JP4382038B2 - 新規生理活性物質ｐｆ１２７０ａ、ｂおよびｃ物質 - Google Patents

Description

本発明は新規生理活性物質ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質またはそれらの塩、それらの製造法ならびにそれらを有効成分とする医薬組成物に関するものである。本発明の化合物はヒスタミンＨ_３受容体に対して高い結合親和性を示す。従って、本発明の化合物はヒスタミンＨ_３受容体に関連する疾病の治療あるいは予防に有用である。

ヒスタミンは、生体組織に広く分布している生体アミンの一つである。その薬理作用は細胞表面に存在するヒスタミン受容体を介して細胞内に伝達される。これまでにヒスタミン受容体として、ヒスタミンＨ_１、Ｈ_２およびＨ_３受容体が知られていた［ＡｓｈおよびＳｃｈｉｌｄ、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、２７巻、４２７−４３９頁、１９６６年、Ｂｌａｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ、２３６巻、３８５−３９０頁、１９７２年、Ａｒｒａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３０２巻、８３２−８３７頁、１９８３年］。また、近年になりＨ_４受容体の発見が報告され［Ｏｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２７５巻、３６７８１−３６７８６頁、２０００年］、現在もヒスタミン受容体およびそのリガンドに関して様々な研究が行われている。
このうち、ヒスタミンＨ_３受容体は自己受容体としてヒスタミンの合成や遊離を調節していることが明らかになっており［Ａｒｒａｇら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、１５巻、５３３−５６２頁、１９８５年、Ａｒｒａｇら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２３巻、１４９−１５７頁、１９８７年］、選択的アゴニストとして（Ｒ）−アルファ−メチルヒスタミン、アンタゴニストとしてチオペラミドが知られている［Ａｒｒａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３２７巻、１１７−１２３頁、１９８７年］。さらにヒスタミンＨ_３受容体は、脳内においてセロトニン、ノルアドレナリン、ドパミンなど様々な神経伝達物質の遊離をコントロールするヘテロ受容体としての機能を有していることが報告されている［Ｓｃｈｌｉｃｋｅｒら、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３３７巻、５８８−５９０頁、１９８８年、Ｓｃｈｌｉｃｋｅｒら、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３４０巻、６３３−６３８頁、１９８９年、Ｓｃｈｌｉｃｋｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ．、９３巻、１−１０頁、１９９３年］。また、ヒスタミンＨ_３受容体は心筋の虚血時などにおけるノルエピネフリンやカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の遊離にも関与していることが報告されている［Ｉｍａｍｕｒａら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、７８巻、４７５−４８１頁、１９９６年、Ｉｍａｍｕｒａら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、７８巻、８６３−８６９頁、１９９６年］。
これまでにヒスタミンＨ_３受容体リガンドとしていくつかの化合物が見出され、医薬への応用が試みられている。例えば、ヒスタミンＨ_３受容体アンタゴニストであるＧＴ−２３３１では、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）を適応症とする臨床試験が行われている［ＴｏｚｅｒおよびＫａｌｉｎｄｊｉａｎ、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、１０巻、１０４５−１０５５頁、２０００年］。また、ヒスタミンＨ_３受容体アゴニストであるＢＰ−２．９４は、喘息を適応疾患として臨床試験中である［Ｆｏｚａｒｄ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ、１巻、８６−８９頁、２０００年］。
この他に、特開平６−８７７４２号公報ではヒスタミンＨ_３受容体アンタゴニストが偏頭痛剤、催眠剤、麻酔剤、精神安定剤、鎮静剤、抗不安剤、抗喘息剤、抗気管支炎剤、皮膚または目の抗炎症剤または胃の抗潰瘍剤などとして利用できることが期待されると記載されている。また国際公開ＷＯ２００１６８６５号、国際公開ＷＯ９９０５１１５号、国際公開ＷＯ９９０５１４１号、国際公開ＷＯ９９０５１４１号などでは肥満、ＩＩ型糖尿病、てんかん、睡眠障害、うつ、アルツハイマー病などの治療薬としてヒスタミンＨ_３受容体リガンドが使用できる可能性があると記載されている。
これまでにヒスタミンＨ_３受容体リガンドを天然物から探索した例として、海綿から単離されたＶｅｒｏｎｇａｍｉｎｅが報告されている［Ｍｉｅｒｚｗａら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．、５７巻、１７５−１７７頁、１９９４年］。Ｖｅｒｏｎｇａｍｉｎｅも含め、従来のヒスタミンＨ_３受容体リガンドの多くはヒスタミンの母核であるイミダゾール骨格を有している。しかし、本願発明のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、イミダゾール骨格を有さない、新規なヒスタミンＨ_３受容体リガンドである。なお、本発明化合物と構造的に関連ある微生物産物としては、寄生虫病の治療および予防に有用なものとして報告されたＭａｒｃｆｏｒｔｉｎｅ Ａなどが知られている［Ｐｏｌｏｎｓｋｙら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、６０１−６０２頁、１９８０年、米国特許第４，８６６，０６０号］。しかしながら、本願発明の化合物は、これまで報告された既知の化合物とは構造が異なる新規物質である。
本発明の目的は、ヒスタミンＨ_３受容体が関与する各種疾病の治療あるいは予防に有用な新規ヒスタミンＨ_３受容体リガンドを提供することにある。

本発明者らは、上記の考えに基づき、より有効で且つ安全な新規ヒスタミンＨ_３受容体リガンドを見出すべく、微生物産物から新規化合物を探索した。そして本発明者らが土壌より新たに分離したＰＦ１２７０株と命名したペニシリウム属の一菌株（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗａｋｓｍａｎｉｉ ＰＦ１２７０）の培養物中にヒスタミンＨ_３受容体リガンドが生産、蓄積されることを見出した。さらにこれらの活性物質が下記の式（１）で表される化学構造を有することを見出し、新規な物質であることを確認して、本物質をＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質と命名した。これらの知見に基づいて、本発明を完成した。
すなわち、本発明は下記の新規生理活性物質ＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質またはそれらの薬理学的に許容される塩を提供するものである。
式（１）

［式中、Ｒは、メチル基、エチル基またはプロピル基を表す。］
で表される化合物または薬理学的に許容されるその塩。
式（２）

で表されるＰＦ１２７０Ａ物質または薬理学的に許容されるその塩。
式（３）

で表されるＰＦ１２７０Ｂ物質または薬理学的に許容されるその塩。
式（４）

で表されるＰＦ１２７０Ｃ物質または薬理学的に許容されるその塩。
また、本発明は、ペニシリウム属に属し、ＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質を生産する能力を有する菌を培養し、その培養物よりＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を採取することを特徴とするＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の製造法。
さらに、ＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質を生産する特性を有し、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６１０として寄託されたＰＦ１２７０株およびその変異株、およびＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質ならびにそれらの薬理学的に許容される塩の少なくとも１つを有効成分とする医薬組成物。

本発明の第１の要旨とするところは、式（２）で表され、下記の理化学的性状を有する新規ヒスタミンＨ_３受容体リガンド、ＰＦ１２７０Ａ物質にある。
１．ＰＦ１２７０Ａ物質の理化学的性状
（１）色および性状：黄白色粉末
（２）分子式：Ｃ_３２Ｈ_４３Ｎ_３Ｏ_６
（３）マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ）：実測値 ５６６．３２２４（Ｍ＋Ｈ）^＋
計算値 ５６６．３２３０
（４）融点：１７３〜１７５℃
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２５＝＋７５．０°（с１．０，ＣＨ_３ＣＮ）
（６）紫外線吸収スペクトル［λ_ｍａｘｎｍ（ε）］：
ＣＨ_３ＣＮ溶液 ２０２（２５２００），２２８（１８８００），２４６（２４６００），３３４（９０３０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＨＣｌ溶液（１０：１）２０１（２４８００），２２７（１９０００），２４５（２４１００），３３０（８９７０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＮａＯＨ溶液（１０：１）２０４（２５９００），２２８（１８５００），２４６（２４０００），３３１（８８３０）
（７）赤外線吸収スペクトル［ν_ｍａｘｃｍ^−１（ＫＢｒ）］：
３３８４，２９３４，１７２１，１６７４，１６０１，１４４５，１３８１，１２５４，１１８４，１０９０，１０６９，７６４
（８）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：０．９８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２０（１Ｈ，ｍ），１．２６（３Ｈ，ｓ），１．５０（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ），１．６１（３Ｈ，ｓ），１．６７（１Ｈ，ｓｅｘｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．６７（１Ｈ，ｍ），１．８５（１Ｈ，ｍ），１．８５（１Ｈ，ｍ），１．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），２．００（１Ｈ，ｍ），２．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．３０（２Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝７．３，３．１Ｈｚ），２．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），２．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．７，２．９Ｈｚ），２．７９（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），３．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），３．０７（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．０５（１Ｈ，ｓ），５．１０（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），９．３５（１Ｈ，ｓ），９．６４（１Ｈ，ｂｒ ｓ）
（９）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：２０１．９，１９４．７，１８２．１，１７３．１，１４３．０，１３４．５，１３４．２，１２７．４，１２１．８，１１７．２，６８．０，６４．２，６２．７，６１．５（ｘ２），５８．７，５６．７，５３．９，５０．６，４７．０，４４．８，３７．８，３６．８，３５．５，３０．５，２９．２，２４．３，１８．６，１８．４，１７．９，１３．７，１３．２
（１０）溶解性：クロロホルム、メタノールに可溶、水に難溶。
本発明の第２の要旨とするところは、式（３）で表され、下記の理化学的性状を有する新規ヒスタミンＨ_３受容体リガンド、ＰＦ１２７０Ｂ物質にある。
２．ＰＦ１２７０Ｂ物質の理化学的性状
（１）色および性状：黄白色粉末
（２）分子式：Ｃ_３１Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_６
（３）マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ）：実測値 ５５２．３０７７（Ｍ＋Ｈ）^＋
計算値 ５５２．３０７３
（４）融点：１７６〜１７８℃
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２５＝＋８２．８°（ｃ１．０，ＣＨ_３ＣＮ）
（６）紫外線吸収スペクトル［λ_ｍａｘｎｍ（ε）］：
ＣＨ_３ＣＮ溶液 ２０１（２３８００），２２８（１７２００），２４６（２２４００），３３４（８１１０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＨＣｌ溶液（１０：１）２０１（２３８００），２２７（１７４００），２４５（２１８００），３３１（８０６０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＮａＯＨ溶液（１０：１）２０５（２６１００），２２８（１７１００），２４５（２１８００），３３１（８０１０）
（７）赤外線吸収スペクトル［ν_ｍａｘｃｍ^−１（ＫＢｒ）］：
３４１１，２９４２，１７２８，１６７３，１６０３，１４５０，１３８１，１２５５，１１８８，１０９２，１０６９，７６２
（８）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．１５（３Ｈ，ｓ），１．１５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．２１（１Ｈ，ｍ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．５０（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），１．６０（３Ｈ，ｓ），１．６６（１Ｈ，ｍ），１．８５（１Ｈ，ｍ），１．８５（１Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），１．９９（１Ｈ，ｍ），２．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．３４（２Ｈ，ｑｄ，Ｊ＝７．３，２．７Ｈｚ），２．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），２．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．７，３．４Ｈｚ），２．８１（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），３．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．０５（１Ｈ，ｓ），５．０８（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），９．３３（１Ｈ，ｓ），９．６５（１Ｈ，ｂｒ ｓ）
（９）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：２０１．９，１９４．７，１８２．１，１７３．９，１４３．０，１３４．５，１３４．２，１２７．４，１２１．８，１１７．２，６８．２，６４．２，６２．７，６１．５（ｘ２），５８．７，５６．７，５３．９，５０．５，４７．０，４４．８，３７．８，３５．４，３０．５，２９．２，２８．１，２４．３，１８．６，１７．９，１３．２，９．１
（１０）溶解性：クロロホルム、メタノールに可溶、水に難溶。
本発明の第３の要旨とするところは、式（４）で表され、下記の理化学的性状を有する新規ヒスタミンＨ_３受容体リガンド、ＰＦ１２７０Ｃ物質にある。
３．ＰＦ１２７０Ｃ物質の理化学的性状
（１）色および性状：黄白色粉末
（２）分子式：Ｃ_３０Ｈ_３９Ｎ_３Ｏ_６
（３）マススペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ）：実測値 ５３８．２９１７（Ｍ＋Ｈ）^＋
計算値 ５３８．２９１７
（４）融点：１８７〜１８９℃
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２５＝＋７９．６°（ｃ１．０，ＣＨ_３ＣＮ）
（６）紫外線吸収スペクトル［λ_ｍａｘｎｍ（ε）］：
ＣＨ_３ＣＮ溶液 １９９（２０７００），２２８（１３３００），２４７（１７７００），３３４（６３８０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＨＣｌ溶液（１０：１）１９９（２１６００），２２８（１３４００），２４５（１７２００），３３１（６３５０）
ＣＨ_３ＣＮ−１Ｎ ＮａＯＨ溶液（１０：１）２０３（２４４００），２２８（１３３００），２４６（１７３００），３３１（６３３０）
（７）赤外線吸収スペクトル［ν_ｍａｘｃｍ^−１（ＫＢｒ）］：
３３８２，２９６４，１７３２，１６７６，１６０５，１４５３，１３８１，１２５０，１１９０，１１０３，１０６９，７５８
（８）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：１．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．２１（１Ｈ，ｍ），１．２６（３Ｈ，ｓ），１．５０（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ），１．６１（３Ｈ，ｓ），１．６７（１Ｈ，ｍ），１．８８（１Ｈ，ｍ），１．８８（１Ｈ，ｍ），１．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），１．９８（１Ｈ，ｍ），２．０７（３Ｈ，ｓ），２．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），２．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．４，２．９Ｈｚ），２．８２（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），３．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．０５（１Ｈ，ｓ），５．０７（１Ｈ，ｓ），７．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），９．３４（１Ｈ，ｓ），９．６４（１Ｈ，ｂｒ ｓ）
（９）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
δ（ｐｐｍ）：２０１．９，１９４．７，１８２．１，１７０．６，１４３．０，１３４．５，１３４．３，１２７．４，１２１．８，１１７．２，６８．４，６４．２，６２．７，６１．５（ｘ２），５８．７，５６．７，５３．９，５０．５，４７．０，４４．７，３７．８，３５．３，３０．５，２９．２，２４．３，２１．５，１８．６，１７．９，１３．１
（１０）溶解性：クロロホルム、メタノールに可溶、水に難溶。
本発明化合物は、塩として存在することができ、そのような塩としては例えば塩酸、硫酸、硝酸、燐酸などの無機酸との塩あるいは酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸などの有機酸との塩などが挙げられる。
本発明の第４の要旨とするところは、ペニシリウム属に属して且つ前記の式（２）に示されるＰＦ１２７０Ａ物質、式（３）に示されるＰＦ１２７０Ｂ物質および式（４）に示されるＰＦ１２７０Ｃ物質を生産する菌を培養し、その培養物からＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を採取することを特徴とする、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の製造法である。
上記のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の生産菌としては、例えば本発明者らが新たに分離したＰＦ１２７０株が挙げられる。なお、本発明で用いられるＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の生産菌は、本明細書に記載の特定の微生物に限定されるものではなく、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を生産する能力を有している菌であればＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質生産菌としていずれを用いてもよい。使用できる微生物の好適な例としては、ＰＦ１２７０株、あるいはこれらの菌株の継代培養株、人工変異株ならびに自然変異株、遺伝子組換え株などが挙げられる。ＰＦ１２７０株の菌学的性状は以下の通りである。
４．ＰＦ１２７０株の菌学的性状
（１）各種培地上での性状
ツアペック酵母エキス寒天培地上での生育は良好で、２５℃、７日間で１８〜２６ｍｍのコロニーとなる。灰緑色、ビロード状、平坦、厚く密な菌糸層からなり、分生子を豊富に形成する。裏面は濃黄色となる。麦芽エキス寒天培地上での生育はやや抑制的で、２５℃、７日間で１７〜１９ｍｍのコロニーとなる。灰緑色、ビロード状、平坦、緩やかな菌糸層からなり、分生子を豊富に形成する。裏面は濃黄色となる。３７℃の培養ではどの培地でも生育しない。
（２）形態的性状
ペニシリは単輪生もしくは複輪生、フィアライドはアンプル型、６〜８ｘ１．５〜２μｍである。分生子は球形〜亜球形、２〜３μｍ、表面は滑面となる。
以上の菌学的性状より本菌株をＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗａｋｓｍａｎｉｉと同定した。同定のための参考文献としてＴｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｅｌｅｏｍｏｒｐｈｉｃ ｓｔａｔｅｓ Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｎｄ Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ（Ｊｏｈｎ Ｉ．Ｐｉｔｔ著、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社、Ｌｏｎｄｏｎ、１９７９年）を使用した。なお、本菌株は以下のように独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ ＢＰ−０８６１０として寄託されている。
▲１▼寄託機関：国際寄託機関、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター
住所： 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）
▲２▼寄託日： 原寄託日：２００３年２月２４日
移管請求日：２００４年２月３日（２００２年２月２４日に寄託されたＦＥＲＭ Ｐ−１９２２５号より移管）
▲３▼寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６１０
５．ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質生産菌の培養法
本発明の方法では、ペニシリウム属に属するＰＦ１２７０株を、通常の微生物が利用し得る栄養物を含有する培地で培養する。
栄養源としては、従来カビの培養に利用されている公知のものが使用できる。例えば、炭素源としては、グルコース、シュクロース、水飴、デキストリン、澱粉、グリセロール、糖蜜、動植物油などを使用し得る。また、窒素源としては、大豆粉、大豆粕、小麦胚芽、コーン・スティープ・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素などを使用し得る。その他必要に応じてナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸およびその他のイオンを生成することができる無機塩類を添加することは有効である。また、菌の発育を助け、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の生産を促進するような有機および無機物を適当に添加することができる。
培養法としては、好気的条件での培養法、特に静置培養法が最も適している。培養に適当な温度は２０〜３０℃であるが、多くの場合２５℃付近で培養する。ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の生産は、培地や培養条件によって異なるが、静置培養、振盪培養、ジャー（Ｊａｒ）培養のいずれにおいても、通常２〜２０日間でその蓄積が最高に達する。培養物中のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の蓄積が最高になった時に培養を停止し、培養物から目的物質を単離、精製する。
６．ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の精製法
本発明によって得られるＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、上記の理化学的性状を有するので、その性状に従って培養物から精製することが可能である。例えば、有機溶媒を用いて培養物よりＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を抽出した後、吸着剤を用いた吸脱着法、ゲル濾過剤を用いた分子分配法、適当な溶剤からの再結晶法などを用いて精製することが可能である。
例えば、活性成分を含む培養物を吸着剤ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２０（三菱化学社製）で処理して、活性成分を吸着させる。ついで、アセトン、水などの溶媒で溶出し、溶出液を減圧濃縮することで溶媒を留去し、水溶液とする。この水溶液を酢酸エチルにより抽出し、抽出液を減圧濃縮し、抽出物を少量のクロロホルム、メタノールなどの有機溶媒に溶解してシリカゲルカラムに付し、クロロホルム／メタノール、ヘキサン／酢酸エチルなどの溶媒系でカラムクロマトグラフィーを行う。その後、アセトニトリル／燐酸などの溶媒系で分取ＨＰＬＣを行い、さらにクロロホルム／メタノール、ヘキサン／酢酸エチルなどの溶媒系で分取薄層クロマトグラフィーを行うことにより、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を単離、精製することができる。さらに、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、メタノール、水などの溶剤を単一、もしくは適宜組み合わせて用いることで再結晶化することが可能である。
本発明のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、後記の試験例に示すようにヒスタミンＨ_３受容体リガンドであり、ヒトを含む動物に医薬として投与することが有用である。本発明の化合物であるＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、ヒスタミンＨ_３受容体に対して高い結合親和性を有することから、抗痴呆薬、抗ＡＤＨＤ（Ａｔｔｅｎｔｉｏｎ−Ｄｅｆｉｃｉｔ／Ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ、注意欠陥移動性障害）薬、抗てんかん薬、抗不安薬、抗統合性失調症薬、抗うつ薬、睡眠障害改善薬、鎮痛薬、偏頭痛治療薬、抗喘息薬、抗炎症薬、抗潰瘍薬、抗肥満薬、心筋梗塞予後改善薬、催眠剤、麻酔剤、ＩＩ型糖尿病治療薬等の治療剤あるいは予防剤として有用である。
本発明のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を医薬として投与する場合、種々の投与形態または使用形態に合わせて、常法に従い製剤化する。
経口投与のための製剤としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、舌下剤などが挙げられる。また非経口投与のための製剤としては、注射剤、経皮吸収剤、吸入剤、座剤などが挙げられる。製剤化に際しては、界面活性剤、賦形剤、安定化剤、湿潤剤、崩壊剤、溶解補助剤、等張剤、緩衝剤、着色剤、着香料などの医薬用添加剤を適宜使用する。
医薬としての投与量は、患者の年齢、体重、疾病の種類や程度、投与経路により異なるが、ヒトに経口投与する場合には、成人一人当たり一日に０．０２〜２００ｍｇ／ｋｇ、静脈内投与の場合には同じく０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内で投与する。

以下に本発明の実施例および試験例を示すが、本発明はこれに限定されるものではなく、ここに示さなかった変法あるいは修飾手段の全てを包括する。

１．ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質生産菌の培養
種培地として、でんぷん２．０％、ブドウ糖１．０％、ポリペプトン０．５％、小麦胚芽０．６％、酵母エキス０．３％、大豆粕０．２％および炭酸カルシウム０．２％の組成からなる培地（殺菌前ｐＨ７．０）を用いた。また、生産培地としては、充分吸水した米に大豆粕２．５％を添加した固形培地を用いた。
前記の種培地２０ｍＬを分注した１００ｍＬ容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し、これにＰＦ１２７０株（ＦＥＲＭ Ｐ−１９２２５）の斜面寒天培養の１白金耳を植菌後、２５℃で３日間振とう培養した。次いで、生産培地１００ｇを分注した５００ｍＬ容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し、これに上記種培養液を３ｍＬずつ植菌し、よく撹拌後、２５℃で１４日間静置培養した。得られた培養物１０ｋｇを６７％アセトン水２０Ｌで抽出し、抽出液を減圧濃縮してアセトンを留去した。
２．ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の精製
得られた水溶液６．５Ｌを１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７に調整後、吸着剤ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２０（三菱化学社製）のカラム（内径６０ｍｍ×２００ｍｍ）を通過させ、活性成分を吸着させた後、水３Ｌおよび５０％アセトン水３Ｌで洗浄後、アセトン３Ｌで活性成分を溶出した。そこに水３Ｌを加え、減圧濃縮によりアセトンを留去した水溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ９に調整後、酢酸エチル３Ｌで抽出した。酢酸エチル層を減圧濃縮して３．７ｇの粗抽出物を得た。得られた粗抽出物をメタノール５０ｍＬに溶解し、１８ｇのシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬社製）を加えた後、減圧下でメタノールを留去し、粗抽出物をシリカゲルに均一に吸着させた。これをグラスフィルター上のシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬社製）３７ｇに重層してヘキサン／酢酸エチル溶液（酢酸エチル濃度が１０、５０、７０、１００％をそれぞれ５００ｍＬ）で溶出し、活性成分を含む画分を集めて減圧濃縮し、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を含む残渣を１．２ｇ得た。
得られた残渣をメタノール２０ｍＬに溶解し、６．０ｇのシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬社製）を加えた後、減圧下でメタノールを留去し、粗抽出物をシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬社製）に均一に吸着させた。これをグラスフィルター上のシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬社製）１２ｇに重層し、ヘキサン／酢酸エチル溶液（酢酸エチル濃度が１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０％をそれぞれ３００ｍＬ）で溶出し、活性成分を含む画分を集めて減圧濃縮し、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を含む残渣１．０ｇを得た。
得られた残渣をクロロホルム／メタノール＝５０／１の溶液で充填したシリカゲルカラム（ワコーゲルＣ−３００、内径４０ｍｍ×１６０ｍｍ、和光純薬社製）に付し、クロロホルム／メタノール＝５０／１で溶出し、活性成分を含む画分を集めて減圧濃縮し、少量のメタノールを加えた。その際、ＰＦ１２７０Ａ物質を含むメタノール可溶分１５４．０ｍｇとＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を含む析出物１２８．０ｍｇを得た。
ＰＦ１２７０Ａ物質を含むメタノール可溶分を用い、ヘキサン／酢酸エチル（１：１０）溶液を展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィー（キーゼルゲル６０、０．５ｍｍ、メルク社製）を行い、黄白色粉末状のＰＦ１２７０Ａ物質７２．３ｍｇを得た。
ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を含む析出物を少量のアセトニトリルに溶解し、アセトニトリル／０．００５％燐酸＝２２／７８の溶液で充填したＨＰＬＣ（カラム：イナートシルＯＤＳ−２、内径２０ｍｍ×２５０ｍｍ、ジーエルサイエンス社製）に注入し、アセトニトリル／０．００５％燐酸＝２２／７８の溶液で溶出した。活性成分を含む画分を集めてアセトニトリルを減圧下留去し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ９に調整後、酢酸エチルで抽出し、減圧濃縮して黄白色粉末状のＰＦ１２７０Ａ物質７０．２ｍｇ、ＰＦ１２７０Ｂ物質を含む残渣２２．１ｍｇおよびＰＦ１２７０Ｃ物質を含む残渣１０．６ｍｇを得た。
ＰＦ１２７０Ｂ物質を含む残渣を用い、ヘキサン／酢酸エチル（１：５）溶液を展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィー（キーゼルゲル６０、０．５ｍｍ、メルク社製）を行い、黄白色粉末状のＰＦ１２７０Ｂ物質１７．０ｍｇを得た。
ＰＦ１２７０Ｃ物質を含む残渣を用い、ヘキサン／酢酸エチル（１：５）溶液を展開溶媒とする分取薄層クロマトグラフィー（キーゼルゲル６０、０．５ｍｍ、メルク社製）を行い、黄白色粉末状のＰＦ１２７０Ｃ物質６．０ｍｇを得た。
本発明により得られるＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質はヒスタミンＨ_３受容体に対し、親和性を有する。ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質のヒスタミンＨ_３受容体に対する親和性をヒスタミンＨ_３受容体リガンドであるＮ^α−メチルヒスタミンの結合阻害試験により調べた。
試験例 Ｎ ^α −メチルヒスタミン結合阻害活性
ラット前脳を１０倍量の０．３２Ｍシュクロース液中でテフロン−ガラスホモジナイザーを用いてホモジナイズし、得られたホモジネートを１０００ｘｇで１０分間遠心分離した。上清を３９０００ｘｇで２０分間遠心分離し、沈査を得た。この沈査をアッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス（ｐＨ７．４），５ｍＭ ＥＤＴＡ）にて遠心洗浄した。この操作をさらに２回行い、最終的に得られた膜画分をヒスタミンＨ_３受容体膜画分とした。
結合阻害実験は、得られた膜画分と放射性のリガンドである［^３Ｈ］Ｎ^α−メチルヒスタミン（パーキンエルマーライフサイエンス社製）を用いて行った。ＰＦ１２７０Ａ、ＢあるいはＣ物質存在下、アッセイ緩衝液１５０μＬ中に膜画分（タンパク量５５μｇ）と終濃度１ｎＭの［^３Ｈ］Ｎ^α−メチルヒスタミン（８２．０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を加えて、室温で６０分間インキュベーションした。０．３％ポリエチレンイミンでコートしたユニフィルターＧＦ／Ｂフィルター（パーキンエルマー社製）で濾過し、２００μＬのアッセイ緩衝液で３回洗浄した。５０℃で１時間乾燥後、シンチレーターとしてマイクロシンチ−２０（パーキンエルマー社製）を３０μＬを添加し、放射活性をトップカウント（パーキンエルマー社製）を用いて計測した。非特異的結合は、大過剰のチオペラミド（終濃度１０μＭ）を加えることにより決定した。ＰＦ１２７０Ａ、ＢあるいはＣ物質存在下でのＮ^α−メチルヒスタミンの結合阻害率は以下の式によって算出した。

上記の方法により、ＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質のＮ^α−メチルヒスタミン結合阻害率を測定し、５０％阻害する濃度（ＩＣ_５０）をＮ^α−メチルヒスタミン結合阻害活性とした結果を表１に示す。

本発明のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、表１に示したようにヒスタミンＨ_３受容体に対して強い親和性を有し、ヒスタミンＨ_３受容体リガンドであることが示された。
本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは当業者にとって明らかである。
本出願は、２００３年３月３１日出願の日本特許出願（特願２００３−０９３５９５）に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。

本発明のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質は、試験例に示したように、ヒスタミンＨ_３受容体親和性を有しており、これらを有効成分とする薬剤はヒスタミンＨ_３受容体が関与する各種疾病の治療あるいは予防に有用である。

Claims (7)

1. 式（１）
   

   

   ［式中、Ｒは、メチル基、エチル基またはプロピル基を表す。］
   で表される化合物または薬理学的に許容されるその塩。
2. 式（２）
   

   

   で表されるＰＦ１２７０Ａ物質または薬理学的に許容されるその塩。
3. 式（３）
   

   

   で表されるＰＦ１２７０Ｂ物質または薬理学的に許容されるその塩。
4. 式（４）
   

   

   で表されるＰＦ１２７０Ｃ物質または薬理学的に許容されるその塩。
5. ペニシリウム属に属するＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質を生産する能力を有する菌を培養し、その培養物よりＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質を採取することを特徴とする請求項１記載のＰＦ１２７０Ａ、ＢおよびＣ物質の製造法。
6. 請求項１記載のＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質を生産する特性を有し、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６１０として寄託されたペニシリウム属に属するＰＦ１２７０株およびその変異株。
7. 請求項１記載のＰＦ１２７０Ａ物質、ＰＦ１２７０Ｂ物質およびＰＦ１２７０Ｃ物質ならびにそれらの薬理学的に許容される塩の少なくとも１つを有効成分とする医薬組成物。