JP3510591B2

JP3510591B2 - ポリエトキシル化レチンアミド誘導体およびその製造方法

Info

Publication number: JP3510591B2
Application number: JP2000541145A
Authority: JP
Inventors: ボンヨルチョン; ヨンクンキム; インサンリー; ボンジュンパク; ワングーチョー; ヨンスクソング; ムンオクパク; ヨンドゥクキム; ソンジュンリー
Original assignee: エルジケミカルリミテッド
Priority date: 1998-03-30
Filing date: 1999-02-04
Publication date: 2004-03-29
Anticipated expiration: 2019-02-04
Also published as: KR100297061B1; US6316644B1; WO1999050240A1; ATE239701T1; EP1068181B1; EP1068181A1; DE69907656D1; KR19990077401A; DE69907656T2; JP2002509914A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は皮膚老化抑制剤として有用な下記化学式（Ｉ）
で示されるポリエトキシル化レチンアミド誘導体および
化学式（Ｉ）の化合物を製造する方法に関するものであ
る。

【０００２】

【化３】

【０００３】（式中、Ｒは水素またはＣ_1-6−低級アル
キルを示し、ｎは２〜１００の数である。）本発明によ
る化学式（Ｉ）の１３−トランス−ポリエトキシル化レ
チンアミド誘導体は非刺激性であるのみならず、皮膚吸
収力とコラーゲン合成効能が増進した特性を示す。した
がって、化学式（Ｉ）の化合物は医薬および化粧品の機
能性原料として有用に使用することができる。したがっ
て、本発明はまた化学式（Ｉ）の化合物を有効成分とし
て含有する化粧料組成物に関するものである。

【０００４】（背景技術）長期間の日光露出は、しわ、肌荒れ、そばかすなど特徴
的な皮膚の光老化のみならず、ケラトシス（keratosi
s）のような皮膚癌など、数多い皮膚不均衡を引き起こ
す。このような皮膚の光老化はトレチノイン（all−tra
ns−レチン酸）を含有するクリーム製剤を皮膚に塗る場
合改善されると報告している［参照："Topical Tretino
in Improves Photoaged Skin", JAMA, 259, Vol. 4, pp
95, 527-532, Jan, 22/29, 1988, the authors Webb e
t. al.］。しかし、トレチノインは脂溶性のため、皮膚
吸収力が低く生体内で不安定であり、皮膚に刺激的であ
り、さらには皮膚乾燥、創傷、皮むけなどの副作用をも
たらす。このような副作用によってトレチノインを医薬
および化粧品の主原料として使用するのに多難であっ
た。したがって、光老化の抑制というトレチノインの活
性をそのまま保持しながらも非刺激的な新たな機能性原
料の開発が至急に求められている。

【０００５】トレチノインに比べてさらに改善された皮
膚老化抑制剤の一つとして、１３−トランス−レチン酸
のエステルまたはアミド誘導体は、皮膚疾患およびニキ
ビに治療効果を示すことが報告されている。すなわち、
２−（all−trans−レチノイルオキシ）−４−メトキシ
アセトフェノン化合物は割合低刺激性でありながらも皮
膚癌や光老化の抑制に効果を示すことが報告されており
［参照：米合衆国特許第４，６７７，１２０号］、レチ
ン酸とテトラエチレングリコールとのエステル化によっ
て得られる化合物は皮膚に対する浸透効果が増加するも
のと報告している［参照：米合衆国特許第４，９００，
４７８号］。さらに、Ｎ−（４−ヒドロキシ−フェニ
ル）レチンアミド（４−ＨＰＲ）及びレチノイルβ−グ
ルクロニド（ＲＡＧ）もまたレチン酸の活性を有しなが
らも相対的に毒性が減少することが報告されている［参
照：FASEB J., 10, 1014-1024, 1996］。

【０００６】しかし、上記言及のレチン酸のエステルお
よびアミドは脂溶性のため、根本的に皮膚吸収力が弱く
コラーゲン合成の増進機能およびエラスチン分解防止効
果を大きく期待するのは難しい。さらにこれらは生体内
での迅速な酵素分解のために、安定性に問題があると指
摘されている。したがって、上述のレチン酸のエステル
およびアミド誘導体が既存のレチノイド系皮膚老化防止
用原料薬品の使用上に代表的な短所である刺激性をある
程度克服したというものの、外皮からの吸収力を増加さ
せ、生体内での細胞再生機能が極大化させ、安定性を向
上させるという新たな皮膚老化抑制剤に対する願望は依
然として残っている。

【０００７】したがって、本発明者らは従来のレチノイ
ド系皮膚老化抑制剤の問題点を解決すべく集中的な研究
を行ない、その過程で、ポリエチレングリコール誘導体
は、界面活性力に優れ、その親水性による皮膚吸収力増
進効果があることのみならず、水に溶解し容易に排泄さ
れるために、残留毒性を極小化することのできる好まし
い性質があることを見出した。これによって本発明者ら
はポリエチレングリコール誘導体とレチン酸誘導体のア
ミド縮合反応によって得られる新たな化学式（Ｉ）のポ
リエトキシル化レチンアミド誘導体を開発した。このよ
うにして開発した化学式（Ｉ）化合物は既存のレチン酸
誘導体に比べ、化学的安定性と皮膚吸収力が優れ、究極
的に皮膚再生において卓越した効果を示す。

【０００８】（発明の開示）したがって、本発明の目的は、皮膚老化抑制剤として有
用に使用できる下記化学式（Ｉ）で示されるポリエトキ
シル化レチンアミド誘導体を提供することである。

【０００９】

【化４】

【００１０】（式中、Ｒは水素またはＣ_1-6−低級アル
キルを示し、ｎは２〜１００の数である。）本発明の他
の目的は、上述の化学式（Ｉ）の化合物を製造する方法
を提供することである。

【００１１】本発明のさらに他の目的は、化学式（Ｉ）
の化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を提供
することである。

【００１２】本発明の性質および目的の徹底した理解の
ため、添付の図面を参照して詳細に説明すると次の通り
である。

【００１３】（発明の詳細な説明）本発明は下記化学式（Ｉ）で示されるポリエトキシル化
レチンアミド誘導体に関するものである。

【００１４】

【化５】

【００１５】（式中、Ｒは水素またはＣ_1-6−低級アル
キルを示し、ｎは２〜１００の数である。）上記化学式
（Ｉ）の化合物の中でもさらに望ましい化合物はＲが水
素またはメチルであり、ｎが４〜４０の数の化合物であ
る。

【００１６】さらに、本発明は新規な化学式（Ｉ）の化
合物を製造する方法を提供する。化学式（Ｉ）の化合物
は、１）下記化学式（IIa）の化合物を溶媒中で有機ア
ミン触媒存在下に下記化学式（IIIa）のモノ−メトキシ
ポリエチレングリコールアミンと反応させるか、２）下
記化学式（IIb）の化合物を溶媒中で縮合剤および触媒
の存在下に化学式（IIIa）の化合物と反応させるか、ま
たは３）下記化学式（IIc）の化合物を溶媒中で塩基存
在下に下記化学式（IIIb）のモノ−メトキシポリエチレ
ングリコールハライドまたはスルホネートと反応させる
ことにより製造することができる。

【００１７】

【化６】

【００１８】（式中、Ｒおよびｎは前記の定義した通り
であり、Ｘ¹はハロゲンを示し、Ｘ²はハロゲン、ｐ−ト
ルエンスルホニルまたはメタンスルホニルを示す。）上
記製造方法に対し、さらに具体的に説明すると次の通り
である。

【００１９】方法１）で触媒として作用する有機アミン
では、ピリジンまたはトリエチルアミンが好ましく用い
られ、溶媒としては無水有機溶媒、例えばジクロロメタ
ン、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフランおよびジ
エチルエーテルからなる群より選ばれた１種以上が好ま
しく用いられる。この方法で有機アミンは、化学式（II
Ia）の化合物１モルに対し、１．０〜２．０モルの比率
で使用するのが望ましい。

【００２０】方法２）で縮合剤としては、Ｎ，Ｎ−カル
ボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）またはＮ，Ｎ−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用し、縮合反
応を促進する触媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピ
リジン（ＤＭＡＰ）または１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢＴ）が好ましく用いられる。さらに、こ
の方法で溶媒としては、方法１）で説明したものと同じ
種類の溶媒が好ましく用いられる。反応は、通常窒素雰
囲気下に光と水分を遮断した状態で進行し、冷却および
加温状態で行われる。

【００２１】方法３）で塩基としては、水素化ナトリウ
ム、水酸化ナトリウム、水素化カリウム、炭酸ナトリウ
ムまたは炭酸カリウムのような金属塩基、及びピリジ
ン、トリエチルアミンのような有機塩基からなる群より
選ばれた１種以上が好ましく用いられる。この方法で溶
媒としては方法１）で説明したものと同じ種類を用いる
ことができる。

【００２２】しかし、本発明による方法で用いられる塩
基、縮合剤、触媒および溶媒が上述のものだけに限定さ
れるのではなく、関連する技術分野で同様の目的で通常
使用されている公知の試薬は、反応に悪影響を与えない
範囲内でいずれも用いることができる。

【００２３】本発明の方法で出発物質として用いられる
化学式（IIa）のハライド化合物は、化学式（IIb）のカ
ルボン酸化合物を、三塩化リン、チオニルクロリドなど
の様なハロゲン化剤と反応させることによって製造する
ことができ、化学式（IIIa）または（IIIb）のポリエチ
レングリコール誘導体は、公知の方法［参照：(1)S. Za
lipsky, C. Gilon and A. Zilkha, Eur. Polym. J., Vo
l. 19, No. 12, pp1177-1183, 1983, 及び(2) J. Milt
on. Harris, N. H. Hundley, T. G. Shannon and E. C.
Struck, J. Org. Chem., 1982, 47, 4789-4791］によ
って容易に製造することができる［実施例１の（Ｂ）参
照］。

【００２４】上述の方法で製造した化学式（Ｉ）の化合
物は、通常の分離、精製方法、たとえば再結晶やカラム
クロマトグラフィーを使用して精製することができる。

【００２５】化学式（Ｉ）の化合物は、皮膚癌やニキビ
のような皮膚疾患による”しわ”、”そばかす”などの
治療に使用することができる。特に、化学式（Ｉ）の化
合物は、投薬による皮膚刺激性がない、皮膚吸収力が優
れてコラーゲン生合成を極大化する、およびエラスチン
分解防止によって皮膚再生効果を示すなどの特徴を有し
ている。

【００２６】本発明による化学式（Ｉ）の化合物の生理
活性を確認するための試験を次のように行なった。ま
ず、経皮吸収実験は８週齢雌性マウスの背部皮膚を切り
取ることによって行ない、３５ｍＭの試験試料を適用し
た後、経皮吸収測定機器（Franz cell）およびＨＰＬＣ
を使用して分析した。細胞毒性実験はＶ７９−４細胞を
用いたＭＴＴ評価方法で行なった。皮膚刺激性実験は、
ギニーピッグ（guinea pig）を用いたパッチ実験を通じ
て、水とプロピレングリコールのＯ／Ｗ剤形およびＬｅ
ｘｏｌＧＴ−８６５を使用し、試験サンプルの濃度範
囲０．１〜１％で行なった。皮膚器官培養実験は、無毛
雌性マウスを対象にＭＴＴ法を使用して行なった。アレ
ルギーテストは、エタノールを運搬媒介物として使用
し、マウス（Ｂａｌｂ／ｃ）を対象に行なった。さら
に、細胞再生効果はヒト繊維芽細胞に対するコラーゲン
合成増進効果を測定した。

【００２７】このような実験の結果、本発明による化学
式（Ｉ）の化合物は、既存に商業的に用いられて来てい
る皮膚老化抑制用医薬および化粧料用原料であるレチン
酸またはレチノールパルミテートなどと比較し、経皮吸
収力において２〜１０倍の増加程度を示し、細胞毒性実
験では１０^-4ｗ％／ml以下の濃度で無毒性である特性を
有するものと確認された。したがって、化学式（Ｉ）の
化合物は、その無毒性、非刺激性の物性に加えて、極大
化された皮膚吸収力およびこれによる優れたコラーゲン
合成増進機能を有するので、医薬および化粧品（クリー
ム、ローション、ゲルなどの形態）に皮膚老化防止用添
加剤として便利に使用することができる。

【００２８】

【実施例】以下、本発明を下記実施例および実験例に基
づき、より具体的に説明する。しかし、これら実施例お
よび実験例は本発明による理解のためのものであるだけ
で、いかなる意味でも本発明の範囲がこれら実施例に限
定されるのではない。

【００２９】実施例１：化学式（Ｉ）のポリエトキシル
化レチンアミド（Ｒ＝メチル、ｎ＝９．８）の製造（Ａ）ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）３．
４１ｇ（０．０１６５ｍｏｌ）を１−アミノ−ポリエチ
レングリコール−モノメチルエーテル（化学式（III
a）、平均分子量５５０）６．９８ｇ（０．０１２６ｍ
ｏｌ）、レチン酸４．５４ｇ（０．０１５１ｍｏｌ）お
よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１．７ｇ（０．
０１２６ｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液５０ｍｌに
加えた後、窒素下で光と水分を遮断し、常温で８時間攪
拌した。反応溶液を濾過した後、溶媒を減圧蒸留して除
去した。残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して
（ＳｉＯ₂、メッシュサイズ２７０〜４００、ジクロロ
メタン／メタノール＝１５：１、ｖ／ｖ）標題化合物
（ワックス形態の淡黄色液体、Ｔｍ＝−１５℃、Ｒｆ＝
０．２２）９．４２ｇ（収率：７５％）を得た。

【００３０】（Ｂ）上記（Ａ）で使用された出発物質で
ある１−アミノ−ポリエチレングリコール−モノメチル
エーテル（化学式（IIIa））はポリエチレングリコール
−モノメチルエーテルから３段階反応を経て下記のよう
に製造した。

【００３１】i）ポリエチレングリコールモノメチルエ
ーテル５５ｇ（０．１ｍｏｌ）をトルエン３００ｍｌに
溶解し、蒸留して乾燥した。残留物に無水ピリジン７．
９ｇ（０．１ｍｏｌ）を加えた。反応液を加熱還流しな
がら、チオニルクロリド７．３ｍｌを３０分かけて滴加
した。滴加完了後、４時間反応液を加熱還流した後、常
温まで冷却した。反応液を濾過し、ピリジン塩酸塩を除
去した後、トルエンを減圧下で除去した。残留物をジク
ロロメタンに溶解し、無水炭酸カリウムで乾燥した後、
濾過した。濾液を活性アルミナ（１００ｇ）で処理し、
濾過した後に減圧蒸留してクロロ−ポリエチレングリコ
ールモノメチルエーテル［ＭＰＥＧ₅₅₀−Ｃｌ］５６ｇ
（収率：９９％、Ｔｍ＝−１０℃、無色液体）を得た。

【００３２】ii）段階i）で得たＭＰＥＧ₅₅₀−Ｃｌ５
６ｇ（０．０９９ｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）３００ｍｌに溶解した。得られた溶液にアジ化ナ
トリウム（ＮａＮ₃）５１．２ｇ（０．７９ｍｏｌ）を
加えて３時間１２０℃で加熱した。反応液を冷却、濾過
した後、減圧蒸留してＤＭＦを除去した。残留物をジク
ロロメタンに溶解し、水で洗浄した。有機層を分離し
て、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過および減圧蒸
留してアジド−ポリエチレングリコールモノメチルエー
テル［ＭＰＥＧ₅₅₀−Ｎ₃］５５ｇ（収率：９８％、Ｔｍ
＝−１１℃、無色液体）を得た。

【００３３】iii）段階ii）で得たＭＰＥＧ₅₅₀−Ｎ₃
５５ｇとトリフェニルホスフィン（Ｐｈ₃Ｐ）２８．４
ｇ（０．１０７ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３００ｍ
ｌに溶解した後、水３ｍｌを加えた。反応混合物を常温
で８時間攪拌した。反応液を減圧蒸留して溶媒を除去
し、残留物をジクロロメタンに溶解した後、水で洗浄し
た。有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥して
濾過した後、減圧蒸留した。得られた混合物をシリカゲ
ル［ＳｉＯ₂］（３００ｇ）に通して、副生成物である
トリフェニルホスフィンオキシドを除去した後に減圧蒸
留し、１−アミノ−ポリエチレングリコールモノメチル
エーテル［ＭＰＥＧ₅₅₀−ＮＨ₂］４５ｇ（収率：８５
％、淡黄色液体、Ｔｍ＝−１２℃）を得た［参考文献：
BioconjugateChem., Vol. 7, No. 2, 1996］。

【００３４】実施例２：化学式（Ｉ）のポリエトキシル
化レチンアミド（Ｒ＝メチル、ｎ＝９．８）の製造レチン酸４．０ｇ（０．０１３ｍｏｌ）を無水トルエン
２０ｍｌに溶解した後、そこに三塩化りん（ＰＣｌ₃）
１．８３ｇ（０．０１３ｍｏｌ）を滴加して、反応混合
物を、常温で光と水分を遮断し、窒素下で１５時間攪拌
した。

【００３５】上記得られたレチン酸クロリド溶液を、実
施例１（Ｂ）で得られた１−アミノ−ポリエチレングリ
コールモノメチルエーテル７．１５ｇ（０．０１３ｍｏ
ｌ）およびトリエチルアミン１．５７ｇ（０．０１６ｍ
ｏｌ）とともに、氷冷下で２０分かけて無水メチレンク
ロリド４０ｍｌに滴加した後、混合物を５時間常温で攪
拌した。反応液を飽和塩化ナトリウム５０ｍｌに加えて
有機層を分離し水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥
し、濾過および濃縮した。残留物をカラムクロマトグラ
フィーで分離し（シリカ、メッシュサイズ２００〜４０
０、メチレンクロリド／メタノール＝１５：１、ｖ／
ｖ）、淡黄色の標題化合物９．１ｇ（収率：８６％）を
得た。

【００３６】実施例３：化学式（Ｉ）のポリエトキシル
化レチンアミド（Ｒ＝メチル、ｎ＝９．８）の製造（Ａ）レチンアミド３ｇ（０．０１ｍｏｌ）の無水トル
エン２０ｍｌ溶液を、水素化ナトリウム０．５８ｇ
（０．０１２ｍｏｌ）の無水トルエン１０ｍｌ溶液に氷
冷下で滴加した後、常温で４時間攪拌した。上記混合液
にモノメトキシポリエチレングリコールｐ−トルエンス
ルホネート７．１１ｇ（０．０１ｍｏｌ）の無水トルエ
ン２０ｍｌ溶液を１０分かけて滴加した後、常温で１０
時間攪拌した。反応液を減圧蒸留して濃縮した。残留物
をカラムクロマトグラフィーで分離し（シリカ、メッシ
ュサイズ２００〜４００、メチレンクロリド／メタノー
ル＝１５：１、ｖ／ｖ）、淡黄色の標題化合物６．９ｇ
（収率：８２％）を得た。

【００３７】（Ｂ）上記段階（Ａ）で出発物質として使
用されたレチンアミド（化学式（IIc））はレチン酸か
ら下記のように製造した。

【００３８】実施例２に記載の方法によって製造したレ
チン酸クロリド１０ｇ（０．０３１ｍｏｌ）を、アンモ
ニア水（３５％）３００ｍｌとテトラヒドロフラン１０
０ｍｌの混合液に加えた後、常温で２０時間攪拌した。
反応液を減圧蒸留して濃縮した。メチレンクロリドを加
えて残留物を抽出した。有機層を分離して水で洗浄し、
無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後に減圧蒸留
し、所望のレチンアミド９．４３ｇ（収率：９９％）を
得た。

【００３９】実施例４：化学式（Ｉ）のポリエトキシル
化レチンアミド（Ｒ＝水素、ｎ＝９．８）の製造ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）３ｇ（０．
０１４６ｍｏｌ）を１−アミノ−ポリエチレングリコー
ル（分子量４００）４．４８ｇ（０．０１１２ｍｏ
ｌ）、レチン酸３．９８ｇ（０．０１３３ｍｏｌ）およ
び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１．５１ｇ（０．
０１１２ｍｏｌ）の無水ジクロロメタン４０ｍｌ溶液に
加えた後、反応液を実施例１（Ａ）と同じ方法によって
処理し、標題化合物を製造した（収率：６２％、Ｔｍ＝
−１４℃、Ｒｆ＝０．１５）実施例５：経皮吸収実験本発明による化学式（Ｉ）の化合物の経皮吸収実験を、
運搬媒介としてオイル（caprylic capric triglycerid
e）とエタノールの１：１混合溶媒を使用して行なった
［参照：Lehman PA, Slattery JT, Franz TJ, Percutan
eous absorptionof retinoids: Influence of vehicle,
light exposure, and dose, J. InvestDermatol., 91;
56-61, 1988］。この実験では、既存の皮膚老化防止用
医薬および化粧品原料として使用されているレチノー
ル、レチノールパルミテートおよびレチン酸を比較薬物
として用いた。

【００４０】すなわち、８週齢の雌性マウス（無毛マウ
ス）の背部位の皮膚を切り取り、１．７ｃｍ²の皮膚に
３５ｍＭの試料溶液２５０μｌを適用した。経皮吸収測
定機器（Franz cell）を用いて、２４時間後、受容器
（receptor）溶媒［２％ＶｏｌＰＯ２０ポリエチレ
ンオレイルエーテル（ＨＬＢ＝１６）含有５０ｍＭＰ
ＢＳ緩衝溶液（ｐＨ＝７．４）］７ｍｌと皮膚とにそれ
ぞれ吸収されている物質を抽出して、高圧液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）で定量分析し、その結果を表１
に示した。

【００４１】

【表１】

【００４２】表１に示したように、本発明による化学式
（Ｉ）の化合物は既存に皮膚老化抑制剤として使用され
て来ているレチノールの３倍、レチノールパルミテート
の６倍、レチン酸の２．４倍と高い経皮吸収増加率を示
した。すなわち、本発明による化学式（Ｉ）の化合物
は、対照物質に比べ、経皮吸収率が割合高く増加するこ
とがわかる。

【００４３】実施例６：コラーゲン合成試験化学式（Ｉ）の化合物（Ｒ＝ＣＨ₃、ｎ＝９．８）の皮
膚老化抑制剤としての有用性を確認するため、そのコラ
ーゲン合成効果を、対照物質としてレチン酸とレチノー
ルパルミテートを用いて比較実験した。２４個のウェル
を有するプレートの各ウェルで、同一数のヒト繊維芽細
胞（human fibroblast）を２４時間培養した後、１０^-4
〜１０^-7 ｗ％／ml濃度で試料を適用した。２時間後、
トリチウム導入のプロリン（Ｌ−２，３−³Ｈプロリ
ン）をプレートに適用して２４時間培養した。培養培地
を用いて、繊維芽細胞が新たに合成分泌したコラーゲン
の量を、Ｌ−２，３−³Ｈプロリンのｃｐｍ（counting
per minute）数に基づいてＣＰＳ（collagenous sensit
ive protein）の量を計算することにより測定した。さ
らに、計算されたＣＳＰ量を用いて、試料のコラーゲン
合成効果を比較した結果を図１に示した［参照：(1) Da
vid F. W. and Wilson Harvey, Analytical Biochemist
ry, 1979; 96, 220-224, 及び(2) Atsushi Hatamochi,
Masashi Ono,Hiroaki Ueki and Masayoshi Namba, J.
Invest Dermatol., 1991, 96, 473-477］。但し、図１
で対照群は、皮膚老化抑制物質が加えられておらず、コ
ラーゲン合成に活性を有する血清が加えられている群を
示す。

【００４４】図１に示しているように、レチノールパル
ミテートは殆どコラーゲン合成増進効果を示さず、レチ
ン酸は濃度１０^-6ｗ％／mlで最高２１．７％の増加効果
を示した。これに反し、ポリエトキシル化された化学式
（Ｉ）の化合物は意外にも、１０^-7 ｗ％／mlの濃度で
最高（３３．８％）のコラーゲン合成増進効果を示し
た。

【００４５】実施例７：アレルギー試験（ＬＬＮＡ）化学式（Ｉ）の化合物（Ｒ＝ＣＨ₃，ｎ＝９．８）に対
する安全性実験方法としては、運搬媒介物としてエタノ
ールを用いる方法を選んだ［参照：KimberI(1990): Ide
ntification of contact allergens using the murine
local lymph node assay, J. Appl. Toxicol. 10(3); 1
73-180］。試験サンプルとして、比較物質としてのレチ
ノールパルミテートおよびレチン酸と化学式（Ｉ）の化
合物とを、それぞれ０．３％、１％アセトン／オリーブ
油（４／１、ｖ／ｖ）溶液に調整した。各試験サンプル
をマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）の両耳に５０μｌの量で３日
間塗った後、マウスより耳介リンパ節（auricular lymp
h node）を分離した。リンパ節を単一細胞状態にまで粉
砕した後、放射性同位元素（³Ｈ−チミジン）を加え、
２４時間培養した後、細胞の増幅度(ｃｐｍ)を測定し
た。結果を下記表２に示した。

【００４６】

【表２】

【００４７】表２に示しているように、本発明による化
学式（Ｉ）の化合物は０．３％および１％溶液の両方
で、エタノールに比べ、３倍以下の低いアレルギー誘発
性を示したのに対し、レチノールパルミテートとレチン
酸は同じ条件で６倍以上の高いアレルギー誘発性を示し
た。

【００４８】実施例８：皮膚刺激性試験化学式（Ｉ）の化合物（Ｒ＝ＣＨ₃，ｎ＝９．８）の皮
膚刺激性を確認するため、ギニーピッグ（guinea pig）
を用いたパッチ試験を行なった［参照：(1) Draize, J.
H.(1959): Dermal toxicity. Assoc. Food and Drug O
fficials, US.Appraisal of the safety of chemicals
in Food, Drugs and Cosmetics, pp46-59, Texas State
Dept. of Health, Austin, Texas、及び(2) Federal R
egister(1973): Method of testing primary irritant
substances 38(187): pp1500-1541］。ｏ／ｗ剤形ある
いはレキソールＧＴ−８６５を運搬媒介とした０．３％
濃度の６種類試料溶液を調製した。まず、試料塗布部位
（マウスの背）の毛を除去し、皮膚刺激を最小化するた
め、２４時間環境に適応した。設定された試料塗布部位
（１．５ｃｍ×１．５ｃｍ）に試料とガーゼを適用した
後、試料の蒸発および損失を防止するため、固形材質の
薄膜で密封し、弾力包帯で４８時間固定した。閉鎖パッ
チを除去した後、２時間目、２４時間目（パッチ適用後
それぞれ５０時間目、７２時間目）に刺激の程度を判定
し、その結果を下記表３に示した。

【００４９】

【表３】

【００５０】注）１．ＣＬＣ：レキソールＧＴ−８６５２．ＲＰＬＣ：レキソールＧＴ−８６５＋レチノールパ
ルミテート（０．３％）３．ＲＡＬＣ：レキソールＧＴ−８６５＋レチン酸
（０．３％）４．ＰＡＬＣ：レキソールＧＴ−８６５＋化学式（Ｉ）
の化合物（０．３％）５．ＲＰＬＣ＃１：ｏ／ｗ剤形６．ＰＡＬＣ＃２：ｏ／ｗ剤形＋化学式（Ｉ）の化合物
（０．３％）表３の結果よりわかるように、レチノールパルミテー
ト、レチン酸と本発明による化学式（Ｉ）の化合物の刺
激程度には有意な差のないことがわかる。

【００５１】実施例９：皮膚器官培養試験本発明による化学式（Ｉ）の化合物（Ｒ＝ＣＨ₃，ｎ＝
９．８）の一次安全性を検証するため、９週齢無毛雌性
マウスを対象に実験した。レキソールＧＴ−８６５を運
搬媒体とする７種類の試料溶液を調製した後、ＭＴＴ
［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２，５−ジフェ
ニルテトラゾリウムブロマイド］試験法を行なった［参
照：J. J. M. Van De SandT, A. A. J. J. L. Rutten &
H. B. W.M. Koeter.,Cutaneous toxicity testing in
organ culture: Neural Red uptake & Reduction of te
trazolium salt(MTT) Toxic. In Vitro Vol. 7, No. 1,
81-86, 1993］。結果は下記表４に示した。

【００５２】

【表４】

【００５３】表４に示しているように、０．３％のレチ
ン酸は強い刺激を示したのに反し、同じ濃度のレチノー
ルパルミテートと化学式（Ｉ）の化合物は類似に弱い刺
激を示した。

【００５４】実施例１０：細胞毒性試験化学式（Ｉ）の化合物（Ｒ＝ＣＨ₃、ｎ＝９．８）を医
薬および化粧品の原料として使用する場合の一次安全性
を検証するため、化学式（Ｉ）の化合物をＶ７９−４細
胞（チャイニーズハムスターの肺組織繊維芽細胞の連続
細胞株）と共に培養し、ＭＴＴ試験法［参照：Mossman
T. (1983). Rapid colormetric assay for cellular gr
owth & survival: application to proliferation & cy
totoxicity assays. Journal of Immunological Method
s 65, 55-63］を行なうことによって化学式（Ｉ）の化
合物の細胞毒性を調査し、その結果を図２に示した。

【００５５】図２の結果よりわかるように、本発明によ
る化学式（Ｉ）の化合物は１０^-3ｗ％／ml以上の濃度で
は徐々に毒性を示したが、１０^-4 ｗ％／ml以下の濃度
では微弱な毒性のみ示した。このような結果は、毒性を
示さない限界濃度である１０^-4ｗ％／ml以下の濃度で細
胞増進効果を示しはじめ、１０^-7ｗ％／mlの濃度で最高
のコラーゲン合成増進効果を示し、細胞毒性を発現する
１０^-3ｗ％／ml以上の濃度では増進効果を示さない図１
の実験結果とよく一致することがわかる。［図面の簡単な説明］

【図１】図１は本発明による化学式（Ｉ）の化合物と
比較物質であるレチン酸およびレチノールパルミテート
のコラーゲン合成増加率を比較したものである。

【図２】図２は本発明による化学式（Ｉ）の化合物と
比較物質であるレチン酸およびレチノールパルミテート
の細胞毒性効果を比較したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者リーインサン大韓民国 305−340 デジョンヨクシユソン−グドリョン−ドン 386−４エルジアパート＃９−206 (72)発明者パクボンジュン大韓民国 305−340 デジョンシン− グガルマ−ドンクンマウルアパート＃110−203 (72)発明者チョーワングー大韓民国 305−390 デジョンヨクシユソン−グゾンミン−ドンチョングアパート＃103−1704 (72)発明者ソングヨンスク大韓民国 305−751 デジョンヨクシユソン−グソンガン−ドングリーンアパート＃306−1503 (72)発明者パクムンオク大韓民国 305−343 デションヨクシユソン−グジャン−ドン 84 (72)発明者キムヨンドゥク大韓民国 305−343 デジョンヨクシユソン−グドリョン−ドン 386−４エルジアパート＃１−403 (72)発明者リーソンジュン大韓民国 305−390 デジョンヨクシユソン−グゾンミン−ドンセゾンアパート＃109−301 (56)参考文献特公昭54−4948（ＪＰ，Ｂ２) ＥｕｒＪＭｅｄＣｈｅｍ，1993 年，Ｖｏｌ．28，Ｎｏ．４，ｐ．275− 290 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07C 403/20 A61K 7/00 A61K 7/48 C07C 403/18 C08G 65/329 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記化学式（Ｉ）のポリエトキシル化レ
チンアミド誘導体：【化１】（式中、Ｒは水素またはＣ_1-6−低級アルキルを示し、ｎは２〜１００の数である。）
【請求項２】Ｒが水素またはメチルであり、ｎが４〜
４０の数である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】１）下記化学式（IIa）の化合物を溶媒
中で有機アミン触媒存在下に下記化学式（IIIa）のモノ
-メトキシポリエチレングリコールアミンと反応させる
か、２）下記化学式（IIb）の化合物を溶媒中で縮合剤
および触媒の存在下に化学式（IIIa）の化合物と反応さ
せるか、3）下記化学式（IIc）の化合物を溶媒中で塩基
存在下に下記化学式（IIIb）のモノ−メトキシポリエチ
レングリコールハライドまたはスルホネートと反応させ
ることを特徴とする請求項１に定義の化学式（Ｉ）の化
合物を製造する方法：【化２】（式中、Ｒおよびｎは請求項１で定義した通りであり、Ｘ¹はハロゲンを示し、Ｘ²はハロゲン、p−トルエンスルホニルまたはメタンス
ルホニルを示す。）
【請求項４】方法１）で有機アミン触媒がピリジンま
たはトリエチルアミンであり、触媒を化学式（IIIa）の
化合物１モルに対し、１．０〜２．０モルの比率で用い
る請求項３に記載の方法。
【請求項５】方法２）で縮合剤がＮ，Ｎ−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはＮ，Ｎ−カルボ
ニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である請求項３に記載の
方法。
【請求項６】方法２）で触媒がＮ，Ｎ−ジメチルアミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）または１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（ＨＯＢＴ）である請求項３に記載の方法。
【請求項７】方法３）で塩基が水素化ナトリウム、水
酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水素化カリウム、炭
酸カリウム、ピリジンおよびトリエチルアミンからなる
群より選ばれた1種以上である請求項３に記載の方法。
【請求項８】溶媒がジクロロメタン、ベンゼン、トル
エン、テトラヒドロフランおよびジエチルエーテルから
なる群より選ばれた１種以上である請求項３に記載の方
法。
【請求項９】請求項１に定義の化学式（Ｉ）の化合物
を有効成分として含有することを特徴とする化粧料組成
物。