JP4681230B2 - フィトスフィンゴシンのスリミング剤としての化粧的使用、及び、フィトスフィンゴシンを含む化粧組成物 - Google Patents
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Description
−皮膚中の受容体を介して皮膚に直接影響を与えることができる、
−脂肪分解の誘導において脂肪組織に影響を与えることができる、
−体重調節因子として働く因子、すなわちオレイルエストロンに影響を与えることができる
方法を得ることが最も重要である。
活性成分として、
―フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種(特に塩酸塩)、並びに、
―cAMP及びその化粧品に許容される誘導体、アデニル酸シクラーゼ活性化剤及びホスホジエステラーゼ阻害剤からなる群より選択される化粧品に許容される脂肪分解剤の少なくとも1種
を化粧品に許容される媒体中に含む
ことを特徴とする化粧組成物に関する。
−図1:実施例2中で実施した様々な処理が脂質生成に及ぼす効果、
−図2〜4:実施例2の処理の異なる段階におけるマウス脂肪細胞の形態、
−図5:(実施例3の)コントロール溶液について、18日目におけるヒト脂肪細胞の形態、及び、
−図6:本発明の(実施例3の)組み合わせによる処理について、18日目におけるヒト脂肪細胞の形態
を示す。
1.試験の原理
分泌された循環因子によって脂肪量が制御される概念は非常に興味深い。この試験の原理は、脂肪細胞によるレプチン分泌の調節である。
3T3−F442A細胞の培養
トリグリセリドを多量に蓄積できるクローンを、マウス3T3前駆脂肪細胞の確立された細胞系から単離した。脂肪分解剤はこの蓄積を減少させる。従って、脂肪分解剤である可能性のある物質を3T3−F442Aマウス前駆脂肪細胞系に対して試験することは重要であると考えられる。この前駆脂肪細胞(GREEN H.及びKEHINDE O.“Spontaneous Heritable Changes Leading to Increased Adipose Conversion in 3T3 Cells”Cell Vol.7,105−113,1976年)は、成熟脂肪細胞の分化後の機能に特徴的な形態学上及び生化学上の表現型を獲得することにより増殖及び分化できる。この細胞は、指数増殖期において繊維芽細胞のような外観を呈し、細長い形態で支持体に非常によく付着する。コンフルエンスにおいて、条件によっては、非常に早熟期の形態変化により丸い形態となる。
基本培地はそのまま(DMEM)であるが、ウシ胎児血清(FCS)10%及びインスリン(5μg/mL)(SIGMA社)を添加する。培地はその後、9日目と11日目に交換する。
0日目:DMEM、CS5%、FCS5%の中への3T3−F442Aの播種。細胞密度=2x104個/35mmペトリ皿。
2日目:培地の交換。
4日目:培地の交換。
7日目:コンフルエンス。培地はDMEM、FCS10%、インスリン(母液は500μg/mL)1%。
9日目及び11日目:培地の交換。
14日目:試験する組成物による処理。
16日目及び18日目:試験する組成物による処理。
21日目:細胞上清の回収。
Quantikine M マウスレプチンイムノアッセイキットを用いてサンドイッチElisa法を繰り返し行い、分泌されたレプチンの量を測定する。このELISA測定には、大腸菌中で発現した組み換えマウスレプチン及び抗組み換えマウスレプチン抗体を使用する。この試験には「サンドイッチ」酵素抗体法を用いる。マイクロプレートウェルにマウスレプチンポリクローナル抗体を一列に並べる。
フィトスフィンゴシン又はその塩酸塩をそれぞれ0.25、1及び2μg/mL含む3種の組成物について試験した。
1.研究の原理
この研究は、活性成分2種、すなわちコレウス・フォルスコリ(プレクトランサス・バルバトス)(PB)及びフィトスフィンゴシン(PS)の組み合わせの、新しい脂肪細胞の増殖に対する効果に関する。
a)培養と処理
前駆脂肪細胞とも呼ばれる、実施例1のプロトコールにおいて7日目で得られたあまり成熟していない分化過程の脂肪細胞を、分化した成熟脂肪細胞に対して条件付けた培地で処理し、下記プロトコール中で示すように、PB又はPSで、及び、PBとPSとの組み合わせで8日間(9日目と11日目に培地を交換)の処理をする又は処理しない。
細胞の断片をPBSバッファーで2回洗浄し、細胞を25mMのTRIS−HClバッファー(pH7.5、EDTAを1mM含む、4℃)中でかき取って回収する。細胞をすりつぶし、10,000gで10分間、4℃において遠心分離してホモジナイズする。
0日目:3T3−F442Aの播種。細胞密度=2x104個/35mmペトリ皿。
培地はDMEM、5%FCS/5%CS。
2日目:培地の交換。
4日目:培地の交換。
7日目:コンフルエンス。培地はDMEM、FCS10%、インスリン(母液は500μg/mL)1%。条件付けた培地による処理:PB:0.25μg/mL:PS:0.5及び1μg/mL。
9日目−11日目:培地の交換。同じ培地+処理。
14日目:処理、同じ培地。
16日目:上清の回収及びG3PDH測定。
G3PDH活性の測定は、Kozak及びJensenの方法で行う(Kozak及びJensen,1974年,J.Biol.Chem.,249,7775−7781)。
ジヒドロキシアセトンリン酸(DHAP)+NADH、H+ → グリセロール−3−リン酸+NAD+
G3PDH
SA=81.25xΔAbs/分x(1/タンパク質(mg))
グリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(G3PDH)活性の測定
培地の処理について、8日後のNAD+の量を下記表3中に示す。
同時に、脂肪細胞の形態を、ペトリ皿の中の細胞を逆位相顕微鏡(reverse phase microscope)(Olympus社、BH2)で直接観察して調べた。縁が円形になって細胞質が脂質小滴で満たされた際に、形態分析により細胞は分化しているとみなす。逆に、形態が細長くなって脂質液胞の量が減少すると、この成熟が減速したことになる。
図2:7日目におけるコントロール培養の細胞。この培養では細胞はあまり分化しておらず、脂質液胞はそう多くない。ここから処理を開始する。
図3:21日目におけるコントロール培養の細胞。細胞内に脂質液胞が詰まっている。
図4:25μg/mLのPBと1μg/mLのPSとの組み合わせで処理して培養した細胞。
この研究により、成熟脂肪細胞をPBとPSとの組み合わせで処理すると、前駆脂肪細胞中のトリグリセリドの蓄積を全体的に減速できるような情報が得られることが分かった。脂質生成酵素G3PDHの活性が低下すると、細胞内の脂質小滴が著しく減少する。
ZEN−BIO社(アメリカ)から市販されている、41歳女性の形成手術に由来するヒト脂肪細胞を成熟進行段階で使用した。この培養細胞の反応は播種して16日後に起こる。この細胞は、いずれの処理をする間も、その分化を保証する特定の培地中で培養する。
0日目:コレウス(PB)及び/又はフィトスフィンゴシン(PS)抽出物による処理の開始。
6日目〜18日目:様々なパラメーターの測定。
水 qsp.100%
変性アルコール 42%
PPG−3ミリスチルエーテル 10%
香料 0.20%
フィトスフィンゴシン 0.10%
酢酸PPG−2−イソセテス−20 2%
ポロキサマー(Poloxamer)407 0.50%
酢酸PG−イソセテス−3 15%
ペンタシクロメチコン 15%
水 qsp.100%
ブチレングリコール 3%
防腐剤 q.s.
コレウス・フォルスコリ抽出物(フォルスコリン80%) 0.1%
キサンタンガム 0.05%
アクリル酸/アクリル酸アルキル(C10−30)クロスポリマー 0.04%
中和剤 q.s.
ポリアクリルアミド/C13−14イソパラフィン/ラウレス−7 0.50%
香料 0.20%
フィトスフィンゴシン 0.05%
ステアレス−2 0.50%
ステアレス−21 1.75%
セチルアルコール 0.30%
ステアリルアルコール 0.30%
ステアリン酸 0.50%
ステアリン酸2−エチルヘキシル 4.00%
セテアリルイソノナノエート 3.00%
スクアラン 4.00%
IBMX 1.00%
ジメチコン 0.40%
水 qsp.100.00%
グリセリン 2.00%
ブチレングリコール 3.00%
防腐剤 q.s.
アクリル酸/アクリル酸アルキル(C10−30)クロスポリマー 0.35%
キサンタンガム 0.10%
ヒアルロン酸ナトリウム 0.02%
中和剤 q.s.
ポリアクリルアミド/C13−14イソパラフィン/ラウレス−7 0.50%
変性アルコール 5.00%
香料 0.20%
フィトスフィンゴシン 0.002%
Claims (30)
- 過剰な皮下脂肪の低減を意図した化粧組成物を調製するための、フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種のスリミング剤としての化粧的使用。
- 過剰な皮下脂肪の低減を意図した化粧組成物を調製するための、フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種の、脂肪細胞によるレプチンの合成を刺激する活性成分としての化粧的使用。
- 前記フィトスフィンゴシン又はその塩の1種は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜1重量%の濃度である
ことを特徴とする請求項1又は2に記載の化粧的使用。 - 前記フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩は、化粧品に許容される脂肪分解剤の少なくとも1種と組み合わせて、前記組成物を調製するために使用される
ことを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項に記載の使用。 - 前記脂肪分解剤は、環状アデノシン3’,5’−一リン酸(cAMP)、又は、その化粧品に許容される誘導体である
ことを特徴とする請求項4に記載の使用。 - 前記cAMP又はその誘導体は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜5重量%の濃度で使用される
ことを特徴とする請求項5に記載の使用。 - 前記脂肪分解剤はアデニル酸シクラーゼ活性化剤である
ことを特徴とする請求項4に記載の使用。 - 前記アデニル酸シクラーゼ活性化剤は、フォルスコリン又はこれを含む植物抽出物である
ことを特徴とする請求項7に記載の使用。 - 前記フォルスコリン又はこれを含む植物抽出物は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜1重量%の濃度で使用される
ことを特徴とする請求項8に記載の使用。 - 前記フォルスコリンを含む抽出物は、コレウス・フォルスコリ(Coleus forskohlii)又はプレクトランサス・バルバトス(Plectranthus barbatus)の抽出物である
ことを特徴とする請求項8又は9に記載の使用。 - 前記アデニル酸シクラーゼ活性化剤は植物テフロジア・プルプレア(Tephrosia purpurea)の抽出物であり、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜5重量%の濃度である
ことを特徴とする請求項7に記載の使用。 - 前記脂肪分解剤はホスホジエステラーゼ阻害剤である
ことを特徴とする請求項4に記載の使用。 - 前記ホスホジエステラーゼ阻害剤は、キサンチン誘導体、カフェイン又はテオフィリンである
ことを特徴とする請求項12に記載の使用。 - 前記キサンチン誘導体は、前記組成物の重量に対して0.001重量%〜10重量%の濃度で使用される
ことを特徴とする請求項13に記載の使用。 - 人体に対するスリミング効果を得ることを意図した化粧処置の方法であって、
フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種を含む化粧組成物の有効量を前記効果を必要とする身体部分に塗布することである方法。 - 前記化粧組成物は、化粧品に許容される脂肪分解剤の少なくとも1種を更に含む
ことを特徴とする請求項15に記載の化粧処置の方法。 - 前記脂肪分解剤は、cAMP並びにその誘導体からなる群より選択され、
前記脂肪分解剤は、前記組成物中に請求項6、9又は14に記載の濃度で含まれる
ことを特徴とする請求項16に記載の化粧処置の方法。 - 過剰な皮下脂肪の低減を意図した化粧組成物であって、
活性成分として、
―フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種、並びに、
―cAMP及びその化粧品に許容される脂肪分解性誘導体、アデニル酸シクラーゼ活性化剤及びホスホジエステラーゼ阻害剤からなる群より選択される脂肪分解剤の少なくとも1種
を化粧品に許容される媒体中に含む
ことを特徴とする化粧組成物。 - フィトスフィンゴシン又はその化粧品に許容される塩の1種を、0.001重量%〜1重量%含む
ことを特徴とする請求項18に記載の化粧組成物。 - 前記脂肪分解剤は、cAMP、又は、その化粧品に許容される誘導体の1種である
ことを特徴とする請求項18又は19に記載の化粧組成物。 - cAMP又はその脂肪分解性誘導体は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜5重量%の濃度で含まれる
ことを特徴とする請求項20に記載の化粧組成物。 - 前記脂肪分解剤はアデニル酸シクラーゼ活性化剤である
ことを特徴とする請求項18に記載の化粧組成物。 - 前記アデニル酸シクラーゼ活性化剤は、フォルスコリン又はこれを含む植物抽出物である
ことを特徴とする請求項22に記載の化粧組成物。 - 前記フォルスコリン又はこれを含む抽出物は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜1重量%の濃度で含まれる
ことを特徴とする請求項23に記載の化粧組成物。 - 前記植物抽出物は、コレウス・フォルスコリ又はプレクトランサス・バルバトスの抽出物である
ことを特徴とする請求項23又は24に記載の化粧組成物。 - 前記アデニル酸シクラーゼ活性化剤は、植物テフロジア・プルプレアの抽出物である
ことを特徴とする請求項22に記載の化粧組成物。 - 前記テフロジア・プルプレアの抽出物は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜5重量%の濃度で含まれる
ことを特徴とする請求項26に記載の化粧組成物。 - 前記脂肪分解剤はホスホジエステラーゼ阻害剤である
ことを特徴とする請求項18に記載の化粧組成物。 - 前記ホスホジエステラーゼ阻害剤は、キサンチン誘導体、カフェイン又はテオフィリンである
ことを特徴とする請求項28に記載の化粧組成物。 - 前記キサンチン誘導体は、前記組成物の全重量に対して0.001重量%〜10重量%の濃度で含まれる
ことを特徴とする請求項29に記載の化粧組成物。
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