JP5091385B2 - 弱毒生ワクチン - Google Patents
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Description
フラビウイルス属は主に蚊またはダニによって媒介されるウイルスを含み、それらの多くはヒト、および動物の重要な病原である。特に重要なのは黄熱(YF)ウイルス、日本脳炎(JE)ウイルス、デング(Den)ウイルスの4つの血清型、ダニ媒介脳炎(TBE)ウイルス、および近年北アメリカでヒトおよび様々なトリにおいて病原となっているウエストナイル(WN)ウイルスである。
ペスチウイルス属は経済的に非常に重要な動物病原を含み、例えば古典的ブタ熱(CPF)ウイルス、ウシウイルス性下痢性(BVD)ウイルスおよびボーダー病ウイルス(BDV)を含む。
C型肝炎ウイルス属はC型肝炎ウイルス(HCV)の異なる亜型および、G型肝炎ウイルスのような、関連ウイルスを含む。
一連の弱毒フラビウイルスが知られており、その弱毒化はゲノムの多様な領域での変異に基づく。弱毒化変異は、自然株において観察されるか、実験室においてウイルスの連続継代によって得られるか、中和抗体の存在下で変異株を選択して調製されるか、または組換えクローニング技術によって変異を標的導入して調製されるかのいずれかである。いくつかのフラビウイルスの感染cDNAクローンが存在し、かかるクローンの製法は当業者に公知である。これらの感染cDNAクローンによって、変異はフラビウイルスゲノムに特異的に導入可能となる。
被膜蛋白:弱毒変異の観察の大部分はエンベローププロテインE(フラビウイルス属)に関する(McMinn、1997参照;新例Mandlら、2000)。同様に、プロテインE(rns)(ペスチウイルス属)における弱毒変異が記載されている(Meyersら、1999)。
非構造蛋白:クンジンウイルスのNS1蛋白における点変異によって複製が遅延し、それ故、弱毒化する(Hallら、1999)。弱毒変異はまたNS3蛋白(Burtrapetら、2000)およびNS5蛋白(Xieら、1998)においても記載されている。
非コードゲノム部分:3’末端非コード領域における欠失によるTBEウイルスの弱毒化が記載されている(Mandlら、1998)。デングウイルスに関して、5’および3’の両方の非コード領域において欠失を有する実験的ワクチンが調製された(Laiら、1998)。これらのウイルスの弱毒化の分子的根拠はこのような変異によるウイルス複製に対する逆効果であると考えられる。
本発明によると、この目的はフラビウイルス変異株を含むフラビウイルス弱毒生ワクチンであって、該フラビウイルス変異株がカプシド蛋白において少なくとも4個以上の連続するアミノ酸を欠失しているという点で特徴的であり、カルボキシ末端の疎水性領域がその欠失によって影響されない、フラビウイルス弱毒生ワクチンによって達せられる。しかし(上記のように)一連の弱毒フラビウイルスはすでに当該分野において記載されており、その弱毒化は変異に基づいているが、カプシド蛋白においては、いずれの変異も、特に欠失に関しては、フラビウイルスの弱毒化の根拠として記載されていない。本発明記載のカプシド蛋白内に変異を含むフラビウイルスは、フラビウイルスの確実な弱毒化を提供してフラビウイルス生ワクチンとして使用可能であることもまた非常に驚くべきことである。それ故、本発明の変異はカプシド蛋白内に提供されるが、弱毒ウイルスの増殖が生ワクチンとして本発明記載のウイルスを投与した後ワクチン接種者内で生じるだろう。これは不活化ワクチンに勝る一連の利点となる。
従来の不活化ワクチンの調製においては多量の感染および有毒ウイルスを産生する必要がある。組換え調製不活化ワクチンに関しても、多量の抗原が産生されて精製されなければならない。生ワクチンでは、ワクチンそれ自体がワクチン接種者体内で増殖するので、産生に必要な量は実質的に少なく、それ故生ワクチンの製造費用は一般に不活化ワクチンに比べて実質的に低い。さらに、毒性ではなく、非病原性ウイルスが産生されるため、その産生は健康のリスクとは関係がない。従来のフラビウイルス不活化ワクチンはホルマリンで処理して、抗原構造にある変化を引き起こして感染粒子を不活化することにより調製される。ワクチン接種者において、まず抗原構造が自然形態に正確に対応しない構造蛋白に対する体液性免疫応答が誘発され、長期免疫の構築および細胞障害性T細胞の形成という非常に重要な非構造蛋白に対する免疫応答は誘発されない。
本発明のフラビウイルス生ワクチンは、特に好ましい具体例によると、さらに従来の生ワクチンおよび遺伝子工学的方法によって調製される実験的生ワクチンに勝る利点を有する:
現在使用されているフラビウイルス生ワクチンは実験室で何度も接種されてきたもので、それは多数の変異を提供したが、これらのウイルスの生態に関してその意味がまだ詳細に完全に理解されておらず個々の弱毒変異間の相互作用と同様に、これらのウイルスの弱毒化への個々の寄与もまだ完全に明らかでなかった(JEに関して、Nitayaphanら、1990参照;YFに関して、Postら、1992参照;CPFに関して、Bjorklundら、1998参照)。変異の中には表面プロテインEのような、免疫応答に関して特に重要な抗原内に位置するものもある。それ故、ある抗原決定基は野生株ウイルスと比較して異なる形態で存在する。これらのウイルス弱毒化の遺伝学的根拠が複雑であるため弱毒化の根拠を形成する理論を直接他のフラビウイルスに応用するわけにはいかないのである。
本発明記載の生ワクチンの好ましい具体例は他のいずれの変異も含まず、特に免疫応答に関係する他の蛋白と同様に被膜蛋白における変異を含まない。
すでに上記した通り、一連の遺伝子工学的弱毒フラビウイルスが記載されておりその中で弱毒化は点変異に基づいている。これらに関して遺伝学的に復帰させることは比較的容易である。また、点変異によって弱毒化した、ウイルスの次の点変異による有毒表現型への復帰が記載されている(Mandlら、2000)。対照的に、本発明記載の生ワクチンにおいて、弱毒化は野生株への復帰が不可能である欠失によって達せられる。
さらなる設定において、フラビウイルスワクチンは多様なウイルスを組み合わせて(キメラウイルス)調製される(Guirakhooら、2000)。キメラウイルスは病原ウイルスの遺伝子を人工的な手法で互いを新規に組み合わせた有機体であるため、ワクチン化によるかかるウイルスの放出はこれらのキメラウイルスが新規のウイルスへ予見不可能な性質を発達させるという危険性を孕んでいる。対照的に、新規のワクチンは多様なウイルスゲノムの組み合わせを構成せず、それ故ワクチン化による放出がこれまで自然に存在しなかったウイルス種の形成を引き起こすことはありえない。
さらに、本発明記載の欠失はカプシド蛋白のカルボキシ末端疎水性領域と関係してはならない。この配列はゲノム内の被膜蛋白の正確な形成に必要であって蛋白分解によって分裂して成熟カプシド蛋白から除去されることが知られている。このシグナル配列の長さは個々のフラビウイルスで様々であるが、親水性プロフィールを設定して容易に定量されうる(図1参照)。従って、本発明記載の欠失はこのカルボキシ末端領域と関係してはならない。
本発明記載の好ましい欠失は内部疎水性ドメインという領域に関係する。図1から全フラビウイルスのカプシド配列は、上記のカルボキシ末端の疎水性シグナル配列に加えて、さらに強力な親水性アミノ酸鎖の内部に強力な疎水性を有する部分を含むことが確認できる。これらの内部ドメインという領域が部分的にまたは完全に除去される欠失は特に適当なフラビウイルス弱毒生ワクチンを提供するだろう。「内部疎水性ドメイン」少なくともその当該領域全ては図1において負の疎水値を有すると考えることができる。
図1記載の疎水性ブロットはKyteおよびDoolittle(1982)のウインドウサイズ9アミノ酸残基での、またはHoppおよびWoods(1981)の、各々、ウインドウサイズ7アミノ酸残基でのアルゴリズムに従って計算された。好ましい疎水性領域はデング1:46−67、デング2:46−66、デング3:46−67、デング4:45−65、日本脳炎:46−62、ウエストナイル:46−62、マリーバレー脳炎:46−62、セントルイス脳炎:45−61、黄熱:43−58、ランガート(Langat):42−54、ポーワッサン:40−52、TBE:42−54、HCV:119−145、特に125−144から選択される。
アミノ酸の極性における僅かな差異となる単一変異は継代能力の保存には十分である(例えば、プロリンをロイシンに、バリンをフェニルアラニンに交換すること)。
本発明はフラビウイルスのあらゆる代表種に応用可能である。本明細書の範疇で、「フラビウイルス」なる語は、フラビウイルス属の代表種のみを意味すると明らかに指摘している場合を除き、フラビウイルス科のあらゆる代表種に関する。本発明が認識している特に好ましいフラビウイルスの代表種は黄熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、デングウイルスの4つの血清型、ダニ媒介脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ポーワッサンウイルス、古典的ブタ熱ウイルス、ウシウイルス性下痢性ウイルス、ボーダー病ウイルス、C型肝炎ウイルスおよびG型肝炎ウイルスから成る群から選択される。これらの代表種はヒトおよび動物に関する病原性が既知であって、これらの代表種に関して適当な弱毒生ワクチンに対する需要が特に高いので、本発明に特に適している。
好ましくは、本発明記載の生ワクチンは活性物質または補助物質を含むのがよい。ネオマイシンまたはカナマイシンのような、抗生物質、チオメルサールのような、保存料、およびヒトアルブミン、ラクトース−ソルビット(sorbit)、ソルビット−ゼラチン、ポリゼリン(polygeline)または、塩化マグネシウムまたは硫酸マグネシウムのような、塩のような、安定化剤を加えるのが特に好ましい。一般に、アミノ酸、多糖類および(緩衝)塩が添加剤として使用されるのが好ましい。
本発明記載の生ワクチンの調製において、―ヒトに投与したいのであれば―非形質転換宿主細胞を使用すると、この手法で、性質変化の危険性(例えば新規の、好ましくない変異の容易な導入)、およびこれらの細胞の要素との汚染の危険性が避けられるので、推奨される。
本発明のさらなる態様に従って、フラビウイルスワクチンは核酸ワクチン、核酸は本発明記載の欠失したカプシド蛋白をコードしている、として提供されてもよい。好ましくは、かかるフラビウイルス核酸ワクチンは、プラスミドワクチンにおけるFDAによって推奨されるような、ネオマイシンまたはカナマイシンのような、アミノグリコシド抗生物質、加えて核酸を含んでいるのがよい。当該分野において、非常に多くの様々な戦略が「裸」核酸でのワクチン化に関して記載された(例えば、WO90/11092、WO94/29469、WO97/47197参照、その出典を明示することにより本明細書の一部とする、リポソーム介在核酸転移、(好ましくは生分解性の)ミクロスフィアを用いる核酸転移が好ましい)。
・フラビウイルスまたはフラビウイルス核酸がカプシド蛋白において本発明記載の欠失を含む、フラビウイルスまたはフラビウイルス核酸を提供する、
・該フラビウイルスまたはフラビウイルス核酸を適当な宿主細胞で増殖させる、
・宿主細胞で増殖させたウイルス粒子を回収させる、
・該ウイルス粒子を生ワクチンに加工する
で特徴的である、本発明記載の生ワクチンの製法に関する。
好ましい宿主細胞はニワトリ胚細胞、初期ニワトリ胚細胞、ヒト二倍体細胞系(例えばWI−38、MRC−5)、ベロ細胞、初期ハムスター腎細胞、初期イヌ腎細胞または二倍体アカゲザル胎児肺細胞から成る群から選択される。
最後に、本発明はまたカプシド蛋白において本発明の欠失を有するフラビウイルス核酸であって、フラビウイルス感染の予防に関するワクチン産生のためのフラビウイルス核酸の使用に関する。
本発明は図と同様に以下の実施例によってより詳細に説明されるだろう、しかしながら、それは制限するものではない。
実施例1:TBEウイルスのカプシド欠失変異の生ワクチンとしての使用
TBEウイルスの場合、病原性および免疫原性は成熟マウスモデルで試験されてもよい。生ワクチンとして、カプシド蛋白の領域において16個のアミノ酸の欠失を有するTBEウイルスの変異株(CD28−43)が使用された。この変異株および以下の実施例で議論される他の変異株は表1に開示される。変異株CD28−43は野生株と比較される遺伝子発現を示しBHK−21細胞で所望されるのと同程度継代されるだろう。個々の変異株をTBEウイルスの感染cDNAクローンに導入して変異株を調製した。この変異株cDNAクローンからのRNAをインビトロで転写し、このRNAをBHK−21細胞内にエレクトロポレーションした。3日後細胞培養上清を収集し、ハイタイターウイルス懸濁液を得るためにウイルスを2回新生マウス脳にて継代させた。成熟マウスモデルにおいて生ワクチンとしての変異株の適性を試験するために後者を使用した。この目的で、生後15週間のマウスを10000pfuの変異株または有毒な野生株に各々皮下接種させて、4週間かけて生存率を観察した。表2から明らかなように、有毒野生株ウイルスの場合では、10匹のマウスのうち9匹が脳炎の典型的な臨床所見を示し死亡した。それとは対照的に、カプシド欠失変異株を接種したマウスのいずれも死亡しなかった。また100倍の高い投与量で変異株を接種させた場合、10匹のマウスのいずれも発症しなかった。この結果はカプシド欠失変異株が非病原性であったことを意味する。変異株を接種した全マウスの血清のアッセイによると全てTBEウイルスに対して特異的免疫応答を形成していた。有毒ウイルスを高い投与量で接種させて、この免疫応答が野生株ウイルスの感染に対して保護できるか否か試験した。マウスは全て疾患の徴候を全く示さずにこの試験を生き残った。この結果はカプシド欠失変異株が保護免疫を誘発して野生株ウイルスに対するワクチンとして使用可能であることを意味する。
感染cDNAクローンによって、TBEウイルスのカプシド蛋白に欠失を導入した、その欠失はアミノ酸16からアミノ酸25までに及ぶ(変異株CD16−25;表1参照)。変異株CD16−25は細胞培養において所望されるのと同程度継代可能であった。この結果は、当該分野の従来の主張とは対照的に、20アミノ末端アミノ酸の領域に及ぶ欠失が、アミノ酸16を除いて、フラビウイルスの複製を破壊しないということを示す。
カプシド変異CD28およびCD28−31は各々、1および4個のアミノ酸の長さの欠失を有する(表1)。これらの変異株において、欠失アミノ酸は内部疎水性ドメインの部分ではない(図1)。成熟マウスにこの変異株を接種させると野生株ウイルスに対応する、各々、マウスの80%、および100%を殺す有毒な表現型を有することが示された(表2)。この結果はカプシド蛋白の非疎水性領域における4個のアミノ酸までの欠失は弱毒ワクチンを調製するのに適していないことを示す。
カプシド欠失変異株CD28−35、CD28−39、および実施例1記載の変異株CD28−43は8、12および16個のアミノ酸の長さの欠失を有する(表1)。これらの欠失は内部疎水性ドメインの一部を除去する(図1)。成熟マウスにこれらの変異株を接種させると、例えば、全く殺さない、変異株CD28−35の場合、マウスのたった10%しか殺さない、弱毒な表現型を有することが示された(表2)。この結果は内部疎水性ドメインの一部を除去するにおける欠失は弱毒化させることを示す。弱毒化の程度はまた欠失の大きさに依存してその大きさによって増加するだろう。これらの弱毒変異株によって免疫化したマウスは全て有毒な野生株ウイルスによる感染に対して完全に保護された。この結果はカプシド欠失変異株が生ワクチンとして使用可能であるという実施例1の結果を保証する。
カプシド欠失変異株CD28−48、CD28−54およびCD28−89は21、27および62個のアミノ酸の長さの欠失を有する(表1)。これらの欠失は内部疎水性ドメインを完全に除去し、または最も大きい欠失の場合、カプシド蛋白の内部疎水性部分を全て除去する(図1)。これらの変異株は遺伝子発現には影響しないが、BHK−21細胞にて継代させることができない。これらの変異株をトランスフェクションしたBHK−21細胞培養上清を3日後収集して10匹の新生マウス(生後1日)に頭蓋内接種させた。これはTBEウイルスに関する既知の増殖系の最も感受性の高いものの1つを構成する。5ないし10日後、CD28−48の場合で全て、CD28−54の場合で10匹のうち7匹の新生マウスが脳炎の明らかな臨床所見を示して死亡した。変異株CD28−89を接種させたマウスは全て死亡しなかった。発症した全てのマウスの脳では、TBEウイルスがPCRによって検出でき、生存マウスではウイルスは見出すことができなかった。発症したマウスの脳からのウイルスはBHK−21細胞培養で所望されるのと同程度継代可能であった。この結果は疎水性ドメインの除去によって細胞培養での継代能力を失った変異株において、細胞培養において再び継代可能な復帰変異株が選択されうることを示す。
これらの変化の遺伝学的基礎を定量するために、カプシド蛋白をコードするゲノム部分を一連のかかる復帰変異株における配列を読んだ。各場合、元々導入した欠失に加えてプロテインCにおける別の変異が存在することが示された。これらは点変異または配列重複であった。別の変異は表3で開示される。これら全ての変異株のある共通の特徴はそれらがカプシド蛋白の疎水性を増大させているということである。この結果はカプシド蛋白の疎水性を増大させる変異株は細胞培養においてフラビウイルスの継代能力に関して内部疎水性配列の欠失効果を復帰させることが可能であることを示す。
感染クローンによって、カプシド蛋白において各々(表3に表記の変異から選択)ある付加的な変異とともに内部疎水性ドメインの21個のアミノ酸の長さの欠失を含む2つの変異株を調製した。付加的な変異のない対応する変異株(CD28−43)とは対照的に、これら2つの変異株、CD28−43/L70およびCD28−43/Du8は所望されるのと同程度の継代能力があった(表1)。この結果は実施例5の結果を保証する。成熟マウスにこれらの変異株を接種させると両方とも非病原性で保護免疫を誘発することが示された(表2)。この結果は上記の視点に記載の欠失および付加的な変異が生ワクチンとして適していることを示す。
1.Bjorklund,H.V.、T.Stadejek、S.Vilcek、およびS.Belak、1998.Molecular characterization of the 3'noncoding region of classical swine fever virus vaccine strains. Virus Genes 16:307-312.
2.Butrapet,S.C.、Y.Huang、D.J.Pierroら、2000.Attenuation markers of a candidate dengue type 2 vaccine virus, strain 16681(PDK-53), are defined by mutations in the 5'noncoding region and nonstructural proteins 1 and 3.J.Virol.74:3011-3019.
3.Guirakhoo,F.、R.Weltzin、T.J.Chambersら、2000.Recombinant chimeric yellow fever-dengue type 2 virus is immunogenic and protective in nonhuman primates.J.Virol.74:5477-5488.
4.Hall R.A.、A.A.Khromykh、J.M.Mackenzie、ら、1999.Loss of dimerisation of the nonstructural protein NS1 of Kunjin virus delays viral replication and reduces virulence in mice, but still allows secretion of NS1.Virology 264:66-75.
5.Hope,R.G.、およびJ.McLauchlan.、2000.Sequence motif required for lipid droplet association and protein stability are unique to the hepatitits C virus core protein.J.Gen.Virol.81:1913-1925.
7.Khromykh,A.A.、およびE.G.Westaway.、1996.RNA binding properties of core protein of the flavivirus Kunjin.Arch.Virol.141:685-699.
8.Khromykh,A.A.、およびE.G.Westaway.、1997.Subgenomic replicons of the flavivirus Kunjin:construction and applications.J.Virol.71:1497-1505.
9.Kyte,J.、およびR.F.Doolittle.、1982.A simple method for displaying the hydropathic character of a protein.J.Mol.Biol.157:105-132.
10.Lai,C.J.、M.Bray、R.Men、A.Cahour.ら、1998.Evaluation of molecularstrategiesto develop a live dengue vaccine.Clin Diagn.Virol.10:173-179.
12.Mandl,C.W.、H.Holzmann、T.Meixner、S.Rauscher、P.F.Stadler、S.L.AllisoおよびF.X.Heinz、1998.Spontaneous and engineered delations in the 3'noncoding region of tick-borne encephalitis virus: Construction of highly attenuated mutants of a flavivirus.J.Virol.72:2132-2140.
13.Marcoff,L.、B.Falgout、およびA.Chang.、1997.A conserved internal hydrophobic domain mediates the stable membrane integration of the dengue virus capsid protein. Virology 233:105-117.
14.McMinn,P.C.、1997.The molecular basis of virulence of the encephalito-genic flaviviruses.J.Gen.Virol.78:2711-2722.
15.Meyers,G.、A.Saalmuller、およびM.Buttner.、1999.Mutations abrogating the Rnase activity in glycoprotein E(rns) of the pestivirus classical swine fever virus lead to virus attenuation.J.Virol.73:10224-10235.
17.Post,P.R.、C.N.D.Santos、R.Carvalho、A.C.R.Cruz、C.M.Rice、およびR.Galler.、1992.Heterogeneity in envelope protein sequences and N-linked glycosylation among yellow fever virus vaccine strains. Virology 188:160-167.
18.Xie,H.、K.D.Ryman、G.A.Campbell、およびA.D.Barrett.、1998.Mutation in NS5 protein attenuates mouse neurovirulence of yellow fever 17D vaccine virus. J.Gen.Virol.79: 1895-1899.
Claims (11)
- フラビウイルス属ウイルスの変異株を含む、フラビウイルス属ウイルス弱毒生ワクチンであって、該フラビウイルス属ウイルスの変異株はカプシド蛋白において5個ないし20個の連続するアミノ酸が欠失しており、その欠失がカプシド蛋白の内部疎水性ドメインに関係し、カルボキシ末端の疎水性領域がその欠失によって影響されないという点で特徴的である、フラビウイルス属ウイルス弱毒生ワクチン。
- フラビウイルス属ウイルスが、黄熱ウイルス(YFV)、日本脳炎ウイルス(JEV)、デングウイルス(DV)の4つの血清型、ダニ媒介脳炎ウイルス(TBEV)、ウエストナイルウイルス(WNV)、マリーバレー脳炎ウイルス(MVEV)、セントルイス脳炎ウイルス(SLEV)およびポーワッサンウイルス(PV)から成る群から選択される点で特徴的である、請求項1記載の生ワクチン。
- 10ないし107 の感染単位を含むという点で特徴的である、請求項1または2記載の生ワクチン。
- さらに抗生物質、保存料、安定化剤、緩衝物質またはそれらの混合物を含むという点で特徴的である、請求項1ないし3のいずれか一項に記載の生ワクチン。
- 5個ないし20個の連続するアミノ酸が欠失しているカプシド蛋白をコードするフラビウイルス属ウイルス核酸を含み、その欠失がカプシド蛋白の内部疎水性ドメインに関係し、カルボキシ末端の疎水性領域がその欠失によって影響されないという点で特徴的である、フラビウイルス属ウイルスワクチン。
- フラビウイルス属ウイルスが黄熱ウイルス(YFV)、日本脳炎ウイルス(JEV)、デングウイルス(DV)の4つの血清型、ダニ媒介脳炎ウイルス(TBEV)、ウエストナイルウイルス(WNV)、マリーバレー脳炎ウイルス(MVEV)、セントルイス脳炎ウイルス(SLEV)およびポーワッサンウイルス(PV)から成る群から選択される点で特徴的である、請求項5記載のワクチン。
- さらに抗生物質、保存料、安定化剤、緩衝物質またはそれらの混合物を含むという点で特徴的である、請求項5または6記載のワクチン。
- 以下の工程:
a.カプシド蛋白において5個ないし20個の連続するアミノ酸が欠失しているフラビウイルス属ウイルスの変異株、または5個ないし20個の連続するアミノ酸が欠失しているカプシド蛋白をコードするフラビウイルス属ウイルス核酸であって、その欠失がカプシド蛋白の内部疎水性ドメインに関係し、カルボキシ末端の疎水性領域がその欠失によって影響されないフラビウイルス属ウイルスの変異株またはフラビウイルス属ウイルス核酸を準備する工程、
b.該フラビウイルス属ウイルスの変異株またはフラビウイルス属ウイルス核酸を適当な宿主細胞で増殖させる工程、
c.宿主細胞で増殖させたウイルス粒子を回収する工程、および
d.該ウイルス粒子を生ワクチンに処理する工程
で特徴的である、請求項1に記載のフラビウイルス属ウイルス弱毒生ワクチンを製造する方法。 - 宿主細胞がニワトリ胚細胞、初期ニワトリ胚細胞、ヒト二倍体細胞系、ベロ細胞、初期ハムスター腎細胞、初期イヌ腎細胞または二倍体アカゲザル胎児肺細胞から成る群から選択されるという点で特徴的である、請求項8記載の方法。
- 5個ないし20個の連続するアミノ酸が欠失しているフラビウイルスカプシド蛋白をコードするフラビウイルス属ウイルス核酸の使用であって、その欠失がカプシド蛋白の内部疎水性ドメインに関係し、カルボキシ末端の疎水性領域がその欠失によって影響されない、フラビウイルス属ウイルスによる感染の防止用のワクチンの製造における使用。
- フラビウイルス属ウイルスが、黄熱ウイルス(YFV)、日本脳炎ウイルス(JEV)、デングウイルス(DV)の4つの血清型、ダニ媒介脳炎ウイルス(TBEV)、ウエストナイルウイルス(WNV)、マリーバレー脳炎ウイルス(MVEV)、セントルイス脳炎ウイルス(SLEV)およびポーワッサンウイルス(PV)から成る群から選択される点で特徴的である、請求項10記載の使用。
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