JP3564150B2

JP3564150B2 - プロテインｃ誘導体

Info

Publication number: JP3564150B2
Application number: JP11822393A
Authority: JP
Inventors: ブルース・エドワード・ガーリッツ; ブライアン・ウィリアム・グリンネル
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1992-05-21
Filing date: 1993-05-20
Publication date: 2004-09-08
Anticipated expiration: 2019-09-08
Also published as: CA2096604A1; HU9301461D0; NO311299B1; FI932282A; MX9302917A; RU2122004C1; ATE286121T1; CN1080658A; PT575054E; CA2096604C; FI932282A0; BR9301944A; EP0575054A2; AU661901B2; AU3869993A; CZ94893A3; KR930023370A; PH29911A; NO931840D0; US5453373A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はヒト用医薬、殊に血液凝固疾患処置の分野に属する。特に、本発明はヒトプロテインＣ分子の誘導体、これら誘導体の使用法およびこれらプロテインＣ誘導体を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
プロテインＣは主として約２５キロダルトンの軽鎖と約４１キロダルトンの重鎖とがジスルフィドで結合した不活性なヘテロダイマーとして循環しているビタミンＫ依存性血漿蛋白である。重鎖はそのＮ端活性化ペプチドを持つセリンプロテアーゼドメインを含み、軽鎖はカルシウム依存性膜結合および機能活性に必要なガンマ−カルボキシグルタミン酸の残基の領域を含む。不活性ヒトプロテインＣチモーゲンはトロンビン／トロンボモジュリン複合体の作用で活性化プロテインＣに変換される。このトロンビン／トロンボモジュリン複合体は活性ペプチド（循環チモーゲンの残基１５８から１６９またはプレプロチモーゲンの残基２００から２１１）を切断して活性化プロテインＣを形成するものである。
【０００３】
治療剤としてのプロテインＣの役割はよく知られている（例えば、ヒトプロテインＣチモーゲンをコードするＤＮＡ配列を開示するバング等の米国特許第４７７５６２４号および活性化ヒトプロテインＣの製法を開示するバング等の米国特許第４９９２３７３号参照）。ＦＬＩＮと呼ばれるヒトプロテインＣ誘導体はゲルリッツ等が欧州特許出願第９１３０１４５０．２号に開示した。このＦＬＩＮ誘導体は活性化ペプチドの１６７位（プレプロチモーゲンの２０６位）にＡｓｐ残基の代わりにＰｈｅ残基を、重鎖の１７２位（プレプロチモーゲンの２１４位）にＡｓｐ残基の代わりにＡｓｎ残基を持つ。このＦＬＩＮ誘導体は野生型ヒトプロテインＣチモーゲンよりもトロンビンによってより容易に活性化される。別のヒトプロテインＣ誘導体Ｑ３１３およびＱ３２９はゲルリッツ等が欧州特許出願第９１３０１４４６．０号に開示した。Ｑ３１３誘導体は野生型チモーゲンの３１３位にＡｓｎ残基の代わりにＧｌｎ残基を持ち、Ｑ３２９誘導体は野生型チモーゲンの３２９位にＡｓｎ残基の代わりにＧｌｎ残基を持つ。このＱ３１３とＱ３２９誘導体は正常には野生型分子のこれらの位置にあるＡｓｎに結合する炭水化物構造を欠くため、アミド分解および機能活性の強化を示す。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明のヒトプロテインＣ誘導体はトロンビンによって容易に活性化され、天然型ヒトプロテインＣ分子や別のヒトプロテインＣ誘導体よりも機能的に活性である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は天然型ヒトプロテインＣ分子のアミノ酸３１３をアスパラギンからグルタミンに、アミノ酸１６７をアスパラギン酸からフェニルアラニンに、またアミノ酸１７２をアスパラギン酸からアスパラギンに変更することによって修飾したヒトプロテインＣの誘導体に関する。さらに、これらの分子は、野生型アスパラギン残基をグルタミン残基に変えることによって３２９位を修飾してもよい。この残基３２９の変更は残基３１３の変更とのみ共同して行ってもよいが、残基１６７および１７２の変更と共同して行ってもよい。上記ヒトプロテインＣ誘導体は野生型ヒトプロテインＣ分子または他のヒトプロテインＣ誘導体よりも、トロンビンによってより容易に活性化され、また機能的にもより活性である。
【０００６】
また、新規ヒトプロテインＣ誘導体の生産に有用な組換えＤＮＡ構築物、ベクターおよび形質転換体も開示する。さらに、本発明のヒトプロテインＣ誘導体の有効量を医薬的に受容し得る添加剤一以上と共に含む医薬組成物およびこの誘導体を疾病の処置または予防に使う方法も開示する。
【０００７】
本明細書に用いる用語と略号をここに定義しておく。
【０００８】
Ｑ３１３＝天然型ヒトプロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
Ｑ３２９＝天然型ヒトプロテインＣ分子の３２９位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
プロテインＣ誘導体Ｑ３１３およびＱ３２９は参考文献であるゲルリッツ等の欧州特許出願第９１３０１４４６．０号およびグリンネル等、１９９１年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２２６巻、９７７８〜９７８５頁に開示されている。
【０００９】
Ｑ３Ｑ９＝天然型ヒトプロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に、天然型ヒトプロテインＣ分子の３２９位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
【００１０】
Ｆ１６７＝天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニンに変えたヒトプロテインＣ誘導体。プロテインＣ誘導体Ｆ１６７は参考文献であるバング等、欧州特許出願第８８３１２２０１．２号およびエールリヒ等、１９９０年、ＥＭＢＯ・ジャーナル、９巻、２３６７〜２３７３頁に開示されている。
【００１１】
ＬＩＮ＝天然型ヒトプロテインＣ分子の１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
ＦＬＩＮ＝天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニンに、天然型プロテインＣ分子の１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
プロテインＣ誘導体ＬＩＮとＦＬＩＮは参考文献であるゲルリッツ等、欧州特許出願第９１３０１４５０．２号およびグリンネル等、「プロテインＣおよび関連する抗凝血剤」１３〜４６頁（Ｄ．ブルリーおよびＷ．ドロハン編、ガルフ出版者、ヒューストン、１９９０年）に開示されている。
【００１２】
ＦＬＩＮ−Ｑ３１３＝天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニンに変え、天然型プロテインＣ分子んの１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変え、天然型プロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
【００１３】
ＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９＝天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニンに変え、天然型プロテインＣ分子の１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変え、天然型プロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変え、天然型プロテインＣ分子の３２９位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体。
【００１４】
ＧＢＭＴ転写ユニット＝アデノウイルスメジャー・レート・プロモーター（ＭＬＴＦ）の上流制御要素に接近したＢＫウイルスのＰ２エンハンサー、アデノウイルス２メジャー・レート・プロモーター、該プロモーターを刺激する位置にあるポリＧＴ要素およびアデノウイルスのスプライスト・トリパータイト・リ−ダー配列を含むＤＮＡ配列からなる修飾された転写制御ユニット。
【００１５】
形成期蛋白＝ｍＲＮＡ転写の翻訳で生じたポリペプチドであって、翻訳後修飾が始まる前のもの。しかし、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化およびアスパラギン酸残基のヒドロキシル化のような翻訳後修飾はｍＲＮＡ転写から蛋白質が完全に翻訳される前に始まるかもしれない。
【００１６】
プロテインＣ活性＝蛋白分解、アミド開裂、エステル開裂および生物学的（抗凝血またはプロフィブリン分解）活性の原因となるヒトプロテインＣの性質のうちいづれか。蛋白の抗凝血作用の検定法は文献公知である。すなわち、グリンネル等、１９８７年、バイオ／テクノロジー、５巻、１１８９〜１１９２頁参照。
【００１７】
チモーゲン＝蛋白分解酵素の酵素的に不活性な前駆体。ここにプロテインＣチモーゲンとは分泌された一鎖か二鎖の不活性型プロテインＣである。
【００１８】
この開示で用いるアミノ酸の略号は３７、Ｃ．Ｆ．Ｒ．、１．８２２条（ｂ）（２）（１９９０）に記載のように米国特許商標庁が認めたものである。
【００１９】
本発明は変更されたグリコシル化パターンおよび変更された活性領域を持つヒトプロテインＣ誘導体を提供する。特に、これら誘導体はＱ３Ｑ９、ＦＬＩＮ−Ｑ３１３およびＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９を含む。誘導体Ｑ３Ｑ９はプロテインＣ分子の３１３位と３２９位に（正常時にこれらの位置に認められるアスパラギン残基ではなく）グルタミン残基を持つ。誘導体ＦＬＩＮ−Ｑ３１３は該分子の１６７位にフェニルアラニン残基を、該分子の１７２位にアスパラギン残基（正常時に両位置に認められるアスパラギン酸残基ではなく）を持ち、また３１３位に（正常時にこの位置に認められるアスパラギン残基ではなく）グルタミン残基を持つ。誘導体ＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９では、１６７位の残基はアスパラギン酸からフェニルアラニンに、１７２位の残基はアスパラギン酸からアスパラギンに、３１３位の残基はアスパラギンからグルタミンに、３２９位の残基はアスパラギンからグルタミンに変わっている。
【００２０】
誘導体ＦＬＩＮ−Ｑ３１３およびＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９はトロンビンのみでも例外的に高率の活性化を示す。さらに野生型ヒトプロテインＣと異なり誘導体ＦＬＩＮ−Ｑ３１３およびＦＬＩＮＱ３Ｑ９は凝固ヒト血漿中に生成するトロンビンによって活性化され得、それ以上の血塊形成を阻止する。この血塊で活性化されるプロ酵素は実質的に天然型プロテインＣの活性型よりも比活性が大きく、半減期が長い。それ故、本発明の誘導体は顕著なトロンビン発生があるとき以外には抗凝固活性のない作用部位で活性化される抗血栓剤として用い得る。
【００２１】
さらに、本発明はこのプロテインＣ誘導体を作るために用いるＤＮＡ化合物をも提供する。これらＤＮＡ化合物は、野生型チモーゲンプロテインＣのプレプロペプチド配列と翻訳読み枠が合っていて、その下流に直に隣接して位置するヒトプロテインＣの軽鎖のためのコード配列を含む。また、このＤＮＡ配列はプロテインＣ分子の成熟の間に加工（プロセシング）されるジペプチドＬｙｓ−Ａｒｇ、活性化ペプチドおよびプロテインＣ分子の重鎖もコードしている。１６７、１７２および３１３位にあるアミノ酸残基の変更は分子の活性化を変えるが、３１３および３２９位にあるアミノ酸残基の変更は分子の炭水化物含有量を変える。
【００２２】
遺伝子コードの縮重のため、当業者は多数のＤＮＡ化合物が上記ポリペプチドをコードできることを理解するであろう。参考文献であるバング等の米国特許第４７７５６２４号は野生型ヒトプロテインＣ分子をコードするＤＮＡ配列を開示し、特許請求している。本明細書に開示するポリペプチドそのものをコードできる別のＤＮＡ配列を構築するために如何なるＤＮＡ配列変化を使えるかは当業者なら容易に決められるので、本発明は寄託によって開示する特定のＤＮＡ配列に限られるものではない。それ故、以下に記載する構築および実施例で用いる好適なＤＮＡ化合物、ベクター及び形質転換体は単なる例示であり、本発明を限定するものではない。加えるに、３１３および３２９位にあるＡｓｎのＧｌｎへの置換も単なる例示であって、ＣｙｓとＰｒｏを除けば別の置換も使えるので、これも本発明の範囲を限定するものでない。
【００２３】
本発明のＤＮＡ化合物は全てヒトプロテインＣ遺伝子の部位特異的突然変異誘発によって製造された。次いで、突然変異化したチモーゲンをコードする分子を、チモーゲン遺伝子の発現がＧＢＭＴ転写ユニットによって駆動され得るように真核細胞の発現ベクターに挿入した。これらのベクターを大腸菌Ｋ１２・ＡＧ１細胞にトランスフォームし、１９９２年１月１４日に６１６０４イリノイ州ペオリアのノーザン・リジョナル・リサーチ・ラボラトリーズに寄託し、永久保存カルチャー・コレクションの一部とした。その培養名と受託番号を表１に示す。
【表１】

【００２４】
従来の技術で培養物を得、プラスミドを単離し、次にヒトプロテインＣの誘導体を製造するための真核宿主細胞に直接トランスフェクトすることができる。アデノウイルスＥ１Ａ即時−初期遺伝子産物を発現する宿主細胞にプラスミドをトランスフェクトすることは、ＧＢＭＴ転写制御ユニット中にあるＢＫエンハンサーがＥ１Ａの存在下で最も効率的に発現を強化するよう機能する点で好ましい。このＧＢＭＴ転写制御ユニットは参考文献であるベルグ等の欧州特許出願第９１３０１４５１．０号により詳細に記載されている。当業者はいくつかの宿主細胞が大型ＤＮＡウイルスの即時−初期遺伝子産物を発現するか、発現させることができることを知っている。本発明のヒトプロテインＣ誘導体の発現に最も好適なセルライン（細胞系）は参考文献であるバング等の米国特許第４９９２３７３号に開示されているヒト腎臓２９３セルラインである。このセルラインで発現後、この誘導体を細胞培養上澄液から参考文献であるヤンの米国特許第４９８１９５２号の操作を用いて精製する。
【００２５】
本発明のＤＮＡ配列は化学的に合成することができ、あるいは、制限断片の結合によって、またはこの分野で公知の技術を結合して合成できる。ＤＮＡ合成機を利用して本発明のＤＮＡ化合物を構築することもできる。
【００２６】
本発明の例示であるベクターはアデノウイルス後期プロモーターによってコード配列の転写が刺激されるように配置されたＧＢＭＴ転写ユニットを含む。当業者は多数の真核プロモーター、エンハンサーおよび発現ベクターが公知であり、これらを用いて上記ＤＮＡ配列を発現させることにより本発明のプロテインＣ誘導体を製造できることを知っている。また、当業者は真核発現ベクターはエンハンサー要素がなくても機能できることも知っている。本発明が特徴とするのはこの誘導体発現に用いる特定のエンハンサーまたはプロモーターではなく、新規ＤＮＡ配列とそれら配列から製造される対応する蛋白なのである。
【００２７】
本発明のベクターは特に哺乳類のような多種の真核宿主細胞中にトランスフォームし、そこで発現できる。ＮＲＲＬに寄託したこれらのベクターはいずれもハイグロマイシン耐性遺伝子を含む。しかし、選択マーカーを含まないベクターも容易に構築でき、一時的検定を行うために用いるか、あるいは選択マーカーを含む別のベクターと共にセル・ラインに同時トランスフォームすることもできる。普通、他の宿主生物よりも大腸菌中でプラスミドＤＮＡを製造する方が効率的なので、本発明のベクターには大腸菌中で複製できる配列を含めることもできる。
【００２９】
本発明の例示であるＤＮＡ配列およびプラスミドには多くの修飾および変形が可能である。例えば、遺伝子コードの縮重のため、ポリペプチドをコードする全領域並びに翻訳停止シグナル内で、コードされたポリペプチドコード配列の変更なしにヌクレオチドを置換できる。このような置換可能な配列はヒトプロテインＣの既知のアミノ酸またはＤＮＡ配列から推測でき、従来の合成的または部位特異的突然変異誘発操作に従って構築できる。合成法はイタクラ等、１９７７年、サイエンス、１９８巻、１０５６頁およびクレア等、１９７８年、プロシーディングス・オブ・ナチュラル・アカデミー・オブ・サイエンス・ＵＳＡ、７５巻、５７６５頁の操作に実質的に従って実施できる。故に本発明は特定的に例示したＤＮＡ配列およびプラスミドには決して限定されるものではない。
【００３０】
ヒトプロテインＣのチモーゲン型を活性化ヒトプロテインＣ誘導体に活性化する方法は古く、当該分野で公知である。プロテインＣはトロンビンのみ、トロンビン／トロンボモデュリン複合体、クサリヘビ毒または多数の別法によって活性化できる。ヒトプロテインＣ誘導体の活性はトロンビンによる活性化後、全アミド開裂検定または抗凝固検定によって測定できる。トロンビン活性化とプロテインＣ（アミド開裂および抗凝固）検定は参考文献であるグリンネル等、１９８７年、バイオ／テクノロジー、５巻、１１８７〜１１９２頁の記載に従って実施された。
【００３１】
本発明の組換えヒトプロテインＣ誘導体は深静脈血栓症、肺塞栓症、抹梢動脈血栓症、心臓または抹梢動脈に起因する塞栓症、急性心筋梗塞、血栓性発作、不安定狭心症、抹梢血管手術、臓器移植および播種性血管内凝固などを含む血管内凝固に伴う多数の後天的疾患の予防または処置に有用である。これらのプロテインＣ誘導体は再発性深静脈血栓症を示すヘテロ接合性プロテインＣ欠損症の多数の患者および電撃性紫斑病を示すホモ接合性プロテインＣ欠損症の患者に処置にも効果的に利用できる。活性化されたこのプロテインＣ誘導体の別の医療的適用には低用量のヘパリンで処置中の深静脈血栓症および肺塞栓症の予防がある。
【００３２】
本発明の誘導体とその活性化体は医薬的に有用な組成物製造用の公知方法に従い、本発明のヒトプロテインＣ誘導体または活性化プロテインＣ誘導体を医薬的に受容し得る担体と混合して製剤化できる。たとえばヒト血清アルブミンなどの他のヒト蛋白も含む適当な担体およびその製剤は例えば参考文献であるレミントンズ・ファーマシューテイカル・サイエンスイズ、１６版、１９８０年、マック出版社、オーソル等編に記載されている。これら組成物は有効量のプロテインＣ誘導体またはその活性化体を適当量の担体とともに含み、宿主への有効な投与に適する医薬的に受容し得る組成物に調製される。このプロテインＣ誘導体組成物は有効な形態で確実に血流に到達するよう、非経口投与または他の方法で投与され得る。
【００３３】
【実施例】
本発明の説明のために以下の実施例を記載するがこれは本発明の限定を意図するものではない。
【００３４】
実施例１ヒトプロテインＣ誘導体の製造
本発明の発現ベクターを大腸菌細胞から単離し、２９３細胞に導入し、形質転換体を３７℃で選択し、次に参考文献であるバング等、米国特許第４９９２３７３号の記載に実質的に従って培養してヒトプロテインＣ誘導体を製造する。参考文献であるヤン、米国特許第４９８１９５２号の記載に実質的に従って誘導体を細胞培養上清液から分離精製する。
【００３５】
実施例２抗凝固活性
参考文献であるパーキンソン等、１９９０年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６５巻、１２６０２〜１２６１０頁に記載の可溶性組換えヒトトロンボモデュリンＴＭＤ−７５と錯化した１０ｎＭ−トロンビンで原料を活性化して完全に活性化されたプロテインＣを得た。活性化された分子の抗凝固活性は活性化部分的トロンボプラスチン時間凝固検定法で測定した。結果を表２に示す。
【表２】

【００３６】
実施例３活性化の速度
２０ｍＭ−トリス、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ−ＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ−ＢＳＡおよび３ｍＭ−ＣａＣｌ_２を含む反応混合物中でヒトトロンビン（１０ｎＭ）を用いて活性化速度を測定した。野生型および誘導体の精製プロテインＣは活性化反応中、０．８１から１．６１μＭの濃度であった。様々な時点で活性化反応混合物の適当量を取り、９６穴板に入れ、色素原基質（Ｓ−２３６６）を加えて最終濃度を０．７５ｍＭとし、アミド開裂活性を４０５ｎＭでの吸光単位／分の変化としてＴｈｅｒｍｏＭａｘｋｉｎｅｔｉｃｍｉｃｒｏ−ｔｉｔｅｒｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒ（モレキュラー・デバイセス）で測定することにより活性化速度を決定した。ＯＤ／分の変化を、各蛋白について決定した比活性を用いて、生成する活性化プロテインＣ量に換算し、活性化時間に対してプロットして速度を求めた。生成した活性化プロテインＣ量は全ての実験で全出発原料の１０％未満であった。結果を表３に示す。
【表３】

【００３７】
また、トロンビンおよびトロンボモデュリンを用いる相対活性化速度も前記と同じ検定法で測定した。使用したトロンボモデュリン分子はパーキンソンら（前出）の可溶性ヒトトロンボモデュリンである。結果を表４に示す。
【表４】

【００３８】
実施例４ヒト凝固血漿中での抗凝固活性
野生型ヒトプロテインＣと誘導体ＦＬＩＮ−Ｑ３１３を２０ｎＭの濃度で、ヘレナ標準ＡＰＴＴ試薬と共にヒト血漿に加え、３７℃に５分間インキュベートした。最終濃度が８ｍＭになるようにＣａＣｌ_２を加えて血漿の凝固を開始させ、凝固時間を測定した。並行実験で、活性化プロテインＣ活性を中和できるモノクロナール抗体を対照血漿および野生型プロテインＣチモーゲンまたはＦＬＩＮ−Ｑ３１３チモーゲンを含む血漿に加えた。結果を表５に示す。
【表５】

【００３９】
凝固血漿中に誘発された凝固活性の強さを野生型ヒトプロテインＣの濃度とＦＬＩＮ−Ｑ３１３誘導体の濃度の関数として算出し、データを凝固時間延長値として表した。基礎凝固時間は２７から３３秒であった。結果を表６に示す。
【表６】

【００４０】
実施例５相対半減期の測定
正常なヒト血漿（クエン酸添加）を各１００ｎＭの活性化ヒトプロテインＣ、活性化ＦＬＩＮ−Ｑ３１３またはチモーゲン（非活性化）ＦＬＩＮ−Ｑ３１３と共にインキュベートして血漿中でのヒトプロテインＣの抑制を測定した。最終反応液中、血漿の濃度は９０（ｖ／ｖ）％で、残りは３ｍＭ−ＣａＣｌ_２、１５０ｍＭ−ＮａＣｌ、２０ｍＭ−トリス−ｐＨ７．４および１ｍｇ／ｍｌ−ＢＳＡであった。所定時間に適量を取り、最終濃度１ｍＭのＳ−２３６６を用いるアミド開裂活性または活性化部分的トロンボプラスチン時間によって活性化されたプロテインＣ活性を測定した。血塊で活性化されたＦＬＩＮ−Ｑ３１３の活性レベルは実施例４記載の方法で測定した。活性化プロテインＣと活性化ＦＬＩＮ−Ｑ３１３は共に約２５分後に５０％以上失活したが、チモーゲンＦＬＩＮ−Ｑ３１３は４５分後でも少なくとも８０％の活性を維持していた。

Claims

Ｑ３Ｑ９、ＦＬＩＮ−Ｑ３１３およびＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９からなる群から選ばれる、天然型ヒトプロテインＣ分子のヒトプロテインＣ誘導体であって、
Ｑ３Ｑ９が、天然型ヒトプロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に、天然型ヒトプロテインＣ分子の３２９位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体であり、
ＦＬＩＮ−Ｑ３１３が、天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニン残基に変え、天然型ヒトプロテインＣ分子の１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変え、天然型ヒトプロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体であり、そして
ＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９が、天然型ヒトプロテインＣ分子の１６７位にあるアスパラギン酸残基をフェニルアラニン残基に変え、天然型ヒトプロテインＣ分子の１７２位にあるアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に変え、天然型ヒトプロテインＣ分子の３１３位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変え、天然型ヒトプロテインＣ分子の３２９位にあるアスパラギン残基をグルタミン残基に変えたヒトプロテインＣ誘導体である、天然型ヒトプロテインＣ分子のヒトプロテインＣ誘導体。
請求項１記載のヒトプロテインＣ誘導体をコードする組換えＤＮＡ分子。
活性成分としてＱ３Ｑ９、ＦＬＩＮ−Ｑ３１３およびＦＬＩＮ−Ｑ３Ｑ９からなる群から選ばれる、請求項１記載の天然型ヒトプロテインＣ分子のヒトプロテインＣ誘導体を一以上の医薬的に受容し得る担体、添加剤または希釈剤と共に含む抗血栓製剤。