JP4682153B2 - 集積されたエミッションサイトを有するタンパク質インプリントポリマー - Google Patents
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Description
本仕事は、ナショナル・サイエンス・ファウンデーションからの承諾番号CHE-0078101およびCHE-0315129により資金調達された。当該機関が本発明の所定の権利を有する。
本発明は概して、アナライトの検出の分野およびより詳細には、サンプル中のタンパク質の検出に関するものである。
概して、検出のために試みられている手段は、「バイオセンサー」の使用である。一般的なバイオセンサーでは、固定化されたバイオ認識エレメント(例えば、抗体、アプタマー、DNAオリゴヌクレオチド、酵素、レクチン、シグナリングタンパク質、輸送タンパク質)が、標的アナライトを選択的に認識するのに役立ち、結合またはコンバーション(当該アナライトが基質である場合)の現象は、サンプル内のアナライト濃度に関連する光学的、質量的、熱的および/または電子化学的応答を導く。
本発明は、分子的にインプリントされたポリマー、およびタンパク質およびポリペプチドの選択的検出のためにこれを用いる方法を提供する。分子的にインプリントされたポリマーを作製する方法は、レポーター分子が鋳型サイトにまたはその付近に選択的にインプリントされていることを意味する集積エミッションサイトを有する、タンパク質またはポリペプチド鋳型ポリマー(PIPIES)を作成することを含む。試験サンプル中のタンパク質またはポリペプチドの存在を検出するために、試験サンプルをPIPIESに曝し、標的タンパク質またはポリペプチドが存在する場合、これをPIPIESに会合/反応させる。当該センサーの反応は、光増幅チューブ、電荷転送素子(CTD)、または相補型金属酸化膜半導体 (CMOS)等のいずれかのフォトニック検出装置を用いて検出することができる。
本発明は、所定の標的タンパク質のためのポリマーを分子的にインプリンティングし、次いで、1個以上のレポーター分子を、タンパク質検出のための鋳型サイトに、またはその付近に部位選択的に取り付けるための方法および組成物を提供する(図1)。PIPIESに基づくセンサーを用いることによるタンパク質の検出および定量のための方法も提供する。説明目的のために、概して、タンパク質の検出に対して言及するが、タンパク質およびポリペプチド両方が包含されることが意図される。概して、ポリペプチドは約50〜500のアミノ酸から成り、タンパク質は500より多くのアミノ酸から成ると考えられる。本発明の方法を用いることにより、未知のポリペプチドまたはタンパク質に関するセンサーを、利用可能な生物学的認識エレメントがなくても、開発することができる。
タンパク質鋳型ポリマー物質をタンパク質-ARレポーター複合体に曝し、接近可能な鋳型タンパク質サイトを当該複合体で満たす。このステップでは、標的タンパク質は、鋳型サイトがレポーター分子のサイボタクティック領域内部に存在するように、AR分子またはAR分子(複数)を選択的に輸送する。タンパク質-ARをロードしたMIPを次いで適当な手段(例えばUV光での照射)により活性化する。結果として、1個以上のレポーター分子が鋳型サイトに、またはその付近に共有結合される。インサーション反応によりポリマープラットフォームへの結合を形成する、光活性化される残基の場合、鋳型ポリマーを適当な波長の電磁気照射で照射し、例えば鋳型サイトへの高効率のC-Hインサーションを経るニトレンを作成する。他のインサーション/結合形成反応は、合成化学の分野における当業者の予測可能な範囲内にある。無制限の例には、照射に際して反応性中間体を作成するアリールアジド、UV光分解に際して反応性ニトレンを作成するフッ素化アリールアジド、共有付加化合物を作成するまで、電磁気ラジエーションで継続的にエキサイト/イルミネイトされ得るベンゾフェノン誘導体、マレイミドとスルフヒドリル、カルボジイミドとアミン/カルボキシレート、NHS-エステルとアミン、ヒドラジドとカルボヒドレート(酸化される)、PFP-エステルとアミン、ヒドロキシメチルホスフィンとアミン、ソレランとチミン(光活性インターカレーター)、イミドエステルとアミン、ピリジルシスルフィドとスルフヒドリル、イソシアネートとヒドロキシル(非水性)、およびビニルスルホンとスルフヒドリル、アミンまたはヒドロキシルが含まれる。
この方法は、あらゆるMIPに基づくタンパク質検出法に適用可能である。PIXIES法は、本明細書中に詳細に記載するが、他のインプリントされた物質に対する適用が、当該分野における専門家に認識されるであろう。
本発明の態様では、複数の調整可能なセンサーを、各標的タンパク質のために設計および開発することができる。この方法により、単一アナライト/単一センサースキーマに伴う基本的な問題を回避する。ここで、PIXIESライブラリーの同時スクリーニングを行って(参考、表1)、PIXIESの分析パーフォーマンスを最も効果的にし、PIXIESのセットであって、当該セット内で反応特性が所定のアナライトに関して最大の相違を示すものを同定することができる。
他の態様では、ピンプリンティング法または他のアレイ作成スキーマを用いて、同時マルチアナライト検出のためのセンサーアレイを開発することができる。これにより、光源または適当な基質の表面における複数の光センサーエレメントのインプリンティングが可能となる。
以下の記載により、本発明の特定の実施例を提供する。当業者には、本発明の範囲内のものであることが意図される、これらの態様に対する通常の変更が可能であることが明らかであろう。
本実施例(図1)により、一般的なPIPIESの調製を記載する。反応1は、リンカー基(LG)を有するレポーター分子(RM)、リンカー基(LG'、LG'')を有する任意のつなぎ鎖、およびリンカー基(LG''')を有する活性化可能な基(AG)から活性化可能なレポーター(AR)分子を作成するプロセスを示す。反応2は、タンパク質テンプレート(PT、標的アナライト)-AR複合体(PT-(AR)n)を作成するプロセスを示す。AR対PT化学量はn対1であり、nは整数であり得る。一態様では、nは1〜10である。反応3は、タンパク質インプリントポリマー(PIP)を、プレカーサー(PR)、任意の添加物(ADD)およびタンパク質テンプレート(PT)から作成するプロセスを説明する。反応4は、タンパク質テンプレート(PT、標的アナライト)-AR複合体(PT-(AR)n)を用いることにより、PIPをPIPIESへ変換するプロセスを示す。
本実施例は、オブアルブミンに特異的なPIXIESの調製を記載する。ARを図2に示すように調製した。つなぎ鎖により連結された活性化可能なアリールアジド基を有するレポーター分子(RM)を調製する。暗中で、フッ素化アリールアジドに結合されるアミン反応性スクシンイミジルエステルをアミン含有ルミノフォア(BODIPY 505/515)と反応させて、ルミノフォアタグ付アリールアジド(化合物1)を作成した。化合物1はARであり、これを用いて、以下に記載するように、キセロゲル内部のタンパク質鋳型サイト内に1個以上のレポーター分子を取り付けた。
この実施例は、実施例2にて記載したように調製したPIXIESを用いることによるオブアルブミンの検出を記載する。図4に、一連(n=10)のオブアルブミン鋳型PIXIESフィルムからの反応特性をまとめる。これらの特定のPIXIESに基づくフィルムのモル組成は、55%テトラエチルオルトシラン(TEOS)、2%アミノプロピルトリエトキシシラン(APTES)、3%オクチルトリメトキシシラン(OTS)および40%ビス(2-ヒドロキシ-エチル)アミノプロピルトリエトキシシラン(HAPTS)であった。オブアルブミン:アルコキシドSiのモル比は1:750であり、BODIPY 505/515をルミネセントレポーター分子(図2のRM)として用いた。図4に示すように、オブアルブミンをこれらのオブアルブミン鋳型PIXIESに添加すると、ルミネセンスは増す。
この実施例は、オブアルブミンに関するPIXIESの選択性を記載する。オブアルブミンに関するオブアルブミン鋳型PIXIES選択性の初期試験として、15ミクロモルのオブアルブミン溶液を15倍モル過剰のフェニル-SO2Clと反応させ、オブアルブミン表面の全ての接近可能な一級アミンをブロックした。次いでオブアルブミンスルホアミドに対するPIXIESの反応を再測定した。試験した濃度範囲に渡り(2.5mMまで)、観察可能な反応はなかった(図4)。
第三の実験で、一連の同一のオブアルブミン鋳型PIXIESを用いて、これらをオブアルブミン、オブアルブミンスルホンアミドおよびHSAと混合物中でインキュベートして、サンプルのオブアルブミン含量にのみ相当する反応を観察した。
第四の実験で、オブアルブミン鋳型PIXIESセンサーを用いた一連の連続フロー実験を、オブアルブミンのプラグを注入後、純粋なバッファーを注入することにより行った。625±1-mn厚のPIXIESフィルムに関する反応時間(最大のシグナル変化の90%に達する時間)は、45sのオーダーであり、反応は8%の範囲内で可逆的である(25サイクル)。
本実施例により、別個のプレカーサーおよびキセロゲル組成を用いることにより調製された一連のPIXIES-に基づくセンサーフィルムにおけるScatchard分析[20]を記載する。これらの実験の結果を表1にまとめる。これらの実験の結果は、別個のキセロゲル組成物を用いてPIXIES反応および選択性を調整できることを示す。
この実施例(図5)は、独立センサーエレメント(左)から、リダンダントセンサーの組(中央)、多様化されたマルチモデルセンサーアレイ法(右)へのPIPIESに基づくセンシングプラットフォームの推移を記載する。検量曲線を、各アレイに関して下に描写する。異なるサークルは、異なるPR、ADD、AR、TおよびPTに基づく別個のセンサーエレメントを示す(図1−3)。当該方法を用いて、他からの一タンパク質に関する選択性を改善するために、または、一サンプル中での同時マルチタンパク質検出および定量のために用いることができる、適合されたPIPIESに基づくセンサープラットフォームを設計および開発することができる。発明のこの側面を、以下により詳細に記載する。
本実施例では、アレイフォーマットにおけるPIXIES法の適用可能性を、ケラチノサイト成長因子(KGF)の検出に関して示す。ここで、5つの(5)同一のPIXIESに基づくセンサーエレメントを、KGFのためのアレイフォーマットにおいて調製した。これらの結果を図6にまとめる。図6の左側部分に、LEDの表面にプリントされた100ミクロメーターの直径のPIXIESに基づくセンサーエレメントの一連のCCD画像であって、CCDにより検出されたものを、添加されたKGFのファンクションとしてを示す。PIXIESからのエミッションは、KGF濃度が増すに従い増加する。高濃度のBSA(1ミクロモル)または化学的に変性されたKGF(即ち2Mの尿素で処理したKGF)を用いた対照実験も示す。当該シグナルはブランクと同義である。図6の右側は、ネイティブなKGFおよび化学的に変性されたKGFの存在下でのKGF鋳型PIXIESに関する検量曲線を示す。選択性は明らかであり、PIXIESの検出ポテンシャルを示す。
本実施例では、オブアルブミン、HSAおよびBSAに関して設計され、各PIXIESが異なるキセロゲル処方に基づく一連の5つの(5)複製PIXIESに基づくセンサーエレメントからの反応を示す。結果を図7に示す。特に、処方F1は15%TEOS、5%OTSおよび75%HAPTSであり、処方F2は8%TEOS、14%APTES、7%OTSおよび71%HAPTSであり、処方F3は8%TEOS、14%APTES、7%OTSおよび71%HAPTSであり、3重量%のPEG(2000)を塗布したものであり、処方F4は、28%TEOS、4%APTES、7%OTSおよび61%HAPTSであり、および処方F5は、8%TEOS、14%APTES、7%OTSおよび71%HAPTSと1.5モル%のグリセロールである。かかる複数のセンサーを協調使用することにより、所定のタンパク質に関する総合的な検出の正確さ、精度、および動的範囲を数倍改善することができる。誤ったポジティブおよびネガティブも、マルチプル協調可能センサーおよびリダンダント検出スキーマを用いることによりより容易に検出される。
本実施例では、別個のタンパク質の検出に対する本方法の適用可能性を示す。一連のタンパク質鋳型キセロゲルを調製し、タンパク質を実施例1および2のごとく検出した。結果を表2にまとめる。
本実施例では、リシンの検出のための、多様化されたPIXIESに基づくセンサーアレイの開発を示す。完全なリシンに関して設計された5×5アレイのPIXIESに基づくセンサーエレメントに関する、エピ蛍光顕微鏡からの未処理の、偽色CCD画像を示す(図8)。各縦列は、所定のキセロゲル処方ケミストリー(Fx)に基づく5つの(5)複製センサーエレメントから成る。このケースにおけるARは図2に示すものであり、RM=ダンシルであり、つなぎ鎖は-(CH2)3-である。Faの処方は15%TMOS、75%OTSおよび5%HAPTSであり、処方Fbは18%TEOS、3%APTES、8%OTSおよび71%HAPTSであり、処方Fbは8%TMOS、14%APTES、7%OTSおよび71%HAPTSで、12重量%のPEG(2000)を塗布したものであり、処方Fdは25%TMOS、7%APTES、18%OTSおよび25%HAPTSであり、および処方Feは、20%TEOS、10%APTES、45%OTSおよび25%HAPTSと3モル%プロピレングリコールである。かかるマルチプルセンサーを協調使用することにより、リシンに関する全般的な検出の正確さ、精度および動的範囲が、1オーダーを越すマグニチュードまで改善され、動的範囲は有意に拡張される。
本実施例では、標準的な酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)の完全なリシンに関する選択性を、各々10、100、512および1024のセンサーエレメントから成る4つの(4)多様化されたPIXIESに基づくセンサーアレイからの選択性と比較する。各センサーエレメントは、異なるキセロゲル処方(図3および実施例3−10をご参照)から誘導した。選択性ファクターは、10pg/mLの完全なリシン(AおよびB鎖)に対するELISAまたは表示されたセンサーアレイからの反応を、ELISAまたは同じアレイを10pg/mLの指定のタンパク質(リシンAのみ、リシンBのみ、HSAおよびBSA)でチャレンジした場合にELISAまたは同じアレイに関して認められた集合的反応で割った比を示す。ELISAと比較して、多くのセンサーエレメントを有するPIXIESに基づくプラットフォームに関して認められる選択性の、(2オーダーのマグニチュードを越える)非常な増加は、注目に値する。
本実施例では、異なるタンパク質の同時マルチモデル検出へのPIXIES法の適用可能性を示す。ここでは、5×5アレイのPIXIESに基づくセンサーエレメント(図10)であって、各PIXIESに基づくセンサーエレメントが異なるタンパク質ターゲットに関して設計されたものを3つの異なるタンパク質混合物でチャレンジする。図10Aでは、HSA、BSA、オブアルブミン、KGF、IL-1およびTGFを含む混合物からの反応を示す。図10Bでは、KGF、カルモジュリン、ブタの血清アルブミン、RANTESおよびEGFの混合物からの反応を示す。図10Cには、HSA、RANTES、EGF、IL-1およびTGFの混合物からの反応を示す。これらの結果により、1サンプル中の同時性マルチタンパク質検出が立証される。
特定の態様を本記載において示したが、通常の変更が、本発明の要旨から離れることなく、当業者になされ得ることが、当業者には明らかであろう。
1.コマーシャルバイオセンサーズ。臨床、バイオプロセス、および環境サンプルへの適用 ; Ramsay, G. , Ed.; John Wiley & Sons: New York, NY, 1998.
2. Harris, T. D., Anal. Chem. 2000, 72, 669A.
3. Gopel, W., Sens.アクチュエーターズ B 2000, B65, 70-72.
4. Albert, K. J.; Lewis, N. S.; Schauer, CL.; Sotzing, G. A.; Stitzel, S. E.; Vaid, T. P.; Walt, D. R.,Chem. Rev. 2000,100, 2595-626.
5. Britton, C. L.; Jones, R. L.; Oden, P.1. ; Hu, Z.;Warmack, R. J.; Smith, S. F.; Bryan,
W. L.; Rocelle, J. M., 高分解能顕微鏡2000,82,17-21.
7. Stefan, R. -I. ; Van Staden, J. F.; Aboul-Enein, H. Y., Crit. Rev. Anal. Chem. 1999, 29, 133-53.
8. Walt, D. R., Cur. Opin. Chem. Biol. 2002,6, 689-95.
9. (a) Barko, G.; Abonyi, J.; Ulavay, J., Anal. Chim. Acta 1999,398, 219-26.(b) Wachter, E. A.; Thundat, T.,Rev. Sci. Instrum. 1995,66, 3662-7.
10. (a) Grate, J. W., Chem. Rev. 2000, 100, 2627-47. (b) Park, J.; Groves, W. A.; Zellers, E. T., Anal. Chem. 1999, 71, 3877-86. (c) Ricco, A. J.; Crooks, R. M.; Osbourn, G. C., Acc. Chem. Res. 1998, 31, 289-96.
12. タンパク質の不動化: 基礎および応用、Taylor, R. F. , Marcel Dekker, Inc.: New York, NY, 1991; 第8章.
13. Weetall, H. H. 不動化された酵素、抗原、抗体およびペプチド: 調製および特徴付け、 Marcel Dekker, Inc.: New York, NY, 1975;第6章および第8章.
14 (a) Piletsky, S. A.; Alcock, S.; Turner, A. P. F.,TrBC 2001,19, 9-12. (b) Katz, A.; Davis, M. E., ネイチャー 2000, 403,286-9.(c) Dickert, F. L.; Hayden,0.,"ケミカルセンシングにおける分子インプリンティング"TrAC 1999, 18, 192-9. (d) Kriz, D.; Ramstrom,O. ; Mosbach, K., Anal. Chem. 1997,69, 345A-9A. (e) Ensing, K. ; De Boer, T., TrAC 1999, 18, 138-45.(f) Wulff, G.,"Ang.Chem., Int. Ed. Engl. 1995, 34, 1812-32. (g)Mayes, A. G.; Mosbach, K. , TrAC 1997, 16, 321-32. (h) Mosbach, K., TrBS 1994, 19, 9-14. (i) Mallik, S.; Plunkett, S. D.; Dhal, P. K. ; Johnson, R. D.; Pack, D.; Shuck, D.; Arnold, F. H., New. J. Chem. 1994,18, 299-304.
(b) Sellergren, B., Angew. Chem.Irat. Ed. Engl. 2000,39, 1031-7. (c) Mosbach, K., Anal. Claim. Acta 2001, 435, 3-8. (d) Piletsky, S. A.; Piletska, E. V.; Bossi, A. ; Karim, K.; Lowe, Turner, A. P. F.,Bisera. & Bioelec. 2001,16,701-7. (e) Bossi, A.; Piletsky, S. A.; Piletska, E. V.; Righetti, P. G.; Turner, A. P. F., Anal.Chem. 2001,73, 5281-6.
16. Leung, M. K.-P ; Chow, C. -F. ; Lam, M. H.-W.," J Mater. Chem. 2001, 11, 2985- 91.
18. 開発された材料のケミカルプロセシング; Hench, L. L.; West J. K. , Eds.; Wiley: New York, NY, 1992.
19. Jin, W.; Brennan, J. D., Anal Chim. Acta 2002, 461, 1-36.
20. Lulka, M. F.;Iqbal, S. S.; Chambers, J. P.; Valdes, E. R.; Thompson, R. G.; Goode, M. T.; Valdes, J. J., Mater. Sci. Engr. 2000,Cll, 101-5.
Claims (20)
- タンパク質またはペプチドから成る群から選択されるアナライトの存在を検出するための分子的にインプリントされたポリマーであって、
複数の鋳型サイトであって、各鋳型サイトが前記アナライトに特異的である、鋳型サイト;および
1個以上のレポーター分子であって、前記特異的ポリペプチドまたはタンパク質の前記鋳型サイトへの結合に際して、当該レポーターに関するアブソーバンスおよび/またはエミッションの変化が認められるように、前記鋳型サイトに選択的に取り付けられたレポーター分子、
を含むポリマーマトリックスを含む分子インプリントポリマー。 - 実質的に全ての前記レポーター分子が、前記鋳型サイトに存在する、請求項1に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記ポリマーがキセロゲルまたはエアロゲルである、請求項1に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記レポーターが、ルミノフォアまたはクロモフォアから成る群から選択される、請求項1に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記ルミノフォアが、フルオレセイン、BODIPY、ローダミン、トリス(4,7-ジフェニル-1,10-フェナントロリン)ルテニウム(II)([Ru(dpp)3]2+およびクアンタムドットから成る群から選択される、請求項4に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記クロモフォアが、4-ニトロアニリン;2,6-ジフェニル-4-(2,4,6-トリフェニル-1-ピリジニオ)フェノレート;2.6-ジクロロ-4-(2,4,6-トリフェニル-1-ピリジニオ)フェノレート;およびN,N-ジエチル-4-ニトロアニリンから成る群から選択される、請求項4に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記鋳型サイトが、ケラチノサイト成長因子、オブアルブミン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミンおよびこれらの組合せに関して特異的である、請求項1に記載の分子インプリントポリマー。
- 前記レポーター分子が、化学的つなぎ鎖により前記鋳型サイトに取り付けられている、請求項1に記載の分子インプリントポリマー。
- タンパク質およびポリペプチドから成る群から選択されるアナライトを選択的に検出するための分子インプリントポリマーを調製する方法であって、
a)未重合のポリマー成分を、アナライト分子の存在下に重合させ、鋳型サイトを有するポリマーマトリックスを作成するステップ、ここで、各鋳型サイトは、それに結合されたアナライト分子を有する、
b)前記アナライト分子を前記鋳型サイトから放し、これにより、前記アナライトに特異的な鋳型サイトを作成するステップ、
c)活性化可能な化学的残基がレポーター分子に共有結合している、アナライト-活性化可能なレポーター複合体を、別個に調製するステップ、
d)前記鋳型サイトを、前記アナライト-活性化可能なレポーター複合体と、接触させるステップ、
e)前記アナライト-活性化可能なレポーター複合体を活性化し、アナライト-活性化レポーター複合体を作成し、次いでこれにより、前記アナライト-活性化レポーター複合体の前記レポーター部分の前記鋳型サイトへの結合をもたらすステップ、
f)前記アナライト分子を前記アナライト-活性化レポーター複合体から放し、これにより、前記アナライトに関して特異的な鋳型サイトおよび当該サイトに結合されたレポーター分子を有する分子インプリントポリマーを得るステップ、
を含む方法。 - 前記ポリマーがキセロゲルまたはエアロゲルである、請求項9に記載の方法。
- アナライト-活性化可能なレポーター複合体を調製する前記ステップが、1個のレポーター分子を1個の活性化可能な化学的残基に共有結合して、1個の活性化可能なレポーターを形成するステップ、次いで、1個以上の活性化可能なレポーターを1個のアナライト分子に結合して、1個以上のレポーター分子を有するアナライト-活性化可能なレポーター複合体を作成するステップ、を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記レポーター分子が、化学的つなぎ鎖により前記活性化可能な化学的残基に共有結合される、請求項11に記載の方法。
- 前記活性化可能な化学的残基が光活性化可能な化学的残基である、請求項11に記載の方法。
- 前記光活性化可能な化学的残基が、アリールアジド、フッ素化アリールアジドおよびベンゾフェノン誘導体から成る群から選択される、請求項13に記載の方法。
- 前記活性化可能な化学的残基が、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、カルボキシルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、カルボニルアジド、スルホニルクロライド、アリール化剤、アルデヒド、ヨードアセトアミド、マレイミド、アルキルハロゲン化物、アリール化剤、ジスルフィド、ジクロロトリアジン、N-メチルイサトイン無水物、アミノフェニルボロン酸、アシルアジドから調製されたイソシアネート、アシルニトリル、ヒドラジン、ヒドロキシルアミンアミン、カルボジイミド、エステル化試薬、ジアゾアルカン、アルキルハロゲン化物、およびトリフルオロメタンスルホネートから成る群から選択される、請求項11に記載の方法。
- 前記つなぎ鎖が、メチレン鎖、エーテル鎖、ポリジメチルシロキサン鎖、ポリスチレン鎖またはアミノ酸鎖および有機または無機オリゴマーからなる群から選択される、請求項12に記載の方法。
- 前記レポーターが、ルミノフォアまたはクロモフォアである、請求項9に記載の方法。
- 前記ルミノフォアが、フルオレセイン、BODIPY、ローダミン、トリス(4,7-ジフェニル-1,10-フェナントロリン)ルテニウム(II)([Ru(dpp)3]2+およびクアンタムドットから成る群から選択される、請求項17に記載の方法。
- 前記クロモフォアが、4-ニトロアニリン;2,6-ジフェニル-4-(2,4,6-トリフェニル-1-ピリジニオ)フェノレート;2.6-ジクロロ-4-(2,4,6-トリフェニル-1-ピリジニオ)フェノレート;およびN,N-ジエチル-4-ニトロアニリンから成る群から選択される、請求項17に記載の方法。
- 試験サンプル中のアナライトの存在を検出するための方法であって、
a)前記試験サンプルを、請求項1に記載の分子インプリントポリマーと接触させるステップ、および、
b)前記試験サンプルに曝した際の前記レポーター分子からのアブソーバンスまたはエミッションの変化を検出するステップ
を含み、前記レポーター分子からの前記アブソーバンスまたはエミッションの変化が前記試験サンプル中の前記アナライトの存在を示す、方法。
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US6131580A (en) | 1998-04-17 | 2000-10-17 | The University Of Washington | Template imprinted materials by RFGD plasma deposition |
US6287765B1 (en) * | 1998-05-20 | 2001-09-11 | Molecular Machines, Inc. | Methods for detecting and identifying single molecules |
JP4197773B2 (ja) * | 1998-08-28 | 2008-12-17 | 俊文 竹内 | 人工レセプターの評価方法 |
US6057377A (en) * | 1998-10-30 | 2000-05-02 | Sandia Corporation | Molecular receptors in metal oxide sol-gel materials prepared via molecular imprinting |
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US6458599B1 (en) * | 2000-02-18 | 2002-10-01 | Aspira Biosystems, Inc. | Compositions and methods for capturing, isolating, detecting, analyzing and quantifying macromolecules |
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