JP3529843B2 - 芳香族リン脂質誘導体の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、芳香族リン脂質誘導体
の製造方法に関する。本発明により提供される芳香族リ
ン脂質誘導体は、各種芳香族ヒドロキシ化合物にホスフ
ァチジル基を付加することにより、該化合物の親油性、
生体親和性、界面活性等の作用が増強され、用いる芳香
族ヒドロキシ化合物の性質により化粧品、食品、塗料、
飼料、農薬、医薬品等の分野において利用される。

【０００２】

【従来の技術】ホスホリパーゼを用いて、アルコール類
にホスファチジル基を導入する反応は、当初キャベツ由
来のホスホリパーゼＤ（以下、これをＰＬＤと略記する
ことがある。）を用い、主に水溶性の低分子量脂肪族一
級アルコールに対して行われた［ジャーナル オブ バ
イオロジカル ケミストリー（J. Biol. Chem.）、242
巻、477-484 頁（1967年）；およびバイオケミカル ジ
ャーナル（Biochem. J.）、102 巻、205-210 頁（1967
年）参照］。以後、細菌由来でより高い活性を持つＰＬ
Ｄが見いだされ、それらを用いたアルコール類へのホス
ファチジル基転移反応が報告されている。かかる反応
は、適当なバッファー類と有機溶媒、特に酢酸エチル
［バイオキミカ バイオフィジカ アクタ（Biochim. B
iophys. Acta.）、960 巻、334-341 頁（1988年）；特
開昭６３−２４５６８４号公報；特公平２−７６３３号
公報；特公平２−８７１６号公報；特開平３−２９１２
８９号公報参照］、ジエチルエーテル［アプライド マ
イクロバイオロジー バイオテクノロジー（Appl. Micr
obiol. Biotechnol.）、27巻、146-151 頁（1987年）；
アグリカルチュラル バイオロジカル ケミストリー
（Agric. Biol. Chem.）、53巻、3083-3085 頁（1989
年）；特開昭６３−３６７９０号公報参照］、またはク
ロロホルム（特開昭６３−９１０９０号公報、特開平４
−２１１３８７号公報参照）との２相系で行われ、水溶
性の低分子量一級アルコールで高い転移率を示すことが
知られている。

【０００３】一方、芳香族リン脂質誘導体の合成方法と
しては、１−ナフトール、フェノール、４−ニトロフェ
ノール、２，４−ジクロロフェノール、２−クロロフェ
ノール、２−アセトキシフェノール、チロシン誘導体等
の芳香族ヒドロキシ化合物のホスファチジル化合物につ
いて、化学的合成方法が知られているにすぎない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記のように、従来Ｐ
ＬＤによる芳香族ヒドロキシ化合物へのホスファチジル
基転移反応は例がなく、芳香族リン脂質誘導体の合成
は、複雑な工程を経る化学的合成方法によるしかなかっ
た。しかしながら、該化学的合成方法は、一般的に置換
基の保護、反応基の活性化など反応が複雑であり、かつ
副生成物も多いことから、芳香族リン脂質誘導体の一般
的な合成方法とはなっておらず、また合成可能な対象も
限られていた。芳香族ヒドロキシ化合物の中には生理活
性を持つものも多く、かかる化合物にホスファチジル基
を導入することにより親油性、生体親和性、界面活性等
の作用が増強された芳香族リン脂質誘導体を、短工程か
つ簡便な操作で得ることが望まれているのが現状であ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、上記の
目的は、下記一般式（Ｉ）

【０００６】

【化５】

【０００７】（式中、Ａは置換基を有していてもよい芳
香族炭化水素基または置換基を有していてもよい芳香族
複素環基を表す。）で示される芳香族ヒドロキシ化合物
（以下、これを芳香族ヒドロキシ化合物（Ｉ）と略記す
る。）を、ホスホリパーゼＤの存在下、下記一般式（Ｉ
Ｉ）

【０００８】

【化６】

【０００９】［式中、Ｘはコリン残基を表し、Ｒは下記
一般式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）

【００１０】

【化７】

【００１１】（式中、Ｒ¹ およびＲ² はそれぞれ水素原
子、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を表
す。ただし、Ｒ¹ およびＲ² の両方が水素原子であるこ
とはない。）で示される基（以下、これをグリセリド部
分（III)または（IV）と略記することがある。）を表
す。］で示されるリン脂質（以下、これをリン脂質（I
I）と略記する。）と反応させることを特徴とする下記
一般式（Ｖ）

【００１２】

【化８】

【００１３】（式中、ＡおよびＲは前記定義のとおりで
ある。）で示される芳香族リン脂質誘導体（以下、これ
を芳香族リン脂質誘導体（Ｖ）と略記する。）の製造方
法を提供することにより達成される。

【００１４】芳香族ヒドロキシ化合物（Ｉ）および芳香
族リン脂質誘導体（Ｖ）において、Ａが表す置換基を有
していてもよい芳香族炭化水素基の芳香族炭化水素環と
しては、ベンゼン、ナフタレンなどが挙げられる。ま
た、置換基を有していてもよい芳香族複素環基の複素環
としては、クロマン、クロモン、フラボン、イソフラボ
ン、フラボノール、フラバノン、フラン、ベンゾフラ
ン、イソベンゾフラン、チオフェン、ピロール、ピラゾ
ール、ベンゾピラゾール、チアゾール、ベンゾチアゾー
ル、イソチアゾール、ベンゾイソチアゾール、オキサゾ
ール、ベンゾオキサゾール、イソキサゾール、ベンゾイ
ソキサゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ピ
リジン、キノリン、イソキノリン、インドール、ピリミ
ジン、トリアジン、トリアゾール、テトラゾール、プリ
ン、キナゾリン、キノキサリンなどが挙げられる。

【００１５】これらの芳香族炭化水素基または芳香族複
素環基は、置換可能な置換基を有していてもよい。該置
換基としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ
素原子などのハロゲン原子；メチル基、エチル基、プロ
ピル基、ブチル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基、デ
カリン基などの炭素数１５以下のアルキル基またはシク
ロアルキル基；ビニル基、アリル基、プレニル基、ゲラ
ニル基などの炭素数１５以下のアルケニル基；エチニル
基、プロピニル基、ブチニル基、ヘキシニル基などのア
ルキニル基；フェニル基、ナフチル基などの芳香族炭化
水素基；クロマニル基、イソクロマニル基、フリル基、
チエニル基、ピロリル基、ピラゾリル基、チアゾリル
基、イソチアゾリル基、イソキサゾリル基、ピリジル
基、ピリミジニル基、プリニル基などの芳香族複素環
基；テトラヒドロフラニル基、モルホリノ基、チアゾリ
ニル基、イソキサゾリニル基などの飽和複素環基；水酸
基；アミノ基；ニトロ基；カルボニル基；メチルチオ
基、エチルチオ基、ブチルチオ基などのアルキルチオ
基；フェニルチオ基、ナフチルチオ基などのアリールチ
オ基；メチルスルフィニル基、エチルスルフィニル基な
どのアルキルスルフィニル基；フェニルスルフィニル
基、ナフチルスルフィニル基などのアリールスルフィニ
ル基；メチルスルホニル基、エチルスルホニル基、ブチ
ルスルホニル基などのアルキルスルホニル基；フェニル
スルホニル基、ナフチルスルホニル基などのアリールス
ルホニル基；リン酸エステル基；亜リン酸エステル基な
どをあげることができる。また、これらの置換基はさら
に置換可能な基で置換されることもできる。

【００１６】

【００１７】リン脂質（II）において、Ｘが表すコリン
残基とは、下記式

【００１８】

【化９】

【００１９】で示される基を表す。

【００２０】

【００２１】

【００２２】

【００２３】

【００２４】リン脂質（II）および芳香族リン脂質誘導
体（Ｖ）においてＲが表すグリセリド部分（III)または
（IV）において、Ｒ¹ およびＲ² がそれぞれ表すアルキ
ル基、アルケニル基およびアルキニル基は、直鎖状であ
っても分岐鎖状であってもよい。かかるアルキル基とし
ては、例えば、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、
オクチル基、ノニル基、デシル基、３，７−ジメチルオ
クチル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、
テトラデシル基、ペンタデシル基、３，７，１１−トリ
メチルドデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、
オクタデシル基、アラキル基、ドコシル基、テトラコシ
ル基、トリアコンチル基、２−エチルヘキシル基、２−
オクチルドデシル基、２−ウンデシルヘキサデシル基、
２−テトラデシルオクタデシル基、２−メチルヘプタデ
シル基などの炭素数５〜３６の基が挙げられる。好まし
くは、オクチル基、ドデシル基、テトラデシル基、ヘキ
サデシル基、オクタデシル基などの炭素数８〜２２の基
が挙げられる。

【００２５】Ｒ¹ およびＲ² がそれぞれ表すアルケニル
基としては、例えば、ヘキセニル基、オクテニル基、デ
セニル基、ゲラニル基、ドデセニル基、ファルネシル
基、ヘキサデセニル基、オクタデセニル基、テトラコセ
ニル基、トリアコンテニル基などの炭素数５〜３６の基
が挙げられる。好ましくは、オクテニル基、ゲラニル
基、ファルネシル基などの炭素数８〜２２の基が挙げら
れる。また、アルキニル基としては、オクチニル基、ウ
ンデシニル基などの炭素数８〜２２の基が好ましい。

【００２６】リン脂質（II）および芳香族リン脂質誘導
体（Ｖ）において、Ｒが表すグリセリド部分（II）また
は（III)は、大豆レシチン、卵黄レシチンなどの天然脂
質に由来するグリセリド部分であってもよく、また、合
成した脂質に由来するグリセリド部分であってもよい。

【００２７】リン脂質（ＩＩ）の具体例としては、例え
ば、大豆レシチンおよび卵黄レシチンなどの天然由来の
もの；ホスファチジルコリンなどが挙げられる。

【００２８】リン脂質（II）および芳香族リン脂質誘導
体（Ｖ）は、アルカリ金属原子の塩、アルカリ土類金属
原子の塩またはアルキル基もしくはヒドロキシアルキル
基で置換されていてもよいアンモニウムの塩であっても
よい。具体的には、例えばリチウム塩、ナトリウム塩、
カリウム塩などのアルカリ金属原子の塩；マグネシウム
塩、カルシウム塩、バリウム塩などのアルカリ土類金属
原子の塩；メチルアンモニウム塩、ジメチルアンモニウ
ム塩、エチルアンモニウム塩、ジエチルアンモニウム
塩、プロピルアンモニウム塩、ジプロピルアンモニウム
塩、ブチルアンモニウム塩、ヒドロキシエチルアンモニ
ウム塩、ヒドロキシプロピルアンモニウム塩などのアル
キル基もしくはヒドロキシアルキル基で置換されていて
もよいアンモニウム塩などが挙げられる。

【００２９】また、リン脂質（II）においては、例えば
ホスファチジルコリンの様に、水素原子が脱離して分子
内でイオン対を形成していてもよい。

【００３０】本発明によれば、芳香族ヒドロキシ化合物
（Ｉ）を、ＰＬＤの存在下、リン脂質（II）と反応させ
ることにより、芳香族リン脂質誘導体（Ｖ）を得ること
ができる。

【００３１】本発明の製造方法をさらに詳しく説明す
る。まず、芳香族ヒドロキシ化合物（Ｉ）およびリン脂
質（II）を、ｐＨ４．０〜８．０、好ましくはｐＨ４．
５〜７．５に調整した水溶液、または適当なバッファー
水溶液および有機溶媒の混合溶液に加える。該反応液
に、ＰＬＤを加えて、１０〜１００℃、好ましくは２０
〜７０℃で撹拌する。反応後、生成物を有機層に抽出
し、芳香族リン脂質誘導体（Ｖ）を得ることができる。
なお、有機層に未反応の芳香族ヒドロキシ化合物（Ｉ）
およびリン脂質（II）が存在する場合があるので、その
場合には、芳香族ヒドロキシ化合物（Ｉ）およびリン脂
質（II）を適当な方法、例えばシリカゲルクロマトグラ
フィー等により分離すればよい。また、反応条件によっ
て、リン脂質（Ｉ）が加水分解されたホスファチジン酸
が副生する場合があるが、この場合も必要に応じてホス
ファチジン酸を分離すればよい。

【００３２】かかる反応に用いられるバッファー水溶液
としては、酢酸バッファー、リン酸バッファー、トリス
バッファーなどが挙げられる。好ましくは酢酸バッファ
ー、リン酸バッファーなどが用いられる。

【００３３】かかる反応に用いられる有機溶媒は、水と
の相互溶解性が乏しく、かつ水の溶解性［ジェイ．エ
イ．リディック（J.A.Riddick ）、ダブリュ．ビー．バ
ンガー（W.B.Bunger）著、「オーガニック ソルベンツ
（Organic Solvents）」、第３版、Wiley （1970年）発
行参照］が１．０重量％以下である溶媒が好ましい。具
体的には、例えば、四塩化炭素、塩化メチレンなどのハ
ロゲン化炭化水素類；ヘキサン、ベンゼン、トルエンな
どの炭化水素類；メチルイソブチルケトンなどのケトン
類などより選ばれた１種またはこれらの混合溶媒が挙げ
られる。

【００３４】なお、クロロホルムは、水溶解性が０．０
７２重量％であり、上記条件に適するが、クロロホルム
はそのままでは著しく不安定であり、通常０．１〜１％
のエタノールを添加して安定化されている。ＰＬＤによ
るホスファチジル基転移反応においてエタノールは顕著
な反応性を示す受容体であり［蛋白質、核酸、酵素、３
１巻、553-558 頁（1991年）参照］、芳香族ヒドロキシ
化合物とリン脂質の反応系中にエタノールが存在する
と、生成物の大半がホスファチジルエタノールとなるた
め、上記反応にエタノールで安定化されたクロロホルム
は使用することができない。

【００３５】水溶解性が１．０重量％以上の溶媒、例え
ば酢酸エチルまたはエーテルを用いた場合には、芳香族
リン脂質誘導体（Ｖ）の収率が著しく低くなること、ま
た長時間の反応ではホスファチジン酸の生成が主とな
り、一度生成した芳香族リン脂質誘導体（Ｖ）が分解さ
れることなどの理由から、本反応に用いることは好まし
くない。

【００３６】有機溶媒に対する水の含量は、０．１％
（ｖ／ｖ）を越えることが好ましい。有機溶媒に対する
水の含量が０．１％（ｖ／ｖ）以下であると酵素活性が
失われるため、好ましくない。有機溶媒に対する水の含
量が増加すると、目的化合物である芳香族リン脂質誘導
体（Ｖ）の収率は高くなるが、水の含量が１０％（ｖ／
ｖ）以上になると副生成物であるホスファチジン酸の生
成が顕著になる。したがって、ホスファチジン酸の生成
を抑制することを目的とするならば、水の含量を１０％
（ｖ／ｖ）以下とすることが好ましいが、水の含量が１
０％（ｖ／ｖ）以上であっても、目的とする芳香族リン
脂質誘導体（Ｖ）を充分に得ることが出来る。有機溶媒
に対する水の含量のさらに好ましい範囲は、１〜５％
（ｖ／ｖ）である。

【００３７】本反応に用いられるＰＬＤとしては、キャ
ベツ由来のＰＬＤ；ストレプトマイセス属菌由来のＰＬ
Ｄなどの細菌由来のＰＬＤ；動物由来のＰＬＤなどを用
いることができる。中でもストレプトマイセス属菌由来
のＰＬＤが好ましい。また、ＰＬＤは適当なバッファー
に溶解して用いてもよいが、反応生成物の精製の簡便性
を考えるとシリカゲル、ゼオライト、ガラスなどの多孔
性担体、多糖類ゲル、脂肪族基が結合した多糖類ゲル、
合成高分子担体、イオン交換樹脂などの担体に共有結合
あるいは非共有結合で結合した固定化酵素として用いて
もよい。

【００３８】本発明の方法によって得られる芳香族リン
脂質誘導体（Ｖ）には、酵素活性測定用試薬として有用
なホスファチジル−１−ナフトール、ホスファチジル−
４−ニトロフェノール（米国特許第５０１１９６４号明
細書参照）；リン脂質誘導体合成のための中間体として
有用なホスファチジル−２，４−ジクロロフェノール、
ホスファチジル−２−クロロフェノール［ドイツ特許出
願公開第４１１１７３０号公報；テトラヘドロン レタ
ー（Tetrahedron Lett. ）、30巻、5353-5356頁（1989
年）参照］など、有用性が期待されるものがある。

【００３９】さらに、本発明の製造方法により提供され
る芳香族リン脂質誘導体（Ｖ）は、生体成分のリン脂質
を構成要素に持つことにより、親油性、生体親和性、界
面活性等の作用が増強されたおり、かつ生体内で蓄積さ
れることなく分解されることが期待できる。また、リン
脂質の特性であるリポソームあるいはミセルのような小
胞体形成による安定化が期待できる。

【００４０】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例により限定されるもので
はない。

【００４１】実施例１ １，２−ジパルミトイルホスファチジル−４−メトキシ
フェノール（化合物１：以下、ＤＰＰ−ＰＭＰと略記す
ることがある。）の合成 １，２−ジパルミトイルホスファチジルコリン（以下、
ＤＰＰＣと略記する。）０．５ｇ（０．６８ｍｍｏｌ）
および４−メトキシフェノール１．０ｇ（８．１ｍｍｏ
ｌ）を、ベンゼン１００ｍｌおよび０．２Ｍ酢酸バッフ
ァー（ｐＨ５．６）５ｍｌの混合溶液に加え、さらにＰ
ＬＤ１００ユニットを加え、室温で５時間撹拌した。反
応後、１Ｎ塩酸１００ｍｌならびにクロロホルムおよび
メタノール混合溶液（３：１体積比）２００ｍｌを加え
撹拌した。有機層を取り、水洗、無水硫酸ナトリウムで
乾燥し、減圧下で溶媒を留去した。残渣をクロロホルム
に溶かしシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、クロロ
ホルムおよびメタノールの混合溶液（５：１体積比）で
溶出することにより、白色のワックス状物質として２６
７ｍｇの１，２−ジパルミトイルホスファチジル−４−
メトキシフェノール（ＤＰＰ−ＰＭＰ）を得た（ＤＰＰ
Ｃからの収率５２％）。ＤＰＰ−ＰＭＰの物性値を以下
に示す。なお、ＵＶ吸収スペクトルはクロロホルムを溶
媒にして測定した。また、ＮＭＲスペクトルは、重クロ
ロホルムを溶媒にテトラメチルシランを内部標準物質と
して測定した。

【００４２】ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２８２ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７７７（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.10(2H,d,J=3.4Hz,aroma
tic-2,6), 6.78(2H,d,J=3.4Hz,aromatic-3,5), 5.20(1
H,m,glycerol CH), 4.36(1H,m,glycerol CH2), 4.14(1
H,m,glycerol CH2), 4.02(2H,m,glycerol CH2), 3.74(3
H,s,OCH3), 2.24(4H,m,palmitoyl CH2), 1.55(4H,m,pal
mitoyl CH2) 1.25(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,p
almitoyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：173.6(palmitoyl C=O), 173.
3(palmitoyl C=O), 155.4(aromatic-4), 146.3(aromati
c-1), 120.5(aromatic-2,6), 114.1(aromatic-3,5), 7
0.2(glycerol 2-CH),63.7(glycerol 3-CH2), 62.3(glyc
erol 1-CH2), 55.3(OCH3), 34.0-22.4(palmitoyl CH2),
13.7(palmitoyl CH3)

【００４３】実施例２〜１１ 実施例１において、反応条件を表１に示すように一部変
更した以外は実施例１と同様に反応および分離精製を行
うことにより、１，２−ジパルミトイルホスファチジル
フェノール（実施例２）、１，２−ジパルミトイルホス
ファチジル−４−メチルフェノール（実施例３）、１，
２−ジパルミトイルホスファチジル−４−クロロフェノ
ール（実施例４）、１，２−ジパルミトイルホスファチ
ジルハイドロキノン（実施例５）、１，２−ジパルミト
イルホスファチジル−３−メトキシフェノール（実施例
６）、１，２−ジパルミトイルホスファチジルカテコー
ル（実施例７）、１，２−ジパルミトイルホスファチジ
ル−２−ナフトール（実施例８）、１，２−ジパルミト
イルホスファチジル−５−ヒドロキシインドール（実施
例９）、１，２−ジパルミトイルホスファチジルチロシ
ンアミド（実施例１０）、および１，２−ジパルミトイ
ルホスファチジルチロシンエチルエステル（実施例１
１）を得た。

【００４４】

【表１】

【００４５】上記表中、ＡＢは０．２Ｍ酢酸バッファー
（ｐＨ５．６）を表す。

【００４６】実施例２〜１１で得られた化合物の物性値
を以下に示す。なお、ＵＶ吸収スペクトルはクロロホル
ムを溶媒にして測定した。また、ＮＭＲスペクトルは、
重クロロホルムを溶媒にテトラメチルシランを内部標準
物質として測定した。

【００４７】１，２−ジパルミトイルホスファチジルフ
ェノール（実施例２） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２６５ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７４７（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.22(4H,m,aromatic-2,3,
5,6), 7.05(1H,t,J=3.1Hz,aromatic-4), 5.21(1H,m,gly
cerol CH), 4.35(1H,m,glycerol CH2), 4.13(1H,m,glyc
erol CH2), 4.02(2H,m,glycerol CH2), 2.27(4H,q,J=2.
2Hz,palmitoyl CH2), 1.57(4H,m,palmitoyl CH2), 1.26
(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,palmitoyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：174.2(palmitoyl C=O), 173.
8(palmitoyl C=O), 152.8(aromatic-1), 129.5(aromati
c-3,5), 123.6(aromatic-4), 120.0(aromatic-2,6), 7
0.4(glycerol 2-CH),64.1(glycerol 3-CH2), 62.6(glyc
erol 1-CH2), 34.4-22.8(palmitoyl CH2), 14.2(palmit
oyl CH3)

【００４８】１，２−ジパルミトイルホスファチジル−
４−メチルフェノール（実施例３） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２６９ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７６１（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.05(2H,d,J=3.2Hz,aroma
tic-2,6), 6.94(2H,d,J=3.2Hz,aromatic-3,5), 5.11(1
H,m,glycerol CH), 4.13(1H,m,glycerol CH2), 4.03(1
H,m,glycerol CH2), 3.92(2H,m,glycerol CH2), 2.22(3
H,s,aromatic CH3), 2.13(4H,m,palmitoyl CH2),1.48(4
H,m,palmitoyl CH2), 1.25(48H,m,palmitoyl CH2), 0.8
8(6H,t,palmitoylCH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：173.7(palmitoyl C=O), 150.
4(aromatic-1), 132.4(aromatic-4), 129.7(aromatic-
3,5), 119.6(aromatic-2,6), 70.5(glycerol 2-CH), 6
4.1(glycerol 3-CH2),62.7(glycerol 1-CH2), 34.2-22.
7(palmitoyl CH2), 20.6(aromatic CH3), 14.1(palmito
yl CH3)

【００４９】１，２−ジパルミトイルホスファチジル−
４−クロロフェノール（実施例４） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２７４ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７８１（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.10(4H,s,aromatic), 5.
10(1H,m,glycerol CH), 4.20(1H,m,glycerol CH2), 4.0
3(1H,m,glycerol CH2), 3.90(2H,m,glycerol CH2), 2.1
4(4H,m,palmitoyl CH2), 1.48(4H,m,palmitoyl CH2),
1.25(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,J=2.5Hz,palmi
toyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：174.8(palmitoyl C=O), 153.
0(aromatic-4), 151.1(aromatic-1), 129.3(aromatic-
3,5), 128.4(aromatic-4), 121.1(aromatic-2,6), 70.4
(glycerol 2-CH), 64.1(glycerol 3-CH2), 62.6(glycer
ol 1-CH2), 34.2-22.7(palmitoyl CH2), 14.1(palmitoy
l CH3)

【００５０】１，２−ジパルミトイルホスファチジルハ
イドロキノン（実施例５） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２８３ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７６３（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：6.98(2H,d,J=2.9Hz,aroma
tic-2,6), 6.71(2H,d,J=2.9Hz,aromatic-3,5), 5.20(1
H,m,glycerol CH), 4.36(1H,m,glycerol CH2), 4.14(1
H,m,glycerol CH2), 4.01(2H,m,glycerol CH2), 2.27(4
H,t,J=2.7Hz,palmitoyl CH2), 1.58(4H,m,palmitoyl CH
2), 1.26(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,J=2.5Hz,p
almitoyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：174.1(palmitoyl C=O), 173.
7(palmitoyl C=O), 153.0(aromatic-4), 145.7(aromati
c-1), 120.9(aromatic-2,6), 115.8(aromatic-3,5), 7
0.6(glycerol 2-CH),64.1(glycerol 3-CH2), 62.7(glyc
erol 1-CH2), 34.3-22.8(palmitoyl CH2), 14.1(palmit
oyl CH3)

【００５１】１，２−ジパルミトイルホスファチジル−
３−メトキシフェノール（実施例６） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２７８ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７７７（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.01(1H,m,aromatic), 6.
78(2H,m,aromatic), 6.53(1H,m,aromatic), 5.11(1H,m,
glycerol CH), 4.16(1H,m,glycerol CH2), 4.01(1H,m,g
lycerol CH2), 3.93(2H,m,glycerol CH2), 3.69(3H,s,O
CH3), 2.14(4H,m,palmitoyl CH2), 1.49(4H,m,palmitoy
l CH2), 1.25(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,palmi
toyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：173.8(palmitoyl C=O), 173.
6(palmitoyl C=O), 160.4(aromatic-3), 153.7(aromati
c-1), 129.6(aromatic-5), 112.0(aromatic-6), 108.9
(aromatic-4), 105.9(aromatic-2), 70.8(glycerol 2-C
H), 63.9(glycerol 3-CH2), 62.6(glycerol 1-CH2), 5
5.2(OCH3), 34.2-22.7(palmitoyl CH2), 14.1(palmitoy
l CH3)

【００５２】１，２−ジパルミトイルホスファチジルカ
テコール（実施例７） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２７４ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７６３（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.60(1H,d,J=1.7Hz,aroma
tic-6), 7.08(1H,t,J=1.7Hz,aromatic-5), 6.86(1H,t,J
=1.7Hz,aromatic-4), 6.77(1H,d,J=1.7Hz,aromatic-3),
5.13(1H,m,glycerol CH), 4.22(1H,m,glycerol CH2),
4.03(1H,m,glycerol CH2), 3.98(2H,m,glycerolCH2),
2.18(4H,m,palmitoyl CH2), 1.45(4H,m,palmitoyl CH
2), 1.26(48H,m,palmitoylCH2), 0.89(6H,t,palmitoyl
CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：174.0(palmitoyl C=O), 173.
7(palmitoyl C=O), 146.4(aromatic-2), 135.8(aromati
c-1), 124.8(aromatic-4), 121.3(aromatic-6), 120.1
(aromatic-5), 117.2(aromatic-3), 70.6(glycerol 2-C
H), 64.3(glycerol 3-CH2), 62.0(glycerol 1-CH2), 3
4.3-22.7(palmitoyl CH2), 14.1(palmitoyl CH3)

【００５３】１，２−ジパルミトイルホスファチジル−
２−ナフトール（実施例８） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ３２３、３０９ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７９７（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.62-7.23(7H,m,aromati
c), 5.07(1H,m,glycerol CH), 4.08(1H,m,glycerol CH
2), 3.97(3H,m,glycerol CH2), 1.85(4H,m,palmitoyl C
H2), 1.26(52H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,palmitoy
l CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：173.7(palmitoyl C=O), 173.
5(palmitoyl C=O), 150.3, 134.1, 130.0, 129.1,127.
4, 126.0, 124.3, 120.7, 115.3(aromatic), 70.5(glyc
erol 2-CH), 64.2(glycerol 3-CH2), 62.6(glycerol 1-
CH2), 34.0-22.8(palmitoyl CH2), 14.1(palmitoyl CH
3)

【００５４】１，２−ジパルミトイルホスファチジル−
５−ヒドロキシインドール（実施例９） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２７０、２８６ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ７８６（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：8.96(1H,s,NH), 7.26(1H,
d,indole-7), 7.03(3H,m,indole-2,4,6), 6.26(1H,m,in
dole-3), 5.11(1H,m,glycerol CH), 4.10(1H,m,glycero
l CH2), 3.95(3H,m,glycerol CH2), 2.08(4H,m,palmito
yl CH2), 1.42(4H,m,palmitoyl CH2), 1.25(48H,m,palm
itoyl CH2), 0.88(6H,t,palmitoyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：173.8(palmitoyl C=O), 146.
1, 132.8, 128.0, 125.4, 115.4, 111.9, 110.1, 102.0
(indole), 70.7(glycerol 2-CH), 64.4(glycerol 3-CH
2), 62.7(glycerol 1-CH2), 34.1-22.7(palmitoyl CH
2), 14.1(palmitoyl CH3)

【００５５】１，２−ジパルミトイルホスファチジルチ
ロシンアミド（実施例１０） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２６８ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ８３４（Ｍ−１＋Ｎａ）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.12(4H,s,aromatic), 5.
22(1H,m,glycerol CH), 4.36(1H,m,glycerol CH2), 4.1
6(1H,m,glycerol CH2), 4.06(2H,m,glycerol CH2), 3.8
0(1H,m,tyrosinamide CH), 3.06(1H,m,tyrosinamide CH
2), 2.81(1H,m,tyrosinamide CH2), 2.28(4H,t,J=2.7H
z,palmitoyl CH2), 1.59(4H,m,palmitoyl CH2), 1.27(4
8H,m,palmitoyl CH2), 0.88(6H,t,J=2.7Hz,palmitoyl C
H3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：１７４．２（ｐａｌｍｉｔｏ
ｙｌ Ｃ＝Ｏ）， １７３．８（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ
Ｃ＝Ｏ）， １５２．２（ａｒｏｍａｔｉｃ−１），
１３１．５（ａｒｏｍａｔｉｃ−４）， １３０．４
（ａｒｏｍａｔｉｃ−３，５）， １２０．６（ａｒｏ
ｍａｔｉｃ−２，６）， ７０．６（ｇｌｙｃｅｒｏｌ
２−ＣＨ），６４．２（ｇｌｙｃｅｒｏｌ ３−ＣＨ
２）， ６２．９（ｇｌｙｃｅｒｏｌ １−ＣＨ２），
５５．８（ｔｙｒｏｓｉｎａｍｉｄｅ ＣＨ）， ３
９．５（ｔｙｒｏｓｉｎａｍｉｄｅ ＣＨ２）， ３
４．５−２２．９（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ＣＨ２），
１４．１（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ ＣＨ３）

【００５６】１，２−ジパルミトイルホスファチジルチ
ロシンエチルエステル（実施例１１） ＵＶ吸収スペクトル（λｍａｘ：ｎｍ） ２６９ 質量スペクトル（ｍ／ｚ） ８４０（Ｍ）^１ Ｈ−ＮＭＲスペクトル δ：7.15(2H,d,J=2.9Hz,arom
atic-3,5), 7.07(2H,d,J=2.9Hz,aromatic-2,6), 5.22(1
H,m,glycerol CH), 4.32(1H,m,glycerol CH2), 4.15(1
H,m,glycerol CH2), 4.22(2H,q,J=2.3Hz,ethyl CH2),
4.04(2H,m,glycerol CH2), 3.93(1H,m,tyrosine CH),
3.21(1H,m,tyrosine CH2), 2.93(1H,m,tyrosine CH2),
2.22(4H,m,palmitoylCH2), 1.55(4H,m,palmitoyl CH2),
1.25(48H,m,palmitoyl CH2), 0.88(9H,t,J=2.3Hz,palm
itoyl CH3,ethyl CH3)¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル：174.7(palmitoyl C=O), 174.
4(palmitoyl C=O), 153.3(aromatic-1), 131.8(aromati
c-3,5), 131.1(aromatic-4), 121.6(aromatic-2,6), 7
1.5(glycerol 2-CH),65.4(glycerol 3-CH2), 63.8(glyc
erol 1-CH2), 63.2(ethyl CH2), 55.5(tyrosine CH), 3
8.3(tyrosine CH2), 35.4-23.9(palmitoyl CH2), 15.3
(palmitoyl CH3,ethyl CH3)

【００５７】参考例１ 芳香族リン脂質誘導体の酵素合成における溶媒効果 ＤＰＰＣ１４ｍｍｏｌおよび４−メトキシフェノール１
００ｍｍｏｌを、ＰＬＤ３ユニットとともに各種の有機
溶媒（トルエン、ベンゼン、塩化メチレン、エーテルま
たは酢酸エチル）１ｍｌおよび０．２Ｍ酢酸バッファー
１ｍｌの混合溶液中で、室温下に撹拌した。反応解析は
以下に示す方法により行った。５０μｌの反応混合物に
５０μｌの１Ｎ塩酸ならびに１００μｌのクロロホルム
およびメタノール混合溶液（３：１体積比）を加えよく
混合した。有機層をシリカゲル薄層クロマトグラフィー
（展開溶媒；クロロホルム：メタノール：Ｈ₂ Ｏ＝３：
１：０．１）で分析した後、リンモリブデン酸のエタノ
ール溶液を薄層プレートにスプレーし１８０℃に加熱す
ることによりリン脂質および誘導体を検出した。各スポ
ットの定量は、島津フライングスポットスキャナーＣＳ
−９０００（株式会社島津製作所製）を用いて行った。
それぞれの溶媒を用いた反応におけるＤＰＰ−ＰＭＰお
よびジパルミトイルホスファチジン酸ナトリウム塩（以
下、ＤＰＰＡ−Ｎａと略記する。）の生成量の時間経過
を図１および図２に示した。

【００５８】図１および図２において０．５時間におけ
るＤＰＰ−ＰＭＰ含量％および３時間におけるＤＰＰＡ
−Ｎａ含量％を、使用した有機溶媒の水溶解性に対して
プロットした（図３）。それぞれの有機溶媒の水溶解性
（重量％）は、トルエン：０．０３３；ベンゼン：０．
０６；塩化メチレン：０．２０；ジエチルエーテル：
１．４７；酢酸エチル：２．９４である［ジェイ．エ
イ．リディック（J.A.Riddick ）、ダブリュ．ビー．バ
ンガー（W.B.Bunger）著、「オーガニック ソルベンツ
（Organic Solvents）」、第３版、Wiley （1970年）発
行参照］。

【００５９】参考例２ 芳香族リン脂質誘導体の酵素合成における反応系の水含
量の影響 ＤＰＰＣ１４ｍｍｏｌおよび４−メトキシフェノール１
２６ｍｍｏｌを、ＰＬＤ５ユニットとともに、ベンゼン
および０．２Ｍ酢酸バッファーの混合溶液２ｍｌ中、３
０℃で撹拌した。混合溶液中のベンゼンと酢酸バッファ
ーの比率は酢酸バッファー０．１％、１．０％、１０
％、５０％（体積比）である。生成物（ＤＰＰ−ＰＭＰ
およびＤＰＰＡ−Ｎａ）の生成量の時間経過を図４およ
び図５に示した。

【００６０】

【発明の効果】本発明によれば、芳香族ヒドロキシ化合
物にホスファチジル基を導入することにより親油性、生
体親和性、界面活性等の作用が増強された芳香族リン脂
質誘導体を、短工程かつ簡便な操作で得ることができ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＤＰＰ−ＰＭＰの含量％に対する各種有機溶媒
の水溶解性による効果を示した図である。

【図２】ＤＰＰＡ−Ｎａの含量％に対する各種有機溶媒
の水溶解性による効果を示した図である。

【図３】生成物含量と有機溶媒の水溶解性との関係を示
した図である。

【図４】ＤＰＰ−ＰＭＰの含量％に対する水含量の影響
を示した図である。

【図５】ＤＰＰＡ−Ｎａの含量％に対する水含量の影響
を示した図である。

【符号の説明】

１：ベンゼン ２：トルエン ３：塩化メチレン ４：エーテル ５：酢酸エチル ６：ＤＰＰ−ＰＭＰの含量％ ７：ＤＰＰＡ−Ｎａの含量％ ８：５０％酢酸バッファー ９：１０％酢酸バッファー １０：１％酢酸バッファー １１：０．１％酢酸バッファー

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 米国特許5011964（ＵＳ，Ａ) Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．（1994），Ｖｏｌ. 58，Ｎｏ．12，ｐ．2140−2144 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎ ｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉ ｎｅｅｒｉｎｇ（1995），Ｖｏｌ．79, Ｎｏ．４，ｐ．313−316 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12P 1/00 - 41/00 C12N 9/00 C12N 1/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ Ｓ（ＳＴＮ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記一般式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ａは置換基を有していてもよい芳香族炭化水素
   基または置換基を有していてもよい芳香族複素環基を表
   す。）で示される芳香族ヒドロキシ化合物を、ホスホリ
   パーゼＤの存在下、下記一般式（ＩＩ） 【化２】 ［式中、Ｘはコリン残基を表し、Ｒは下記一般式（ＩＩ
   Ｉ）または（ＩＶ） 【化３】 （式中、Ｒ^１ およびＲ^２ はそれぞれ水素原子、アルキ
   ル基、アルケニル基またはアルキニル基を表す。ただ
   し、Ｒ^１ およびＲ^２ の両方が水素原子であることはな
   い。）で示される基を表す。］で示されるリン脂質と反
   応させることを特徴とする下記一般式（Ｖ） 【化４】 （式中、ＡおよびＲは前記定義のとおりである。）で示
   される芳香族リン脂質誘導体の製造方法。
2. 【請求項２】 水溶解性が１．０重量％以下の有機溶媒
   の存在下に反応させることを特徴とする請求項１記載の
   芳香族リン脂質誘導体の製造方法。