CN109900887A - 一种尿液样本的前处理液 - Google Patents
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Abstract
本发明针对现有检测11‑脱氢‑血栓烷B2技术存在的缺陷，目的在于提供一种尿液样本的前处理液，使测量结果更加准确。其成分包括蒸馏水、Tris‑HCl或Na2B4O7‑HCl缓冲物质的一种、表面活性剂Tween‑20和Brij‑35、无机盐(NH4)2SO4和MgCl2，pH值为8.5~9.8。使用时须将尿液样本与前处理液按体积比1:1混合均匀，再进行后续测定。本发明所提供的尿液样本的前处理液可使11‑脱氢‑血栓烷B2测定更加准确。
Description
技术领域
本发明属体外诊断领域，具体的说是一种尿液样本的前处理液，应用于人体尿液11-脱氢-血栓烷B2的定量检测。
背景技术
据《中国心血管病报告2017》报导，心血管病死亡占我国居民疾病死亡构成中的40%以上，并且未来10年内心血管病患病人数仍会快速增长，我国心血管病防治工作仍面临严峻挑战。
血小板过度活化并聚集，最终形成粥样硬化血栓是心血管疾病关键成因之一。多项研究表明，花生四烯酸的代谢产物血栓烷A2(Thromboxane A2，TXA2)是人体血液中最强的血小板凝集剂，另外该物质还会引起血管平滑肌的剧烈收缩。人体血液中TXA2含量与粥样硬化血栓的形成密切相关，并在一定程度上可以反映患者发生心脑血管意外(如脑卒中、心肌梗死等)的风险。控制患者体内TXA2生物合成水平是目前心脑血管疾病治疗的重要方法，该治疗方法被称为“抗血小板凝集治疗”。其主要机理为服用阿司匹林(Aspirin)类药物抑制血小板环氧合酶-1(COX-1)和血小板环氧合酶-2(COX-2)的活性，控制患者体内TXA2的含量，进而减少血小板异常凝集。另一方面，这种方法(长期服用阿司匹林)也被广泛的用于心脑血管疾病的一、二级预防。
然而，由于个体差异，阿司匹林抑制血小板凝集的作用并非对所有患者都有效。约25%的患者长期服用常规计量的阿司匹林，但仍然不能有效减少体内TXA2的生成量，此现象被称为“阿司匹林抵抗（Aspirin Resistance）”。所以，临床医生需要一种可靠的方式来分析个体对阿司匹林的特异反应，帮助医生判断治疗情况，据此调节个体的用药类型和计量。显然，直接测定血液中TXA2含量可以反应患者对抗血小板凝集治疗的应答水平，也可用这一指标来判断患者在未来一段时间发生脑卒中等心脑血管意外的风险。不幸的是，TXA2在血液中半衰期仅为30秒，临床上对血液中的TXA2含量分析非常困难。
11-脱氢-血栓烷B2(11-dehydro-thromboxane B2,11-dhTXB2)是TXA2在尿液中的代谢产物，尿液中11-dhTXB2含量能精准反映患者体内TXA2的生物合成水平。因此，测定尿液中的11-dhTXB2含量是用于评估血小板活化水平的最佳方法，能帮助医生确定抗血小板凝集治疗效果，并可对患者发生脑卒中等心脑血管意外的风险进行预测，以便及时采取治疗措施。
目前，酶联免疫法(ELISA法)是测定尿液11-dhTXB2检测的主要方法。例如，专利文献US 8168400“Methods and kits for detection of thromboxane A2 metabolites”公开了一种使用单克隆单体测定尿液中11-dhTXB2含量的方法；公开号为CN 103592430A的专利申请“用于检测11-去氢血栓烷素B2的ELISA试剂盒”公开了一种检测11-dhTXB2的双抗体夹心法ELISA试剂盒；公开号为CN 102520156A的专利申请“血栓烷B2酶联免疫测定试剂盒”公开了一种检测11-dhTXB2的酶联免疫测定试剂盒。
尿液样本中成分复杂，pH值变化范围较广，且采集过程易受污染，同时尿液样本在常温保存和运输中11-dhTXB2可能会发生开环、分解等化学反应，都会使测定结果产生误差。对同一尿液样本进行多次测定，结果可能会产生很大偏差。所以，需要一种尿液样本的处理方法，来增强尿液中11-dhTXB2检测的灵敏度。
发明内容
本发明提供一种尿液样本的前处理液，用于人体尿液中11-dhTXB2的定量检测。
本发明的内容包括：
[1] 一种尿液样本的前处理液，其成分包括蒸馏水、缓冲物质、表面活性剂和无机盐；
[2] [1]中所述的尿液样本的前处理液pH值范围为8.5~9.8，所用的缓冲物质为Tris-HCl或Na2B4O7-HCl的一种，浓度为50-200 mM；
[3] [1]中所述的表面活性剂为Tween-20和Brij-35，浓度分别为0.01%~0.3%和0.05~0.2%；
[4] [1]中所述的无机盐为(NH4)2SO4和MgCl2，浓度分别为100mM~200mM和50mM~100mM；
使用时，取等体积的尿液样本与本发明配置的前处理液混合，经旋涡混合均匀后，即可进行后续的测定。
本发明的优点在于，尿液样本在于前处理液混合后，在表面活性剂的作用下，其中的11-dhTXB2趋于稳定，样本溶液的pH值稳定在一个定值，增强了测定时的准确度。
附图说明
图1处理前后尿液样本测试
具体实施方式
实施例1：前处理液的配制
按下表配制本发明的前处理液，并将其pH调至8.7。
实施例2：尿液样本测试
取已知肌酐浓度的低值、中值、高值三份尿液样本，用11-dhTXB2试剂盒(11-dehydroThromboxane B2 ELISA Kit – Monoclonal，Cayman，Item No. 519510)测定30次并记录测定值；再将这三份样本与实施例1中所配置的处理液按体积比1:1混匀，作为样本用上述试剂盒测定30次并记录测定值。结果如图1所示，可以看出，经本发明的处理液处理后，测试的误差大幅降低。
Claims (4)
1.一种尿液样本的前处理液用于尿液11-脱氢血栓烷含量的测定，其成分包括去蒸馏水、缓冲物质、表面活性剂和无机盐。
2.[1]中所述的尿液样本的前处理液pH值范围为8.5~9.8，所用的缓冲物质为Tris-HCl或Na2B4O7-HCl的一种，浓度为50-200 mM。
3.[1]中所述的表面活性剂为Tween-20和Brij-35，浓度分别为0.01%~0.3%和0.05~0.2%。
4.[1]中所述的无机盐为(NH4)2SO4和MgCl2，浓度分别为100mM~200mM和50mM~100mM。
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