JP3710153B2 - 水溶液中でカラム材料を保存するための組合せ物及び水性カラム材料 - Google Patents
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Description
【産業上の利用分野】
本発明は、カラム材料を水溶液中で保存するためのメチルイソチアゾロンとブロモニトロジオキサンとの混合物の使用に関する。
【0002】
【従来の技術】
水溶液中のカラム材料は、主に蛋白、核酸及び炭水化物のような水溶性の有機化合物を分離するために使用される。これらの化合物は微生物の成長を増進させる。水溶液で洗うことにより出来るだけカラム材料から有機化合物の残渣を除去するための努力がなされているが、これはしばしば完壁には達成されない。このように汚染されたカラム材料は多くの異なった微生物にとり理想的な栄養物質であり、このため2〜3日ですでに強力な微生物混入物を観察し得る。
【0003】
カラム材料の微生物の混入は、しばしば大変高価である原料の再利用に悪い影響を与える。これは、劣った分離効率及び/又は流速度、微生物の代謝産物によるカラム材料の汚染、例えば蛋白及び核酸の分解物の崩壊のような分離すべき物質に対する損傷といった形態で表われ、或る場合にはカラム材料それ自体さえも微生物の混入により化学的な影響を受けることがありうる。それゆえ、カラム材料における微生物成長は、通常、例えばアルコール又は高度に濃縮された塩溶液といった殺生物性溶剤を分離材料に添加することにより防止される。微生物の成長を防止するための他の既知の方法は、pH値を強アルカリ性(>12)又は強酸性(<2)のいずれかの値に調節すること、又はアジ化ナトリウムを添加することである(B.ワッドワース(Wadsworth)、Varian Instrum.Appl.第11/3巻、第10頁(1977))。
【0004】
しかしながら、微生物の成長を防止するための全ての既知の方法は、固有の不利益を有する。かかる有機溶剤は高い濃度で添加されなければならない(約15〜30v/v%)。加えて、これら有機溶剤のいくつかは分解が困難であり、それゆえこれらは環境を汚染する。加えて、有機溶剤の不利益は、これらがある種のカラム材料を破壊することである。高い塩濃度は、カラム材料上に望ましくない結晶をもたらす。さらに、塩容量は、洗浄の間にかなり環境を汚染する。高い又は低いpH値での保存は有害であり、多くのカラム材料は耐えることができない。アジ化ナトリウムは極めて毒性であり、かつ変異誘発性である(ブーフベルガー(Buchberger)及びキールマイアー(Kiermeier)、Clin.Chem.25、1514〜1515頁、(1979);工業用原料の危険な特性の報告(Dangerous Properties of Industrial Materials Report)、第1016巻、第65〜76頁(1990))。さらに、アジ化ナトリウムは、重金属と高度に爆発性の複合物を形成しうる。そして、アジ化ナトリウムの微生物効率はpHに依存し、かつ基本的には弱く、微生物はアジ化ナトリウムを利用することすらできる(抵抗性)。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】
それゆえ、本発明の課題は水溶液中でカラム材料を保存する際の上述の不利益を除去することである。
【0006】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、極めて低い濃度でさえも微生物の混入からカラム材料を効果的に保護できる、2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩(メチルイソチアゾロン)及び5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサン(ブロモニトロジオキサン)の組合せ物(混合物)により達成される。また、この混合物は微生物ですでに強度に汚染されたカラム材料に効果的に使用することができ、2〜3日以内に微生物を有意義に減少させることができる。
【0007】
本発明の混合物は、好適にはメチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンのほぼ等容量のものから成る。しかしながら、メチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンが20:80〜80:20の割合である混合物も微生物の成長を阻止する。二成分から成る混合物は、それらを少なくとも0.001%(w/v)の濃度でカラム材料の水溶液に添加するとき、微生物の成長を抑制する。約0.05%〜0.3%(w/v)の濃度が好適に使用される。0.1%(w/v)のメチルイソチアゾロン/ブロモニトロジオキサンの1:1混合物が、カラム材料における微生物の成長を阻止するために特に有利である。さらに、この殺生物性混合物は長時間(何ケ月ないし何年)に亙り効果的であり、実際に非毒性であり、容易に分解でき、即ち環境的に許容でき、これはカラム材料を破壊することなく、また、単に洗浄するだけでこれらから容易に分離しうる。
【0008】
本発明の殺生物性混合物は、化学的に異なるカラム材料を保存するために適当である。原則として、例えばセファロース、セファデックス、アガロース、アクリルゲル、ポリスチレン、ケイ酸塩にもとづくゲル等の水性系において分離するのに適切なすべての物質が考慮されうる。これに関連して、ポリマーが親和性のリガンド又は担体荷電でコーティングされているか否かは重要でない。
【0009】
更に、本発明の殺生物剤の組合せ物は、すでに微生物で強力に汚染された(約106〜108微生物/ml)カラム材料の微生物侵入を減少させるため、及び2〜3日で(2日後、28℃)微生物の数を有意義に減少させるために使用され、ある場合には微生物を全く有しないものが達成され得る。
【0010】
2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩及び5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサンはすでに久しく知られており、種々の会社から購入できる(例えば、ベーリンガーマンハイム社、MIT又はブロモニトロジオキサン、ブロニドックス(Bronidox)Kという商品名である。)。これらの物質は特に、化粧品及び或る種の技術的製造物において高度に効果的な殺生物剤として使用される(“Praxis der Sterilisation、Desinfection−Konservierung”、カールハインツ ヴァルホイサー(Karl−Heinz Wallhaeusser)、第4版、Georg Thieme Verlag Stuttgart/ニューヨーク、第445及び534頁、1988を参照)。さらに、これらの化合物の組合せ物及び診断試験における保存剤としてのその使用は既知である(ヨーロッパ特許第467337号)。
【0011】
メチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンから成るこの混合物が水溶液中におけるカラム材料に対してすぐれた殺生物作用を有しているという事実は驚くべきことである。というのは、診断剤における慣用の溶液に比較して、例えば殺生物剤の効果を低下させるカラム材料中で吸着作用を生じさせることができるからである。このような殺生物効果を有する他の既知の物質は微生物の数を減少させない。
【0012】
本発明は、以下に具体的に示される:
【0013】
【実施例】
例:
微生物が混入したカラム材料に対する本発明の殺生物性混合物の効果について使用される殺生物性混合物:メチルイソチアゾロン/ブロモニトロジオキサン(9gMIT及び10gブロニドックスK/100mlエタノール、96%)
微生物が混入した試料:
1) G−ゲル
2) 蛋白A−セファロース(室温で水中に60時間保存)
3) 蛋白A−セファロース(室温で10mMのK−リン酸緩衝液pH7.5に60時間保存)
4) DEAE−セファロース
5) Q−セファロース
6) 20mMリン酸緩衝液、0.15M NaCl、0.05%アジ化ナトリウム中で固定されたストレプトアビジン
前処理:
試料1)、4)及び5)をそれぞれ0.75gずつ計量し、3mlの滅菌した0.85%の食塩溶液に懸濁し、他の試料と同様に更に処理した。
【0014】
試料3)は4+1の割合で希釈しなければならなかった、というのは他の方法ではピペットできないからである。
【0015】
それぞれの初期力価は、これらを各々3個の1mlに分割する前に(3個の殺生物性混合物溶液を試験するため)、標準の1個の栄養寒天上に置き、28℃で培養することにより準備した試料中で測定した。
【0016】
殺生物性混合物は、0.01〜0.04及び0.1%(w/v)の最終濃度で分割した試料中に添加し、28℃で培養し、作用させ、残留する微生物の力価は引き続き上述のようにして測定した。
【0017】
【表1】
Claims (4)
- 殺生物物質2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩及び5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを含有する水溶液中に保存されたカラム材料。
- 水溶液が20:80〜80:20の割合で殺生物物質2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩と5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサンとを含有する、請求項1記載のカラム材料。
- 水溶液が0.001〜0.3%(w/v)の活性濃度で殺生物物質2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩と5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサンとを含有する、請求項1または2記載のカラム材料。
- 殺生物物質2−メチル−4−イソチアゾリン−3−オン塩酸塩及び5−ブロモ−5−ニトロ−1,3−ジオキサンを含有する水溶液を、カラム材料を保存するために使用する方法。
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