JP3873429B2 - ペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及びその用途 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及びその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
多くの歯周病は歯周局所の常在微生物によって惹起される一種の感染症と考えられている。その中でも特に、グラム陰性嫌気性桿菌のポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis、以下「Ｐ．ジンジバリス」と略す。）が成人性歯周炎や急速進行性歯周炎において最も重要な病因菌であることが明らかにされている(J. Clin. Periodontol., 15, 85-93, 1988、同316-323, 1988、J. Dent. Res.,63, 441-451, 1984)。近年、そのＰ．ジンジバリスが産生するプロテアーゼ群がその機能、即ちコラーゲンをはじめとする歯周組織成分や生体防御系に関与する血清蛋白質を分解することが知られ、病原性と深く関係していることが明らかにされている(Greiner D.,Mayrand D.:Biology of the Species Porphyromonas gingivalis, Edited by Shah H. N., Mayrand D. and Genco R. J., pp227-243, CRC Press, Boca Raton, Ann Arbor, London, Tokyo, 1993)。このＰ．ジンジバリスが産生するトリプシン様プロテアーゼ活性を有する蛋白質分解酵素であるアルグ−ジンジパイン（Arg-gingipain、以下「ＲＧＰ」と略す。）も好中球障害活性や歯周組織の主要成分であるコラーゲンを分解することが知られ、菌の定着、歯周炎の発現や歯周組織の破壊に関与するものと考えられている（山本，日薬理誌，１０５，３４５〜３５５（１９９５））。
【０００３】
従来より、歯周病の予防及び治療には、細菌の成育を阻害するような薬剤、例えばシクロヘキサジン、トラネキサム酸やテトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質、カミツレチンキ、ラタニアチンキ等の天然物等が利用されている。しかしながら、これらの薬剤は安全性に問題があったり、不快臭を伴う等種々の問題が残されている。また、特開平５−９７７０８号公報には、ＡＴＰアーゼ阻害剤、システインプロテアーゼ阻害剤等を有効成分とする歯周病治療剤が開示されているが、該治療剤の抗歯周病効果は満足のいくものではなかった。一方、ＲＧＰを阻害する物質としては、特開平８−８１３８０号公報に高分子量ポリフェノールが報告されているのみである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、歯周病の発症と進行にＰ．ジンジバリスが密接に関係していること、Ｐ．ジンジバリスの歯周病に関与する成分には蛋白質分解酵素であるＲＧＰが寄与していることに着目し、ＲＧＰの蛋白質分解活性を選択的に阻害することにより、歯周病疾患の予防剤及び治療剤等として有用な新規化合物を提供することにある。
【０００５】
また、本発明の他の目的は、上記化合物の製造方法及び用途を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、有効な歯周病疾患の予防及び治療剤を得るべく鋭意研究を重ねた結果、蛋白質分解酵素であるＲＧＰの活性を阻害する新規なペプチド誘導体を見出し、これに基づき本発明を完成した。
【０００７】
即ち、本発明は、一般式
【０００８】
【化４】
【０００９】
（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ1及びＡ2は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基を示す。Ｒ1は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ2は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ3は−ＯＲ4又は−ＮＲ5Ｒ6を示す。Ｒ4、Ｒ5又はＲ6は、同一又は異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩に係る。
【００１０】
また、本発明は、一般式
【００１１】
【化５】
【００１２】
（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ1及びＡ2は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基を示す。Ｒ1は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ2は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ3は−ＯＲ4又は−ＮＲ5Ｒ6を示す。Ｒ4、Ｒ5又はＲ6は、同一又は異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。Ａ3及びＡ4は同一又は相異なってＮεが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮimが保護基で保護されたヒスチジル誘導体を示し、Ｒ7は水素原子、ニトロ基又は保護基を示す。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を、脱保護基反応することを特徴とする一般式
【００１３】
【化６】
【００１４】
（式中、Ｘ、Ａ1、Ａ2、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、前記に同じ。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩の製造方法にも係る。
【００１５】
更に、本発明は、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を有効成分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤、
一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を有効成分とする歯周病疾患用薬剤、並びに
一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含有する組成物にも係る。
【００１６】
【発明の実施の形態】
一般式（１）のＲ2で示される置換オキシカルボニル基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル等のアラルキルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等のアルキルオキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくはアラルキルオキシカルボニル基であり、より好ましくはベンジルオキシカルボニル基である。
【００１７】
一般式（１）中、Ｒ4、Ｒ5又はＲ6の低級アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル又はエチル基である。
【００１８】
一般式（１）の本発明化合物の内、好ましい化合物は、一般式（１）においてＡ1及びＡ2がリジル基であり、Ｒ3が−ＮＲ5Ｒ6であるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩である。更に、より好ましい化合物は、一般式（１）においてＡ1及びＡ2がリジル基、Ｒ1が水素原子であり、Ｒ2がアラルキルオキシカルボニル基であり、Ｒ3が−ＮＲ5Ｒ6であるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩である。
【００１９】
本発明化合物の薬学的に許容される塩としては、特に制限はなく、薬学的に許容される酸を作用させた酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等の塩が挙げられる。更に、本発明化合物又はその薬学的に許容される塩は、水和物に代表される溶媒和物の形であってもよい。
【００２０】
また、本発明化合物を構成するアミノ酸はＬ−体、Ｄ−体のいずれであっても良い。好ましくは、Ｌ−体である。
【００２１】
一般式（１）で表される本発明化合物は、例えば、前記本発明製造方法に基づき、下記反応工程式１に従って製造することができる。
【００２２】
＜反応工程式１＞
【００２３】
【化７】
【００２４】
（各式中、Ｘ、Ａ1、Ａ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ａ3、Ａ4及びＲ7は、前記に同じ。）。
【００２５】
上記一般式（２）において、Ａ3及びＡ4で示されるＮεが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮimが保護基で保護されたヒスチジル誘導体の保護基としては、Ｒ2が安定であるような反応条件で除去されるものであれば特に制限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｐ−メトキシカルボベンゾキシ基、トリチル基等が挙げられる。
【００２６】
Ｒ7で示される保護基としては、Ｒ2が安定であるような反応条件で除去されるものであれば特に制限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−アダマンチルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好ましくは２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基である。
【００２７】
〔工程(i)〕一般式（２）で表される化合物を、適当な溶媒中あるいは無溶媒で、希酸で処理することにより、Ａ3、Ａ4及びＲ7の保護基を選択に除去し、一般式（１）で表される本発明化合物が得られる。反応の条件としてはＲ2が安定であるような反応条件であれば特に制限はない。
【００２８】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばクロロホルム、ジクロロメタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン等が例示できる。希酸としては、例えば塩酸、硫酸等の鉱酸、トリフルオロ酢酸、パラトルエンスルホン酸等の有機酸が例示できる。希酸の量としては、一般式（２）で表される化合物に対し、１〜１０００倍モル量程度、好ましくは１〜１００倍モル量である。また、反応を促進するために、アニソール、チオアニソール等を反応促進剤として添加してもよい。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜５時間である。反応温度は、０〜１００℃程度であり、好ましくは０〜４０℃である。
【００２９】
反応工程式１で原料として用いられる一般式（２）で表される化合物は、ペプチド合成化学の分野で通常用いられる方法、例えば、「（社）日本生化学会編、生化学実験講座１、タンパク質の化学IV、207-400頁、1977年、（株）東京化学同人発行」に記載の方法に準じて製造される。具体的には、下記反応工程式２及び３に従って、製造できる。
【００３０】
＜反応工程式２＞
【００３１】
【化８】
【００３２】
（各式中、Ａ3、Ａ4、Ｒ2及びＲ3は、前記に同じ。Ｒ7aは水素原子又は保護基を示し、Ｒ8はアラルキルオキシカルボニル基を示し、Ｒ9は低級アルキル基を示す。）。
【００３３】
上記反応工程式中、Ｒ7aの保護基としては、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−アダマンチルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好ましくは２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基である。
【００３４】
Ｒ8のアラルキルオキシカルボニル基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくはベンジルオキシカルボニル基である。
【００３５】
Ｒ9の低級アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル又はエチル基である。
【００３６】
〔工程(ii)〕一般式（３）で表される化合物を、適当な溶媒中又は無溶媒で、公知化合物である一般式（４）で表される化合物と縮合させることにより、一般式（５）で表される化合物が得られる。
【００３７】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。縮合させる場合、例えばＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩等の縮合剤を用いる方法、イソブチルクロロフォルメート等を用いた混合酸無水物法、アジド法、活性エステル法等を用いることができ、好ましくは縮合剤を用いる方法である。縮合剤の量としては、一般式（３）で表される化合物に対し、０．５〜１０モル倍量程度、好ましくは、１〜２倍モル量である。また、反応を促進するために、それらの縮合剤に、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド等の添加剤を反応促進剤として添加してもよい。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜２０時間である。反応温度は、−５０〜１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０℃である。
【００３８】
本工程により得られた一般式（５）で表される化合物は、単離又は単離することなく次の工程(iii)に用いることができる。
【００３９】
〔工程(iii)〕工程(ii)により得られた一般式（５）で表される化合物を、適当な溶媒中又は無溶媒で、一般式（６）で表される化合物を反応させることにより、一般式（２ａ）で表される化合物が得られる。
【００４０】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。一般式（６）で表される化合物の量としては、一般式（５）で表される化合物に対し、０．５〜１０倍モル量程度、好ましくは０．９〜２倍モル量である。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜２０時間である。反応温度は、−５０〜１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０℃である。
【００４１】
本工程により得られた一般式（２ａ）で表される化合物は、単離又は単離することなく前記工程(i)に用いることができる。
【００４２】
一般式（３）で表される化合物は、例えば特表平８−５０２４９３号公報に開示されている６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸エステルを出発原料として、公知慣用の方法により、Ｎα−ｔ−ブトキシカルボニル基をＲ8基に変換し、更にニトロ基をＲ7a基に変換することにより得られる。
【００４３】
＜反応工程式３＞
【００４４】
【化９】
【００４５】
（各式中、Ａ3、Ａ4、Ｒ2、Ｒ3及びＲ9は前記に同じ。）。
【００４６】
〔工程(iv)〕反応工程式２の工程(iii)と同様の方法により、上記一般式（５）で表される化合物の代わりに、特表平８−５０２４９３号公報に開示されている一般式（７）で表される化合物を用いて、一般式（８）で表される化合物が得られる。
【００４７】
本工程により得られた一般式（８）で表される化合物は、単離又は単離することなく、次の工程(v)に用いることができる。
【００４８】
〔工程(v)〕反応工程式２の工程(ii)と同様の方法により、上記一般式（３）で表される化合物の代わりに、工程(iv)により得られた一般式（８）で表される化合物を用いて、一般式（２ｂ）で表される化合物が得られる。
【００４９】
本工程により得られた一般式（２ｂ）で表される化合物は、単離又は単離することなく、前記工程(i)に用いることができる。
【００５０】
上記反応工程式２又は３で得られた一般式（２ａ）又は（２ｂ）で表される化合物は、適当な溶媒中又は無溶媒で、酸化反応を行い、一般式（２）で表される化合物におけるＸを−ＣＨＯＨ−から−ＣＯ−に変換することができる。本酸化反応は、例えば、デスマーチン試薬を用いるデスマーチン酸化、ジメチルスルフォキシド−１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩−ジクロロ酢酸を試薬として用いる改良モファット酸化等の方法が用いられる。
【００５１】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。試薬の量としては、一般式（２ａ）又は（２ｂ）で表される化合物に対し、０．３〜１００モル量程度、好ましくは０．５〜１０倍モル量である。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜５０時間である。反応温度は、−２０〜１００℃程度であり、好ましくは０〜４０℃である。
【００５２】
上記方法により得られる本発明化合物及び各化合物は、再結晶、蒸留、各種カラムクロマトグラフィー等の合成化学上の通常の分離手段で精製可能である。
【００５３】
本発明の一般式（１）のペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、歯周病の発症と進行に密接に関係しているＰ．ジンジバリスが産生する蛋白質分解酵素であるＲＧＰを選択的に強力に阻害する。また、本発明ペプチド誘導体は、その構造成分が、天然に存在する安全性の高いアミノ酸あるいはその誘導体よりなることから、生体内代謝産物も含めて、極めて安全性の高いと考えられる。
【００５４】
従って、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、これを有効成分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤及び歯周病疾患用薬剤として、有用である。ここで、歯周病疾患用薬剤としては、歯周病疾患の予防剤及び治療剤が包含される。
【００５５】
また、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、これと薬学的に許容される担体を含有する組成物としても、有用である。例えば、本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩は薬学的に許容される担体と配合し、口腔用ゲル製剤、口腔用粘膜付着性軟膏、歯周ポケット挿入剤、歯肉付着製剤等の口腔用製剤又は歯磨、洗口液、トローチ等の口腔衛生剤として投与することができる。
【００５６】
薬学的に許容される担体としては、その剤形に応じた通常使用される適宜な成分を使用することができ、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、流動パラフィン、白色ワセリン、プラチナベース、オイドラジットＬ、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、プルラン、トラガント、キサンタンガム、キトサン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタアクリル酸、メタアクリル酸エチル、ジメチルアミノアセテート、酢酸セルロース、コラーゲン、アテロコラーゲン、ゼラチン、グリセリン、トリアセチン、マクロゴール４００、ポリソルベート６０、ステアリン酸ポリオキシル４０、パラオキシ安息香酸ブチル、セタノール、モノステアリン酸グリセリン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、カラギーナン、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ヒノキチオール、アラントイン、グリチルリチン、アラビアゴム、デンプン、コーンスターチ、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ブドウ糖、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、メントール、ユーカリ油、ペッパーミント、スペアミント、色素、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウムのフッ化物、塩化リゾチウム、アズレン等の抗炎症剤、塩化ナトリウム等の通常使用される成分を適宜配合することができる。
【００５７】
本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩を含有する組成物を投与する方法としては、例えば、ゲル製剤又は軟膏製剤の場合は、歯肉に塗布すればよく、テープ製剤の場合には歯肉に付着させればよく、又ポケット挿入剤の場合には歯周ポケットに挿入すればよい。
【００５８】
投与量としては歯周病の広がり度合いにより異なるが、通常本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩として０．００１重量％以上を含有する製剤の適量を、通常１日１回以上投与、塗布または洗浄すればよい。
【００５９】
【実施例】
以下に、参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。尚、参考例及び実施例に示した各化学構造式において、ＯＨ基が結合する不斉炭素原子に付けられた「＊」及び「※」の記号は、対となる化合物間で絶対配置が互いに逆であることを示している。
【００６０】
参考例１ 下記化合物（１）の合成
【００６１】
【化１０】
【００６２】
特表平８−５０２４９３号記載の方法に準じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸メチルエステル１.９ｇ（５.２ｍｍｏｌ）、アニソール０.２ｍｌとトリフルオロ酢酸１９ｍｌの混合物を氷冷下１５分、室温４５分攪拌した。反応後、反応液を減圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン２０ｍｌを加えた。ｎ−ヘキサン層をデカンテーションにより除去後、得られた残渣をテトラヒドロフラン２０ｍｌに溶解し、氷冷下、トリエチルアミンで中和した。このテトラヒドロフラン溶液をＮα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン２.５７ｇ（６.８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１.１ｍｌ（７.８ｍｍｏｌ）とイソブチルクロロホルメート１.０ｍｌ（７.８ｍｍｏｌ）で調製した混合酸無水物のテトラヒドロフラン溶液３０ｍｌに加え、氷冷下０．５時間撹拌した。精製水２ｍｌを加え反応を停止させた後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝1０：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物２.８５ｇ（収率８７.７％）を得た。以下に物性値を示す。
【００６３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６４（Ｍ＋Ｋ）+。
【００６４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.46 (1H, brs), 7.38-7.23 (6H, m), 6.92 (1H, m), 5.96及び5.78 (1H, brd), 5.06 (2H, m), 4.84及び4.77 (1H, brs), 4.39 (1H, m), 4.27及び4.203 (1H, brs), 4.08 (1H, m), 3.79及び3.77 (3H, s), 3.45-3.08 (4H, m), 1.82-1.27 (19H, m)。
【００６５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1708, 1704, 1693, 1680, 1666, 1660, 1536, 1531, 1273, 1256。
【００６６】
参考例２ 下記化合物（２−１）及び（２−２）の合成
【００６７】
【化１１】
【００６８】
参考例１で得た化合物（１）２．３０ｇ（３．７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液２３ｍｌに氷冷下、水酸化ナトリウム２２１ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）の水溶液２２ｍｌを加え、３時間撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸水にてｐＨ４に調製し、溶媒を留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣にジエチルエーテルを加え粉末化し、化合物（１）のカルボン酸誘導体１．９４ｇ(収率８５．８ｇ）を得た。得られたカルボン酸誘導体１．６０ｇ（２．６ｍｍｏｌ）に、Ｎα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン ジメチルアミド８４７ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物４２４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩５９４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン２６３ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ１６ｍｌ溶液を室温６時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、薄層クロマトグラフィー上、Ｒｆ値０．３９（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ））の画分を採取し、石油エーテルより粉末化し、化合物（２−１）を５７９ｍｇ（収率２５．７％）得た。また、Ｒｆ値０．３５（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ））の画分を採取し、ジエチルエーテルより粉末化し、化合物（２−２）を９１８ｍｇ（収率４０．７％）得た。更に両化合物の混合物を３４９ｍｇ（収率１５．５％）得た。以下に物性値を示す。
【００６９】
（ｉ）化合物（２−１）：
融点：９５−９９℃。
【００７０】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）+。
【００７１】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.10 (1H, brs), 7.81-7.69 (1H, brd), 7.32 (5H, m), 6.86 (1H, m), 5.98 (1H, brs), 5.11-5.02 (2H, m), 4.89-4.60 (3H, m), 4.36-4.12 (3H, m), 3.45 (1H, m), 3.11 (8H, m), 2.93 (3H, s), 1.80-1.27 (34H, m)。
【００７２】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1721, 1710, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1641, 1632, 1615, 1601, 1547, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1444, 1413, 1408, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254, 1170。
【００７３】
比旋光度：［α］25 D＝−２２．５３°（ｃ＝1.003, クロロホルム ）。
【００７４】
（ｉｉ）化合物（２−２）：
融点：９１−９５℃。
【００７５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）+。
【００７６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.30 (1H, brs), 7.70-7.52 (2H, m), 7.33-7.23 (5H, m), 6.13 (1H, brs), 5.17-4.74 (5H, m), 4.30 (1H, m), 4.18 (1H, m), 4.12 (1H,m), 3.33-2.91 (12H, m), 1.72-1.35 (34H, m)。
【００７７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1722, 1710, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1614, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1444, 1413, 1409, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254, 1170。
【００７８】
比旋光度：［α］25 D＝−１３．０１°（ｃ＝0.507, クロロホルム ）。
【００７９】
参考例３ 下記化合物（３）の合成
【００８０】
【化１２】
【００８１】
参考例２で得られた化合物（２−１）５００ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液２０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン２５０ｍｇを加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオキサン２ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水２ｍｌの混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド１６５μｌ（１．１５４ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反応後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５０％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；６０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮し、ジエチルエールより粉末化し、上記化合物３７４ｍｇ（収率７８．９％）を得た。以下に物性値を示す。
【００８２】
融点：１００−１０４℃。
【００８３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【００８４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.35-7.29 (5H, m), 5.12-5.04 (2H, m), 4.84 (1H, m), 4.28-4.27 (1H, m), 4.07-4.04 (2H, m), 3.21-3.01 (9H, m),2.95 (3H, s), 1.81-1.25 (34H, m)。
【００８５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3345, 1721, 1709, 1704, 1691, 1689, 1679, 1674, 1666, 1660, 1650, 1642, 1633, 1615, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1407, 1403, 1367, 1275, 1252, 1172。
【００８６】
比旋光度：［α］25 D＝−３０．２０°（ｃ＝1.013, メタノール ）。
【００８７】
参考例４ 下記化合物（４）の合成
【００８８】
【化１３】
【００８９】
参考例２で得られた化合物（２−２）８５４ｍｇ（０．９９ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液３０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン４００ｍｇを加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオキサン３ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水３ｍｌの混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド２１１μｌ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反応後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５０％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；５５％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮し、凍結乾燥し、上記化合物５４４ｍｇ（収率６７．２％）を得た。以下に物性値を示す。
【００９０】
融点：９４−９８℃。
【００９１】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【００９２】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：7.46 (1H, brs), 7.36-7.31 (5H, m), 6.76 (1H, brs), 5.04-4.95 (2H, m), 4.66-4.63 (1H, m), 4.09 (1H, m),3.96 (1H, m), 3.92-3.88 (1H, m), 3.05-2.82 (12H, m), 1.64-1.09 (34H, m)。
【００９３】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3354, 1684, 1672, 1642, 1527, 1456, 1405, 1367, 1274, 1252, 1172。
【００９４】
比旋光度：［α］25 D＝−１３．５１°（ｃ＝1.006, メタノール ）
参考例５ 下記化合物（５）の合成
【００９５】
【化１４】
【００９６】
参考例２で得られた化合物（２−１）及び（２−２）の混合物３４９ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ）とデスマーチン試薬６８０ｍｇ（１．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍｌを室温１３時間撹拌した後、反応液に精製水２ｍｌを加え、０．２時間撹拌した。不溶物を瀘去し、ジクロロメタン層を５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１２：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物１９１ｍｇ（収率５４．８％）を得た。以下に物性値を示す。
【００９７】
融点：８１−８４℃。
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ ８６３（Ｍ−Ｈ）-。
【００９８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.86 (1H, brs), 7.52 (1H, brs), 7.33 (5H, m), 5.88 (1H, brs), 5.39 (1H, brs), 5.07 (2H, s), 4.87-4.83 (1H, m), 4.75 (1H, m), 4.17 (1H, m), 3.49-3.29 (2H, m), 3.10-2.91 (10H, m), 1.98 (1H, m), 1.75-1.33 (33H, m)。
【００９９】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3332, 1722, 1710, 1704, 1692, 1680, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1621, 1614, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1367, 1254, 1170。
【０１００】
参考例６ 下記化合物（６）の合成
【０１０１】
【化１５】
【０１０２】
特表平８−５０２４９３号記載の方法に準じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸メチルエステル１４．２ｇ（３９．１ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液２０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン４．０ｇを加え、常圧下で３２時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣とトリフルオロ酢酸１５０ｍｌの混合物を１．３時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン５０ｍｌを加えた。ｎ−ヘキサン層をデカンテーションにより除去後、得られた残渣のジオキサン１８０ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水２００ｍｌ混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド７．３ｍｌ（５１．０ｍｍｏｌ）を加え、１３時間撹拌した。反応液を濃縮し、２Ｎ塩酸を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層をＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮・乾燥し、不定形の結晶１１．５ｇ（８３．５％）を得た。得られた結晶１０．５ｇ（２９．８ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム２．０ｇ（５０ｍｍｏｌ）、５０％メタノール水２００ｍｌの混合物を５５分間撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸でｐＨ７に調製し、減圧下濃縮した。得られた残渣を１Ｎ塩酸に溶解し、ＭＣＩゲルを担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０〜４０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮・乾燥し、不定形の結晶７．３２ｇ（７２．６％）を得た。得られた結晶５００ｍｇ（１．４４ｍｍｏｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム３ｍｌ、アセトン３ｍｌの混合物に氷冷下、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニルクロライド７００ｍｇ（２．３１ｍｍｏｌ）のアセトン溶液２ｍｌを滴下し、２．５時間撹拌した。反応後、反応液を５％クエン酸でｐＨ７に調製し、減圧下濃縮した。残渣を５％クエン酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をメタノール中シクロヘキシルアミン塩とし、ジエチルエーテルより粉末化した。得られた粉末を１Ｎ塩酸にて脱塩し、酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：メタノール：精製水＝１０：３：１（ｖ／ｖ）の下層液で溶出）により精製した。ジエチルエーテルより粉末化し、上記化合物を１５４ｍｇ（収率１７．７％）得た。以下に物性値を示す。
【０１０３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２７（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０１０４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：7.35-7.29 (5H, m), 7.09及び6.84 (１H, d, J=8Hz), 6.74 (1H, brs), 6.41 (1H, brs), 5.03-4.99 (2H, m), 3.93-3.89 (1H, m), 3.77-3.72 (1H, m), 3.03-2.97 (2H, m), 2.60-2.47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.79-1.74 (2H, m), 1.48-1.26 (10H, m)。
【０１０５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3435, 3354, 1722, 1710, 1626, 1621, 1580, 1550, 1453, 1299, 1238, 1166, 1110。
【０１０６】
参考例７ 下記化合物（７）の合成
【０１０７】
【化１６】
【０１０８】
参考例６で得られた化合物（６）７００ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）に、Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン ジメチルアミド３８１ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物２０３ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩２９０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン１１７ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２５ｍｌ溶液を加え、室温６時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１５：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上記化合物６３２ｍｇ（収率６３．３％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１０９】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８６０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１１０】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.58-7.57 (1H, m), 7.32-7.29 (5H, m), 6.28-6.02 (2H, m), 5.75及び5.55 (1H, ｍ), 5.11-5.04 (2H, m), 4.81 (2H, m), 4.46-4.05 (2H, m), 3.34-3.04 (7H, m), 2.91 (3H, s), 2.63-2.56 (8H, m), 2.10 (3H, s), 1.81 (2H, m), 1.61-1.24 (25H, m)。
【０１１１】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3340, 1705, 1701, 1636, 1550, 1455, 1403, 1394, 1368, 1298, 1251, 1167, 1111, 610.7。
【０１１２】
参考例８ 下記化合物（８）の合成
【０１１３】
【化１７】
【０１１４】
参考例７で得られた化合物（７）６２１ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）に、１０％パラジウムカーボン２１０ｍｇ、酢酸３滴、メタノール１００ｍｌの混合物を加え、３．０ｋｇ／ｃｍ2、５時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣とＮ−メチルモルホリン７３ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２ｍｌ溶液をＮα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン３３０ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物１１７ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩１６６ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ５ｍｌ溶液に氷冷下、滴下し、室温で１２時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝２５：２（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上記化合物６３２ｍｇ（収率８０．５％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１１５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ １０８８（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１１６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.71-7.69 (1H, m), 7.30 (5H, m), 6.97 (1H, m), 6.31 (2H, brs), 6.13-6.03 (1H, m), 5.10-4.80 (5H, m), 4.30-4.15 (3H, m), 3.20-2.91 (12H, m), 2.61 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.55 (3H, s), 2.09 (3H, s), 1.79 (2H, m), 1.71-1.24 (40H, m)。
【０１１７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3344, 2934, 1691, 1656, 1639, 1548, 1479, 1454, 1402, 1393, 1367, 1296, 1251, 1168, 1111, 610.6。
【０１１８】
参考例９ 下記化合物（９）の合成
【０１１９】
【化１８】
【０１２０】
参考例８で得られた化合物（８）５１０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）とデスマーチン試薬７９４ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液２０ｍｌを室温５時間撹拌した後、反応液に精製水２ｍｌを加え、０．５時間撹拌した。不溶物を瀘去し、ジクロロメタン層を５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１６：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物２１５ｍｇ（収率４２．３％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１２１】
融点：８６−９０℃。
【０１２２】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ １０８４（Ｍ−Ｈ）-。
【０１２３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：8.53 (1H, brd, J=7.6Hz), 8.28 (1H, brd, J=6.6Hz), 7.35-7.26 (6H, m), 6.77-6.75 (2H, m), 6.40 (1H, brs), 5.04-4.97 (2H, m), 4.92 (1H, m), 4.67-4.62 (1H, m), 4.02-3.97 (1H, m), 3.03-2.83 (12H, m), 2.59-2.47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.78-1.75 (2H, m), 1.62-1.14 (40H, m)。
【０１２４】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3348, 1722, 1711, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1621, 1613, 1581, 1573, 1564, 1548, 1536, 1531, 1519, 1513, 1503, 1494, 1453, 1444, 1392, 1367, 1296, 1251, 1168, 1111。
【０１２５】
実施例１ 下記化合物（１０）の合成
【０１２６】
【化１９】
【０１２７】
参考例３で得られた化合物（３）１０５ｍｇ（０．１２８ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；５％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を７３．３ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１２８】
融点：１２４−１２８℃。
【０１２９】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１３０】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：7.47-7.37 (5H, m), 5.21-5.11 (2H, m), 4.79 (1H, m), 4.27-4.08 (3H, m), 3.18 (3H, s), 3.10-2.97 (9H, m), 1.80-1.32 (16H, m)。
【０１３１】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3392, 3190, 3059, 2946, 1703, 1661, 1650, 1633, 1573, 1562, 1525, 1469, 1455, 1255, 1128, 699, 634, 622, 607, 593, 579, 564, 550, 536。
【０１３２】
比旋光度：［α］25 D＝−２６．１２°（ｃ＝0.513, メタノール ）。
【０１３３】
実施例２ 下記化合物（１１）の合成
【０１３４】
【化２０】
【０１３５】
参考例４で得た化合物（４）８４ｍｇ（０．１０２ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；精製水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を６０．７ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１３６】
融点：１２３−１２６℃。
【０１３７】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１３８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.73 (1H, d, J=9Hz), 7.36-7.30 (5H, m), 5.12-5.04 (2H, m), 4.83 (1H, m), 4.28 (1H, m), 4.17-4.04 (2H, m), 3.23-3.12 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.84-1.35 (16H, m)。
【０１３９】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3388, 3253, 3051, 1698, 1662, 1656, 1644, 1633, 1526, 1469, 1457, 1252, 599, 575。
【０１４０】
比旋光度：［α］25 D＝−１９．８６°（ｃ＝0.574, メタノール ）。
【０１４１】
実施例３ 下記化合物（１２）の合成
【０１４２】
【化２１】
【０１４３】
参考例５で得られた化合物（５）１５０ｍｇ（０．１７４ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１５分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０％メタノールで溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を９０．９ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１４４】
融点：１３１−１３４℃。
【０１４５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１４６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.35-7.29 (5H, m), 5.09 (2H, s), 4.81(1H, m), 4.29-4.02 (2H, m), 3.22-2.91 (12H, m), 1.93-1.35 (16H, m)。
【０１４７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3294, 3209, 2941, 1673, 1634, 1528, 1455, 1404, 1342, 1266, 1132, 1061, 700。
【０１４８】
実施例４ 下記化合物（１３）の合成
【０１４９】
【化２２】
【０１５０】
参考例９で得られた化合物（９）４４０ｍｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）に、アニソール０．４ｍｌ、トリフルオロ酢酸６ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１５分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０％メタノールで溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を１７４ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１５１】
融点：１０２−１０６℃。
【０１５２】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１５３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.36-7.30 (5H, m), 5.12 (1H, d, J=12Hz), 5.07 (1H, d, J=12Hz), 4.80-4.77 (1H, m), 4.26-4.02 (2H, m), 3.22-3.10 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.98-1.36 (16H, m)。
【０１５４】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3371, 3180, 3042, 2949, 1660, 1649, 1520, 1469, 1456, 1405, 1256, 1174, 620, 597, 584。
【０１５５】
試験例１ ＲＧＰに対する本発明化合物の阻害活性の測定
ＲＧＰは門脇、山本らの方法〔T.kadowaki, K.Yamamoto, et al. The Journal of Biological Chemistry, 269, 21371-21378（1994）〕によりPorphyromonas gingivalis 381の培養瀘液の上清より調製されたものを使用した。
【０１５６】
ＲＧＰに対する阻害活性については、門脇、山本らの方法〔The Journal of Biological Chemistry, 269, 21371-21378（1994）〕に従って測定した。即ち、５０ｍＭのＬ−システイン１００μｌ、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００μｌ、０．０５％のブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬（株）製）を含む１２．３ｎＭの酵素（ＲＧＰ）液２０μｌ、蒸留水８０μｌ、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌの混合物を３７℃で５分間保温した。その後、２０μＭの７−（Ｎα−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液５００μｌを加え、４０℃で反応した。１０分間後、１０ｍＭのヨード酢酸を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）１０００μｌを反応液に加え、反応を停止させ、遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光分光光度計を用い、波長３８０ｎｍで励起した４６０ｎｍの蛍光波長の蛍光強度を測定した。対照として、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液の代わりにジメチルスルホキシドを用い、同様に反応し、蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１５７】
同様に、カテプシンＢ及びカテプシンＬの阻害活性の測定はＡ．Ｊ．Ｂａｒｒｅｔｔらの方法（Biochemical Journal、201、189-198(1982)）に従った。
【０１５８】
即ち、カテプシンＢに対する阻害活性の測定は８ｍＭのジチオスレイトール及び４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）０．５ｍｌ、５μｌのカテプシンＢと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び本発明化合物０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間保温した。その後、２０μＭの７−（Ｎ−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間反応した。反応後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え反応を停止させ、遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光光度計を用い、波長３５０ｎｍで励起した４５８ｎｍの蛍光波長の蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１５９】
カテプシンＬに対する阻害活性については上記カテプシンＢの測定方法に準じて行った。
【０１６０】
即ち、上記方法のカテプシンＢの代わりにカテプシンＬをｐＨ５．５の緩衝液に加え、同様に遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光光度計を用い蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１６１】
【表１】
【０１６２】
表１より本発明化合物は、高活性でかつ選択的にアルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の酵素分解活性を阻害しうることが判る。
【０１６３】
試験例２ ＲＧＰのヒトtypeＩコラーゲン分解能に対する本発明化合物による阻害活性の測定
ＲＧＰによるヒトtypeＩコラーゲンの分解に対する本発明化合物による阻害活性の測定は、次のようにして行った。５０ｍＭのＬ−システインと１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）の１：２の割合（Ｖ／Ｖ）の混液１０μｌ、０．３６ｍｇ／ｍｌの酵素液１０μｌ、本発明化合物の水溶液１０μｌの混合物を３７℃で１０分間保温した。その後、１０００μｇ／ｍｌのヒトtypeＩコラーゲン（生化学工業製）３０μｌを加え、３７℃で反応した。６０分間後、反応液２０μｌを１００μｇ／ｍｌのロイペプチンと１０ｍＭのＥＤＴＡ−Ｎａ2を含む混液１μｌで反応を停止させた。反応液を１００℃で、５分間熱処理した後、反応液１５μｌをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、下記条件下でヒトtypeＩコラーゲンを測定した。対照として、本発明化合物の水溶液に代えて、精製水を用い、同様に反応し、電気泳動により比較測定した。
【０１６４】
ゲル：マルチゲル（４／２０）２０，０００−２００，０００（第一化学薬品（株）製）、
ローディングバッファー：０．０６２５Ｍトリス塩酸バッファー（ｐＨ６．８），２％ドデシル硫酸ナトリウム，１０％グリセロール，５％２−メルカプトエタノール，１０％ブロモフェノールブルー、
電極バッファー：０．０２５Ｍトリス−０．１９４Ｍグリシン（ｐＨ８．４），０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、
泳動条件：２０ｍＡ定電流、泳動時間：約２時間、
着色：Coomassie Brilliant Blue R-250(PAGE Blue 83)。
【０１６５】
上記測定の結果、本発明の前記化合物（１３）は、１μｇ／ｍｌの低用量でＲＧＰによるヒトtypeＩコラーゲンの分解を有意に阻害することが判った。
【０１６６】
【発明の効果】
本発明化合物は、蛋白質分解酵素、特に口腔内中に存在しているポルフィロモナス・ジンジバリス（P.gingivalis）が産生するアルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の活性を特異的かつ高活性に阻害することができ、例えば、歯周病の予防剤及び治療薬等として有用である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及びその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
多くの歯周病は歯周局所の常在微生物によって惹起される一種の感染症と考えられている。その中でも特に、グラム陰性嫌気性桿菌のポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis、以下「Ｐ．ジンジバリス」と略す。）が成人性歯周炎や急速進行性歯周炎において最も重要な病因菌であることが明らかにされている(J. Clin. Periodontol., 15, 85-93, 1988、同316-323, 1988、J. Dent. Res.,63, 441-451, 1984)。近年、そのＰ．ジンジバリスが産生するプロテアーゼ群がその機能、即ちコラーゲンをはじめとする歯周組織成分や生体防御系に関与する血清蛋白質を分解することが知られ、病原性と深く関係していることが明らかにされている(Greiner D.,Mayrand D.:Biology of the Species Porphyromonas gingivalis, Edited by Shah H. N., Mayrand D. and Genco R. J., pp227-243, CRC Press, Boca Raton, Ann Arbor, London, Tokyo, 1993)。このＰ．ジンジバリスが産生するトリプシン様プロテアーゼ活性を有する蛋白質分解酵素であるアルグ−ジンジパイン（Arg-gingipain、以下「ＲＧＰ」と略す。）も好中球障害活性や歯周組織の主要成分であるコラーゲンを分解することが知られ、菌の定着、歯周炎の発現や歯周組織の破壊に関与するものと考えられている（山本，日薬理誌，１０５，３４５〜３５５（１９９５））。
【０００３】
従来より、歯周病の予防及び治療には、細菌の成育を阻害するような薬剤、例えばシクロヘキサジン、トラネキサム酸やテトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質、カミツレチンキ、ラタニアチンキ等の天然物等が利用されている。しかしながら、これらの薬剤は安全性に問題があったり、不快臭を伴う等種々の問題が残されている。また、特開平５−９７７０８号公報には、ＡＴＰアーゼ阻害剤、システインプロテアーゼ阻害剤等を有効成分とする歯周病治療剤が開示されているが、該治療剤の抗歯周病効果は満足のいくものではなかった。一方、ＲＧＰを阻害する物質としては、特開平８−８１３８０号公報に高分子量ポリフェノールが報告されているのみである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、歯周病の発症と進行にＰ．ジンジバリスが密接に関係していること、Ｐ．ジンジバリスの歯周病に関与する成分には蛋白質分解酵素であるＲＧＰが寄与していることに着目し、ＲＧＰの蛋白質分解活性を選択的に阻害することにより、歯周病疾患の予防剤及び治療剤等として有用な新規化合物を提供することにある。
【０００５】
また、本発明の他の目的は、上記化合物の製造方法及び用途を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、有効な歯周病疾患の予防及び治療剤を得るべく鋭意研究を重ねた結果、蛋白質分解酵素であるＲＧＰの活性を阻害する新規なペプチド誘導体を見出し、これに基づき本発明を完成した。
【０００７】
即ち、本発明は、一般式
【０００８】
【化４】
（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ1及びＡ2は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基を示す。Ｒ1は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ2は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ3は−ＯＲ4又は−ＮＲ5Ｒ6を示す。Ｒ4、Ｒ5又はＲ6は、同一又は異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩に係る。
【００１０】
また、本発明は、一般式
【００１１】
【化５】
（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ1及びＡ2は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基を示す。Ｒ1は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ2は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ3は−ＯＲ4又は−ＮＲ5Ｒ6を示す。Ｒ4、Ｒ5又はＲ6は、同一又は異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。Ａ3及びＡ4は同一又は相異なってＮεが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮimが保護基で保護されたヒスチジル誘導体を示し、Ｒ7は水素原子、ニトロ基又は保護基を示す。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を、脱保護基反応することを特徴とする一般式
【００１３】
【化６】
（式中、Ｘ、Ａ1、Ａ2、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、前記に同じ。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩の製造方法にも係る。
【００１５】
更に、本発明は、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を有効成分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤、
一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を有効成分とする歯周病疾患用薬剤、並びに
一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含有する組成物にも係る。
【００１６】
【発明の実施の形態】
一般式（１）のＲ2で示される置換オキシカルボニル基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル等のアラルキルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等のアルキルオキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくはアラルキルオキシカルボニル基であり、より好ましくはベンジルオキシカルボニル基である。
【００１７】
一般式（１）中、Ｒ4、Ｒ5又はＲ6の低級アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル又はエチル基である。
【００１８】
一般式（１）の本発明化合物の内、好ましい化合物は、一般式（１）においてＡ1及びＡ2がリジル基であり、Ｒ3が−ＮＲ5Ｒ6であるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩である。更に、より好ましい化合物は、一般式（１）においてＡ1及びＡ2がリジル基、Ｒ1が水素原子であり、Ｒ2がアラルキルオキシカルボニル基であり、Ｒ3が−ＮＲ5Ｒ6であるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩である。
【００１９】
本発明化合物の薬学的に許容される塩としては、特に制限はなく、薬学的に許容される酸を作用させた酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等の塩が挙げられる。更に、本発明化合物又はその薬学的に許容される塩は、水和物に代表される溶媒和物の形であってもよい。
【００２０】
また、本発明化合物を構成するアミノ酸はＬ−体、Ｄ−体のいずれであっても良い。好ましくは、Ｌ−体である。
【００２１】
一般式（１）で表される本発明化合物は、例えば、前記本発明製造方法に基づき、下記反応工程式１に従って製造することができる。
【００２２】
＜反応工程式１＞
【００２３】
【化７】
（各式中、Ｘ、Ａ1、Ａ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ａ3、Ａ4及びＲ7は、前記に同じ。）。
【００２５】
上記一般式（２）において、Ａ3及びＡ4で示されるＮεが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮimが保護基で保護されたヒスチジル誘導体の保護基としては、Ｒ2が安定であるような反応条件で除去されるものであれば特に制限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｐ−メトキシカルボベンゾキシ基、トリチル基等が挙げられる。
【００２６】
Ｒ7で示される保護基としては、Ｒ2が安定であるような反応条件で除去されるものであれば特に制限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−アダマンチルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好ましくは２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基である。
【００２７】
〔工程(i)〕一般式（２）で表される化合物を、適当な溶媒中あるいは無溶媒で、希酸で処理することにより、Ａ3、Ａ4及びＲ7の保護基を選択に除去し、一般式（１）で表される本発明化合物が得られる。反応の条件としてはＲ2が安定であるような反応条件であれば特に制限はない。
【００２８】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばクロロホルム、ジクロロメタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン等が例示できる。希酸としては、例えば塩酸、硫酸等の鉱酸、トリフルオロ酢酸、パラトルエンスルホン酸等の有機酸が例示できる。希酸の量としては、一般式（２）で表される化合物に対し、１〜１０００倍モル量程度、好ましくは１〜１００倍モル量である。また、反応を促進するために、アニソール、チオアニソール等を反応促進剤として添加してもよい。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜５時間である。反応温度は、０〜１００℃程度であり、好ましくは０〜４０℃である。
【００２９】
反応工程式１で原料として用いられる一般式（２）で表される化合物は、ペプチド合成化学の分野で通常用いられる方法、例えば、「（社）日本生化学会編、生化学実験講座１、タンパク質の化学IV、207-400頁、1977年、（株）東京化学同人発行」に記載の方法に準じて製造される。具体的には、下記反応工程式２及び３に従って、製造できる。
【００３０】
＜反応工程式２＞
【００３１】
【化８】
（各式中、Ａ3、Ａ4、Ｒ2及びＲ3は、前記に同じ。Ｒ7aは水素原子又は保護基を示し、Ｒ8はアラルキルオキシカルボニル基を示し、Ｒ9は低級アルキル基を示す。）。
【００３３】
上記反応工程式中、Ｒ7aの保護基としては、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−アダマンチルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好ましくは２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基である。
【００３４】
Ｒ8のアラルキルオキシカルボニル基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくはベンジルオキシカルボニル基である。
【００３５】
Ｒ9の低級アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル又はエチル基である。
【００３６】
〔工程(ii)〕一般式（３）で表される化合物を、適当な溶媒中又は無溶媒で、公知化合物である一般式（４）で表される化合物と縮合させることにより、一般式（５）で表される化合物が得られる。
【００３７】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。縮合させる場合、例えばＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩等の縮合剤を用いる方法、イソブチルクロロフォルメート等を用いた混合酸無水物法、アジド法、活性エステル法等を用いることができ、好ましくは縮合剤を用いる方法である。縮合剤の量としては、一般式（３）で表される化合物に対し、０．５〜１０モル倍量程度、好ましくは、１〜２倍モル量である。また、反応を促進するために、それらの縮合剤に、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド等の添加剤を反応促進剤として添加してもよい。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜２０時間である。反応温度は、−５０〜１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０℃である。
【００３８】
本工程により得られた一般式（５）で表される化合物は、単離又は単離することなく次の工程(iii)に用いることができる。
【００３９】
〔工程(iii)〕工程(ii)により得られた一般式（５）で表される化合物を、適当な溶媒中又は無溶媒で、一般式（６）で表される化合物を反応させることにより、一般式（２ａ）で表される化合物が得られる。
【００４０】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。一般式（６）で表される化合物の量としては、一般式（５）で表される化合物に対し、０．５〜１０倍モル量程度、好ましくは０．９〜２倍モル量である。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜２０時間である。反応温度は、−５０〜１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０℃である。
【００４１】
本工程により得られた一般式（２ａ）で表される化合物は、単離又は単離することなく前記工程(i)に用いることができる。
【００４２】
一般式（３）で表される化合物は、例えば特表平８−５０２４９３号公報に開示されている６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸エステルを出発原料として、公知慣用の方法により、Ｎα−ｔ−ブトキシカルボニル基をＲ8基に変換し、更にニトロ基をＲ7a基に変換することにより得られる。
【００４３】
＜反応工程式３＞
【００４４】
【化９】
（各式中、Ａ3、Ａ4、Ｒ2、Ｒ3及びＲ9は前記に同じ。）。
【００４６】
〔工程(iv)〕反応工程式２の工程(iii)と同様の方法により、上記一般式（５）で表される化合物の代わりに、特表平８−５０２４９３号公報に開示されている一般式（７）で表される化合物を用いて、一般式（８）で表される化合物が得られる。
【００４７】
本工程により得られた一般式（８）で表される化合物は、単離又は単離することなく、次の工程(v)に用いることができる。
【００４８】
〔工程(v)〕反応工程式２の工程(ii)と同様の方法により、上記一般式（３）で表される化合物の代わりに、工程(iv)により得られた一般式（８）で表される化合物を用いて、一般式（２ｂ）で表される化合物が得られる。
【００４９】
本工程により得られた一般式（２ｂ）で表される化合物は、単離又は単離することなく、前記工程(i)に用いることができる。
【００５０】
上記反応工程式２又は３で得られた一般式（２ａ）又は（２ｂ）で表される化合物は、適当な溶媒中又は無溶媒で、酸化反応を行い、一般式（２）で表される化合物におけるＸを−ＣＨＯＨ−から−ＣＯ−に変換することができる。本酸化反応は、例えば、デスマーチン試薬を用いるデスマーチン酸化、ジメチルスルフォキシド−１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩−ジクロロ酢酸を試薬として用いる改良モファット酸化等の方法が用いられる。
【００５１】
反応に使用される溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使用してもよい。試薬の量としては、一般式（２ａ）又は（２ｂ）で表される化合物に対し、０．３〜１００モル量程度、好ましくは０．５〜１０倍モル量である。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜５０時間である。反応温度は、−２０〜１００℃程度であり、好ましくは０〜４０℃である。
【００５２】
上記方法により得られる本発明化合物及び各化合物は、再結晶、蒸留、各種カラムクロマトグラフィー等の合成化学上の通常の分離手段で精製可能である。
【００５３】
本発明の一般式（１）のペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、歯周病の発症と進行に密接に関係しているＰ．ジンジバリスが産生する蛋白質分解酵素であるＲＧＰを選択的に強力に阻害する。また、本発明ペプチド誘導体は、その構造成分が、天然に存在する安全性の高いアミノ酸あるいはその誘導体よりなることから、生体内代謝産物も含めて、極めて安全性の高いと考えられる。
【００５４】
従って、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、これを有効成分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤及び歯周病疾患用薬剤として、有用である。ここで、歯周病疾患用薬剤としては、歯周病疾患の予防剤及び治療剤が包含される。
【００５５】
また、一般式（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩は、これと薬学的に許容される担体を含有する組成物としても、有用である。例えば、本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩は薬学的に許容される担体と配合し、口腔用ゲル製剤、口腔用粘膜付着性軟膏、歯周ポケット挿入剤、歯肉付着製剤等の口腔用製剤又は歯磨、洗口液、トローチ等の口腔衛生剤として投与することができる。
【００５６】
薬学的に許容される担体としては、その剤形に応じた通常使用される適宜な成分を使用することができ、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、流動パラフィン、白色ワセリン、プラチナベース、オイドラジットＬ、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、プルラン、トラガント、キサンタンガム、キトサン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタアクリル酸、メタアクリル酸エチル、ジメチルアミノアセテート、酢酸セルロース、コラーゲン、アテロコラーゲン、ゼラチン、グリセリン、トリアセチン、マクロゴール４００、ポリソルベート６０、ステアリン酸ポリオキシル４０、パラオキシ安息香酸ブチル、セタノール、モノステアリン酸グリセリン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、カラギーナン、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ヒノキチオール、アラントイン、グリチルリチン、アラビアゴム、デンプン、コーンスターチ、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ブドウ糖、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、メントール、ユーカリ油、ペッパーミント、スペアミント、色素、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウムのフッ化物、塩化リゾチウム、アズレン等の抗炎症剤、塩化ナトリウム等の通常使用される成分を適宜配合することができる。
【００５７】
本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩を含有する組成物を投与する方法としては、例えば、ゲル製剤又は軟膏製剤の場合は、歯肉に塗布すればよく、テープ製剤の場合には歯肉に付着させればよく、又ポケット挿入剤の場合には歯周ポケットに挿入すればよい。
【００５８】
投与量としては歯周病の広がり度合いにより異なるが、通常本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許容される塩として０．００１重量％以上を含有する製剤の適量を、通常１日１回以上投与、塗布または洗浄すればよい。
【００５９】
【実施例】
以下に、参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。尚、参考例及び実施例に示した各化学構造式において、ＯＨ基が結合する不斉炭素原子に付けられた「＊」及び「※」の記号は、対となる化合物間で絶対配置が互いに逆であることを示している。
【００６０】
参考例１ 下記化合物（１）の合成
【００６１】
【化１０】
特表平８−５０２４９３号記載の方法に準じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸メチルエステル１.９ｇ（５.２ｍｍｏｌ）、アニソール０.２ｍｌとトリフルオロ酢酸１９ｍｌの混合物を氷冷下１５分、室温４５分攪拌した。反応後、反応液を減圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン２０ｍｌを加えた。ｎ−ヘキサン層をデカンテーションにより除去後、得られた残渣をテトラヒドロフラン２０ｍｌに溶解し、氷冷下、トリエチルアミンで中和した。このテトラヒドロフラン溶液をＮα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン２.５７ｇ（６.８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１.１ｍｌ（７.８ｍｍｏｌ）とイソブチルクロロホルメート１.０ｍｌ（７.８ｍｍｏｌ）で調製した混合酸無水物のテトラヒドロフラン溶液３０ｍｌに加え、氷冷下０．５時間撹拌した。精製水２ｍｌを加え反応を停止させた後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝1０：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物２.８５ｇ（収率８７.７％）を得た。以下に物性値を示す。
【００６３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６４（Ｍ＋Ｋ）+。
【００６４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.46 (1H, brs), 7.38-7.23 (6H, m), 6.92 (1H, m), 5.96及び5.78 (1H, brd), 5.06 (2H, m), 4.84及び4.77 (1H, brs), 4.39 (1H, m), 4.27及び4.203 (1H, brs), 4.08 (1H, m), 3.79及び3.77 (3H, s), 3.45-3.08 (4H, m), 1.82-1.27 (19H, m)。
【００６５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1708, 1704, 1693, 1680, 1666, 1660, 1536, 1531, 1273, 1256。
【００６６】
参考例２ 下記化合物（２−１）及び（２−２）の合成
【００６７】
【化１１】
参考例１で得た化合物（１）２．３０ｇ（３．７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液２３ｍｌに氷冷下、水酸化ナトリウム２２１ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）の水溶液２２ｍｌを加え、３時間撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸水にてｐＨ４に調製し、溶媒を留去した後、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣にジエチルエーテルを加え粉末化し、化合物（１）のカルボン酸誘導体１．９４ｇ(収率８５．８ｇ）を得た。得られたカルボン酸誘導体１．６０ｇ（２．６ｍｍｏｌ）に、Ｎα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン ジメチルアミド８４７ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物４２４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩５９４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン２６３ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ１６ｍｌ溶液を室温６時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、薄層クロマトグラフィー上、Ｒｆ値０．３９（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ））の画分を採取し、石油エーテルより粉末化し、化合物（２−１）を５７９ｍｇ（収率２５．７％）得た。また、Ｒｆ値０．３５（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ））の画分を採取し、ジエチルエーテルより粉末化し、化合物（２−２）を９１８ｍｇ（収率４０．７％）得た。更に両化合物の混合物を３４９ｍｇ（収率１５．５％）得た。以下に物性値を示す。
【００６９】
（ｉ）化合物（２−１）：
融点：９５−９９℃。
【００７０】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）+。
【００７１】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.10 (1H, brs), 7.81-7.69 (1H, brd), 7.32 (5H, m), 6.86 (1H, m), 5.98 (1H, brs), 5.11-5.02 (2H, m), 4.89-4.60 (3H, m), 4.36-4.12 (3H, m), 3.45 (1H, m), 3.11 (8H, m), 2.93 (3H, s), 1.80-1.27 (34H, m)。
【００７２】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1721, 1710, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1641, 1632, 1615, 1601, 1547, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1444, 1413, 1408, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254, 1170。
【００７３】
比旋光度：［α］25 D＝−２２．５３°（ｃ＝1.003, クロロホルム ）。
【００７４】
（ｉｉ）化合物（２−２）：
融点：９１−９５℃。
【００７５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）+。
【００７６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：8.30 (1H, brs), 7.70-7.52 (2H, m), 7.33-7.23 (5H, m), 6.13 (1H, brs), 5.17-4.74 (5H, m), 4.30 (1H, m), 4.18 (1H, m), 4.12 (1H,m), 3.33-2.91 (12H, m), 1.72-1.35 (34H, m)。
【００７７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3334, 1722, 1710, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1614, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1444, 1413, 1409, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254, 1170。
【００７８】
比旋光度：［α］25 D＝−１３．０１°（ｃ＝0.507, クロロホルム ）。
【００７９】
参考例３ 下記化合物（３）の合成
【００８０】
【化１２】
参考例２で得られた化合物（２−１）５００ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液２０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン２５０ｍｇを加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオキサン２ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水２ｍｌの混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド１６５μｌ（１．１５４ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反応後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５０％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；６０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮し、ジエチルエールより粉末化し、上記化合物３７４ｍｇ（収率７８．９％）を得た。以下に物性値を示す。
【００８２】
融点：１００−１０４℃。
【００８３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【００８４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.35-7.29 (5H, m), 5.12-5.04 (2H, m), 4.84 (1H, m), 4.28-4.27 (1H, m), 4.07-4.04 (2H, m), 3.21-3.01 (9H, m),2.95 (3H, s), 1.81-1.25 (34H, m)。
【００８５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3345, 1721, 1709, 1704, 1691, 1689, 1679, 1674, 1666, 1660, 1650, 1642, 1633, 1615, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1407, 1403, 1367, 1275, 1252, 1172。
【００８６】
比旋光度：［α］25 D＝−３０．２０°（ｃ＝1.013, メタノール ）。
【００８７】
参考例４ 下記化合物（４）の合成
【００８８】
【化１３】
参考例２で得られた化合物（２−２）８５４ｍｇ（０．９９ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液３０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン４００ｍｇを加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオキサン３ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水３ｍｌの混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド２１１μｌ（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反応後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５０％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；５５％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮し、凍結乾燥し、上記化合物５４４ｍｇ（収率６７．２％）を得た。以下に物性値を示す。
【００９０】
融点：９４−９８℃。
【００９１】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【００９２】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：7.46 (1H, brs), 7.36-7.31 (5H, m), 6.76 (1H, brs), 5.04-4.95 (2H, m), 4.66-4.63 (1H, m), 4.09 (1H, m),3.96 (1H, m), 3.92-3.88 (1H, m), 3.05-2.82 (12H, m), 1.64-1.09 (34H, m)。
【００９３】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3354, 1684, 1672, 1642, 1527, 1456, 1405, 1367, 1274, 1252, 1172。
【００９４】
比旋光度：［α］25 D＝−１３．５１°（ｃ＝1.006, メタノール ）
参考例５ 下記化合物（５）の合成
【００９５】
【化１４】
参考例２で得られた化合物（２−１）及び（２−２）の混合物３４９ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ）とデスマーチン試薬６８０ｍｇ（１．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍｌを室温１３時間撹拌した後、反応液に精製水２ｍｌを加え、０．２時間撹拌した。不溶物を瀘去し、ジクロロメタン層を５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１２：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物１９１ｍｇ（収率５４．８％）を得た。以下に物性値を示す。
【００９７】
融点：８１−８４℃。
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ ８６３（Ｍ−Ｈ）-。
【００９８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.86 (1H, brs), 7.52 (1H, brs), 7.33 (5H, m), 5.88 (1H, brs), 5.39 (1H, brs), 5.07 (2H, s), 4.87-4.83 (1H, m), 4.75 (1H, m), 4.17 (1H, m), 3.49-3.29 (2H, m), 3.10-2.91 (10H, m), 1.98 (1H, m), 1.75-1.33 (33H, m)。
【００９９】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3332, 1722, 1710, 1704, 1692, 1680, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1621, 1614, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 1367, 1254, 1170。
【０１００】
参考例６ 下記化合物（６）の合成
【０１０１】
【化１５】
特表平８−５０２４９３号記載の方法に準じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸メチルエステル１４．２ｇ（３９．１ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液２０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン４．０ｇを加え、常圧下で３２時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣とトリフルオロ酢酸１５０ｍｌの混合物を１．３時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン５０ｍｌを加えた。ｎ−ヘキサン層をデカンテーションにより除去後、得られた残渣のジオキサン１８０ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水２００ｍｌ混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド７．３ｍｌ（５１．０ｍｍｏｌ）を加え、１３時間撹拌した。反応液を濃縮し、２Ｎ塩酸を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層をＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮・乾燥し、不定形の結晶１１．５ｇ（８３．５％）を得た。得られた結晶１０．５ｇ（２９．８ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム２．０ｇ（５０ｍｍｏｌ）、５０％メタノール水２００ｍｌの混合物を５５分間撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸でｐＨ７に調製し、減圧下濃縮した。得られた残渣を１Ｎ塩酸に溶解し、ＭＣＩゲルを担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０〜４０％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮・乾燥し、不定形の結晶７．３２ｇ（７２．６％）を得た。得られた結晶５００ｍｇ（１．４４ｍｍｏｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム３ｍｌ、アセトン３ｍｌの混合物に氷冷下、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニルクロライド７００ｍｇ（２．３１ｍｍｏｌ）のアセトン溶液２ｍｌを滴下し、２．５時間撹拌した。反応後、反応液を５％クエン酸でｐＨ７に調製し、減圧下濃縮した。残渣を５％クエン酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をメタノール中シクロヘキシルアミン塩とし、ジエチルエーテルより粉末化した。得られた粉末を１Ｎ塩酸にて脱塩し、酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：メタノール：精製水＝１０：３：１（ｖ／ｖ）の下層液で溶出）により精製した。ジエチルエーテルより粉末化し、上記化合物を１５４ｍｇ（収率１７．７％）得た。以下に物性値を示す。
【０１０３】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２７（Ｍ＋Ｎａ）+。
【０１０４】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：7.35-7.29 (5H, m), 7.09及び6.84 (１H, d, J=8Hz), 6.74 (1H, brs), 6.41 (1H, brs), 5.03-4.99 (2H, m), 3.93-3.89 (1H, m), 3.77-3.72 (1H, m), 3.03-2.97 (2H, m), 2.60-2.47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.79-1.74 (2H, m), 1.48-1.26 (10H, m)。
【０１０５】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3435, 3354, 1722, 1710, 1626, 1621, 1580, 1550, 1453, 1299, 1238, 1166, 1110。
【０１０６】
参考例７ 下記化合物（７）の合成
【０１０７】
【化１６】
参考例６で得られた化合物（６）７００ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）に、Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン ジメチルアミド３８１ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物２０３ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩２９０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン１１７ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２５ｍｌ溶液を加え、室温６時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１５：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上記化合物６３２ｍｇ（収率６３．３％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１０９】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８６０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１１０】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.58-7.57 (1H, m), 7.32-7.29 (5H, m), 6.28-6.02 (2H, m), 5.75及び5.55 (1H, ｍ), 5.11-5.04 (2H, m), 4.81 (2H, m), 4.46-4.05 (2H, m), 3.34-3.04 (7H, m), 2.91 (3H, s), 2.63-2.56 (8H, m), 2.10 (3H, s), 1.81 (2H, m), 1.61-1.24 (25H, m)。
【０１１１】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3340, 1705, 1701, 1636, 1550, 1455, 1403, 1394, 1368, 1298, 1251, 1167, 1111, 610.7。
【０１１２】
参考例８ 下記化合物（８）の合成
【０１１３】
【化１７】
参考例７で得られた化合物（７）６２１ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）に、１０％パラジウムカーボン２１０ｍｇ、酢酸３滴、メタノール１００ｍｌの混合物を加え、３．０ｋｇ／ｃｍ2、５時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣とＮ−メチルモルホリン７３ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２ｍｌ溶液をＮα−カルボベンゾキシ−Ｎε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン３３０ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物１１７ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩１６６ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ５ｍｌ溶液に氷冷下、滴下し、室温で１２時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝２５：２（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上記化合物６３２ｍｇ（収率８０．５％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１１５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ １０８８（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１１６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：7.71-7.69 (1H, m), 7.30 (5H, m), 6.97 (1H, m), 6.31 (2H, brs), 6.13-6.03 (1H, m), 5.10-4.80 (5H, m), 4.30-4.15 (3H, m), 3.20-2.91 (12H, m), 2.61 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.55 (3H, s), 2.09 (3H, s), 1.79 (2H, m), 1.71-1.24 (40H, m)。
【０１１７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3344, 2934, 1691, 1656, 1639, 1548, 1479, 1454, 1402, 1393, 1367, 1296, 1251, 1168, 1111, 610.6。
【０１１８】
参考例９ 下記化合物（９）の合成
【０１１９】
【化１８】
参考例８で得られた化合物（８）５１０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）とデスマーチン試薬７９４ｍｇ（１．８７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液２０ｍｌを室温５時間撹拌した後、反応液に精製水２ｍｌを加え、０．５時間撹拌した。不溶物を瀘去し、ジクロロメタン層を５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１６：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物２１５ｍｇ（収率４２．３％）を得た。以下に物性値を示す。
【０１２１】
融点：８６−９０℃。
【０１２２】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ １０８４（Ｍ−Ｈ）-。
【０１２３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：8.53 (1H, brd, J=7.6Hz), 8.28 (1H, brd, J=6.6Hz), 7.35-7.26 (6H, m), 6.77-6.75 (2H, m), 6.40 (1H, brs), 5.04-4.97 (2H, m), 4.92 (1H, m), 4.67-4.62 (1H, m), 4.02-3.97 (1H, m), 3.03-2.83 (12H, m), 2.59-2.47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.78-1.75 (2H, m), 1.62-1.14 (40H, m)。
【０１２４】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3348, 1722, 1711, 1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 1621, 1613, 1581, 1573, 1564, 1548, 1536, 1531, 1519, 1513, 1503, 1494, 1453, 1444, 1392, 1367, 1296, 1251, 1168, 1111。
【０１２５】
実施例１ 下記化合物（１０）の合成
【０１２６】
【化１９】
参考例３で得られた化合物（３）１０５ｍｇ（０．１２８ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；５％メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を７３．３ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１２８】
融点：１２４−１２８℃。
【０１２９】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１３０】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：7.47-7.37 (5H, m), 5.21-5.11 (2H, m), 4.79 (1H, m), 4.27-4.08 (3H, m), 3.18 (3H, s), 3.10-2.97 (9H, m), 1.80-1.32 (16H, m)。
【０１３１】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3392, 3190, 3059, 2946, 1703, 1661, 1650, 1633, 1573, 1562, 1525, 1469, 1455, 1255, 1128, 699, 634, 622, 607, 593, 579, 564, 550, 536。
【０１３２】
比旋光度：［α］25 D＝−２６．１２°（ｃ＝0.513, メタノール ）。
【０１３３】
実施例２ 下記化合物（１１）の合成
【０１３４】
【化２０】
参考例４で得た化合物（４）８４ｍｇ（０．１０２ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；精製水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を６０．７ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１３６】
融点：１２３−１２６℃。
【０１３７】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１３８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.73 (1H, d, J=9Hz), 7.36-7.30 (5H, m), 5.12-5.04 (2H, m), 4.83 (1H, m), 4.28 (1H, m), 4.17-4.04 (2H, m), 3.23-3.12 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.84-1.35 (16H, m)。
【０１３９】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3388, 3253, 3051, 1698, 1662, 1656, 1644, 1633, 1526, 1469, 1457, 1252, 599, 575。
【０１４０】
比旋光度：［α］25 D＝−１９．８６°（ｃ＝0.574, メタノール ）。
【０１４１】
実施例３ 下記化合物（１２）の合成
【０１４２】
【化２１】
参考例５で得られた化合物（５）１５０ｍｇ（０．１７４ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１５分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０％メタノールで溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を９０．９ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１４４】
融点：１３１−１３４℃。
【０１４５】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６５（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１４６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.35-7.29 (5H, m), 5.09 (2H, s), 4.81(1H, m), 4.29-4.02 (2H, m), 3.22-2.91 (12H, m), 1.93-1.35 (16H, m)。
【０１４７】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3294, 3209, 2941, 1673, 1634, 1528, 1455, 1404, 1342, 1266, 1132, 1061, 700。
【０１４８】
実施例４ 下記化合物（１３）の合成
【０１４９】
【化２２】
参考例９で得られた化合物（９）４４０ｍｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）に、アニソール０．４ｍｌ、トリフルオロ酢酸６ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１５分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０％メタノールで溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化合物の塩酸塩を１７４ｍｇ得た。以下に物性値を示す。
【０１５１】
融点：１０２−１０６℃。
【０１５２】
Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２０（Ｍ＋Ｈ）+。
【０１５３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ：7.36-7.30 (5H, m), 5.12 (1H, d, J=12Hz), 5.07 (1H, d, J=12Hz), 4.80-4.77 (1H, m), 4.26-4.02 (2H, m), 3.22-3.10 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.98-1.36 (16H, m)。
【０１５４】
ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1：3371, 3180, 3042, 2949, 1660, 1649, 1520, 1469, 1456, 1405, 1256, 1174, 620, 597, 584。
【０１５５】
試験例１ ＲＧＰに対する本発明化合物の阻害活性の測定
ＲＧＰは門脇、山本らの方法〔T.kadowaki, K.Yamamoto, et al. The Journal of Biological Chemistry, 269, 21371-21378（1994）〕によりPorphyromonas gingivalis 381の培養瀘液の上清より調製されたものを使用した。
【０１５６】
ＲＧＰに対する阻害活性については、門脇、山本らの方法〔The Journal of Biological Chemistry, 269, 21371-21378（1994）〕に従って測定した。即ち、５０ｍＭのＬ−システイン１００μｌ、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００μｌ、０．０５％のブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬（株）製）を含む１２．３ｎＭの酵素（ＲＧＰ）液２０μｌ、蒸留水８０μｌ、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液１００μｌの混合物を３７℃で５分間保温した。その後、２０μＭの７−（Ｎα−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液５００μｌを加え、４０℃で反応した。１０分間後、１０ｍＭのヨード酢酸を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）１０００μｌを反応液に加え、反応を停止させ、遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光分光光度計を用い、波長３８０ｎｍで励起した４６０ｎｍの蛍光波長の蛍光強度を測定した。対照として、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液の代わりにジメチルスルホキシドを用い、同様に反応し、蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１５７】
同様に、カテプシンＢ及びカテプシンＬの阻害活性の測定はＡ．Ｊ．Ｂａｒｒｅｔｔらの方法（Biochemical Journal、201、189-198(1982)）に従った。
【０１５８】
即ち、カテプシンＢに対する阻害活性の測定は８ｍＭのジチオスレイトール及び４ｍＭのエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）０．５ｍｌ、５μｌのカテプシンＢと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び本発明化合物０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間保温した。その後、２０μＭの７−（Ｎ−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．５ｍｌを加え、４０℃で１０分間反応した。反応後、１００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加え反応を停止させ、遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光光度計を用い、波長３５０ｎｍで励起した４５８ｎｍの蛍光波長の蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１５９】
カテプシンＬに対する阻害活性については上記カテプシンＢの測定方法に準じて行った。
【０１６０】
即ち、上記方法のカテプシンＢの代わりにカテプシンＬをｐＨ５．５の緩衝液に加え、同様に遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光光度計を用い蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。
【０１６１】
【表１】
表１より本発明化合物は、高活性でかつ選択的にアルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の酵素分解活性を阻害しうることが判る。
【０１６３】
試験例２ ＲＧＰのヒトtypeＩコラーゲン分解能に対する本発明化合物による阻害活性の測定
ＲＧＰによるヒトtypeＩコラーゲンの分解に対する本発明化合物による阻害活性の測定は、次のようにして行った。５０ｍＭのＬ−システインと１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）の１：２の割合（Ｖ／Ｖ）の混液１０μｌ、０．３６ｍｇ／ｍｌの酵素液１０μｌ、本発明化合物の水溶液１０μｌの混合物を３７℃で１０分間保温した。その後、１０００μｇ／ｍｌのヒトtypeＩコラーゲン（生化学工業製）３０μｌを加え、３７℃で反応した。６０分間後、反応液２０μｌを１００μｇ／ｍｌのロイペプチンと１０ｍＭのＥＤＴＡ−Ｎａ2を含む混液１μｌで反応を停止させた。反応液を１００℃で、５分間熱処理した後、反応液１５μｌをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、下記条件下でヒトtypeＩコラーゲンを測定した。対照として、本発明化合物の水溶液に代えて、精製水を用い、同様に反応し、電気泳動により比較測定した。
【０１６４】
ゲル：マルチゲル（４／２０）２０，０００−２００，０００（第一化学薬品（株）製）、
ローディングバッファー：０．０６２５Ｍトリス塩酸バッファー（ｐＨ６．８），２％ドデシル硫酸ナトリウム，１０％グリセロール，５％２−メルカプトエタノール，１０％ブロモフェノールブルー、
電極バッファー：０．０２５Ｍトリス−０．１９４Ｍグリシン（ｐＨ８．４），０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、
泳動条件：２０ｍＡ定電流、泳動時間：約２時間、
着色：Coomassie Brilliant Blue R-250(PAGE Blue 83)。
【０１６５】
上記測定の結果、本発明の前記化合物（１３）は、１μｇ／ｍｌの低用量でＲＧＰによるヒトtypeＩコラーゲンの分解を有意に阻害することが判った。
【０１６６】
【発明の効果】
本発明化合物は、蛋白質分解酵素、特に口腔内中に存在しているポルフィロモナス・ジンジバリス（P.gingivalis）が産生するアルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の活性を特異的かつ高活性に阻害することができ、例えば、歯周病の予防剤及び治療薬等として有用である。
Claims (5)
- 一般式
- Ｒ 1 が水素原子であり、Ｒ2がアラルキルオキシカルボニル基である請求項１に記載のペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩。
- 一般式
- 一般式
- 一般式
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