチドの混合物から本質的になる、血液からエンドトキシンを除去するための組成物であって、上記オリゴペプチドが４５％ＮＨ ３ 溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ ３ ＯＨ：ＮＨ ３ ／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．４以上のＲ ｆ 値を持つ多分散性である組成物。
- アミノ酸がアルギニン、リジン及びヒスチジンからなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
- 上記オリゴペプチドが、４５％ＮＨ３溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．６以上のＲｆ値を持つ多分散性である請求項１に記載の組成物。
- アミノ酸がアルギニンである請求項１から３の何れか一項に記載の組成物。
- 固相支持媒体上に固定化されたリガンドを含んでなるエンドトキシン除去用吸着剤であって、リガンドが、７．２の生理的なｐＨで正に帯電する一又は複数のアミノ酸からなる直鎖状又は分岐状オリゴペプチドの混合物から本質的になり、上記オリゴペプチドが４５％ＮＨ ３ 溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ ３ ＯＨ：ＮＨ ３ ／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．４以上のＲ ｆ 値を持つ多分散性である吸着剤。
- 固相支持媒体が血液細胞の通過を可能にするのに十分に多孔性である請求項５に記載の吸着剤。
- 固相支持媒体がビーズの形態である請求項５に記載の吸着剤。
- リガンドが固相支持媒体に共有結合によって結合している請求項５に記載の吸着剤。
- アミノ酸がアルギニン、リジン及びヒスチジンからなる群から選択される請求項５、７又は８に記載の吸着剤。
- 上記オリゴペプチドが、４５％ＮＨ３溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．６以上のＲｆ値を持つ多分散性である請求項７又は８に記載の吸着剤。
- アミノ酸がアルギニンである請求項７、８又は１０に記載の吸着剤。
- 固相支持媒体に固定化されたリガンドを含んでなるエンドトキシン除去用吸着剤を収容し保持する容器を具備する全血からのエンドトキシンの体外除去装置であって、リガンドが、７．２の生理的なｐＨで正に帯電する一又は複数のアミノ酸からなる直鎖状又は分岐状オリゴペプチドの混合物から本質的になり、上記オリゴペプチドが４５％ＮＨ ３ 溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ ３ ＯＨ：ＮＨ ３ ／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．４以上のＲ ｆ 値を持つ多分散性であり、上記固相支持媒体が血液細胞の通過を可能にするのに十分に多孔性であり、上記容器が、流入口に入る血液が流出口を通って容器から出る前に吸着剤に接触するように、吸着剤に対して位置決めされた流入口と流出口を有している装置。
- 固相支持媒体がビーズの形態である請求項１２に記載の装置。
- リガンドがビーズに共有結合によって結合され、アミノ酸がアルギニン、リジン及びヒスチジンからなる群から選択される請求項１３に記載の装置。
- 上記オリゴペプチドが、４５％ＮＨ３溶液中ＣＨＣｌ ３ ：ＣＨ３ＯＨ：ＮＨ３／４０：４０：２０の系を用いるシリカゲルでの薄層クロマトグラフィーによって測定して０．６以上のＲｆ値を持つ多分散性である請求項１２に記載の装置。
- アミノ酸がアルギニンである請求項１４又は１５に記載の装置。
- 動物又はヒトの患者からの血液からエンドトキシンを除去する方法において使用される請求項５から１１の何れか一項に記載の吸着剤であって、該方法が、該吸着剤とその血液を接触させることを含み、それによってエンドトキシンが該吸着剤への吸着によって血液から除去される、吸着剤。
- エンドトキシン結合リガンドの製造方法において、アルギニン、リジン及びヒスチジンからなる群から選択されるアミノ酸を、選択したｐＨでカップリング試薬と反応させて、アミノ酸の塩基性基の一部を脱プロトン化させ、それによって多分散性の分岐オリゴペプチドを生成させることを含んでなる方法。
- アミノ酸がアルギニンで、反応ｐＨが１２であり、カップリング試薬が１-エチル-３-(３-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミドである請求項１８に記載の方法。
- 請求項１８又は１９に記載の方法によって製造されたエンドトキシン結合リガンド。
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| JP2008511340A (ja) * | 2004-04-30 | 2008-04-17 | バイオフェレシス テクノロジーズ， インコーポレイテッド | 患者において可溶性ｔｎｆｒ１、可溶性ｔｎｆｒ２、および可溶性ｉｌ２を除去する方法およびシステム |
| US20050287515A1 (en) * | 2004-06-24 | 2005-12-29 | Reinhold Deppisch | Removal of bacterial DNA from therapeutic fluid formulations |
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996038410A1 (en) * | 1995-06-02 | 1996-12-05 | Forskningscenter Risø | Novel physically functional materials |
| WO2000016897A1 (de) * | 1997-09-17 | 2000-03-30 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Mikrofiltrationsfilterschicht zur abtrennung von endotoxinen und deren verwendung |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5670028A (en) | 1979-11-12 | 1981-06-11 | Teijin Ltd | Polymer bonding with albumin |
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| EP0299965A4 (en) * | 1986-03-24 | 1992-12-16 | University Of Sydney | Antigenic analogues of platelet activating factor (paf) |
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| DE4110730A1 (de) | 1991-04-03 | 1992-10-15 | Fresenius Ag | Vorrichtung zur auftrennung von zumindest zwei biologischen stoffen in loesung durch adsorption |
| GB9215780D0 (en) * | 1992-07-24 | 1992-09-09 | Univ London Pharmacy | Peptide compounds |
| CA2140257A1 (en) * | 1992-07-27 | 1994-02-03 | Lawrence M. Kauvar | Sorbent families |
| US5780594A (en) * | 1993-03-01 | 1998-07-14 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Biologically active protein fragments containing specific binding regions of serum albumin or related proteins |
| WO1995000540A1 (en) * | 1993-06-18 | 1995-01-05 | Robert Webber | Synthetic carrier and immunogen |
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| WO1996020042A1 (en) | 1994-12-26 | 1996-07-04 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | ADSORBENT FOR ENDOTOXIN, TUMOR NECROSIS FACTOR-α OR INTERLEUKINS, METHOD FOR REMOVAL VIA ADSORPTION, AND ADSORBER |
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| DE69634141T2 (de) | 1996-02-06 | 2005-12-22 | Bellco S.P.A. | Adsorptive extrakoporale Entfernung von Zytokinen bei akutem Organversagen |
| DE19609479A1 (de) * | 1996-03-11 | 1997-09-18 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Endotoxin-spezifische Membranen |
| DE69704269T2 (de) * | 1997-06-11 | 2001-11-22 | Univ London Pharmacy | Dendritische, lysinhaltige Polypeptide zur gezielten Arzneimittelabreichung |
| US6344360B1 (en) * | 1998-03-11 | 2002-02-05 | Sensors For Medicine And Science, Inc. | Detection of analytes by fluorescent lanthanide metal chelate complexes containing substituted ligands |
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Patent Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
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| WO2000016897A1 (de) * | 1997-09-17 | 2000-03-30 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Mikrofiltrationsfilterschicht zur abtrennung von endotoxinen und deren verwendung |
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