KR100789342B1 - Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 - Google Patents
Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100789342B1 KR100789342B1 KR1020010043836A KR20010043836A KR100789342B1 KR 100789342 B1 KR100789342 B1 KR 100789342B1 KR 1020010043836 A KR1020010043836 A KR 1020010043836A KR 20010043836 A KR20010043836 A KR 20010043836A KR 100789342 B1 KR100789342 B1 KR 100789342B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- tat peptide
- retinol
- compound
- skin
- formula
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 107
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 title claims abstract description 71
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 150000004609 retinol derivatives Chemical class 0.000 title abstract description 4
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 title description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 claims abstract description 18
- 150000004347 all-trans-retinol derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 claims description 76
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 claims description 39
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 claims description 39
- 239000011607 retinol Substances 0.000 claims description 39
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 13
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 11
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 229940100552 retinamide Drugs 0.000 claims description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 10
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 5
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- GODZNYBQGNSJJN-UHFFFAOYSA-N 1-aminoethane-1,2-diol Chemical compound NC(O)CO GODZNYBQGNSJJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 abstract description 12
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 abstract description 12
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 abstract description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 11
- 230000037384 skin absorption Effects 0.000 abstract description 9
- 231100000274 skin absorption Toxicity 0.000 abstract description 9
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 abstract description 5
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 abstract description 5
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000007794 irritation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 abstract 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N Retinol Palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C VYGQUTWHTHXGQB-FFHKNEKCSA-N 0.000 description 30
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 20
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 229940108325 retinyl palmitate Drugs 0.000 description 15
- 239000011769 retinyl palmitate Substances 0.000 description 15
- 235000019172 retinyl palmitate Nutrition 0.000 description 15
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 15
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 10
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- -1 retinol compound Chemical class 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 5
- YCLAMANSVUJYPT-UHFFFAOYSA-L aluminum chloride hydroxide hydrate Chemical compound O.[OH-].[Al+3].[Cl-] YCLAMANSVUJYPT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 5
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700003968 Human immunodeficiency virus 1 tat peptide (49-57) Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AKJHMTWEGVYYSE-AIRMAKDCSA-N 4-HPR Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1NC(=O)/C=C(\C)/C=C/C=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C AKJHMTWEGVYYSE-AIRMAKDCSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040954 Skin wrinkling Diseases 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 2
- 150000003927 aminopyridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 108700004027 tat Genes Proteins 0.000 description 2
- 101150098170 tat gene Proteins 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000007056 transamidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 2
- ZFLMWSDRGYCDJF-LYKFAKFTSA-N (2e,4e,6e,8e)-3,7-dimethyl-n-(2-oxothiolan-3-yl)-9-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)nona-2,4,6,8-tetraenamide Chemical compound C1CSC(=O)C1NC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C ZFLMWSDRGYCDJF-LYKFAKFTSA-N 0.000 description 1
- XUNKPNYCNUKOAU-VXJRNSOOSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]a Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O XUNKPNYCNUKOAU-VXJRNSOOSA-N 0.000 description 1
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 206010014970 Ephelides Diseases 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000001126 Keratosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 231100000220 OECD 429 (LLNA) Skin Sensitisation Toxicity 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- ORPPWWSYVKBNRV-UHFFFAOYSA-N [Br-].C1=CSC=N1.C1=CC=CC=C1C1=NN(C=2C=CC=CC=2)N=[NH+]1 Chemical compound [Br-].C1=CSC=N1.C1=CC=CC=C1C1=NN(C=2C=CC=CC=2)N=[NH+]1 ORPPWWSYVKBNRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037374 absorbed through the skin Effects 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000489 anti-atherogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000036570 collagen biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N copper;hydrate Chemical compound O.[Cu].[Cu] LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000007682 dermal toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229950003662 fenretinide Drugs 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- KIWQWJKWBHZMDT-UHFFFAOYSA-N homocysteine thiolactone Chemical compound NC1CCSC1=O KIWQWJKWBHZMDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 239000011968 lewis acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- GXHMMDRXHUIUMN-UHFFFAOYSA-N methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O GXHMMDRXHUIUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000037368 penetrate the skin Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000916 relative toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000001444 retinoyl group Chemical group O=C([*])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])=C([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])=C([H])/C1=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000036620 skin dryness Effects 0.000 description 1
- 231100000438 skin toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000036561 sun exposure Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- LADGBHLMCUINGV-UHFFFAOYSA-N tricaprin Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCC LADGBHLMCUINGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/67—Vitamins
- A61K8/671—Vitamin A; Derivatives thereof, e.g. ester of vitamin A acid, ester of retinol, retinol, retinal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C403/00—Derivatives of cyclohexane or of a cyclohexene or of cyclohexadiene, having a side-chain containing an acyclic unsaturated part of at least four carbon atoms, this part being directly attached to the cyclohexane or cyclohexene or cyclohexadiene rings, e.g. vitamin A, beta-carotene, beta-ionone
- C07C403/06—Derivatives of cyclohexane or of a cyclohexene or of cyclohexadiene, having a side-chain containing an acyclic unsaturated part of at least four carbon atoms, this part being directly attached to the cyclohexane or cyclohexene or cyclohexadiene rings, e.g. vitamin A, beta-carotene, beta-ionone having side-chains substituted by singly-bound oxygen atoms
- C07C403/08—Derivatives of cyclohexane or of a cyclohexene or of cyclohexadiene, having a side-chain containing an acyclic unsaturated part of at least four carbon atoms, this part being directly attached to the cyclohexane or cyclohexene or cyclohexadiene rings, e.g. vitamin A, beta-carotene, beta-ionone having side-chains substituted by singly-bound oxygen atoms by hydroxy groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
본 발명은 자가침투신호를 갖는 인간 면역 결핍 바이러스 단백질의 일종인 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체, 그리고 이를 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 피부에 자극 없이 용이하고 안전하게 피부 내부로 침투될 뿐만 아니라 피부 흡수력이 우수하여 콜라겐 합성 증진 및 엘라스틴 분해 억제를 통하여 피부 재생과 피부노화 억제에 뛰어난 효과가 있다.
Tat 펩타이드, 레티놀 유도체, 자가침투신호, 피부노화 억제
Description
본 발명은 펩타이드가 접합된 레티놀 및 그 유도체에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 자가침투신호를 갖는 인간 면역 결핍 바이러스 단백질의 일종인 Tat 펩타이드(Transactivator of transcription peptide)가 접합된 레티놀 유도체, 및 이를 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부의 노화는 자유라디칼(free-radical)에 의한 생체물질의 산화적 손상에 기인한 것이 주요 원인으로 생각되고 있다. 즉, 과산화수소, 히드록시 라디칼, 슈퍼옥사이드 라디칼 등의 활성 산소와 같은 반응성이 높은 자유 라디칼은 세포막을 구성하는 지질을 과산화시켜 세포막을 파괴하고, 단백질을 산화시키고, 핵산을 공격하여 산화적 손상을 일으켜 생체물질을 파괴하여 비정상적인 속도로 노하시킴으로써 결국 세포를 죽게 한다.
상기와 같은 피부노화의 원인으로는 피부세포의 영양결핍, 햇볕에의 과다한 노출, 잘못된 화장품의 사용 등을 들 수 있다. 피부 노화의 외부 환경 중에서도 장 기간의 햇빛 노출은 주름살, 피부의 거칠음, 및 반점 등 특징적인 피부의 광노화 뿐 아니라 케라토시스(keratoses)와 같은 피부암 등 수많은 피부의 불균형을 초래하고 있다. 이러한 피부의 광노화는 트레티노인(all-트랜스-레티노인산)을 함유하는 크림을 피부에 도포할 경우 개선될 수 있다고 보고되어 있다("Topical Tretinoin Improves Photoaged Skin", JAMA, 259, Vol 4, pp95, 527~532, Jan, 22/29, 1988, the authors Webb et. al.). 그러나 트레티노인은 지용성이므로 피부 흡수력이 낮고 생체 내에서 불안정하며 피부에 자극적이고 잠복기간 동안에 피부건조, 상처, 또는 허물 벗겨짐 등의 부작용을 초래하는 문제가 있다. 상기와 같은 부작용으로 인하여 트레티노인을 화장품의 주원료로 사용하는데 많은 어려움이 있으므로, 광노화의 억제를 위해서는 트레티노인의 활성을 그대로 유지하면서도 비자극적인 새로운 기능성 원료의 개발이 절실히 요구되고 있다.
한편 1,3-트랜스 레티노인산의 에스테르 또는 아미드 유도체가 피부질환 및 여드름치료 등 노화 억제 기능을 한다는 것이 보고되었다. 즉, 2-(all-트랜스-레티노일옥시)-4-메톡시아세토페논 화합물은 비교적 비자극성이면서 사용할 때 피부암이나 광노화 억제에 효과를 주는 것으로 보고되었으며(미국특허 제 4,677,120 호), 레티노인산과 테트라에틸렌글리콜과의 에스테르화에 의해서 얻어진 화합물은 피부의 침투효과를 증가시키는 것으로 알려져 있다(미국특허 제 4,900,478 호). 또한 N-(4-히드록시페닐)레틴아미드(4-HPR) 및 레티노일 β-글루크로나이드(RAG) 역시 레티노인산의 활성을 보유하면서도 상대적인 독성이 감소된 것으로 보고되었다(FASEB J., 10, 1014-1024, 1996).
그러나 상기 언급된 레티노인산의 에스테르 및 아미드는 지용성의 물성으로 인하여 피부 흡수력이 미약하여 콜라겐 합성의 증진기능 및 엘라스틴 분해 방지효과를 크게 기대하기 어렵거나, 생체 내에서의 빠른 효소분해로 인한 안정성 문제가 대두되고 있다. 그러므로 기존의 레티노인산 유도체의 단점인 자극성이 다소 극복되었다하더라도 이것만으로는 부족하며, 외피로부터의 흡수력이 증가되어 생체 내에서의 세포 재생 기능이 극대화되고, 안정성이 향상된 새로운 피부 노화 억제제의 개발이 시급하다.
또한 폴리에틸렌글리콜 유도체의 계면활성 능력을 이용하여 레틴아미드에 축합 반응시킨 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체(대한민국 특허공개공보 1999-77401, 한국특허출원번호 제 1998-0063715호)도 피부 노화 억제제로써 피부 흡수력을 높이기 위한 하나의 방법으로 제시되었으나, 피부내 침투에 있어서 아직 만족할 만한 수준은 아니었다.
한편, 아미노산 유도체인 호모시스테인 티오락톤(Homocysteine thiolactone)을 레틴아미드에 합성하여 항암제(anticancer)와 동맥경화(antiatherogenic) 치료효과가 있는 N-호모시스테인 티오락토닐 레틴아미드(N-homocysteine thiolactonyl retinamide)를 얻은 예도 있다(미국특허 제 6,054,595호).
따라서, 피부에 자극이 없고 피부 침투성이 우수할 뿐만 아니라 피부 흡수력이 뛰어나 피부노화를 효과적으로 억제할 수 있는 화합물에 대한 연구가 필요한 실정이다.
상기 종래 기술의 문제점을 고려하여, 자가침투신호를 갖는 인간 면역 결핍 바이러스 단백질의 일종인 Tat 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 와 이들의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 화합물은 피부에 비자극적이며 안전하고 쉽게 침투하여 피부노화를 억제할 수 있으며, 뛰어난 피부 흡수력으로 콜라겐 합성 증진 및 엘라스틴 분해 억제를 통하여 피부 재생과 피부노화 억제에 효과적이며, 세포내에 효율적으로 침투하여 피부노화를 억제할 수 있다.
본 발명의 또다른 목적은 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부노화방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 자가침투신호(penetration)를 갖는 인간 면역 결핍 바이러스 단백질의 일종인 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체, 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 자세하게는, 본 발명은 레티놀 또는 그 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 1의 화합물을 제공한다.
상기 식에서,
X는 -CH2- 또는 -CO- 이고,
Y는 -O-, -NH- 또는 다음 화학식 4의 화합물이고 p는 2 내지 100 범위의 정수이고;
m은 1 내지 12 범위의 정수이고;
[] Tat 는 세포침투성 Tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며, n은 4 내지 12 범위의 정수이다.
또한 본 발명은 세포침투성 Tat 펩타이드를 제조 및 정제하고, 유기용매, 촉매 및 축합제제의 존재하에 상기 Tat 펩타이드의 C-말단 또는 N-말단과 레티놀 유도체를 결합시켜 Tat 펩타이드가 결합된 레티놀 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 레티놀 또는 그 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 2의 화합물을 제공한다.
상기 식에서,
X는 -CH2- 또는 -CO- 이고,
Y는 -O- 또는 -NH- 이고,
m 은 1 내지 12 범위의 정수이고;
[] Tat 는 세포침투성 Tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며,
n은 4 내지 12 범위의 정수이다.
또한, 본 발명은 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 3의 화합물을 제공한다.
상기 식에서,
[] Tat 는 세포침투성 Tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며,
n은 4 내지 12 범위의 정수이고,
p는 2 내지 100의 정수이다.
또한 본 발명은 세포침투성 Tat 펩타이드를 제조 및 정제하고; 유기용매 중 축합제, 촉매 존재하에서 레티놀을 반응시켜 아세틸화 아미드를 제조하고; 상기 아세틸화 아미드의 말단기인 -ORA를 알코올로 치환한 후 그래프팅 반응시키는 단계를 포함하는 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 화학식 1 내지 3으로 표시되는 세포침투성 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체를 함유하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
최근 다양한 인체의 질환이 세포 단백질의 비정상적인 활성에 기인한다는 사실에 따라 이들 단백질의 활성을 조절함으로써 치명적인 인체질환을 치료할 수 있는 물질의 개발이 전 세계적으로 관심의 대상이 되고 있다. 그러나 펩타이드와 단백질은 다른 화합물에 비하여 생리작용에 대한 선택성과 효용성이 매우 우수함에도 불구하고, 세포내부로 직접 전달될 수 없는 단점 때문에 효과적인 약물 전달 수단으로서의 실용화가 현실적으로 어려운 실정이었다.
상기와 같은 문제를 해결하기 위하여 중요한 생리활성을 갖는 다양한 생체 기능 단백질을 세포내로 효율적으로 침투시키는 기술(protein penetration technology)을 이용함으로써 인체 질환 치료에 필요한 물질을 직접적이고 효율적으로 전달 또는 흡수시킬 수 있게 되었다. 상기 단백질 침투기술은 자가침투신호(penetration)를 갖는 인간 면역결핍 바이러스(HIV: Human Immunodeficiency Virus type-1) 단백질의 일종인 Tat 펩타이드가 자발적으로 세포막을 통과하여 쉽게 세포내로 침투 및 이동하는 것을 이용한 것임이 밝혀졌다. 이러한 기능은 Tat 펩타이드 시퀀스의 중간 부위인 단백질 형질도입 부위(protein transduction domain)의 특성 때문에 나타나며, 아직 그 정확한 메카니즘은 알려지지 않은 상태이다(Frankel, A.D. and Pabo, C.O.(1988) Cell 55, 1189-1193. Green, M. and Loewenstein, P.M.(1988) Cell 55, 1179-1188. Ma, M. and Nath, A.(1997) J. Virol. 71, 2495-2499. Vives, E., Brodin, P. and Lebleu, B.(1997) J. Biol. Chem. 272, 16010-16017.).
본 발명자들은 상기와 같은 Tat 펩타이드의 침투 특성에 주시하여 연구한 결과, 레티놀 또는 레틴아미드와 같은 원하는 피부 활성 성분을 자가침투신호를 갖는 Tat 펩타이드에 부착하여 이들을 피부내 세포로 직접적이고 효율적으로 침투시키는 것을 완성하여 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.
본 명세서에서 사용된 "세포침투성 Tat 펩타이드"는 그 자체 또는 이와 결합된 물질과 함께 세포침투능을 갖는 Tat 펩타이드 또는 그로 유래된 펩타이드를 의미한다. 구체적으로 HIV-1의 Tat 펩타이드의 주요 특징은 단백질의 백터중 특정 구간의 시퀀스가 세포막(barrier)를 여는 신호를 갖고 있다는 것이며, 서열은 RKKRRQRRR로서 다음 화학식 7에 나타낸다.
세포침투성 Tat 펩타이드의 구성 아미노산은 20 개의 아미노산 중에 라이신(이하, Lys 또는 K이라 함), 알지닌(이하, Arg 또는 R이라 함), 글루타민(이하, Gln 또는 Q이라 함) 등은 모두 구조적으로 아민기(amine group)와 카르복실기(carboxyl group)를 가지고 있기 때문에 알코올과의 반응을 통하여 에스테르화(esterfication)하거나, 산과의 반응을 통하여 선택적으로 아미드(amide) 결합으로 레티놀과 반응시킬 수 있다. 이들이 말단에 배치된 N-말단 및 C-말단을 갖는 9-Tat 펩타이드(n = 9), 예를 들면, Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg 또는 RKKRRQRRR로 표시되는 9-Tat 펩타이드, Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys 또는 KKKKKKKKK로 표시되는 9-Tat 펩타이드, Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg 또는 RRRRRRRRR로 표시되는 9-Tat 펩타이드 등은 레티놀과 에 스테르화 반응 또는 아미드화 반응으로 그래프팅 시킬 수 있다.
상기 화학식 1중 []Tat는 다음의 화학식 5으로 표시되며,
상기 세포침투성 Tat펩타이드는 글루타민(glutamine : Gln), 라이신(lysine : Lys), 알지닌(arginine : Arg), 및 글리신 (glycine : Gly)의 곁사슬(side chain)으로 이루어지는 군으로부터 선택된 1 종 이상의 치환기를 포함하는 펩타이드이며, 더욱 바람직하게는 라이신 및 알지닌으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산으로 이루어진 펩타이드이다. 또한 상기 화학식 1중에서 n이 8 내지 10인 것이 바람직하며, n이 9인 것이다.
상기 Tat 펩타이드의 제조방법은 다음과 같다.
첫째는 재조합 발현벡터를 이용하는 생물학적 방법으로서, a) pSVC21의 HIV-1 Tat 유전자로부터 자가침투신호 영역 유전자를 6 개의 히스티딘 택(6 His tag)을 갖고 있는 pET 벡터에 PCR 기법을 이용하여 HIV-1의 Tat 유전자를 클로닝(cloning)하여 융합 단백질의 형태로 발현시킬 수 있는 벡터를 제조하는 단계, 그리고 b) 상기 pET-Tat 발현 벡터를 이용하여 대장균 내에서의 재조합 His-Tat 펩타이드의 형태로 대량 발현시킨 후, 순수 분리 정제하는 단계를 포함하는 Tat 펩타이드의 제조방법이다.
두 번째 방법은, a) pET-Tat 발현 벡터에 목표 단백질(target protein), 예컨대 SOD 또는 GST을 삽입하여 His-Tat-목표단백질의 융합단백질로 대량 발현하고 순수분리 정제하는 단계를 포함하는 Tat 펩타이드의 제조방법이다.
셋째 방법은, 펩타이드 합성용 유기합성기기를 이용하여 순수한 His-Tat 펩타이드를 합성하는 단계를 포함하는 Tat 펩타이드 제조방법이다.
본 명세서에서 레티놀 유도체라 함은 레티놀의 에스테르 및 아미드 유도체를 포함하는 의도이다.
레티놀 또는 그 유도체는 상기 Tat 펩타이드의 주쇄중 C-말단 또는 N-말단,또는 곁사슬의 N 그룹에도 에스테르 반응, 아미드화 반응, 또는 트랜스아미드화 반응으로 결합될 수 있다. 상기 치환기 X 와 Y의 종류에 따라, 레티놀 또는 그 유도체가 Tat 펩타이드의 C-말단 또는 N-말단에 결합할 수 있다.
상기 에스테르 반응은 무수조건에서 진행된다. 레티놀 및 그 유도체는 물에 녹지 않으므로 무수 유기 용매, 예를 들어 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 디메틸술폭사이드, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르 중에서 1종 이상이 바람직하게 사용된다. 에스테르화 반응은 무촉매의 경우도 반응이 진행되지만, 촉매로는 공지의 루이스산을 사용하거나 할로겐화물, 예를 들어 티오닐클로라이드(thionyl chloride)를 이용하여 카르복실산(carbonyl acid)을 활성화시킨 후 알코올과의 반응을 유도하거나, 메탄슬폰산(methanesulfonic acid) 등을 촉매로 사용하여 에스테르화 반응으로 본 발명의 화합물을 제조한다. 또한 에스테르화 반응은 가역 반응이므로 반응을 정방향으로 보내기 위해서는 통상 레티놀 및/또는 그 유도체를 10당량 이상을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 아미드화 반응은 무수조건에서 진행되며, 무수 유기 용매, 축합제, 및 촉매의 존재하에서 실시되는 것이 바람직하다. 상기 무수 유기 용매로는 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 디메틸술폭사이드, 테트라하이드로퓨란, 및 디에틸에테르로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 것이 바람직하다. 상기 축합제는 N,N-카보닐디이미다졸(CDI), 또는 N,N-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)를 사용하는 것이 바람직하고, 축합반응을 촉진시키는 촉매로는 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP), 또는 1-하이드록시벤조트리아졸[1-HOBT]을 사용하는 것이 바람직하다.
또한 트랜스아미드화 반응은 유기용매 중에서 축합제 및 촉매의 존재하에서 반응시키는 것이 바람직하다. 상기 축합제는 N,N-카보닐디이미다졸(CDI), 또는 N,N-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)를 사용하는 것이 바람직하고, 축합반응을 촉진시키는 촉매로는 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP), 또는 1-하이드록시벤조트리아졸[1-HOBT]을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 레티놀에 Tat 펩타이드를 결합시키는 방법을 상세히 설명하면 다음과 같다.
하기 화학식 6a로 표시되는 레티놀은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에서 정의와 같이, X가 -CH2-이고, Y가 -O-이므로 Tat 펩타이드의 C-말단과 에스테르화 반응을 시켜 상기 화학식 2로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀을 제조할 수 있다. 상기 에스테르화 반응은 할로겐화물을 이용하여 카르복실산을 활성화시킨 후 레티놀 또는 그 유도체의 알코올과의 반응을 유도하거나, 메탄술폰산(methanesulfonic acid)을 루이스산(Lewis acid) 촉매로 사용하여 수행한다.
또한 하기 화학식 6b로 표시되는 레티놀은 상기 화학식 1로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀의 정의와 같이, X가 -CH2-이고, Y가 -NH-이므로 Tat 펩타이드의 C-말단과 아미드화 반응시켜 상기 화학식 2로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀을 제조할 수 있다.
또한 하기 화학식 6c로 표시되는 레티놀은 상기 화학식 1로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀에서 정의한 바와 같이, X가 -CO-이고, Y가 -O-이므로 Tat 펩타이드의 C-말단과 에스테르화 반응시켜 상기 화학식 2로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 화합물을 제조할 수 있다.
또한 하기 화학식 6d로 표시되는 레티놀은 상기 화학식 1로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체에서 정의와 바와 같이, X가 -CO-이고, Y가 -NH-이므로 Tat 펩타이드의 C-말단과 트랜스아미드화 반응을 수행하여 상기 화학식 2로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 화합물을 제조할 수 있다.
또한 본 발명은 상기 화학식 5로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체 및 그 제조방법을 제공한다.
상기 레티놀 유도체는 레티놀을 유기 용매 중에서 축합제 및 촉매의 존재 하에서 반응시켜 아세틸화 레틸아미드를 제조하고, 상기 아세틸화 레틸아미드의 말단기인 -ORA를 알코올로 치환하여 레티놀 유도체를 제조한다. 상기와 같이 제조된 레티놀 유도체에 Tat 펩타이드의 C-말단과 에스테르화 반응으로 결합시켜 RAOH를 분리, 제거하여 상기 화학식 5로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체를 제조한다.
상기 화학식 4의 화합물에서 RA는 수소, 또는 탄소수 1∼6의 저급 알킬이고, p는 2 내지 100 범위의 정수이다. 폴리에폭실화 레틴아미드 유도체 및 이의 제법에 대해서는 PCT 공개공보 WO 99/50240호에 자세히 기재되어 있다.
상기 유기 용매는 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 및 에테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다. 상기 촉매는 피리딘 또는 트리에틸아민인 것이 바람직하며, 모노-메톡시 폴리에틸렌 글리콜 아민에 대하여 1.0 내지 2.0 몰 배의 양으로 사용되는 것이 바람직하다. 상기 축합제는 N,N-카보닐디이미다졸(CDI) 또는 N,N-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)인 것이 바람직하다. 본 발명에서 사용될 수 있는 산, 축합제, 촉매, 및 용매는 반응에 악영향을 끼치지 않는 범위 내에서 당 업계에 통상적으로 공지된 모든 것이 사용될 수 있다.
상기와 같은 방법으로 제조된 상기 화학식 1로 표시되는 Tat 펩타이드가 접합된 레티놀 유도체는 통상의 분리, 정제 방법, 예를 들어 재결정이나 칼럼 크로마토그래피법을 사용하여 정제할 수 있다.
또한 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 함유하는 피부노화 방지용 화장료 조성물은 일반 피부화장료에 배합되는 보통의 성분, 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다. 본 발명의 피부노화 방지용 화장료 조성물은 크림, 연고, 로션, 스킨, 겔, 팩, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 첩포제 등 모든 제형으로 제조될 수 있다. 이들 제형의 에어로졸 타입으로도 제조될 수 있 다. 또한 상기 피부노화 방지용 화장료 조성물은 피부를 통해 흡수되는 제품으로, 유연화장수(스킨), 수렴화장수, 영양화장수(로션), 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 겔, 팩, 파우더, 피부외용연고, 첩포제, 서스펜션, 에멀젼, 스프레이, 또는 미용액 등의 통상의 화장료 형태로 제조될 수 있으며, 이들 각 제형에 적합하고 당업계에 주지된 각종의 통상적인 담체와 첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명의 피부노화 방지용 화장료 조성물은 활성도와 사용상의 무독성, 비자극성의 물성과 극대화된 피부 흡수력과 뛰어난 콜라겐 합성 증진에 우수한 효과가 있다.
본 발명의 화합물은 피부암이나 여드름과 같은 피부 질환에 의한 주름살, 주근깨 등의 치료에 사용될 수 있다. 특히, 자가침투신호를 갖는 Tat 펩타이드에 의해 쉽게 피부 내로 침투될 뿐 아니라, 피부 자극성이 없으며, 피부 흡수력이 뛰어나서 콜라겐 생합성의 극대화 및 엘라스틴 분해 방지를 통한 피부 재생 효과를 지니고 있음을 특징으로 하고 있다.
본 발명의 화합물의 생리활성을 확인하기 위하여 실시된 경피 흡수 실험, 피부 자극성 실험, 원료 안정성 시험, 및 피부재생효과 실험을 수행한 결과, 본발명의 화합물은 기존의 상업적으로 사용되고 있는 노화 억제용 화장품 원료인 레티노인산 또는 레티놀팔미테이트에 비해 경피 흡수력에 있어서 5~100배, 세포 독성 실험에 있어서는 10-4 (w%/㎖)이하의 농도에서 무독성이었으며 제형상의 안정성은 25% 증가효과를 나타냈다. 따라서, 본 발명의 화합물은 그의 활성도와 사용상의 무 독성, 비자극성의 물성과 극대화된 피부 흡수력과 뛰어난 콜라겐 합성 증진 기능에 기인하여 화장품의 크림, 로션, 겔 등의 모든 형태로 첨가하여 사용할 수 있는 편리함을 주었다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 다음의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 다음의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1 : 화학식 2의 9-Tat 펩타이드(R = KKKKKKKKK) 그래프팅 레티놀의 제조방법
(1) 9-Tat 펩타이드의 제조 및 정제
1) 9-Tat 융합 단백질(KKKKKKKKK : 올리고라이신) 발현 벡터 제조
먼저, 세포 내로 침투 기능을 갖는 목표 펩타이드를 전달할 수 있는 융합 펩타이드 발현 벡터인 pLys를 제조하였다. 9개의 라이신 펩타이드를 세포 내로 전달할 수 있는 능력을 용이하게 분석할 수 있도록 하기 위하여 녹색형광 단백질(Green Fluorescence Protein; "GFP"라 약칭함)를 목표 펩타이드로 선택하여 GFP의 염기서열에 해당하는 DNA 절편을 pLys 벡터에 삽입시켜 올리고Lys-GFP 융합 펩타이드를 발현할 수 있는 벡터인 pLys-GFP 융합 펩타이드를 제조하였다. 올리고Lys-GFP 융합 펩타이드에 대한 대조 펩타이드인 GFP를 과대 발현시키기 위하여 9개의 라이신만 포함되지 않고 나머지 부위는 동일한 pGFP 발현 벡터를 개발하였다.
9개의 라이신을 발현할 수 있는 염기서열을 가진 올리고뉴클레오타이드, 정 방향 개시체(forward primer): 5'-TAAGAAGAAAAAGAAAAAGAAAAAGAAGC-3'; 역방향 개시체(reverse primer): 5'-TCGAGC TTCTTTTTCTTTTTCTTTTTCTTCT-3' 두 개를 100℃에서 5분 동안 어닐링(annealing)시켜서 만든 이중가닥의 올리고뉴클레오타이드를 NdeI과 XhoI 제한효소로 절단된 pET-15b 벡터(Invitrogen, Carlsbad, CA)에 삽입시켜 9개의 라이신을 발현시킬 수 있는 벡터인 pLys를 제조하였다. 따라서 신규 제조된 벡터는 아미노 말단부터 6개의 히스티딘, 9개의 라이신 잔기와 목표 펩타이드를 융합 펩타이드 형태로 발현시킬 수 있도록 고안되었다.
다음으로 목표 펩타이드를 녹색형광 단백질(GFP)로 선택하여 GFP의 cDNA의 서열을 기본으로 하여 2종류의 올리고뉴클레오타이드를 합성하였다. 정방향 개시체는 5'-CTCGAGGTGAGCAAGGGCG AGGAGCTG-3'로 Xho I 제한효소 분해자리를 지니고 있으며, 역방향 개시체의 서열은 5'-GGATCCTTACTTGT ACAGCTCGTCCATGCCGAG-3' 로 BamH I 제한효소 분해자리를 갖고 있다.
합성된 올리고뉴클레오타이드를 이용하여 pEGFP-C2 (Clontech)로부터 다음과 같이 중합효소 연쇄반응(PCR)을 수행하여 GFP 염기서열을 가진 DNA 절편을 준비하였다. PCR은 thermal cycler(Perkin-Elmer, model 9600)에서 수행하였으며, 반응 혼합액을 50 ㎕ 실리콘 튜브(siliconized reaction tube)에 넣고 94℃에서 3분간 가열하였다. PCR 반응은 94℃에서 30초간 30회의 연장(extension)반응, 51℃에서 45초간 변성(denaturation), 70℃에서 1분 30초간 어닐링(annealing), 그리고 72℃에서 10분, 20℃에서 5분간 최종 연장반응을 유도하였다.
PCR 수행 후 아가로즈 젤 전기영동으로 반응물을 분리하고 이것을 pGEM-T 벡 터(Promega, USA)에 삽입하였다. 이어서 이 벡터로 적절한 세포(competent cell)를 형질 전환시키고, 형질 전환된 박테리아로부터 플라스미드를 알칼리 용균 방법(alkaline lysis method; Sambrook et al., 1989)으로 분리하였다. GFP cDNA가 포함된 pGEM-T 벡터를 Xho I 과 BamH I로 절단한 다음 pET-15b 및 pLys 발현 벡터에 삽입하였다. 여기서 얻어진 벡터를 pGFP 및 pLys-GFP로 각각 명명하였다.
2) 융합 펩타이드의 발현 및 확인
IPTG로 융합 펩타이드의 과대 발현을 유도한 대장균 세포를 4℃에서 초음파처리로 파쇄한 다음, 원심 분리하여 상등액에 있는 펩타이드를 12% SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동으로 분리하였다.
pGFP 및 pLys-GFP로 형질전환된 E. coli BL21(DE3)를 선택한 다음, 콜로니를 50 ml LB 배지에 접종하고 IPTG (0.5 mM)를 배지 내에 첨가하여 융합 펩타이드의 과대 발현을 유도시킨 후 세포 추출물을 준비하였다. 재조합된 GFP 및 올리고Lys-GFP 융합 펩타이드의 과대 발현을 유도하였다. 세포 추출물에 존재하는 과대 발현된 GFP 및 올리고 Lys-GFP 융합 펩타이드를 SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동(polyacrylamide gel electrophoresis)과 웨스턴 블랏 분석으로 확인하였다.
3) 9-Tat 융합 펩타이드의 정제
pLys-GFP 벡터로 형질전환된 E. coli BL21을 앰피실린이 포함된 LB 배지에 넣고 37℃에서 250rpm으로 교반하며 배양하였다. 배양액내의 박테리아 농도가 O.D600 = 0.6 ~ 1.0을 나타낼 때 IPTG를 배지 내에 첨가하여 최종농도가 0.5mM 되게 한 다음 3시간을 더 배양하였다. 배양한 세포를 원심분리하여 모은 뒤 5ml 결합완충용액(binding buffer; 5mM 이미다졸, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, pH 7.9)를 넣고 초음파처리를 하였다. 재조합 올리고 Lys-GFP 융합 펩타이드는 두 가지의 조건하에서 즉, 변성상태(denaturing condition)와 변성시키지 않은 자연상태(native condition)에서 각각 정제하였다. 10g의 박테리아 펠렛을 40ml 완충액 A(buffer A; 6M 우레아, 20mM HEPES, pH 8.0, 100mM NaCl)에 넣고 초음파 처리하여 세포를 파쇄시킨 다음, 원심분리를 2회(16,500rpm 30분, 40,000rpm 30 분, 4℃) 연속 수행하여 불용성의 세포 파편을 제거하였다.
완충액 B(buffer B; 6M 우레아, 20mM HEPES, pH 8.0, 100mM NaCl, 20mM 이미다졸)로 평형을 유지시킨 2.5ml Ni2+-니트릴로삼아세트산 세파로즈 컬럼(nitrilotriacetic acid sepharose column; Quagen, USA)에 원심 분리하여 얻은 상등액을 즉시 부하하고, 10배 부피의 결합 완충액과 6배 부피의 세척 완충액(washing buffer; 60mM 이미다졸, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, pH 7.9)으로 세척한 다음, 용출 완충액(elution buffer; 1M 이미다졸, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, pH 7.9)로 올리고Lys-GFP 융합 펩타이드를 용출하였다. 이어서 올리고Lys-GFP 융합 펩타이드가 포함된 분획들을 모아 세파덱스(Sephadex) G-25M을 함유한 PD-10 컬럼 크로마토그래피(column chromatography)를 수행하여 분획중에 포함된 염분을 제거하였다. 다시 이것을 동결 건조하여 수분이 완전히 제거된 분말 상태의 9개의 라이신으로 이루어진 Tat 펩타이드(KKKKKKKKK)를 얻었다.
(2) 9-Tat 펩타이드와 레티놀의 에스테르화 반응
피리딘 용액 50 ㎖에 상기 (1)에서 수득한 분말 상태의 9-Tat 펩타이드 1.32g을 녹이고 교반하면서 티오닐클로라이드 7.5 ㎖을 30분간 적가하였다. 여기에 피리딘 용액 50 ㎖에 레티노인산 2.86 g을 가하여 용해한 것을 적가 한 후 4시간 동안 반응액을 40 ℃로 가열 환류시킨 후 상온으로 냉각시켰다. 이것을 분액 깔대기에 옮기고 여기에 정제수 100 ㎖를 가하여 진탕하고 정치한 후 수층을 취하여 감압 건조한 후, 역상 컬럼 크로마토그래피(C18 레진, 물/에탄올/아세트니트릴 = 1 : 1 : 1, v/v)로 분리하여 9-Tat 펩타이드 그래프팅 레티놀(연노랑색의 액체)을 수득하였다.
실시예 2 : 화학식 3의 9-Tat 펩타이드(R = KKKKKKKKK)가 결합된 폴리에톡실화 레틴아미드의 제조방법
(1) 9-Tat 펩타이드의 제조
실시예 1의 (1)과 같은 동일한 방법으로 실시하여 수득하였다.
(2) 폴리에톡실화 레틴아미드의 제조
레티노인산 4.0g을 무수 톨루엔 20㎖에 용해시킨 후, 여기에 삼염화인 (PCl3) 1.83g을 적가하고 상온에서 빛과 수분을 차단한 채 질소 하에 15시간 동안 교반하여 레티노인산 클로라이드를 수득하였다. 상기 수득된 레티노인산 클로라이드 용액을 1-아미노-폴리에틸렌글리콜 모노메틸에테르 7.15g 및 트리에틸아민 1.57g과 함께 얼음 냉각 하에서 20분간 무수 메틸렌 클로라이드 40㎖에 적가해 준 후, 계속해서 5시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응액을 포화 염화나트륨 50㎖에 가하고 유기층을 분리하여 물로 세척한 다음 황산나트륨으로 건조, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 분리(실리카, 메쉬 크기 200~400, 메틸렌클로라이드/메탄올 = 15:1, v/v)하여 연 노란색의 화합물 9.1g을 수득하였다.
(3) 9-Tat 펩타이드와 폴리에톡실화 레틴아미드의 에스테르화 반응
피리딘 용액 50㎖에 상기 (1)에서 수득한 분말 상태의 9-Tat 펩타이드 1.32g을 녹이고 교반하면서 티오닐클로라이드 7.5㎖을 30분간 적가하였다. 여기에 피리딘 용액 50㎖에 레티노인산 2.86g을 가하여 용해한 것을 적가한 후 4시간 동안 반응액을 40℃로 가열 환류시킨 후 상온으로 냉각시켰다. 이것을 분액 깔대기에 옮기고 여기에 정제수 100㎖를 가하여 진탕하고 정치한 후 수층을 취하여 감압 건조한 후, 역상 컬럼 크로마토그래피(C18 레진, 물/에탄올/아세트니트릴 = 1 : 1 : 1, v/v)로 분리하여 9-Tat 펩타이드 그래프팅 폴리에톡실화 레틴아미드(연노랑색의 액체)을 수득하였다.
실시예 3 : 경피흡수 실험
상기 실시예 1에서 얻어진 화합물의 피부 세포내 침투, 이를 통상적으로 경피흡수라 하므로 본 명세서에서는 경피흡수로 통칭한다. 경피흡수 실험은, 공지의 노화방지용 화장품원료로써 사용되고 있는 레티놀 및 레티놀 팔미테이트와 운반매개로 오일(카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드)과 에탄올 1:1 혼합용매를 사용하여 비교 실험하였다[참고문헌: Lehman PA, Slattery JT, Franz TJ. Percutaneous absorption of retinoids : Influence of vehicle, light exposure, and dose, J. Invest Dermatol., 91; 56-61, 1988]. 좀 더 자세하게는, 8주령의 암컷 쥐(헤어리스 마우스)의 등쪽 부위 피부를 1.7cm2 크기로 절취하고, 여기에 35nM의 시료 50㎕을 적용한 후 경피흡수 측정기기(Franz cell)를 이용하여 24시간 후 수용기(receptor)용액 (2% 계면활성제를 포함하는 PBS 완충용액)과 쥐의 등쪽 피부에 흡수된 물질을 추출하여 HPLC로 정량 분석하였다. 실시예 1의 본 발명의 화합물과 레티놀 및 레티놀 팔미테이트가 경피흡수된 량을 정량 비교하였다. 그 결과를 다음 표 1에 나타내었다.
| 실시예 1의 화합물 | 레티놀 | 레티놀 팔미테이트 |
| 54.23 nmol | 23.43 nmol | 18.75 nmol |
| 62.73 nmol | 11.45 nmol | 0.53 nmol |
| 116.96 nmol | 34.88 nmol | 19.28 nmol |
| 6.9 nmol | 2.0 nmol | 1.1 nmol |
표 1에서 보는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 상대적으로 기존의 레티놀의 6,7배, 레티놀 팔미테이트의 14.3배의 경피흡수 증가율을 나타내었다.
실시예 4 : 콜라겐 합성효과 시험
실시예 1의 화합물의 피부 노화 억제제로서의 유용성을 보기 위하여 콜라겐 합성효과를 공지의 대조 물질로 사용되고 있는 원료인 레티놀과 레티놀 팔미테이트를 이용하여 비교 실험하였다. 좀 더 상세하게는 24개의 웰(wall)을 가진 플레이트에 동일수의 사람 섬유 아세포(human fibroblast)를 24시간 배양하고 나서 10-4 부터 10-7의 농도(w%/㎖)로 시료를 적용한다. 2시간 후 트리튬이 도입된 프롤린(L-2,3-3H 프롤린)을 적용하여 24시간 배양한 후 배양배지를 이용하여 섬유 아세포가 새롭게 합성 분비한 콜라겐의 양을 트리튬이 도입된 프롤린의 cpm(counting per minute)으로 측정하여 csp(콜라겐 민감 단백질: collagenous sensitive protein)의 양을 계산하였다[참고문헌 : ① David F. W. and Wilson Harvey, Analytical Biochemistry, 1979 ; 96, 220-224. ② Atsushi Hatamochi, Masashi Ono, Hiroaki Ueki, and Masayoshi Namba., J. Invest Dermatol., 1991, 96, 473-477].
이를 이용하여 콜라겐 합성 효과를 측정하여 비교한 결과, 기존의 원료인 레티놀 팔미테이트는 거의 콜라겐 합성의 증진효과를 보이지 않았으며, 레티놀의 경우 10-6 (w%/㎖)의 농도에서 최고 21.7%의 증가를 보였다. 상대적으로 Tat 펩타이드가 그래프팅된 실시예 1의 화합물의 경우 놀랍게도, 10-7(w%/㎖)의 농도에서 최고치(55.32%)의 증진효과를 보였다.
실시예 5 : 알러지 테스트(LLNA)
화장품 원료로서의 실시예1 화합물에 대한 안전성 실험으로는 운반 매개물로 에탄올을 사용하는 실험법을 택하였다[참고 문헌 : Kimber Ⅰ(1990) : Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl. Toxicol. 10(3) ; 173~180]. 노화 방지용 화장품 원료로 사용되고 있는 레티놀 팔미테이트와 실시예 1의 화합물을 각각 0.3%, 및 1% 용액으로 제조 시행하였다. 즉 쥐(Balb/c)의 양쪽 귀에 50 ㎕씩 3일간 발라준 후 쥐로부터 이개임파절(Auricular lymph node)을 분리한다. 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만든 후 방사성 동위원소(3H-티미딘)를 첨가하여 24시간 배양한 하고 나서, 세 포의 증폭도[cpm]를 측정한 결과를 다음 표 2에 나타내었다.
| 시 료 | 림프절 세포 (107 세포/mL) | 평균 cpm | 증폭도 |
| 에탄올(운반매개물) | 1.84 | 2861 | - |
| 실시예 1의 화합물 0.3% | 2.41 | 2883 | 1.01 |
| 실시예 1의 화합물 1% | 2.90 | 5638 | 1.97 |
| 레티놀 팔미테이트 0.3% | 5.61 | 16212 | 5.67 |
| 레티놀 팔미테이트 1% | 6.99 | 19087 | 6.67 |
표 2에서 보는 바와 같이, 실시예 1의 화합물의 0.3%와 1% 용액 모두 에탄올에 비해 3배 이하의 낮은 유발성을 나타내었고, 레티놀 팔미테이트는 동일한 조건하에서 6배 이상의 높은 유발성을 보였다.
실시예 6 : 피부 자극성 시험
실시예 1에서 제조된 화합물의 피부 자극성 시험을 위하여 기니아 피그(Guinea Pig)를 이용한 첩포시험(Patch test)를 수행하였다[참고문헌 : ①Draize, J. H.(1959) : Dermal toxicity. Assoc. Food and Drug officials, US. Appraisal of the safety of chemicals in Food, Drugs and Cosmetics., pp46-59, Texas State Dept. of Health, Austin, Texas. ②Federal Register(1973) : Method of testing primary irritant substances 38(187) : pp1500-1541]. 즉, 오일(렉솔(Lexol) GT-865)을 운반매개로 하여 7종류의 0.3% 비교 시료 용액을 제조 시험하였다. 먼저 시료 도포 부위(등)의 털을 제거하고 피부 자극을 최소화하기 위해 24시간 동안 환경 적응을 시킨 후 시료 도포 부위를 설정(1.5cm X 1.5cm) 시료와 가제를 적용하였다. 시의 증발 및 손실을 방지하기 위해 고형 재질의 박지로 밀봉하고 탄력 붕대로 48시간 고정하였다. 폐쇄첩포를 제거한 후 2시간, 24시간(첩포 후 48시간, 72시간)째 자극의 정도를 판정하였다. 그 결과를 다음 표 3에 나타내었다.
| 시료 | 자극지수 | 자극도 |
| RPLC #1 | 0.6 | 미세자극 |
| PALC #2 | 0.6 | 미세자극 |
| PALC #3 | 0.6 | 미세자극 |
| PALC #4 | 0.8 | 약한자극 |
| PALC #5 | 0.8 | 약한자극 |
| RPLC #6 | 0.7 | 약한자극 |
| PALC #7 | 0.7 | 약한자극 |
시료
#1 : 대조군(렉솔(Lexol GT-865 용액))
#2 : 대조군 + 실시예 1의 화합물 0.3%
#3 : 대조군 + 액정캡슐(실시예 1의 화합물 없음)
#4 : 대조군 + 액정캡슐(실시예 1의 화합물 0.3% 함유)
#5 : 대조군 + 지질 액정젤 (실시예 1의 화합물 0.3% 함유)
#6 : 렉솔 GT-865 중 레티놀 팔미테이트 0.3%
#7 : 렉솔 GT-865 중 실시예 1의 화합물 0.3%
표 3 에서와 같이 레티놀 팔미테이트와 실시예 1의 화합물의 자극정도는 유의하게 큰 차이가 없음을 알 수 있다.
실시예 7 : 피부 기관 배양 시험
실시예 1의 화합물의 1차 안전성을 검증하기 위하여, 9주령 무모 암컷 쥐로부터 오일(렉솔 GT865)을 운반매개로 하여 7가지 종류의 시료용액을 제조한 후 MTT[3-(4,5-디메틸티아졸-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드)] 시험을 시행한 결 과를 다음 표 4에 나타내었다[참고문헌 : J. J. M. Van De SandT, A. A. J. J. L. Rutten & H. B. W. M. Koeter., Cutaneous toxicity testing in organ culture : Neutral Red uptake & Reduction of tetrazolium satt(MTT) Toxic. In Vitro Vol. 7, No. 1, 81~86, 1993].
| 시료 | 안전도 | 안전성 |
| - | 1 | 비자극 |
| <0.05% 나트륨라우릴 설페이트 | 0.85 | 약한 자극 |
| <0.25% 나트륨라우릴 설페이트 | 0.55 | 중간 자극 |
| <0.5% 나트륨라우릴 설페이트 | 0.30 | 강한 자극 |
| 렉솔 GT 865중 0.3% 레티놀 팔미테이트 | 0.70 | 강 약한 자극 |
| 렉솔 GT 865중 0.3% 실시예 1 화합물 | 0.87 | 미세 자극 |
| 100% 렉솔 GT 865 | 0.90 | 미세 자극 |
표 4에서 보는 바와 같이 실시예 1의 화합물의 자극 정도는 본 발명의 Tat 펩타이드 그래프팅 레티놀이 0.3%의 레티놀 팔미테이트에 비해 거의 자극이 없는 것으로 나타났다.
실시예 8 : 세포독성 시험
화장품에 사용되는 원료로서의 1차 안전성을 검증하고자 실시예 1의 화합물에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속 세포주)을 배양하여 MTT 시험을 하는 방법 [참고 문헌 : Mossman T.(1983). Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival : application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55~63]을 수행하여 세포독성을 시험한 결과, 실시예 1의 화합물은 10-3 (w%/㎖)이상에서는 점차 아주 약한 독성을 나타내었으나 10-4 (w%/㎖)이하의 농도에서는 거의 독성을 나타내지 않음 을 나타내었다. 이 결과는 독성을 나타내지 않는 농도인 10-4 (w%/㎖)이하에서는 세포증진 효과를 보이기 시작하여 10-7 (w%/㎖)농도에서 최고의 콜라겐 합성 증진 효과를 보이며, 상대적으로 세포독성을 아주 약하지만 발현되기 시작하는 10-3 (w%/㎖)이상의 농도에서는 세포 증진 효과가 떨어지는 실험 결과의 일치성을 잘 보여 주었다.
본 발명은 Tat 펩타이드가 결합된 레티놀 및 그 유도체, 그리고 이를 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화합물 및 이를 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물은 피부에 자극 없이 용이하고 안전하게 피부 내부로 침투될 뿐만 아니라 피부 흡수력이 우수하여 콜라겐 합성 증진 및 엘라스틴 분해 억제를 통하여 피부 재생과 피부노화 억제에 뛰어난 효과가 있다.
Claims (12)
- 레티놀 또는 그 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 1의 화합물:[화학식 1 ]
상기 식에서,X는 -CH2- 또는 -CO- 이고,Y는 -O-, -NH- 또는 다음 화학식 4의 화합물이고 p는 2 내지 100 범위의 정수이고;[화학식 4]
m은 1 내지 12 범위의 정수이고;[] Tat 는 세포침투성 tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며,n은 4 내지 12 범위의 정수이다. - 제 1항에 있어서, 레티놀 또는 그 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 2의 화합물:[화학식 2 ]
상기 식에서,X는 -CH2- 또는 -CO- 이고,Y는 -O- 또는 -NH- 이고,m 은 1 내지 12 범위의 정수이고;[] Tat 는 세포 침투성 tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며,n은 4 내지 12 범위의 정수이다. - 제 1 항에 있어서, 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체와 세포침투성 Tat 펩타이드가 결합된 하기 화학식 3의 화합물:[화학식 3]
상기 식에서,[] Tat 는 세포침투성 tat 펩타이드로서, 상기 R은 글루타민, 라이신, 알지닌, 및 글리신의 곁사슬(side chain)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되며,n은 4 내지 12 범위의 정수이고,p는 2 내지 100의 정수이다. - 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 있어서, m이 1이고 n이 8 내지 10인 화합물.
- 제 1 항 내지 3항중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포침투성 Tat 펩타이드의 R은 라이신의 곁사슬 및 알지닌의 곁사슬로 이루어진 군에서 1종 이상 선택된 화합물.
- 촉매 및 축합제의 존재하에 유기용매 중에서 레티놀 또는 그 유도체를 피부침투성 Tat 펩타이드의 C-말단 또는 N-말단에 결합시켜 제 1항의 화합물을 제조하는 방법으로서,상기 촉매는 피리딘 또는 트리에틸아민이며, 모노-메톡시 폴리에틸렌 글리콜 아민에 대하여 1.0-2.0 몰배의 양으로 사용하고,상기 축합제는 N,N-디사이클로헥실카보디이미드 또는 N,N-카보닐디이미다졸이며,상기 유기용매는 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 또는 에테르인 것을 특징으로 하는 것인, 제조방법.
- 제 6 항에 있어서, 상기 Tat 펩타이드의 C-말단에 레티놀 또는 그 유도체를 에스테르화 반응 또는 아미드 반응으로 결합시키는 방법.
- 제 6 항에 있어서, 상기 Tat 펩타이드의 N-말단에 레티놀 유도체를 트랜스아미드반응으로 결합시키는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 따른 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020010043836A KR100789342B1 (ko) | 2001-07-20 | 2001-07-20 | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020010043836A KR100789342B1 (ko) | 2001-07-20 | 2001-07-20 | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20030008364A KR20030008364A (ko) | 2003-01-25 |
| KR100789342B1 true KR100789342B1 (ko) | 2007-12-28 |
Family
ID=27715963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020010043836A KR100789342B1 (ko) | 2001-07-20 | 2001-07-20 | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100789342B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160107818A (ko) * | 2015-03-05 | 2016-09-19 | 한국유니온제약 주식회사 | 개량형 TAT 펩타이드가 융합된 EGF, 티모신β4, hGH 단백질의 생산방법 및 이들 단백질을 포함하는 화장료 조성물 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040040792A (ko) * | 2002-11-08 | 2004-05-13 | 주식회사 엘지생활건강 | 아미노산 또는 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648563A (en) * | 1991-04-09 | 1997-07-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Retro-alpha-retinol derivative and uses of retro-alpha-retinol |
| US5814612A (en) * | 1991-04-09 | 1998-09-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Retinol derivatives and uses thereof |
| US5968981A (en) * | 1995-07-28 | 1999-10-19 | The Regents Of The University Of California | Retinoid suppression of ventricular muscle cell hypertrophy |
| KR19990077401A (ko) * | 1998-03-30 | 1999-10-25 | 성재갑 | 폴리에톡실화레틴아미드유도체및그의제조방법 |
| KR20020060598A (ko) * | 2001-01-11 | 2002-07-18 | 김웅겸 | 신규한 레티놀 유도체, 그 제조방법 및 그 용도 |
-
2001
- 2001-07-20 KR KR1020010043836A patent/KR100789342B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648563A (en) * | 1991-04-09 | 1997-07-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Retro-alpha-retinol derivative and uses of retro-alpha-retinol |
| US5814612A (en) * | 1991-04-09 | 1998-09-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Retinol derivatives and uses thereof |
| US5968981A (en) * | 1995-07-28 | 1999-10-19 | The Regents Of The University Of California | Retinoid suppression of ventricular muscle cell hypertrophy |
| KR19990077401A (ko) * | 1998-03-30 | 1999-10-25 | 성재갑 | 폴리에톡실화레틴아미드유도체및그의제조방법 |
| KR20020060598A (ko) * | 2001-01-11 | 2002-07-18 | 김웅겸 | 신규한 레티놀 유도체, 그 제조방법 및 그 용도 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160107818A (ko) * | 2015-03-05 | 2016-09-19 | 한국유니온제약 주식회사 | 개량형 TAT 펩타이드가 융합된 EGF, 티모신β4, hGH 단백질의 생산방법 및 이들 단백질을 포함하는 화장료 조성물 |
| KR101666934B1 (ko) | 2015-03-05 | 2016-10-17 | 한국유니온제약 주식회사 | 개량형 TAT 펩타이드가 융합된 EGF, 티모신β4, hGH 단백질의 생산방법 및 이들 단백질을 포함하는 화장료 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20030008364A (ko) | 2003-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2729374T3 (es) | Combinaciones de alquilamidotiazoles y agentes conservantes | |
| EP2928484B1 (en) | Compounds useful in the treatment and/or care of the skin, hair and/or mucous membranes and their cosmetic or pharmaceutical compositions | |
| JP6470680B2 (ja) | 皮膚および／または粘膜の処置および／またはケアのための組成物ならびに化粧品組成物または医薬組成物におけるその使用 | |
| ES2358829B1 (es) | Péptidos útiles en el tratamiento y/o cuidado de la piel, mucosas y/o cabello y su uso en composiciones cosméticas o farmacéuticas. | |
| ES2549392T3 (es) | Composición cosmética y/o farmacéutica que comprende un hidrolizado peptídico capaz de reforzar la función barrera | |
| ES2733130T3 (es) | Preparaciones cosméticas o dermatológicas con un contenido de uno o varios derivados de tiazol | |
| JP6470679B2 (ja) | ニューロンの開口分泌を阻害する化合物（ｉｉｉ） | |
| KR100753472B1 (ko) | 사람 콜라겐 ⅰ형의 ｃ-말단에서 유래된 펩타이드에ｔａｔ 펩타이드가 결합된 융합 펩타이드, 이의 제조방법,및 이를 포함하는 피부주름개선 화장료 조성물 | |
| CN102395598A (zh) | 用于治疗和/或护理皮肤和/或毛发的肽、及其在化妆用组合物或药物组合物中的用途 | |
| DD158238A5 (de) | Verfahren zur herstellung eines neuen inhibitors fuer das angiotensin umwandelnde enzym | |
| JP2015514124A (ja) | ニューロンの開口分泌を阻害する化合物（ｉｉ） | |
| JP6316799B2 (ja) | ニューロンの開口分泌を阻害する化合物 | |
| ES2610252T3 (es) | Heterociclocarbonilaminotiazoles, preparaciones cosméticas o dermatológicas que los contienen y su uso para el tratamiento y la profilaxis de la pigmentación indeseada de la piel | |
| KR100297061B1 (ko) | 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체 및 그의 제조방법 | |
| KR100789342B1 (ko) | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 | |
| JP2007297387A (ja) | 皮膚の脱色素化法 | |
| US20110070296A1 (en) | Topical compositions and methods for utilizing peptides containing lipid-modified cysteine-containing peptides | |
| KR100817191B1 (ko) | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 아스코르브산 유도체, 그의제조방법 및 이를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 | |
| KR20040040792A (ko) | 아미노산 또는 펩타이드가 결합된 레티놀 유도체 및 이를포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물 | |
| KR100891970B1 (ko) | Ｔａｔ 펩타이드가 결합된 하이드로퀴논 유도체, 그의제조방법 및 이를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 | |
| KR101354915B1 (ko) | 칼로일-펩타이드 및 이를 이용한 피부 외용제 조성물 | |
| JP2005506383A (ja) | ヒトの副甲状腺ホルモンに由来するペプチドにＴａｔペプチドが結合された融合ペプチド、その製造方法およびこれを含む経皮性体脂肪減量化粧品組成物 | |
| JP2003192522A (ja) | 化粧料用または皮膚外用剤用組成物 | |
| JPH0578383A (ja) | コウジ酸フラクトシド及びそれを含有する皮膚外用剤 | |
| US4690939A (en) | Anti-hypertensive agents |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20120914 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130913 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140917 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150917 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160919 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170928 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180927 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20191014 Year of fee payment: 13 |