JP3519832B2

JP3519832B2 - 生体反応検査方法

Info

Publication number: JP3519832B2
Application number: JP23841595A
Authority: JP
Inventors: 幸司小林; 和夫新村; 澄栗山
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1995-09-18
Filing date: 1995-09-18
Publication date: 2004-04-19
Anticipated expiration: 2015-09-18
Also published as: JPH0980045A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、材料と血液とを接
触させることにより、インターロイキン１（ＩＬ−
１）、またはインターロイキン６（ＩＬ−６）を産生誘
導し、その産生能力を測定することにより、免疫及び炎
症等に関する生体反応を検査する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のごとく、生体の免疫担当細胞とし
ては、単球、マクロファージ、顆粒球、リンパ球等の白
血球やキラー細胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞等があり、こ
れらの細胞は血液中や各臓器、器官において免疫監視を
行うとともに、各種の免疫反応において様々な役割を担
って活動している。

【０００３】一般に各種の疾患や悪性腫瘍においては多
様な免疫反応によってこれらの細胞の機能が抑制された
り、または増強されたりすることが知られている。そこ
で、これらの細胞の機能を調べることにより、生体の免
疫機能を把握することが種々の病態把握や、薬剤の投与
タイミングの決定などに重要である。従来、このよう
な、生体の免疫機能を測定する方法としては、例えば、
リンパ球幼若化試験や顆粒球貪食機能試験、顆粒球殺菌
能（活性酸素産生能）試験等が行われ、また、最近で
は、フローサイトメトリー装置と各種免疫担当細胞表面
抗原に対する蛍光標識モノクローナル抗体を用いた表面
抗原試験が行われてきた。しかしながら、これらの試験
には、細胞分離、細胞培養、顕微鏡測定等の用手法の特
殊な技術が要求され、また、時間がかかり、ＲＩ（ラジ
オアイソトープ）施設や高価な装置が必要なことから、
より簡単で危険性がなく、精度の良い検査方法が望まれ
ている。

【０００４】また、これらの免疫細胞から産生される各
種免疫因子等も、生体の免疫系で重要な役割を担ってい
る。特に、近年の細胞工学や遺伝子工学技術の発達等に
より、組換えＤＮＡ技術を用いて、多くの体液性免疫因
子（サイトカイン等）の遺伝子の構造が解明されてい
る。これまでに、インターロイキン、インターフェロ
ン、ＴＮＦ等のようなサイトカイン類等、種々のものが
報告されている。これらの因子は、互いに、密接に関わ
り合って、サイトカインネットワークをつくり、生体の
免疫機能を調節していることがわかってきた。現在で
は、生体の免疫系を考える上で、これらのサイトカイン
等の動態を知ることが、非常に重要なことと考えられて
いる。

【０００５】そのため、各種疾患の患者血液中のこれら
のサイトカインの血中濃度を調べることが最近行われる
ようになってきた。しかしながら、これらのサイトカイ
ンは非常に微量で生体内で作用しているために血中濃度
は低く、分解も早いため、通常これらのサイトカインの
測定は困難である。

【０００６】一方、サイトカインは、上記の免疫担当細
胞から産生されるため、患者の免疫担当細胞のサイトカ
インの産生能力を知ることも重要である。このような考
え方から、特表昭６３−５０２６９５号公報には、ツベ
ルクリン精製蛋白誘導体などの特異抗原と血液とを反応
させ、感作リンパ球から放出されるγ−インターフェロ
ンを測定する方法が開示されている。また、特開平２−
１９６９６１号公報には、血液にリポ多糖（ＬＰＳ）や
レクチンを反応させ、産生誘導されたリンフォカインを
測定する方法が開示されている。しかしながら、これら
の方法は、生体由来物質を用いているので、菌体等から
の精製工程が必要であり、ロット間差等の問題があり、
再現性の良い測定結果が得られないという問題点があ
る。また、リポ多糖やレクチンのような刺激剤を用いた
場合、細胞障害性試験や細胞増殖試験などのバイオアッ
セイによって、サイトカイン量を定量するとき、それら
の刺激剤による各種細胞への影響によって、正確な測定
が困難である。

【０００７】ＩＬ−１は主に単球・マクロファージ系の
細胞や好中球等の細胞から産生されるサイトカインであ
る。ＩＬ−１は種々の細胞に作用し、様々な生物活性を
示し、免疫、炎症、造血、内分泌、脳神経等の生体反応
に重要な役割を果たしている（Oppenheim,J.J. et al.:
There is more than one interleukin 1. Immunol. Tod
ay,7,45-56,1986)。また、正常個体においてもＩＬ−１
は恒常的に産生されており、生体の機能維持に必須な因
子であると考えられている。一方、ＩＬ−１が異常に産
生された場合では、炎症を伴う疾患の原因となることも
示唆されている。

【０００８】例えば、慢性関節リウマチ患者滑液中にＩ
Ｌ−１活性が検出されており、その活性と進行度との間
に相関性が認められていることから、ＩＬ−１の病態へ
の関与が示唆されている(Eastgare,J.A. et al. :Corre
lation of plasma interleukin 1 levels with disease
activity in rheumatoid arthriitis. Lancet, 8913,70
6-709,1988)。このほかにも、糸球体腎炎、肉芽腫、ア
ルツハイマー、ダウン症候群、川崎病、痛風、急性骨髄
性白血病等種々の疾患でもＩＬ−１の関与が示唆されて
いる。ＩＬ−１は全身の様々な組織や細胞で非常に多彩
な作用を示し、感染症や炎症性疾患に見られる生体の様
々な反応に関与していることが分かってきた。このよう
に、病態時でのＩＬ−１の産生や産生能力、及びその動
態を知ることは極めて重要になってきている。

【０００９】しかしながら、血液中のＩＬ−１の産生量
と疾患との関係が明確に証明されているものはあまり多
くない。これは、ＩＬ−１の作用が非常に強力で、ｐｇ
／ｍｌオーダーの濃度で作用するため、生体で機能異常
を起こし得る産生量の変化を現在の測定系では正確に検
出できていないという可能性も考えられる。

【００１０】他方、ＴＮＦは腫瘍に壊死をもたらすサイ
トカインである。当初は腫瘍細胞を障害する因子として
注目されたが、現在では、正常細胞においても炎症や代
謝異常に係わる多彩な作用を示すことが知られている。
このように、ＴＮＦは全身の様々な組織や細胞で非常に
多彩な作用を示し、感染症や炎症性疾患に見られる生体
の様々な反応に関与していることがわかってきた。従っ
て、病態時でのＴＮＦの産生や産生能力、及びその動態
を知ることは極めて重要になってきている。

【００１１】例えば、ＴＮＦは、慢性関節リウマチ、川
崎病、ベーチェット病を含む多くの炎症性疾患や髄膜
炎、マラリア等の感染症等の病態に重要な役割を持つと
されている（和田英夫、斎藤令子、長尾美昌ら：播種性
血管内凝固症候群における血中 Tumor necrosis factor
値並びにFOY 投与による治療効果．現代医療．22:265-2
69,1990)。

【００１２】このように、ＴＮＦは非常に広範な疾患の
病因と関わることが推測されているにもかかわらず、実
際の患者において、その産生量と疾患との関係が明確に
証明されているものはあまり多くない。これは、ＴＮＦ
の作用が非常に強力で、ｐｇ／ｍｌオーダーの濃度で作
用するため、生体で機能異常を起こし得る産生量の変化
を現在の測定系では正確に検出できていないという可能
性も考えられる。

【００１３】また、ＩＬ−６は主に単球・マクロファー
ジ系の細胞やリンパ球等の細胞から産生されるサイトカ
インである〔笠倉新平編集、日本医学館発行、「サイト
カイン９４」、７４−８１（１９９４）〕。ＩＬ−６は
種々の細胞に作用し、様々な生物活性を示し、免疫、炎
症、造血等の生体反応に重要な役割を果たしている。ま
た、正常個体においてもＩＬ−６は恒常的に産生されて
おり、生体の機能維持に必須な因子であると考えられて
いる。一方、ＩＬ−６が異常に産生された場合等では、
炎症を伴う疾患の原因となることも示唆されている。

【００１４】例えば、Castleman 病、多発性骨髄腫、メ
サンギゥム増殖性腎炎患者では、血中に高いＩＬ−６活
性が検出されており、その活性と進行度との間に相関性
が認められていることから、ＩＬ−６の病態への関与が
示唆されている。ＩＬ−６は全身の様々な組織や細胞で
非常に多彩な作用を示し、感染症や炎症性疾患に見られ
る生体の様々な反応に関与していることが分かってき
た。このように、病態時でのＩＬ−６の産生や産生能
力、及びその動態を知ることは極めて重要になってきて
いる。

【００１５】しかしながら、血液中のＩＬ−６の産生量
と疾患との関係が明確に証明されているものはあまり多
くない。これは、ＩＬ−６の作用が非常に強力で、ｐｇ
／ｍｌオーダーの濃度で作用するため、生体で機能異常
を起こし得る産生量の変化を現在の測定系では正確に検
出できていないという可能性も考えられる。

【００１６】そこで、最近では末梢血単球等を採取し、
試験管内でＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＬ−６の産生能を検討
し、疾患とこれらのサイトカインとの関係を明らかにし
ようという研究がなされている（小野日出麿、菊地秀、
中村志ら：癌患者におけるtumor necrosis factor 産生
能の検討．医学のあゆみ.150:165-166,1989 ）。

【００１７】しかしながら、血液中からの単球等の採
取、調製には無菌処理を含む煩雑な操作が必要であり、
操作時の手技が細胞に与える影響も大きい。また、これ
らの検査は、血液から分離調製した細胞を適当な培養液
中で行っており、血液中に含まれる種々の液性因子や他
の細胞が存在していない系であるため、正確に体内の生
体反応を反映しているとは言えない。

【００１８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
の検査方法の欠点を解消し、ＬＰＳや各種薬剤等の刺激
剤によるＩＬ−１、ＩＬ−６産生能ではなく、全血を用
いてより簡略化された測定系にて、ＩＬ−１又はＩＬ−
６産生能を測定することによって、生体反応検査を行
う、新しい検査方法を提供することにある。

【００１９】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を達
成するためになされたものであり、請求項１〜３に記載
の発明は、それぞれ、下記の構成を備える。

【００２０】すなわち、請求項１に記載の発明は、キチ
ン、キトサン、アガロース、アルギン酸、或いはこれら
の誘導体からなる高分子材料又はカチオン性官能基を有
する高分子材料と血液とを接触させることにより、ＩＬ
−１の産生を誘導させ、該ＩＬ−１の産生量を測定する
ことを特徴とする生体反応検査方法である。

【００２１】請求項２に記載の発明は、キチン、キトサ
ン、アガロース、アルギン酸、或いはこれらの誘導体か
らなる高分子材料又はカチオン性官能基を有する高分子
材料と血液とを接触させることにより、ＩＬ−６の産生
を誘導させ、該ＩＬ−６の産生量を測定することを特徴
とする生体反応検査方法である。

【００２２】また、請求項１又は２に記載の発明では、
請求項３に記載のように、好ましくは、上記高分子材料
が、血液と１５℃〜４２℃の温度範囲で接触される。上
記のように、請求項１〜３に記載の発明は、高分子材料
と血液とを接触させることにより、サイトカイン（ＩＬ
−１又はＩＬ−６）の産生を誘導し、該サイトカインの
産生量を測定することにおいて共通するものであり、上
記サイトカインの産生能力を測定することにより、免疫
や炎症等に関与する生体反応を検査することを可能とす
る、より正確かつ簡便な生体検査方法を提供するもので
ある。

【００２３】本発明の生体反応検査方法では、上記の通
り全血等をそのまま利用することもでき、その場合は該
血液より単球や好中球等を分離する必要がなく、それに
伴う操作や処理時間が不要であることは勿論のこと、そ
れらの操作、処理時間等による細胞の活性低下または不
要な活性化が惹起される問題もない。

【００２４】さらに、本発明では、検査に必要とされる
血液量も非常に少なくてすみ、被採血者の負担も軽減さ
れる。また、全血又はその希釈血液を用いるため、血液
中に含まれる様々な液性因子や細胞の関与が生体内と同
様に働き、より正確に生体内の防御機能を把握すること
ができる。

【００２５】以下、本発明について詳述する。本発明方
法の実施形態としての一例においては、サンプルとして
血液を採取し、この血液を全血のまま、または希釈して
組織培養用プレートや試験管等に加える。これらのプレ
ートウェルや試験管内壁の底面または側面は、細胞から
のＩＬ−１及びＩＬ−６の産生を誘導するための材料か
ら構成されているか、あるいはそれらの材料が塗布され
ているかまたは充填されている。これらの反応容器を用
いて血液を培養することにより、これらの材料と血液が
作用し合い、ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生が誘導され
る。このＩＬ−１又はＩＬ−６産生量を測定することに
より免疫や炎症等に関する生体反応を把握することがで
きる。

【００２６】上記において血液サンプルの採取は常法に
従い、任意の方法で実施できる。例えば、ヘパリン採
血、クエン酸採血等が挙げられる。ただし、ＩＬ−１及
びＩＬ−６の産生誘導は、細胞の生物学的反応の結果で
あるため、血液や培地中のカルシウムイオン、マグネシ
ウムイオンなどをキレートしないヘパリン採血などがよ
り好ましい。

【００２７】また、血液を希釈する場合には、例えばリ
ン酸緩衝液、ハンクス緩衝液、ＭＥＭ、ＲＰＭＩ−１６
４０等の通常の培地をいずれも利用できる。培養は、通
常３７℃付近の温度条件下で行われるが、１５℃から４
２℃の範囲でも行い得る。この培養時にプレートや試験
管を振盪器や回転培養器を用いて混和することが、ＩＬ
−１及びＩＬ−６の産生誘導には好ましく、個々の血液
サンプルの産生能力を把握し易くなる。

【００２８】培養後のＩＬ−１又はＩＬ−６の産生量の
測定は免疫酵素抗体法等の各種の免疫測定法で行い得
る。また、このＩＬ−１及びＩＬ−６産生誘導方法には
リポ多糖やレクチン等の刺激剤を用いないため、細胞障
害性試験や細胞増殖試験などのバイオアッセイによって
ＩＬ−１又はＩＬ−６の活性を測定する場合でも、各種
細胞へのそれらの刺激剤の影響もなく、正確な測定が可
能である。

【００２９】次に本発明の経緯について述べる。血液中
の単球や好中球などの白血球は、微生物のような異物と
反応すると、粘着反応、貪食反応を介して活性化し、細
胞内酵素の放出や活性化酸素、プロスタグランジン、サ
イトカイン等、種々のメディエーターを放出し、生体防
御反応において重要な役割を果たしている。これらの反
応は材料と接触するときにも同様に引き起こされる。例
えば、単球や好中球などの白血球は、ラテックス粒子の
ような合成高分子材料をも旺盛に貪食する。これは、材
料が異物とみなされて起こるものであるが、これらの反
応は高分子材料の表面性状、物理化学的組成等の性質に
よって大きく変わってくる。そのため、材料の性質を制
御することによって、この反応を制御できると考えられ
る。

【００３０】本発明者らは、上記の反応の中で、白血球
によるサイトカインの産生に注目し、種々の天然及び合
成高分子材料と血液との接触によるサイトカインの産生
誘導について、鋭意研究を行い、種々の高分子材料が血
液中でＩＬ−１及びＩＬ−６のようなサイトカインの顕
著な産生誘導を引き起こすことを発見した。特に、分子
中に水酸基、アミド骨格及びエステル骨格からなる群よ
り選ばれる少なくとも１つの化学構造を有する高分子材
料又はカチオン性官能基を有する高分子材料と血液とを
接触させることにより、顕著なＩＬ−１及びＩＬ−６の
産生誘導が認められたのに対して、ポリスチレン、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニルのような高
分子材料では、殆どＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導が
認められなかった。また、スルホン基やカルボキシル基
のようなアニオン性基だけを有する高分子材料では、低
いレベルのＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導を認めたに
過ぎなかった。

【００３１】本発明で用いられる、分子中に水酸基、ア
ミド骨格及びエステル骨格からなる群より選ばれる少な
くとも１つの化学構造を有する高分子材料は、アガロー
ス、アルギン酸、キチン、キトサンやそれらをカルボキ
シメチル化、スクシニル化、糖側鎖グラフト、ペプチド
側鎖グラフト、グリコール化、アシル化、アミノ化によ
って修飾した種々の誘導体である。

【００３２】例えば、本発明者らが得た知見では、キチ
ン及びそのＮ−脱アセチル化物であるキトサンやキトサ
ンのアミノ基に１級アミン、２級アミン、３級アミン又
は第４アンモニウム塩を導入したキトサン誘導体、アル
キル基を導入した誘導体、また、水酸基にスルホン基、
カルボキシメチル基を導入した誘導体などは血液との接
触によって、ＩＬ−１及びＩＬ−６の大きな産生誘導を
示した。また、アガロースやアガロースに２、３−ジブ
ロモプロパノールを強アルカリ条件下で作用させて架橋
することで強度を高めた架橋型アガロースや、それにジ
エチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基等のイオン交換基を
エーテル結合させたアガロース誘導体、第４アンモニウ
ム塩等で修飾したアガロース誘導体よりなるゲルビーズ
と血液との接触によっても、ＩＬ−１及びＩＬ−６の顕
著な産生誘導が見られた。また、アルギン酸ナトリウム
などを水に溶解させ、これらとＣａ²⁺、Ａｌ³⁺、Ｂ
ａ²⁺、Ｃｕ²⁺などの多価金属イオンを含む水溶液とを接
触させることにより作製したアルギン酸ゲルビーズと血
液との接触によっても、ＩＬ−１及びＩＬ−６の顕著な
産生誘導が見られた。

【００３３】また、本発明で用いられるカチオン性官能
基を有する高分子材料は、アミノ基、イミノ基、ニトリ
ロ基、第４アンモニウム基、スルホニウム基、ホスホニ
ウム基等を有する高分子材料であり、例えば、ポリビニ
ルピリジン及びその塩、イオネンポリマー、Ｎ−トリア
ルキルアミノメチルポリスチレン、アミノアセタール化
ポリビニルアルコール、ポリビニルイミダゾール、ポリ
エチレンイミン、ポリジアルキルジアリルアンモニウム
塩、ポリジアルキルジアリルアンモニウム塩−ＳＯ₂共
重合体、ポリビニルベンジルスルホニウム塩、ポリビニ
ルベンジルホスホニウム塩等が挙げられる。

【００３４】上記カチオン性官能基を有する高分子材料
は、天然多糖類及びポリスチレン等の合成高分子に種々
の化学修飾方法を用いて、上記カチオン性官能基を導入
したり、これらの官能基を有するビニルモノマー間の共
重合、架橋反応により得ることができる。例えば、スチ
レンとジビニルベンゼンを共重合し、Ｆｒｉｅｄｅｌ−
Ｃｒａｆｔｓ反応を介して、クロロメチル基をベンゼン
核に導入し、クロロメチル基をアミンで処理することに
よって、アミノ化し、しかる後にアルキル置換を行うこ
とにより、ポリスチレンにカチオン性官能基を導入する
ことができる。

【００３５】また、他の方法として、例えば、エピクロ
ルヒドリンのような分子内にクロルメチル基とオキシラ
ン環とを有する化合物にイミダゾール類を反応させ、変
性イミダゾールを合成し、これを多官能性エポキシ化合
物で樹脂化することによっても得ることができる。ま
た、カチオン性官能基を有する高分子材料については、
他にも種々の合成法が考えられるが、本発明はその方法
によって限定されるものではない。

【００３６】本発明者らが得た知見では、カチオン性基
として、トリアルキル置換窒素原子をもつトリメチルア
ンモニウム基やジアルキルエタノールであるジメチルエ
タノールアンモニウム基を導入したポリスチレン修飾体
は、未修飾のポリスチレンやアニオン性基で修飾したポ
リスチレンからなる材料に比較して、著しく大きなＩＬ
−１及びＩＬ−６の産生誘導を示した。また、カチオン
性基として、アミノ基またはイミノ基をもつものやニト
リロ基をもつものでも、ＩＬ−１及びＩＬ−６の大きな
産生誘導が確認された。一方、アニオン性基であるスル
ホン酸基を導入したポリスチレン誘導体では、ほとんど
ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導が見られなかった。

【００３７】また、ジメチルエタノールアンモニウム
基、ジエチルアミノ基、末端にアミノ基のようなカチオ
ン性基を有するメタクリル酸エステルモノマーの共重合
により得られたポリメタクリル酸エステル系材料は、顕
著なＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導を示した。一方ア
ニオン性基であるカルボキシル基を有するメタクリル酸
エステル系材料では、ほとんどＩＬ−１及びＩＬ−６の
産生誘導が見られなかった。

【００３８】また、キチン及びそのＮ−脱アセチル化物
であるキトサンやキトサンのアミノ基に１級アミン、２
級アミン、３級アミン又は第４アンモニウム塩を導入し
たキトサン誘導体、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）
基等のイオン交換基をエーテル結合させたアガロース誘
導体、第４アンモニウム塩等で修飾したアガロース誘導
体も、上述したように、特に高いＩＬ−１及びＩＬ−６
の産生誘導を示した。

【００３９】本発明において用いられる種々の上記高分
子材料の形状としては、粒子状、繊維状、中空糸状、膜
状等いずれの公知の形状のものでも用いることができ
る。例えば、スチレンモノマーにジビニルベンゼンとラ
ジカル開始剤ベンゾイルパーオキサイドを加えて、水中
で６０℃、５時間懸濁攪拌を続けるとスチレン・ジビニ
ルベンゼン共重合体球状粒子を容易に得ることができ
る。粒子径は攪拌速度、水中に加える安定剤の種類と濃
度、モノマーと水の容量比などで制御できる。また、希
釈剤とモノマーの混液の懸濁重合を行うことで、多孔質
化を行うことも容易である。また、各種メタクリル酸エ
ステルモノマーの重合をモノマーに対する良溶媒でかつ
ポリマーに対する貧溶媒中で懸濁重合を行うと、ポリメ
タクリル酸エステルの球状粒子を容易に得ることができ
る。粒子径は攪拌速度、添加する安定剤の種類と濃度な
どで制御することができる。こうして合成した球状粒子
に、前述のような化学修飾反応を行い、種々のＩＬ−１
及びＩＬ−６産生誘導材料が得られる。

【００４０】また、血液と上記材料とを接触させる方法
については、血液と上記材料が十分に接触され得る限
り、任意の方法を用いることができる。例えば、繊維状
の上記材料をカラムに充填し、該カラムに血液を循環さ
せる方法や、粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の材料を
カラムに充填し、血液を循環させる方法を用いることが
できる。さらに、血液中に種々の形状の上記材料を懸濁
させることにより、血液と上記材料を接触させてもよ
い。

【００４１】上記材料と血液を接触させる際の温度は、
１５℃〜４２℃の範囲がＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘
導を高める上で好ましい。本発明者らが得た知見では、
後述の実施例から明らかなように、接触温度が低くなる
と、ＩＬ−１及びＩＬ−６の十分な産生誘導は見られな
かった。また、接触温度が高くなると、ＩＬ−１及びＩ
Ｌ−６の十分な産生誘導は見られなかった。接触温度が
４５℃より高温度の場合には、血漿蛋白質の変性、著し
い溶血、白血球の崩壊が起こり、ＩＬ−１及びＩＬ−６
の産生誘導は激減した。

【００４２】本発明では、上記材料と血液とを接触させ
ることにより、上記材料と細胞との相互作用が起こり、
ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導が行われる。ＩＬ−１
又はＩＬ−６の産生細胞とは、末梢血中の細胞に限ら
ず、リンパ管、リンパ節、脾臓等から得られる細胞も含
まれる。血液中にはＩＬ−１又はＩＬ−６を産生するこ
れらの細胞が多く含まれている。また、血液中のこれら
の細胞が上記材料と作用し、ＩＬ−１及びＩＬ−６が産
生誘導されるが、直接作用しなくとも、上記材料と血液
中の何らかの因子とが作用して誘導された別の因子を介
して、ＩＬ−１又はＩＬ−６の産生が誘導されてもよ
い。

【００４３】上記材料を用いて、健常人あるいは各種疾
患の患者血液から簡便にＩＬ−１及びＩＬ−６を誘導す
ることができ、その誘導量の程度を測定することによ
り、個人のＩＬ−１及びＩＬ−６産生能力を調べること
ができる。これは、健康状態や種々の疾患の病態を反映
する有効なパラメーターとなり得る。

【００４４】（作用）上記のように、本発明によれば、上記特定の高分子材料
が血液と接触されることにより、ＩＬ−１及びＩＬ−６
が迅速にかつ簡便に誘導される。従って、検査される者
の血液から簡便にかつ迅速にＩＬ−１及びＩＬ−６の産
生誘導を行うことができるため、この産生量を測定する
ことにより、検査される者自身のＩＬ−１及びＩＬ−６
産生能力を調べることができる。

【００４５】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明するが、本発
明は、以下の実施例に限定されるものではない。まず、
下記の実施例１〜３１及び比較例１〜９に記載する方法
にて、ＩＬ−１及びＩＬ−６産生誘導用材料を作製し、
次いで得られた材料を用いて、ＩＬ−１及びＩＬ−６の
産生誘導を試験した。

【００４６】（キトサンまたはキトサン誘導体による産
生誘導用材料）実施例１キトサンのアミノ基がそのまま残っているキトサンゲル
粒子（富士紡績社製、商品名「Chitopearl basic AL-0
3」、平均粒径０．３ｍｍ）を、１５ｍｌ用ポリプロピ
レン試験管（岩城硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ充填
した。これに注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２
ｍｌ添加して軽く攪拌した後、５００ｒｐｍで５分間遠
心分離し、上澄みを吸引して捨てることにより洗浄し
た。この洗浄操作を更に２回繰り返した後、一晩４℃で
放置した。その後、同様の洗浄操作を更に５回行った
後、最後にできるだけ注射用生理食塩水を取り除いた。
２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf
社製）に、注射用生理食塩水を加えた後、１２０℃で２
０分間オートクレーブ滅菌し、注射用生理食塩水を廃棄
した後、さらに注射用生理食塩水で３度洗浄した。この
２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブに、上記で得
られたキトサンゲル粒子をかさ体積で５００μｌ充填し
た。

【００４７】実施例２実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」）に代えて、キトサンのア
ミノ基がアセチル化されたキトサン誘導体ゲル粒子（富
士紡績社製、商品名「Chitopearl basic BL-03」、平均
粒径０．３ｍｍ）を使用したことの他は、実施例１と同
様にして行い、キトサン誘導体ゲル粒子が充填された２
ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブを得た。

【００４８】実施例３実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンのア
ミノ基にベンジル基を介して１級アミンが導入されたキ
トサン誘導体ゲル粒子（富士紡績社製、商品名「Chitop
earl BCW-3503 」、平均粒径０．３ｍｍ）を使用したこ
との他は、実施例１と同様にして行い、キトサン誘導体
ゲル粒子が充填された２ｍｌ用ポリプロピレンサンプル
チューブを得た。

【００４９】実施例４実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンのア
ミノ基に直鎖アルキル基を介して１級アミンが導入され
たキトサン誘導体ゲル粒子（富士紡績社製、商品名「Ch
itopearl BCW-3003 」、平均粒径０．３ｍｍ）を使用し
たことの他は、実施例１と同様にして行い、キトサン誘
導体ゲル粒子が充填された２ｍｌ用ポリプロピレンサン
プルチューブを得た。

【００５０】実施例５実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンのア
ミノ基に３級アミンが導入されたキトサン誘導体ゲル粒
子（富士紡績社製、商品名「Chitopearl BCW-2603 」、
平均粒径０．３ｍｍ）を使用したことの他は、実施例１
と同様にして行い、キトサン誘導体ゲル粒子が充填され
た２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブを得た。

【００５１】実施例６実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンのア
ミノ基に第４アンモニウム塩が導入されたキトサン誘導
体ゲル粒子（富士紡績社製、商品名「Chitopearl BCW-2
503 」、平均粒径０．３ｍｍ）を使用したことの他は、
実施例１と同様にして行い、キトサン誘導体ゲル粒子が
充填された２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブを
得た。

【００５２】実施例７実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンの６
位の水酸基にカルボキシメチル基が導入されたキトサン
誘導体ゲル粒子（富士紡績社製、商品名「Chitopearl C
M-03」、平均粒径０．３ｍｍ）を使用したことの他は、
実施例１と同様にして行い、キトサン誘導体ゲル粒子が
充填された２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブを
得た。

【００５３】実施例８実施例１のキトサンゲル粒子（富士紡績社製、商品名
「Chitopearl basic AL-03」) に代えて、キトサンの６
位の水酸基にスルホン基が導入されたキトサン誘導体ゲ
ル粒子（富士紡績社製、商品名「Chitopearl SU-03」、
平均粒径０．３ｍｍ）を使用したことの他は、実施例１
と同様にして行い、キトサン誘導体ゲル粒子が充填され
た２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブを得た。

【００５４】実施例９キトサンのアミノ基がそのまま残っているキトサン粉末
粒子（カトキチ社製、商品名「CHITOSAN 10B」）５ｇ
を、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）３０ｍｌに懸濁
し、１５００ｒｐｍ、１分間の条件で遠心分離し、上澄
みを吸引して捨てることにより洗浄した。この洗浄操作
を更に２回繰り返した後、一晩４℃で放置した。その
後、同様の洗浄操作を更に５回行った後、最後にできる
だけ注射用生理食塩水を取り除いた。２ｍｌ用ポリプロ
ピレンサンプルチューブ（eppendorf 社製）に、注射用
生理食塩水を加えた後、１２０℃で２０分間オートクレ
ーブ滅菌し、注射用生理食塩水を廃棄した後、さらに注
射用生理食塩水で３度洗浄した。この２ｍｌ用ポリプロ
ピレンサンプルチューブに、上記で得られたキトサン粉
末をかさ体積で５００μｌ充填した。

【００５５】（アガロース及びアガロース誘導体による
産生誘導用材料）実施例１０アガロース（ナカライ化学社製、電気泳動用特製試薬
ＧＰ−３６）を５重量％濃度で蒸留水に溶解させ、１２
１℃で２０分間オートクレーブを行った。この溶液を６
０℃に保温しておき、冷蒸留水（４℃）中にマイクロシ
リンジを用いて滴下して、アガロースゲルビーズ（粒径
５ｍｍ）を作製した。

【００５６】このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社
製）に充填した。充填量はアガロースゲルビーズ２０個
とした。

【００５７】実施例１１約２重量％濃度のアガロースよりなる、 Sepharose 2B
(Pharmacia LKB Biotechnology 社製) の懸濁液３ｍｌ
を、１５ｍｌ用ポリプロピレン試験管（岩城硝子社製）
に入れた。これを１０００ｒｐｍで５分間遠心して、上
澄みを吸引して捨て、注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）を１２ｍｌ加えて攪拌し、同じ条件で遠心し、上澄
みを吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行い、４℃に
て一晩放置した。

【００５８】このゲル担体５００μｌ（かさ体積）を実
施例１と同様に、２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチュ
ーブ（eppendorf 社製）に入れて、注射用生理食塩水
（大塚製薬社製）にて洗浄した。

【００５９】実施例１２約６重量％濃度の架橋型アガロースよりなる、Sepharos
e CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnology社製）を用いた
こと以外は、実施例１１と同様に操作して、ゲル充填チ
ューブを得た。

【００６０】実施例１３約６重量％濃度の架橋型アガロースにジエチルアミノエ
チル（ＤＥＡＥ）基をエーテル結合で導入した、ＤＥＡ
ＥSepharose CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnology社
製）を用いたこと以外は、実施例１１と同様に操作し
て、ゲル充填チューブを得た。

【００６１】実施例１４約４重量％濃度の架橋型アガロースにエーテル結合を介
してフェニル基を導入した、Phenyl Sepharose CL-4B(P
harmacia LKB Biotechnology社製）を用いたこと以外
は、実施例１１と同様に操作して、ゲル充填チューブを
得た。

【００６２】実施例１５約６重量％濃度の架橋型アガロースに第４アンモニウム
塩を導入した、Q Sepharose FF(Pharmacia LKB Biotech
nology社製）を用いたこと以外は、実施例１１と同様に
操作して、ゲル充填チューブを得た。

【００６３】（アルギン酸ゲルによる産生誘導用材料）実施例１６２重量％のアルギン酸ナトリウム（ＡＬ−１、中粘度タ
イプ、新田ゼラチン社製）を生理食塩水に懸濁して、オ
ートクレーブにより１２１℃、２０分で処理すること
で、加熱滅菌と同時にアルギン酸ナトリウムを溶解させ
た。これを滅菌済み１．５重量％塩化カルシウム溶液中
へ滴下してゲル化させることにより、粒径約２．５ｍｍ
のアルギン酸カルシウムのゲルビーズを作製した。この
ゲルビーズを１５ｍｌ用ポリピロプレン試験管（岩城硝
子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れた。これに注射用生
理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ添加して軽く攪拌
した。５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引して
捨て、同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２
ｍｌ加えて攪拌し、遠心して上澄みを吸引して捨てた。
この洗浄操作を３回行い、一晩４℃にて放置した。その
後、同じ洗浄操作を５回行い、最後にできるだけ生理食
塩水を取り除いた。

【００６４】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf
社製）にこのゲルビーズを７０個充填した。

【００６５】実施例１７２重量％のアルギン酸ナトリウムを５重量％の濃度のも
のに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６６】実施例１８２重量％のアルギン酸ナトリウムを１０重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６７】実施例１９１．５重量％の塩化カルシウム溶液を３重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６８】実施例２０１．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更した以外はすべて実施例１６と同
様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００６９】実施例２１１．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更し、５重量％のアルギン酸ナトリ
ウムを３重量％の濃度のものに変更した以外はすべて実
施例１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得
た。

【００７０】実施例２２アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（100 〜
150cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７１】実施例２３アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（300 〜
400cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７２】実施例２４アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（500 〜
600cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７３】（ポリスチレン修飾体による産生誘導用材
料）実施例２５トリメチルアンモニウム基をもつ、スチレン・ジビニル
ベンゼン共重合体である、ＤｉａｉｏｎＳＡ１１Ａ
（三菱化成社製）を５０ｍｌポリプロピレン試験管（岩
城硝子社製）に、かさ体積で３ｍｌ入れた。これにメタ
ノール（和光純薬社製液体クロマトグラム用グレー
ド）４０ｍｌを添加して、軽く攪拌した。静置後、上清
を吸引して除去した。これを３回行った後、同様にメタ
ノール４０ｍｌを添加して、室温にて一晩静置した。

【００７４】次に、メタノールを吸引して除き、同様に
メタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み蒸
留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍで
１分間遠心し、上済みを吸引して除き、同様に滅菌済み
蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留水
４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。

【００７５】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上済みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。その後、同じ洗浄操作を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。注射用
生理食塩水を充填して滅菌洗浄した２ｍｌ用ポリプロピ
レンサンプルチューブ（eppendorf 社製）に、このポリ
スチレン粒子をかさ体積で５００μｌ充填した。

【００７６】実施例２６用いたポリスチレン粒子を、ジメチルエタノールアンモ
ニウム基をもつ、ＤｉａｉｏｎＳＡ２１Ａ（三菱化成社
製）に変更した以外はすべて実施例２５と同様にして行
い、粒子充填チューブを得た。

【００７７】実施例２７用いたポリスチレン粒子を、アミノ基とイミノ基を含む
〔−ＣＨ₂ＮＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ）n Ｈ（ｎ＝１〜
３）〕をもつ、ＤｉａｉｏｎＷＡ２１（三菱化成社
製）に変更した以外はすべて実施例２５と同様にして行
い、粒子充填チューブを得た。

【００７８】実施例２８用いたポリスチレン粒子を、ニトリロ基を含む〔−（Ｃ
Ｈ₂ ）n Ｎ（ＣＨ₃ ）₂ （ｎ＝１〜３）〕をもつ、Ｄｉ
ａｉｏｎＷＡ３０（三菱化成社製）に変更した以外は
すべて実施例２５と同様にして行い、粒子充填チューブ
を得た。

【００７９】（ポリメタクリル酸エステル誘導体による
産生誘導用材料）実施例２９ジメチルエタノールアミンで修飾されている、ポリメタ
クリル酸エステル系材料である、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ
ＦＰ−ＱＡ１３（三菱化成社製）を５０ｍｌ用ポリプロ
ピレン試験管（岩城硝子社製）に、かさ体積で３ｍｌ入
れた。これにメタノール（和光純薬社製液体クロマト
グラム用グレード）４０ｍｌを添加して、軽く攪拌し
た。静置後、上清を吸引して除去した。これを３回行っ
た後、同様にメタノール４０ｍｌを添加して、室温にて
一晩静置した。

【００８０】その後、メタノールを吸引して除き、同様
にメタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み
蒸留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍ
で１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、同様に滅菌済
み蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留
水４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。

【００８１】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加した軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。しかる後、同じ洗浄装置を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。

【００８２】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf
社製）に、このポリメタクリル酸エステル系材料の粒子
をかさ体積で５００μｌ充填した。

【００８３】実施例３０用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、ジエチルア
ミノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳＦＰ−ＤＡ１３（三
菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例２９と同様
にして行い、粒子充填チューブを得た。

【００８４】実施例３１用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、末端にアミ
ノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳＦＰ−ＨＡ１３（三菱化
成社製）に変更した以外はすべて実施例２９と同様にし
て行い、粒子充填チューブを得た。

【００８５】比較例１注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄した２ｍｌ用
ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社製）。

【００８６】比較例２用いたポリスチレン粒子を、未修飾のポリスチレン粒子
であるテクポリマー：ＳＢ−１００Ｓ（積水化成品工業
社製）に変更した以外はすべて実施例２５と同様にして
行い、粒子充填チューブを得た。

【００８７】比較例３用いたポリスチレン粒子をスルホン酸基をもつスチレン
・ジビニルベンゼン共重合体である、ＤｉａｉｏｎＳ
Ｋ１Ｂ（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例
２５と同様にして行い、粒子充填チューブを得た。

【００８８】比較例４用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、カルボキシ
ル基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳＦＰ−ＣＭ１３（三菱化
成社製）に変更した以外はすべて実施例２９と同様にし
て行い、粒子充填チューブを得た。

【００８９】比較例５ポリエチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社
製）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。

【００９０】比較例６ポリスチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社
製）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。

【００９１】比較例７ポリ塩化ビニルのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社
製）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。

【００９２】比較例８ポリプロピレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用ポリプロピレンサンプルチューブ（eppendorf 社
製）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。

【００９３】比較例９ポリテトラフルオロエチレンプロピレン共重合体のビー
ズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形により作製した。次に
このビーズをメタノールで洗浄後乾燥した。次に、この
ビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄後、
同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用ポリプロピ
レンサンプルチューブ（eppendorf 社製）に充填した。
充填量はビーズ７０個とした。

【００９４】ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導試験実施例１〜３１及び比較例１〜９で得られた材料を用い
て、ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導試験を行った。Ｉ
Ｌ−１及びＩＬ−６の産生誘導試験とその測定方法は以
下のように行った。（１）ＩＬ−１及びＩＬ−６産生誘導試験実施例１〜３１及び比較例１〜９で得られた各チューブ
にヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍ１を加えて回
転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒ
ｐｍで転倒混和した。しかる後、血液を回収し、以下の
方法で血漿中のＩＬ−１及びＩＬ−６の濃度を測定し
た。

【００９５】（２）血漿中ＩＬ−１及びＩＬ−６濃度測
定方法ＩＬ−１及びＩＬ−６産生誘導試験後の血液を遠心分離
して血漿を採取し、血漿中のＩＬ−１及びＩＬ−６の濃
度を次のようにして測定した。ＩＬ−１の濃度は、ＩＬ
−１モノクローナル抗体を用いて、免疫酵素抗体法
（（Ｍｅｄｇｅｎｉｘ社製ＩＬ−１β ＥＡＳＩＡ）
にて測定した。この測定方法の検出限界濃度は４０ｐｇ
／ｍｌであった。ＩＬ−６の濃度は、ＩＬ−６モノクロ
ーナル抗体を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System
社製、商品名:Quantikine IL-6R ）にて測定した。この
測定方法の検出限界濃度は２．８ｐｇ／ｍｌであった。

【００９６】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＩＬ−１及びＩＬ−６の濃度を同
様にして測定した。採血直後の血液の血漿中ＩＬ−１及
びＩＬ−６濃度は何れも検出限界以下であった。各実施
例及び比較例のＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導試験の
結果を表１〜３に示した。

【００９７】

【表１】

【００９８】

【表２】

【００９９】

【表３】

【０１００】実施例１〜３１及び比較例１〜９の結果か
ら以下のことが分かる。採血直後の血漿中のＩＬ−１及
びＩＬ−６の濃度は検出限界以下であり、注射用生理食
塩水で洗浄した２ｍｌ用チューブに血液を充填しただけ
のもの（比較例１）では、血漿中のＩＬ−１及びＩＬ−
６の濃度は検出限界以下であった。表１〜３の結果か
ら、分子中に水酸基、アミド骨格及びエステル骨格から
なる群より選ばれる少なくとも１つの化学構造を有する
高分子材料又はカチオン性官能基を有する高分子材料
は、血液との接触によって特に高いＩＬ−１及びＩＬ−
６の産生を誘導することが明らかである。未修飾のポリ
スチレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニルなどの疎水性
高分子材料やアニオン性官能基だけを有する高分子材料
では、ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生を殆ど誘導しなかっ
た。

【０１０１】（接触温度の産生誘導に及ぼす影響）実施例３２実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０２】実施例３３実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、１５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０３】実施例３４実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、３０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０４】実施例３５実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、４０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０５】実施例３６実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、４２℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０６】比較例１０実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、１０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０７】比較例１１実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌｂａｓｉｃＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンサンプルチューブにヘパリン採
血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り
付けて、４５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混
和した。

【０１０８】混和後の各血液を遠心分離して血漿を採取
し実施例１〜３１の評価方法と同様にして、血漿中のＩ
Ｌ−１及びＩＬ−６の濃度を測定した。また、採血直後
の血液を遠心分離して血漿を採取して、血漿中のＩＬ−
１及びＩＬ−６の濃度を同様にして測定した。採血直後
の血液の血漿中ＩＬ−１及びＩＬ−６濃度は何れも検出
限界以下であった。結果を表４に示す。

【０１０９】

【表４】

【０１１０】表４の結果から明らかなように、血液と上
記ＩＬ−１及びＩＬ−６誘導材料との接触温度が、１５
〜４２℃の範囲では、ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導
がみられた。また、１５℃未満及び４２℃より高い温度
のときには、ＩＬ−１及びＩＬ−６の産生誘導は殆どみ
られなかった。

【０１１１】

【発明の効果】検査される者自身の血液からのＩＬ−１
又はＩＬ−６産生誘導量を測定することによって、検査
される者の免疫、炎症に関係する生体反応を検出するこ
とが可能になり、種々の疾患の予防や各種疾患における
病態の把握、治療のための薬剤投与量や治療方法の決定
に役立つ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献特開平７−151752（ＪＰ，Ａ) 特開平７−159397（ＪＰ，Ａ) 特開平７−67955（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/50 G01N 33/53

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】キチン、キトサン、アガロース、アルギ
ン酸、或いはこれらの誘導体からなる高分子材料又はカ
チオン性官能基を有する高分子材料と血液とを接触させ
ることにより、インターロイキン−１（ＩＬ−１）の産
生を誘導させ、該ＩＬ−１の産生量を測定することを特
徴とする生体反応検査方法。
【請求項２】キチン、キトサン、アガロース、アルギ
ン酸、或いはこれらの誘導体からなる高分子材料又はカ
チオン性官能基を有する高分子材料と血液とを接触させ
ることにより、インターロイキン−６（ＩＬ−６）の産
生を誘導させ、該ＩＬ−６の産生量を測定することを特
徴とする生体反応検査方法。
【請求項３】前記高分子材料と血液とを１５℃〜４２
℃の範囲で接触させる請求項１又は２に記載の生体反応
検査方法。