JP3544246B2 - 血中脂質濃度低減用薬剤組成物 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は血中脂質濃度を低減する作用のある血中脂質濃度低減用薬剤組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血清中の脂質濃度を評価する項目としてはコレステロール、トリグリセリド、リン脂質および遊離脂肪酸が知られており、これらの脂質含量が増加した状態が高脂血症である。血清コレステロール値と虚血性心疾患の発症危険率との間には正の相関が認められ、しかも血清コレステロール値を低下させると虚血性心疾患の発症危険率も低下することが疫学調査より明らかにされている（例えば、水島裕ら、「今日の治療薬（１９９３年版）」、第３６１頁、南江堂）。また高トリグリセリド血症は脂肪肝、膵炎等の発症に結びつくほか、虚血性心疾患の危険因子としての側面も指摘されている。そのため臨床的には、高脂血症のなかでも特に高コレステロール血症および高トリグリセリド血症が大きな問題となっている。
【０００３】
高脂血症が発症した場合、一般的には高脂血症患者に対して摂取カロリー制限等の食事療法を２〜３カ月間行い、血清中の脂質量の推移を観察した後、主に冠状動脈疾患をはじめとする動脈硬化性疾患につながる危険因子を排除するためにクロフィブラート、ニコチン酸コレスチラミン等の抗高脂血症剤が投与され、血清中のコレステロール値やトリグリセリド値を低減化させることが行われている。
【０００４】
一方、エイコサペンタエン酸（ａｌｌ ｃｉｓ −５，８，１１，１４，１７−ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ 、以下ＥＰＡと略す。Ｃ２０：５、Ｃの後の数字は総炭素数：二重結合数を表わし以下同様とする。）やドコサヘキサエン酸（ａｌｌ ｃｉｓ −４，７，１０，１３，１６，１９ −ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下ＤＨＡと略す。Ｃ２２：６）のようなｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸およびこれらを含む食品素材が血清中トリグリセリド値やコレステロール値を低減させる作用があることが動物実験や臨床実験により明らかにされてきた（例えば、Ｊ．Ｄｙｅｒｂｅｒｇ ら、 Ｐｒｏｇ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ． 、第２１巻、第２５５〜２６９頁、１９８２年）。血清中トリグリセリド値の低減化の作用機序はｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含む油脂の摂取により肝臓内でのトリグリセリド合成能が抑制され、その結果として血中へのトリグリセリドの放出が抑制されるためと推測されている（原 健次、油脂、第４６巻、Ｎｏ．４、第９０頁、１９９３年）。また、血清中コレステロール値の低減はｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸が肝臓におけるコレステロール合成能を抑制することによるものと推定されている。（Ｃｈｏｉ，Ｙ．Ｓ．ら、Ｌｉｐｉｄｓ、第２４巻、第４５頁、１９８９年）。
【０００５】
そこで、高脂血症の予防や高脂血症患者の血清脂質濃度を改善する目的で、ＥＰＡやＤＨＡを含む魚を多く含む食品を意図的に摂取したり、ＥＰＡやＤＨＡを含む魚油や魚油濃縮物等を素材とする健康食品等が市販されている。しかしこれらは多量かつ長期間にわたり摂取あるいは投与することが必要であった。
ＥＰＡやＤＨＡを含む魚油としては主にイワシ油、タラ肝油、ニシン油、イカ油、マグロ眼窩油等が用いられるが、これらの油脂の化学的構造はいずれもグリセリドにエステル結合して存在するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の５０モル％以上が、トリグリセリドの２位の構成脂肪酸としてあり、換言すれば、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸は１位および３位よりも２位により多くエステル結合したトリグリセリド構造をとっている。
【０００６】
一方、ＥＰＡやＤＨＡは前記のように血清脂質の低減化効果を有する反面、通常の例えば食用植物油脂を構造する脂肪酸に比べて二重結合を分子内に数多く持つため酸化され易く、過剰に摂取すると生体に有害な作用をもたらすことも知られている。生体内で脂質の過酸化反応が進行すると生体膜に障害を生じ、虚血性疾患、動脈硬化、白内障、癌、アルツハイマー病、膠原病、アミロイドーシス等の病変の原因となることが推測されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような現状に鑑みなされたものであり、その目的とするところは、ヒトをはじめ動物に対して、副作用がなく、従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源よりも少量の摂取で、血中脂質濃度を減少させ、血中脂質改善を容易ならしめる作用のある血中脂質濃度低減用薬剤組成物を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を行った結果、グリセリド構造の１位および／または３位にｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多くもつ油脂は、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の供給源として用いられている、２位にｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多くもつ魚油に比べて血清コレステロール値やトリグリセリド値を減少させる効果が顕著に高く、上記の目的が達成されることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成されたものである。
【０００９】
すなわち本発明の要旨は、グリセリドの構成脂肪酸としてｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含み、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の２０モル％未満がグリセリドの２位に結合したトリグリセリドからなる油脂を全油脂中５重量％以上含有していることを特徴とする血中脂質濃度低減用薬剤組成物である。
【００１０】
本発明で特徴とするトリグリセリドは、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含有する脂肪酸とグリセリンとから構成されるトリグリセリドにおいて、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量を１００モル％としたとき、その４０モル％未満とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の任意の脂肪酸とがトリグリセリドの２位にエステル結合しており、かつｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の６０モル％以上とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の任意の脂肪酸とがトリグリセリドの１位および３位においてランダムにまたは非ランダムに分布してエステル結合しているものである。
【００１１】
ここにｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸とは炭素数が１８以上で二重結合を３個以上を有するｎ−３系直鎖状不飽和脂肪酸をいい、具体的にはα−リノレン酸（Ｃ１８：３）、オクタデカテトラエン酸（Ｃ１８：４、６，９，１２，１５ −ｏｃｔａｄｅｃａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ ）、アラキドン酸（Ｃ２０：４）、ＥＰＡ（Ｃ２０：５）、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５、７，１０，１３，１６，１９ −ｄｏｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ）、ＤＨＡ（Ｃ２２：６）等を例示することができる。本発明では、これらのうちα−リノレン酸、アラキドン酸、ＥＰＡ、ドコサペンタエン酸およびＤＨＡからなる群から選ばれる１種もしくは２種以上の任意の割合の混合脂肪酸が好ましく、さらにはＥＰＡおよび／またはＤＨＡがより好ましい。
【００１２】
またｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の脂肪酸としては、短鎖、中鎖および長鎖各脂肪酸、また飽和および不飽和各脂肪酸のいかんを問わず使用できるが、このうち直鎖状であって、炭素数が６以上の中鎖ないし長鎖の、飽和または不飽和脂肪酸に属するものが望ましい。かかる脂肪酸としてカプロン酸（Ｃ６：０ ）、カプリル酸（Ｃ８：０ ）、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、パルミトオレイン酸（Ｃ１６：１）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、エライジン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、α’−リノレン酸（Ｃ１８：３、５，８，１１−オクタデカトリエン酸）、γ−リノレン酸（Ｃ１８：３、６，９，１２−オクタデカトリエン酸）、エレオステアリン酸（Ｃ１８：３、９，１１，１３ −オクタデカトリエン酸）、アラキジン酸（Ｃ２０：０）、ガドレイン酸（Ｃ２０：１）、ベヘン酸（Ｃ２２：０）、エルカ酸（Ｃ２２：１）、ブラシジン酸（Ｃ２２：１）等をあげることができる。これらの脂肪酸は単独で用いてよく、または任意の割合の混合脂肪酸として使用してもさしつえない。なお、これらのうち、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等が好ましい。
【００１３】
前記したｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸およびこれ以外の脂肪酸で構成される本発明のトリグリセリドを製造するには、化学合成法、エステル交換法、あるいは天然物からの抽出法等の技術を利用すればよい。
化学合成法としては、例えば所望量および組成の脂肪酸、脂肪酸無水物あるいは脂肪酸ハロゲン化物（脂肪酸クロライド）とグリセリンとを、酸性物質（塩酸、硫酸、パラトルエンスルホン酸等）、アルカリ性物質（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等）、金属（亜鉛、スズ、チタン、ニッケル等）、金属酸化物（酸化亜鉛、アルミナ、酸化第一鉄等）、金属ハロゲン化物（塩化アルミニウム、塩化スズ等）等のエステル化触媒の存在下または非存在下で、窒素ガス気流中にて１００〜２５０℃に加熱し、生成する水を除きながら１〜２５時間エステル化反応せしめるのがよい。
【００１４】
エステル化生成物は必要に応じてアルカリ脱酸処理、活性炭、活性白土、アルミナ、シリカゲル、イオン交換樹脂等を用いる吸着・分画処理、メタノールやエタノール等の親水性有機溶剤および／またはｎ−ヘキサンやキシレン等の親油性有機溶剤を用いる溶剤分別処理を施して遊離脂肪酸、モノグリセリド、ジグリセリド、着色物質、有臭成分等の不純物を除去し、さらにはこれらの処理を適宜に組み合わせ、トリグリセリドの２位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基の含有量が、トリグリセリドの１位、２位および３位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基の総含有量の４０モル％未満となるようにトリグリセリド成分を分画ないしは濃縮してもよい。なお本発明のトリグリセリドは、例えば加熱かつ減圧下に水蒸気を吹き込み脱臭処理しておくことが望ましい。
【００１５】
エステル交換法を利用して本発明のトリグリセリドを得るには、例えば原料としてｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多量に含有する脂肪酸のトリグリセリド（成分ａ−１）とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を実質的に含まないか少量含有の脂肪酸（成分ａ−２）、成分ａ−２の低級アルコールエステル（メチルエステル、エチルエステル等。以下同様。）または成分ａ−２のトリグリセリドとを所望割合で混合し、あるいはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を実質的に含まないか少量含有の脂肪酸のトリグリセリド（成分ｂ−１）とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多量に含有する脂肪酸（成分ｂ−２）または成分ｂ−２の低級アルコールエステルとを所要量混合し、触媒として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性物質、ナトリウムメチラート、ナトリウムエチラート、リチウムブチラート等の金属アルコラート（金属アルコキシド）、塩基性アニオン交換樹脂、酸性カチオン交換樹脂等のイオン交換樹脂、あるいはリパーゼを用いてエステル交換反応を行わしめるのが簡便である。なお触媒として特定のリパーゼを用いてエステル交換すると、後述するように、トリグリセリドの１位および３位に選択的に新たな脂肪酸基を導入することができ、本発明のトリグリセリドを製造する方法として望ましい。
【００１６】
前記エステル交換の原料は、成分ａ−１としてアマニ油、エゴマ油、シソ油等の植物油、イワシ油、タラ肝油、ニシン油、イカ油、マグロ眼窩油等の魚油、クジラ、アザラシ、オットセイ等の海産哺乳動物を起源として得られる圧搾もしくは抽出油、該動物の乳脂、クロレラ、スピルリナ、ドナリエラ等またナンノクロロプシス属（例えばＮａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ 、 ＵＴＥＸ ＬＢ ２１６４ 等）、トラストキトリウム属（例えばＴｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ａｕｒｅｕｍ 、 ＡＴＣＣ ２８２１１ 、同 ３４３０４ 等）、クリプテコディニウム属（例えばＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ、 ＡＴＣＣ ３００２１ 、同 ３０３３４ 、同 ３０３３６ 、同 ５００５２ 等）、イソクリシス属（例えばＩｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ、 ＣＣＡＰ９２７／１ 、 ＵＴＥＸ ＬＢ ９８７ 等）等に属する微細藻類から抽出された油脂、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属等の微生物（ Ｍ．ｉｓａｂｅｌｌｉｎａ 、 ＩＦＯ ６３３６ 、同 ６７３９ 、同 ７８７３ 、同 ７８８４ 、 ＡＴＣＣ ４４８５３ 等）に由来する油脂、またｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸またはこれを任意の割合で含む前記各種脂肪酸（段落番号００１２の項参照）との混合脂肪酸のトリグリセリドを使用できる。ここで ＡＴＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ ＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （米国）、 ＣＣＡＰ：Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｇａｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｚｏａ （英国）、 ＵＴＥＸ：Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｇａｅ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ （米国）、 ＩＦＯ： 大阪発酵研究所の各略称である。成分ａ−２としては段落番号００１２の項に記載の各種脂肪酸またはその誘導体を用いることができる。
【００１７】
また成分ｂ−１として動植物、微生物、微細藻類等から得られるトリグリセリドがあり、大豆油、菜種油、綿実油、コーン油、パーム油、ヤシ油、サフラワー油、ハイオレイックサフラワー油、ヒマワリ油、ハイオレイックヒマワリ油、オリーブ油、落花生油、カカオ脂、チャイニーズ タロウ、サル脂、シア脂、牛脂、ラード、これらの水素添加油脂、分別油脂、前記成分ａ−２のトリグリセリド、中鎖脂肪酸トリグリセリド等を例示でき、成分ｂ−２としては前記成分ａ−１の加水分解処理によって得られる脂肪酸がある。
【００１８】
エステル交換反応は、一例として前記原料をモル比率で成分ａ−１：成分ａ−２＝１：０．１〜５、成分ｂ−１：成分ｂ−２＝１：２〜１０となるように混合し、アルカリまたは金属アルコラートを触媒とする場合には実質的に無水状態として８０〜１２０℃で０．５〜３時間エステル交換反応せしめる。またイオン交換樹脂を用いる場合も同様に無水状態とするが、室温〜４０℃程度にてカラム方式で原料を循環接触させるのがよい。リパーゼを触媒として用いる場合には、原料中の水分量を１重量％以下にし、市販のリパーゼ粉末あるいはこれを公知の担体例えばセライト、ケイソウ土、活性炭、多孔質ガラス、イオン交換樹脂、キトサン、高分子ゲル、セルロース粉末等に固定化した固定化リパーゼを加え、２０〜８０℃で０．５〜２０時間エステル交換反応せしめる。
【００１９】
リパーゼは次に述べる微生物を起源とするものあるいは動物臓器由来のものを使用できる。すなわちアスペルギルス属（例えばＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ）、ムコール属（例えばＭｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、キャンディダ属（例えばＣａｎｄｉｄａ ｃｙｒｉｎｄｒａｃｅａ ）、シュードモナス属（例えばＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｒａｇｉ ）、アルカリゲネス属（例えば、特公昭５８−３６９５３号公報に記載のＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． ）、リゾプス属（例えばＲｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）、ジオトリクム属（例えばＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ）等に属する微生物起源のリパーゼおよびブタ、ウシ等の膵臓リパーゼである。このうちアスペルギルス属、ムコール属、アルカリゲネス属およびリゾプス属の微生物を起源とするリパーゼ、ブタ膵臓リパーゼはグリセリドの１位および３位に特異的に作用するため、本発明のトリグリセリドを製造するに際しては好適である。
【００２０】
前述した各種エステル交換方法によって得られるエステル交換反応物は、選択する原料の種類によってはエステル交換反応物そのものを本発明で用いるトリグリセリドとすることができるが、前記化学合成法によって得られるエステル化生成物の場合と同様に、必要に応じてアルカリ脱酸処理、吸着・分画処理、溶剤分別処理あるいは無溶剤分別（ウィンタリング）処理等を適宜に組み合わせてエステル交換反応物に施し、不純物を除去したりグリセリド成分を分画あるいは濃縮して本発明で用いるトリグリセリドとすることもできる。なお該トリグリセリドは脱臭処理しておくことが望ましい。
【００２１】
本発明に係るトリグリセリドは天然物から油脂分を抽出する方法によっても得ることができる。すなわち前記エステル交換の原料（成分ａ−１）として記載したもののうち、クジラ、アザラシ（ｈａｒｂｏｕｒ ｓｅａｌ、ｈａｒｐ ｓｅａｌ 等）、オットセイ等の海産哺乳動物の体組織、該動物から分泌される乳汁、クロレラ、スピルリナ、ドナリエラ等の微細藻類の細胞またはこれらの培養細胞、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ）属、トラストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、クリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ）属およびイソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）属等に属する微細藻類例えばナンノクロロプシス オキュラータ（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ ）、トラストキトリウム アウレウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ａｕｒｅｕｍ）、クリプテコディニウム コーニー（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ）、イソクリシスガルバナ（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ）等の細胞またはこれらの培養細胞を原材料とする。なお微生物を起源とする場合にはこれから得られるトリグリセリドが本発明のグリセリド構造を満足するものであればさしつかえない。
【００２２】
これらを圧搾処理もしくはｎ−ヘキサン、クロロホルム、ベンゼン、ジエチルエーテル、メタノール等の有機溶剤を用いて抽出処理または分別処理して油分を得、これに脱ガム、アルカリ脱酸、脱色、脱臭等の処理を施して遊離脂肪酸、リン脂質、糖脂質、不ケン化物、着色物質、有臭成分等の不純物を除き、グリセリド画分を得ることができる。このグリセリド画分は本発明で用いるトリグリセリドとして利用できるが、該グリセリド画分をさらに無溶剤低温分別、溶剤分別あるいはシリカゲル・カラム等により分画して、トリグリセリドの２位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基がより一層少ないトリグリセリドを製造することも可能である。
【００２３】
以上に述べたような化学合成法、エステル交換法、あるいは天然物からの抽出法等によって製造される本発明のトリグリセリドは、その構成脂肪酸としてのｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の４０モル％未満がトリグリセリドの２位にエステル結合するものであるが、より好ましくは２０モル％未満である。４０モル％以上になると本発明の所望の効果は小さくなる。本発明のトリグリセリドはそのままで油脂として利用でき、また通常の食用油脂例えば成分ｂ−１として記載したような動植物系油脂と混合して油脂としても用いることができる。このとき本発明のトリグリセリドの含有量は油脂全体の５〜１００重量％が望ましく、さらには１０〜１００重量％がより一層好ましい。最も好ましくは２０〜１００重量％である。５重量％未満では本発明の所望の効果が小さい。
【００２４】
本発明に係る油脂は例えば通常の食用動植物系油脂、ビタミンＥ、β−カロチン等とともにソフトカプセルやマイクロカプセル等のカプセル状態にして摂取することができ、また通常の食用油脂と同様に食品素材として各種加工食品の原料、料理の材料に用い、摂食することができる。または本発明に係る油脂は高脂血症の予防および治療のために利用されることが期待できる。
【００２５】
【実施例】
実施例１
トリオレイン１ｋｇと、魚油（タマ生化学（株）製、商品名：ＥＰＡ−１８）加水分解混合脂肪酸を低温分別した魚油加水分解脂肪酸濃縮物（総脂肪酸中のＣ２０：５：３７．４モル％、Ｃ２２：５：５．４モル％、Ｃ２２：６：２５．２モル％。ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸として７２．５モル％。ＢＨＴを０．０１重量％添加。）とをモル比で１：５にて混合し、水分含量を０．２重量％に調節した後、リポザイムＩＭ２０（商品名。ノボ ノルディスク社製、ムコール ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ） 由来のリパーゼ）を充填したガラス製カラム（１０ｃｍφ×６０ｃｍ） に４０℃にて通し選択的エステル交換反応を行わせた。
【００２６】
水蒸気蒸留および水洗処理にてエステル交換反応物から遊離脂肪酸を除去した後、ｎ−ヘキサンで浸潤させたシリカゲル（和光製薬（株）製、商品名：ワコーゲルＣ１００）を充填したステンレス製カラムに供し、ｎ−ヘキサンで溶出させジグリセリドを除き、本発明のトリグリセリド７２０ｇを得た。本トリグリセリドを構成する全脂肪酸組成、グリセリドの１位および３位、２位の各脂肪酸組成をＧＬＣ分析によって求めた。この結果を表１に示す。本トリグリセリドを構成するＣ２０：５の９０モル％。Ｃ２２：６の９５モル％以上、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の９３．５モル％がトリグリセリドの１位および３位に分布していた。すなわち本トリグリセリドの２位にはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の６．５モル％が分布していた。本トリグリセリドを以下の動物実験の試験油とした。
【００２７】
本トリグリセリドの一部にナトリウムメトキシド０．１重量％を加え、減圧下１００℃にてランダムエステル交換反応を行わせた後、セライトを用いて濾過し、本トリグリセリドのランダムエステル交換物を得た。この全脂肪酸組成、１位および３位、２位の各脂肪酸組成を前記同様に求めた（表１参照）。このトリグリセリドの２位にはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の５０．６モル％が分布していた。このランダムエステル交換物を動物実験の対照油とした。
【００２８】
【表１】
※総炭素数：二重結合数で表示。（ｎ−３）はｎ−３系脂肪酸を示す。
【００２９】
４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、試験油および対照油を用い、各５重量％配合した飼料（表２参照）を用いて飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製し給餌した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した。この結果を表３に示す。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意差は認められなかった。
この実験結果から、本発明に係るトリグリセリド（試験油）はラットに対して副作用がなく、試験油を添加した区では、血中トリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値、肝臓中トリグリセリド値が顕著に低減することが明らかになった。
【００３０】
【表２】
【００３１】
【表３】
【００３２】
実施例２
試験油脂（本発明のトリグリセリドを含む油脂）および対照油脂を次のように調製した。すなわち試験油脂は ｈａｒｐ ｓｅａｌ（アザラシ）油脂をドライアイス／アセトン冷媒で−８０℃、１時間冷却し、析出した結晶部を濾紙で濾別して調製した。対照油脂は脂肪酸組成の異なる２種類の魚油（タラ肝油と雑魚油との混合油、マグロ眼窩油）をドライアイス／アセトン冷媒で同様に冷却、分別した濃縮物をブレンドし、その総脂肪酸組成を試験油脂のそれとほぼ近似するものとした。表４にこれらの脂肪酸組成を示す。
【００３３】
【表４】
※：表１の注釈と同じ。
【００３４】
４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、前記の試験油脂および対照油脂を用い、それぞれ２０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂２０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油５重量部およびハイリノールサフラワー油２５重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表５参照。）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪５重量％を１０重量％とし、コーンスターチ４１．７重量％を３６．７重量％とする以外は実施例１と同じ。）で、飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製し給餌した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した（表６参照）。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意な差異は認められなかった。この実験結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値を効果的に低減することが認められた。
【００３５】
【表５】
【００３６】
【表６】
【００３７】
実施例３
実施例２で使用した試験油脂および対照油脂の配合割合を変えた油脂を飼料に添加して実施例２と同様にラット飼育実験を行った。すなわち４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、実施例２に記載の試験油脂または対照油脂をそれぞれ１０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂１０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油１０重量部およびハイリノールサフラワー油３０重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表７参照。）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪分を除き実施例２と同じ。）で、飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した（表８参照）。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意な差異は認められなかった。この実験結果および実施例２の結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、対照油脂に比べて少量の試験油脂を混合した油脂の場合をも含めて、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）値を顕著に低減する効果をもつことが認められた。
【００３８】
【表７】
【００３９】
【表８】
【００４０】
実施例４
微細藻類クリプテコディニウム コーニー（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ、ＡＴＣＣ ３０３３６）を表９に示す培地３０リットルに植つけ、３０℃にて、ジャーファーメンターで１００時間通気培養し、培養液から培養藻体を遠心分離して集め、さらにこれを凍結乾燥した（収量６２５ｇ）。この乾燥藻体をクロロホルム：メタノール＝１：１（重量比）混合溶媒中でヒスコトロン（商品名。日音医理科器械製作所製）により細胞破砕して抽出し、油分５２０ｇを得た。ｎ−ヘキサン中に分散させたシリカゲル（和光純薬（株）製、商品名： ワコーゲルＣ１００）を充填したステンレス製カラムに前記油分を供し、ジエチルエーテル：ｎ−ヘキサン＝１０：９０（容量比）にて溶出させ、本発明に係るトリグリセリド２５０ｇを得た。本トリグリセリド（これを試験油脂とした）の脂肪酸組成を実施例１と同様にして求めた（表１０参照）。
【００４１】
【表９】
【００４２】
【表１０】
【００４３】
かくして得られた微細藻類由来のトリグリセリド（試験油脂）および実施例２に記載の対照油脂を用い、それぞれ１０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂１０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油１０重量部およびハイリノールサフラワー油３０重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表１１参照）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪分を除き実施例３と同じ。）を調製し、実施例３と同様の飼育試験を行った。各試験区ラットの血中および肝臓中脂質含量の分析結果を表１２に示す。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意差は認められなかった。この実験結果および実施例２の結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、対照油脂に比べて少量の試験油脂を混合した油脂の場合をも含めて、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値を顕著に低減化する効果をもつことが認められた。
【００４４】
【表１１】
【００４５】
【表１２】
※：表３と同じ。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、動物に対して、副作用がなく、従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源に比べて血中脂質濃度を低減化する効果が大きく、魚油等の従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源よりも少量の摂取で、血中および肝臓中のトリグリセリド値および／またはコレステロール値を減少させ、血中脂質改善を容易ならしめる作用のある油脂を提供できる。
【産業上の利用分野】
本発明は血中脂質濃度を低減する作用のある血中脂質濃度低減用薬剤組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血清中の脂質濃度を評価する項目としてはコレステロール、トリグリセリド、リン脂質および遊離脂肪酸が知られており、これらの脂質含量が増加した状態が高脂血症である。血清コレステロール値と虚血性心疾患の発症危険率との間には正の相関が認められ、しかも血清コレステロール値を低下させると虚血性心疾患の発症危険率も低下することが疫学調査より明らかにされている（例えば、水島裕ら、「今日の治療薬（１９９３年版）」、第３６１頁、南江堂）。また高トリグリセリド血症は脂肪肝、膵炎等の発症に結びつくほか、虚血性心疾患の危険因子としての側面も指摘されている。そのため臨床的には、高脂血症のなかでも特に高コレステロール血症および高トリグリセリド血症が大きな問題となっている。
【０００３】
高脂血症が発症した場合、一般的には高脂血症患者に対して摂取カロリー制限等の食事療法を２〜３カ月間行い、血清中の脂質量の推移を観察した後、主に冠状動脈疾患をはじめとする動脈硬化性疾患につながる危険因子を排除するためにクロフィブラート、ニコチン酸コレスチラミン等の抗高脂血症剤が投与され、血清中のコレステロール値やトリグリセリド値を低減化させることが行われている。
【０００４】
一方、エイコサペンタエン酸（ａｌｌ ｃｉｓ −５，８，１１，１４，１７−ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ 、以下ＥＰＡと略す。Ｃ２０：５、Ｃの後の数字は総炭素数：二重結合数を表わし以下同様とする。）やドコサヘキサエン酸（ａｌｌ ｃｉｓ −４，７，１０，１３，１６，１９ −ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ、以下ＤＨＡと略す。Ｃ２２：６）のようなｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸およびこれらを含む食品素材が血清中トリグリセリド値やコレステロール値を低減させる作用があることが動物実験や臨床実験により明らかにされてきた（例えば、Ｊ．Ｄｙｅｒｂｅｒｇ ら、 Ｐｒｏｇ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ． 、第２１巻、第２５５〜２６９頁、１９８２年）。血清中トリグリセリド値の低減化の作用機序はｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含む油脂の摂取により肝臓内でのトリグリセリド合成能が抑制され、その結果として血中へのトリグリセリドの放出が抑制されるためと推測されている（原 健次、油脂、第４６巻、Ｎｏ．４、第９０頁、１９９３年）。また、血清中コレステロール値の低減はｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸が肝臓におけるコレステロール合成能を抑制することによるものと推定されている。（Ｃｈｏｉ，Ｙ．Ｓ．ら、Ｌｉｐｉｄｓ、第２４巻、第４５頁、１９８９年）。
【０００５】
そこで、高脂血症の予防や高脂血症患者の血清脂質濃度を改善する目的で、ＥＰＡやＤＨＡを含む魚を多く含む食品を意図的に摂取したり、ＥＰＡやＤＨＡを含む魚油や魚油濃縮物等を素材とする健康食品等が市販されている。しかしこれらは多量かつ長期間にわたり摂取あるいは投与することが必要であった。
ＥＰＡやＤＨＡを含む魚油としては主にイワシ油、タラ肝油、ニシン油、イカ油、マグロ眼窩油等が用いられるが、これらの油脂の化学的構造はいずれもグリセリドにエステル結合して存在するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の５０モル％以上が、トリグリセリドの２位の構成脂肪酸としてあり、換言すれば、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸は１位および３位よりも２位により多くエステル結合したトリグリセリド構造をとっている。
【０００６】
一方、ＥＰＡやＤＨＡは前記のように血清脂質の低減化効果を有する反面、通常の例えば食用植物油脂を構造する脂肪酸に比べて二重結合を分子内に数多く持つため酸化され易く、過剰に摂取すると生体に有害な作用をもたらすことも知られている。生体内で脂質の過酸化反応が進行すると生体膜に障害を生じ、虚血性疾患、動脈硬化、白内障、癌、アルツハイマー病、膠原病、アミロイドーシス等の病変の原因となることが推測されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような現状に鑑みなされたものであり、その目的とするところは、ヒトをはじめ動物に対して、副作用がなく、従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源よりも少量の摂取で、血中脂質濃度を減少させ、血中脂質改善を容易ならしめる作用のある血中脂質濃度低減用薬剤組成物を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を行った結果、グリセリド構造の１位および／または３位にｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多くもつ油脂は、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の供給源として用いられている、２位にｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多くもつ魚油に比べて血清コレステロール値やトリグリセリド値を減少させる効果が顕著に高く、上記の目的が達成されることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成されたものである。
【０００９】
すなわち本発明の要旨は、グリセリドの構成脂肪酸としてｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含み、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の２０モル％未満がグリセリドの２位に結合したトリグリセリドからなる油脂を全油脂中５重量％以上含有していることを特徴とする血中脂質濃度低減用薬剤組成物である。
【００１０】
本発明で特徴とするトリグリセリドは、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含有する脂肪酸とグリセリンとから構成されるトリグリセリドにおいて、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量を１００モル％としたとき、その４０モル％未満とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の任意の脂肪酸とがトリグリセリドの２位にエステル結合しており、かつｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の６０モル％以上とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の任意の脂肪酸とがトリグリセリドの１位および３位においてランダムにまたは非ランダムに分布してエステル結合しているものである。
【００１１】
ここにｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸とは炭素数が１８以上で二重結合を３個以上を有するｎ−３系直鎖状不飽和脂肪酸をいい、具体的にはα−リノレン酸（Ｃ１８：３）、オクタデカテトラエン酸（Ｃ１８：４、６，９，１２，１５ −ｏｃｔａｄｅｃａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ ）、アラキドン酸（Ｃ２０：４）、ＥＰＡ（Ｃ２０：５）、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５、７，１０，１３，１６，１９ −ｄｏｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ）、ＤＨＡ（Ｃ２２：６）等を例示することができる。本発明では、これらのうちα−リノレン酸、アラキドン酸、ＥＰＡ、ドコサペンタエン酸およびＤＨＡからなる群から選ばれる１種もしくは２種以上の任意の割合の混合脂肪酸が好ましく、さらにはＥＰＡおよび／またはＤＨＡがより好ましい。
【００１２】
またｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸以外の脂肪酸としては、短鎖、中鎖および長鎖各脂肪酸、また飽和および不飽和各脂肪酸のいかんを問わず使用できるが、このうち直鎖状であって、炭素数が６以上の中鎖ないし長鎖の、飽和または不飽和脂肪酸に属するものが望ましい。かかる脂肪酸としてカプロン酸（Ｃ６：０ ）、カプリル酸（Ｃ８：０ ）、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、パルミトオレイン酸（Ｃ１６：１）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、エライジン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、α’−リノレン酸（Ｃ１８：３、５，８，１１−オクタデカトリエン酸）、γ−リノレン酸（Ｃ１８：３、６，９，１２−オクタデカトリエン酸）、エレオステアリン酸（Ｃ１８：３、９，１１，１３ −オクタデカトリエン酸）、アラキジン酸（Ｃ２０：０）、ガドレイン酸（Ｃ２０：１）、ベヘン酸（Ｃ２２：０）、エルカ酸（Ｃ２２：１）、ブラシジン酸（Ｃ２２：１）等をあげることができる。これらの脂肪酸は単独で用いてよく、または任意の割合の混合脂肪酸として使用してもさしつえない。なお、これらのうち、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等が好ましい。
【００１３】
前記したｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸およびこれ以外の脂肪酸で構成される本発明のトリグリセリドを製造するには、化学合成法、エステル交換法、あるいは天然物からの抽出法等の技術を利用すればよい。
化学合成法としては、例えば所望量および組成の脂肪酸、脂肪酸無水物あるいは脂肪酸ハロゲン化物（脂肪酸クロライド）とグリセリンとを、酸性物質（塩酸、硫酸、パラトルエンスルホン酸等）、アルカリ性物質（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等）、金属（亜鉛、スズ、チタン、ニッケル等）、金属酸化物（酸化亜鉛、アルミナ、酸化第一鉄等）、金属ハロゲン化物（塩化アルミニウム、塩化スズ等）等のエステル化触媒の存在下または非存在下で、窒素ガス気流中にて１００〜２５０℃に加熱し、生成する水を除きながら１〜２５時間エステル化反応せしめるのがよい。
【００１４】
エステル化生成物は必要に応じてアルカリ脱酸処理、活性炭、活性白土、アルミナ、シリカゲル、イオン交換樹脂等を用いる吸着・分画処理、メタノールやエタノール等の親水性有機溶剤および／またはｎ−ヘキサンやキシレン等の親油性有機溶剤を用いる溶剤分別処理を施して遊離脂肪酸、モノグリセリド、ジグリセリド、着色物質、有臭成分等の不純物を除去し、さらにはこれらの処理を適宜に組み合わせ、トリグリセリドの２位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基の含有量が、トリグリセリドの１位、２位および３位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基の総含有量の４０モル％未満となるようにトリグリセリド成分を分画ないしは濃縮してもよい。なお本発明のトリグリセリドは、例えば加熱かつ減圧下に水蒸気を吹き込み脱臭処理しておくことが望ましい。
【００１５】
エステル交換法を利用して本発明のトリグリセリドを得るには、例えば原料としてｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多量に含有する脂肪酸のトリグリセリド（成分ａ−１）とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を実質的に含まないか少量含有の脂肪酸（成分ａ−２）、成分ａ−２の低級アルコールエステル（メチルエステル、エチルエステル等。以下同様。）または成分ａ−２のトリグリセリドとを所望割合で混合し、あるいはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を実質的に含まないか少量含有の脂肪酸のトリグリセリド（成分ｂ−１）とｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を多量に含有する脂肪酸（成分ｂ−２）または成分ｂ−２の低級アルコールエステルとを所要量混合し、触媒として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性物質、ナトリウムメチラート、ナトリウムエチラート、リチウムブチラート等の金属アルコラート（金属アルコキシド）、塩基性アニオン交換樹脂、酸性カチオン交換樹脂等のイオン交換樹脂、あるいはリパーゼを用いてエステル交換反応を行わしめるのが簡便である。なお触媒として特定のリパーゼを用いてエステル交換すると、後述するように、トリグリセリドの１位および３位に選択的に新たな脂肪酸基を導入することができ、本発明のトリグリセリドを製造する方法として望ましい。
【００１６】
前記エステル交換の原料は、成分ａ−１としてアマニ油、エゴマ油、シソ油等の植物油、イワシ油、タラ肝油、ニシン油、イカ油、マグロ眼窩油等の魚油、クジラ、アザラシ、オットセイ等の海産哺乳動物を起源として得られる圧搾もしくは抽出油、該動物の乳脂、クロレラ、スピルリナ、ドナリエラ等またナンノクロロプシス属（例えばＮａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ 、 ＵＴＥＸ ＬＢ ２１６４ 等）、トラストキトリウム属（例えばＴｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ａｕｒｅｕｍ 、 ＡＴＣＣ ２８２１１ 、同 ３４３０４ 等）、クリプテコディニウム属（例えばＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ、 ＡＴＣＣ ３００２１ 、同 ３０３３４ 、同 ３０３３６ 、同 ５００５２ 等）、イソクリシス属（例えばＩｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ、 ＣＣＡＰ９２７／１ 、 ＵＴＥＸ ＬＢ ９８７ 等）等に属する微細藻類から抽出された油脂、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属等の微生物（ Ｍ．ｉｓａｂｅｌｌｉｎａ 、 ＩＦＯ ６３３６ 、同 ６７３９ 、同 ７８７３ 、同 ７８８４ 、 ＡＴＣＣ ４４８５３ 等）に由来する油脂、またｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸またはこれを任意の割合で含む前記各種脂肪酸（段落番号００１２の項参照）との混合脂肪酸のトリグリセリドを使用できる。ここで ＡＴＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ ＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （米国）、 ＣＣＡＰ：Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｇａｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｚｏａ （英国）、 ＵＴＥＸ：Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｇａｅ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ （米国）、 ＩＦＯ： 大阪発酵研究所の各略称である。成分ａ−２としては段落番号００１２の項に記載の各種脂肪酸またはその誘導体を用いることができる。
【００１７】
また成分ｂ−１として動植物、微生物、微細藻類等から得られるトリグリセリドがあり、大豆油、菜種油、綿実油、コーン油、パーム油、ヤシ油、サフラワー油、ハイオレイックサフラワー油、ヒマワリ油、ハイオレイックヒマワリ油、オリーブ油、落花生油、カカオ脂、チャイニーズ タロウ、サル脂、シア脂、牛脂、ラード、これらの水素添加油脂、分別油脂、前記成分ａ−２のトリグリセリド、中鎖脂肪酸トリグリセリド等を例示でき、成分ｂ−２としては前記成分ａ−１の加水分解処理によって得られる脂肪酸がある。
【００１８】
エステル交換反応は、一例として前記原料をモル比率で成分ａ−１：成分ａ−２＝１：０．１〜５、成分ｂ−１：成分ｂ−２＝１：２〜１０となるように混合し、アルカリまたは金属アルコラートを触媒とする場合には実質的に無水状態として８０〜１２０℃で０．５〜３時間エステル交換反応せしめる。またイオン交換樹脂を用いる場合も同様に無水状態とするが、室温〜４０℃程度にてカラム方式で原料を循環接触させるのがよい。リパーゼを触媒として用いる場合には、原料中の水分量を１重量％以下にし、市販のリパーゼ粉末あるいはこれを公知の担体例えばセライト、ケイソウ土、活性炭、多孔質ガラス、イオン交換樹脂、キトサン、高分子ゲル、セルロース粉末等に固定化した固定化リパーゼを加え、２０〜８０℃で０．５〜２０時間エステル交換反応せしめる。
【００１９】
リパーゼは次に述べる微生物を起源とするものあるいは動物臓器由来のものを使用できる。すなわちアスペルギルス属（例えばＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ）、ムコール属（例えばＭｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）、キャンディダ属（例えばＣａｎｄｉｄａ ｃｙｒｉｎｄｒａｃｅａ ）、シュードモナス属（例えばＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｒａｇｉ ）、アルカリゲネス属（例えば、特公昭５８−３６９５３号公報に記載のＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． ）、リゾプス属（例えばＲｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ）、ジオトリクム属（例えばＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ）等に属する微生物起源のリパーゼおよびブタ、ウシ等の膵臓リパーゼである。このうちアスペルギルス属、ムコール属、アルカリゲネス属およびリゾプス属の微生物を起源とするリパーゼ、ブタ膵臓リパーゼはグリセリドの１位および３位に特異的に作用するため、本発明のトリグリセリドを製造するに際しては好適である。
【００２０】
前述した各種エステル交換方法によって得られるエステル交換反応物は、選択する原料の種類によってはエステル交換反応物そのものを本発明で用いるトリグリセリドとすることができるが、前記化学合成法によって得られるエステル化生成物の場合と同様に、必要に応じてアルカリ脱酸処理、吸着・分画処理、溶剤分別処理あるいは無溶剤分別（ウィンタリング）処理等を適宜に組み合わせてエステル交換反応物に施し、不純物を除去したりグリセリド成分を分画あるいは濃縮して本発明で用いるトリグリセリドとすることもできる。なお該トリグリセリドは脱臭処理しておくことが望ましい。
【００２１】
本発明に係るトリグリセリドは天然物から油脂分を抽出する方法によっても得ることができる。すなわち前記エステル交換の原料（成分ａ−１）として記載したもののうち、クジラ、アザラシ（ｈａｒｂｏｕｒ ｓｅａｌ、ｈａｒｐ ｓｅａｌ 等）、オットセイ等の海産哺乳動物の体組織、該動物から分泌される乳汁、クロレラ、スピルリナ、ドナリエラ等の微細藻類の細胞またはこれらの培養細胞、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ）属、トラストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、クリプテコディニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ）属およびイソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）属等に属する微細藻類例えばナンノクロロプシス オキュラータ（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ ）、トラストキトリウム アウレウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ａｕｒｅｕｍ）、クリプテコディニウム コーニー（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ）、イソクリシスガルバナ（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ ｇａｌｂａｎａ）等の細胞またはこれらの培養細胞を原材料とする。なお微生物を起源とする場合にはこれから得られるトリグリセリドが本発明のグリセリド構造を満足するものであればさしつかえない。
【００２２】
これらを圧搾処理もしくはｎ−ヘキサン、クロロホルム、ベンゼン、ジエチルエーテル、メタノール等の有機溶剤を用いて抽出処理または分別処理して油分を得、これに脱ガム、アルカリ脱酸、脱色、脱臭等の処理を施して遊離脂肪酸、リン脂質、糖脂質、不ケン化物、着色物質、有臭成分等の不純物を除き、グリセリド画分を得ることができる。このグリセリド画分は本発明で用いるトリグリセリドとして利用できるが、該グリセリド画分をさらに無溶剤低温分別、溶剤分別あるいはシリカゲル・カラム等により分画して、トリグリセリドの２位に結合するｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸残基がより一層少ないトリグリセリドを製造することも可能である。
【００２３】
以上に述べたような化学合成法、エステル交換法、あるいは天然物からの抽出法等によって製造される本発明のトリグリセリドは、その構成脂肪酸としてのｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の４０モル％未満がトリグリセリドの２位にエステル結合するものであるが、より好ましくは２０モル％未満である。４０モル％以上になると本発明の所望の効果は小さくなる。本発明のトリグリセリドはそのままで油脂として利用でき、また通常の食用油脂例えば成分ｂ−１として記載したような動植物系油脂と混合して油脂としても用いることができる。このとき本発明のトリグリセリドの含有量は油脂全体の５〜１００重量％が望ましく、さらには１０〜１００重量％がより一層好ましい。最も好ましくは２０〜１００重量％である。５重量％未満では本発明の所望の効果が小さい。
【００２４】
本発明に係る油脂は例えば通常の食用動植物系油脂、ビタミンＥ、β−カロチン等とともにソフトカプセルやマイクロカプセル等のカプセル状態にして摂取することができ、また通常の食用油脂と同様に食品素材として各種加工食品の原料、料理の材料に用い、摂食することができる。または本発明に係る油脂は高脂血症の予防および治療のために利用されることが期待できる。
【００２５】
【実施例】
実施例１
トリオレイン１ｋｇと、魚油（タマ生化学（株）製、商品名：ＥＰＡ−１８）加水分解混合脂肪酸を低温分別した魚油加水分解脂肪酸濃縮物（総脂肪酸中のＣ２０：５：３７．４モル％、Ｃ２２：５：５．４モル％、Ｃ２２：６：２５．２モル％。ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸として７２．５モル％。ＢＨＴを０．０１重量％添加。）とをモル比で１：５にて混合し、水分含量を０．２重量％に調節した後、リポザイムＩＭ２０（商品名。ノボ ノルディスク社製、ムコール ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ） 由来のリパーゼ）を充填したガラス製カラム（１０ｃｍφ×６０ｃｍ） に４０℃にて通し選択的エステル交換反応を行わせた。
【００２６】
水蒸気蒸留および水洗処理にてエステル交換反応物から遊離脂肪酸を除去した後、ｎ−ヘキサンで浸潤させたシリカゲル（和光製薬（株）製、商品名：ワコーゲルＣ１００）を充填したステンレス製カラムに供し、ｎ−ヘキサンで溶出させジグリセリドを除き、本発明のトリグリセリド７２０ｇを得た。本トリグリセリドを構成する全脂肪酸組成、グリセリドの１位および３位、２位の各脂肪酸組成をＧＬＣ分析によって求めた。この結果を表１に示す。本トリグリセリドを構成するＣ２０：５の９０モル％。Ｃ２２：６の９５モル％以上、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の９３．５モル％がトリグリセリドの１位および３位に分布していた。すなわち本トリグリセリドの２位にはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の６．５モル％が分布していた。本トリグリセリドを以下の動物実験の試験油とした。
【００２７】
本トリグリセリドの一部にナトリウムメトキシド０．１重量％を加え、減圧下１００℃にてランダムエステル交換反応を行わせた後、セライトを用いて濾過し、本トリグリセリドのランダムエステル交換物を得た。この全脂肪酸組成、１位および３位、２位の各脂肪酸組成を前記同様に求めた（表１参照）。このトリグリセリドの２位にはｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の５０．６モル％が分布していた。このランダムエステル交換物を動物実験の対照油とした。
【００２８】
【表１】
【００２９】
４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、試験油および対照油を用い、各５重量％配合した飼料（表２参照）を用いて飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製し給餌した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した。この結果を表３に示す。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意差は認められなかった。
この実験結果から、本発明に係るトリグリセリド（試験油）はラットに対して副作用がなく、試験油を添加した区では、血中トリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値、肝臓中トリグリセリド値が顕著に低減することが明らかになった。
【００３０】
【表２】
【表３】
実施例２
試験油脂（本発明のトリグリセリドを含む油脂）および対照油脂を次のように調製した。すなわち試験油脂は ｈａｒｐ ｓｅａｌ（アザラシ）油脂をドライアイス／アセトン冷媒で−８０℃、１時間冷却し、析出した結晶部を濾紙で濾別して調製した。対照油脂は脂肪酸組成の異なる２種類の魚油（タラ肝油と雑魚油との混合油、マグロ眼窩油）をドライアイス／アセトン冷媒で同様に冷却、分別した濃縮物をブレンドし、その総脂肪酸組成を試験油脂のそれとほぼ近似するものとした。表４にこれらの脂肪酸組成を示す。
【００３３】
【表４】
【００３４】
４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、前記の試験油脂および対照油脂を用い、それぞれ２０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂２０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油５重量部およびハイリノールサフラワー油２５重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表５参照。）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪５重量％を１０重量％とし、コーンスターチ４１．７重量％を３６．７重量％とする以外は実施例１と同じ。）で、飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製し給餌した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した（表６参照）。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意な差異は認められなかった。この実験結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値を効果的に低減することが認められた。
【００３５】
【表５】
【表６】
実施例３
実施例２で使用した試験油脂および対照油脂の配合割合を変えた油脂を飼料に添加して実施例２と同様にラット飼育実験を行った。すなわち４週齢のＳＤ系雄性ラット７匹を１試験区とし、実施例２に記載の試験油脂または対照油脂をそれぞれ１０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂１０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油１０重量部およびハイリノールサフラワー油３０重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表７参照。）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪分を除き実施例２と同じ。）で、飼育実験を行った。この間、飼料成分の酸化劣化を防ぐために、飼料は毎日調製した。水と前記各飼料とを自由摂取させて３週間飼育したのち、各試験区ラットの血中および肝臓中の中性脂質、総コレステロールおよびリン脂質各含有量を測定した（表８参照）。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意な差異は認められなかった。この実験結果および実施例２の結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、対照油脂に比べて少量の試験油脂を混合した油脂の場合をも含めて、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）値を顕著に低減する効果をもつことが認められた。
【００３８】
【表７】
【表８】
実施例４
微細藻類クリプテコディニウム コーニー（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ、ＡＴＣＣ ３０３３６）を表９に示す培地３０リットルに植つけ、３０℃にて、ジャーファーメンターで１００時間通気培養し、培養液から培養藻体を遠心分離して集め、さらにこれを凍結乾燥した（収量６２５ｇ）。この乾燥藻体をクロロホルム：メタノール＝１：１（重量比）混合溶媒中でヒスコトロン（商品名。日音医理科器械製作所製）により細胞破砕して抽出し、油分５２０ｇを得た。ｎ−ヘキサン中に分散させたシリカゲル（和光純薬（株）製、商品名： ワコーゲルＣ１００）を充填したステンレス製カラムに前記油分を供し、ジエチルエーテル：ｎ−ヘキサン＝１０：９０（容量比）にて溶出させ、本発明に係るトリグリセリド２５０ｇを得た。本トリグリセリド（これを試験油脂とした）の脂肪酸組成を実施例１と同様にして求めた（表１０参照）。
【００４１】
【表９】
【表１０】
かくして得られた微細藻類由来のトリグリセリド（試験油脂）および実施例２に記載の対照油脂を用い、それぞれ１０重量％含む油脂（試験油脂または対照油脂１０重量部、パーム油５０重量部、ハイオレイックサフラワー油１０重量部およびハイリノールサフラワー油３０重量部の混合油脂。脂肪酸組成は表１１参照）を各１０重量％配合した飼料（飼料組成は脂肪分を除き実施例３と同じ。）を調製し、実施例３と同様の飼育試験を行った。各試験区ラットの血中および肝臓中脂質含量の分析結果を表１２に示す。なお各試験区とも飼料摂取量、体重増加量および肝臓重量に有意差は認められなかった。この実験結果および実施例２の結果から、本発明に係る油脂はラットに対して副作用を及ぼさず、対照油脂に比べて少量の試験油脂を混合した油脂の場合をも含めて、血中および肝臓中のトリグリセリド（中性脂質）および総コレステロールの値を顕著に低減化する効果をもつことが認められた。
【００４４】
【表１１】
【表１２】
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、動物に対して、副作用がなく、従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源に比べて血中脂質濃度を低減化する効果が大きく、魚油等の従来のｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸供給源よりも少量の摂取で、血中および肝臓中のトリグリセリド値および／またはコレステロール値を減少させ、血中脂質改善を容易ならしめる作用のある油脂を提供できる。
Claims (7)
- グリセリドの構成脂肪酸としてｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸を含み、ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸の総量の２０モル％未満がグリセリドの２位に結合したトリグリセリドからなる油脂を全油脂中５重量％以上含有していることを特徴とする血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸がα−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる１種もしくは２種以上である請求項１に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- ｎ−３系長鎖多価不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸および／またはドコサヘキサエン酸である請求項２に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- トリグリセリドが海産哺乳動物もしくは微細藻類から得られるものまたはこれらを濃縮処理したものまたはこれらをエステル交換処理したものである請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- 海産哺乳動物がクジラまたはアザラシである請求項４に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- 微細藻類がナンノクロロプシス属、トラストキトリウム属、イソクリシス属またはクリプテコディニウム属のいずれかに属するものである請求項４に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
- トリグリセリドがグリセリドの１，３位に特異性を有するリパーゼを用い、エステル交換反応によって製造されたものである請求項１または４項に記載の血中脂質濃度低減用薬剤組成物。
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