JP4201135B2 - 新規結晶性化合物 - Google Patents

Description

本発明は、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の新規結晶形及びその製造方法に関する。

３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルは、化学式Ｃ_１６Ｈ_２０Ｎ_６Ｏ及び以下の構造式：

を有する。

その合成は、同時係属中の米国特許出願第０９／７３２６３９号（２０００年１２月８日に出願）、及び米国仮特許出願第６０／２９４７７５号（２００１年５月３１日に出願）に記載されている。これらの出願は、共に、本発明の譲受人に譲受けられ、そしてそれら全体が参照として本明細書に含まれる。３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル及び対応するクエン酸塩は、プロテインキナーゼ、例えば、酵素ジャヌスキナーゼ（Janus Kinase）３〔以下、本明細書においてＪＡＫ３と称することもある〕のインヒビターとして有用であり、そして従って、臓器移植、異種移植、狼瘡、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、乾癬、１型糖尿病及び糖尿病由来の合併症、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病、白血病、及び免疫抑制が望ましいその他の徴候に対する免疫抑制剤として有用な治療である。

３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の結晶形は、錠剤の開発のサポートを受け入れることのできる固体特性を有していることが決定された。

本発明も、結晶性３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の製造方法に関する。

《発明の概要》
本発明は、ヒトを含む哺乳類において、（ａ）臓器移植の拒絶反応、異種移植、狼瘡、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、乾癬、１型糖尿病及び糖尿病由来の合併症、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病、白血病、及びその他の自己免疫障害から選択された障害若しくは状態の治療若しくは予防、又は（ｂ）プロテインキナーゼ若しくはジャヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の阻害に有効である、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の新規結晶形に関する。前記新規結晶形は、温度約２０３℃〜約２１０℃で融解し、図１に示すように、２シータ（２θ）度が５．７，１６．１，２０．２，及び２０．５において特徴的なピークを有するＸ線回折パターンを示す。Ｘ線パワー回折パターン理論の議論は、Ｓｔｏｕｔ及びＪｅｎｓｅｎ，Ｘ−Ｒａｙ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ， ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｃｏ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８６）に見出すことができ、これは、それ全体が参照として本明細書に含まれる。

本発明は、図２に示すように、温度約２０３℃から約２１０℃の間に特徴的なピークを有し、１分間あたり５℃の走査速度で温度約１９９℃から約２０６℃に開始点を有する示差走査熱量サーモグラムを有する３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の結晶形にも関する。

本発明は、また、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の非晶（アモルファス）形にも関する。

本発明は、また、ヒトを含む哺乳類における（ａ）臓器移植の拒絶反応、異種移植、狼瘡、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、乾癬、１型糖尿病及び糖尿病由来の合併症、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病、白血病、及びその他の自己免疫障害から選ばれた障害若しくは状態の治療用若しくは予防用、又は（ｂ）プロテインキナーゼ若しくはジャヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の阻害用の、前記障害又は状態に有効な量の式１で表される化合物、及び薬剤学的に許容することのできる担体を含む、医薬組成物にも関する。

本発明は、また、ヒトを含む哺乳類に、有効量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む、前記哺乳類におけるプロテインチロシンキナーゼ又はジャヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の阻害方法にも関する。

本発明は、ヒトを含む哺乳類における臓器移植の拒絶反応、異種移植、狼瘡、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、乾癬、１型糖尿病及び糖尿病由来の合併症、ガン、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺障害、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病、白血病、及びその他の自己免疫障害から選ばれた障害又は状態の治療又は予防方法であって、前記哺乳類の前記状態の治療に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む方法にも関する。

本発明は、また３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルとクエン酸とを反応させることを含む、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の製造方法にも関する。

《図面の簡単な説明》
図１は、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の特徴的なＸ線粉末回折パターンである〔垂直軸：強度（計数）；水平軸：２θ（度）〕。
図２は、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の特徴的な示差走査熱量温度記録図である〔走査速度：１分間あたり５℃；垂直軸：熱流量（ｗ／ｇ）；水平軸：温度（℃）〕。
《発明の詳細な説明》

本発明の３−｛４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩化合物の結晶形は、以下の方法で調製する。

《反応工程式１》

《反応工程式２》

反応工程式１の反応１は、式IIIで表される（３Ｒ，４Ｒ）−メチル−（４−メチル−ピペリジン−３−イル）−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミン化合物を、塩基（例えば、トリエチルアミン）存在下でシアノ酢酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステルと反応させることによって、相当する式IIで表される３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル化合物に変換する。この反応混合物を、室温で、約１５分間〜約２時間、好ましくは約３０分間に亘って攪拌する。

反応工程式１の反応２は、式IIで表される３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル化合物を、水性クエン酸と反応させることによって、相当する式Iで表される３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩化合物に変換する。

反応工程式２の反応１は、式IVで表される（（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチル−ピペリジン−３−イル）−メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミン化合物を、カーボン上の水酸化パラジウム２０％（水５０重量％）、及び極性プロトン性溶媒（例えば、エタノール）の存在下で水素によって処理することにより、相当する式IIIで表される（３Ｒ，４Ｒ）−メチル−（４−メチル−ピペリジン−３−イル）−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミン化合物に変換する。この反応混合物を、温度約４５℃から約７５℃の間、好ましくは約６０℃で、圧力約６０ｐｓｉ下、好ましくは約５０ｐｓｉ下で、約２日間から約４日間の間、好ましくは約３日間に亘って攪拌する。

反応工程式２の反応２は、式IIIで表される（３Ｒ，４Ｒ）−メチル−（４−メチル−ピペリジン−３−イル）−（７Ｈ−ピロロ〔２，３ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミン化合物を、極性プロトン性溶媒（例えば、エタノール）存在下でシアン酢酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステルと反応させることによって、相当する式IIで表される３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル化合物に変換する。この反応混合物を、室温で約３０分間から約３時間の間、好ましくは約１時間に亘って攪拌する。

反応工程式２の反応３は、式IIで表される３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル化合物を、極性プロトン性溶媒（例えば、アセトン）存在下でクエン酸と反応させることによって、相当する式Iで表される３｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミノ〕ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩化合物に変換する。この反応混合物を、温度約３０℃から約５０℃の間、好ましくは約４０℃にて、約１時間から約３時間の間、好ましくは約２時間に亘って攪拌する。こうして得られた反応混合物を、場合により更に温度約２０℃から約４０℃の間、好ましくは約３０℃で、約３時間から約５時間の間、好ましくは約４時間に亘って攪拌し、その後で更に室温で約１６時間から約２０時間の間、好ましくは約１８時間攪拌することができる。

本発明の組成物は、１つ以上の薬剤学的に許容することができる担体を用いる従来方法によって製剤化することができる。

経口投与用として、医薬組成物は、薬剤学的に許容することのできる賦形剤、例えば、結合剤（例えば、前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロース、又はリン酸カルシウム）；滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）と共に従来の手段によって調製した錠剤の形状とすることができる。前記錠剤は、当業者に周知の方法でコーティングすることができる。

前記状態（例えば、リウマチ様関節炎）の治療用で、平均的な成人に対して経口、非経口、又は経頬投与用の本発明の活性化合物の予定の用量は、例えば１日に１回〜４回投与することが可能な、用量単位あたりの活性成分が０．１〜１０００ｍｇである。

式Iで表される化合物は、それ単独で、又は哺乳類免疫システムを調節する追加的な剤１つ以上、若しくは抗炎症剤との組み合わせのどちらかで、薬剤学的に許容することのできる形状で投与される。前記の剤としては、限定はされないが、シクロスポリンＡ〔例えば、サンディミュン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ：商標）又はネオーラル（Ｎｅｏｒａｌ：商標）、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、ＦＫ−５０６〔タクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）〕、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、デオキシスパーグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、ミコフェノレート（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ）〔例えば、セルセプト（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ：商標）、アザチオプリン〔例えば、イムラン（Ｉｍｕｒａｎ：商標）〕、ダシリツマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）〔例えば、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ：商標）〕、ＯＫＴ３〔例えば、オルトコロン（Ｏｒｔｈｏｃｏｌｏｎｅ：商標）〕、ＡｔＧａｍ、アスピリン、アクタミノフェン（ａｃｃｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、及び抗炎症のステロイド〔例えば、プレドニソロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）又はデキサメタソン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）〕を挙げることができ、そして前記剤は、同一又は分離した投薬形態の一部として、同一又は異なる投与経路を経て、及び標準的な薬剤学的プラクティスに従う同じ又は異なる投与計画によって投与することができる。

ＦＫ５０６（タクロリムス）は、経口的に０．１０〜０．１５ｍｇ／ｋｇ体重で、１２時間毎に、手術後最初の４８時間以内に与えられる。用量は、血清タクロリムスのトラフ（ｔｒｏｕｇｈ）レベルによって監視される。

シクロスポリンＡ（サンディミュン経口又は静注の製剤、又はネオーラル、経口溶液又はカプセル）は、５ｍｇ／ｋｇ体重で、手術後最初の４８時間以内から１２時間毎に経口的に与える。用量は、血液シクロスポリンＡのトラフ（ｔｒｏｕｇｈ）レベルによって監視される。

活性剤は、当業者に周知の方法により、徐放性デリバリー用に製剤化することができる。前記製剤化の例は、米国特許第３５３８２１４号、米国特許第４０６０５９８号、米国特許第４１７３６２６号、米国特許第３１１９７４２号、及び米国特許第３４９２３９７号に見出すことができる。

ジャヌスキナーゼ３を阻害し、そして従って、ジャヌスキナーゼ３によって特徴付けられる障害又は状態の治療の効果を示す、式Iで表される化合物の能力は、以下のインビトロアッセイテストによって示される。

《生物学的アッセイ》
〈ＪＡＫ３（ＪＨ１：ＧＳＴ）酵素アッセイ〉
ＪＡＫ３キナーゼアッセイは、グルタチオンセパハロース上のアフィニティクロマトグラフィーによって精製された、バキュロウイルス感染ＳＦ９細胞中に発現されたタンパク質（ＧＳＴとヒトＪＡＫ３の触媒性ドメインとの融合タンパク質）を利用する。反応用の基質は、ポリグルタミン酸−チロシン〔ＰＧＴ（４：１）、シグマカタログ＃Ｐ０２７５〕であり、ヌンク・マキシィー・ソープ（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉ Ｓｏｒｐ）プレートに、１００μｇ／ｍＬで３７℃で一晩かけてコートした。コーティングした次の日の朝、前記プレートを３回洗い、そしてキナーゼ緩衝液１００μＬ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．３，１２５ｍＭ ＮａＣｌ，２４ｍＭ ＭｇＣｌ_２）＋０．２ｕＭ ＡＴＰ＋１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム）を含むウエルにＪＡＫ３を加える。反応を３０分間、室温で進行させ、そして前記プレートを更に３回洗う。与えられた或るウエル中のリン酸化されたチロシンのレベルは、抗ホスホチロシン抗体（ＩＣＮ ＰＹ２０，ｃａｔ．＃６９−１５１−１）を利用する標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって定量することができる。

〈ヒトＩＬ−２依存性Ｔ−細胞芽細胞増殖の阻害〉
このスクリーンでは、インビトロで、ＩＬ−２依存性Ｔ−細胞芽細胞（ｂｌａｓｔ）増殖に対する化合物の阻害効果を測定する。ＩＬ−２レセプターを通過するシグナルがＪＡＫ−３を必要とするので、ＪＡＫ−３の細胞活性阻害剤がＩＬ−２依存性Ｔ−細胞芽細胞増殖を阻害するはずである。

このアッセイ用の前記細胞は、新鮮なヒトの血液から単離する。Ａｃｃｕｓｐｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ−Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（シグマ＃Ａ７０５４）を用いて、単核細胞を分離した後、Ｌｙｍｐｈｏ−Ｋｗｉｔ Ｔ（Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ＃ＬＫ−５０Ｔ）を用いるネガティブ選択によって１次ヒトＴ−細胞を単離する。Ｔ−細胞を、メディア（Ｍｅｄｉａ）〔ＲＰＭＩ＋１０％加熱不活性化した子牛胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｃａｔ＃Ａ−１１１１−Ｌ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ギブコ）〕中で１〜２×１０^６／ｍＬにて培養し、そしてＰＨＡ（Ｍｕｒｅｘ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｃａｔ＃ＨＡ１６）１０μｇ／ｍＬを添加することによって、増殖を誘発させる。３７℃にて、５％ＣＯ_２中で３日間経過させた後、細胞をメディア（Ｍｅｄｉａ）中で３回洗い、ヒト組換えＩＬ−２（Ｒ＆Ｄシステム，Ｃａｔ＃２０２−ＩＬ）１００単位／ｍＬを加えたメディア（Ｍｅｄｉａ）中で、濃度１〜２×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように再懸濁する。１週間後、前記細胞はＩＬ−２依存性であり、ＩＬ−２（１００単位／ｍＬ）を追加したメディア（Ｍｅｄｉａ）を同容積で１週間に２回供給することによって３週間まで維持することができる。

ＩＬ−２依存性Ｔ−細胞芽細胞増殖を阻害するテスト化合物のアッセイを行うために、ＩＬ−２依存性細胞を３回洗い、培地に再懸濁して、そして平底９６−ウエルマイクロタイタープレート（ファルコン＃３５３０７５）に塗布する（５００００ｃｅｌｌｓ／ウエル／０．１ｍＬ）。ＤＭＳＯ中のストックテスト化合物１０ｍＭから、化合物の連続的２倍希釈液を３重のウエルに加えて、１０ｕＭで開始する。１時間後、ＩＬ−２（１０単位／ｍＬ）を各々のテストウエルに加える。次に、プレートを３７℃にて５％ＣＯ_２中で７２時間インキュベートする。次に、プレートを^３Ｈ−チミジン（０．５ｕＣｉ／ウエル）（ＮＥＮ Ｃａｔ＃ＮＥＴ−０２７Ａ）によってパルス化し、更に１８時間インキュベートする。次に、９６−ウエルプレートハーベスタによって培養プレートを集菌し、増殖細胞中に取り込まれた^３Ｈ−チミジン量をパッカード・トップ・カウント・シンチエーションカウンターによる計数によって決定する。テスト化合物の濃度に対する増殖阻害％をプロッティングにすることによってデータを分析する。ＩＣ_５０値（ｕＭ）は、このプロットから決定される。

以下の実施例は、本発明の化合物の調製を説明するものであるが、その詳細な内容に限定されるものではない。融点は補正されていない。ＮＭＲデータは、１００万分の１（δ）で報告され、そしてサンプル溶媒（特に断らない限り、ジュウテリウムクロロホルム）のジュウテリウム・ロック・シグナルを基準とする。

《実施例１》 ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩
エタノール（１３Ｌ）、（３Ｒ，４Ｒ）−メチル−（４−メチル−ピペリジン−３−イル）−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミン（１．３ｋｇ）、シアノ酢酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエーテル（１．５ｋｇ）、及びトリエチルアミン（１．５Ｌ）を一緒にし、そして周囲温度で攪拌した。反応の完了〔高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析で決定；約３０分間〕に際し、その溶液を濾過し、濃縮し、メチレンクロライド１５Ｌと共に共沸した。前記反応混合物を、０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶液１２Ｌ、塩水１２Ｌ、及び水１２Ｌによって順に洗った。その有機層を濃縮し、アセトン３Ｌと共に共沸した（最終容器温度は４２℃であった）。得られた溶液を２０℃〜２５℃に冷却し、その後にアセトン１０Ｌを添加した。この溶液を濾過し、それから水性クエン酸（水４Ｌ中０．８ｋｇ）をイン・ライン・フィルターを経て加えた。前記反応混合物を放置して粒状体とした。そのスラリーを、冷却してから濾過によって固体を集めた。前記固体を乾燥し、（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノサイトレート１．９ｋｇ（７１％）を得た。次に、その材料をエタノール／水（比率１：１）１５Ｌと一緒にし、そしてそのスラリーを一晩攪拌した。その固体を濾過し、乾燥して、標記の化合物１．７ｋｇ〔（３Ｒ，４Ｒ）−メチル−（４−メチル−ピペリジン−３−イル）−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）アミンから６３％〕を白色結晶固体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨＺ）（Ｄ_２Ｏ）δＨＯＤ：０．９２（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．９６（１Ｈ，ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．６６（１Ｈ，ｍ），１．８０（１Ｈ，ｍ），２．３７（１Ｈ，ｍ），２．５８（２Ｈ，１／２ＡＢｑ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），２．７０（２Ｈ，１／２ＡＢｑ，Ｊ＝１５４Ｈｚ），３．２３（２Ｈ，ｓ），３．２５（１Ｈ，ｓ），３．３３（１Ｈ，ｍ），３．４６（１Ｈ，ｍ），３．８１（４Ｈ，ｍ），４．５５（１Ｈ，ｍ），６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），８．０９（１Ｈ，ｍ）。

《実施例２》 ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩
エタノール２Ｌ中に（（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチル−ピペリジン−３−イル）−メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミン７９ｇを溶解した溶液に、カーボン上の２０％水酸化パラジウム７９ｇ（水５０重量％）を添加し、そしてその混合物を水素５０ｐｓｉの圧力雰囲気下で３日間攪拌した（高められた温度〔５０℃〜７０℃〕における水添分解の実施は、反応時間を有意に減少する）。セライト（商標）を通す濾過によって触媒を除去した後、シアノ酢酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル５１ｇをエタノール溶液に加え、そして得られた混合物を室温で１時間攪拌し、その時点で減圧下で前記エタノールを除去した。その残渣を、ジクロロメタン１．０Ｌに再び溶解し、そして飽和水性炭酸水素ナトリウム０．６Ｌ及び飽和炭酸水素ナトリウム０．４Ｌで順に洗った。その一緒にした水性層をジクロロメタン０．４Ｌでバック・ウォッシングし、ジクロロメタン層を一緒にし、硫酸マグネシウムで乾燥して、濾過して、そして真空で濃縮して、琥珀色のオイル６１ｇを得た。次に、この材料をアセトン２．１Ｌ中に再び溶解し、そしてその溶液を４０℃に加熱した。細かく粉砕されたクエン酸３７ｇを溶液に（固体として）ゆっくり加えた。その混合物を４０℃で２時間、継続して攪拌した（顆粒化が完了した）。室温に冷却した後、固体を濾過によって集め、アセトンで洗い、そして真空で乾燥して、標記の化合物７８．５ｇ〔（（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチル−ピペリジン−３−イル）−メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミンから６６％〕を僅かに灰白色の結晶固体として得た。

《実施例３》 ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩
アセトン２３ｍＬ中に溶解した（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリル（２３０ｍｇ／０．７４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を４０℃に加熱した。前記溶液に、細かく粉砕したクエン酸１５５ｍｇ（０．８１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を４０℃で２時間、そして、３０℃で４時間攪拌し、続いて室温で更に１８時間攪拌した。この時点で、濾過によって固体を集めて、アセトンで洗い、そして真空で乾燥して、標記の化合物２８０ｍｇ（７５％）を白色結晶固体として得た。

《実施例４》３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の粉末Ｘ線回折の収集方法
銅輻射、固定したスリット（１．０，１．０，０．６ｍｍ）、及びケベックス（Ｋｅｖｅｘ）固体状態検出器を備えたブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）Ｄ５０００回折計（マジソン，ウィスコンシン）を用いて、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の粉末Ｘ線回折パターンを収集した。データを以下の通り収集した：銅アノード；波長１：１．５４０５６；波長２：１．５４４３９（相対強度：０．５００）；ステップサイズ０．０４°及びステップタイム１．０秒用い、２θで３．０°〜４０．０°。その結果を表１に要約する。

図１は、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の特徴的なＸ線粉末回折パターンである〔垂直軸：強度（計数）；水平軸：２θ（度）〕。 図２は、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の特徴的な示差走査熱量温度記録図である〔走査速度：１分間あたり５℃；垂直軸：熱流量（ｗ／ｇ）；水平軸：温度（℃）〕。

Claims (7)

1. ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の結晶。
2. 角度２θで表される特徴ピークを５．７±０．２、１６．１±０．２、２０．２±０．２、及び２０．５±０．２に有するＸ線粉末回折パターンを含む、請求項１に記載の３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の結晶。
3. 角度２θで表される特徴ピークを、
   に有する、粉末回折パターンを含む、請求項２に記載の結晶。
4. １９９℃から２０６℃の間に開始融解温度を有する、請求項１に記載の３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の結晶。
5. ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の非晶形。
6. ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルとクエン酸とを反応させることを含む、３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩の製造方法。
7. ３−｛（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−〔メチル−（７Ｈ−ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン−４−イル）−アミノ〕−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルモノクエン酸塩。