JP3692153B2 - ウイルス安全な血液凝固因子xiii調製物 - Google Patents
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Description
【産業上の利用分野】
本発明は、低い感染危険性を有すると同時に高活性を有する、ヒト起源の、ウイルスに対して安全な血液凝固因子XIII調製物に関する。
【0002】
プロ酵素因子XIIIは血漿中にaおよびb鎖の形態(a2b2、分子量約320,000Da)で存在する。式a2で示される因子XIII(分子量約160,000Da)は、例えば胎盤および血小板中に見い出される。因子XIIIの両変異体において、a鎖はプロ酵素を正確に構成し、この酵素からCa2+イオンの存在下、トロンビンの作用の下で活性な酵素である因子XIIIaが生成する。
【0003】
因子XIIIは血液凝固の最終期に必須の役割を果たす:トロンビンにより引き起こされるフィブリノーゲンからフィブリンへの変換(凝固)と同時に、因子XIIIはCa2+イオンの存在下に因子XIIIaへと活性化され、次いでこの因子XIIIaは形成されたフィブリン単量体を共有結合により架橋する。この様にして形成された高重合体は非架橋フィブリンよりかなり高い機械的強度を呈し、さらに繊維素溶解分解に比較的耐性であって、これが有効な止血に決定的に重要である。さらに、因子XIIIの存在は正常な癒傷にとって必要な先行条件である。
【0004】
因子XIII欠損患者は、負傷したときに止血および癒傷において重い障害を受け、これは因子XIII調製物の静脈内投与によってのみ除去することができる。さらにフィブリノーゲンおよび因子XIIIに基づく組織接着(「フィブリン接着」)においても、所望の高強度の接着を得るためならびに有効な止血および良好な癒傷のために因子XIIIの十分な含量が必須である。
【0005】
最後に、医学-診断目的のために標準化された因子XIII調製物に対する必要性が存在する。
【0006】
【従来の技術】
因子XIII調製物、特にヒトに投与すべき調製物はヒト血漿およびヒト胎盤から得られる。使用される出発物質の故に、無菌的濾過により除去し得ない感染性病原体、例えばウイルスを伝染させる危険性が基本的に存在する。
【0007】
上記の全ての適用のために、患者またはスタッフのどちらも危険にさらさないように、因子XIII調製物が実際に感染のいかなる危険性も有していてはならないという要求が存在する。この必要条件はヒトに投与すべき調製物に関して特に重要であり、例えば因子XIII欠損患者に一生を通して定期的な間隔で投与しなければならない注入調製物に関して最も重要である。感染性粒子が完全には除去されていない全ての調製物を用いる場合には、この繰り返し投与は患者においてこれら粒子の蓄積を導き、このようにして感染の危険性の大きな増大を導くであろう。
【0008】
従って、この危険性を可能なかぎり最小限にするための試み、すなわち一方では出発物質を試験することによる、また他方では存在する可能性のあるあらゆる感染性病原体を不活性化するための追加的な測定による試みがなされている。しかし、既知でありさらに適当な試験法が利用可能である感染性病原体(肝炎およびHIウイルス)に対して出発物質を試験することができるのみであり、存在するかもしれない他の未知の感染性病原体に対しては試験することができない。さらに、全ての試験法の感受性は限られており、ゆえに、既にこの理由のために絶対的な安全性を期待することができない。
【0009】
不安定な生物学的調製物中のウイルスなどの病原体を不活性化する全ての方法は、この方法がウイルス力価をできるだけ低下させるべきであるが、他方では生物学的活性の低下をできるだけ少ない程度にすべきであるという基本的問題を有する。
【0010】
現在のウイルス不活性化法は、高用量(例えば、凝固因子調製物中、約105ID/mlの最大可能力価に対応する)の試験ウイルスと混合した試験調製物に対して該方法を適用した後に、もはやサンプル中にいかなるウイルスも検出することができず、こうしてウイルス力価が検出限界以下まで低下した場合に有効であると称される。
【0011】
不活性化の確認としていわゆる「低下係数」(「ウイルス低下係数」)が知られており、これは、試験ウイルスの一回の添加後の最初および最後のウイルス力価の比の10の対数から算出される。欧州共同体委員会の指導的なEC III/8115/898-ENから、さらにいわゆる全低下係数が知られている。これは個々の続いて行われる不活性化測定の低下係数の合計から算出される。
【0012】
従って、該方法を実施した後の低下係数(RI)または全低下係数(R)の生物学的残存活性(RA)に対する比は、ウイルス不活性化法を確認するのに役立つ。
【0013】
溶液中の加熱(低温殺菌)により因子XIII調製物中の病原体を不活性化する既知の方法が存在する[EP-A−0 018 561、EP-A−0 037 078]。因子XIIIの生物学的活性は、既知の安定化物質、例えばアミノ酸、ペプチド、糖、ポリオールまたはカルボン酸、いわゆる「熱安定化物質」(10%より多く50%までの量で用いなければならない)の添加により実質的に保持することができる(シロップ法)。さらに、0.1%より高い濃度のヒトアルブミンが熱安定化物質として示唆されている(特願昭63−80960号)。また、熱処理前の0.5Mより多い硫酸アンモニウムの添加により血液凝固因子を安定化する方法が知られている(AT 376 883)。
【0014】
しかし、加熱産物からの高濃縮された熱安定化物質の必要な除去は厄介である。安定化物質の存在下での低温殺菌によるウイルス不活性化法は、所望の生物学的活性と同時にウイルス自体が安定化され、これにより低下係数の残存活性に対する特に好ましい比(R/RA)が得られないという不利益をさらに有する。
【0015】
これまで、安定化物質を含まない因子XIII含有溶液の液体加熱は専門家の観点から不可能であると考えられていた;例えば、EP-A−0 037 078における比較例において、安定化物質を添加せずに因子XIIIを60℃で10時間加熱した。この実施において、因子XIIIの活性は完全に破壊された。
【0016】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物であって、大量の因子XIIIを投与したときでさえ感染性病原体の伝染が排除されることを該調製物から予測することができ、それにもかかわらず高活性を有する調製物を提供するという目的を有する。さらに本発明は、溶液中で加熱することにより因子XIII含有調製物中の感染性病原体を不活性化する方法であって、既知の低温殺菌法に固有の不利益を呈しない方法を提供する目的を有する。
【0017】
【課題を解決するための手段】
本発明に従い、これら目的はウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物により達成され、これは、全タンパク質1mgあたり少なくとも2Uの比活性を有する血液凝固因子XIIIを含有する水溶液であって、糖、ポリオール、アミノ酸、ペプチドおよびカルボン酸からなる群から選択される10%未満の既知の安定化物質、ならびに0.5モル/L未満の硫酸アンモニウムを含む溶液を、感染性病原体を不活性化するに十分な時間、好ましくは30分〜100時間加熱することにより達成される。
【0018】
さらに本発明は、感染性病原体が加熱により不活性化されるウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物を製造する方法であって、糖、ポリオール、アミノ酸、ペプチドおよびカルボン酸からなる群から選択される10%未満の既知の安定化物質、ならびに0.5モル/L未満の硫酸アンモニウムを含み、少なくとも2単位、好ましくは少なくとも15単位/mg全タンパク質の比活性を有する因子XIII含有分画の水溶液を、40〜65℃の温度で、感染性病原体を不活性化するに十分な時間、好ましくは30分〜100時間加熱することを特徴とする方法を包含する。
【0019】
驚くべきことに、因子XIII含有溶液を既知の安定化物質の不在下または低含有量の下で加熱した場合に、非常に好ましいこれまで達成されなかったウイルス低下係数の因子XIII残存活性に対する比が得られることが見い出された。比較アッセイにより、溶液(60℃)中で加熱することによるHIV力価の一定の低下は、加熱を安定化物質(EP-A−0 018 561に従った50%スクロース、2Mグリシン)の存在下で行うときには少なくとも10倍長い加熱時間を必要とすることが示された。
【0020】
因子XIII活性が高度に保存されたいう事実はさらに驚くべきことであった。この理由は、因子XIIIを例えばEP-B−0 159 311に従って熱処理に供する場合には因子XIIIが比較的、熱不安定であると考えられるからである。
【0021】
本発明による方法を、因子XIIIの生物学的活性の50%より多くが保存される温度および時間で行う。
【0022】
本発明の方法の好ましい態様は次の測定を特徴とする:
・因子XIII含有COHN I分画を得、
・因子XIIIをCOHN I分画から沈殿させて沈殿物を分離し、
・所望なら、因子XIII含有沈殿物を溶解および再沈殿によりさらに精製し、
・溶解沈殿物を短時間加熱して熱変性フィブリノーゲンを分離し、
・所望なら、因子XIII含有溶液をさらに精製および濃縮し、
・既知の安定化物質を添加せずに40〜60℃の温度で30分〜2時間、XIII含有溶液を加熱する。
【0023】
溶解したCOHN I分画からの因子XIIIの沈殿は、例えば硫酸アンモニウム(20℃で約10〜20%飽和)またはグリシン(約1.5〜3モル/L)を用いて行うことができる。また、因子XIIIを沈殿させる(フィブリノーゲンの存在下で)のに適当であることが知られているさらに別の沈殿化物質を用いてもよい。
【0024】
得られた沈殿物の分離および溶解後に、同じかまたは異なる沈殿化物質を用いて沈殿を繰り返してもよい。次いで、沈殿物を溶解して短時間(例えば56℃で3分間)加熱し、存在するあらゆるフィブリノーゲンを変性および沈殿させる。加熱沈殿後に得られた上清は、約0.5〜2.5mg/mlの全タンパク質含量を有し、約2〜10U/mg全タンパク質の比活性を有する因子XIIIを含有する。
【0025】
さらにこの因子XIII含有溶液を精製してもよく、この場合、伴われるタンパク質はポリエチレングリコール(例えば、約4℃で約3.5%までの濃度のPEG4000)の添加により沈殿および分離される。
【0026】
さらに、10%までの濃度のPEG4000の添加により因子XIIIを沈殿させて、緩衝溶液、例えば0.1%クエン酸溶液(pH7.0)中に溶解して数百単位/mlの濃度にすることができる。
【0027】
次いで、このようにして得た溶液を、既知の安定化物質を添加せずに加熱し(例えば、60℃で27時間または50℃で12時間)、因子XIII活性は実質的に保存される。
【0028】
好ましい態様において、加熱すべき溶液はさらにテンシド(tenside)、好ましくは非イオン性テンシドを含有する。テンシド濃度は、用いるテンシドの型により可変的に選択すべきである。加熱工程中にテンシドがさらに抗ウイルス薬的に活性となり、因子XIII活性が実質的に損傷されない濃度が適当である。
【0029】
各々の所望のテンシドに対してこのような適当な濃度は簡単な実験により決定されるであろう。
【0030】
適当な濃度は、例えばデスオキシコレートについては0.2%(w/v)以下であり、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムおよび塩化ベンジル-ジメチル-2-ヒドロキシエチル-アンモニウムについては0.1%(w/v)以下であり、スルホベタインSB 12(Serva;N-ドデシル-N',N-ジメチルアンモニオ-1-プロパン-スルホネート)については0.3%(w/v)以下であり、N-オクチルグルコシドについては1%以下であるが、Tween 80またはTriton X-100などのテンシドを実質的に比較的高い濃度(15%(w/v)およびそれ以上)で用いても良い。
【0031】
驚くべきことに、テンシド存在下の溶液中で加熱したときに因子XIIIの安定性は、テンシド不在下とおよそ同程度に良好であるが、ウイルス不活性化はさらに迅速に進行し、これにより概してウイルス低下係数の因子XIII残存活性に対するさらに好ましい比が得られる。必要ならば、添加されるテンシドを加熱工程後に本質的に既知の方法、例えば再沈殿またはイオン交換クロマトグラフィーにより再び除去してもよい。
【0032】
感染性病原体、例えば肝炎またはAIDSウイルス(HIV)の伝染の点でこれまで達成されなかった安全性と同時に存在する酵素の高い比活性のために、本発明による調製物は、ヒトに対する予防的および治療的投与のための調製物の製造、組織接着物質の製造ならびに診断的目的のために適している。
【0033】
ウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物の好ましい適用は、既にウイルス不活性化されたフィブリノーゲン調製物への因子XIIIの添加による、ウイルス安全な組織接着調製物の製造から成る。
【0034】
所望の低下係数を得るための本発明による熱処理の継続時間は、一定量の試験ウイルスが混合された因子XIIIサンプルについて実験的に決定することができる。
【0035】
ウイルス不活性化のために、依然として測定可能なウイルス力価が得られるまで因子XIIIサンプルを特定の温度で熱処理する。時間当たりのウイルス力価単位の低下から、ウイルス力価の所望の全低下を得るために必要な処理時間を計算することが可能である。
【0036】
この様式で計算する場合には、ウイルス不活性化が、変化しない速度定数を有する一次の反応であることが前提とされる。
【0037】
これは実際に常に起こらないとしても、なおその時間経過の間に方法の効力の低下(いわゆるテーリング)が観察されることが多いが、記載される計算の様式は依然として様々なウイルス不活性化法の効力を互いに比較する認められた方法である。
【0038】
しかし、熱処理の間に一定量の試験ウイルスを繰返し加えることもEP 0 519 901の方法に従って可能であり、各繰返しはウイルス力価が特定の値、好ましくは検出限界以下まで低下したときにのみ行う。次いで、全低下係数は個々の低下係数の合計から得られる。
【0039】
本発明の方法を実施するために、高度に精製された因子XIIIを含有している分画が特に適していることが判明した。従って、本発明の方法の好ましい態様は、熱不活性化の前に、因子XIII含有分画を精製して、所望なら濃縮して因子XIIIの少なくとも15単位/mg全タンパク質の比活性を得ることから成る。
【0040】
本発明の方法を実施したときに、調製物の精製度が高いほど、すなわちその比活性が高ければ高いほど因子XIIIの安定性が高くなることは驚くべきことであった。
【0041】
通常、不安定な酵素は他のタンパク質(既知の例はアルブミン)の存在により安定化されるから、全く正反対のことが予想されねばならないであろう。
【0042】
しかし、驚くべきことに、本発明に従った方法においてはアルブミンは因子XIIIに対していかなる安定化効果も有さず、さらに他の血漿タンパク質も安定化物質として作用しないことが見い出されている。
【0043】
因子XIII含有分画を血漿から得ることは都合がよい。その場合因子XIIIはa鎖およびb鎖の両方を含むであろう。
【0044】
本発明に従った方法を実施する前に、存在する可能性のあるフィブリノーゲンを分離するのは都合がよい。熱変性されたフィブリノーゲンの存在下で、ウイルスの封入も起こるであろう。このような封入ウイルスは熱作用に関して安定化され、これにより方法の信頼性は疑わしいものとなるであろう。短時間の加熱(例えば、56℃〜60℃で数分間)の後に、フィブリノーゲンは変性し、次いで沈殿物として分離することができる。
【0045】
本発明に従った方法を、因子XIIIが溶液中に少なくとも2単位/mg全タンパク質の比活性で存在する血漿分画法のあらゆる段階で行うことができる。
【0046】
以下の実施例において、以下の分析法を適用した:
全タンパク質:ビウレット法。
【0047】
因子XIII:2つの異なるが両方とも同じ基本的原理、すなわち因子XIIIによるフィブリン架橋に基づく方法に従い測定を行った。
【0048】
方法1:
因子XIIIを含まないフィブリノーゲン溶液の一部を、測定すべきサンプルの異なる希釈物およびトロンビン-CaCl2溶液と混合し、37℃でインキュベートする。一定のインキュベート時間後に反応を1%モノクロロ酢酸(MCA)の添加により停止させ、MCA中のフィブリン凝塊の溶解性または不溶性を測定する。
プールした十分に凍結させたヒトクエン酸化血漿を標準とする(定義により血漿1mlが1単位の因子XIIIを含有する)。
不溶性の凝塊が依然として得られるサンプルおよび標準の最も高い希釈を、各々、次の式に従い、未知のサンプル(x)の因子XIII含量を算出するために供した:
【数1】
x = Vx / Vs
[式中、Vxは未知のサンプルの希釈であり、そしてVsは標準の希釈である]。
従ってこの通常の測定法は、最終的に1%モノクロロ酢酸中の非架橋フィブリンの溶解性または架橋フィブリンの不溶性に基づく。ゆえに、その精度はこの溶解性限界の不正確性により制限される。
【0049】
方法2:
反応混合物は方法1のものに対応するが、反応は尿素、Na-ドデシル硫酸(SDS)およびβ-メルカプトエタノールの混合物の添加により停止され、タンパク質に含有されるジスルフィド架橋は還元により切断される。
このようにして得られたサンプル中のフィブリン-γ-鎖の架橋度は、SDSゲル電気泳動およびクーマシーブルーによる染色後に濃度計により測定する。グラフ内挿法により、フィブリン-γ-鎖の架橋が50%に達するサンプルおよび標準の希釈が得られる。これら希釈を各々VxおよびVsとしたときに、未知サンプル(x)の因子XIII含量は次式に従い方法1のように算出される:
【数2】
x = Vx / Vs
その性質により、方法2は(通常の)方法1より正確であるが、これははるかに多くの作業を含む。
従って方法2は、因子XIII測定の比較的高い正確度が本発明の方法を説明するために都合がよいかまたは必要であるらしい場合に用いた。
【0050】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例1 フィブリノーゲンを含まない因子XIII溶液の調製(熱沈殿上清)
通常のCOHN I沈殿物(フィブリノーゲンおよび因子XIIIを含有する血漿分画からエタノールを用いた沈殿により得た)を10倍量のクエン酸含有緩衝溶液(pH7.0)(0.05Mクエン酸、0.5M NaCl、20.000KIUアプロチニン/L)を用いて溶解し、撹拌しながら16%飽和になるまで(室温で)硫酸アンモニウムと混合した。直ちにこれを4℃まで冷却し、混合物をさらに2時間撹拌した。生成した沈殿物を上記緩衝溶液を用いて溶解し、硫酸アンモニウムを用いて沈殿をもう1度繰り返した。
この沈殿物をクエン酸含有緩衝溶液(pH7.0)[0.02Mクエン酸、0.12M NaCl、100KIUアプロチニン/ml]に溶解し、56℃で10分間加熱した。生成した沈殿物(変性化フィブリノーゲンから)を遠心分離した。熱沈殿上清は2.1mg/mlのタンパク質含量および7.7U/mlの因子XIII含量(方法2による)を有していた。従って、比活性は因子XIII3.7U/mg(タンパク質)であった。
【0051】
実施例2 溶液加熱時の因子XIIIの安定性
実施例1に対応する熱沈殿上清を40〜65℃の温度で安定化物質を添加せずに加熱した。熱処理の一定持続時間後に、加熱前の活性に基づく因子XIIIの残存活性を測定した。
【表1】
【0052】
実施例3 溶液中で加熱した場合の因子XIIIの比活性および安定性
安定化物質を含まない溶液中で加熱した場合の次の因子XIII溶液の安定性を比較した:
A)実施例1の熱沈殿上清
B)さらに精製するために、実施例1の硫酸アンモニウム沈殿物をクエン酸含有緩衝溶液[0.02Mクエン酸、0.12M NaCl、50,000KIUアプロチニン/L]に溶解し、グリシン(1.75モル/L)で再沈殿させた。沈殿物を同じ緩衝溶液中に溶解し、熱沈殿を実施例1に従って行った。
C)実施例1に従った熱沈殿上清を、さらに精製および濃縮するために以下の様式でさらに処理した。
1)4℃で3.5%(w/v)PEG4000を用いた沈殿による伴われるタンパク質の分離
2)4℃で10%(w/v)濃度までのPEG4000の添加による上清からの因子XIIIの全沈殿、遠心による沈殿物の分離および0.1%クエン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)の元の容量の1/25への溶解
熱処理(60℃で4時間、安定化物質なし)後の3つの溶液A、B、Cの因子XIII残存活性を測定した(方法2)。
【表2】
実施例は、安定化物質を含まない溶液中で加熱した場合に因子XIIIの安定性がその純度(比活性)と共に上昇することを示している。
【0053】
実施例4 テンシドの存在下に溶液(安定化物質を含まない)中で加熱した場合の因子XIIIの安定性
因子XIII含有溶液は実施例3、変形Cに従い製造した。比活性は21U因子XIII/mg(タンパク質)に達した。溶液を分割し、一部を1%(w/v)のTween80(登録商標)と混合した。両溶液を60℃で6時間加熱した。6時間の加熱後に、因子XIII残存活性はテンシドの添加なしで82%、テンシドを添加した場合には84%に達した(方法2に従い測定)。
【0054】
実施例5
異なる濃度の様々なテンシドと共に実施例4を繰り返した(加熱:60℃、4時間)。
【表3】
実施例4および5は、非イオン性、陰イオン性、陽イオン性または両性イオン性テンシドの存在下でもいかなる問題も伴わず、因子XIII活性の大きな損失を受けることなく本発明の方法を行うことができることを示している。
以下の実施例6および7は本発明による方法の効果を示す。
【0055】
実施例6 変性化フィブリノーゲンの存在または不在下での本発明の方法によるモデルウイルスの不活性化
実施例1による因子XIII含有分画のサンプルについて、A)熱沈殿およびフィブリノーゲンの分離前に、またはB)熱沈殿分離後の沈殿物をシンドビス、ワクシニア、ポリオまたは水疱性口内炎(VS)ウイルスの10容量%の懸濁物と混合して60℃で加熱し、ウイルス力価を異なる加熱時間の後に測定し、60分の加熱時間に基づいて低下係数(R)を算出した。変形A)においては、ウイルス力価測定を加熱中に形成した熱沈殿上清由来のB)と同様に行った。
結果を表4に挙げる。
【表4】
結果は、最もこれに類似している既知の方法、すなわち安定化物質の存在下での低温殺菌と比較したときに本法の優れた効力を示す。
この既知の方法の効力は、例えば、R.MaulerおよびJ.Hilfenaus[Arzneim.Forsch./Drug Res. 34, 1524-1527 (1984), Table 2, p.1526]より知られている。
【0056】
ポリオおよびワクシニアウイルスに対する各低下係数(60℃、1時間)を計算し、その後にウイルス力価の105の低下が発生する(R=5)加熱時間(60℃)を決定した(グラフ内挿法により)場合に、結果として以下の比較が得られる(表5):
【表5】
結果(表4)はさらに、ワクシニアウイルスの例により、沈殿した変性化タンパク質を除去することは都合がよいことを示している。
【0057】
実施例7 テンシド存在下または不在下の本発明の方法によるモデルウイルス(シンドビス)の不活性化
実施例3、変形Cに従った因子XIII含有溶液を分割し、一部を0.3%(w/v)N-オクチルグルコシドと混合した。
両溶液を60℃で加熱し、10容量%のシンドビスウイルス懸濁物と混合し(ウイルス不活性化反応の開始)、さらに60℃でインキュベートした。一定の時間間隔で、サンプルを採取し、ウイルス力価を測定した。
結果を以下の表6に挙げる。
【表6】
本実施例は、本発明の方法がテンシドの存在下で行われた場合に一層有効であることを示す:
さらに迅速で一層広範囲なウイルス不活性化が、因子XIII活性の大きな損失を受けることなく達成される(実施例5を参照)。
Claims (14)
- 血液凝固因子X III を含む水性医薬調製物の製造方法であって、以下の工程:
少なくとも2Uの因子X III/mg タンパク質を含む水溶液を得、そして
ウイルスを非活性化してウイルス安全な血液凝固因子X III を得るために安定剤を加えることなく40〜65℃で加熱する、
を含み、
該水性医薬調製物は、加熱前の水溶液中に存在する因子X III の元の生物学的活性の50%を超える活性を有する方法。 - 加熱を30分〜100時間行う請求項1に記載の方法。
- 加熱をテンシドの存在下に行う請求項1に記載の方法。
- テンシドが非イオン性テンシドである請求項3に記載の方法。
- 前記水溶液が公知の安定剤を実質的に含まない請求項1に記載の方法。
- 加熱を因子XIIIの生物学的活性の60%以上を保持するに適した温度及び時間で行なう請求項1に記載の方法。
- 因子XIIIを含むCOHN−I画分を供し、
該COHN−I画分から因子XIIIを沈殿させて沈殿物を形成させて該沈殿を分離し、
溶解した沈殿を短時間加熱して変性したフィブリノーゲンを分離し、そして
該因子XIIIを含む溶液を安定剤を添加せずに40〜60℃の温度で30分〜2時間加熱する、
ことを含む請求項1に記載の方法。 - 請求項1〜7のいずれかに記載の方法により得られるウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物。
- 該因子XIIIが更にテンシドを含む請求項8に記載のウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物。
- テンシドが非イオン性テンシドである請求項9に記載のウイルス安全な血液凝固因子XIII調製物。
- 請求項8に記載の血液凝固因子XIII調製物を活性成分として含む治療用又は予防用調製物。
- 請求項8に記載の血液凝固因子XIII調製物を活性成分として含む診断用調製物。
- 請求項8に記載の血液凝固因子XIII調製物を含む組織接着用調製物。
- すでにウイルスを不活性化したフィブリノーゲン調製物を更に含む請求項13に記載の組織接着用調製物。
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