JP4587537B2 - 抗アレルゲン組成物及びアレルゲン不活化方法 - Google Patents
抗アレルゲン組成物及びアレルゲン不活化方法 Download PDFInfo
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、環境中のアレルゲンを不活化するための抗アレルゲン組成物及びこれを用いたアレルゲン不活化方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
喘息やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患は、長年にわたり、多くの人が悩まされてきたものである。これらのアレルギー性疾患の原因物質（以下アレルゲンと示す）の代表的なものとしては、屋内に棲息するダニ、ペットの上皮や毛、花粉などがよく知られている。現在、アレルギー患者の治療には主に薬物療法が適用されている一方、原因物質であるアレルゲンを患者自身の生活環境から除去することも、患者をアレルゲンへの暴露から直接守るという合理的な手段である。このようなアレルゲン除去による症状改善は、日本の他、ヨーロッパやアメリカにおいても報告がなされている。
【０００３】
アレルゲン除去の方法としては、電気掃除機による吸引、空気清浄機による除去や寝具の高密度カバーの使用などがあげられる。しかしながら、電気掃除機による吸引だけでは除去できるアレルゲン量に限界があり、空気清浄機では空中に舞うアレルゲン除去しかできない。また、寝具の高密度カバーでは内側からのアレルゲン除去にはなるが外側からのアレルゲン除去にはならないなど、これらの方法は必ずしも満足できるものではなかった。
【０００４】
アレルゲンを化学的に不活化する方法としては、タンニン酸を用いた方法（特公平２−１６７３１）、茶抽出物、没食子酸等を用いた方法（特開平６−２７９２７３）が知られていた。しかしながら本方法では、処理を行った対象物に何らかの着色が認められるという問題があった。
【０００５】
また、ハウスダスト中のダニ駆除には一般的に殺ダニ剤が用いられるが、ハウスダスト中のコナヒョウヒダニ Dermatophagoides farinae (Hughes) や ヤケヒョウヒダニ Dermatophagoides pteronyssinus(Trouessart) 等は、死んだ後もアレルゲン性を有し、虫体が分解するに従い、徐々に微粒子のアレルゲンを放出するため、ダニを殺しただけではアレルゲンを不活化したことにはならない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、このような課題を解決するため、鋭意研究の結果、ジルコニウム塩を含有する組成物が、着色を起こすことなく、アレルゲン不活化効果を有すること及びこの組成物を環境中に処理することにより、環境中のアレルゲンを安定的に不活化し得る方法を見いだし、本発明に至った。すなわち、本発明は、ジルコニウム塩を含有する抗アレルゲン組成物及びこれを環境に散布し、アレルゲンを不活化するアレルゲン不活化方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の抗アレルゲン組成物におけるジルコニウム塩含有量は０．０１〜５０重量％であり、より好ましくは０．５〜２．５重量％である。ジルコニウム塩の含有量が０．０１重量％未満の場合には、アレルゲンの不活化効果が弱く、５０重量％を越えると製剤化が困難となる。本発明に用いるジルコニウム塩としては、塩基性塩化ジルコニル、オキシ塩化ジルコニウム、四塩化ジルコニウム、臭化ジルコニウム等のハロゲン化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、塩基性硫酸ジルコニウム等の鉱酸のジルコニウム塩、酢酸ジルコニル、ギ酸ジルコニル等の有機酸のジルコニウム塩、硫酸ジルコニウムナトリウム、酢酸ジルコニウムアンモニウム、シュウ酸ジルコニウムナトリウム、クエン酸ジルコニウムアンモニウム等のジルコニウム錯塩が挙げられるが、水溶性のものが扱いやすく、特に、塩基性塩化ジルコニルが好ましい。本発明の抗アレルゲン組成物の主剤としては、有効成分であるジルコニウム塩類を溶解するに適当な溶剤が単独、もしくは混合溶媒として使用され、例としては水、アルコール類、および水―アルコール類混合溶媒を例示出来る。上記条件から、本発明の抗アレルゲン組成物は、エタノール ２０〜４０重量％、水 ５０〜７０重量％、ベンジルアルコール ５〜２０重量％からなる溶媒中に、ジルコニウム塩を０．０１〜５０重量％を含有する組成物が特に好ましい。本発明の抗アレルゲン剤組成物の使用形態としては、水性溶液、スプレー、エアゾール等、都合の良い形にできるが、一般には、水性溶液が好ましい。
【０００８】
本発明の環境としては、カーペット、畳、床面、床カバー、布団などの寝具類、ソファー、ぬいぐるみ、衣類、カーテンなど直接人と接触するもの、あるいはタンス、押し入れなどの直接人と接触するものを収納している場所の空間、あるいは家屋内の居住空間などが挙げられる。
【０００９】
本発明の抗アレルゲン組成物は、一般には、アレルゲンで汚染された環境に対して直接散布してアレルゲンを不活化するが、本組成物による着色はない。また、アレルゲンで汚染された寝具類等には、洗濯時ののりづけのように直接処理する方法も効果的である。さらに、直接処理した綿布や不織布などを寝具類の上に敷く方法も効果的である。ダニによる汚染度の高いものは、抗アレルゲン組成物を処理する前に、殺ダニ剤を処理したり、丸洗いや電気掃除機による吸引などをするのが望ましい。
【００１０】
本発明の使用により、ハウスダスト中のダニアレルゲン、イヌやネコなどのペットの毛や上皮、ゴキブリ、羽毛、カビ、及び植物アレルゲン（例えば、スギ、ヒノキ、ブタクサ、オオアワガエリ、ケヤキ、ヨモギ、ハルガヤ等の花粉）をほぼ完全に不活化することができ、大部分のアレルゲンを実質的に減少させる事が出来る。よって本発明は、環境中のアレルゲンがハウスダスト中のダニアレルゲンや動物・植物アレルゲンの場合に特に効果的に作用するものである。
【００１１】
【実施例】
本発明を製剤例、実施例により更に詳しく説明するが、本発明がこれらによって限定されることはない。
【００１２】
【抗アレルゲン組成物製剤例１〜４】
表１に示す組成のものを、充分攪拌することにより、均一な溶液を得た。なお、塩基性塩化ジルコニルとしては、ニューテックス株式会社製のジルコゾールＺＣ−２｛塩基性塩化ジルコニルを４６重量％（酸化ジルコニウムとして３５重量％）含有、比重（２５℃）１．６５｝を酢酸ジルコニルとしては、ニューテックス株式会社製の酢酸ジルコニール｛酢酸ジルコニルを２７重量％（酸化ジルコニウムとして１５重量％）含有、比重（２５℃）１．２０｝を使用した。
【表１】
抗アレルゲン組成物製剤例
【００１３】
【実施例１】
ダニアレルゲン Ｄｅｒ ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定
標準ハウスダストに含まれるダニアレルゲン Ｄｅｒ ２ 約２０μｇ／５ｍＬ｛リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）｝に対し、ジルコゾールＺＣ−２を １００，５０，２５，５，２．５，０．５μＬを反応させた。一連の反応溶液における塩基性塩化ジルコニル濃度は、それぞれ１．５２，０．７６，０．３８，０．０７６，０．０３８，０．００７６重量％である。これら試料について Ｄｅｒｆ２ 酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）のサンドイッチ法にてダニアレルゲン不活化効果の測定を行った。まず、Ｄｅｒｆ２ モノクローナル抗体１３Ａ４（１０００ｎｇ／１μＬ）をリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、０．１重量％ＮａＮ３含有）で５００倍に希釈し、Ｆ１６ ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯ ＭＯＤＵＬＥプレート（ＮＵＮＣ社製）の１ウェルあたり １００μＬずつ添加し、４℃にて１日以上感作させた。感作後、液を捨て、ブロッキング試薬｛１重量％牛血清アルブミンＦ−Ｖ（ナカライテスク株式会社） ＋ リン酸緩衝液（ｐＨ７．２、０．１重量％ ＮａＮ３含有）｝を１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃、６０分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。次に、ダニアレルゲンと塩基性塩化ジルコニルとを反応させて得られた抽出液を１ウェルあたり１００μＬずつ滴下し、３７℃、６０分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識したＤｅｒｆ２モノクローナル抗体を蒸留水に溶解し、それをリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン 及び ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で１０倍希釈した液を、１ウェルあたり１００μＬずつ添加した。３７℃、６０分間反応させた後、先ずリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、 ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で、次いで蒸留水でプレートを洗浄した。０．１ｍｏｌ／Ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１５ｍＬに オルト−フェニレンジアミン ジヒドロクロライド（３０ｍｇ Ｔａｂｌｅｔ、ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯ．製）と過酸化水素水 １５μＬを加えたものを１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃、５分間反応させた。その後直ちに、２ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４を５０μＬずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．製）で吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ）を測定した。
結果を表２に示した。
【表２】
ダニアレルゲンＤｅｒ ２に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定結果
【００１４】
【実施例２】
スギ花粉 Ｃｒｙ ｊ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定
スギ花粉抽出物 Ｃｅｄｅｒ Ｐｏｌｌｅｎ Ｅｘｔｒｕｃｔ−Ｃｊ ５μｇ／５０μＬ｛炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）｝に対し、ジルコゾールＺＣ−２を０．４，０．６，０．８，１，１．２μＬずつ反応させ、これらをＬｉｎｂｒｏ／Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｅ．Ｉ．Ａ． Ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ プレート（ＩＣＮ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＩＮＣ．製）に感作させた｛４℃、一晩）。感作後、プレートをポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートをリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、０．１重量％ ＮａＮ３含有｝にて洗浄した。次に、スギ花粉抗体 Ａｎｔｉ−Ｃｒｙ ｊ２（Ｌｏｔ．７４７０３２）をリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン および ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で２００倍希釈し、１ウェルあたり５０μＬずつ添加し、３７℃、６０分で反応させた。反応終了後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、 ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識抗家兎 ＩｇＧ（γ鎖）マウスモノクローナル抗体ＨＲＰ−Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬＳ ＣＯ．、Ｌｏｔ．０９７Ｈ４８５２）をリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン および ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で５，０００倍に希釈し、１ウェルあたり５０μＬずつ添加し、３７℃、６０分で反応させた。反応終了後、先ずリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で、次いで蒸留水でプレートを洗浄した後、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１５ｍＬに、オルト−フェニレンジアミン ジヒドロクロライド（３０ｍｇ Ｔａｂｌｅｔｓ、ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯ．）と過酸化水素水１５μＬを加えたものを１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃で１５分間反応させた。その後直ちに、２ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４を５０μＬずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計で吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ）を測定した。
結果を表３に示した。
【表３】
スギ花粉 Ｃｒｙ ｊ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定結果
【００１５】
【実施例３】
抗アレルゲン組成物によるダニアレルゲンの不活化効果の測定
ダニアレルゲン約２６μｇを含む標準ハウスダスト（約０．０２ｇ）を、未使用のカーペット（５０ｃｍ×５０ｃｍ）にまんべんなく散布し、落ち着かせるために１時間程度放置した。その後、製剤例１の抗アレルゲン組成物約１２ｍＬをスプレーで散布し、室温にて完全に乾燥させた（約４時間放置）。パイプの連結部分にダストサンプラー（シントーファイン株式会社製）、ダストフィルター（シントーファイン株式会社製）、およびマイティフェルト（シントーファイン株式会社製）を装着した電気掃除機で１分間掃除機をかけ、カーペット上の標準ハウスダストを収集した。マイティフェルト、およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．０、１５重量％ 牛血清アルブミン含有）１０ｍＬをチャック付きポリ袋に入れてよく揉んでダニアレルゲンを抽出し、抽出液を遠心分離機にかけた後（１２，０００ｒｐｍ×６０ｍｉｎ）に上澄み液にてダニアレルゲン検査を行った。ダニアレルゲン検査には、屋内塵性ダニ簡易検査キットであるマイティチェッカー（シントーファイン株式会社製）を使用した。マイティチェッカーによるダニアレルゲン量の判定基準は表４の通りである。上記の操作の内、製剤例１を製剤例２に変更する以外は全て同じ操作を行い、製剤例２のダニアレルゲン不活化効果を測定した。また、製剤例１の散布を行わない以外は全て同じ操作を行い、対照とした。結果を表５に示す。製剤例１及び２は、どちらも対照と比較してダニアレルゲンレベルが低下しており、ダニアレルゲン不活化効果を示していた。
【表４】
マイティチェッカーによるダニアレルゲン量の判定基準
【表５】
製剤例１及び製剤例２によるダニアレルゲン不活化効果
【００１６】
【発明の効果】
本発明のジルコニウム塩を含有する抗アレルゲン組成物を環境中に処理することにより、アレルゲンを不活化することができた。
【発明の属する技術分野】
本発明は、環境中のアレルゲンを不活化するための抗アレルゲン組成物及びこれを用いたアレルゲン不活化方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
喘息やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患は、長年にわたり、多くの人が悩まされてきたものである。これらのアレルギー性疾患の原因物質（以下アレルゲンと示す）の代表的なものとしては、屋内に棲息するダニ、ペットの上皮や毛、花粉などがよく知られている。現在、アレルギー患者の治療には主に薬物療法が適用されている一方、原因物質であるアレルゲンを患者自身の生活環境から除去することも、患者をアレルゲンへの暴露から直接守るという合理的な手段である。このようなアレルゲン除去による症状改善は、日本の他、ヨーロッパやアメリカにおいても報告がなされている。
【０００３】
アレルゲン除去の方法としては、電気掃除機による吸引、空気清浄機による除去や寝具の高密度カバーの使用などがあげられる。しかしながら、電気掃除機による吸引だけでは除去できるアレルゲン量に限界があり、空気清浄機では空中に舞うアレルゲン除去しかできない。また、寝具の高密度カバーでは内側からのアレルゲン除去にはなるが外側からのアレルゲン除去にはならないなど、これらの方法は必ずしも満足できるものではなかった。
【０００４】
アレルゲンを化学的に不活化する方法としては、タンニン酸を用いた方法（特公平２−１６７３１）、茶抽出物、没食子酸等を用いた方法（特開平６−２７９２７３）が知られていた。しかしながら本方法では、処理を行った対象物に何らかの着色が認められるという問題があった。
【０００５】
また、ハウスダスト中のダニ駆除には一般的に殺ダニ剤が用いられるが、ハウスダスト中のコナヒョウヒダニ Dermatophagoides farinae (Hughes) や ヤケヒョウヒダニ Dermatophagoides pteronyssinus(Trouessart) 等は、死んだ後もアレルゲン性を有し、虫体が分解するに従い、徐々に微粒子のアレルゲンを放出するため、ダニを殺しただけではアレルゲンを不活化したことにはならない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、このような課題を解決するため、鋭意研究の結果、ジルコニウム塩を含有する組成物が、着色を起こすことなく、アレルゲン不活化効果を有すること及びこの組成物を環境中に処理することにより、環境中のアレルゲンを安定的に不活化し得る方法を見いだし、本発明に至った。すなわち、本発明は、ジルコニウム塩を含有する抗アレルゲン組成物及びこれを環境に散布し、アレルゲンを不活化するアレルゲン不活化方法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の抗アレルゲン組成物におけるジルコニウム塩含有量は０．０１〜５０重量％であり、より好ましくは０．５〜２．５重量％である。ジルコニウム塩の含有量が０．０１重量％未満の場合には、アレルゲンの不活化効果が弱く、５０重量％を越えると製剤化が困難となる。本発明に用いるジルコニウム塩としては、塩基性塩化ジルコニル、オキシ塩化ジルコニウム、四塩化ジルコニウム、臭化ジルコニウム等のハロゲン化ジルコニウム、硫酸ジルコニウム、塩基性硫酸ジルコニウム等の鉱酸のジルコニウム塩、酢酸ジルコニル、ギ酸ジルコニル等の有機酸のジルコニウム塩、硫酸ジルコニウムナトリウム、酢酸ジルコニウムアンモニウム、シュウ酸ジルコニウムナトリウム、クエン酸ジルコニウムアンモニウム等のジルコニウム錯塩が挙げられるが、水溶性のものが扱いやすく、特に、塩基性塩化ジルコニルが好ましい。本発明の抗アレルゲン組成物の主剤としては、有効成分であるジルコニウム塩類を溶解するに適当な溶剤が単独、もしくは混合溶媒として使用され、例としては水、アルコール類、および水―アルコール類混合溶媒を例示出来る。上記条件から、本発明の抗アレルゲン組成物は、エタノール ２０〜４０重量％、水 ５０〜７０重量％、ベンジルアルコール ５〜２０重量％からなる溶媒中に、ジルコニウム塩を０．０１〜５０重量％を含有する組成物が特に好ましい。本発明の抗アレルゲン剤組成物の使用形態としては、水性溶液、スプレー、エアゾール等、都合の良い形にできるが、一般には、水性溶液が好ましい。
【０００８】
本発明の環境としては、カーペット、畳、床面、床カバー、布団などの寝具類、ソファー、ぬいぐるみ、衣類、カーテンなど直接人と接触するもの、あるいはタンス、押し入れなどの直接人と接触するものを収納している場所の空間、あるいは家屋内の居住空間などが挙げられる。
【０００９】
本発明の抗アレルゲン組成物は、一般には、アレルゲンで汚染された環境に対して直接散布してアレルゲンを不活化するが、本組成物による着色はない。また、アレルゲンで汚染された寝具類等には、洗濯時ののりづけのように直接処理する方法も効果的である。さらに、直接処理した綿布や不織布などを寝具類の上に敷く方法も効果的である。ダニによる汚染度の高いものは、抗アレルゲン組成物を処理する前に、殺ダニ剤を処理したり、丸洗いや電気掃除機による吸引などをするのが望ましい。
【００１０】
本発明の使用により、ハウスダスト中のダニアレルゲン、イヌやネコなどのペットの毛や上皮、ゴキブリ、羽毛、カビ、及び植物アレルゲン（例えば、スギ、ヒノキ、ブタクサ、オオアワガエリ、ケヤキ、ヨモギ、ハルガヤ等の花粉）をほぼ完全に不活化することができ、大部分のアレルゲンを実質的に減少させる事が出来る。よって本発明は、環境中のアレルゲンがハウスダスト中のダニアレルゲンや動物・植物アレルゲンの場合に特に効果的に作用するものである。
【００１１】
【実施例】
本発明を製剤例、実施例により更に詳しく説明するが、本発明がこれらによって限定されることはない。
【００１２】
【抗アレルゲン組成物製剤例１〜４】
表１に示す組成のものを、充分攪拌することにより、均一な溶液を得た。なお、塩基性塩化ジルコニルとしては、ニューテックス株式会社製のジルコゾールＺＣ−２｛塩基性塩化ジルコニルを４６重量％（酸化ジルコニウムとして３５重量％）含有、比重（２５℃）１．６５｝を酢酸ジルコニルとしては、ニューテックス株式会社製の酢酸ジルコニール｛酢酸ジルコニルを２７重量％（酸化ジルコニウムとして１５重量％）含有、比重（２５℃）１．２０｝を使用した。
【表１】
抗アレルゲン組成物製剤例
【実施例１】
ダニアレルゲン Ｄｅｒ ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定
標準ハウスダストに含まれるダニアレルゲン Ｄｅｒ ２ 約２０μｇ／５ｍＬ｛リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）｝に対し、ジルコゾールＺＣ−２を １００，５０，２５，５，２．５，０．５μＬを反応させた。一連の反応溶液における塩基性塩化ジルコニル濃度は、それぞれ１．５２，０．７６，０．３８，０．０７６，０．０３８，０．００７６重量％である。これら試料について Ｄｅｒｆ２ 酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）のサンドイッチ法にてダニアレルゲン不活化効果の測定を行った。まず、Ｄｅｒｆ２ モノクローナル抗体１３Ａ４（１０００ｎｇ／１μＬ）をリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、０．１重量％ＮａＮ３含有）で５００倍に希釈し、Ｆ１６ ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯ ＭＯＤＵＬＥプレート（ＮＵＮＣ社製）の１ウェルあたり １００μＬずつ添加し、４℃にて１日以上感作させた。感作後、液を捨て、ブロッキング試薬｛１重量％牛血清アルブミンＦ−Ｖ（ナカライテスク株式会社） ＋ リン酸緩衝液（ｐＨ７．２、０．１重量％ ＮａＮ３含有）｝を１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃、６０分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。次に、ダニアレルゲンと塩基性塩化ジルコニルとを反応させて得られた抽出液を１ウェルあたり１００μＬずつ滴下し、３７℃、６０分間反応させた。反応後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識したＤｅｒｆ２モノクローナル抗体を蒸留水に溶解し、それをリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン 及び ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で１０倍希釈した液を、１ウェルあたり１００μＬずつ添加した。３７℃、６０分間反応させた後、先ずリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、 ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で、次いで蒸留水でプレートを洗浄した。０．１ｍｏｌ／Ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１５ｍＬに オルト−フェニレンジアミン ジヒドロクロライド（３０ｍｇ Ｔａｂｌｅｔ、ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯ．製）と過酸化水素水 １５μＬを加えたものを１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃、５分間反応させた。その後直ちに、２ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４を５０μＬずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．製）で吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ）を測定した。
結果を表２に示した。
【表２】
ダニアレルゲンＤｅｒ ２に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定結果
【実施例２】
スギ花粉 Ｃｒｙ ｊ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定
スギ花粉抽出物 Ｃｅｄｅｒ Ｐｏｌｌｅｎ Ｅｘｔｒｕｃｔ−Ｃｊ ５μｇ／５０μＬ｛炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）｝に対し、ジルコゾールＺＣ−２を０．４，０．６，０．８，１，１．２μＬずつ反応させ、これらをＬｉｎｂｒｏ／Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｅ．Ｉ．Ａ． Ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ プレート（ＩＣＮ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＩＮＣ．製）に感作させた｛４℃、一晩）。感作後、プレートをポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートをリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、０．１重量％ ＮａＮ３含有｝にて洗浄した。次に、スギ花粉抗体 Ａｎｔｉ−Ｃｒｙ ｊ２（Ｌｏｔ．７４７０３２）をリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン および ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で２００倍希釈し、１ウェルあたり５０μＬずつ添加し、３７℃、６０分で反応させた。反応終了後、リン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、 ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝にてプレートを洗浄した。ペルオキシダーゼ標識抗家兎 ＩｇＧ（γ鎖）マウスモノクローナル抗体ＨＲＰ−Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ（ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬＳ ＣＯ．、Ｌｏｔ．０９７Ｈ４８５２）をリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、１重量％ 牛血清アルブミン および ０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で５，０００倍に希釈し、１ウェルあたり５０μＬずつ添加し、３７℃、６０分で反応させた。反応終了後、先ずリン酸緩衝液｛ｐＨ７．２、０．１重量％ ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート含有｝で、次いで蒸留水でプレートを洗浄した後、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６．２）１５ｍＬに、オルト−フェニレンジアミン ジヒドロクロライド（３０ｍｇ Ｔａｂｌｅｔｓ、ＳＩＧＭＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯ．）と過酸化水素水１５μＬを加えたものを１ウェルあたり１００μＬずつ添加し、３７℃で１５分間反応させた。その後直ちに、２ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４を５０μＬずつ入れて反応を停止させ、マイクロプレート用分光光度計で吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ）を測定した。
結果を表３に示した。
【表３】
スギ花粉 Ｃｒｙ ｊ２ に対するジルコニウム塩の不活化効果の測定結果
【実施例３】
抗アレルゲン組成物によるダニアレルゲンの不活化効果の測定
ダニアレルゲン約２６μｇを含む標準ハウスダスト（約０．０２ｇ）を、未使用のカーペット（５０ｃｍ×５０ｃｍ）にまんべんなく散布し、落ち着かせるために１時間程度放置した。その後、製剤例１の抗アレルゲン組成物約１２ｍＬをスプレーで散布し、室温にて完全に乾燥させた（約４時間放置）。パイプの連結部分にダストサンプラー（シントーファイン株式会社製）、ダストフィルター（シントーファイン株式会社製）、およびマイティフェルト（シントーファイン株式会社製）を装着した電気掃除機で１分間掃除機をかけ、カーペット上の標準ハウスダストを収集した。マイティフェルト、およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．０、１５重量％ 牛血清アルブミン含有）１０ｍＬをチャック付きポリ袋に入れてよく揉んでダニアレルゲンを抽出し、抽出液を遠心分離機にかけた後（１２，０００ｒｐｍ×６０ｍｉｎ）に上澄み液にてダニアレルゲン検査を行った。ダニアレルゲン検査には、屋内塵性ダニ簡易検査キットであるマイティチェッカー（シントーファイン株式会社製）を使用した。マイティチェッカーによるダニアレルゲン量の判定基準は表４の通りである。上記の操作の内、製剤例１を製剤例２に変更する以外は全て同じ操作を行い、製剤例２のダニアレルゲン不活化効果を測定した。また、製剤例１の散布を行わない以外は全て同じ操作を行い、対照とした。結果を表５に示す。製剤例１及び２は、どちらも対照と比較してダニアレルゲンレベルが低下しており、ダニアレルゲン不活化効果を示していた。
【表４】
マイティチェッカーによるダニアレルゲン量の判定基準
製剤例１及び製剤例２によるダニアレルゲン不活化効果
【発明の効果】
本発明のジルコニウム塩を含有する抗アレルゲン組成物を環境中に処理することにより、アレルゲンを不活化することができた。
Claims (4)
- 水溶性ジルコニウム塩を含有することを特徴とする抗アレルゲン組成物。
- 水溶性ジルコニウム塩が塩基性塩化ジルコニルであることを特徴とする請求項１記載の抗アレルゲン組成物。
- 水溶性ジルコニウム塩０．０１〜５０．０重量％、アルコール類及び水を含有する請求項１または請求項２記載の抗アレルゲン組成物。
- 請求項１記載の抗アレルゲン組成物を環境中に散布し、環境中のアレルゲンを不活化する、アレルゲン不活化方法。
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