JP4099068B2 - 皮膚の治療 - Google Patents
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Description
反応物を94℃まで5分間加熱する;
1/50に希釈したElongase反応ミックスを加える(高温開始);
プログラムを開始する:
94℃で5分を1サイクル;
94℃で30秒
57℃で30秒
68℃で12分
から成る処理を35サイクル;
4℃で浸漬する。
方法
QIAamp DNA Blood Midi Kit(Qiagen)を使用してDNAを単離し、方法をSchie and Wilson(1997,Journal of Immunological Methods,208,91−101)によって記載されたように唾液サンプルに合うように設計した。5mlの唾液を5mlのPBS(Sigma)で希釈し、3000gで5分間遠心した。上清を廃棄し、ペレットを10mlのPBSに再懸濁させた。再懸濁ペレットを3000gで5分間遠心し、上清を廃棄し、ペレットを750μlのPBSに再懸濁させた。1mlのキット溶解バッファと100μlのキットプロテアーゼとをキットプロトコルに従って添加した。5μlのRNアーゼ(7単位/μl)を添加し、次いで掻き混ぜて70℃で20分間インキュベートした。1mlの無水エタノールを添加し、キットプロトコルに従ってDNAを精製した。最終調製物を300μlのキット溶出バッファに溶出させ、溶出液をカラムで1回再処理して調製物を濃縮した。溶出液をアリコートに分けて−20℃で保存した。
反応物を94℃まで5分間加熱する;
1/50の希釈度のElongase反応ミックスを加える(高温開始);
以下のプログラムを開始する:
94℃で5分間を1サイクル;
94℃で30秒
57℃で30秒
68℃で12分から成るサイクルを35サイクル;
4℃で浸漬させる。
10個の反復単位(18%)、11個の反復単位(60%)及び12個の反復単位(22%)。
10個の反復単位(24%)、11個の反復単位(56%)及び12個の反復単位(20%)。
Claims (16)
- 皮膚の異常状態を生じ易い個体の素因を判定するための方法であって、
(a)個体から採取したex vivoサンプルのゲノム中に存在するプロフィラグリン対立遺伝子を同定する段階であって、プロフィラグリン対立遺伝子の同定が、各対立遺伝子によってコードされているフィラグリン反復単位の数を測定することによって行われるものである段階と、
(b)個体のプロフィラグリン遺伝子型を、皮膚の異常状態を生じ易い個体の素因に相関させる段階であって、皮膚の状態が
(i) 角質層の天然湿潤因子(NMF)レベル、
( ii ) ふけ、
( iii )洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復、
( iv ) 乾燥肌、
(v) 脚乾燥、及び
( vi ) 洗剤チャレンジ後の皮膚回復
から成る群から選択されるものである段階と、
(c)前記皮膚の異常状態を生じ易い素因が高いかまたは低い個体としてグループ分けする段階であって、
(i) フィラグリン反復単位の数が多いと、角質層の天然湿潤因子(NMF)レベルが高いグループに属する個体とし、
( ii ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、ふけの発生率が高いグループに属する個体とし、
( iii )12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復が早いグループに属する個体とし、
( iv ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、乾燥肌の自覚報告が少ないグループに属する個体とし、
(v) 11個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、脚がより乾燥するグループに属する個体とし、及び
( vi ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、洗剤チャレンジ後の皮膚がより回復するグループに属する個体とする
ものである段階と、
から成ることを特徴とする方法。 - ex vivoサンプルが口腔から採取されたサンプルであることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- (a)ex vivoサンプルから採取されたDNAを基質として準備する段階と、
(b)フィラグリン反復単位コーディング配列を含む基質の所定領域を増幅する段階と、
(c)上記によって産生された1つまたは複数の増幅産物のサイズを測定することによってサンプルのゲノム中に存在するプロフィラグリン対立遺伝子を決定する段階と、
から成る請求項1または2に記載の方法。 - 段階(b)がポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって行われることを特徴とする請求項3に記載の方法。
- フィラグリン反復単位コーディング配列に隣接する位置で基質DNAにハイブリダイズできる配列を有しているオリゴヌクレオチド対を準備する段階を含む請求項4に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド対の一方のオリゴヌクレオチドが配列5′GGA TGA AGC CTA TGA CAC CAC 3′を有していることを特徴とする請求項5に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチド対の一方のオリゴヌクレオチドが配列5′GA CAG GAA AAG ATA ACT TCC C 3′を有していることを特徴とする請求項5または6に記載の方法。
- 増幅が、0.1−30ng/mlのDNA基質、200μMの複数のdNTP、200μMの順方向及び逆方向のプライマー、及び、1.7μMのMg2+を使用して行われることを特徴とする請求項3から7のいずれか一項に記載の方法。
- 臨床パネルを構成するために個体をグループ分けすることを特徴とする請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 個体に合った身体手入れ用製品を選定するための請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 皮膚の異常状態を生じ易い個体の素因を判定するためのキットであって、皮膚の状態が、(i)角質層の天然湿潤因子(NMF)レベル、( ii )ふけ、( iii )洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復、( iv )乾燥肌、(v)脚乾燥、及び( vi )洗剤チャレンジ後の皮膚回復から成る群から選択されるものであり、キットが、個体から採取したサンプルのゲノム中に存在するプロフィラグリン対立遺伝子を同定する手段であって、プロフィラグリン対立遺伝子の同定が各対立遺伝子によってコードされているフィラグリン反復単位の数を測定することにより行われるものである手段を含んでおり、但し、前記手段がサザンブロッティング用プローブであるときは、キットが更に特定のプロフィラグリン遺伝子型を有している個体に使用するための適当な身体手入れ用製品を含むことを特徴とするキット。
- 皮膚の異常状態を生じ易い個体の素因を判定するためのPCRプライマーの使用であって、皮膚の状態が(i)角質層の天然湿潤因子(NMF)レベル、( ii )ふけ、( iii )洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復、( iv )乾燥肌、(v)脚乾燥、及び( vi )洗剤チャレンジ後の皮膚回復から成る群から選択されるものであり、個体の素因の判定が、プロフィラグリン対立遺伝子によってコードされているフィラグリン反復単位の数により行われ、PCRプライマーが配列5′GGA TGA AGC CTA TGA CAC CAC 3′、または、配列5′GA CAG GAA AAG ATA ACT TCC C 3′から成るものである使用。
- 個体に使用するための適当な身体手入れ用製品の同定方法であって、
(a)個体から採取したex vivoサンプルのゲノム中に存在するプロフィラグリン対立遺伝子を同定する段階であって、プロフィラグリン対立遺伝子の同定が、各対立遺伝子によってコードされているフィラグリン反復単位の数を測定することによって行われるものである段階と、
(b)個体のプロフィラグリン遺伝子型を、皮膚の異常状態を生じ易い個体の素因に相関させる段階であって、皮膚の状態が
(i) 角質層の天然湿潤因子(NMF)レベル、
( ii ) ふけ、
( iii )洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復、
( iv ) 乾燥肌、
(v) 脚乾燥、及び
( vi ) 洗剤チャレンジ後の皮膚回復
から成る群から選択されるものである段階と、
(c)前記皮膚の異常状態を生じ易い素因が高いかまたは低い個体としてグループ分けする段階であって、
(i) フィラグリン反復単位の数が多いと、角質層の天然湿潤因子(NMF)レベルが高いグループに属する個体とし、
( ii ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、ふけの発生率が高いグループに属する個体とし、
( iii )12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、洗剤チャレンジ後の皮膚障壁回復が早いグループに属する個体とし、
( iv ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、乾燥肌の自覚報告が少ないグループに属する個体とし、
(v) 11個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、脚がより乾燥す るグループに属する個体とし、及び
( vi ) 12個のフィラグリン反復単位を1コピー以上有していると、洗剤チャレンジ後の皮膚がより回復するグループに属する個体とする
ものである段階と、
(d)このようにして決定されたプロフィラグリン遺伝子型に使用するために適当であることが判明している身体手入れ用製品を選択する段階と
から成る、個体に使用するための適当な身体手入れ用製品の同定方法。 - 更に、このようにして決定されたプロフィラグリン遺伝子型を有している個体に使用するための適当な身体手入れ用製品を準備する段階を含む請求項13に記載の方法。
- 身体手入れ用製品が湿潤用スキンケア製品であることを特徴とする請求項13または14に記載の方法。
- 身体手入れ用製品が洗剤主体の洗浄製品であることを特徴とする請求項13または14に記載の方法。
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