JP2001526897A - 気分障害遺伝子 - Google Patents

気分障害遺伝子

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の間に位置する、気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つのヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）を同定するためのヒト染色体１８ｑまたはそのフラグメントの使用を特徴とする。本発明はまた、上記領域内におけるトリヌクレオチド反復範囲の存在についてサンプルを分析することを特徴とする気分障害または関連障害に対する個体の罹病性を決定する方法を提供する。このようなトリヌクレオチド反復範囲の存在を検出するのに有用なポリヌクレオチド配列もまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、特にヒト遺伝子に関し、患者における気分障害または関連障害の発
現に寄与する、あるいは原因となる、精神医学的健康に関連する遺伝的因子の決
定に関する。さらに詳しくは、排他的ではないが、本発明は、ヒト第１８染色体
からこのような遺伝子を同定および特徴付けする方法、ならびにそのように同定
された遺伝子およびその発現産物を提供する。本発明はまた、気分障害または関
連障害に対する個体の遺伝子的罹病性を決定する方法に関する。気分障害または
関連障害とは、“精神障害の診断および統計的マニュアル第４版”（ＤＳＭ−Ｉ
Ｖ）に定義された以下の障害を意味する（カッコ内は、ＤＳＭ−ＩＶコードであ
る）：―気分障害（２９６．ＸＸ、３００．４、３１１、３０１．１３、２９５
．７０）、精神分裂病および関連障害（２９５．ＸＸ、２９７．１、２９８．８
、２９７．３、２９８．９）、不安障害（３００．ＸＸ、３０９．８１、３０８
．３）、適応障害（３０９．ＸＸ）および人格異常（３０１．ＸＸ）。
【０００２】 本発明方法は、双極性スペクトル障害（ＢＰ：Bipolar spectrum disorder） として知られる気分障害の家族に関連する遺伝的因子に関し、特に例が実証され
る。 双極性障害（ＢＰ）は、爽快気分（躁）から不快気分（抑うつ）が交互に出現
する気分障害を特徴とする重篤な精神医学的状態である。２つのタイプの双極性
疾患が記述されている：Ｉ型ＢＰ疾患（ＢＰＩ）は、躁期をともなった主たる抑
うつ症状の発現を特徴とし、ＩＩ型ＢＰ疾患（ＢＰＩＩ）は、軽躁期をともなっ
た主たる抑うつ症状の発現を特徴とする。ＢＰの発端者の親族は、ＢＰ、単極性
障害（患者は抑うつ症状の発現のみを体験する；ＵＰ）、循環基質（軽度の抑う
つと軽度の躁症状の発現；ＣＹ）ならびに躁病患者（ＳＡｍ）および抑うつ疾患
患者（ＳＡｄ）の分裂情動障害に対する大きな危険性を有している。これらの観
察に基いて、ＢＰ、ＣＹ、ＵＰおよびＳＡは、双極性スペクトル障害として分類
される。双極性スペクトル障害の病因諭における遺伝的因子の関わりは、家族、
双子および養子縁組実験によって示唆された（TsuangおよびFaraone（１９９０ ）、The Genetics of Mood Disorders、バルチモア、ジョン・ホプキンズ大学出
版）。しかし、伝播の正確なパターンはわかっていない。幾つかの研究において
は、複合分離分析が、ＢＰに対する１つの主な遺伝子座の存在を確認している（
Spenceら（１９９５）、Am J.Med.Genet（Neuropsych.Genet.）、６０、３７０ −３７６）。他の研究者たちは、多数の遺伝的および環境的影響の相加的組合せ
が、該障害が進行する傾向の原因であるという傾向−閾値−モデルを提案してい
る（McGuffinら（１９９４）、Affective Disorders；ロンドン、ガスケルにお ける精神医学遺伝学のセミナー、１１０−１２７）。
【０００３】 遺伝が複合モードであるゆえに、パラメーターおよび非パラメーター性連鎖方
策が、ＢＰ障害がメンデルの様式で伝播していると思われる家族に適用される。
染色体１１ｐ１５（Egelandら（１９８７）、Nature、３２５、７８３−７８７ ）およびＸｑ２７−ｑ２８（Mendlewiczら（１９８７）、The Lancet、１、１２
３０−１２３２；Baronら（１９８７）、Nature、３２６、２８９−２９２）に おいて発見された早期の連鎖は、いまなお論争中であり、初めは反復することが
できなかった（Kelsoeら（１９８９）、Nature、２４２、２３８−２４３；Baro
nら（１９９３）、Nature Genet、３、４９−５５）。多型性の高いマーカーを 最大限まで満たしたヒト遺伝子マップの発達およびデータ分析技術の継続的発達
により、数多くの新規連鎖調査が開始された。幾つかの研究においては、第４、
１２、１８、２１およびＸ染色体上の特定の領域への連鎖の証拠または示唆に富
む証拠が発見された（Blankwoodら（１９９６）、Nature Genetics、１２、４２
７−４３０、Craddockら（１９９４）、Brit J.Phychiatry、１６４、３５５− ３５８、Berrettiniら（１９９４）、Proc Natl Acad Sci USA、９１、５９１８
−５９２１、Straubら（１９９４）、Nature Genetics、８、２９１−２９６お よびPekkarinenら（１９９５）、Genome Research、５、１０５−１１５）。報 告された連鎖の結果の確実性をテストするためには、これらの発見は他の独立し
た研究において反復されなければならない。
【０００４】 最近、第１８染色体上の動原体周囲の領域への双極性障害の連鎖が報告された
（Berrettiniら（１９９４））。ＢＰ疾患または関連症候群に冒されている３名
の親族でない患者において、１８ｐｔｅｒ−ｐ１１および１８ｑ２３−ｑｔｅｒ
に切断点および欠失領域をもつ環状第１８染色体も報告された（Craddockら（１
９９４））。染色体１８ｐの連鎖は、Stineら（１９９５）、Am J Hum Genet、 ５７、１３８４−１３９４によって反復された。彼らは、同じ研究において１８
ｑ２１．２−ｑ２１．３２における遺伝子座に関する示唆に富む証拠も報告した
。興味深いことに、Stineらは、ペアレンツ・オブ・オリジン効果も観察した： 連鎖の証拠は父方の家系において最強であり、該家系においては発端者の父親ま
たは発端者の父親の血縁者の一人が病気に冒されている。
【０００５】 ひとつの独立した反復研究においては、本発明者らは、双極性障害発端者を含
む１０組のベルギー人家族の第１８染色体マーカーで連鎖をテストした。原因と
なる遺伝子を突きとめるために、連鎖分析または見込み法をこれらの家族に対し
て用いた。この方法は、一組の家族内の、ヒトゲノムに分散した多型遺伝マーカ
ーという表現型をもつ明確な疾患の表現型の分離を目的とする。疾患の共分離お
よび連鎖対非連鎖下における遺伝マーカーを観察する見込み率が算出され、この
比率の対数または確率の対数はＬＯＤスコア統計値ｚである。ＬＯＤスコア３（
または１０００またはそれ以上の見込み率）を連鎖の有意な統計的証拠として扱
う。本発明者らの研究においては、動原体周囲領域への連鎖の証拠は発見されな
かったが、ＢＰＩＩ発端者を含むベルギー人の家族の１つであるＭＡＤ３１にお
いて、１８ｑ２１．３３−ｑ２３に位置するマーカーにおいて示唆に富む連鎖が
発見された（De bruynら（１９９６）、Biol Psychiatry、３９、６７９−６８ ８）。マルチポイント連鎖分析において、ＳＴＲ（ショート・タンデム・リピー
ト）多型体Ｄ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間の隔たりにおいて、最大マルチポイ
ントＬＯＤスコア＋１．３４という最も高いＬＯＤスコアが得られた。シミュレ
ーション研究によって、このＬＯＤスコアが、該家族において入手可能な情報を
与えられた連鎖したマーカーについて予測しうるスコアの範囲内であることが明
らかになった。同様に、冒された血縁者ペア分析もまた、テストしたマーカーの
幾つかについて無連鎖の帰無仮説を拒絶した。２つの他のグループもまた、１８
ｑへの双極性障害の連鎖の証拠を発見した（Freimerら（１９９６）、Nature Ge
netics、１２、４３６−４４１、Coonら（１９９６）、Biol Psychiatry、３９ 、６８９−６９６）。異なる研究における候補領域は、完全にはオーバーラップ
しないけれども、それらはすべて、１８ｑ２１−ｑ２３における罹病性遺伝子座
の存在を示唆している。
【０００６】 本発明者らは現在、ＭＡＤ３１家族の１８ｑ染色体領域へのさらなる調査を行
っている。前述のマーカーＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間に予め配置された１
２個のＳＴＲ多型マーカーによるＭＡＤ３１における双極性障害の共分離の分析
ならびにそれに続く前述のＬＯＤスコア分析の分析によって、本発明者らは、双
極性スペクトル障害などの気分障害に関連する遺伝子が位置する第１８染色体の
候補領域をさらに正確にし、物理的地図を構築している。したがって、問題とな
っている領域を用いて、精神医学的健康および気分に影響を及ぼす遺伝子を突き
とめ、単離し、配列決定することができる。 また本発明者らは、候補領域のＹＡＣ（酵母人工染色体：yeast artificial c
hromosome）近接地図を構築して、共分離分析によってマッピングされた１２個 のＳＴＲマーカーの相対的順序を決定し、候補領域を含むＹＡＣライブラリーか
ら７個のクローンを同定した。
【０００７】 関連する遺伝子の同定および特徴付けの過程において、数多くの手順を、同定
されたＹＡＣクローンおよび前記の気分障害に悩まされている個体のＤＮＡに適
用することができる。たとえば、本発明者らは、第１８染色体の対象領域に及ん
でいるＹＡＣクローンを用い、ＣＡＧまたはＣＴＧフラグメト化によって、気分
障害または関連障害の出現に関連すると伝えられる新規遺伝子を同定した。 他の手順を該ＹＡＣクローンに適用して、以下に論じる候補遺伝子を同定する
こともできる。 一旦、候補遺伝子を同定すると、その遺伝子における気分障害または関連障害
に関連する多型体の存在を検出することによって、気分障害または関連障害に対
する個体の罹病性を評価することが可能である。
【０００８】 したがって、本発明の第１の態様は、少なくとも１つの、前記の気分障害また
は関連障害に関連するヒト遺伝子（その突然変異および多型変異体を含む）を同
定するための、多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の間に位置するヒト
染色体１８ｑの８．９ｃＭ領域またはそのフラグメントの使用である。以下に記
載するように、本発明者らは、予めＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間に配置され
た１２個のＳＴＲ多型マーカーによるＭＡＤ３１家族における双極性障害の共分
離の分析およびそれに続くＬＯＤスコア分析によって、このような遺伝子に対す
る染色体１８ｑのこの候補領域を同定した。
【０００９】 本発明の第２の態様は、少なくとも１つの、前記の気分障害または関連障害に
関連するヒト遺伝子（その突然変異および多型変異体を含む）を同定するための
、多型マーカーＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間に配置されたヒト染色体１８ｑ
の一部分を含むＹＡＣクローンの使用である。Ｄ１８Ｓ６０は、Ｄ１８Ｓ５１に
近いので、使用するための特定のクローンは、本発明者らによって先に同定され
た（De bruynら（１９９６））、多型マーカーＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間
のヒト染色体１８ｑの候補領域に広がる人工染色体をもつクローンである。 本発明に用いることができる、候補領域を包含する特定のＹＡＣは、９６１- ｈ-９、９４２-ｃ-３、７６６-ｆ-１２、７３１-ｃ-７、９０７-ｅ-１、７５２ −ｇ−８、および７１７-ｄ-３であり、候補領域の全域に最小被覆経路をもつ９
６１-ｈ-９、７６６-ｆ-１２、および９０７-ｅ-１が好ましい。使用のための適
当なＹＡＣクローンは、Ｄ１８Ｓ６８とＤ１８ＳＳ９７９の間の正確な候補領域
に広がる人工染色体をもつクローンである。 気分障害または関連障害に関連する候補遺伝子を同定するための、前述したよ
うな染色体１８ｑの候補領域がＹＡＣ内に存在するか否かを知るために適用しう
る数多くの方法がある。たとえば、ヒトゲノムにおけるトリヌクレオチド反復伸
張（ＴＲＥ）と気分障害の予期の現象との間に、明らかな関連が存在することが
これまでに実証されている（Lindbladら（１９９５）、Neurobiology of Diseas
e、２：５５−６２およびO'Donovanら（１９９５）、Nature Genetics、１０： ３８０−３８１）。
【００１０】 したがって、本発明の第３の態様は、多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９
７９の間に位置するヒト染色体１８ｑの領域におけるトリヌクレオチド反復伸張
を検出することを特徴とする、気分障害または関連障害に関連する少なくとも１
つのヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法である。 該遺伝子の同定方法の別法は、たとえば、１つまたはそれ以上の７つの前記Ｙ
ＡＣクローンなどの、多型マーカーＤ１８Ｓ６０と１８Ｓ６１の間に配置された
ヒト染色体１８ｑの一部分を含むＹＡＣクローンをフラグメント化し、該フラグ
メント中のヌクレオチドトリプレット反復を検出することを特徴とする。適当に
標識される場合、少なくとも５つ、好ましくは少なくとも１０のＣＴＧおよび／
またはＣＡＧトリプレット反復を含む核酸プローブが検出の適当な手段である。
公知のＲＥＤ（反復伸張検出：repeat expansion detection）システムを用いて
、トリヌクレオチド反復を決定することもできる（Shallingら（１９９３）、Na
ture Genetics、４、１３５−１３９）。
【００１１】 本発明の第４の態様は、気分障害または関連障害に関連し、多型マーカーＤ１
８Ｓ６０とＤ１８Ｓ６１の間に位置するヒト染色体１８ｑの領域に広がるＹＡＣ
クローンに存在する少なくとも１つのヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変
異体を含む）の同定方法であって、該方法は、少なくとも８つ、好ましくは少な
くとも１２の連続グルタミン残基のストリングを含むアミノ酸配列をもつタンパ
ク質を認識することができる抗体の使用によって、ヌクレオチドトリプレット反
復を含む遺伝子の発現産物を検出するステップを特徴とする。このような方法は
、たとえば、７つの前述のＹＡＣクローンからＹＡＣ ＤＮＡをヒトＤＮＡ発現
ライブラリーへサブクローニングすることによって実行される。関連発現産物の
好ましい検出手段は、モノクローナル抗体、特にｍＡＢ １Ｃ２の使用である。
この製造および特性は、国際公開公報ＷＯ９７／１７４４５に記載されている。
【００１２】 以下に詳述するように、トリプレット反復を含む候補遺伝子を同定するために
、本発明者らは、多型マーカーＤ１８Ｓ６０とＤ１８Ｓ６１の間に位置するヒト
染色体１８ｑの一部分を含む、ＹＡＣ９６１-ｈ-９、７６６-ｆ-１２、および９
０７-ｅ-１の直接ＣＡＧまたはＣＴＧフラグメンテーションを行い、ＣＡＧまた
はＣＴＧ反復を含む多くの配列を同定した。この反復の異常な伸張が気分障害ま
たは関連障害に対する遺伝的罹病性に関連する。 したがって、本発明の第５の態様は、図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａ
のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。 さらなる態様において、本発明は、図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａの
いずれか１つに示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を
特徴とするタンパク質を提供する。 本発明のさらに別の態様において、本発明は、トリヌクレオチド反復の大きさ
において図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示されるヌク
レオチド配列とは相異するヌクレオチド配列を特徴とする突然変異核酸を提供す
る。 また、本発明は、トリヌクレオチド反復の大きさにおいて図１５ａ、１６ａ、
１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示されるヌクレオチド配列とは相異するヌ
クレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を特徴とする突然変異タンパ
ク質を提供する。
【００１３】 本発明には、上記配列のいずれかと、少なくとも７５％、好ましくは少なくと
も８０％の相同性をもつヌクレオチド配列および上記配列のいずれかと機能的同
一性をもつヌクレオチド配列もまた本発明の企図するものであることを理解すべ
きである。相同性は、Altschulら（１９９７）、Nucleic Acids Res.、２５：３
３８９−３４０２；Karlinら（１９９０）、Proc Natl Acad Sci USA、８７：２
２６４−６８；およびKarlinら（１９９３）、Proc Natl Acad Sci USA、９０：
５８７３−５８７７の記載にしたがって算出する。保存性のアミノ酸の変更のみ
において上記配列と相異するアミノ酸配列も本発明の企図するものである。適当
な変更は、当業者に公知である。
【００１４】 上記配列の知識を用いて、気分障害または関連障害に対する遺伝的罹病性を決
定するアッセイを設計することができる。 したがって、本発明のさらに他の態様は、気分障害または関連障害に対する個
体の遺伝的罹病性を決定する方法であって、 ａ）個体からＤＮＡサンプルを得； ｂ）図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示される配列に
含まれるヌクレオチド配列の増幅に適した、該配列に含まれるトリヌクレオチド
反復に隣接するプライマーを提供し； ｃ）該プライマーを該ＤＮＡに適用して増幅反応を行い； ｄ）対照個体からのＤＮＡサンプルにおいて該増幅反応を行い；次いで ｅ）該個体と該対照個体について増幅反応の結果を比較する [ここで、対照個体由来の増幅フラグメントよりも大きいサイズの個体由来の増 幅フラグメントの存在は、気分障害または関連障害に対する該個体の罹病性の存
在の指標である] ステップを特徴とする方法を提供する。 対照個体とは、気分障害または関連障害に冒されておらず、気分障害または関
連障害の家族暦をもたない個体を意味する。 本発明に用いるのに好ましいプライマーを図１５ｂ、１６ｂ、１７ｂまたは１
８ｂに示すが、他のプライマーを利用してもよい。
【００１５】 本発明のさらに他の態様は、気分障害または関連障害に対する個体の遺伝的罹
病性を決定する方法であって、 ａ）個体からＤＮＡサンプルを得；次いで ｂ）トリヌクレオチド反復の大きさのみにおいて図１５ａ、１６ａ、１７ａま
たは１８ａのいずれか１つに示されるヌクレオチド配列とは相異するヌクレオチ
ド配列によってコードされるアミノ酸配列を特徴とするタンパク質の存在を検出
する [ここで、該タンパク質の存在は、気分障害または関連障害に対する該個体の罹 病性の存在の指標である] ステップを特徴とする方法を提供する。 前記タンパク質が、たとえばｍＡＢ ＩＣ２などの少なくとも８個の連続グル
タミンからなるストリングを認識しうる抗体を利用することによって検出される
のが好ましい。 本発明の核酸分子は、原核または真核宿主細胞内へ導入される発現ベクターに
含まれるのが都合がよい。適当な発現ベクターとしては、細菌または真核宿主細
胞において外来性ＤＮＡを発現するのに用いられるプラスミド、ウイルスベクタ
ー、酵母人工染色体または哺乳類人工染色体が挙げられる。電気穿孔、マイクロ
インジェクション、感染、リポ感染および直接取りこみなどの当業界で公知の適
当な方法を用いてベクターをトランスフェクトまたはトランスフォームする。そ
のような方法は、たとえば、Sambrookら“Molecular Cloning：A Laboratory Ma
nual”、第２版（１９８９）およびAusbelら“Current Protocols in Molecular
Biology”（１９９４）に、より詳細に記載されている。 また、本発明は、本発明の発現ベクターを含む宿主細胞、組織または臓器を提
供する。本発明はさらに、本発明タンパク質をコードする能力をもち、ゲノムＤ
ＮＡまたはｃＤＮＡであるトランスジーンを含むトランスジェニック宿主細胞、
組織または臓器を提供する。トランスジーンは、ゲノムに安定に組み込まれるか
、または染色体外の状態のいずれかにおいて、トランスジェニック宿主細胞、組
織または臓器内に存在する。
【００１６】 図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示されるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子ならびに該配列によってコードされるタンパク質は、上記
配列の少なくとも１つにおいて、トリヌクレオチド反復配列（ＴＲＥ）を提示す
る気分障害または関連障害の患者の治療に用いることができる。 したがって、本発明のもう１つの態様は、気分障害または関連障害の個体の治療
用薬剤として使用するための上記核酸分子およびタンパク質を提供する。核酸ま
たはタンパク質が、適当な担体またはデリバリービヒクル中に存在するのが好ま
しい。たとえば、プラスミドまたはウイルスベクターなどのベクターに挿入され
た核酸を、前述にしたがって、体細胞系または哺乳類生殖細胞系などの哺乳類細
胞にトランスフェクトさせる。トランスフェクトされる細胞は、血液または骨髄
などの患者から得られた生物学的サンプル中に存在するか、または細胞培養によ
って得られる。Kasidら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（１９９０）８７：４７３；R
osenbergら（１９９０）、New Eng.J.Med.、３２３：５７１；Williamsら（１９
９４）、Nature、３１０：４７６；Dickら（１９８５）、Cell、４２：７１；Ke
llerら（１９８５）、Nature、３１８：１４９；およびAndersonｔｓ（１９９４
）、米国特許第５３９９３４６号に記載されている方法などの当業者に公知の方
法にしたがって、トランスフェクション後、サンプルを患者に戻すか、または再
投与する。
【００１７】 哺乳類細胞に核酸を導入するために用いることができる、当業者に公知のウイ
ルスベクターは多数存在し、たとえば、レトロウイルス、パルボウイルス、コロ
ナウイルス、ピコルナウイルスまたはアルファウイルスといったようなマイナス
鎖ＲＮＡウイルスおよびアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス１および２型、
エプスタイン・バールウイルスまたはサイトメガロウイルスといったようなヘル
ペスウイルスおよびワクシニアニワトリポックスまたはカナリヤポックスウイル
スといったようなポックスウイルスなどの二本鎖ＤＮＡウイルスである。他のウ
イルスとして、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウ
イルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルスおよび肝炎ウイルスなどが挙げられ
る。
【００１８】 所望のタンパク質をコードする核酸を細胞へ導入する好ましい方法は、遺伝子
工作されたウイルスベクターの使用を介して行われる。これらのベクターは、間
期および休止期細胞に核酸を導入する手段を提供するものであり、細胞毒性を低
減化し、遺伝子安定性を改良するように改変されている。工作された単純ヘルペ
スウイルス１型ベクター（D.M.Kriskyら（１９９７）、Gene Therapy、４（１０
）：１１２０−１１２５）、アデノウイルスベクター（A.Amaltifitanlら（１９
９８）、Journal of Virology、７２（２）：９２６−９３３）、弱毒化レンチ ウイルスベクター（R.Zuffereyら、Nature Biotechnology（１９９７）、１５（
９）、８７１−８７５）およびアデノウイルス／レトロウイルスキメラベクター
（M.Fengら、Nature Biotechnology（１９９７）、１５（９）、８６６−８７０
）の調製および使用は、当業者には公知である。 タンパク質は、当業者に公知の方法を用いて投与する。たとえば、投与形態は
、標的細胞の位置で行うのが好ましい。注射によって投与することができる。他
の投与形態（非経口、経粘膜、全身、インプラント、腹腔内）は、当業界におい
て一般に公知である。作用剤は、生理食塩水、滅菌水、リンゲル液および等張食
塩水などの医薬的に許容しうる担体とともに投与するのが好ましい。
【００１９】 本発明のさらに別の態様は、本発明のタンパク質の発現を増強または阻害する
ことができる化合物を同定するためのアッセイ方法を提供する。これらのアッセ
イは、たとえば、本発明の核酸を宿主細胞にトランスフェクトさせ、次いで、該
化合物の存在あるいは不在下において、ｍＲＮＡ転写物のレベルまたは該核酸か
ら発現されたタンパク質のレベルを比較することによって行うことができる。発
現レベルを測定するために、当業者に公知の別の方法を利用することができる。
別法として、当業者に公知のタイプのリポーター遺伝子アッセイを用いることに
よって転写を調節する化合物を同定することが可能である。このようなアッセイ
においては、転写レベルをモニターする予定の遺伝子のプロモーターが、リポー
ター分子を発現する能力をもつ遺伝子の上流に位置するように、リポータープラ
スミドを構築する。リポーター分子は、発現レベルが容易に検出されうる分子で
あり、リポーター遺伝子の転写物または検出されうる特性をもつタンパク質分子
である。たとえば、該分子は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＲ）などの蛍光タンパ
ク質である。 化合物アッセイは、適当な宿主細胞に上記リポータープラスミドを導入し、次
いで、テストされる化合物の存在あるいは不在下において発現したリポーター分
子の量を測定することによって行う。
【００２０】 本発明のさらなる具体例は、ＢＡＣ（細菌人工染色体）またはＰＡＣ（Ｐ１ま
たはファージ人工染色体）もしくはエクソン−トラップコスミドベクターといっ
たようなコスミドベクターなどのベクターへの前記ＹＡＣ ＤＮＡのサブクロー
ニングに関与する関連遺伝子の同定方法に関する。このような方法への出発点は
、多型マーカーＤ１８Ｓ６０とＤ１８Ｓ６１の間のヒト染色体１８ｑの領域の近
接地図の構築である。このために、本発明者らは、前述の７つのＹＡＣクローン
においてヒトＤＮＡのフラグメントの末端領域のシーケンシングを行い、本明細
書において開示する。前記他のベクターへのＹＡＣ ＤＮＡのサブクローニング
に続いて、本明細書においてＹＡＣクローン近接において記載したように、これ
らの末端配列またはその一部、特に図１から１１に示す配列を含み、この領域に
いずれかの配列決定されたタグ部位（ＳＴＳ）を含むプローブを、サブクローン
間のオーバーラップを検出するのに用いることができ、近接地図を構築すること
ができる。このＹＡＣ近接において公知の配列を、近接地図サブクローンの生成
に用いることができる。
【００２１】 気分障害または関連障害に関連する遺伝子を同定しうるひとつのルートは、エ
クソントラッピングという公知の技術の使用である。 これは、特殊化されたエクソン−トラップコスミドベクターの現行のプロトコ
ルにおいて最もよく用いられる、人工ＲＮＡスプライシングアッセイである。ベ
クターは、複製起点、およびマルチプルクローニングサイトおよびＳＶ４０ポリ
アデニル化サイトを含む、イントロンによって分離された２つのスプライシング
コンピテントエクソンである強力プロモーター配列、を含むＳＶ４０ゲノムのセ
グメントからなる人工ミニ遺伝子を含む。 ＹＡＣ ＤＮＡをエクソン−トラップベクターでサブクローニングし、組換え
ＤＮＡで哺乳類細胞の株をトランスフェクトする。ＳＶ４０プロモーターからの
転写によって、正常にスプライシングされてミニ遺伝子の２つのエクソンを含む
ＲＮＡ転写物が得られる。もし、クローニングされたＤＮＡそれ自体が機能性エ
クソンを含むならば、それはベクターのミニ遺伝子に存在するエクソンへとスプ
ライシングされうる。逆転写酵素を用いて、ｃＤＮＡコピーを作成することがで
き、特異的ＰＣＲプライマーを用いて、挿入ＤＮＡのエクソンに関連するスプラ
イシングを同定することができる。気分障害または関連障害に苦しんでいる人由
来のＤＮＡの相当する領域と比較することによって関連遺伝子を同定するといっ
たような手順によって、ＹＡＣ ＤＮＡ内のコーディング領域を同定することが
できる。
【００２２】 したがって、本発明のさらに別の態様は、気分障害または関連障害に関連する
少なくとも１つのヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定
方法であって、 （ａ）哺乳類細胞を前述のように調製およびマッピングされたエクソントラッ
プコスミドベクターでトランスフェクトし； （ｂ）該哺乳類細胞を適当な培地中で培養し； （ｃ）ＳＶ４０プロモーターから発現されたＲＮＡ転写物を単離し； （ｄ）該ＲＮＡ転写物からＤＮＡを調製し； （ｅ）該エクソントラップコスミドベクターにサブクローニングされたＤＮＡ
のエクソンに関与するスプライシングを同定して、該サブクローニングされたＤ
ＮＡにおけるコーディング領域の位置を解明し； （ｆ）該コーディング領域と気分障害または関連障害に苦しんでいる人由来の
ＤＮＡにおける相当する領域との間の相異を検出し；次いで （ｇ）気分障害または関連障害に関連する、該遺伝子またはその突然変異体も
しくは多型変異体を同定する ステップを特徴とする方法である。
【００２３】 エクソントラッピングの別法として、前述したように、ＹＡＣ ＤＮＡを、Ｂ
ＡＣ、ＰＡＣ、コスミドまたは他のベクターにサブクローニングし、近接地図を
構築する。サブクローニングされたＤＮＡ上の関連遺伝子の位置を決定すること
ができる、以下のような数多くの適当な公知の方法がある： （ａ）ｃＤＮＡ選択または捕捉（直接選択およびｃＤＮＡ選択ともいう）：こ
の方法は、クローニングされたＤＮＡ（ＹＡＣ ＤＮＡのインサートなど）をハ
イブリダイズして、特定の（脳など）ｃＤＮＡライブラリー由来のすべてのｃＤ
ＮＡクローンのインサートといったようなｃＤＮＡの複合混合物にすることによ
るゲノムＤＮＡ／ｃＤＮＡへテロ二重体の形成が関連する。関連配列は、ハイブ
リダイズされ、ビオチン−ストレプトアビジン捕捉およびＰＣＲ（または関連技
術）を用いる次のステップにおいて増やすことができる； （ｂ）ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡへのハイブリダイゼーション：ゲノムクローン（特
異的コスミドのインサートなど）を培養細胞系のパネルからの、または適当な（
脳など）ｃＤＮＡライブラリーに対する、ｍＲＮＡのノーザンブロットにハイブ
リダイズすることができる。正のシグナルは、クローニングされたフラグメント
内の遺伝子の存在を指示することができる； （ｃ）ＣｐＧアイランド同定；ＣｐＧまたはＨＴＦアイランドは、遺伝子の５
’末端に見出されることが多い、短い（約１ｋｂ）ヒポメチル化されたＧＣ−リ
ッチ（＞６０％）配列である。ＣｐＧアイランドは、しばしば、数種のレアカッ
ター制限酵素に対する制限部位をもつ。レアカッター制限部位のクラスター形成
は、ＣｐＧアイランドを示し、したがって可能性のある遺伝子を示す。ＣｐＧア
イランドは、レアカッター酵素で切断されたゲノムＤＮＡのサザンブロットに対
するＤＮＡクローンのハイブリダイゼーションによって、またはアイランド−レ
スキューＰＣＲ（アイランドと隣接Ａｌｕ反復の間の配列を増幅することによる
ＹＡＣからのＣｐＧアイランドの単離）によって検出することができる； （ｄ）ズーブロッティング；ストリンジェンシー低減状態における、種々の動
物由来のゲノムＤＮＡサンプルのサザンブロットに対するＤＮＡクローン（特異
的コスミドのインサートなど）のハイブリッド形成。ハイブリダイゼーションシ
グナルの検出は、保存された配列を示唆し、可能性のある遺伝子を指示する。
【００２４】 したがって、本発明のさらなる態様は、気分障害または関連障害に関連する少
なくとも１つのヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方
法であって、 （ａ）前述したＹＡＣ ＤＮＡをコスミド、ＢＡＣ、ＰＡＣまたは他のベクタ
ーにサブクローニングし； （ｂ）図１から１１に示すヌクレオチド配列、または本明細書に記載したＹＡ
Ｃクローン近接領域におけるいずれかの他の配列決定されたタグ部位（ＳＴＳ）
、または１４以下でない隣接する塩基からなるその一部またはその相補体を用い
て、サブクローン間のオーバーラップを検出してその地図を構築し； （ｃ）ＣｐＧアイランド同定、ズー・ブロッティング、サブクローニングされ
たＤＮＡのｃＤＮＡライブラリーへのハイブリダイゼーションまたは培養細胞系
のパネルからのｍＲＮＡのノーザン・ブロットのうちの１つまたはそれ以上によ
ってサブクローニングされたＤＮＡ内の遺伝子の位置を同定し； （ｄ）該遺伝子と気分障害または関連障害に苦しむ個体のＤＮＡの相当する領
域との間の相異を検出し；次いで （ｅ）該気分障害または関連障害に関連する該遺伝子を同定する； ステップを特徴とする方法である。
【００２５】 クローニングされたＹＡＣ ＤＮＡを配列決定する場合、コンピューター分析
を用いて関連遺伝子の存在を確証することができる。相同性検査やエクソン予測
などの技術を適用してもよい。 本発明方法にしたがって、候補遺伝子を単離すると、正常な個体と双極性スペ
クトル障害などの気分障害に苦しむ個体との間で、より詳細な比較を行うことが
できる。たとえば、“突然変異テスト”として記載する、ＤＮＡ配列における突
然変異または多型を同定することができる２つの方法がある。第１の方法では、
１つの特定の突然変異の有無についてＤＮＡサンプルをテストするが、これは該
突然変異が何であるかという知識を必要とする。第２の方法では、対照（正常）
ＤＮＡからの偏差についてＤＮＡのサンプルをスクリーニングする。この後者の
方法は、突然変異が予め同定されない候補遺伝子の同定にとって、より有用であ
る。
【００２６】 さらに、上記方法によって同定された遺伝子に以下の技術をさらに適用して、
正常または健康な個体と気分障害または関連障害に苦しむ個体との間の差異を同
定することができる： （ａ）サザンブロッティング技術：患者および健康な個体の、種々の制限酵素
で切断されたゲノムＤＮＡを含むナイロン膜へクローンをハイブリダイズする。
放射活性標識プロトコルを用いて、患者および健康な個体の間の大きな差異を視
覚化することができる； （ｂ）ポリアクリルアミドゲル中のヘテロ二重体の移動度：この技術は、非変
性ポリアクリルアミドゲル中のヘテロ二重体の移動度が、ホモ二重体の移動度よ
りも少ないという事実に基いている。２００ｂｐ以下のフラグメントにとって最
も有効である； （ｃ）一本鎖コンホーメーション多型分析（ＳＳＣＰまたはＳＳＣＡ）：一本
鎖ＤＮＡは、複合体構造を形成するように折りたたまれ、弱い分子内結合によっ
て安定化する。これらの構造の非変性ポリアクリルアミドゲル中の電気泳動にお
ける移動度は、それらの鎖の長さおよびコンホーメーションに依存する； （ｄ）ミスマッチの化学切断（ＣＣＭ）：放射標識プローブをテストＤＮＡに
ハイブリダイズし、ＤＮＡの一本の鎖をミスマッチ部位で切断する一連の化学反
応によってミスマッチを検出する。これは非常に感度が高い方法であり、キロベ
ース長さのサンプルに適用することができる； （ｅ）ミスマッチの酵素切断：このアッセイはＣＣＭに類似しているが、切断
は、特定のバクテリオファージ酵素によって行われる； （ｆ）変性勾配ゲル電気泳動：この技術では、ＤＮＡ二重体を、変性剤（化学
薬品または温度）の量が増加する勾配がある電気泳動ゲルを通して移動させる。
移動は、ＤＮＡ二重体が、鎖が解けて分離するゲル上の位置に到達するまで継続
させ、この後、変性ＤＮＡはさらには移動しない。ゲル内の異なる位置へそれら
を移動させるには、正常および突然変異ＤＮＡ二重体の間に１つの塩基対の差異
があれば十分である； （ｇ）直接ＤＮＡ配列決定。
【００２７】 本明細書に記載した方法に関し、ＹＡＣおよび気分障害または関連障害に苦し
む個体のＤＮＡ由来のコーディング領域間の差異を検出するステップにおいては
、該個体は、該障害をもつ個体であればだれでもよく、ＭＡＤ３１家族のメンバ
ーである必要はない。 本発明のさらなる態様は、上記方法のいずれかによって獲得可能な、気分障害
または関連障害に関連する単離ヒト遺伝子およびその変異体、該遺伝子によって
コードされる単離ヒトタンパク質および該タンパク質をコードするｃＤＮＡを提
供する。 後記実験においては、図面を参照されたい。
【００２８】実験例１ （ａ）家族データ ＢＰＩＩ発端者を含むベルギー人の家族であるＭＡＤ３１における臨床診断は
、De bruynら（１９９６）に詳細に記載された。その実験においては、連鎖分析
において情報をもたらした１５名の家族メンバーのみを選択して、さらに遺伝子
型分析を行った。該家族における種々の臨床診断は、以下のとおりであった：Ｂ
ＰＩ １名、ＢＰＩＩ ２名、ＵＰ ２名、重度抑うつ障害（ＭＤＤ） ４名、
ＳＡｍ １名およびＳＡｄ１名。 ＭＡＤ３１家族の家系図を図１２に示す。
【００２９】 （ｂ）家族メンバーの遺伝子型分析 すべてのショートタンデム反復（ＳＴＲ）遺伝マーカーは、ジまたはテトラヌ
クレオチド反復多型体である。この実験に用いた遺伝マーカーに関する情報は，
インターネット上の幾つかのソースから得た：ゲノムデータベース（ＧＤＢ、ht
tp://gdbwww.gdb.org/）、ジェンバンク（http;//www.ncbi.nlm.nih.gov/）、共
同ヒューマン・リンケージ・センター（ＣＨＬＣ、http://www.chlc.org/）、エ
ックルス・インスティチュート・オブ・ジェネティクス（ＥＩＨＧ、http://www
.genetics.uah.edu/）およびジェネソン（http://www.genethon.fr/）。１００ ｎｇのゲノムＤＮＡ、２００ｍＭの各ｄＮＴＰ、１．２５ｍＭのＭｇＣｌ2、３ ０ｐｍｏｌの各プライマーおよび０．２ユニットのゴールドスターＤＮＡポリメ
ラーゼ（ユーロゲンテック）を含む２５μｌ容量にて標準ＰＣＲを行った。１つ
のプライマーは、ＰＣＲ前に、[γ−32Ｐ]ＡＴＰおよびＴ４ポリヌクレオチドキ
ナーゼで末端標識した。９４℃２分間の初期変性後、９４℃で１分間、適当なア
ニーリング温度で１．５分間および７２℃で２分間伸張を２７サイクル行った。
最後に、さらに伸張ステップを７２℃で５分間行った。ＰＣＲ産物は、６％変性
ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動およびエックス感受性フィルムへの曝露
によって検出した。正確な候補領域を包含する連続的に分析されたＳＴＳ、ＳＴ
ＲおよびＥＳＴは、本明細書中、後記する。
【００３０】 （ｃ）２点ｌｏｄスコア分析 Fastlink２．２．を用いる３つの異なる疾患モデル（Cottinghamｒａ，１９９３
）について、２点ｌｏｄスコアを計算した。すべてのモデルについて、１％の疾
患遺伝子頻度および１／１０００の表現型率を用いた。モデル１は、すべての患
者と冒されていない個体を含んでおり、後者は審査時の年齢に応じて疾患浸透度
クラスを割り当てられている。De bruynら（１９９６）に記載された９つの年齢
従属性浸透度クラスは、６０歳以上の個体については、最大浸透度９９％の減少
に対応する因子０．７をかけて７０％になる（Ott、１９９１）。モデル２はモ デル１と類似しているが、症状発現の数、最悪の症状発現中の徴候の数、治療暦
といったような臨床データ基いて計算された診断上の安定性スコアを患者に割り
当てた（Riceら、１９８７；De bruynら、１９９６）。モデル３は、患者のみを
含むモデル１である。
【００３１】 （ｄ）ＹＡＣ近接−プロトコルの構築 標準的プロトコル（Silverman、１９９５）に従って、ＹＡＣの成長およびＹ ＡＣ ＤＮＡの抽出を行った。染色体１８ｑ候補領域に広がるＹＡＣ−近接の構
築のために、配列タグ部位（ＳＴＳ）に基く物理的地図のデータ（Hudsonら、１
９９５）をホワイトヘッド・インスティチュート（ＷＩ）インターネットサイト
（http://wwwgenome.wi.mit.edu/）で調べた。ＹＡＣスクリーニングセンター・
ライデン（ＹＳＣＬ、オランダ）およびＣＥＰＨ（パリ、フランス）からＣＥＰ
Ｈメガ−ＹＡＣを得た。予めＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間に配置したＳＴＳ
およびＳＴＲの存在について、タッチダウンＰＣＲ増幅によって、ＹＡＣを分析
した。ＳＴＳ／ＳＴＲについての情報は、ＷＩ、ＧＤＢ、Genethon、、ＣＨＬＣ
およびGenBankのインターネットサイトから得た。９４℃で１分間の変性、６５ ℃から５１℃でそれぞれ１．５分間のアニーリング（各温度で２サイクル）およ
び７２℃で２分間の伸張からなるＰＣＲを３０サイクル行った。続いて、９４℃
で１分間の変性、５０℃で１．５分間のアニーリングおよび７２℃で２分間の伸
張からなるＰＣＲを１０サイクル行った。最終的伸張ステップを、７２℃で１０
分間行った。１％ＴＢＥ寒天ゲル上の電気泳動および臭化エチジウムによる染色
によって増幅された産物を視覚化した。
【００３２】 （ｅ）ＳＴＲマーカーの順序付け 予めＤ１８Ｓ５１とＤ１８Ｓ６１の間に配置した１２個のＳＴＲマーカーを、
ＭＡＤ３１家族における双極性疾患との共分離についてテストした。ＭＡＤ３１
家族における兄弟の遺伝子型情報および可能な組換え体の数の最小化から、親の
ハプロタイプを再構築した。この分析の結果を図１３に示す。父親は３つのマー
カーについて情報を提供せず、母親は５つのマーカーについて情報を提供しなか
った。ＭＡＤ３１家族におけるハプロタイプは、分析されたＳＴＲマーカーにつ
いて以下の順序を示唆した：ｃｅｎ−[Ｓ５１−Ｓ６８−Ｓ３４６]−[Ｓ５５− Ｓ９６９−Ｓ１１１３−Ｓ４８３−Ｓ４６５]−[Ｓ８７６−Ｓ４７７]−Ｓ９７ ９−[Ｓ４６６−Ｓ８１７−Ｓ６１]−ｔｅｌ。カッコ内のマーカーの互いに相対
的な順序は、我々のハプロタイプデータから推論できなかった。ＭＡＤ３１家族
におけるマーカーの順序を、異なるマッピング技術を用いて得られたマーカーの
順序と比較し、その結果を以下の表１に示す。
【表１】 表１．双極性障害に対する１８ｑ候補領域内のマーカーの順序の地図間におけ
る比較
【００３３】 ３つの地図すべてに共通のＤ１８Ｓ６８を地図のアンカーポイントとして選び
、他のマーカーのＤ１８Ｓ６８に対する相対的遺伝子距離をｃＭまたはｃＲで与
える。マーカーの順序は、近年刊行された第１８染色体放射ハイブリッド地図の
マーカー（Giacaloneら、１９９６、Genomics、３７：９−１８）およびＷＩ ＹＡＣ近接地図（http://www-genome.wi.mit.edu/）の順序によく一致する。し かし、他の地図との若干の不一致が見られた。Genethonの遺伝子地図との唯一の
不一致は、Ｄ１８Ｓ４６５とＤ１８Ｓ４７７の順序が逆になることである。Mars
hfield地図（http://www.marshmed.org/genetics/）とは２つの不一致が見られ た。本発明者らは、母系のハプロタイプに基いてＤ１８Ｓ５５の上にＤ１８Ｓ３
４６をマッピングしたが、Marshfield地図においては、Ｄ１８Ｓ３４６は、Ｄ１
８Ｓ４８３とＤ１８Ｓ９７９の間に配置される。本発明者らは、Ｄ１８Ｓ８９７
９の下にＤ１８Ｓ８１７を配置したが、Marshfield地図においては、このマーカ
ーは、Ｄ１８Ｓ４６５とＤ１８Ｓ４７７の間に配置される。しかし、Ｄ１８Ｓ３
４６およびＤ１８Ｓ８１７の位置は、Giacaloneら（１９９６）の第１８染色体 放射ハイブリッド地図と一致する。１つの不一致が、ＷＩ放射ハイブリッド地図
（http://www-genome.wi.mit.edu/）にも見られ、そこでは、Ｄ１８Ｓ６８はＤ １８Ｓ４６５の下に配置される。しかし、本発明者らならびに他の地図は、この
マーカーをＤ１８Ｓ５５の上に配置した。
【００３４】 （ｆ）Ｌｏｄスコア分析は、すべてのマーカーに正の結果を与え、１８ｑ２１．
３３−ｑ２３がＢＰ疾患、少なくともＭＡＤ３１家族に関連があるという先の観
察が確認された（De bruynら、１９９６）。すべてのモデルにおけるｌｏｄスコ
ア分析の統計一覧を以下の表２に示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】 最も高い２点ｌｏｄスコア（Θ＝０．０における＋２．０１）は、組換え体な
しのモデル１において、マーカーＤ１８Ｓ１１１３、Ｄ１８Ｓ８７６およびＤ１
８Ｓ４７７で得られた（表２）。モデル１においては、ＢＰスペクトル障害をも
つすべての個体が、冒されているとみなされ、連鎖分析に完全に寄与している。
正確なマッピングの前には、候補領域は、Marshfield地図では１５．２ｃＭの遺
伝距離またはGenethon地図では１３．１ｃＭの遺伝距離によって分離されている
、Ｄ１８Ｓ５１およびＤ１８Ｓ６１によって隣接された。Ｄ１８Ｓ５１およびＤ
１８Ｓ６１をもつ情報に富んだ組換え体が、２名の冒された個体に見られた（図
１３におけるＩＩ．１０とＩＩ．１１）。しかし、他のマーカーを候補領域内で
テストしなかったので、これらの個体が実際に、家系によって同一な（ＩＢＤ：
identical-by-descent）領域を共有しているかどうかはわからなかった。さらな
る遺伝子マッピングのデータは、すべての冒された個体がＤ１８Ｓ９６９、Ｄ１
８Ｓ１１１３．Ｄ１８Ｓ８７６およびＤ１８Ｓ４７７に対立遺伝子を共有してい
ることを示している（図１３、枠囲みされたハプロタイプ）。また、マーカーＤ
１８Ｓ４８３およびＤ１８Ｓ４６５からの対立遺伝子はおそらくＩＢＤであるが
、これらのマーカーは、冒された親Ｉ．１において情報に富んでいない。ＳＴＲ
マーカーＤ１８Ｓ６８、Ｄ１８Ｓ３４６、Ｄ１８Ｓ９７９およびＤ１８Ｓ８１７
において必須の組換え体が見られた（表２、図１３）。異なる地図間の不一致が
、Ｄ１８Ｓ３４６とＤ１８Ｓ８１７の位置に対して見られるので、本発明者らは
、Ｄ１８Ｓ６８およびＤ１８Ｓ９７９を用いて、ＢＰ疾患に対する候補領域を再
調査した。これらの２つのマーカー間の遺伝距離は、Marshfield遺伝地図に基い
て８．９ｃＭである（http://www.marshmed.org/genetics/）。
【００３７】 （ｇ）ＹＡＣ近接の構築 ＷＩ完全地図に従って、５６のＣＥＰＨ ｍｅｇａＹＡＣを、Ｄ１８Ｓ５１と
Ｄ１８Ｓ６１の間に含まれる初期候補領域に配置する（Chumakovら、１９９５、
Nature、３７７、Suppl．；De bruynら、１９９６）。これらのＹＡＣから、Ｄ １８Ｓ６０とＤ１８Ｓ６１の間の領域に位置するものを選んだ。Ｄ１８Ｓ５１は
、ＷＩ地図には存在しないが、Marshfield遺伝地図（http://www.marshmed.org/
genetics/）では、Ｄ１８Ｓ６０の近くに位置する。潜在的キメラ性ＹＡＣの数 を限定するために、非第１８染色体ＳＴＳに対してもポジティブであるＹＡＣを
排除した。このようにして、２５のＹＡＣ、すなわち、Ｄ１８Ｓ６０とＤ１８Ｓ
６１の間に位置することがわかっている、配列決定されたタグ部位（ＳＴＳ）、
シンプルタンデム反復（ＳＴＲ）および発現された配列タグ（ＥＴＳ）からの配
列、を選択し（図１４参照）、ＹＡＣ近接マッピングの技術に基いた近接内に置
き、ＹＡＣクローンからのＤＮＡをＰＣＲによって増幅した。使用したＳＴＳ、
ＳＴＲおよびＥＳＴ配列は後に記載する。ポジティブＹＡＣクローンをＹＡＣ近
接地図内に集めた（図１４）。
【００３８】 ３つのギャップがＹＡＣ近接内に残り、そのうちのＤ１８Ｓ８７６およびＧＣ
Ｔ３Ｇ０１の間の１つは、正確な候補領域に配置された。Ｄ１８Ｓ８７６および
ＧＣＴ３Ｇ０１の間のギャップを埋めるために、１４のＹＡＣクローン（表３）
をさらに分析した。ＹＡＣクローン７６６-ｆ-１２（ＳＶ１１Ｒ）、７５２-ｇ- ８（ＳＶ３１Ｌ）、９４２-ｃ-３（ＳＶ１０Ｒ）からの末端フラグメントを得て
、配列決定した（後記参照）。これらの３つの配列からのプライマーを選択し、
１４このＹＡＣクローンのそれぞれのＤＮＡをＰＣＲによって増幅した。表３に
示すように、動原体側の７つのＹＡＣクローンおよび末端小粒側の２つのクロー
ンの間にオーバーラップが得られた（７１７-ｄ-３および９０７-ｅ-１）。 最終的ＹＡＣ近接を図１４に示す。この図においては、第１８染色体ＳＴＳ、
ＳＴＲおよびＥＳＴに明白な的中をなすＹＡＣクローンのみを示す。２，３のケ
ースでは、幾つかのＹＡＣクローンで弱いポジティブシグナルも得られたが、そ
れらは誤ったポジティブな結果を表すように思われる。しかし、これらのシグナ
ルは、該近接におけるＹＡＣクローンのアラインメントに影響を及ぼさなかった
。すべての入手可能なＳＴＳ／ＳＴＲに加えて、該領域に位置することがわかっ
ているすべてのＹＡＣを最初にテストしたが、ＹＡＣ近接におけるギャップは埋
まらなかった。しかし、これは、８つの選択されたＹＡＣ（下記）の末端配列を
決定することによって、引き続いて達成された。ＹＡＣ近接地図によって提供さ
れたマーカーの順序は、遺伝地図、放射ハイブリッド地図およびＳＴＳ ＹＡＣ
近接地図からの情報をまとめているＷＩ地図によって提供されたマーカーの順序
と完全に一致する（Hudsonら、１９９５）。また、ＭＡＤ３１家族におけるハプ
ロタイプ分析によって示唆されたように、ＹＡＣ近接地図は、ＳＴＲマーカーの
順序を確認する。さらに、ＹＡＣ近接地図は、ＳＴＲマーカーの相対的順序につ
いて追加の情報を提供する。たとえば、Ｄ１８Ｓ５５は、ＹＡＣ９３１-ｇ-１０
には存在するが、９３１-ｆ-１には存在せず（図１４）、ＭＡＤ３１家族におけ
るハプロタイプ分析によって得られた、そのクラスター[Ｓ５５−Ｓ９６９−Ｓ １１１３−Ｓ４６５]からＤ１８Ｓ５５を引き離している。Ｄ１８Ｓ５５の動原 体方向の位置は、周囲のＹＡＣのＳＴＳ／ＳＴＲ含量によって決定される（図１
４）。ハプロタイプのデータとＹＡＣ近接地図を組合わせると、次に示すＳＴＲ
マーカーの順序が得られる：ｃｅｎ−[Ｓ５１−Ｓ６８−Ｓ３４６]−Ｓ５５−[ Ｓ９６９−Ｓ１１１３]−[Ｓ４８３−Ｓ４６５]−Ｓ８７６−Ｓ４７７−Ｓ９７ ９−Ｓ４６６−[Ｓ８１７−Ｓ６１]−ｔｅｌ。
【００３９】 最小被覆経路を同定するために、全近接におよぶ２５個のＹＡＣクローンから
、７つのＹＡＣクローンを選んだ（表４）。これらの７つのＹＡＣクローンは、
正確な第１８染色体の領域の全域を包含する。さらに、ＹＡＣクローンは、非キ
メラ性、すなわち、ヒト第１８染色体由来のフラグメントのみを含むのが好まし
い。キメラ現象の存在を審査するために、これらのＹＡＣの両末端をサブクロー
ニングし、配列決定する（後記）。各配列に対して、プライマーを得、次いで、
単染色体マッピングパネル由来のＤＮＡを、これらのプライマーを用いるＰＣＲ
によって増幅する。後述するように、幾つかのＹＡＣクローンは、ヒト第１８染
色体に加えて、他の染色体由来のフラグメントを含んでいた。 次いで、最小被覆経路を構成している３つのＹＡＣクローンを選んだ（表５）
。これらの３つのＹＡＣクローンは、パルスフィールドゲル電気泳動によって決
定されるように、安定であり、それらのサイズは公表されたサイズに、よく一致
した。制限マッピングのために、これらのＹＡＣクローンを他の宿主酵母菌株に
移し、さらなるサブクローニングを行う。
【００４０】 正確な候補領域を包含するＳＴＳ、ＳＴＲおよびＥＳＴの分析に関する記載 説明： ＳＴＳ：配列タグ部位（sequence tagged site） ＳＴＲ：シンプルタンデム反復（simple tandem repeat） ＥＳＴ：発現配列タグ（expressed sequence tag） これらのマーカーを、動原体から末端小粒の方向へ配置する。効果的にテスト
されたマーカーおよびＹＡＣに作用したマーカーのみが付与される。 リスト：１．Ｄ１８Ｓ６０： データベースＩＤ：ＡＦＭ１７８ＸＥ３（１７８ｘｅ３、Ｚ１６７８１、Ｄ１８
Ｓ６０としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ１６７８１ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ６０）ＤＮＡセグメント
；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ２．ＷＩ−９２２２： データベースＩＤ：ＵＴＲ−０３５４０（Ｇ０６１０１、Ｄ１８Ｓ１０３３、９
２２２としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：GenBank配列から誘導されたプライマー 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｘ６３６５７ 分類記載：ホモサピエンスｆｖｔ１ ｍＲＮＡ ＧＤＢエントリー用サーチ３．ＷＩ−７３３６： データベースＩＤ：ＵＴＲ−０４６６４（Ｐ１５、Ｇ００−６７９−１３５、Ｇ
０６５２７、７３３６、Ｕ０４３１３としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：GenBank配列から誘導されたプライマー 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０６５２７ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ４．ＷＩ−８１４５： データベースＩＤ：ＥＳＴ１０２４４１（Ｄ１８Ｓ１２３４、Ｇ００−６７７−
８２７、Ｇ０６８４５、８１４５、Ｔ４９１５９としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：dbＥＳＴ配列から誘導されたＳＴＳ 染色体：第１８染色体 ：左および右プライマー ＰＣＲ条件 GenBankＩＤ：Ｔ４９１５９ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ｙｂ０９ｅ０７．ｓ１ホモサピエンスｃＤＮＡクローン
７０６９２ ３'はｇｂ：Ｊ０２６８５に類似 UniGene Cluster分類記載：Ａｒｇ−Ｓｅｒｐｉｎ（プラスミノーゲンアクチベ ーターインヒビター２、ＰＡＩ−２）のためのヒトｍＲＮＡ ＧＤＢエントリー用サーチ５．ＷＩ−７０６１： データベースＩＤ：ＵＴＲ−０２９０２（ＰＡＩ２、Ｇ００−６７８−９７９、
Ｇ０６３７７、７０６１、Ｍ１８０８２としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：GenBank配列から誘導されたプライマー 染色体：第１８染色体 ＰＣＲ条件 GenBankＩＤ：Ｇ０６３７７ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ６．Ｄ１８Ｓ６８： データベースＩＤ：ＡＦＭ２４８ＹＢ９（２４８ｙｂ９、Ｚ１７１２２、Ｄ１８
Ｓ６８としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ１７１２２ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ６８）ＤＮＡセグメント
；クローン７．ＷＩ−３１７０： データベースＩＤ：ＭＲ３７２６（Ｄ１８Ｓ１０３７、Ｇ０４２０７、ＨＡＬｄ
２２ｆ２、３１７０としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０４２０７ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ８．ＷＩ−５６５４： データベースＩＤ：ＭＲ１０９０８（Ｄ１８Ｓ１２５９、Ｇ００−６７８−６９
５、Ｇ０５２７８、５６５４としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０５２７８ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ９．Ｄ１８Ｓ５５： データベースＩＤ：ＡＦＭ１２２ＸＣ１（１２２ｘｃ１、Ｚ１６６２１、Ｄ１８
Ｓ５５としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ１６６２１ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ５５）ＤＮＡセグメント
１０．Ｄ１８Ｓ９６９： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｐ１８０９９（Ｇ０８００３、ＣＨＬＣ.ＧＡＴ Ａ６９Ｆ０１、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ６９Ｆ０１.Ｐ１８０９９としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０８００３ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ６９Ｆ０１.Ｐ１８０９９クローンＧ ＡＴＡ６９Ｆ０１１１．Ｄ１８Ｓ１１１３： データベースＩＤ：ＡＦＭ２０００ＶＧ９（Ｄ１８１１１３、２００ｖｇ９、ｗ
２４０３としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 １２．Ｄ１８Ｓ８６８： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｐ８６８（Ｇ０９１５０、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ３ Ｅ１２、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ３Ｅ１２.４９６、ＣＨＬＣ４９６、Ｄ１８Ｓ８６８
としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０９１５０ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ３Ｅ１２.Ｐ６５５３クローンＧＡＴ Ａ３Ｅ１２１３．ＷＩ−９９５９： データベースＩＤ：ＭＲ１２８１６（Ｄ１８Ｓ１２５１、Ｇ００−６７８−５２
４、Ｇ０５４８８、９９５９としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０５４８８ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ１４．Ｄ１８Ｓ５３７： データベースＩＤ：ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ２Ｅ０６.１３（ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ２Ｅ ０６、Ｄ１８Ｓ５３７、ＧＡＴＡ−Ｄ１８Ｓ５３７としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０７９９０ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ２Ｅ０６.Ｐ６００６クローンＧＡＴ Ａ２Ｅ０６ ＧＤＢエントリー用サーチ１５．Ｄ１８Ｓ４８３： データベースＩＤ：ＡＦＭ３２４ＷＣ９（３２４ｗｃ９、Ｚ２４３９９、Ｄ１８
Ｓ４８３としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ２４３９９ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ４８３）ＤＮＡセグメン
ト；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ１６．Ｄ１８Ｓ４６５： データベースＩＤ：ＡＦＭ２６０ＹＨ１（２６０ｙｈ１、Ｚ２３８５０、Ｄ１８
Ｓ４６５としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ２３８５０ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ４６５）ＤＮＡセグメン
ト；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ１７．Ｄ１８Ｓ９６８： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｐ３４２７２（Ｇ１０２６２、ＣＨＬＣ.ＧＡＴ Ａ１１７Ｃ０５、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ１１７Ｃ０５.Ｐ３４２７２としても公知）
ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ１０２６２ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ１１７Ｃ０５.Ｐ３４２７２クローン ＧＡＴＡ１１７Ｃ０５１８．ＧＡＴＡ−Ｐ６０５１： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｐ６０５１（ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ３Ｅ０８、ＣＨ ＬＣ.ＧＡＴＡ３Ｅ０８.Ｐ６０５１としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０９１０４ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ３Ｅ０８.Ｐ６０５１クローンＧＡＴ Ａ３Ｅ０８１９．Ｄ１８Ｓ８７５： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｄ１８Ｓ８７５（Ｇ０８００１、ＣＨＬＣ.ＧＡ ＴＡ５２Ｈ０４、Ｄ１８Ｓ８７５としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０８００１ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ５２Ｈ０４.Ｐ１６１７７クローンＧ ＡＴＡ５２Ｈ０４ ＧＤＢエントリー用サーチ２０．ＷＩ−２６２０： データベースＩＤ：ＭＲ１４３６（Ｇ０３６０２、Ｄ１８Ｓ８９０、ＨＨＡａ１
２ｈ３、２６２０としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０３６０２ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ２１．ＷＩ−４２１１： データベースＩＤ：ＭＲ６６３８（Ｇ０３６１７、Ｄ１８Ｓ９８０、４２１１と
しても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０３６１７ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ２２．Ｄ１８Ｓ８７６： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｄ１８Ｓ８７６（Ｇ０９９６３、ＣＨＬＣ.ＧＡ ＴＡ６１Ｅ１０、Ｄ１８Ｓ８７６としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０９９６３ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ６１Ｅ１０.Ｐ１７７４５クローンＧ ＡＴＡ６１Ｅ１０ ＧＤＢエントリー用サーチ２３．ＧＣＴ３Ｇ０１： データベースＩＤ：ＧＣＴ−Ｐ１０８２５（Ｇ０９４８４、ＣＨＬＣ. ＧＣＴ３
Ｇ０１、ＣＨＬＣ.ＧＣＴ３Ｇ０１.Ｐ１０８２５としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０９４８４ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＣＴ３Ｇ０１.Ｐ１０８２５クローンＧＣＴ ３Ｇ０１２４．ＷＩ−５２８： データベースＩＤ：ＭＨ２３２（Ｇ０３５８９、５２８、Ｄ１８Ｓ８２８として
も公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０３５８９ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ２５．ＷＩ−１７８３： データベースＩＤ：Ｍｒ４３２（Ｇ０３５８７、-ｓｈｕ-３１.Ｓｅｑ．、１７ ８３、Ｄ１８Ｓ８２４としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０３５８７ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ２６．Ｄ１８Ｓ４７７： データベースＩＤ：ＡＦＭ３０１ＸＦ５（３０１ｘｆ５、Ｚ２４２１２、Ｄ１８
Ｓ４７７としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ２４２１２ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ４７７）ＤＮＡセグメン
ト；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ２７．Ｄ１８Ｓ９７９： データベースＩＤ：ＧＡＴＡ−Ｐ２８０８０（Ｇ０８０１５、ＣＨＬＣ.ＧＡＴ Ａ９２Ｃ０８、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ９２Ｃ０８.Ｐ２８０８０としても公知） ソース：ＣＨＬＣ：遺伝マッピングされた多型テトラヌクレオチド反復 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０８０１５ 分類記載：ヒトＳＴＳ ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ９２Ｃ０８.Ｐ２８０８０クローンＧ ＡＴＡ９２Ｃ０８２８．ＷＩ−９３４０： データベースＩＤ：ＵＴＲ−０５１３４（Ｇ０６１０２、Ｄ１８Ｓ１０３４、９
３４０、Ｘ６０２２１としても公知） ソース：ＷＩＣＧＲ：GenBank配列から誘導されたプライマー 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｇ０６１０２ 分類記載：ＷＩＣＧＲ：ランダムゲノムワイドＳＴＳ ＧＤＢエントリー用サーチ２９．Ｄ１８Ｓ４６６： データベースＩＤ：ＡＦＭ０９４ＹＥ５（０９４ｙｅ５、Ｚ２３３５４、Ｄ１８
Ｓ４６６としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ２３３５４ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ４６６）ＤＮＡセグメン
ト；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ３０．Ｄ１８Ｓ１０９２： データベースＩＤ：ＡＦＭＡ１１２ＷＥ９（Ｄ１８Ｓ１０９２、ｗ５３７４、ａ
１１２ｗｅ９としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 ＧＤＢエントリー用サーチ３１．Ｄ１８Ｓ６１： データベースＩＤ：ＡＦＭ１９３ＹＦ８（１９３ｙｆ８、Ｚ１６８３４、Ｄ１８
Ｓ６１としても公知） ソース：Ｊ Weissenbach、Genethon：遺伝マッピングされた多型ＳＴＳ 染色体：第１８染色体 GenBankＩＤ：Ｚ１６８３４ 分類記載：（ＣＡ）反復含有ホモサピエンス（Ｄ１８Ｓ６１）ＤＮＡセグメント
；クローン ＧＤＢエントリー用サーチ
【００４１】 候補領域の正確化に用いたマーカー（ＳＴＲ） 以下に、ＭＡＤ３１において候補領域の正確化に用いたマーカーを示す。これ
らのマーカーの大部分は、前述されており、したがって名称について言及するの
みである。さらなるマーカーについては、ここで情報を記載する。 Ｄ１８Ｓ６８、Ｄ１８Ｓ５５、Ｄ１８Ｓ９６９、Ｄ１８Ｓ１１１３、Ｄ１８Ｓ
４８３、Ｄ１８Ｓ４６５、Ｄ１８Ｓ８７６、Ｄ１８Ｓ４７７、Ｄ１８Ｓ９７９、
Ｄ１８Ｓ４６６およびＤ１８Ｓ６１についてのデータは、すでに示した。 新規データ：１．Ｄ１８Ｓ５１： 他の名称：ＵＴ５７４（Ｄ１８Ｓ３７９） プライマー配列： ２．Ｄ１８Ｓ３４６： 他の名称：ＵＴ５７５ プライマーペア： ３．Ｄ１８Ｓ８１７： 他の名称：ＵＴ６３６５ プライマーペア：
【００４２】 ＹＡＣの特徴付け 候補領域および隣接するｇａｐを含む８つのＹＡＣを選択した。インバース−
ＰＣＲプロトコルによって末端配列を決定することにより、これらのＹＡＣをさ
らに特徴付けした。 選ばれたＹＡＣは、９６１-ｈ-９、９４２-ｃ-３、７６６-ｆ-１２、７３１- ｃ-７、９０７-ｅ-１、７５２−ｇ−８、７１７-ｄ-３および７４５-ｄ-２であ る。 末端配列に基く新規ＳＴＳ（他に特記しない限り、ＳＴＳは、ＹＡＣのキメラ
性を同定するためのモノ染色体マッピングパネルでテストした；ＳＴＳが１８ｑ
−キメラＹＡＣ−でないものにヒットする場合、以下に示す）：１．ＳＶ３２Ｌ ＹＡＣ７４５-ｄ-２左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１０７塩基対（ｂｐ） このＳＴＳは、モノ染色体マッピングパネルに明確なヒットはない。２．ＳＶ３２Ｒ ＹＡＣ７４５-ｄ-２右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１２７ｂｐ このＳＴＳは、モノ染色体マッピングパネルに明確なヒットはない。３．ＳＶ１１Ｌ ＹＡＣ７６６-ｆ-１２左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１１８ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットし、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ−ｐ６０５１とＤ １８Ｓ９６８の間に配置される。４．ＳＶ１１Ｒ ＹＡＣ７６６-ｆ-１２右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１１９ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットし、Ｄ１８Ｓ８７６とＧＣＴ３Ｇ０１の間
に配置される。５．ＳＶ３４Ｌ ＹＡＣ７１７-ｄ-３左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：９８ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットする。６．ＳＶ３４Ｒ ＹＡＣ７１７-ｄ-３右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：２４４ｂｐ このＳＴＳは、第１染色体にヒットするので、ＹＡＣ７１７-ｄ-３はキメラであ
る。７．ＳＶ２５Ｌ ＹＡＣ７３１-ｃ-７左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：７２ｂｐ このＳＴＳは、モノ染色体マッピングパネルに明確なヒットはない。８．ＳＶ２５Ｒ ＹＡＣ７３１-ｃ-７右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１３６ｂｐ このＳＴＳは、第７染色体にヒットするので、ＹＡＣ７３１-ｃ-７はキメラであ
る。９．ＳＶ３１Ｌ ＹＡＣ７５２-ｇ-８左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１７８ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットし、Ｄ１８Ｓ８７６とＧＣＴ３Ｇ０１の間
に配置される。１０．ＳＶ３１Ｒ ＹＡＣ７５２-ｇ-８右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１３１ｂｐ このＳＴＳは、モノ染色体マッピングパネルに明確なヒットはなく、ＹＡＣのキ
メラ性に関する情報をもたらさない。１１．ＳＶ１０Ｌ ＹＡＣ９４２-ｃ-３左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１３０ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットし、ＣＨＬＣ.ＧＡＴＡ−ｐ６０５１とＤ １８Ｓ９６８の間に配置される。１２．ＳＶ１０Ｒ ＹＡＣ９４２-ｃ-３右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１３５ｂｐ このＳＴＳは、第１８染色体にヒットし、Ｄ１８Ｓ８７６とＧＣＴ３Ｇ０１の間
に配置される。１３．ＳＶ６Ｌ ＹＡＣ９６１-ｈ-９左アーム末端配列から誘導 この配列は公知のＳＴＲマーカーＤ１８Ｓ４２と同一であり、この領域にマッピ
ングされているので、プライマーは作成しなかった。 増幅された配列長さ： ＳＶ６Ｌは、Ｄ１８Ｓ４２を認識するのでＷＩ−７３３６とＷＩ−８１４５の間
に配置される。１４．ＳＶ６Ｒ ＹＡＣ９６１-ｈ-９右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１２２ｂｐ ＳＶ６Ｒは、第１８染色体上のセグメントを増幅する。このセグメントはＷＩ−
２６２０とＷＩ−４２１１の間に配置される。１５．ＳＶ２６Ｌ ＹＡＣ９０７-ｅ-１左アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：１５４ｂｐ このＳＴＳは、第１３染色体にヒットするので、ＹＡＣ９０７-ｅ-１はキメラで
ある。１６．ＳＶ２６Ｒ ＹＡＣ９０７-ｅ-１右アーム末端配列から誘導 増幅された配列長さ：９０ｂｐ このＳＴＳは、モノ染色体マッピングパネルに明確なヒットはなく、ＹＡＣのこ
のサイドのキメラ性に関する情報をもたらさない。
【００４３】 他のＹＡＣにおけるギャップに隣接する３末端配列のテスト：以下の表３にお
いて、ギャップの反対側のＹＡＣをより明確に同定するために、ＳＴＳ−マーカ
ーＷＩ−４２１１、Ｄ１８Ｓ８７６およびＧＣＴ３Ｇ０１も示す。
【表３】 ＋：明確なヒット／−：ヒット無し／？：明確なヒットが予想される（マーカー
の仮定の順序において）が、しかしヒットが観察されないという２例があった。
この理由は不明である。
【００４４】 ＹＡＣ７４５-ｄ-２は、第１８染色体に明確なヒットがなかったので、さらに
次の分析は行わなかった。以下の表４に示されるように、モノ染色体マッピング
パネルにおいて残った７つのうち、３つがキメラであり、４つが非キメラである
ことが決定された。
【表４】 非キメラＹＡＣについて、ギャップに隣接する１４個のＹＡＣにおいて、ギャ
ップに隣接する末端配列に基いたＳＴＳ（１０Ｒ、１１Ｒ、３１Ｌ）をテストし
た。ギャップの反対側のＹＡＣ間のオーバーラップを実証した：たとえば、“１
１Ｒ”末端配列（７６６-ｆ-１２）は、ＹＡＣ７６６-ｆ-１２およびＹＡＣ９０
７-ｅ-１を検出する。次いで、最小被覆経路となるようにＹＡＣを選択する。
【表５】 ＰＦＧＥによって審査したように、これらの３つのＹＡＣは安定であり、それ
らのサイズは公表されたサイズにおおよそ一致する。制限マッピングのために、
これらのＹＡＣを他の宿主酵母菌株に移した。
【００４５】実験例２ フラグメント形成ベクターの構築 リシン２および末端小粒配列を運搬するｐＢＬＣ８．１の４．５ｋｂのＥｃｏ
ＲＩ／ＳａｌＩフラグメント（Lewisら、１９９２）を、ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ で切断されたＧＥＭ３ｚｆ（−）へ指向的にクローニングした。続いて、末端レ
スキュー部位をＥｃｏＲＩ部位にライゲートした。ここで、２つのオリゴヌクレ
オチド（鎖１：５’−ＴＴＣＧＧＡＴＣＣＧＧＴＡＣＣＡＴＣＧＡ−３’および
鎖２：３’−ＧＣＣＴＡＧＧＣＣＡＴＧＧＴＡＧＣＴＡＴＴ−５’）を、部分（
ｄＡＤＰ）充填ＥｃｏＲＩ部位へライゲートし、ベクターｐＤＦ１を作成した。
２１ｂｐおよび３０ｂｐのＣＡＧ／ＣＴＧアダプターをｐＤＦ１のクレノウ充填
ＰｓｔＩ部位にクローニングすることによって、トリプレット反復を含むフラグ
メント形成ベクターを構築した。形質転換および選択の結果、末端小粒に対して
反復配列５’から３’の配向をもつ（ＣＡＧ）7および（ＣＴＧ）10フラグメン ト形成ベクターが得られた。
【００４６】酵母形質転換 直線（ＳａｌＩで切断）ベクターを用い、ＬｉＡｃ法を用いて、ＹＡＣクロー
ン９６１-ｈ-９、７６６-ｆ-１２または９０７-ｅ-１を形質転換した。形質転換
後、ＹＡＣクローンをＳＤＬｙｓ-プレートに植え、フラグメント形成ベクター の存在について選択した。２〜３日後、コロニーをＳＤＬｙｓ-−Ｔｒｐ―−Ｕ ｒａ-プレートおよびＳＤＬｙｓ-−Ｔｒｐ―−Ｕｒａ+プレートに植えた。ＳＤ Ｌｙｓ-−Ｔｒｐ―−Ｕｒａ+プレートでは成長するがＳＤＬｙｓ-−Ｔｒｐ―− Ｕｒａ-プレートでは成長しないコロニーはフラグメント化されたＹＡＣを含ん だ。
【００４７】フラグメント化ＹＡＣの分析 正しい表現型をもつクローンから単離された酵母ＤＮＡを、パルスフィールド
電気泳動（ＰＦＧＥ）、次いで、ブロッティングならびにＬｙｓ２遺伝子とのハ
イブリッド形成によって分析し、フラグメント化ＹＡＣのサイズを長さが公知の
ＤＮＡスタンダードとの比較によって評価した。
【００４８】末端レスキュー 主要ＣＡＧまたはＣＴＧトリプレット反復の存在の指標である、他のフラグメ
ント化ＹＡＣと共通するサイズを特徴とするフラグメント化ＹＡＣを酵素の１つ
で末端レスキュー部位から切断し、ライゲートし、大腸菌の形質転換に用いた。
形質転換した細菌が成長した後、プラスミドＤＮＡを単離し、単離されたトリヌ
クレオチドに隣接する配列に対応する、フラグメント化ＹＡＣの末端の配列決定
を行った。 配列決定により、長さが等しいフラグメント化ＹＡＣがすべて同じ部位でフラ
グメント化されていることが明らかになった。GenBankデータベースのＢＬＡＳ Ｔサーチを同定した配列で行って、公知の配列との相同性を同定した。フラグメ
ント化ＹＡＣのＣＡＧまたはＣＴＧ反復を含む完全配列を、配列特異的プライマ
ーおよびスプライスプライマーを用いるコスミドシーケンシング（Fuentesら、 １９９２、Hum.Genet.１０１：３４６−３５０）、または“ゲノムウォーカー”
キット（Chlontech Laboratories、パロアルト、ＵＳＡ）を用いることによって
得、Siebertら、Nucleic Acid Res（１９９５）、２３（６）：１０８７−１０ ８８およびSiebertら、１９９５、CLONTECHniques、Ｘ（ＩＩ）：１−３に記載 した。
【００４９】結果 ＹＡＣ９６１-ｈ-９を（ＣＡＧ）7または（ＣＴＧ）10フラグメント形成ベク ターで形質転換した。ＣＴＧベクターは、ＣＴＧ反復の存在を明らかにしなかっ
た。１２個の（ＣＡＧ）7フラグメント化ＹＡＣの分析により、これらのうち５ 個が、同じ約１００ｋｂのサイズをもつことが明らかになった。ＥｃｏＲＩで末
端レスキューを行い、これらのフラグメントのうち３個の配列決定から、それら
がすべて図１５ａにおいて斜体で示す末端配列を共有していることが明らかにな
った。この配列で行ったGenBankデータベースのＢＬＡＳＴサーチにより、ＣＡ Ｐ２遺伝子（GenBank受託番号：Ｌ４０３７７）との配列相同性が示された。図 １５ａに示すＣＡＧ反復を含む配列は、コスミドシーケンシングとゲノムウォー
カーシーケンシングの両方によって得られた。該配列は、ＳＴＳ含量マッピング
によって、マーカーＤ１８Ｓ６８とＷＩ−３１７０の間に配置された。
【００５０】 （ＣＡＧ）7または（ＣＴＧ）10フラグメント形成ベクターを用いてＹＡＣ７ ６６-ｆ-１２をフラグメント化した。再び（ＣＴＧ）10は、ＣＴＧ反復の存在を
明らかにしなかった。２０個の（ＣＡＧ）7フラグメント化ＹＡＣの分析により 、同じサイズをもつ２つのグループのフラグメントの存在が明らかになった：約
６５０ｋｂの５個と約５０ｋｂの２個。 ４個の６５０ｋｂのフラグメント化ＹＡＣにおいてＥｃｏＲＩを用いて末端レ
スキューを行った。配列決定から、それらがすべて図１５ａにおいて斜体で示す
末端配列を特徴とする同一の３’末端を共有していることが確認された。ＢＬＡ
ＳＴサーチから、この配列とＡｌｕ反復配列ファミリーとの相同性が明らかにな
った。図１６ａに示すＣＡＧ反復を含む配列は、コスミドシーケンシングによっ
て得られた。該配列は、ＹＡＣ近接地図上のＳＴＳ含量マッピングによって、マ
ーカーＷＩ−２６２０とＷＩ−３１７０の間に配置された。 ５０ｋｂの２つのフラグメントにおいても末端レスキューを行った。配列決定
から、図１７ａにおいて斜体で示す末端配列が明らかになった。ＢＬＡＳＴサー
チから、いずれかの公知の配列との相同性が明らかになった。コスミドシーケン
シングにより、図１７ａに示すＣＡＧ反復を含む完全配列が同定された。該配列
は、ＹＡＣ近接地図上のＳＴＳ含量マッピングによって、マーカーＤ１８Ｓ９６
８とＤ１８Ｓ８７５の間に配置された。
【００５１】 （ＣＡＧ）7または（ＣＴＧ）10フラグメント形成ベクターを用いてＹＡＣ９ ０７-ｅ-１を形質転換した。（ＣＴＧ）7は、ＣＡＧ反復の存在を明らかにしな かった。２６個の（ＣＴＧ）10フラグメント化ＹＡＣの分析により、これらのう
ち２１個が、同じ約９００ｋｂのサイズをもつことが明らかになった。このサイ
ズの３個のフラグメント化ＹＡＣにおいてＫｐｎＩを用いて末端レスキューを行
った。配列決定から、図１８ａにおいて斜体で示すヌクレオチド配列が明らかに
なった。ＢＬＡＳＴサーチにより、この配列とＧＣＴ３Ｇ０Ｉマーカー（GenBan
k受託番号：Ｇ０９４８４）との相同性の存在が示された。ＣＴＧ反復を含む配 列は、GenBankデータベースから得た。該配列は、マーカー１０ＲとＷＩ−５２ ８の間に配置された。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＹＡＣ７６６-ｆ-１２の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す
。
【図２】 ＹＡＣ７６６-ｆ-１２の右腕末端配列のヌクレオチド配列を示す
。
【図３】 ＹＡＣ７１７-ｄ-３の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図４】 ＹＡＣ７１７-ｄ-３の右腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図５】 ＹＡＣ７３１-ｃ-７の右腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図６】 ＹＡＣ７５２-ｇ-８の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図７】 ＹＡＣ９４２-ｃ-３の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図８】 ＹＡＣ９４２-ｃ-３の右腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図９】 ＹＡＣ９６１-ｈ-９の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す。
【図１０】 ＹＡＣ９６１-ｈ-９の右腕末端配列のヌクレオチド配列を示す
。
【図１１】 ＹＡＣ９０７-ｅ-１の左腕末端配列のヌクレオチド配列を示す
。
【図１２】 ＭＡＤ３１家族の家系図を示す。
【図１３】 ＭＡＤ３１家族のハプロタイプ分析を示す。冒された個体は、
黒ひし形で表し、白ひし形は、最後の精神医学的評価において無症候性であった
個体を表す。濃灰色のバーは、組換え体であるかどうか推論不可能であるマーカ
ーを表す。
【図１４】 多型マーカーＤ１８５６０とＤ１８５６１との間のヒト第１８
染色体の領域のＹＡＣ近接地図を示す。
【図１５】 （ａ）９６１-ｈ-９から単離されたＹＡＣ ＣＡＧ反復（太字
）および周辺ヌクレオチド配列を示す。斜体の配列は、ＹＡＣフラグメントのエ
ンド・レスキューから誘導される。（ｂ）配列中のトリヌクレオチド反復の大き
さを決定するのに用いることができるＰＣＲプライマーである。
【図１６】 （ａ）７６６-ｆ-１２から単離されたＹＡＣ ＣＡＧ反復（太
字）および周辺ヌクレオチド配列を示す。斜体の配列は、ＹＡＣフラグメントの
エンド・レスキューから誘導される。（ｂ）配列中のトリヌクレオチド反復の大
きさを決定するのに用いることができるＰＣＲプライマーである。
【図１７】 （ａ）７６６-ｆ-１２から単離されたＹＡＣ ＣＡＧ反復（太
字）および周辺ヌクレオチド配列を示す。斜体の配列は、ＹＡＣフラグメントの
エンド・レスキューから誘導される。（ｂ）配列中のトリヌクレオチド反復の大
きさを決定するのに用いることができるＰＣＲプライマーである。
【図１８】 （ａ）９０７-ｅ-１から単離されたＹＡＣ ＣＡＧ反復（太字
）および周辺ヌクレオチド配列を示す。斜体の配列は、ＹＡＣフラグメントのエ
ンド・レスキューから誘導される。（ｂ）配列中のトリヌクレオチド反復の大き
さを決定するのに用いることができるＰＣＲプライマーである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ユルヘン・デル−ファフェロ ベルギー、ベー−3300ティーネン、オール ベークセステーンウェッヒ149番 Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA01 DA12 GA11 HA11 4B063 QA08 QQ02 QQ42 QR32 QS32 QX01 4B065 AA72X AA93Y AB01 AC20 BA02 CA24 CA46 4C084 AA02 AA07 NA14 ZA022 4H045 AA10 BA10 CA40 EA50 FA74

Claims (47)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 少なくとも１つの、気分障害または関連障害に関連するヒト
    遺伝子（その突然変異および多型変異体を含む）を同定するための、多型マーカ
    ーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の間に位置するヒト染色体１８ｑの８．９ｃＭ
    領域またはそのフラグメントの使用。
  2. 【請求項２】 少なくとも１つの、気分障害または関連障害に関連するヒト
    遺伝子（その突然変異および多型変異体を含む）を同定するための、多型マーカ
    ーＤ１８Ｓ６０と１８Ｓ６１の間に配置されたヒト染色体１８ｑの一部分を含む
    ＹＡＣクローンの使用。
  3. 【請求項３】 該一部分が、多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の
    間に位置するヒト染色体１８ｑの領域を含む請求項２に記載の使用。
  4. 【請求項４】 該ＹＡＣクローンが、９６１-ｈ-９、９４２-ｃ-３、７６６ - ｆ-１２、７３１-ｃ-７、９０７-ｅ-１、７５２−ｇ−８または７１７-ｄ-３で
    ある請求項２または３に記載の使用。
  5. 【請求項５】 該ＹＡＣクローンが、９６１-ｈ-９、７６６-ｆ-１２または
    ９０７-ｅ-１である請求項４に記載の使用。
  6. 【請求項６】 気分障害または関連障害が、“精神障害の診断および統計的
    マニュアル第４版”（ＤＳＭ−ＩＶ）分類から選ばれ、気分障害（２９６．ＸＸ
    、３００．４、３１１、３０１．１３、２９５．７０）、精神分裂病および関連
    障害（２９５、２９７．１、２９８．９、２９７．３、２９８．９）、不安障害
    （３００．ＸＸ、３０９．８１、３０８．３）、適応障害（３０９．ＸＸ）およ
    び人格異常（３０１．ＸＸ）を包含する、前記請求項のいずれかに記載の使用。
  7. 【請求項７】 多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の間に位置する
    ヒト染色体１８ｑの領域におけるトリヌクレオチド反復伸張を検出することを特
    徴とする、気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つのヒト遺伝子（突
    然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法。
  8. 【請求項８】 請求項２〜４のいずれか１つに記載のＹＡＣクローンのフラ
    グメント化を特徴とする、気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つの
    ヒト遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法。
  9. 【請求項９】 該トリプレット反復が、ＣＡＧまたはＣＴＧである請求項７
    または８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 該トリプレット反復が、少なくとも５つのＣＴＧおよび／
    またはＣＡＧ反復を含むプローブの手段によって検出される請求項９に記載の方
    法。
  11. 【請求項１１】 気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つのヒト
    遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法であって、該遺伝
    子が請求項２〜５のいずれか１つに記載のＹＡＣクローンに含まれるＤＮＡに存
    在し、少なくとも８つの連続グルタミン残基のストリングを含むアミノ酸配列を
    もつタンパク質を認識することができる抗体を用いて遺伝子の発現産物を検出す
    るステップを特徴とする方法。
  12. 【請求項１２】 該ＤＮＡが、ヒトｃＤＮＡ発現ライブラリーの部分を形成
    する請求項１１に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 該抗体が、ｍＡＢ １Ｃ２である請求項１１または１２に
    記載の方法。
  14. 【請求項１４】 多型マーカーＤ１８Ｓ６０と１８Ｓ６１の間に配置された
    ヒト染色体１８ｑの領域のＹＡＣクローンの近接地図の構築方法であって、 （ａ）請求項２〜５のいずれか１つに記載のＹＡＣクローンをエクソントラッ
    プベクターにサブクローニングし； （ｂ）図１から１１のいずれか１つに示すヌクレオチド配列または本明細書に
    記載したＹＡＣクローン近接からのいずれかの他の公知の配列タグ配列、または
    １４以下でない隣接する塩基からなるその一部またはその相補体を用いて、コス
    ミドベクター間のオーバーラップを検出し；次いで （ｃ）該領域のＹＡＣクローンのコスミド近接地図を構築する ステップを特徴とする方法。
  15. 【請求項１５】 気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つのヒト
    遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法であって、 （ａ）哺乳類細胞を前述のように調製およびマッピングされたエクソントラッ
    プコスミドベクターでトランスフェクトし； （ｂ）該哺乳類細胞を適当な培地中で培養し； （ｃ）ＳＶ４０プロモーターから発現されたＲＮＡ転写物を単離し； （ｄ）該ＲＮＡ転写物からＤＮＡを調製し； （ｅ）該エクソントラップコスミドベクターにサブクローニングされたＤＮＡ
    のエクソンに関与するスプライシングを同定して、該サブクローニングされたＤ
    ＮＡにおけるコーディング領域の位置を解明し； （ｆ）該コーディング領域と気分障害または関連障害に苦しんでいる人由来の
    ＤＮＡにおける相当する領域との間の相異を検出し；次いで （ｇ）気分障害または関連障害に関連する、該遺伝子またはその突然変異体も
    しくは多型変異体を同定する ステップを特徴とする方法
  16. 【請求項１６】 気分障害または関連障害に関連する少なくとも１つのヒト
    遺伝子（突然変異体およびその多型変異体を含む）の同定方法であって、 （ａ）請求項２〜５のいずれか１つに記載のＹＡＣクローンをコスミド、ＢＡ
    Ｃ、ＰＡＣまたは他のベクターにサブクローニングし； （ｂ）図１から１１に示すヌクレオチド配列または本明細書において記載した
    ＹＡＣクローン近接からのいずれかの他の公知の配列タグ配列、または１４以下
    でない隣接する塩基からなるその一部またはその相補体を用いて、サブクローン
    間のオーバーラップを検出してその地図を構築し； （ｃ）ＣｐＧアイランド同定、ズー・ブロッティング、サブクローニングされ
    たＤＮＡのｃＤＮＡライブラリーへのハイブリダイゼーションまたは培養細胞系
    のパネルからのｍＲＮＡのノーザン・ブロットのうちの１つまたはそれ以上によ
    ってサブクローニングされたＤＮＡ内の遺伝子の位置を同定し； （ｄ）該遺伝子と気分障害または関連障害に苦しむ個体のＤＮＡの相当する領
    域との間の相異を検出し；次いで （ｅ）該気分障害または関連障害に関連する該遺伝子を同定する； ステップを特徴とする方法。
  17. 【請求項１７】 請求項７〜１３、１５または１６のいずれかに記載の方法
    によって得られる、気分障害または関連障害に関連する単離されたヒト遺伝子（
    突然変異体およびその多型変異体を含む）。
  18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の遺伝子の発現産物である気分障害また
    は関連障害に関連するヒトタンパク質。
  19. 【請求項１９】 請求項７〜１３、１５または１６のいずれかに記載の方
    法によって得られる請求項１８に記載のタンパク質をコードするｃＤＮＡ。
  20. 【請求項２０】 気分障害または関連障害に関連する病原性突然変異または
    遺伝性変異をもつ患者患者および対照個体からのサンプルと、請求項１９のｃＤ
    ＮＡの少なくとも１４個の近接ヌクレオチドまたはその相補体からなるプローブ
    をハイブリダイズすることを特徴とする検出方法における該プローブの使用。
  21. 【請求項２１】 、図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つ
    に示されるヌクレオチド配列を特徴とする核酸分子。
  22. 【請求項２２】 トリヌクレオチド反復の大きさにおいてのみ図１５ａ、１
    ６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示されるヌクレオチド配列とは相異
    するヌクレオチド配列を特徴とする核酸分子。
  23. 【請求項２３】 請求項２１に記載の核酸分子によってコードされるタンパ
    ク質。
  24. 【請求項２４】 請求項２２に記載の核酸分子によってコードされるタンパ
    ク質。
  25. 【請求項２５】 多型マーカーＤ１８Ｓ６８とＤ１８Ｓ９７９の間に位置す
    るヒト染色体１８ｑの領域における気分障害または関連障害に関連するＤＮＡ多
    型の存在について、個体からのサンプルを分析することを特徴とする、気分障害
    または関連障害に対する該個体の罹病性を決定する方法。
  26. 【請求項２６】 ＤＮＡ多型がトリヌクレオチド反復の範囲である請求項２
    ５記載の方法。
  27. 【請求項２７】 該トリヌクレオチド反復の範囲が、トリヌクレオチド反復
    の範囲においてのみ図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示
    されるヌクレオチド配列とは相異するヌクレオチド配列に含まれる、請求項２６
    に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 請求項２６または２７に記載の方法であって、 ａ）個体からＤＮＡサンプルを得； ｂ）図１５ａ、１６ａ、１７ａまたは１８ａのいずれか１つに示される配列に
    含まれるヌクレオチド配列の増幅に適した、該配列に含まれるトリヌクレオチド
    反復に隣接するプライマーを提供し； ｃ）該プライマーを該ＤＮＡに適用して増幅反応を行い； ｄ）対照個体からのＤＮＡサンプルにおいて該増幅反応を行い；次いで ｅ）該個体と該対照個体について増幅反応の結果を比較する [ここで、対照個体由来の増幅フラグメントよりも大きいサイズの個体由来の増 幅フラグメントの存在は、気分障害または関連障害に対する該個体の罹病性の存
    在の指標である] ステップを特徴とする方法。
  29. 【請求項２９】 増幅される該ヌクレオチド配列が図１５ａに示される配列
    に含まれ、該プライマーが図１５ｂに示される配列をもつ、請求項２８に記載の
    方法。
  30. 【請求項３０】 増幅される該ヌクレオチド配列が図１６ａに示される配列
    に含まれ、該プライマーが図１６ｂに示される配列をもつ、請求項２８に記載の
    方法。
  31. 【請求項３１】 増幅される該ヌクレオチド配列が図１７ａに示される配列
    に含まれ、該プライマーが図１７ｂに示される配列をもつ、請求項２８に記載の
    方法。
  32. 【請求項３２】 増幅される該ヌクレオチド配列が図１８ａに示される配列
    に含まれ、該プライマーが図１８ｂに示される配列をもつ、請求項２８に記載の
    方法。
  33. 【請求項３３】 気分障害または関連障害に対する個体の罹病性を決定する
    方法であって、 ａ）個体からタンパク質サンプルを得；次いで ｂ）請求項２４に記載のタンパク質の存在を検出する [ここで、該タンパク質の存在は、気分障害または関連障害に対する該個体の罹 病性の存在の指標である] ステップを特徴とする方法。
  34. 【請求項３４】 該タンパク質が、少なくとも８つの連続グルタミン残基の
    ストリングを認識することができる抗体によって検出される請求項３３に記載の
    方法。
  35. 【請求項３５】 該抗体が、ｍＡＢ １Ｃ２である請求項３４に記載の方法
    。
  36. 【請求項３６】 気分障害または関連障害の治療において医薬として使用す
    るための請求項２１に記載の核酸。
  37. 【請求項３７】 気分障害または関連障害の治療において医薬として使用す
    るための請求項２３に記載のタンパク質。
  38. 【請求項３８】 請求項２１に記載の核酸および医薬的に許容しうる単タン
    パク質にを含む医薬組成物。
  39. 【請求項３９】 請求項２２に記載のタンパク質および医薬的に許容しうる
    単タンパク質にを含む医薬組成物。
  40. 【請求項４０】 請求項２１または２２に記載のヌクレオチド配列を含む発
    現ベクター。
  41. 【請求項４１】 リポーター遺伝子の発現がプロモーター領域によってコン
    トロールされるように、リポーター分子をコードするリポーター遺伝子の上流に
    、請求項２１または２２に記載の核酸分子のプロモーター領域を含むプラスミド
    。
  42. 【請求項４２】 請求項４０に記載の発現ベクターをトランスフェクトされ
    た細胞系。
  43. 【請求項４３】 請求項２３または２４に記載のタンパク質をコードするト
    ランスジーンを含む真核細胞または多細胞組織もしくは生物体。
  44. 【請求項４４】 化合物が、気分障害または関連障害に関連する遺伝子の発
    現のエンハンサーまたはインヒビターであるかどうかの決定方法であって、 ａ）請求項４２に記載の細胞を該化合物と接触させ； ｂ）請求項２１または２２に記載の核酸に対応するいずれかのｍＲＮＡ転写物
    の存在を検出および／または量的に評価し；次いで ｃ）該核酸の転写のレベルと該化合物に接触させていない請求項４２に記載の
    細胞内における同じ核酸の転写のレベルとを比較する ステップを特徴とする方法。
  45. 【請求項４５】 化合物が、気分障害または関連障害に関連する遺伝子の発
    現のエンハンサーまたはインヒビターであるかどうかの決定方法であって、 ａ）請求項４２に記載の細胞を該化合物と接触させ； ｂ）請求項２３または２４に記載のタンパク質の発現を検出および／または量
    的に評価し；次いで ｃ）該タンパク質の発現のレベルと該化合物に接触させていない細胞内におけ
    る同じタンパク質の発現のレベルとを比較する ステップを特徴とする方法。
  46. 【請求項４６】 化合物が、気分障害または関連障害に関連する遺伝子の発
    現のエンハンサーまたはインヒビターであるかどうかの決定方法であって、 ａ）請求項４１に記載のリポータープラスミドにトランスフェクトさせた細胞
    を該化合物と接触させ； ｂ）発現されたリポーター分子の量を検出または量的に評価し；次いで ｃ）該量と該化合物に接触させていないリポータープラスミドを含む細胞にお
    ける該リポーター分子の発現量とを比較する ステップを特徴とする方法。
  47. 【請求項４７】 請求項４４殻６に記載の方法によって、気分障害または関
    連障害に関連する遺伝子の発現のエンハンサーまたはインヒビターとして同定さ
    れた化合物。
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