JP3873222B2 - 臨床診断システムにおいて促進された性能を有する試薬 - Google Patents

Description

概要
イミダゾールおよび関連するバッファー、例えば、（１）５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物、または（２）５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサン等が、臨床診断試薬において用いられている特定の防腐剤の活性を高めることが明らかとなった。これらのバッファー、および、ＢＲＩＪ７００および関連する親水性界面活性剤等の特定の界面活性剤は、酵素バイオセンサーの精密さと正確さを促進することもまた発見された。
背景
臨床診断器具とは、ヒト血液、血清およびその他の液体中の分析対象の存在および量を測定するために用いられるものである。測定されるべき分析対象には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、塩素、その他の電解質、グルコース、乳酸、コレステロール、脂質（トリグリセリド等）、および尿酸等が含まれるが、これに限定されるものではない。加えて、器具は、ｐＨおよびこれらの液体中に溶解している気体の濃度の測定にも用いられる。多くの他の分析対象および特性（ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ）もまた、これらの器具によって測定される。ヒトの健康状態の指標である新規な物理的および化学的特性を同定する理論が頻繁に発見されており、これらの新規特性のための分析的技術が、これらの器具における利用のために開発されている。関心分析対象の濃度を決定する器具の実際の構成要素は、しばしば電極またはセンサーと呼ばれる。これらのセンサーのための典型的な分析対象測定システムは電気化学的であるが、光学的であっても、あるいは他の物理的または化学的性質の測定に関連していても差し支えない。センサーは、複合体であってよく、いくつかのシステムを統合していて差し支えない。例えば、１つの酵素がセンサーマトリックスに結合していて、分析対象を分解を触媒し、それにより、測定され得る成分を生じさせる。
分析対象の成功した測定は、器具、センサーおよび試薬の相互作用に左右される。試薬は特に重要であるが、それは、試薬がセンサーと器具の両方の性能に影響するからである。臨床診断器具での分析の実行に必要である試薬のいくつかには、校正試料（その校正試料を用いてアッセイを行って、特定濃度に対する器具の所定の反応点を決定できるように、関心分析対象をその特定の濃度で含むよう配合された試薬）、対照製品（分析用試料と共にアッセイされ、アッセイが適切に作用しているか否かを決定するための製品）、および分析対象と化学的または物理的反応をもたらす分析用試薬（バッファー、化学反応物質等を含む）が含まれる。その他の試薬には、試験試料を器具から除去するための洗浄溶液が含まれる。これらの試薬のいくつかは、測定される成分の環境を含むかまたは似せた環境中に配合されている。（例えば、あるものは特定のイオン強度および特定のｐＨの血清中に配合されていて差し支えない。また、他のものは特定の脂質親和性の内容物を有していて差し支えない。）これらの試薬は、手動によるアッセイに用いられる試薬と同じ種類のものであり、従って、ここでの議論が自動化されたものを含む臨床診断器具のための試薬に集中してはいるが、同じ事が手動での分析技術に応用可能である。
上記の試薬の多くが、それらの貯蔵寿命を延ばすために保存剤とともに配合されているが、これは試薬が微生物増殖を支援するであろう栄養を含有しているからである。本出願は、特定のバッファーであるイミダゾールまたはその誘導体、が配合物中に用いられた場合に、性能が高められることが予想外に発見されたところの、混合保存システムの効果に関するものである。また本出願は、これらのバッファーおよび特定の界面活性剤、Ｂｒｉｊ７００が、どのように酵素バイオセンサーの精密さと正確さを促進させるかということに関する。
【図面の簡単な説明】
図１は、グルコース拡散制限膜無しのグルコースバイオセンサーに対する、緩衝された反応ｖｓ緩衝されていない反応を示している。図２は、臨床診断試薬において用いられている他の一般のバッファーと比較した、イミダゾールにおけるセンサー反応の改善された安定性を示している。図３は、界面活性剤ＨＬＢの関数としての、１０の血液試料のセンサー反応における％変化（陽性ドリフト）を、ラボ−ベンチテストシステム上で得られた結果とともに示している。図４は、Ｂｒｉｊ３５およびＢｒｉｊ７００を用いたグルコースバイオセンサーの性能の比較を示す。図５は、等モルおよび同じ質量のＢｒｉｊ３５およびＢｒｉｊ７００に対するセンサー反応を示す。
詳細な説明
臨床診断の目的に用いられる試薬は、多様な成分、即ち塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸カルシウム、酢酸ナトリウム等を、特定のイオンの所望のレベルを提供するために充分な量で）、多様な代謝物（例えばグルコースや乳酸）、界面活性剤、バッファー、および水を含んでいる。全ての試薬がこれらの成分全てを含有するものではなく、また、他の試薬は付加的な内容物を含んでいる。特に、市販されているものはしばしば、１またはそれ以上の保存剤を、それらの貯蔵寿命を延ばすために含んでいる。
何れの代謝物も、本製品に取り込むための候補であることに注意されたい。しかしながら、いくらか事前の注意を要する、いくらかの反応性および相互作用の心配がある。例えば、アルブミン等のいくつかのタンパク質は溶液中で常に安定であるのではなく、潜在的に不安定な溶液を、冷蔵庫中で貯蔵することが必要であろう。加えて、いくつかのタンパク質は保存剤に結合し、従って保存剤の効果性を減少させる。
製品に応じて、分析対象の様々な濃度を調製した。濃度の標的は一般に、体内で見られる分析対象の正常レベルかまたは、異常レベル（低いまたは高められたレベルを含む）の何れかである。両方の濃度レベルでセンサーが機能するか否かを決定するために用いられ得るいくつかの対照製品（例えば正常または異常）を調製してもよい。例えば、塩素については、期待される通常の範囲が７０−１２０ｍｍｏｌ／ｌであり、典型的な器具におけるセンサーは３０から１５０ｍｍｏｌ／ｌの範囲にわたって測定可能である。「正常」対照は１００ｍｍｏｌ／ｌで配合され得るし、一方で「高められた」対照は１４０ｍｍｏｌ／ｌで配合され得る。さらには、実験室の必要により、対照製品に配合され得る分析対象の無数の組合せがある。勿論、関心分析対象の分析に干渉する恐れのある分析対象が排除されているか、または少なくとも最小の干渉効果があるような低いレベルで存在していることを確認するよう注意されていなければならない。例えば、塩素の対照の調製においては、硝酸塩、亜硝酸塩を排除または最少化しなければならない。加えて、安定性や製造の容易さを妨害する因子は避けるべきである。
診断試薬で用いる場合、考慮されるべきいくつかの重要な界面活性剤の側面がある。第１には、界面活性剤を含有することによって生じる利益があり、即ち、それは、例えば器具の経路またはセンサー等の、試料と接触していた器具の一部の洗浄を改善し、そして試料同士の汚染を減少させるものである。第２に、界面活性剤の選択において、それがセンサーと共存可能であるか否かを決定することが重要である。第３に、界面活性剤は器具およびセンサーの性能を最適化するために一般に用いられている（例えば、液体の制御、ウェットアップ（ｗｅｔ−ｕｐ）またはセンサー表面の加湿）。診断システムとの共存性を確実なものとするために評価されなければならない界面活性剤の一面には、界面活性剤の親水性／親油性が含まれる。界面活性剤の中で、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテルについて考えることにする。（これは、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓおよび他の供給元からからＢＲＩＪ７００として入手可能である。）この界面活性剤はセンサーおよび器具の両方に、その親水的／親油的性質により作用する。親油的性質は診断システムにおいてしばしば望まれるが、それは親油性生物学的試料の洗浄および水輸送を要するバイオセンサーのウェットアップ（水和）が改善されるからである。他方、血液ガスおよびイオン感受性電極（ＩＳＥ）等のいくつかのシステムにおいては、適切な親水性／親油性バランスが、センサーの重要な成分の加湿および抽出を防ぐために要求される。界面活性剤は、それらの親水的／親油的性質すなわちバランス（ＨＬＢ）により特徴づけられ、それは親水的性質の相対量の尺度である。非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値は０から２０の範囲にあり、そこにおいて０とは０％の親水的性質を表している。診断試薬に一般に用いられる界面活性剤は１３−１７の範囲にあるＨＬＢを有し、このような一般に用いられている界面活性剤の例には、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００（オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ａｎｄ Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．より入手可能）、１３．５のＨＬＢを有する；ＢＲＩＪ ３５（ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓから入手可能）１６．９のＨＬＢ；およびＴＷＥＥＮ ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓから入手可能）１６．９のＨＬＢ；が含まれる。
親水性界面活性剤（ＢＲＩＪ７００等）は、洗浄および校正試料溶液に添加された場合、生物的試料測定の間に、バイオセンサーの促進された精密さおよび正確さを提供することが判明した。ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００およびＢＲＩＪ３５等の、より親油的な界面活性剤を含有する試薬は、所望の分析対象に対するセンサー反応を低下させ（即ち、勾配が減少し）、生物学的試料に繰り返して接触させた場合に、センサーがドリフトを示すこととなる。ＢＲＩＪ７００のセンサー促進効果は、界面活性剤の親水性／親油性バランス、および液相とセンサーとの間の区切りに関連していると考えられている。いくらかは電極の構成に依存しているであろうが、親油性界面活性剤は、水性校正試料からセンサーまでを分断し、親水的界面活性剤から親油的試料（血液等）中に放出する傾向が強いであろう。界面活性剤ＢＲＩＪ７００は、バッファー種のセンサー電極への輸送を促進させると考えられている。
現状の技術では、界面活性剤の利用は、グルコースおよび乳酸等の特定のバイオセンサーの性能に不安定性をもたらすものであることに注意されたい。（Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、グルコース乳酸分析器利用者マニュアル、モデル２３００ Ｓｔａｔ Ｐｌｕｓ、１９９２年２月、ｐ．Ｃ−３を参照されたい。）本発明において示されたように、我々は、Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔの文献に引用された不利益に遭遇することなしに、界面活性剤の有用な性質を利用するために界面活性剤を利用する方法を発見した。
ＢＲＩＪ７００および関連した界面活性剤について、上記のバイオセンサーで示された利益に加えて、臨床分析器において用いられている多くの他のセンサーにおいても、同様の利益がある。多くの場合、特にカルシウム、恐らくはカリウムを用いる場合、センサーの故障は、親油性界面活性剤およびタンパク質含有生物学的試料による、１またはそれ以上の成分の抽出によるものである。ＢＲＩＪ７００および他の関連した親水性界面活性剤は、キーとなる重要な成分の抽出割合の減少により、これらのセンサーの使用寿命を延ばすことができると考えられている。
多くの異なった保存剤が診断試薬において用いられてきている。これらには、（ａ）５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、（ｂ）２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、および（ｃ）５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサン等が含まれるが、これに限定されるわけではない。（ａ）および（ｂ）の、約３：１の比での混合物は、Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓより、ＫＡＴＨＯＮ ＣＧ、ＰＲＯＣＬＩＮ ３００およびＰＲＯＣＬＩＮ １５０等の様々な商品名で市販されており、それらはその混合物の配合に用いられた安定化剤および活性な内容物に影響しない他の要素において、互いに異なっている。この製品の一族（ここでは「Ｋａｔｈｏｎ」と称する）は、インチアゾリンとして知られているクラスの一員であり、その性能はこの全体のクラスの代表的なものである。保存剤（ｃ）はＨｅｎｋｅｌより、商品名Ｂｒｏｎｉｄｏｘ Ｌ（液状の場合）およびＢＲＯＮＩＤＯＸ Ｋ（結晶）として市販されており、ここでは「Ｂｒｏｎｉｄｏｘ」と称する。Ｂｒｏｎｉｄｏｘは、ニトロブロモ化合物として知られているクラスの一員であり、その代表として作用する。
臨床アッセイに用いられる数多くの製品は、生じる化学反応が期待されているものであることを確実とするため、またはアッセイされる生物学的液体のｐＨを擬するため、または安定なバイオセンサーの反応を確実とするための何れかの目的で、ｐＨを制御しなければならない。対照および校正試料は、特に、血清または分析される他の体液に可能な限り適合するように配合されている。その結果、数多くの臨床診断試薬においてバッファーが用いられている。一旦試薬の所望のｐＨが判明したら、化学者はそこから選択すべき数多くのバッファーを有している。典型的には、６．５から７．５のｐＨ範囲においては、バッファーは以下の１つとなるであろう：リン酸；ＡＣＥＳ；ＡＤＡ；（２−アミノエチル）トリメチルアンモニウムクロリド；ヒ酸；ＢＥＳ；Ｎ，Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）エチレンジアミン；ビス−トリス；ビス−トリス−プロパン；２、３−ジヒドロキシプロピル−トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミン；ジメチルアミノエチルアミン；３、６−エンドメチレン−１、２、３、６−テトラヒドロフタル酸；エチレンジアミン；グリセロール−２−リン酸；ＨＥＰＥＳ；ＭＯＰＳ；ＭＯＰＳＯ；ｐ−ニトロフェニル；ＰＩＰＥＳ；ＴＥＳ；ＴＲＩＳ；および２、４、６−トリメチルピリジン。（Ｐｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｕｆｆｅｒｓ ｆｏｒ ｐＨ ａｎｄ Ｍｅｔａｌ Ｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ、１９７４、Ｃｈａｎｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ、Ｌｔｄ．，ｐ．１６１、バッファーの化合物名のために参照されたい。）しかしながら、ある種のバッファーは、６．５から７．５のｐＨ範囲においてｐＨを制御しうるが、生物学的システムにおいての利用には適切であるとは考えられてはいない。例えば、イミダゾールは、３７℃で６．７５のｐＫａを有しているが、あまりに反応性でかつ不安定であるため、生物学的システムにおいて満足ではないと考えられている。（Ｐｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ，前出、ｐ．５９を参照されたい。）
イミダゾールは、これまでは生物学的アッセイとは併存できないと疑われていたが、Ｋａｔｈｏｎ、Ｂｒｏｎｉｄｏｘ、およびそれらの混合物を含む数多くの保存剤の抗菌活性を促進させることが予想外に発見された。イミダゾールは、それ自体は何れの公知の抗菌的性質も有しないが（この研究の一部として試験を行ったが、保存活性が見られないことを確認した）、前述のシステムにおけるそのバッファーとしての使用は、保存剤の抗菌能力を改善する。
抗菌活性の改善を示している好ましい診断用製品は、約６．５から７．５の範囲にあるｐＨ（約６．００から８．００のｐＫａ）を有しており、５から５０ｍｍｏｌ／ｌの緩衝能力；０．１５０から０．２３０の範囲のイオン強度；を有し、電解質値は通常のヒトの範囲（１００−１５０ｍｍｏｌ／ｌのＮａ＋、２．０−８．０ｍｍｏｌ／ｌのＫ＋、７０−１２０ｍｍｏｌ／ｌのＣｌ−、および０．５−２．００ｍｍｏｌ／ｌのＣａ＋）であった。保存活性を高めることが判明したのはイミダゾールのみではなく、関連したバッファー（３７℃で７．２４のｐＫａを有する４−メチルイミダゾール等）もまた同様の効果を有することが判明した。
製品の保存能力を評価するため、一連の試験を行った。第１に、この試験の目的が保存能力の評価であると定義したが、同じ試験を、抗菌保存効果試験と称しても差し支えないことに注意されたい。（最少阻止濃度（ＭＩＣ）、最少殺菌濃度（ＭＢＣ）または保存投与（ＰＣ）試験のためのＵ．Ｓ．薬局方の詳細を参照されたい。）おのおのの保存剤は、幅広い微生物の範囲の組合せを考慮した場合、作用活性の固有のフィンガープリントを有している。ここで行われた試験は無数であり、いくつかの微生物のみが用いられたが、これらの微生物に対する作用が、幅広い微生物に対する作用を代表していると考えられる。ここで試験された微生物はスタフィロコッカス、シュードモナス、カビ、酵母およびグラム陽性桿菌であり、それはこれらは、考慮されている製品（対照製品等）の合成、使用、および貯蔵においてもっとも遭遇しやすい属であると考えられているからである。試験において用いられた実際の微生物は、以下の実施例においてより詳細に議論されている。
抗菌効果を評価するために行われた試験の１つの型は、保存寿命の終りを測定するための試験を含んでいた。この試験は、保存剤を様々な濃度で悪化しうるようにし、様々な濃度レベルで活性が見られなくなるまでの有効性を評価するものである。このように、保存剤の有効濃度が低ければ低いほど、その保存システムはよく機能しているのである。
アゾールとして知られているクラスの保存剤は、いくらかイミダゾールに化学的に関連していて、調査された製品の型において抗菌活性を有する。しかしながら、多くのアゾール（４−（２−ベンズイミダゾリル）チアゾール等）は、外見と溶解度のため、いくつかの製品においては保存剤として考えに入れなかった。その一方で、イミダゾールおよびその関連バッファーは抗菌活性を有していなかった。
広い範囲のＢｒｏｎｉｄｏｘおよびＫａｔｈｏｎが、様々なレベルのイミダゾールによってそれらの活性を促進された。約５−７０ｍｍｏｌ／ｌのイミダゾールが、約３０−２５０ｐｐｍのＢｒｏｎｉｄｏｘおよび／または約１−２５ｐｐｍのＫａｔｈｏｎの保存能力を促進することが判明した。（主要な安定化剤の型が異なっているいくつかの異なったＫａｔｈｏｎがあることに留意されたい。ほとんどが、特にＫａｔｈｏｎ ＳＦ（またはＫＳＦ）、ＰｒｏＣｌｉｎ ３００とも呼ばれるものが、本発明において使用できるように思われる。好ましくは約４０−６０ｍｍｏｌ／ｌのイミダゾールが、約１００−２５０ｐｐｍのＢｒｏｎｉｄｏｘおよび／または約１０−２５ｐｐｍのＫＳＦの能力を促進させるために用いられる。最も好ましい対照製品の組成は、１８０−２２０ｐｐｍのＢｒｏｎｉｄｏｘおよび／または約１６−２０ｐｐｍのＫＳＦの能力を高めるために用いられる約４８−５８ｍｍｏｌ／ｌのイミダゾールである。
保存剤と様々なバッファーとの共存性を、手動および自動化された手順の両方において、および、センサーまたは電極を利用したものを含む様々な器具において使用された溶液上で試験した。何れのセンサーまたは何れの他の器具においても、観察された有害な影響は存在しなかった。
イミダゾールおよび関連するバッファーの、付加的で予想外であった利点は、これらのバッファーが、水性校正試料に対するバイオセンサー（グルコース等）の反応を安定化することである。機構はまだ理解されていないが、これらのバッファーは、局所的センサーｐＨを、リン酸や両性バッファー等の従来の臨床診断バッファーより良好に制御していると考えられている。酵素および過酸化物酸化反応の両方が、酵素／分析対象反応および過酸化物検出スキームの間に酸を発生させ、ｐＨ依存性を示すため、ｐＨの制御は、バイオセンサーの性能に重要である。６．８のｐＨで開始すると、過酸化物酸化および典型的なバイオセンサー酵素（グルコースオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ）は、ｐＨが低下するに従って活性／感度の低下を示すが、これは酸が発生したからである。緩衝されていない環境においては、グルコースまたは乳酸等に対する典型的なバイオセンサーは、分析対象に接触させた場合に反応の低下を示すであろう。緩衝されたものｖｓ緩衝されていないものについて、グルコース拡散制限膜の無いグルコースバイオセンサーにおける水性グルコース試料に対する反応を、電流ｖｓ時間（秒）で示している図１を参照されたい。（電流の単位はナノアンペアである；すなわち、目盛りの最大点は３５０ナノアンペアである。）グルコースオキシダーゼセンサーについて行った実験は、バッファー能力および種類の両方が、測定中にセンサーの安定性に影響することを示している。図２は、臨床診断試薬中で用いられている他の一般のバッファーと比較して、イミダゾールに対しては反応低下が大幅に減少している事を示している。（図２は、いくつかのバッファーについて読み取ったグルコースの％低下を示している。）
以下の実施例は、イミダゾールおよび関連した製品による保存剤活性の促進、および同バッファーおよびＢＲＩＪ７００および関連した界面活性剤によるバイオセンサー反応の促進の、様々な態様を示している。それらの変化型は当業者には自明である。これらの実施例は本発明の有用性を制限することを意図していない。
実施例１
対照製品の配合：
以下の対照製品にいくつかの分析対象を配合した：

これらの製品は、試薬を水に溶解させ、全てが完全に溶解するまで撹拌することにより調製した。全ての成分、特に界面活性剤と保存剤を完全かつ確実に溶解させることに注意が必要がある。さらに、溶液のｐＨは、実際に添加された各成分の安定性を維持し、溶解を可能とするために適切でなければならない。
実施例２
対照製品の分析：
対照製品を、それらを手動アッセイで、またはそれらが使用される器具で使用することにより試験した。いくつかの器具または手動アッセイの工程にわたって試験することにより、数値を特定した。校正試料には、参照方法または各々の分析対象について認識された代用方法により、数値を特定した。例えば、ナトリウムおよびカリウムの値は炎光分析により特定された。

実施例３
製品の貯蔵寿命
製品の貯蔵寿命は保存剤システムの有効性の１つの尺度である。貯蔵寿命は、部分的には、２４時間で選択された生物の全滅をもたらすために必要な最少の濃度を特定するための、寿命の終りのＭＢＣ／ＰＣ試験に基づいている。これらの濃度は続いて、アレニウス分析において用いられ、その試薬がどのくらい長く使用可能であるかを決定した。より効果的な保存剤システムについては、より長い貯蔵寿命が期待される。加えて、寿命試験の終りにおいて、この殺菌を達成するために必要な濃度が低いほど、その保存剤システムはより効果的である。２つの異なったバッファーシステムを評価した以下の表を参照されたい。（寿命の終りの試験は、２４時間以内に微生物を全滅させるために必要な保存剤の最少量を示している。）故に、イミダゾールバッファー存在下で観察される、寿命の終りでのより低い濃度は、イミダゾールがＫａｔｈｏｎの有効性を促進していることを示している。（３３．７ｐｐｍは寿命の終りの３０．５ｐｐｍと実質的に等量であることに注意されたい。）

実施例４
グルコースバイオセンサーの使用：
バイオセンサー実験を、ラボ−ベンチ手動試料注入システムまたは臨床分析器の何れかにおいてグルコースセンサーを用いて行った。用いられたグルコースセンサーは白金炭素陽極、Ａｇ／ＡｇＣｌ参照、それとともに白金対極から成る三極装置であった。表面への吸収または陽極製造の間の混合によって、酵素グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）が陽極に充填された。バイオセンサーは、例えば、シリコン、ポリウレタン、セルロース酢酸、Ｎａｆｉｏｎ、ポリエステルスルホン酸（Ｋｏｄａｋ ＡＱ）、ヒドロゲルまたは当業者に知られている他の何れかの膜等の、グルコース制限膜によって腐敗から防護されている。
バイオセンサーの反応に対する界面活性剤の効果の影響：
界面活性剤ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００およびＢＲＩＪ３５を含む試薬を、典型的なバイオセンサー（グルコース等）の反応に対するそれらの効果を決定するために評価した。データは以下の表に示されており、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ１００はＢＲＩＪ３５よりも勾配を減少させた。

界面活性剤を条件設定した後、繰り返し生物学的試料に接触させた場合、センサーは勾配において陽性ドリフトを示した。ドリフトの規模は界面活性剤のＨＬＢに直接的に相関していることが判明した。図３は、１０の血液試料におけるセンサー反応の％変化（陽性ドリフト）を界面活性剤のＨＬＢの関数として、ラボ−ベンチシステム上で得られた結果とともに示している。このデータは、センサーを、１８より大きいＨＬＢを有する界面活性剤に接触させた場合、ドリフトは、何れの界面活性剤も存在しない場合に得られるものと同程度かまたはより少ないものであることを示している。本発明にとっては好ましい界面活性剤であるＢＲＩＪ７００は、センサーの寿命にわたってセンサーのドリフトを最少化する。（図４はＢＲＩＪ３５およびＢＲＩＪ７００についてのグルコースバイオセンサーの性能の比較を、ドリフト％ｖｓ時間（日）を用いて示している。各々の時間は、各々の界面活性剤システムを評価している４つのセンサーについてのデータを示している。）界面活性剤の濃度もまた重要であり、濃度を増加したＢＲＩＪ３５では、増加したドリフトを示したのに対して、濃度を増加したＢＲＩＪ７００では、減少したドリフトを示している。このことは図５に示されており、等モルおよび等しい質量のＢＲＩＪ３５およびＢＲＩＪ７００に対する％ドリフトで示されたセンサー反応を示している。ＢＲＩＪ７００について評価された濃度は０．０１−１．０ｗｔ％の範囲にあったが、好ましい範囲は０．１−０．３ｗｔ％と判明した。
臨床診断センサー（酵素バイオセンサー等）の促進された性能を提供するための校正および洗浄溶液の配合を以下に示す。

Claims (13)

1. イソチアゾリンまたはニトロブロモ化合物を含む抗菌化合物を含有する製品中に、イミダゾールまたは４−メチルイミダゾールを含むバッファー系を含有させることによる、前記製品の抗菌活性を高める方法であって、
   前記イソチアゾリンが、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物であり、
   前記ニトロブロモ化合物が、５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサンであることを特徴とする、
   方法。
2. 前記抗菌化合物が、イソチアゾリンおよびニトロブロモ化合物の両方を含むことを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
3. 前記製品が、臨床診断試薬であることを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。
4. 前記イソチアゾリンの濃度が、溶液の１−２５ｐｐｍの間であることを特徴とする請求の範囲第３項記載の方法。
5. 前記濃度が、１０−２５ｐｐｍの間であることを特徴とする請求の範囲第４項記載の方法。
6. 前記濃度が、１６−２０ｐｐｍの間であることを特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
7. 前記５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサンが、溶液の３０−２５０ｐｐｍの間の濃度で存在することを特徴とする請求の範囲第３項記載の方法。
8. 前記５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサンが、溶液の１００−２５０ｐｐｍの間で存在することを特徴とする請求の範囲第７項記載の方法。
9. 前記５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサンが、溶液の１８０−２２０ｐｐｍの間で存在することを特徴とする請求の範囲第８項記載の方法。
10. 前記バッファー系が、５から７０ｍｍｏｌ／ｌ溶液で存在することを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
11. 前記バッファー系が、４０から６０ｍｍｏｌ／ｌ溶液で存在することを特徴とする請求の範囲第１０項記載の方法。
12. 前記バッファー系が、４８から５８ｍｍｏｌ／ｌで存在することを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
13. 抗菌化合物を含む臨床診断試薬中にイミダゾールまたは４−メチルイミダゾールから成るバッファー系を含有させることによる、前記臨床診断試薬中の抗菌活性を高める方法であって、前記抗菌化合物が（１）１−２５ｐｐｍの濃度で存在している５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物、および（２）３０−２５０ｐｐｍの濃度で存在している５−ブロモ−５−ニトロ−１、３−ジオキサンであり、前記バッファー系が４８から５８ｍｍｏｌ／ｌの濃度で存在していることを特徴とする方法。

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