JP5397851B2

JP5397851B2 - ペプチド誘導体又はその塩の製造方法

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Publication number: JP5397851B2
Application number: JP2009123038A
Authority: JP
Inventors: 榮一金海; 潤金野; 真佐也宮崎; 英明前田
Original assignee: NS Materials Inc
Current assignee: NS Materials Inc
Priority date: 2009-05-21
Filing date: 2009-05-21
Publication date: 2014-01-22
Anticipated expiration: 2029-05-21
Also published as: JP2010270061A

Description

本発明は、ジケトンを主鎖に有するペプチド誘導体又はその塩の製造方法に関する。

歯周病は、日本の総人口における７０％以上が罹患している病気である。歯周病の原因は、口腔内に存在する歯周病原生細菌とされている。特にこの中でも、ジンジバリス菌によって生産されるタンパク質分解酵素による影響が大きいと考えられている。このジンジバリス菌が生産するタンパク質分解酵素のうち、Ａｒｇ−ｇｉｎｇｉｐａｉｎ（以下「Ｒｇｐ」と略されることもある。）及びＬｙｓ−ｇｉｎｇｉｐａｉｎ（以下「Ｋｇｐ」と略されることもある。）が、病原性を持つ酵素として知られている。これらのタンパク質分解酵素は、歯周組織の破壊、炎症反応の亢進等といった人体にとって有害な性質を持つ。さらに、これらのタンパク質分解酵素は、歯周病のみならず、動脈硬化症や糖尿病など様々な疾患も引き起こしていると考えられている。

このため、このジンジバリス菌が生産するタンパク質分解酵素Ｒｇｐ及びＫｇｐの活動を阻害する阻害剤の研究が行われている。阻害剤として、様々な天然物や合成物が挙げられる。この天然物においては、ＲｇｐやＫｇｐへの特異性は高いが、同時に毒性を有する。また合成物においては、概ね特異性は低く、かつ毒性を有する。しかし、これらの合成された阻害剤のうち、ＫＹＴ−１、ＫＹＴ−３６及びＫＹＴ−４１は、ＲｇｐとＫｇｐとにおいて一方若しくは両方に対して特異性が高く、かつ毒性が低いものとして注目されている（特許文献１，２，３）。これらのＫＹＴ−１、ＫＹＴ−３６及びＫＹＴ−４１は、ペプチド誘導体である。これらのペプチド誘導体は、ジケトンを主鎖に有する。また、これらのペプチド誘導体は安定性もよいため有効成分として有用なものと大いに期待され、大量生産化の研究が進められている。

特開平１１−２２８５２６号公報ＰＣＴ／ＪＰ０１／０９６２１号公報ＰＣＴ／ＪＰ０２／１１８６０号公報

上述されたように、ＫＹＴ−１、ＫＹＴ−３６及びＫＹＴ−４１の構造は、ペプチド誘導体の主鎖中に一つ若しくは二つのジケトンを有する。このため、従来のペプチド合成法のみではこれらを製造できない。よって、現在これらのペプチド誘導体は、複雑な合成課程を経て得られている。例えば、特開平１１−２２８５２６号公報等に記載されている様な合成方法である。この合成方法は、以下に述べられる様な一連の反応等を含む。Ｎ末端が保護されたアミノ酸と、低級アルコキシ基で修飾されたケトン基を有するエタノールアミン化合物と、を縮合する。得られた化合物のケトン基側の低級アルコキシ基を水酸基に置換する。この置換で得られた化合物と、アミノ酸と、を縮合させる。さらに得られた化合物の主鎖上の水酸基を酸化させることにより、ケトン基が得られる。この酸化反応によって、主鎖上にジケトンが得られる。また、さらに保護基に応じて、側鎖や主鎖上の保護基が脱離される。このように、原料から最終生成物が得られるまでに、多くの工程数及び反応の種類が含まれる。よって、この合成方法は、非常に複雑な工程である。このため、実用化のための大量生産の体制が確立されていない。よって、これらのペプチド誘導体を合成するために、多岐に渡る材料費や反応の種類から生じる反応機器の種別及び手間等や、工程数の多さから生じる時間等によって非常に高いコストと時間等が要求されている。

本発明は、前述された問題に鑑みてなされたものであり、その目的は、ペプチド誘導体ＫＹＴ−１、ＫＹＴ−３６及びＫＹＴ−４１を実用化するために、公知の反応に比べると、入手が安易な原料から少ない工程数で、ペプチド誘導体又はその塩を製造する方法を提供することにある。

本発明に係るペプチド誘導体又はその塩の製造方法によると、Ｘ^１ＮＨ−ＣＲ^１−ＣＯ−ＮＨ−ＣＲ^２−ＣＯ−ＣＯ−ＮＡ^１Ａ^２すなわち式（Ｉ）

（式中、式中、Ｘ^１はＮＨ保護基を示し、Ｒ^１は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ｒ^２は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ａ^１及びＡ^２はそれぞれ、水素原子、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、及び後述される第三アミノ酸が含まれる置換基を示す。）で表されるペプチド誘導体又はその塩が効率良く製造される。

本発明に係るペプチド誘導体又はその塩の製造方法において、保護基は、一般的にペプチド合成において慣用されている保護基を示す。なお、フェニル基はＰｈで表される。また、ペプチド誘導体の塩とは、薬学的に許容されるペプチド誘導体の塩を示す。

（１）本発明に係るペプチド誘導体又はその塩の製造方法は、第一保護基でＮ末端を保護した第一アミノ酸と、第二アミノ酸と、を縮合してペプチドを得る第一工程と、上記ペプチドのＣ末端の水酸基をカルボキシル基へ置換して第一化合物を得る第二工程と、上記第一化合物と、第一アミン化合物と、を縮合してペプチド誘導体又はその塩を得る第三工程と、を含む。

上記第一工程は、Ｘ^１ＮＨ−ＣＲ^１ＣＯＯＨすなわち式（ＩＩ）

（式中、Ｘ^１はＮ末端の保護基を示し、Ｒ^１は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示す。）で表される上記第一アミノ酸と、
Ｈ_２Ｎ−ＣＲ^２ＣＯＯＨすなわち式（ＩＩＩ）

（式中、Ｒ^２は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示す。）で表される上記第二アミノ酸とを縮合する反応を含む。また、上記第一アミノ酸は、Ｎ末端が第一保護基（式中、Ｘ^１で表される。）で保護されているものである。

上記第二工程は、上記第一工程で得られたＸ^１ＮＨ−ＣＲ^１−ＣＯ−ＮＨ−ＣＲ^２ＣＯＯＨすなわち式（ＩＶ）

（式中、Ｘ^１はＮ末端の保護基を示し、Ｒ^１は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ｒ^２は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示す。）で表される上記ペプチドのＣ末端の水酸基をカルボキシル基へ置換する反応を含む。

上記第三工程は、上記第二工程で得られたＸ^１ＮＨ−ＣＲ^１−ＣＯ−ＮＨＣＲ^２−ＣＯ−ＣＯＯＨすなわち式（Ｖ）

（式中、Ｘ^１はＮ末端の保護基を示し、Ｒ^１は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ｒ^２は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示す。）で表される上記第一化合物と、ＨＮＡ^１Ａ^２すなわち式（ＶＩ）

（式中、Ａ^１及びＡ^２はそれぞれ、水素原子、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、及び後述される第三アミノ酸が含まれる置換基を示す。）で表される上記第一アミン化合物と、を縮合する反応を含む。

上記第一工程と第三工程とにおけるペプチド結合を形成する縮合反応は、公知慣用の方法が用いられる。例えば、縮合剤としてＤＣＣ、ＰｙＢＯＰ、ＴＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ及びＤＥＰＢＴ等が挙げられる。また、添加剤として、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＯＢｔ及びＣｌ−ＨＯＢｔ等が用いられることも可能である。縮合に用いられる溶媒としては、反応が阻害されないものであれば特に制限はない。溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、クロロホルム、塩化メチレン及びジメチルスルホキシド等が挙げられる。またアジド法や、活性エステル法などにより縮合を行うことも可能である。

（２）上記第三工程における上記第一アミン化合物は、第三アミノ酸のＣ末端が第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物と、第三アミノ酸のＣ末端の水酸基がカルボキシル基へ置換されてかつ第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物と、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基とを含むアミン化合物及び、フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物と、
からなる群から選択されるうちの少なくとも一つである。

上記第三工程において、上記第一アミン化合物は、Ｃ末端が第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物Ｈ_２ＮＣＲ^３−ＣＯ−ＮＡ^３Ａ^４すなわち式（ＶＩＩ）

（式中、Ｒ^３は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ａ^３及びＡ^４はそれぞれ、水素原子、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を示す。）で表される第三アミノ酸及び第三アミノ酸のＣ末端の水酸基がカルボキシル基へ置換されて、かつ第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物Ｈ_２ ^２ＮＣＲ^３−ＣＯ−ＣＯ−ＮＡ^３Ａ^４すなわち式（ＶＩＩＩ）

（式中、Ｒ^３は保護基で保護されていてもよいアミノ酸のＲ基側鎖を示し、Ａ^３及びＡ^４はそれぞれ、水素原子、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基、フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を示す。）で表される化合物を含む。

（３）上記第二アミン化合物は、炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物及びフェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物と、からなる群から選択されるうちの少なくとも一つである。

（４）上記水酸基をカルボキシル基へ置換する反応において、シアノメチレントリフェニルホスフィンが使用される。

（５）上記第一アミノ酸、上記第二アミノ酸及び上記第三アミノ酸は、Ｎ末端及びＣ末端以外が、保護基で修飾されることが可能である。

上記保護基として、例えば、Ｎ末端の保護基は、ベンジルオキシカルボニル基(ＣｂｚあるいはＺ)、ｔ−ブトキシカルボニル基(Ｂｏｃ)、フルオレニルメトキシカルボニル基(Ｆｍｏｃ)、ｐ−トルエンスルホニル基（Ｔｏｓ）等が挙げられる。Ｃ末端の保護基は、例えば、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル及びｔ−ブチルエステル等が挙げられる。また、その他の側鎖の保護基として、例えば、ベンジル基、ｔ−ブチル基、２−ブロモベンジルオキシカルボニル、トリチル基、Ｎ−(アセチル)アミノメチル基、４−メチルベンジル基、ｐ−トルエンスルホニル基（Ｔｏｓ）、ベンジルオキシメチル基(Ｂｏｍ)やｔ−ブトキシメチル基(Ｂｕｍ)、ＮＯ_２等が挙げられる。なお、保護基は公知の方法によって、それぞれの保護基に応じた方法で脱離されることも可能である。

（６）上記第一アミノ酸、上記第二アミノ酸及び上記第三アミノ酸は、Ｌ体又はＤ体のいずれかの光学活性をもつアミノ酸でも可能である。

（７）上記第一保護基は、ベンジルオキシカルボニル基である。

（８）上記第一アミノ酸がリシンであり、上記第二アミノ酸がアルギニンであり、かつ上記第三アミノ酸がリシンである。

（９）上記第一アミノ酸がグルタミン酸であり、上記第二アミノ酸が１−メチル−１−フェニルヒドラジンで修飾されたリシンである。

（１０）上記第一アミノ酸がグルタミン酸であり、上記第二アミノ酸がリシンであり、上記第三アミノ酸がアルギニンである。

（１１）上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｎ（ＣＨ_３）_２すなわち式（ＩＸ）

で表されるＫＹＴ−１である。

（１２）上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＮＨＮＣＨ_３Ｐｈ）−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨＣＨ_２Ｐｈすなわち式（Ｘ）

で表されるＫＹＴ−３６である。

（１３）上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＣＯ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２Ｐｈすなわち式（ＸＩ）

で表されるＫＹＴ−４１である。

本発明は、公知の反応に比べると、少ない工程数で、式（Ｉ）で表されるペプチド誘導体又はその塩を製造する方法を提供する。これにより、今まで製造工程が煩雑で、時間やコスト等がかかっていたＫＹＴ−１、ＫＹＴ−３６及びＫＹＴ−４１が、効率良く製造することが可能となるため大量生産化が図れる。また同時に、主鎖中にケトンが結合されたジケトン構造を有するペプチドの合成も、本発明をもって容易に実施可能となる。

以下に、本発明の好ましい実施例が説明される。なお、以下に説明される各実施例は、本発明の一例にすぎず、本発明の要旨を変更しない範囲で、本発明の実施形態を適宜変更できることは言うまでもない。なお、Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基を、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニル基を、ＯｔＢｕはｔ−ブトキシ基を、ＯＳｕはコハク酸をそれぞれ示す。また、ＤＩＣは、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミドを、ＤＭＦは、ジメチルホルムアミドを、ＤＣＭはジクロロメタンを、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンを、２−ＰＥＡは２−フェニルエチルアミンを、ＰＰｈ_３−ＣＮはシアノメチレントリフェニルホスフィンを、ＤＭＡはジメチルアミンを、ＮＨＢｚはベンジルアミンを、Ｐｂｆはペンタメチルベンゾフラニルを、それぞれ示す。

［実施例１］
式（ＸＩ）で表されるＫＹＴ−４１を合成した。

（第一工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＳｕ０．４３５ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液に、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ０．２４６ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液を加え、０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに１時間攪拌して縮合させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータ（東京理科機器株式会社製、Ｎ−１０００Ｖ）で濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。測定にはＭａｓｓ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製Ｍａｒｉｎｅｒ）を用いた。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ５６７．０（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第二工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの結晶０．５６６ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＰＰｈ_３−ＣＮ０．４５２ｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＭＡＰ０．０２４ｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、水酸基をカルボキシル基へと置換させた。反応終了後、ＤＣＭをエバポレータで濃縮した後、残渣に１，４−ジオキサンを加えて溶解させた。この溶媒に、３０％過酸化水素水を５ｍｌ加え、エバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ５９５．１（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＯＨ０．３１９ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＰＰｈ_３−ＣＮ０．４５２ｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＭＡＰ０．０２４ｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＯＨの水酸基をカルボキシル基へと置換させた。反応終了後、ＤＣＭをエバポレータで濃縮した後、残渣に１，４−ジオキサンを加えて溶解させた。この溶媒に、３０％過酸化水素水を５ｍｌ加え、エバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ３４８．８（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯＯＨの結晶０．３４７ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、２−ＰＥＡ０．１３３ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＨＯＢｔ０．１６２ｇ（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯＯＨの水酸基を２−ＰＥＡへと置換させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）の結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ４５０．７（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）の結晶を４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサンに溶解して、０℃で３０分攪拌しＢｏｃ基を脱離させた。溶媒をエバポレータで濃縮した後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）の結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ３５０．５（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第三工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨ０．５９４ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）０．６５３ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＨＯＢｔ０．１６２ｇ（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させた。ＤＭＦをエバポレータで濃縮して乾燥させた後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）の結晶を得た。得られた結晶を４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサンに溶解して、０℃で３０分攪拌しＯｔＢｕ基とＢｏｃ基を脱離させた。溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＣＯ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−ＣＯ−（２−ＰＥＡ）の結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ７７０．２（Ｍ＋Ｈ）^＋

［実施例２］
式（ＩＸ）で表されるＫＹＴ−１を合成した。

（第一工程）
Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ０．４７８ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液に、Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ０．４２７ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液を加え、０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに１時間攪拌して縮合させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ７９０．９（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第二工程）
Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨの結晶０．７９０ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＰＰｈ_３−ＣＮ０．４５２ｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＭＡＰ０．０２４ｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、水酸基をカルボキシル基へと置換させた。反応終了後、ＤＣＭをエバポレータで濃縮した後、残渣に１，４−ジオキサンを加えて溶解させた。この溶媒に、３０％過酸化水素水を５ｍｌ加え、エバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＣＯＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ８０９．０（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨ０．３８０ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＭＡ０．０５０ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＨＯＢｔ０．１６２ｇ（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨの水酸基をＤＭＡと置換させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＤＭＡの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ４０８．８（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＤＭＡの結晶を、メタノール５ｍｌ、酢酸２ｍｌ及び水３ｍｌに溶解して、Ｐｄ黒０．０４ｇを加えた。この溶媒に水素ガスを通しながら２時間攪拌することで、保護基Ｃｂｚを脱離させた。溶媒をエバポレータで濃縮した後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＤＭＡの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ２７４．６（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第三工程）
Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＣＯＯＨの結晶０．８０９ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＤＭＡ０．３０３ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＨＯＢｔ０．１６２ｇ（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させた。ＤＭＦをエバポレータで濃縮して乾燥させた後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＤＭＡの結晶を得た。得られた結晶を４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサンに溶解して、０℃で３０分攪拌しＰｂｆ基とＢｏｃ基を脱離させた。溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＣＯ−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＤＭＡの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ６２０．４（Ｍ＋Ｈ）^＋

［実施例３］
式（Ｘ）で表されるＫＹＴ−３６を合成した。

（第一工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−ＯＳｕ０．３９２ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液に、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ０．２４６ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液を加え、０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに１時間攪拌して縮合させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ５２５．１（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第二工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨの結晶０．５２３ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＰＰｈ_３−ＣＮ０．４５２ｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＭＡＰ０．０２４ｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、水酸基をカルボキシル基へと置換させた。反応終了後、ＤＣＭをエバポレータで濃縮した後、残渣に１，４−ジオキサンを加えて溶解させた。この溶媒に、３０％過酸化水素水を５ｍｌ加え、エバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ５２３．３（Ｍ＋Ｈ）^＋

（第三工程）
Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨ０．５５２ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ベンジルアミン０．１１８ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＤＩＣ０．１３９ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、ＨＯＢｔ０．１６２ｇ（１．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯＯＨの水酸基をベンジルアミンへと置換させた。反応終了後、ＤＭＦをエバポレータで濃縮した後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＮＨＢｚの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ６４２．５（Ｍ＋Ｈ）^＋

Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＯＭｅ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＮＨＢｚ０．６４１ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、フェニルメチルヒドラジン０．１２２ｇ（１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍｌに溶解した溶液と、を混合させた。この混合物を０℃で３０分攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌させた。ＤＭＦをエバポレータで濃縮して乾燥させた後、残渣に酢酸エチルを加えて溶解させた。この酢酸エチル層を、０．５ＭＮａＨＣＯ_３水溶液、５ｗｔ％ＫＨＳＯ_４水溶液、飽和食塩水で順次分液洗浄し、硫酸化マグネシウムを加えて一晩脱水させた。濾過後、溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＮＨＮＭｅＰｈ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＣＯ−ＮＨＢｚの結晶を得た。得られた結晶を４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサンに溶解して、０℃で３０分攪拌しＢｏｃ基を脱離させた。溶媒をエバポレータで濃縮して乾燥させた後、ジエチルエーテルを加えて再結晶させて、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＮＨＮＭｅＰｈ）−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨＢｚの結晶を得た。以下に得られた結晶の物性値を示す。

Ｍａｓｓ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ６４５．９（Ｍ＋Ｈ）^＋

Claims

第一保護基でＮ末端を保護した第一アミノ酸と、第二アミノ酸と、を縮合してペプチドを得る第一工程と、
上記ペプチドのＣ末端の水酸基をカルボキシル基へ置換して第一化合物を得る第二工程と、
上記第一化合物と、第一アミン化合物と、を縮合してペプチド誘導体又はその塩を得る第三工程と、
を含むペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第三工程において第一アミン化合物は、
第三アミノ酸のＣ末端が第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物と、
第三アミノ酸のＣ末端の水酸基がカルボキシル基へ置換されてかつ第二アミン化合物で修飾されたアミン化合物と、
炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物及び、
フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物と、
からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第二アミン化合物は、
炭素数１から６の直鎖状及び分枝状のアルキル基を含むアミン化合物と、
フェニル基で修飾された炭素数１から６の直鎖状、分枝状及び環状のアルキル基を含むアミン化合物と、
からなる群から選択される少なくとも一つである請求項２に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記水酸基をカルボキシル基へ置換する反応において、シアノメチレントリフェニルホスフィンが使用される請求項１から請求項３のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一アミノ酸、上記第二アミノ酸及び上記第三アミノ酸は、Ｎ末端及びＣ末端以外が保護基で修飾されることが可能である請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一アミノ酸、上記第二アミノ酸及び上記第三アミノ酸は、Ｌ体又はＤ体いずれかの光学活性をもつアミノ酸でも可能な請求項１から請求項５のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一保護基が、ベンジルオキシカルボニル基であることを特徴とする請求項１から請求項６のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一アミノ酸がリシンであり、上記第二アミノ酸がアルギニンであり、上記第三アミノ酸がリシンである請求項１から請求項７のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一アミノ酸がグルタミン酸であり、上記第二アミノ酸が１−メチル−１−フェニルヒドラジンで修飾されたリシンである請求項１から請求項７のいずれかに記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記第一アミノ酸がグルタミン酸であり、上記第二アミノ酸がリシンであり、上記第三アミノ酸がアルギニンである請求項１から請求項７に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｎ（ＣＨ _３） _２すなわち式（ＩＸ）

で表されるＫＹＴ−１である請求項８に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ（ＮＨＮＣＨ _３Ｐｈ）−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨＣＨ _２Ｐｈすなわち式（Ｘ）

で表されるＫＹＴ−３６である請求項９に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。
上記ペプチド誘導体が、Ｃｂｚ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＣＯ−Ａｒｇ（ＮＯ _２）−ＣＯ−ＮＨＣＨ _２ＣＨ _２Ｐｈすなわち式（ＸＩ）

で表されるＫＹＴ−４１である請求項１０に記載のペプチド誘導体又はその塩の製造方法。