JP4683926B2 - ウエストナイルウイルス・ワクチン - Google Patents
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Description
本発明は、ウエストナイルウイルスに対するワクチンに関する。
北半球における最初の発見以来、ウエストナイル(WN)ウイルスは、北アメリカ中に急速に広がり続けている。最初の症例は、1999年にニューヨーク地域において診断されたが、2002年までには死亡数が増大して150症例を越え、ウイルスの拡散は続いてカリフォルニアにまで達した。感染/死亡した鳥類の出現から、発生の地理的地域において、感染した蚊の大きなプールが存在することが示唆される。現在まで、ウエストナイルウイルスに対する効果的な薬物療法は存在せず、調査と予防(surveillance and prevention)の方法は、ヒト感染の症例の件数に顕著には影響を与えていない。従って、ウイルスが南アメリカ大陸に拡散する危険も、低開発国における病気の流行の危険も、極めて高い。
本発明は、ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子を提供する。これらのキメラのウエストナイルウイルス・プレメンブランまたはエンベロープ・タンパク質には、一つまたは複数の弱毒化変異が含まれ、それは、例えばエンベロープ・タンパク質の第107、316、および/または440位のアミノ酸置換であり得る。特定の例として、第107位のアミノ酸置換は、ロイシンからフェニルアラニン(またはその同類アミノ酸)であり得、第316位のアミノ酸置換は、アラニンからバリン(またはその同類アミノ酸)であり得、また、第440位のアミノ酸置換は、リジンからアルギニン(またはその同類アミノ酸)であり得る。
本発明は、ウエストナイル(WN)ウイルス感染の予防および治療において使用するためのワクチンおよび方法を提供する。本発明の方法には、プレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質がウエストナイルウイルスのそれらと置換されている黄熱病ウイルスからなる生の弱毒化したキメラ・フラビウイルスによる、対象のワクチン接種が含まれる。本発明のキメラのウエストナイルウイルス・タンパク質には、下記にさらに説明されるように、一つまたは複数の弱毒化変異が含まれる。
ウエストナイル/黄熱病キメラワクチンの安全特性を増大させるために、本発明者らは、エンベロープ・タンパク質における弱毒化点変異が神経毒性を減じるのかどうかを検討した。下記に詳細に説明されているように、発明者らは、ウエストナイルウイルスのマウス神経侵襲性を欠き、マウスおよびサルの両方のモデルにおいて黄熱病ワクチン株YF17Dより神経毒性がより少ない、YF/WNキメラを構築した。以下は、エンベロープ・タンパク質突然変異誘発の説明、および本ウイルスおよび関連ウイルスのマウスおよびアカゲザルモデルにおける安全性、免疫原性、および有効性の評価である。
YF/WNキメラ構築物および分子的手順
キメラ・フラビウイルスは、既に記載されたツー・プラスミド・システム(two-plasmid system)の使用を伴うChimeriVax(商標)技術を用いて構築した(例えば、米国特許出願出願番号第09/007,664号、第 09/121,587号、および 第09/452,638号;国際出願 PCT/US98/03894 (WO 98/37911)および PCT/US00/32821 (WO 01/39802) ; および Chambersら、 J. Virol. 73: 3095-3101, 1999を参照のこと)。ツー・プラスミド・システムは、E. coli におけるプラスミドの安定性、およびクローン化された黄熱病(YF)のバックボーンを操作するのに適した方法を提供し、YF prMおよびE遺伝子の、標的フラビウイルスのそれらとの置換を容易にする。 使用したウエストナイル(WN)ウイルスprMおよびE遺伝子は、WNV flamingo分離株383-99、配列のGenBank アクセッション番号 AF196835、からクローン化した。ウイルスprME cDNA は、 RT-PCR(XL-PCR Kit、Perkin Elmer)によって得た。WN prM遺伝子の5'末端は、Pwo polymerase(Roche)を用いた重複伸長PCRによって、YF 17Dキャプシド遺伝子の3'末端に正確にクローン化した。このクローン化ステップは、YFキャプシド遺伝子の3'末端にコードされている切断/プロセシング・シグナルの整合性を維持する。E遺伝子の3'末端も、重複伸長PCRによって、YF NS1コード配列の5'末端に正確にクローン化した。YF 17DバックボーンへのウエストナイルウイルスのprME領域のクローン化におけるこの two-plasmidシステムの使用については、既に記載されている(Arroyoら、 Trends in Molecular Medicine 7 (8): 350-354, 2001)。 prMおよびEの配列中にサイレント変異を導入し、ユニーク制限酵素部位、Bsp EIおよび Eag Iを作製した。これらの酵素によるその2つのプラスミドの消化によって、DNA断片が産生され、それをゲル精製し、インビトロで連結して、完全長キメラcDNAを産生した。cDNAはXhoIによって直線化し、SP6 ポリメラーゼ(Epicentre)によるインビトロ転写を行われやすくした。RNA産物はウイルスRNAの翻訳およびウイルスの複製に許容性な真核生物細胞株に導入した。
キメラYF/WN(すなわち、ChimeriVax(商標)-West Nile)ウイルスは、Vero E6細胞株(ATCC、CIDVR UMASS Medical Center Worcester、マサチューセッツ州)へのRNAトランスフェクション(1回継代ウイルス、P1)によって調製した。研究用マスターシード(RMS)は、Vero E6細胞における追加的な増幅(MOI 0.001で2回かまたは3回継代)によって調製した。Vero E6細胞は、MEM(Invitrogen)、10% FBS(Hyclone)中で維持した。ワクチンを製造するためのプレ・マスターシード(PMS)の調製は、無血清Vero(SF-Vero)細胞株(ATCC、Baxter/Immuno Orth、オーストリア)へのRNAトランスフェクションにより開始し、続いて同じSF-Vero細胞株において増幅継代を行い、P2 PMSすなわちプレ・マスターシード(preMaster Seed)を作製した。SF-Vero細胞株は、無血清、無蛋白の培地配合のVT培地(Baxter/Immuno、オーストリア)中で増殖および維持した。使用した野生型WNウイルスは、マスターウイルス・バンクを作製するためのVero E6細胞における2回の追加的継代の状態で、CDC、Fort Collins、コロラド州より入手したNY-99株(NY99-35262-11 flamingo分離株)(CDC ストックの呼称はB82332W)である。YF 17Dは市販のワクチン(YF-VAX(商標)、Aventis Pasteur、Swiftwater、ペンシルバニア州)で、凍結乾燥製品の再構成の後、またはVero E6細胞(ATCC、 Acambis Inc.、 Cambridge、マサチューセッツ州)における1回継代の後、ここで用いた。
マウスには、神経侵襲性試験のため、または野生型WNウイルスによる攻撃(challenge)の間、腹膜内(IP)接種をした。IP接種容量は100〜200μlで、25Gシリンジにより投与した。成熟および乳のみマウスは、神経毒性試験のために、脳内接種(IC)をした。20μlの接種容量をIC投与のために用い、脳の前頭葉の右側に投与した。ウイルスは、別途指摘のある場合を除き、HEPES緩衝液(Invitrogen)および20%FBS(Hyclone)を含むM199に希釈した。ウイルス接種の力価を検証するため、Vero細胞におけるプラーク検定を行った(Monath ら、J. Virol. 74(4):1742-1751, 2000)。
WHOガイドラインに記載されているような、アカゲザルにおいて黄熱病(YF)ワクチンの神経毒性を求める試験を用いて、YF/WNキメラの安全性を求めた(Monathら、J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000)。動物にIC接種をしてから、血液試料を毎日取得し、プラーク検定技術を用いてウイルス血症レベルを測定した。動物は、例えば発熱または振戦のような、疾病に関連した症状の徴候を毎日観察した。動物を感染後30日で安楽死させ、次に脳および脊髄組織を組織病理のために取り除いた。WHOにより定義されたシステムに従って神経病理の記録をし、その価を、YF 17D標準ワクチンにおけるそれらとの比較において解析した。
アカゲザルは、名目上4 log10 PFUを含む単回の0.5ml用量のワクチンの皮下投与によってワクチン接種した。ウイルス血症は、0〜10日目に毎日採取した血清試料を用い、Vero細胞における希釈血清のプラーク検定によって測定した(Monathら、J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000)。中和抗体レベルは、プラーク減少中和力価検定(plaque reduction neutralization titer assays)(PRNT)によって測定した(Monathら、J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000)。動物を、ワクチン接種後64日で、野生型WNウイルスNY99によって攻撃(challenge)した。
Eタンパク質中に弱毒化変異を持たないYF/WN野生型(すなわち、ChimeriVax(商標)-WN01)構築物をVero E6細胞において6回継代し、続けて乳のみマウスにおいてIC経路により6回継代した。Eタンパク質中に3つの弱毒化変異が導入されたYF/WNFVR(すなわち、ChimeriVax(商標)-WN02)のプレ・マスターシードおよび研究用マスターシード構築物を、無血清、無蛋白のSF-Vero細胞培地において、それぞれ12および10回継代した。全ての継代は、初回のMOI 0.01に続く第3日目の回収で行い、ウイルス力価を測定するために、滴定なしに継続した。各々の継代で用いたウイルス力価は、その後プラーク検定によって計算した。継代されたウイルスの神経毒性を、IC接種した成熟および乳のみマウスによって測定した。ウイルスRNAは次に配列決定を行った。
YF 17D(YF-VAX(登録商標))と比べたYF/WN野生型の毒性表現型
最初のウエストナイルウイルス・キメラは、WN NY99野生型株(すなわち、YF/WN野生型またはChimeriVax(商標)-WN01)のエンベロープおよびプレメンブラン・タンパク質遺伝子をコードしていた。このキメラウイルスは、106 pfu用量でのIP接種後、ICRマウスにおいて脳炎を生じさせる能力を欠いている(表2)。脳炎は、麻痺および死につながる運動行動の変化を毎日観察することにより評価した。成熟マウスにおける神経侵襲性を欠くYF/WN野生型は、他のグループでYF 17Dワクチンを接種したマウスにおいて観察されている(Rymanら、Virology 230(2): 376-380, 1997)。対照的に、WN NY99野生株ウイルスは、IP経路でわずか1〜4 pfuを接種したとき、マウスに致死的であった(Beasleyら、Virology 296: 17-23, 2002)。YF/WN野生型のIC LD50は、ここでは103〜105 pfuと概算された。YF/WN野生型の神経毒性表現型はYF 17Dウイルスのそれより低く、後者ではICRマウスIC LD50が101〜102 pfuである。しかしながら、YF/WN野生型ウイルスは、21日齢マウスにおいて明らかなエンドポイントを示さなかった(表3)。
エンベロープ・タンパク質におけるアミノ酸を改変し、これらの改変がYF/WNキメラの毒性を減ずるかどうかを決定した。毒性の変化は、マウスモデルにおいて評価し、オリジナルのキメラであるYF/WN野生型の神経毒性と比較した。YF/WN野生型エンベロープ(E)遺伝子の第107、138、176、および280位に位置づけられるアミノ酸残基は、全て単一の構築物において、それぞれアミノ酸残基F、K、V、Mをコードするように変異させた。新しいキメラウイルスは、YF/WNFKVMとされた。次に、FKVM群のうちの各々のアミノ酸残基が単一に変異を受けたキメラを構築し、神経毒性におけるその個々の役割を評価した(表4)。加えて、アミノ酸残基316および440における変異を、それらの領域に位置づけられたEタンパク質の変異がEタンパク質の3番目のドメインの生物学に作用する可能性があることを示唆する以前のデータに基づき、各々VおよびRに変異させた(Reyら、 Nature 375 (6529): 291-298, 1995 ; Allisonら、J. Virol. 75(9): 4268-4275, 2001)。Eタンパク質中に改変されたアミノ酸を有するキメラの神経毒性についての発明者らの知見は、残基107、316および440が、WNウイルスの神経毒性の原因になっている最も重要なアミノ酸であることを示唆した。この情報に基づき、多部位YF/WNFVR構築物を構築し、発明者らのワクチン候補として選び出した。全ての多部位キメラは、無血清SF Vero細胞において107 pfu/mLの力価まで増殖させた。
YF/WN野生型のエンベロープ・タンパク質遺伝子中に単一または多部位変異を有するウイルスのマウス神経毒性を、104〜105 pfuのウイルス用量をIC経路によって接種した21日齢マウスにおいて測定した。この評価によって、残基107および280(表4)ならびに316/440の組み合わせ(表5)が、マウスの致死率および相対的平均生存時間(AST)による測定で、より優性の弱毒化変異として同定された。発明者らのワクチン候補として選択された、それぞれ残基107、316、および440におけるF、V、およびR変異の組み合わせを有するキメラは、成熟マウスにおいて無毒性であった(表6)。しかしながら、ヒトに安全なChimeriVax(商標)-JEワクチン(Monath ら、Vaccine 20: 1004-1018, 2002)と同様に、2日齢の乳のみマウスにおいて多少の神経毒性が観察された。
発明者らは、YF/WN野生型キメラ、およびエンベロープ残基107、316、440に変異を有するYF/WNFVR構築物の免疫原性を比較した。マウスは、2〜5 log10 pfuの範囲のワクチン用量で、皮下(SC)経路により接種をした。血清は、免疫化後4週間で回収し、中和抗体の滴定をした。図1のデータは、YF/WN野生型構築物の部位標的弱毒化により、より低い免疫原性のウイルスが生じることを示す。免疫化マウスの野生型WN NY99ウイルスによる腹膜内攻撃によって、構築物についてワクチンの効力対有効性の関係が明らかにされた。YF/WNキメラのうち何れかの105 pfu/ml用量で免疫化した全てのマウスは、毒性ウイルス攻撃から防御された。
静置培養で培養した場合の構築物の遺伝的安定性を決定するため、YF/WN野生型またはYF/WNFVRキメラを使ったインビトロおよびインビボ培養基継代調査を行った。YF/WN野生型の、6回のインビトロVero E6細胞継代に続く6回のインビボICR成熟マウス脳継代の後、発明者らは、このキメラのエンベロープ遺伝子(prM、E)領域において、好ましくない変異を何ら見出さなかった。Eタンパク質におけるE336位の、結果としてシステインがセリンになる異型接合変異が、Vero E6細胞におけるYF/WNFVRウイルスの10回インビトロ継代後に確認された。別個の調査において、YF/WNFVRウイルスのSF-Vero細胞のインビトロ継代は、E313位の変異の選択をもたらし、それによってこの位置のアミノ酸がグリシンからアルギニンに代わった。Vero細胞におけるウイルスの全ての連続継代の間、ウイルスの神経毒性に関与する標的残基107F、316V、または440Rにおいて、復帰変異/変異は何ら検出されなかった。
(表1)部位変異誘発に用いたスイッチ・オリゴヌクレオチド
変異弱毒化黄熱病/ウエストナイルウイルスを作製するための部位特異的変異誘発のプライマー。新しいアミノ酸を導入するヌクレオチドの交換は、太字で示されている。導入したサイレント制限酵素部位には下線が引かれている。*(アスタリスク)で示されたプライマーは、断片をサブクローニングするために用いたクローニング・プライマーである。一方はヌクレオチド交換を組み入れるが、他方は組み入れない。
(表2)YF 17Dと比べたYF/WN野生型(ChimeriVax(商標)-West Nile 01)の神経侵襲性、ICRマウスにおける用量反応1
1Harlan-Sprague ICR株3〜4週齢メスマウスを使用した。
2AST=平均生存期間
YF/WN野生型P2とは、Vero細胞における第二世代継代ウイルスを示す。ウエストナイルウイルス株はIP接種後概して神経侵襲性である。
(表3)YF 17Dと比べたYF/WN野生型(ChimeriVax(商標)-West Nile 01)の神経毒性、用量反応(Harlan-Sprague ICR株3〜4週齢メスマウス)
1脳内(IC)に送達された実際の用量は、示されている逆滴定計算のために20μlと仮定された。
(表4)成熟マウス1において試験されたChimeriVax(商標)-WN 01のEタンパク質残基107、138、176、および280における部位特異的変異誘発変異体の神経毒性
1IC接種したマウスは、Taconic ICRの 3〜4週齢メスであった。P2およびP3は、それぞれVero細胞における第二および第三世代ウイルス継代を示す。
(表5)成熟マウス1において試験されたChimeriVax(商標)-WN 01のEタンパク質残基316、および440における部位特異的変異誘発変異体の神経毒性
1IC接種したマウスは、Taconic ICRの3〜4週齢メスであった。3つの独立した実験の結果が示されている。
(表6)YF/WN野生型1と比べた、成熟マウスに対するChimeriVax(商標)-WN 02(YF/WN107F316V440R)の神経毒性
1IC接種したマウスは、Taconic ICR株の3〜4週齢メスであった。
(表7)YF/WN野生型ウイルスに対する逆数中和抗体価(PRNT50)。アカゲザルは、記されているようなYF 17DまたはYF/WNワクチン候補で皮下経路による接種を行った。
a GMT、幾何平均力価;そこでは終末点を求めず、計算において検定限界力価を用いた(例えば、>640を640とし、<40を40とした);b NT=試験を行っていない;c 動物は、ウエストナイルウイルス感染関連症状の発症後安楽死させた。
(表8)ワクチン後ウイルス血症(log10 pfu);アカゲザルは、記されているとおりのYF 17DまたはYF/WNワクチン候補で皮下経路による接種を行った。
*0日(接種前)の検定においてウイルスは何も検出されなかった。
a検定下限値
Claims (34)
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子であって、該エンベロープ・タンパク質が第107位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該核酸分子によってコードされるウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、核酸分子。
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子であって、該エンベロープ・タンパク質が第316位、および440位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該核酸分子によってコードされるウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、核酸分子。
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子であって、該エンベロープ・タンパク質が第107位、第316位、および440位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該核酸分子によってコードされるウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、核酸分子。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンもしくはチロシンに置換されている、請求項1または3に記載の核酸分子。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンに置換されている、請求項1または3に記載の核酸分子。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、もしくはロイシンに置換されている、請求項2または3に記載の核酸分子。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されている、請求項2または3に記載の核酸分子。
- 第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項2、3、6、または7に記載の核酸分子。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、もしくはロイシンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項2または3に記載の核酸分子。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項2または3に記載の核酸分子。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンまたはチロシンに置換されており、第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、またはロイシンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項3に記載の核酸分子。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンに置換されており、第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項3に記載の核酸分子。
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子によりコードされているキメラ・フラビウイルスであって、該エンベロープ・タンパク質が第107位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該キメラ・フラビウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、キメラ・フラビウイルス。
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子によりコードされているキメラ・フラビウイルスであって、該エンベロープ・タンパク質が第316位、および440位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該キメラ・フラビウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、キメラ・フラビウイルス。
- ウエストナイルウイルスのプレメンブランおよびエンベロープ・タンパク質、ならびに黄熱病ウイルスのキャプシドおよび非構造タンパク質をコードする配列を含む核酸分子によりコードされているキメラ・フラビウイルスであって、該エンベロープ・タンパク質が第107位、第316位、および440位において弱毒化変異を含み、かつ該弱毒化変異は、該キメラ・フラビウイルスの神経毒性の低下をもたらすが、効果的な免疫反応を誘発する該ウイルスの能力に悪影響を及ぼさない、キメラ・フラビウイルス。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンまたはチロシンに置換されている、請求項13または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンに置換されている、請求項13または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、またはロイシンに置換されている、請求項14または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されている、請求項14または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項13、14、18、または19に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、またはロイシンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項14または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項14または15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンまたはチロシンに置換されており、第316位のアミノ酸残基がアラニンからグリシン、バリン、イソロイシン、またはロイシンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 第107位のアミノ酸残基がロイシンからフェニルアラニンに置換されており、第316位のアミノ酸残基がアラニンからバリンに置換されており、かつ第440位のアミノ酸残基がリジンからアルギニンに置換されている、請求項15に記載のキメラ・フラビウイルス。
- 請求項13〜24のいずれか一項に記載のキメラ・フラビウイルスを含む薬剤。
- ウエストナイルウイルスに対するワクチンである、請求項25に記載の薬剤。
- 対象においてウエストナイルウイルスへの免疫反応を誘発するためのものである、請求項25に記載の薬剤。
- 対象においてウエストナイルウイルスへの免疫反応を誘発するための薬剤の調製における、請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸分子の使用。
- 対象においてウエストナイルウイルスへの免疫反応を誘発するための薬剤の調製における、請求項13〜24のいずれか一項に記載のキメラ・フラビウイルスの使用。
- 対象が、ウエストナイルウイルス感染は有しないが、それを患う危険にある、請求項28または29に記載の使用。
- 対象がウエストナイルウイルスに感染している、請求項28または29に記載の使用。
- 細胞に請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸分子を導入する段階を含む、キメラ・フラビウイルス・ワクチンを作製する方法であって、該細胞はインビボのヒト細胞ではない、方法。
- ウエストナイルウイルスに対するワクチン接種のための薬剤の調製における、請求項1〜12のいずれか一項に記載の核酸分子の使用。
- ウエストナイルウイルスに対するワクチン接種のための薬剤の調製における、請求項13〜24のいずれか一項に記載のキメラ・フラビウイルスの使用。
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