JP3925872B2 - 連続的マクロポーラス有機マトリックスを使用するクロマトグラフ法および装置 - Google Patents
連続的マクロポーラス有機マトリックスを使用するクロマトグラフ法および装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3925872B2 JP3925872B2 JP51965397A JP51965397A JP3925872B2 JP 3925872 B2 JP3925872 B2 JP 3925872B2 JP 51965397 A JP51965397 A JP 51965397A JP 51965397 A JP51965397 A JP 51965397A JP 3925872 B2 JP3925872 B2 JP 3925872B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- matrix
- pores
- ligand
- emulsion
- column
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims description 114
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims description 10
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 50
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 44
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 31
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 26
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 24
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 23
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 10
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical group C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 20
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical group C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 6
- 229920001903 high density polyethylene Polymers 0.000 description 6
- 239000004700 high-density polyethylene Substances 0.000 description 6
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 6
- 239000003361 porogen Substances 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 3
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012662 bulk polymerization Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1,1,1-trifluorobutane Chemical compound FC(F)(F)CCCBr DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYGWHHGCAGTUCH-ISLYRVAYSA-N V-65 Substances CC(C)CC(C)(C#N)\N=N\C(C)(C#N)CC(C)C WYGWHHGCAGTUCH-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Substances CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMZGPNHSPWNGEP-UHFFFAOYSA-N octadecyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C(C)=C HMZGPNHSPWNGEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 2
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CKNCWKZXMOTPTD-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,10,10,10-hexadecafluorodecyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)CCC(F)(F)F CKNCWKZXMOTPTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSOOIVBINKDISP-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methylprop-2-enoyloxy)butyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OC(CCC)OC(=O)C(C)=C HSOOIVBINKDISP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGBWMWKMTUSNKE-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methylprop-2-enoyloxy)hexyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCCCCC(OC(=O)C(C)=C)OC(=O)C(C)=C OGBWMWKMTUSNKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZJQCUDHKUWEFU-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpentanenitrile Chemical compound CCCC(C)(C)C#N TZJQCUDHKUWEFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-cyano-4-methylpentan-2-yl)diazenyl]-2,4-dimethylpentanenitrile Chemical compound CC(C)CC(C)(C#N)N=NC(C)(C#N)CC(C)C WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUIWJRYTWUGOOF-UHFFFAOYSA-N 2-ethenoxyethanol Chemical compound OCCOC=C VUIWJRYTWUGOOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- QMMRCKSBBNJCMR-KMZPNFOHSA-N Angiotensin III Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 QMMRCKSBBNJCMR-KMZPNFOHSA-N 0.000 description 1
- 102400000344 Angiotensin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800000734 Angiotensin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102400000348 Angiotensin-3 Human genes 0.000 description 1
- 101800000738 Angiotensin-3 Proteins 0.000 description 1
- 238000004438 BET method Methods 0.000 description 1
- 239000004342 Benzoyl peroxide Substances 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWBYJJWSNXDRCJ-UHFFFAOYSA-N C=CC1C=CNC1=O Chemical compound C=CC1C=CNC1=O TWBYJJWSNXDRCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 239000012028 Fenton's reagent Substances 0.000 description 1
- PDLGMYVCPJOYAR-DKIMLUQUSA-N Glu-Leu-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PDLGMYVCPJOYAR-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 229920001311 Poly(hydroxyethyl acrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane trimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC(CC)(COC(=O)C(C)=C)COC(=O)C(C)=C OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000002009 alkene group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N angiotensin I Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 ORWYRWWVDCYOMK-HBZPZAIKSA-N 0.000 description 1
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 235000019400 benzoyl peroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMSCBRSQMRDRCD-UHFFFAOYSA-N dodecyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOC(=O)C(C)=C GMSCBRSQMRDRCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical group CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940094933 n-dodecane Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- -1 perfluoroalkyl acrylate Chemical compound 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L persulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])OOS(=O)(=O)[O-] JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001612 separation test Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- PUVAFTRIIUSGLK-UHFFFAOYSA-M trimethyl(oxiran-2-ylmethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CC1CO1 PUVAFTRIIUSGLK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
- 229920003170 water-soluble synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/282—Porous sorbents
- B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
- B01J20/261—Synthetic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
- B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
- B01J20/267—Cross-linked polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28078—Pore diameter
- B01J20/28085—Pore diameter being more than 50 nm, i.e. macropores
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28095—Shape or type of pores, voids, channels, ducts
- B01J20/28097—Shape or type of pores, voids, channels, ducts being coated, filled or plugged with specific compounds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
- B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
- B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
- B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
- B01J20/3212—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/32—Bonded phase chromatography
- B01D15/325—Reversed phase
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/32—Bonded phase chromatography
- B01D15/325—Reversed phase
- B01D15/327—Reversed phase with hydrophobic interaction
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/80—Aspects related to sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J2220/82—Shaped bodies, e.g. monoliths, plugs, tubes, continuous beds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N2030/524—Physical parameters structural properties
- G01N2030/528—Monolithic sorbent material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
- G01N2030/8827—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
- G01N2030/8831—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving peptides or proteins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
【0001】
本発明は、液体サンプル中の一つまたはいくつかの有機物質を、クロマトグラフ装置に該サンプル物質を通すことにより分離するクロマトグラフ法、およびその分離のためのクロマトグラフ装置に関する。特に、本発明は、クロマトグラフ装置での分離法および連続的マクロポーラス有機マトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置に関する。分離媒体は、高内相エマルジョン系の重合によって製造する。
【0002】
現代のバイオ技術で広く使用されている分離技術の通常の型は、カラムクロマトグラフィーである。クロマトグラフ分離は、粒状ビーズから成るマトリックスを充填したカラムに液体を通すことにより行う。例えば種々のタンパク質の混合物であり得るサンプルをカラムの上から導入すると、カラムの中を流れとともに移動する。タンパク質または物質は、性質、例えば電荷、大きさ、疎水性などが異なるため、異なって遅延され、従って分離されるようにマトリックス上で遅延される。
【0003】
分離は、迅速で、しかも異なる物質の互いの分解が十分に行える分離を得るためには、動力学が速く、バンドの広がりが小さいのが望ましい。これを達成するために、ビーズ内外での物質の拡散輸送は最少でなければならない。なぜならば、拡散輸送は、バンドの広がりを招き、従って、分解能の低下になるからである。バンドの広がりの影響は、流速の増加および粒径の増加とともに増大する。これらの影響のため、高性能クロマトグラフィー媒体の製造者らは、ビーズの大きさを小さくすべく努めている。しかし、小さいビーズは、他の問題を引き起こす。特に、より小さいビーズの充填は、充填床の粒子間の伝達性流動溝が狭くなるため、背圧はより高くなる。この背圧の増大を埋め合わせるために、より短いカラムの使用が可能であるが、それは一般に分離能の低下となり、あるいは、カラムおよび流体ポンプを、より高い圧力に耐えるように再設計することもできるが、これは、コストがかかる。また、粒状マトリックスから完全に充填されたカラムを作ることは困難かつ高価である。
【0004】
ビーズ内外での拡散輸送に伴う問題を解決するために、連続的ポーラスプラグとして形作った固定床を使用することが示唆されている。WO 90/07965は、ポリマー鎖が互いに速状に接着し、束の間に隙間または溝が形成されるようにモノマーのバルク重合によって形成される連続した密着ゲルプラグを開示している。その後の発表で、この特許出願の発明者は、このプラグが、圧力をかけるとしぼむため、クロマトグラフィーには使用できないことを述べている。その代わりに、その発明者は、ゲルプラグを10〜15倍に圧縮することを勧めている。圧縮は、プラグの溝を不均一にし、非常に高い背圧を生じるであろう。
【0005】
米国特許第5,334,310号は、直径が約200nm未満である小孔および直径が約600nmより大きい大孔を含む連続的マクロポーラスポリマープラグに関する。ポーラスプラグは、porogenの存在下でビニルモノマーをバルク重合することにより製造する。分離能が非常に高く、製造が容易であり、モノマー化学物質の選択における融通性が、カラムに含まれるプラグに対して挙げられる利点である。プラグにおける孔の構造が不規則であり、孔の中央サイズがかなり小さいために、このプラグもまた、比較的高い背圧で分離を生じる。
【0006】
従って、さらに改善されたクロマトグラフ分離法およびそのためのクロマトグラフ装置に対する必要性がある。
【0007】
すなわち、本発明の目的は、改善されたクロマトグラフ分離法および上記した欠点のない分離媒体を有するクロマトグラフ装置を提供することである。
【0008】
本発明のさらに別の目的は、クロマトグラフ分離法および速い動力学、高い効率、良好な機械的特性を有し、背圧の低い媒体を含む装置を提供することである。
【0009】
本発明のさらに別の目的は、大きい生物分子または凝集体の分離に特に適した分離法および媒体を得ることである。
【0010】
本発明の目的は、請求の範囲に記載したクロマトグラフ分離法およびクロマトグラフ装置により達成される。本発明によれば、液体サンプル中の一つまたはいくつかの有機物質を分離するためのクロマトグラフ法が得られ、該方法では、少なくとも一つの連続的マクロポーラスマトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置に該サンプル物質を通す。マクロポーラスマトリックスは、有機モノマーの水/油エマルジョンの高内相エマルジョン系の重合によって製造される架橋有機ポリマーを含む。エマルジョンは、少なくとも75重量%の水相を含み、重合の結果オープンポーラス構造が生じ、伝達性(convective)流動がマクロポーラスマトリックスを通過することができ、それによって、該有機物質が互いにおよび/または液体から分離する。マクロポーラスマトリックスの孔は未改変であるか、または、伝達性流動が妨害されないような方法で表面を改変することができる。
【0011】
さらに本発明によれば、少なくとも一つの連続的マクロポーラスマトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置が得られる。マクロポーラスマトリックスは、有機モノマーの水/油エマルジョンの高内相エマルジョン系の重合によって製造され、該エマルジョンは、少なくとも75重量%の水相を含み、該重合の結果、伝達性流動がマクロポーラスマトリックスを通過することができるオ−プンポーラス構造が生じる。マクロポーラスマトリックスの孔は未改変であるか、または、伝達性流動が妨害されないような方法で表面を改変することができる。
【0012】
高内相エマルジョンのモノマーの重合によるマクロポーラスマトリックスの製造により、有機物質がクロマトグラフ装置において低い背圧で互いに分離し、広範囲の線流速にわたって理論的棚段数(plate number)が高く、物質輸送がマトリックス孔での伝達性流動によって駆動される方法が得られる。水とモノマーとの内相比が高い水/油エマルジョンの重合によるポリマー物質の製造は、かなり前から公知である。ドイツ特許第1160616号および同第1494024号は、水/油型の高内相エマルジョンの重合による、物質を単離するためのポーラスポリマーの製造を開示している。エマルジョンの水含量は98%まで可能である。
【0013】
EP 60138は、密度が低く、吸光度が高い架橋ポリマー物質に関する。その物質は、水/油エマルジョンからのビニル重合によって製造され、該エマルジョンは、少なくとも90重量%の水を含む。これらの特許はいずれも、クロマトグラフィーに関するものではない。EP 288310は、ゲル物質を充填したポーラス架橋ポリマー物質を含む基質に関する。ポリマー物質は、EP 60138に記載の高内相エマルジョン法によって製造する。その基質はペプチド合成に使用するものであるが、クロマトグラフィーも可能な使用分野として言及されている。しかし、ペプチド合成はゲル上で行われ、架橋ポリマー物質の機能は、ゲルを包囲するための硬質な枠としてのものである。そのポリマー物質がクロマトグラフィーにおける固定相として使用できることの開示も実施例もない。そのような物質のプラグのカラムクロマトグラフィーにおける固定相としての利点に関する情報はほとんどない。これに対して、EP 60138に開示された発明は、連続マトリックスをクロマトグラフィーに対して使用する方法においては、機能しないであろう。なぜならば、そのゲル充填孔では、マトリックスでの伝達性流動が可能でないからである。EP 288310では、基質を粒状形で使用している。物質は粉砕してカラムに充填する。その場合、序論で述べた充填カラムに伴う欠点がやはり生じる。
【0014】
本発明に係る方法およびクロマトグラフ装置での改善点は、マクロポーラス架橋有機ポリマーに関する。ポリマーは、いわゆるHIPE法(高内相エマルジョン法)で製造する。この方法によれば、多量の水が油相であるモノマー相で乳化される。水相は、所望により、1以上の溶解した塩、例えば塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウムなどを含むことができる。エマルジョンは、モノマー/水組成物に対して少なくとも75重量%の水を含み。好ましくは、エマルジョンは少なくとも90重量%の水相を含む。エマルジョンの重合の結果、非常にオープンで規則的な三次元構造の物質が得られる。そのポリマー構造では、泡様のオープンな孔構造が、球状の空洞によって作られ、球の間には連結孔を有し、その結果、連続した隙間または孔相がマトリックス全体に形成される。この構造は、固体含量が数%と低いが、機械的特性は非常に良好である。マトリックスのオープン構造により、高い流速においてすら、非常に低い背圧での伝達性流動が可能である。
【0015】
本発明に係るクロマトグラフ装置のマトリックスに対して、例えば米国特許第5,334,310号でマトリックスの製造に対して使用されているporogenとのバルク重合は、クラスター集合体で構成されるより不規則な構造を生じる。こうして、しばしば、2種類の別々の孔である通過流動孔および分離孔が得られる。通過流動孔は、集合体間の隙間であり、分離孔は、集合体中の孔である。このマトリックスは機械的強度が低く、マトリックス含量は高くて少なくとも30体積%であり、背圧はかなり高くて、通常はHIPE法によって製造されるマトリックスより10〜50倍高い。
【0016】
高内相水/油エマルジョンを得るために、油相中のモノマーは疎水性でなければならない。マトリックスの架橋ポリマーは、通常は、疎水性モノマーと架橋剤との遊離ラジカル重合によって製造する。適切なモノマーは、1以上のアルケン基、すなわち置換または非置換のビニル基(一官能性、二官能性および多官能性ビニルモノマー)を含む。好ましいモノマーとしては、スチレンモノマーの誘導体;ビニルベンゼン;ドデシルメタクリレート、オクタデシルメタクリレート、パーフルオロアルキルアクリレートなどの疎水性アクリレートまたはメタクリレートモノマー;アクリルアミドの誘導体;およびグリシジルメタクリレートなどの官能基を含むモノマーが挙げられる。架橋剤としては、二または多官能性ビニルモノマー、例えばジビニルベンゼン;アルカンジオールアクリレートまたはメタクリレート、例えばエチレングリコールジメタクリレート、ブタンジオールジメタクリレート、ヘキサンジオールジメタクリレートおよびトリメチロールプロパントリメタクリレートを使用することができる。
【0017】
マクロポーラスマトリックスのクロマトグラフ品質は、孔の構造に依存する。孔の大きさの変化は、表面積、理論的棚段数、圧力−流動特性などに影響を及ぼす。乳化剤の選択および量は、孔の構造に対して重要である。エマルジョンには、常に、水および油相とともに逆エマルジョンを提供する乳化剤を含ませる(DE-A-1160616およびEP-A-60138を参照)。適切な乳化剤は、C10-25カルボン酸の糖アルコールとのモノエステルならびに親水性および疎水性の両方を含むブロックコポリマー、例えばソルビタンモノオレエートおよびポリエチレングリコールポリヒドロキシステアリン酸である。適切なエマルジョンに対する乳化剤の量は、通常は、油相に対して0.5〜30重量%の範囲内である。
【0018】
孔の大きさに影響を及ぼす別の重要なパラメーターは、エマルジョンの水含量である。その含量が約90%〜95%に増加すると、孔の大きさが増大してよりオープンな構造のマトリックスになる。一般に、マトリックスの孔の直径は、約0.5〜100μmである。好ましくは、マクロポーラスマトリックスは、孔の直径が3〜25μm、最も好ましくは5〜25μmである球状の孔および孔の直径が0.5〜15μmである連結孔を含む。
【0019】
エマルジョンは、モノマー、乳化剤および、油溶性のものを使用する場合は開始剤を混合することにより製造する。そうでない場合は、水溶性の開始剤を水に溶解する。油相が均一になると、水にゆっくり添加する。混合物は激しく攪拌する。エマルジョンを鋳型に入れ、好ましくは温度を上げて、重合を開始する。エマルジョンは、室温で製造できる。重合温度は、重合工程中に変えることができるが、温度は、エマルジョンが消えないように制御することが重要である。一般に、温度は、少なくとも10℃〜水の沸点および他の成分の沸点以下、通常は90℃以下を保持すべきである。適切には、エマルジョンを最初に一つの温度で保持して重合させ、その後、温度を上げて、生成物をさらに硬化させることができる。
【0020】
重合は、通常のラジカル開始剤によって開始することができる。開始剤は、水溶性でも油溶性でもよい。開始剤の例としては、アゾ化合物(油溶性)、疎水性過酸化物(油溶性)、過安息香酸塩(油溶性)、過硫酸塩(水溶性)、種々のレドックス系、例えば、過酸化水素+水(フェントン(Fenton)試薬、水溶性)またはアニリン+過酸化ベンゾイル(油溶性)が挙げられる。
【0021】
重合は、UV放射、γ線放射、電子ビーム放射などによっても開始できる。重合の後、ポリマーマトリックスを洗浄し、クロマトグラフ分離装置で使用する。分離装置は、種々の形状および様式にすることができる。装置は、マトリックスを含むホルダーの形状であってもよく、または、マトリックスを自ら支える形状であってもよい。ホルダーの例としては、カラム、充填ピペット先端、スポイト、螺旋形、チューブなどが挙げられる。自ら支える装置としては、例えば、スラブ形状、マイクロタイタープレート、および中空シリンダーが挙げられる。装置の好ましい実施態様は、一つまたはいくつかのマトリックスを含むカラムである。
【0022】
液体は、ポンプ、吸引、遠心力または重力によりマトリックスを通過させることができる。
【0023】
マトリックスは、鋳型で直接、所望の形態に形作ることができ、または、重合の後、切断したり、穴をあけたり、のこぎりでひいたりして所望の形、例えばプラグ、シリンダー、レンガ様、シート、平板、プレートまたはスラブに形作ることができる。
【0024】
分離装置は、少なくとも一つのマトリックスを含むが、同一装置に2以上のマトリックスを使用して分離媒体の長さを延長したり、異なる機能を有するマトリックスを互いの上に重ねることが可能である。マトリックスの大きさは、装置の寸法に依存し、短い毛細管から、直径が1m、床高さが2mまでの非常に大きいカラムまで変わり得る。
【0025】
マトリックスの適する形態はシリンダーであり、それを、空のカラムに挿入する。マトリックスの直径は、使用するカラムの直径よりもわずかに大きくすべきである。マトリックスをカラムに押し込み、カラム壁に対して確実に密着するようにする。そうすることにより、マトリックス全域にわたって流動が得られる。このマトリックス製造法は、毛細管カラム以外の全ての種類のシリンダーカラムに対して好ましい。一般には、米国特許第5,334,310に記載されているように、マトリックスをカラムで直接鋳造することは適切でない。なぜならば、ポリマーマトリックスは、洗浄中に収縮するからである。この結果、マトリックスとカラム壁との間に漏れが生じ得る。
【0026】
本発明によれば、カラムそのものは通常のどんなカラムであってもよく、材料、形および大きさは広範囲で変えられる。カラムチューブは、実質的に硬質であるべきであり、例えば、ステンレス鋼もしくはチタンなどの金属、ガラスまたは硬質ポリマーから作ることができる。しかし、伝統的な粒状媒体に対して設計された普通のカラムのアダプターおよび拡散機は、サンプルをマトリックスの全域に対して分布させるためにマトリックスからの背圧を必要とするので、通常は、本発明の使用にあまり適さない。本発明に係るマトリックスは、多孔性が高く、背圧をほとんど生じない。サンプルのマトリックスでの放射状拡散は非常に限られているので、サンプルは、マトリックスの先端表面に入る前に、完全に分散していなければならない。そうでないと、流動は、マトリックス体積のより小さい部分を通過するのみである。カラムの上部における、中央の入口および拡散機コーンを有するアダプターは、サンプルをマトリックス全体に分散させるので、好ましい。底部では、アダプターをいわゆる環状拡散機にすることができ、所望により、支持ネットを有するものにする。アダプターの適切な配置は、PCT/SE95/00632に開示されている。
【0027】
非常に狭いカラム、すなわち毛細管カラムの場合は、プラグをカラムで直接鋳造することが可能である。毛細管カラムとは、直径が約2mm未満であり、長さが約10〜10000cmであるカラムを意味する。毛細管カラムは、洗浄の後ですら重合物質に接着する毛細管材料から作ることができる。これにより、マトリックスと毛細管壁との間の隙間の形成が阻止され、流動が毛細管の横断面全体にわたって確実に通過する。すなわち、スチールから作った毛細管は、良好な接着性を付与し、マトリックスは、そのような毛細管において直接鋳造され、有機分子を分離することができるが、チタンから作った毛細管では、マトリックスと壁との間に隙間が形成され、従って、分離が損なわれることが分かった。
【0028】
カラムはまた、例えばテフロン(登録商標)管材料から成る鋳型で作り、次の工程で、自由に位置する毛細管を収縮管材料に移動させ、および/またはポリマー樹脂を毛細管の周りに入れて、マトリックスとカラム壁との間に流動の通過が確実に生じないようにすることもできる。
【0029】
本発明方法によれば、分離は、非常に低い背圧で、かつ高い理論的棚段数を有して行うことができる。低い背圧は、1000cm/時の線速度で0.02〜2バール/cmカラム長さを意味する。高い理論的棚段数とは、約2000〜100,000理論棚段数/mを意味する。
【0030】
本発明のさらに別の実施態様は、マトリックス壁内に第二の孔構造を有するマトリックスを含むカラムでの分離である。この構造は、溶媒を水/油エマルジョンの油相に添加することにより製造する。作られる第二の孔構造の程度および大きさは、溶媒の選択によって制御する。この方法により、表面積は、例えば、10m2/g〜約500m2/gまで増加させることができる。クロマトグラフ性能は、いくつかの適用、例えばペプチドの逆相分離の場合は、第二の孔構造の導入によって改善されるが、材料の機械的安定性は低下する。2種類の溶媒を使用することができる。一方は、生成したポリマーに対する溶媒であり、生成したポリマー網を膨潤させることにより作用する。得られる孔は非常に小さく、通常は500Å未満である。他方は、モノマーに対する溶媒であるが、ポリマーを沈殿させ、いわゆるporogenである。重合中、porogenとポリマーとの間には相分離がある。得られる孔の大きさは、通常、500Å〜10000Åの範囲内である。本発明に係るマトリックスの製造に対する溶媒の選択は、懸濁法による多孔性粒子と比較して異なる。後者の場合は、いくつかの高級アルコールまたはカルボン酸を使用するのが普通である。しかし、これらのporogenは表面活性能を有し、エマルジョンの安定化を破壊する。高内相エマルジョンに対して適切なporogenは、脂肪族および芳香族炭化水素、例えばn−ヘキサン、n−オクタン、n−ドデカンおよびトルエンである。
【0031】
本発明に係る方法のさらに別の側面によれば、ポーラスマトリックスの孔は、孔に閉塞または充填が生じないように表面を薄層で改変して、伝達性流動がポーラスマトリックスを通過できるようにする。好ましくは、薄層は2μm未満であり、最も好ましくは0.0005〜0.5μmである。適切には、孔の表面をイオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドもしくはアフィニティーリガンドで改変し、または、架橋することのできる親水性ポリマーの物理的吸着もしくは共有結合により改変する。その場合、親水性ポリマーは、イオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドまたはアフィニティーリガンドによって誘導できる。適する親水性ポリマーとしては、とりわけ、フェニルデキストラン、アリルデキストラン、アガロースおよびそれらの誘導体、水溶性セルロース誘導体、澱粉誘導体、ならびに、ポリビニルアルコールおよびその誘導体、ポリ(ヒドロキシエチルビニルエーテル)およびその誘導体、ポリエチレングリコール、ポリ(ヒドロキシエチルアクリレート)、ポリアクリル酸、ポリ(ビニルN−ビロリドン)およびポリアクリルアミドなどの水溶性合成ポリマーが挙げられる。
【0032】
本発明に係る方法および装置は、あらゆる種類の有機分子の分離に使用できるが、好ましくは、生物分子の分離、特に分子量が10,000,000ダルトン以上の大きい生物分子または集合体の分離に使用できる。なぜならば、マトリックスの大きい孔は、10,000,000ダルトンまでの分子量を有する非常に大きい分子ですら排除しないからである。そのような分子の例としては、タンパク質、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、細胞またはウイルスが挙げられる。本発明に従って使用されるマクロポーラスマトリックスは、表面の疎水性が高く、逆層クロマトグラフィーに非常に適切である。しかし、上記したように、表面は改変することができ、その場合、マクロポーラスマトリックスは、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーなどの他の通常の液体クロマトグラフ法で使用することができる。
【0033】
次に、本発明を以下の実施例により説明するが、以下の実施例は本発明を限定するものではない。実施例の結果は、図に示す。図1は、実施例5の5種類のペプチドのRPC分離に関する。図2は、実施例6の5種類のタンパク質のRPC分離に関する。図3は、実施例7の4種類のタンパク質のイオン交換クロマトグラフィー分離に関する。図4は、実施例10の5種類のペプチドのRPC分離に関する。図において、AUは吸光度を意味する。
【0034】
連続マトリックスの流動特性および棚段数
実施例1〜4:
マトリックスの合成
0.3gの開始剤2,2−アゾビス(2,4−ジメチルバレロニトリル)を、Hypermer(登録商標)B261(ICI)およびソルビタンモオレエート(Fluka製のSPAN(登録商標)80)の界面活性剤とともに、13gのスチレンおよび13gのジビニルベンゼンから成る油相に溶解した。油相を、攪拌機を備えた500mlの反応器に移した。攪拌速度を500rpmにセットし、水をゆっくり添加した(2〜4ml/分)。水が全部添加されると、攪拌をさらに15分続けた。
【0035】
次いで、粘性の高い水/油エマルジョンを、テフロン被覆した225mlの鋳型に移し、これを50℃で16時間加熱し、次いで、70℃でさらに24時間加熱した。重合した連続マトリックスを鋳型から取り出し、ゴム管材料とともにカラムに壁に沿って移した。加圧空気を使用して管材料を膨張させ連続マトリックスに対して押しつけた。マトリックスは最初に3カラム体積のアセトンで、次いでアセトン→水勾配により10カラム体積で、最後に3カラム体積の水で洗浄した。洗浄中、マトリックスは収縮するが、膨張した管材料により、洗浄工程中、マトリックスはカラムに対して確実にぴったりフィットしている。
【0036】
次いで、マトリックスを、直径がカラムの直径よりも約0.05%大きい、寸法の異なる2個に切り取った。すなわち、
a)直径16mm、長さ50mm(16/50)
b)直径35mm、長さ10mm(35/10)
形作ったマトリックスを、各々直径が16mmおよび35mmのカラムに押し入れた。国際特許出願SE95/00632に示されているように、流動分布の取り付けおよび設計は、高棚段数の達成にかなり重要である。
【0037】
孔の大きさおよび固体含量の異なるマトリックスを、モノマー含量および乳化剤組成物を変えることにより作った。空洞および連結孔の大きさは、走査電子顕微鏡から推定した。
【0038】
式N=16(tr/w)2/L(Nは棚段数であり、trは溶離体積(ml)であり、wは基線でのピークの幅(ml)であり、Lはカラムの長さである。)を使用して、棚段数を、UVモニターを備えたPharmacia FPLCTM液体クロマトグラフィー系において、0.5MのNaClを緩衝液として使用し、0.5MのNaClにおける50μlのNaNO3のパルスから計算した。
【0039】
マトリックスは一般に、非常に良好な流動特性および高い棚段数を示した。結果を表1に示す。
【0040】
【表1】
【0041】
空のカラムでの流動測定により、16/50のカラムの場合は、3バールで20,000cm/時の線速度が得られ、35/10のカラムの場合は、5000cm/時の線速度が得られた。
【0042】
逆相連続マトリックスを使用したペプチド分離
【0043】
実施例5:
水/油エマルジョンを実施例1と同様に作った。わずかに円錐形のHDPE(高密度ポリエチレン)カラム(直径1cm)に、粘性の高いエマルジョンを充填し、次いで50℃で一夜、70℃でさらに24時間加熱した。カラムをアセトンおよび水で完全に洗浄した。
【0044】
直径5.5mm、高さ10〜15mmのシリンダーをマトリックスから切り取り、HR5/5カラム(Pharmacia Biotech)に押し入れた。いくつかのシリンダーを同一のカラムにおいて互いの上におき、全長を5cmとした。そのカラムを、緩衝液Aにおける0.125%のトリフルオロ酢酸水溶液および緩衝液Bにおける0.1%トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル−水の90/10混合物とともにFPLCTM液体クロマトグラフィー系に取り付けた。
【0045】
12.5μlの5種類のペプチド(Val5アンギオテンシンII、アンギオテンシンIII、アンギオテンシンI、インスリンB鎖(以上、Sigma製)およびHGRF 1-29(Pharmacia Biotech製))を含む25μlのサンプル混合物をカラム上に充填した。サンプルを5%→45%勾配のB緩衝液で20カラム体積にわたって溶離した。流速は1ml/分であった。混合物は5つのピークに分離し、最後の3つは基線から分解したが、最初の2つは、互いに完全には分離しなかった。図1参照。
【0046】
実施例6:
連続16/50カラムを実施例1と同様に作り、Pharmacia LKB HPLC系に取り付けた。0.5mgの5種類のタンパク質(リボヌクレアーゼA、シトクロムC、リゾチーム、アルブミンおよぶb−ラクトグルブリン(以上、Sigma製))を含む100μlの混合物をカラムに載せて、18%→54%勾配のアセトニトリルにより2カラム体積で溶離した。流速は10ml/分であった。タンパク質は、十分分離した5つのピークに2分未満で溶離した。図2参照。
【0047】
イオン交換連続マトリックスを使用したタンパク質の分離
実施例7:
連続マトリックスを含む16/50カラムを実施例1と同様に作った。2重量%にフェニルデキストラン(分子量500,000、置換度:0.2フェニル基/単糖)を含む水溶液をポンプにより4ml/分で16時間カラムに通した。カラムを4カラム体積の水で洗浄した。
【0048】
T連結を通じて、2ml/分の2M水酸化ナトリウムおよび2ml/分の35%塩化グリシジルトリメチルアンモニウムを混合し、ポンプによりカラムに4時間通した。次いで、そのカラムを10カラム体積の純水および5カラム体積の1M塩化ナトリウムで洗浄した。
【0049】
得られたイオン交換カラムのイオン容量は、5.6μmole Cl−/mlマトリックスであった。
【0050】
動的容量は、FPLCTM液体クロマトグラフィー系および1mgのBSA/ml緩衝液(50mMのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含む、pH8)を使用して、BSAによるブレークスルー曲線を追跡することにより測定した。動的容量は、流速に依存しないことが分かった。300および1000cm/時の両方に対して5mgBSA/mlであった。
【0051】
10mMのピペラジンにおける0.5mgのトランスフェリン、1.0mgのオボアルブミンおよび1.0mgのラクトグロブリン(AおよびB)を含む混合物(pH6)の分離を、0→0.3M勾配の塩化ナトリウムによる9カラム体積にわたる溶離を行うことにより行った。タンパク質は良好な分解能で分離し(図3)、その分解能は、300〜1500cm/時の広い流速範囲にわたって保持された。
【0052】
連続RPC媒体としてのアクリレートマトリックス
実施例8:
0.15gのV-65(登録商標)(アゾビス(ジメチルバレロニトリル)、1.1gのSPAN(登録商標)80、0.35gのHypermer(登録商標)B261を、250mlのビーカー中6.5gのオクタデシルメタクリレートおよび6.5gのエチレングリコールジメタクリレートに溶解した。130gの水を攪拌しながら10分間にわたって滴下した。直径が1cmのわずかに円錐形のHDPEカラムに粘性の高い内相エマルジョンを充填した後、50℃で一夜、70℃でさらに24時間加熱した。カラムをアセトンおよび水で十分に洗浄した後、直径5mmのプラグを、充填したHDPEカラムから切り取った。プラグをHR5/5カラムに押し込み、実施例5と同様のペプチド分離を行うと、だいたい同じ分解能および選択性が得られた。
【0053】
連続RPC媒体としての過フッ素化マトリックス
実施例9:
4.8gのヘキサデカフルオロデシルメタクリレート、8.2gの工業的純度のジビニルベンゼン(60%)、0.15gのV-65、1.1gのソルビタンモノオレエートおよび0.35gの非イオン性ポリマー界面活性剤(Hypermer B261)の溶液を調製した。130gの水を10分間で添加し、400rpmのCollomixer攪拌機プロペラによって有機相中にて乳化した。粘性エマルジョンをHDPE容器に注入し、50℃で24時間重合させた。固体のプラグが形成され、その上端および卞端を整えた。次いで、多孔性プラグを、アセトンおよび水により、ポンプで連続的にその材料に通すことにより洗浄した後、充填HDPEカラムから直径5mmのプラグを切り取った。プラグをHR5/5カラムに押し入れ、実施例5と同様のペプチド分離試験を行うと、だいたい同じ分解能および選択性が得られた。
【0054】
RPC媒体としての表面積の大きい連続マトリックス
実施例10〜11:
0.19gのSPAN 80、0.06gのHypermer B261、2.24gのジビニルベンゼン(65%)、2.24gのスチレン、0.05gのアゾビスジメチルバレロニトリルおよび有機溶媒を250mlのビーカーで混合し、46gの水を、磁気攪拌機で攪拌しながら滴下した。直径が1cmのわずかに円錐形のHDPEカラムに粘性の高い水/油エマルジョンを充填し、50℃で一夜、70℃でさらに24時間加熱した。カラムをアセトンおよび水で十分に洗浄した後、直径5.5mmのプラグをカラムから切り取った。
【0055】
表面積の測定を、窒素吸着(BET法)によって行い、有機溶媒の添加により表面積が増大することが分かった。
【0056】
【表2】
【0057】
プラグを実施例5と同様にHR5/5カラムに押し入れ、同じペプチド分離を行うと、実施例10および11とも、実施例5の表面積の小さいマトリックスと比較して、改善された分解能が得られた。図4参照。
【0058】
収縮材料中の連続マトリックス
実施例12:
逆エマルジョンを、実施例1の方法に従って製造した。スポイトを使用して、直径5mm、長さ115mmのガラスカラムにそのエマルジョンを充填した。管材料を50℃で一夜、次いで70℃でさらに3時間加熱した。管材料をアセトンおよび水で洗浄すると、連続マトリックスチューブの直径が4.85mmに収縮した。マトリックスをテフロン被覆から取り出した後、収縮管材料FIT−221(ELFA製の架橋ポリオレフィン)に入れ、120℃に加熱すると、マトリックスチューブの周りにぴったりフィットするように収縮した。マトリックスを含む収縮管材料を別の収縮管材料に入れて一端を密封した後、エポキシ鋳型(Sikema製のPermabond(登録商標)E27)を充填し、50℃で1時間硬化した。
【0059】
硬化したエポキシ鋳型の強度は、マトリックスと管材料の内壁との間に漏れを生じることなく、1ml/分までの流動を可能とするのに十分であった。分離を実施例5と同様のペプチド混合物に対して行うと、分解能および選択性に関して同様の結果が得られた。
【0060】
長い毛細管での連続マトリックス
実施例13:
逆エマルジョンを、実施例1の方法に従って製造した。スポイトを使用して、長さ2100mmのスチール製毛細管(内径0.75mm)にそのエマルジョンを充填し、50℃で一夜、次いで70℃でさらに3時間加熱することにより重合させた。
【0061】
次いで、連続マトリックスを含むスチール製毛細管を、0.1%のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルで洗浄した。この毛細管で鋳造すると、マトリックスは、収縮することなく洗浄することができた。マトリックスの収縮は隙間を形成し、マトリックスと毛細管の内壁との間に流動の通過を引き起し、従って、分離の乱れが生じる。
【0062】
SMARTTM液体クロマトグラフィー系(Pharmacia Biotech)において、実施例5と同様のペプチドを、アセトニトリルによる勾配溶離により分離すると、分解能は、実施例5で得られたよりもわずかに小さかった。カラムがたとえ非常に長くかつ狭くても、背圧は、1400cm/時の流速で30バールと比較的低いレベルをなおも保持した。
【図面の簡単な説明】
【0063】
【図1】実施例5の5種類のペプチドのRPC分離に関する。
【図2】実施例6の5種類のタンパク質のRPC分離に関する。
【図3】実施例7の4種類のタンパク質のイオン交換クロマトグラフィー分離に関する。
【図4】実施例10の5種類のペプチドのRPC分離に関する。
Claims (34)
- 液体サンプル中の一つまたはいくつかの有機物質を分離するためのクロマトグラフ法において、該サンプル物質を、少なくとも一つの連続的マクロポーラスマトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置に通し、該マクロポーラスマトリックスは、有機モノマーの水/油エマルジョンの高内相エマルジョン系の重合によって製造される架橋有機ポリマーを含み、該エマルジョンは、少なくとも75重量%の水相を含み、該重合の結果、伝達性流動がマクロポーラスマトリックスを通過することができるオープンポーラス構造が生じ、そうして、該有機物質が互いにおよび/または液体から分離し、マクロポーラスマトリックスの孔は未改変であるか、または伝達性流動が妨害されないような方法で表面を改変することを特徴とする方法。
- 有機物質が、クロマトグラフ装置において低い背圧で互いに分離し、理論的棚段数は広い範囲の線速度にわたって高く、物質の移動がマトリックス孔での伝達性流動によって駆動されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 該エマルジョンが少なくとも90重量%の水相を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- クロマトグラフ装置が2以上のマトリックスを含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 架橋有機ポリマーが、疎水性モノマーと架橋剤との遊離ラジカル重合によって製造されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- モノマーがスチレン/ジビニルベンゼンであることを特徴とする、請求項5に記載の方法。
- モノマーがアルカンジオールアクリレートによって架橋される疎水性アクリレートまたはメタクリレートモノマーであることを特徴とする、請求項5に記載の方法。
- マクロポーラスマトリックスの孔の直径が0.5〜100μmであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- マクロポーラスマトリックスが、孔の直径が3〜25μmである球状の孔および孔の直径が0.5〜15μmである連結孔を含むことを特徴とする、請求項8に記載の方法。
- 水/油エマルジョンの油相が溶媒を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- ポーラスマトリックスの孔の表面を、孔の閉塞や充填が生じないように薄層で改変して、伝達性流動がポーラスマトリックスを通過できるようにすることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 薄層が2μm未満であることを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 孔の表面をイオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドまたはアフィニティーリガンドで改変することを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 孔の表面を物理的吸着または架橋可能な親水性ポリマーの共有結合によって改変することを特徴とする、請求項11に記載の方法。
- 親水性ポリマーを、イオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドまたはアフィニティーリガンドによって誘導体化することを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 有機物質が逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーによって分離することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 有機物質がタンパク質、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、細胞またはウイルスなどの生物分子であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 装置がカラムであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも一つの連続的マクロポーラスマトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置において、マクロポーラスマトリックスが、有機モノマーの水/油エマルジョンの高内相エマルジョン系の重合によって製造される架橋有機ポリマーを含み、該エマルジョンが、少なくとも75重量%の水相を含み、該重合の結果、伝達性流動がマクロポーラスマトリックスを通過することができるオープンポーラス構造が生じ、マクロポーラスマトリックスの孔は未改変であることを特徴とする装置。
- 少なくとも一つの連続的マクロポーラスマトリックスを分離媒体として含むクロマトグラフ装置において、マクロポーラスマトリックスが、有機モノマーの水/油エマルジョンの高内相エマルジョン系の重合によって製造される架橋有機ポリマーを含み、該エマルジョンが、少なくとも75重量%の水相を含み、該重合の結果、伝達性流動がマクロポーラスマトリックスを通過することができるオープンポーラス構造が生じ、マクロポーラスマトリックスの孔は、伝達性流動が妨害されないような方法で表面が改変されていることを特徴とする装置。
- 該エマルジョンが少なくとも90重量%の水相を含むことを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- クロマトグラフ装置が2以上のマトリックスを含むことを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- 架橋有機ポリマーが、疎水性モノマーと架橋剤との遊離ラジカル重合によって製造されることを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- モノマーがスチレン/ジビニルベンゼンであることを特徴とする、請求項23に記載の装置。
- モノマーがアルカンジオールアクリレートによって架橋される疎水性アクリレートまたはメタクリレートモノマーであることを特徴とする、請求項23に記載の装置。
- マクロポーラスマトリックスの孔の直径が0.5〜100μmであることを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- マクロポーラスマトリックスが、孔の直径が3〜25μmである球状の孔および孔の直径が0.5〜15μmである連結孔を含むことを特徴とする、請求項26に記載の装置。
- 水/油エマルジョンの油相が溶媒を含むことを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- ポーラスマトリックスの孔の表面を、孔の閉塞や充填が生じないように薄層で改変して、伝達性流動がポーラスマトリックスを通過できるようにすることを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
- 薄層が2μm未満であることを特徴とする、請求項29に記載の装置。
- 孔の表面をイオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドまたはアフィニティーリガンドで改変することを特徴とする、請求項29に記載の装置。
- 孔の表面を物理的吸着または架橋可能な親水性ポリマーの共有結合によって改変することを特徴とする、請求項29に記載の装置。
- 親水性ポリマーを、イオン交換リガンド、疎水性リガンド、キレーティングリガンドまたはアフィニティーリガンドによって誘導体化することを特徴とする、請求項32に記載の装置。
- 装置がカラムであることを特徴とする、請求項19または20に記載の装置。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE9504205A SE9504205D0 (sv) | 1995-11-24 | 1995-11-24 | A chromatographic separation method and device |
SE9504205-7 | 1995-11-24 | ||
PCT/SE1996/001508 WO1997019347A1 (en) | 1995-11-24 | 1996-11-20 | Chromotographic method and device in which a continuous macroporous organic matrix is used |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2000501175A JP2000501175A (ja) | 2000-02-02 |
JP3925872B2 true JP3925872B2 (ja) | 2007-06-06 |
Family
ID=20400349
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51965397A Expired - Fee Related JP3925872B2 (ja) | 1995-11-24 | 1996-11-20 | 連続的マクロポーラス有機マトリックスを使用するクロマトグラフ法および装置 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6290853B1 (ja) |
EP (1) | EP0862737A1 (ja) |
JP (1) | JP3925872B2 (ja) |
SE (1) | SE9504205D0 (ja) |
WO (1) | WO1997019347A1 (ja) |
Families Citing this family (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6355791B1 (en) | 1995-11-13 | 2002-03-12 | Transgenomic, Inc. | Polynucleotide separations on polymeric separation media |
US6066258A (en) | 1997-12-05 | 2000-05-23 | Transgenomic, Inc. | Polynucleotide separations on polymeric separation media |
US7138518B1 (en) | 1996-11-13 | 2006-11-21 | Transgenomic, Inc. | Liquid chromatographic separation of polynucleotides |
RU2131847C1 (ru) * | 1998-04-27 | 1999-06-20 | Открытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт пластических масс им.Г.С.Петрова" | Материал для введения в питьевую воду физиологически необходимых неорганических элементов |
US6046246A (en) * | 1998-06-11 | 2000-04-04 | Prometic Biosciences, Inc. | Process for making fluorinated polymer adsorbent particles |
US6238565B1 (en) * | 1998-09-16 | 2001-05-29 | Varian, Inc. | Monolithic matrix for separating bio-organic molecules |
DE60018044T2 (de) * | 1999-02-18 | 2005-12-29 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Neue biomaterialien |
SE9901825D0 (sv) * | 1999-05-20 | 1999-05-20 | Amersham Pharm Biotech Ab | Foamed material filled with inner material |
AT409095B (de) * | 1999-05-31 | 2002-05-27 | Michael Rudolf Mag Buchmeiser | Verfahren zur herstellung monolithischer trägermaterialien auf der basis von durch metathese hergestellten polymeren |
US6573305B1 (en) | 1999-09-17 | 2003-06-03 | 3M Innovative Properties Company | Foams made by photopolymerization of emulsions |
EP1235852B1 (en) | 2000-01-26 | 2011-06-15 | TRANSGENOMIC, Inc. | Method for separating polynucleotides using monolithic capillary columns |
US6969587B2 (en) | 2000-04-04 | 2005-11-29 | Taylor Paul D | Detection of nucleic acid heteroduplex molecules by anion-exchange chromatography |
GB0018573D0 (en) | 2000-07-29 | 2000-09-13 | Univ Newcastle | Improved methods for separating oil and water |
JP4925504B2 (ja) * | 2000-10-13 | 2012-04-25 | 株式会社日本触媒 | 多孔質重合体の製造方法 |
JP4330265B2 (ja) * | 2000-10-24 | 2009-09-16 | 株式会社日本触媒 | 多孔質架橋重合体の製造方法 |
KR20030016291A (ko) * | 2001-04-13 | 2003-02-26 | 오르가노 가부시키가이샤 | 이온교환체 |
JP4633955B2 (ja) * | 2001-04-13 | 2011-02-16 | オルガノ株式会社 | 多孔質イオン交換体、それを用いる脱イオンモジュール及び電気式脱イオン水製造装置 |
US20040122117A1 (en) * | 2001-04-13 | 2004-06-24 | Koji Yamanaka | Composite porous ion-exchanger, method for manufacturing the ion-exchanger, deionization module using the ion-exchaner and electric deionized water manufacturing device |
JP3729403B2 (ja) * | 2001-05-02 | 2005-12-21 | ミドリ安全株式会社 | 樹脂電極及びそれを用いた静電式集塵装置 |
JP3957179B2 (ja) * | 2001-09-18 | 2007-08-15 | オルガノ株式会社 | 有機多孔質イオン交換体 |
US6841580B2 (en) * | 2001-12-21 | 2005-01-11 | Organo Corporation | Organic porous material, process for manufacturing the same, and organic porous ion exchanger |
SE0200010D0 (sv) * | 2002-01-02 | 2002-01-02 | Amersham Biosciences Ab | A method of producing hierarchical porous beads |
JP3966501B2 (ja) * | 2002-03-18 | 2007-08-29 | オルガノ株式会社 | 超純水製造装置 |
JP4011440B2 (ja) * | 2002-08-28 | 2007-11-21 | オルガノ株式会社 | イオン吸着モジュール及び水処理方法 |
US7119164B2 (en) * | 2002-09-13 | 2006-10-10 | Organo Corporation | Method for preparing sulfonated organic porous material |
JP2004264045A (ja) * | 2003-02-03 | 2004-09-24 | Japan Organo Co Ltd | イオンクロマトグラフィー装置用カラム、サプレッサー及びイオンクロマトグラフィー装置 |
US6750261B1 (en) * | 2003-04-08 | 2004-06-15 | 3M Innovative Properties Company | High internal phase emulsion foams containing polyelectrolytes |
DE112004002919T5 (de) * | 2004-07-16 | 2007-07-26 | Waters Investments Ltd., New Castle | Rohrverbindung und ein Verfahren zum Verbinden von Rohren |
US9308520B2 (en) * | 2005-12-16 | 2016-04-12 | Akzo Nobel N.V. | Silica based material |
US20090095668A1 (en) * | 2006-05-29 | 2009-04-16 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Preparation of monolithic articles |
WO2008019940A1 (en) * | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Unilever Nv | Aqueous media purification method and device comprising a functionalised polyhipe resin |
EP1889811A1 (en) * | 2006-08-17 | 2008-02-20 | Unilever N.V. | Aqueous media purification method and device comprising a functionalised polyhipe resin |
US9314712B2 (en) * | 2008-05-09 | 2016-04-19 | Dionex Corporation | Functionalized substrates with ion-exchange properties |
ES2347214B1 (es) * | 2009-04-03 | 2011-09-08 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Materiales polimericos macroporosos o meso/macroporosos obtenidos en emulsiones concentradas y altamente concentradas. |
US9272260B2 (en) * | 2009-08-14 | 2016-03-01 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Methods of synthesis and purification by use of a solid support |
US9157905B2 (en) * | 2010-02-22 | 2015-10-13 | Fujirebio Inc. | Method for identifying oncogene, method for establishing oncogene-expressing cell, and method of screening oncogene targeting drug |
JP5474881B2 (ja) | 2010-07-28 | 2014-04-16 | ローム アンド ハース カンパニー | 向上したクロマトグラフィー媒体の製造方法および使用方法 |
US20130186836A1 (en) * | 2010-10-05 | 2013-07-25 | Bio-Works Company Limited | Method For Removing Arsenic From Water Using Polymer Based Matrices With Chelating Groups Comprising Metal Ions |
US9592458B2 (en) | 2013-12-26 | 2017-03-14 | Dionex Corporation | Ion exchange foams to remove ions from samples |
CN107001411B (zh) * | 2014-12-15 | 2021-07-23 | 默克专利股份公司 | 从粗溶液捕获靶分子 |
US10495614B2 (en) | 2014-12-30 | 2019-12-03 | Dionex Corporation | Vial cap and method for removing matrix components from a liquid sample |
CN105148556B (zh) * | 2015-09-15 | 2017-04-12 | 南昌航空大学 | 一种老化p204有机相的再生方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ199916A (en) * | 1981-03-11 | 1985-07-12 | Unilever Plc | Low density polymeric block material for use as carrier for included liquids |
CA1315968C (en) * | 1987-04-24 | 1993-04-13 | David Colin Sherrington | Substrate and process for making a substrate |
JP2815700B2 (ja) * | 1989-01-13 | 1998-10-27 | バイオ―ラッド ラボラトリーズ インコーポレイテッド | クロマトグラフィカラム及びこれを用いた分離方法 |
US5228989A (en) * | 1989-07-06 | 1993-07-20 | Perseptive Biosystems, Inc. | Perfusive chromatography |
JP3168006B2 (ja) * | 1991-10-21 | 2001-05-21 | コーネル・リサーチ・フアウンデーシヨン・インコーポレーテツド | マクロ細孔ポリマー媒体が備わっているカラム |
SE9200827D0 (sv) * | 1992-03-18 | 1992-03-18 | Pharmacia Lkb Biotech | Supet porous polysaccharide gels |
US5902834A (en) * | 1994-05-15 | 1999-05-11 | Pharmacia Biotech Ab | Method of manufacturing particles, and particles that can be produced in accordance with the method |
US5728457A (en) * | 1994-09-30 | 1998-03-17 | Cornell Research Foundation, Inc. | Porous polymeric material with gradients |
US5935429A (en) * | 1997-01-03 | 1999-08-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Chromatography columns with continuous beds formed in situ from aqueous solutions |
-
1995
- 1995-11-24 SE SE9504205A patent/SE9504205D0/xx unknown
-
1996
- 1996-11-20 EP EP96940208A patent/EP0862737A1/en not_active Withdrawn
- 1996-11-20 JP JP51965397A patent/JP3925872B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 US US09/068,754 patent/US6290853B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 WO PCT/SE1996/001508 patent/WO1997019347A1/en active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SE9504205D0 (sv) | 1995-11-24 |
US6290853B1 (en) | 2001-09-18 |
JP2000501175A (ja) | 2000-02-02 |
WO1997019347A1 (en) | 1997-05-29 |
EP0862737A1 (en) | 1998-09-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3925872B2 (ja) | 連続的マクロポーラス有機マトリックスを使用するクロマトグラフ法および装置 | |
US6749749B2 (en) | Separation system, components of a separation system and methods of making and using them | |
US5902834A (en) | Method of manufacturing particles, and particles that can be produced in accordance with the method | |
US5334310A (en) | Column with macroporous polymer media | |
Tennikova et al. | High-performance membrane chromatography of proteins, a novel method of protein separation | |
Svec et al. | Monolithic stationary phases for capillary electrochromatography based on synthetic polymers: designs and applications | |
EP0320023B1 (en) | Macroporous polymeric membranes, their preparation and their use for polymer separation | |
EP1237938B1 (en) | Large-pore chromatographic beads prepared by suspension polymerization | |
CA2575570A1 (en) | Separation system, components of a separation system and methods of making and using them | |
JP4109418B2 (ja) | 新規なクロマトグラフィー装置 | |
JP5280604B2 (ja) | 多孔性支持体の後修飾 | |
CA2376429A1 (en) | Process for making fluorinated polymer adsorbent particles | |
Svec | Porous Monoliths: The Newest Generation of Stationary Phases for HPLC and Related Methods. | |
EP2027163B1 (en) | A method for producing cross-linked spherical particles | |
JP4523408B2 (ja) | マクロ多孔性架橋ポリマー粒子 | |
JPH11189601A (ja) | 高分子微粒子の製造方法及び液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法 | |
US6362245B1 (en) | Porous co-polymer particles, process for preparing the same and use of the same | |
EP0990667A2 (en) | Porous copolymer particles, process for preparing the same and use of the same | |
Svec | Organic Polymer Support Materials | |
Lu | Preparation of beaded organic polymers and their applications in size exclusion chromatography | |
Svec | University of California at Berkeley Berkeley, California |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051108 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20060201 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20060320 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060428 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060627 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060922 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20061020 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20070111 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070213 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20070226 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |