JP3472072B2 - 毛髪成長期延長剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、毛髪成長期延長剤
に関する技術分野に属する発明である。より詳細には、
毛髪伸長の促進をすることによって毛周期における成長
期を維持又は延長する毛髪成長期延長剤に関する技術分
野に属する発明である。

【０００２】

【従来の技術】高齢化社会、ストレス社会といわれる現
代社会では、頭部毛髪が様々な原因により脱毛の危機に
さらされる機会がますます多くなってきている。これに
対応して、より優れた「育毛料」を提供すべく様々な試
みがなされている。育毛料が毛髪に与える効果として主
なものに、発毛誘導効果（発毛促進効果，成長期誘導
効果），毛髪を太くする効果，毛髪成長期延長効
果，５α−レダクターゼ阻害効果，血行促進効果，
殺菌効果，フケ防止効果，保湿効果，抗酸化効
果等の効果が挙げられる。

【０００３】しかしながら、前記のように種々の試みが
なされているにもかかわらず、従来の育毛料では、その
脱毛防止，発毛効果等の育毛作用は必ずしも十分なもの
ではなかった。これはおそらく脱毛の原因がさまざまで
あり、また発毛の機構も非常に複雑であるためと考えら
れている。今まで提供されている「育毛料」は、脱毛を
比較的大雑把な概念、言い換えれば漫然と「脱毛」とい
う現象のみを捉えて開発されており、そのメカニズムに
まで突っ込んで着目して開発されたものは決して多くな
い。

【０００４】その大きな理由が、これらのメカニズムに
着目した育毛効果を簡便に検定することが可能な育毛薬
剤検定方法が十分に提供されていなかったという面を否
定できないことである。特に上記の毛髪成長期延長効
果を検定する育毛薬剤検定方法の確立は難しく、結果と
してこれまで提供されてきた育毛料は、毛周期の成長期
へと毛髪を誘導して育毛する上記発毛誘導効果に着目
したものが多かった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者はin
vitroで行う簡便な上記の毛髪成長期延長効果を検定
する育毛薬剤検定方法を確立し、その育毛薬剤検定方法
を用いて上記の毛髪成長期延長効果を有する成分を有
効成分とする毛髪成長期延長剤を見出すことを目指し
た。

【０００６】本願は、その一連の課題のうち、特に上記
の毛髪成長期延長効果を有する成分を見出し、これを
有効成分とする毛髪成長期延長剤を提供することをその
課題とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、種々の物質
における上記の毛髪成長期延長効果を有する成分につ
いて、本発明者が見出した育毛薬剤検定方法を用いて鋭
意検討したところ、コリアンダー等のコエンドロ属に属
する植物の抽出物に、所望する毛髪成長期延長効果が認
められることを見出し、本発明を完成した。

【０００８】すなわち本発明は、コエンドロ属に属する
植物の抽出物を有効成分とする毛髪成長期延長剤を提供
する発明である。

【０００９】前記したように、本発明において「毛髪成
長期延長剤」は、主に後述する育毛薬剤検定方法によっ
て少なくとも毛包上皮系細胞の分裂増殖活性を維持又は
促進することで毛髪の成長期を維持又は延長する効果を
有する成分を有効成分として配合した、特に上記の毛
髪成長期延長効果に着目した毛髪関連薬剤であり、いわ
ば「個別効能育毛料」としての特徴を有する。

【００１０】この「毛髪成長期延長剤」は、例えば毛根
近傍における毛包上皮系細胞の増殖が緩徐であること等
により成長期が短くなって、相対的に成長期毛よりも休
止期毛の割合が多くなってしまうことに起因する脱毛症
に特に有効な薬剤である。また、他の個別効能を有する
育毛料と組み合わせて用いることにより、幅広くの脱毛
症においては，総合的かつ相乗的な効果を上げることが
可能である。すなわち、この「毛髪成長期延長剤」は、
前記した〜の効果を包含する概念を有する一般的な
育毛料用途とは一線を画する用途を有するものである。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明毛髪成長期延長剤は、セリ科(Umbel
liferae)のコエンドロ属(Coriandrum)に属する植物の抽
出物をその有効成分とする毛髪関連薬剤である。

【００１２】このコエンドロ属に属する植物の具体的な
ものとしては、一般にはコエンドロと称されているコリ
アンダー サチバム(Coriandrum sativum L.)を挙げ
ることができるが、その抽出物が後述する毛周期におけ
る成長期を延長する作用を有する限りにおいて、それら
の変種，亜種等の他の種に属するものであってもよい。

【００１３】また、このコエンドロ属に属する植物の抽
出物は、これらの植物の全草又は未熟果実から有利に得
ることが可能であるが、成熟果実から抽出することもで
きる（これらの抽出物の原料となる部分を全て総称し
て，「コエンドロ属に属する植物」ということもあ
る。）。

【００１４】コエンドロ属に属する植物の抽出物を抽出
する際には、植物由来の抽出物を抽出する際に一般的に
用いられる方法で行うことができる。すなわち、前記し
たコエンドロ属に属する植物を、生のまま，又は必要に
より乾燥した後、そのまま若しくは粉砕して溶媒抽出に
供することにより得ることができる。この際用い得る溶
媒は、植物からその植物の成分を抽出する際に用いられ
る一般的な溶媒を用いることが可能であり特に限定され
ず、例えば熱水；メタノール，エタノール，イソプロパ
ノール，ｎ−ブタノール等の低級アルコール；プロピレ
ングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価ア
ルコール；これらのアルコール類の含水物；ｎ−ヘキサ
ン，トルエン等の炭化水素系溶媒等を挙げることができ
るが、メタノールやエタノール等の低級アルコールを抽
出溶媒として用いるのが好ましい。これらの低級アルコ
ールを抽出溶媒として用いる場合、得られる抽出液をそ
のまま本発明毛髪成長期延長剤の有効成分として配合す
ることができるが、抽出溶媒を一旦留去し，必要により
乾燥後に配合することも可能である。

【００１５】このようにして得られるコエンドロ属に属
する植物の抽出物は、少なくともｄ−リナロール，ピネ
ン等の精油、ペトロセリン酸，油酸等の脂肪油、その他
タンパク質，糖，長鎖脂肪族アルデヒド等を一体として
含むことが確認されている。

【００１６】本発明毛髪成長期延長剤の有効成分として
配合される抽出物の、後述する毛包上皮系細胞の増殖作
用はこれらのいずれの成分に由来するのかは定かではな
いが、上述のように全体として強い毛包上皮系細胞の増
殖作用を有している。なお、本発明毛髪成長期延長剤に
おいては、コエンドロ属に属する植物の抽出物の市販品
をも用いることができることは勿論である。

【００１７】本発明毛髪成長期延長剤におけるコエンド
ロ属に属する植物の抽出物の配合量は、本発明毛髪成長
期延長剤の具体的形態等に応じて適宜選択し得るもので
あり、特に限定されるべきものではないが、概ね本剤全
体に対して抽出物の乾燥物として０．００００５重量％
以上，２０．０重量％以下、好ましくは同０．０１重量
％以上，１０．０重量％以下となるように配合される。

【００１８】本剤全体に対して抽出物の乾燥物として
０．００００５重量％未満の配合量では、本発明の所期
の効果である毛包系細胞増殖作用に基づく毛髪成長期延
長効果が十分に発揮されず好ましくなく、同２０．０重
量％を超えて配合しても、配合量の増加に見合った効果
の増大を見込めないばかりではなく、製剤上支障をきた
す傾向が顕著となり好ましくない。

【００１９】このようにして、コエンドロ属に属する植
物の抽出物を有効成分として配合した本発明毛髪成長期
延長剤は、優れた毛包上皮系細胞増殖作用に基づく毛髪
成長期延長効果を有し、前記したように、例えば毛根近
傍における毛包上皮系細胞の増殖が緩徐であること等に
より成長期が短くなって，相対的に成長期毛よりも休止
期毛の割合が多くなってしまうことに起因する脱毛症に
特に有効な薬剤である。また、他の個別効能を有する育
毛料と組み合わせて用いることにより、特定の脱毛症に
おいては相乗的な効果を上げることもまた可能である。

【００２０】本発明毛髪成長期延長剤の所期の効果であ
る毛髪成長期延長効果における本質的作用である、毛周
期における成長期の維持又は延長作用を特定する手段
は、その特定法自体がその作用を特定するために妥当な
ものである限り特に限定されず、例えばin vitro にお
ける特定法も，in vivo における特定法も用いることが
できるが、その簡便性と有効性を考慮すると、in vitr
o における特定法を用いることが好ましい。

【００２１】以下、このin vitro における特定法の一
つである、毛包系上皮培養細胞の増殖効果を検討するこ
とを特徴とする特定法について簡単に説明する（より具
体的には、実施例において記載する。）。すなわちこの
特定法は、「毛包上皮系培養細胞に無血清培地中で対象
物質を接触させることによる、その細胞の増殖活性の有
無及び／又は強弱を特定することにより、その対象物質
の毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛
薬剤検定方法」、すなわち毛髪の伸長に直接的に関係す
る毛包上皮系細胞に着目し、この培養細胞を用いること
によって、所望する毛周期における成長期を延長する効
果を特定する、in vitroの育毛薬剤検定方法である。

【００２２】この育毛薬剤検定方法においては、動物
（ヒトを含む，以下同様である）の毛包上皮系細胞を単
離して得た培養細胞である「毛包上皮系培養細胞」に対
象物質を接触させて、その増殖の有無及び／又は強弱を
特定する。毛包上皮系細胞は、特に毛根近傍の外毛根鞘
細胞とマトリクス細胞等の細胞のことを指し、内側の毛
乳頭細胞は除外される。

【００２３】毛周期における成長期は、まさにこの毛髪
が伸長している時期，すなわち毛包上皮系細胞が分裂し
て増殖している時期であり、同退行期及び休止期はこれ
が鈍化して休止する時期である。つまり、毛周期におけ
る成長期を延長させる物質は、その投与により毛包上皮
系細胞の分裂及び増殖活性を維持することによって、毛
髪が毛周期における退行期及び休止期への移行を防ぐ物
質、すなわち毛包上皮系細胞の増殖を促進又は維持し続
ける物質であることが結論付けられる。

【００２４】なお、他のin vitroの育毛薬剤検定方法と
して、例えば対象物質を動物の毛乳頭細胞に作用させ
て、その増殖効果を判定する方法を挙げることもでき
る。

【００２５】また、in vivo における特定法としては、
例えば「ヌードマウスに対象物質を投与し，このヌード
マウスの体表の発毛部位の状態を特定して，対象物質の
毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛薬
剤検定方法」、すなわち原則的には無毛であるが、その
体表に経時的にその発毛部位が移動する特徴的な発毛を
するヌードマウスにおける発毛部位の広さと発毛部位の
移動速度を特定することによって、毛周期における成長
期の長さを検定する方法等を挙げることができる。

【００２６】本発明毛髪成長期延長剤が採り得る剤型
は、外皮に適用可能な剤型であれば特に限定されず、例
えば液状，乳液，軟膏等を選択可能である。また、本発
明毛髪成長期延長剤の形態は任意であり、例えばトニッ
ク，ヘアークリーム，ムース，シャンプー，リンス，ク
リーム，乳液，化粧水，パック等の形態を採ることがで
きる。

【００２７】本発明毛髪成長期延長剤前記の必須成分に
加えて必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわ
ない限りにおいて、化粧品，医薬部外品，医薬品等にお
いて一般的に用いられる各種油性若しくは水性成分．保
湿剤，増粘剤，防腐剤，酸化防止剤，香料，色剤，各種
薬剤等を配合することができる。

【００２８】例えば、高級脂肪酸，固形パラフィン，流
動パラフィン，シリコーン油，スクワラン，モノオレイ
ン酸グリセリル，オリーブ油，イソプロピルミリステー
ト，高級脂肪酸，高級アルコール等の油分；グリセリ
ン，ヒアルロン酸，プロピレングリコール，マルチトー
ル，アテロコラーゲン，乳酸ナトリウム等の保湿剤；マ
ルメロ粘質物，カルボキシビニルポリマー，キサンタン
ガム等の増粘剤；ニコチン酸アミド，ニコチン酸ベンジ
ル，ビタミンＥアセテート，センブリ抽出物，塩化カル
プロニウム，アセチルコリン誘導体等の血管拡張剤；セ
リン，メチオニン，アルギニン等のアミノ酸類；ビタミ
ンＢ₆ ，ビタミンＥ（若しくはその誘導体），ビオチ
ン，パントテン酸（若しくはその誘導体）等のビタミン
類；ニコチン酸，ニコチン酸メチル，ニコチン酸トコフ
ェロール等のニコチン酸エステル類；セファランチン等
の皮膚機能亢進剤；エストラジオール等の女性ホルモン
剤；グリチルレチン酸（若しくはその誘導体）等の消炎
剤；ヒノキチオール，ヘキサクロロフェン，ベンザルコ
ニウムクロリド，ビチオノール等の抗菌剤；メントール
等の清涼剤；サリチル酸，亜鉛（若しくはその誘導
体），乳酸（若しくはそのアルキルエステル）等；クエ
ン酸等の有機酸類等を配合することができる。本発明毛
髪成長期延長剤の具体的処方は後述する。

【００２９】

【実施例】以下、実施例等により本発明をさらに具体的
に説明するが、この実施例等により本発明の技術的範囲
が限定的に解釈されるべきものではない。なお、以下の
実施例等において「％」と表示され，かつ内容量を示す
ものは、特に断らない限り重量％を意味する。まず、本
実施例等において用いたコエンドロ属に属する植物の抽
出物の毛髪成長期延長作用を評価するためのin vitroの
細胞増殖試験について説明する。

【００３０】〔試験例１〕毛包上皮系培養細胞を用いた
細胞増殖試験 Ａ．ヒト毛包上皮系細胞 １．ヒト毛包上皮系細胞の採取 外科手術の副産物として得られたヒト男性頭皮から毛周
期における成長期の毛包を実体顕微鏡下で機械的に採取
した。この成長期の毛包を1000 U/ml dispase・0.2 ％
コラゲナーゼを含むダルベッコの改変ＭＥＭ（ＤＭＥ
Ｍ）で３０分間，３７℃で処理し、注射針の先を用いて
dermal sheath やdermal papilla、毛球部上皮組織を除
去して、0.05％トリプシン・0.02％ＥＤＴＡを含むリン
酸緩衝液〔ＰＢＳ（−）：（−）とはカルシウムイオン
やマグネシウムイオンを含まない意味である〕で５分
間，３７℃で処理した。

【００３１】次にコラーゲン（Type I）コーティングし
た培養皿に毛包を静置し、外殖片培養を行った。なおこ
の際の培地は、無血清培地〔Keratinocyte Growth Medi
um（ＫＧＭ）〕を用いた（Keratinocyte Serum Free Me
diumを用いることもできる）。この培養の４〜５日後
に、毛包の培養皿への接着及び細胞の増殖が確認できた
時点で培地を交換し、これ以降２日おきに培地交換を行
った。

【００３２】このようにして増殖させた細胞を、0.05wt
％トリプシン-0.02 ％ＥＤＴＡで３７℃で５分間処理し
た後、等量の0.1 ％トリプシンインヒビターで反応を停
止させ、遠心処理(800×g,5 分間) を施して細胞を回収
した。次に、細胞を上記の無血清培地に浮遊させて、50
00 cells/cm²の密度でコラーゲンコーティング（Type
I）した培養皿に播種し、細胞がsubconfluentになるま
で２日おきに培地交換を行い、再び0.05wt％トリプシン
-0.02 ％ＥＤＴＡで３７℃で５分間処理した後、等量の
0.1 ％トリプシンインヒビターで反応を停止させ、遠心
処理(800×g,5 分間) を施して、これにより得られたヒ
ト毛包上皮系細胞に細胞凍結液（セルバンカー：ダイヤ
トロン製）を添加し、１．０×１０⁶ cell/ml の濃度に
調整して、各凍結チューブに１．０×１０⁶ cellずつ入
れ、これを凍結保存した。なお、これらの細胞数は、血
球算定板で算出した。

【００３３】２．対象物質のアッセイ 上記工程により得た毛包上皮系細胞の線維芽細胞混入率
（ＦＢ混入率）を測定（３０００倍，５視野）し、その
結果ＦＢ混入率が３％以上のものは、アッセイの対象か
ら除外した。そして、この毛包上皮系細胞を培養フラス
コ中に播種後、これを０．０５％トリプシンと０．０２
％ＥＤＴＡで処理した後、０．１％トリプシンインヒビ
ターで反応を停止後、系を１５００rpm で５分間遠心処
理を施し、上清を除去し、残渣にＫＧＭ培地２０mlを添
加して、細胞懸濁液を調製した。

【００３４】０．２ml/well の割合で、９６well-plate
（Ｉ型コラーゲンコーティングプレート：ファルコン社
製）に播種し（１．０×１０⁴cell/well）、細胞がウエ
ルの底に沈むまで約２０分間室温下で放置した。その
後、３７℃，５％ＣＯ₂ で１日間培養を行い、所望する
ヒト毛包上皮系培養細胞を得た。

【００３５】Ｂ．ラット毛包上皮系細胞 １．ラット毛包上皮系細胞の採取： （１）毛包の採取 新生児（３〜４日令）のラットの背部皮膚を採取し、こ
の採取した背部皮膚を１％ＰＳＦ含有ＰＢＳ（−）に２
枚ずつ浸した。その後、皮膚脂肪層から下の皮下脂肪や
皮膜等を解剖用ハサミで除去した。次いで、再びこの背
部皮膚を１％ＰＳＦ含有ＰＢＳ（−）に浸し、さらにこ
れを０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ（−）（０．０２
％ＥＤＴＡ含む。以下、同様である。）中に４℃で一晩
浸した。

【００３６】このトリプシン溶液中における浸漬後、背
部皮膚の真皮層と表皮層をピンセットで剥がした後、真
皮層を０．３５％のコラゲナーゼを含有させたＨａｍ'
ｓＦ１２培地〔組成(mg/L)：l-Alanin(8.9),l-Arginine
（HCl:211),l-Asparagine(13.2),l-Asparatic acid(13.
3),l-Cysteine （HCl:31.5),l-Glutamic acid(14.7),l-
Glutamine(146),Glycine(7.5),l-Histidine （HCl:19),
l-Isoleucine(3.9),l-leucine(13.1),l-Lysine(HCl:36.
5),l-Methionine(4.5),l-Phenylalanin(5.0),Proline(3
4.5),l-Serine(10.5),l-Threonine(11.9),l-Tryptophan
e(2.0),l-Tyrosine(5.4),l-Valine(11.7),Biotine(0.00
73),Choline(Cl:14.0),VitaminB12(1.36),葉酸(1.32),I
nositol(18.0),Nicotinamide(0.037),パントテン酸(Ca:
0.477),VitaminB6(HCl:0.062),VitaminB2(0.038),Vitam
inB1(HCl:0.337),CaCl₂(2H₂O:44.0),CuSO₄・5H₂O(0.002
5),FeSO₄・7H₂O(0.834),KCl(224.0),MgCl₂(6H₂O:12
2)，"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,53,288(1965)" 以下同様
である〕が入った100 mm dish 移し、ハサミで裁断し
た。この裁断物を含む培地を３７℃で３５分間浸透を行
った（６０rpm ）。浸透後、このコラゲナーゼ反応物中
に塊状のものが見えなくなるまでピペッティングを行
い、これを５０ml遠沈管に移し、ＤＮase （10000unit)
を含有させたＨａｍ'ｓ Ｆ１２培地を添加し、５分間
放置した。

【００３７】放置後、得られた懸濁液をさらにピペッテ
ィングした後、ナイロンメッシュ（Nytex 157 mesh) で
濾過し、これを５０ml遠沈管に移した。懸濁液を半量ず
つに分け、それぞれについてＰＢＳ（−）を容量が３０
mlになるまで懸濁液を希釈し、次いでこの希釈した懸濁
液に遠心処理を施した（４℃，４００rpm ，５分間）。
遠心後、上清を除いて脂肪分を系から除去した。次い
で、残渣にＰＢＳ（−）を２５ml添加して懸濁後、これ
にさらに遠心処理を施した〔（４℃，４００rpm ，５分
間）×３回〕。この遠心操作により得られた残渣が、ラ
ットの背部皮膚における毛包である。

【００３８】（２）毛包上皮系細胞の採取 上記操作により得られた毛包に、０．２５％トリプシン
含有ＰＢＳ（−）を５ml添加して、細胞懸濁液を３７℃
で５分間インキュベートした。インキュベート終了後、
５mlの等量の牛胎児血清（ＦＢＳ）とＨａｍ'ｓ Ｆ１２
培地を添加して、細胞懸濁液をセルストレーナー（100
μm Nalgene 社製）で濾過後、５０ml遠沈管に入れて、
この細胞懸濁液に遠心処理を施した（４℃，１５００rp
m ，５分間）。この系から上清を除去して、残渣として
所望する毛包上皮系細胞を得た。

【００３９】この毛包上皮系細胞に細胞凍結液（セルバ
ンカー：ダイヤトロン製）を添加し、１．５×１０⁷ ce
ll/ml の濃度に調整して、各凍結チューブに１．５×１
０⁷cellずつ入れ、これを凍結保存した。なお、これら
の細胞数は、血球算定板で算出した。

【００４０】２．毛包上皮系細胞の前培養：系に混入し
ている線維芽細胞を可能な限り系から除去するために、
上記工程により得られた毛包上皮系細胞の前培養を行っ
た。以下、その手順について説明する。３７℃の恒温槽
で、上記工程により得た凍結細胞を融解した。次いでＦ
ＡＤ培地〔Ｈａｍ'ｓ Ｆ１２培地（後述）とＭＥＮ培地
を容量比で３対１で混合したものに、インシュリン(5.0
μg/ml），ハイドロコルチゾン（0.45μg/ml），エピダ
ーマルグロウスファクター(EGF)(10.0ng/ml)，コレラト
キシン(10^-9Ｍ）及びウシ胎児血清(10 ％) を含有させ
た培地、以下同様である〕を１０ml添加し、細胞溶液を
希釈して系に遠心処理を施した（１０℃以下，１５００
rpm ，５分間）。遠心後、上清を除去し、系にＦＡＤ培
地を１０ml添加して、細胞塊が認められなくなるまでピ
ペッティングを繰り返した。

【００４１】得られた細胞数を血球算定板で算出し、Ｆ
ＡＤ培地で２．５×１０⁵ cell/mlの濃度になるように
調整した。Ｉ型コラーゲンでコーティングした７５cm³
のフラスコに細胞を播種して、これを３７℃，５％ＣＯ
₂ で一晩培養した。

【００４２】培養後、系をＰＢＳ（−）１０mlで２回洗
浄し、０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ（−）を２ml添
加して、これを３７℃，５％ＣＯ₂ で４分間インキュベ
ートした。次に、系に牛胎児血清（ＦＢＳ）を２ml添加
して、１回軽くゆすった後で上清を除去して、系に混入
している線維芽細胞を除去した。

【００４３】さらに、系にＫＧＭ培地〔表皮角化細胞基
礎培地(Keratinocyto growth medium)：Keratinocyto b
asal medium （ＫＢＭ培地（改変ＭＣＤＢ１５３培地
（クローネティックス社製）））に，ウシ脳下垂体エキ
ス(BPE)(0.4vol％),インシュリン(0.5μm/ml),ハイドロ
コルチゾン(0.5μm/ml),h-EGF(0.1 ng/ml)を添加した培
地、以下同様である〕を１５ml添加し、３７℃，５％Ｃ
Ｏ₂ で３日間培養した。

【００４４】３．対象物質のアッセイ 上記工程により得た毛包上皮系細胞を播種した培養フラ
スコの線維芽細胞混入率（ＦＢ混入率）を測定（３００
０倍，５視野）し、その結果ＦＢ混入率が３％以上のも
のは、アッセイの対象から除外した。

【００４５】系をＰＢＳ（−）１０mlで２回洗浄し、
０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ（−）を２ml添加し
て、これを３７℃で３分間インキュベートした。次いで
上皮系細胞と線維芽細胞とのトリプシンに対する反応性
の違いを利用して，系から線維芽細胞を除去するため
に、トリプシンを除去し、再び０．２５％トリプシン含
有ＰＢＳ（−）を２ml添加して、３７℃，２０rpm で５
分間振盪した。

【００４６】次いで、細胞のはがれを顕微鏡下で確認し
た後、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を１０ml添加し
て、５０ml遠心チューブ中でピペッティングを行い、系
を１５００rpm で５分間遠心処理を施した。上清を除去
し、ＫＧＭ培地２０mlを添加して、細胞塊がなくなるま
でピペッティングを行った。

【００４７】懸濁液をセルストレーナー（100 μm Nalg
ene 社製）で濾過後、５０ml遠沈管に入れて、懸濁液中
の生細胞数を血球算定板で算出し、系にＫＧＭ培地を添
加して、系の中の細胞濃度が５．０×１０⁴cell/mlにな
るように調整した。次いで、０．２ml/well の割合で、
９６well-plate（Ｉ型コラーゲンコーティングプレー
ト：ファルコン社製）に播種し（１．０×１０⁴cell/we
ll）、細胞がウエルの底に沈むまで約２０分間室温下で
放置した。その後、３７℃，５％ＣＯ₂ で１日間培養を
行い、所望するヒト毛包上皮系培養細胞を得た。

【００４８】Ｃ．試験培地の調製： （１）抽出物の調製 市販のコリアンダー（乾燥物）５００g を、１０l の７
０％メタノールに室温（２３℃）で２４時間の浸漬を２
回行った。抽出液から溶媒を留去し、コリアンダーの７
０％メタノール抽出乾燥物５７．５g を得た。

【００４９】（２）対象物質添加培地の調製 上記のコリアンダー抽出物を約１．５mgスクリュー管に
秤量し、有機溶剤（ＤＭＳＯ）で０．２％溶液になるよ
うに調製した。また同様に対照として、チャ抽出物（抽
出法：水抽出），バクモンドウ抽出物（抽出法：１０％
エタノール抽出）の０．２％ＤＭＳＯ溶液を調製した。

【００５０】次いで、上記の生薬抽出物のＤＭＳＯ溶液
を１０００倍量の上記したＫＢＭ培地に添加した〔抽出
物濃度：２．０×１０^-4％（ＤＭＳＯ ０．１％）〕。
これらの対象物質添加培地０．２mlを、０．１％ＤＭＳ
Ｏ含有ＫＢＭ培地１．８mlに添加し、対象物質の濃度を
２．０×１０^-5％になるように調製した（１０倍希
釈）。

【００５１】（３）コントロール培地の調製 ・ネガティブコントロール：ＫＢＭ培地２mlに、ＤＭＳ
Ｏを ２μl 添加して調製した（ＤＭＳＯ ０．１
％）。 ・ポジティブコントロール：ネガティブコントロール培
地に、インシュリン（５mg/ml)を２μl ，ハイドロコー
チゾン（０．５mg/ml)を２μl 添加して調製した。

【００５２】Ｄ．対象物質培地交換：上記Ａ，Ｂにおい
てヒト毛包上皮系培養細胞及びラット毛包上皮系培養細
胞を調製した９６well-plate中のＫＧＭ培地を、対象物
質添加培地及びコントロール培地（２００μl/well）と
交換して、交換後３７℃，５％ＣＯ₂ で２日間培養し
た。なおこの培地の交換は、ウエル内のＫＧＭ培地を，
底面に付着している細胞を傷つけないように留意しつつ
アスピレーターで抜いて、その後速やかに対象物質添加
培地等をウエルの両端から添加することにより行った。

【００５３】Ｅ．細胞増殖の測定：アラマーブルー(ala
mar blue：アラマーバイオサイエンス社製) を培地量
（容量）に対して１／１０量を添加して、３７℃（５％
ＣＯ₂ ）で６時間インキュベートした。インキュベート
後、系の５９５nm及び５７０nmでの吸光度をマイクロプ
レートリーダー（Micro plate reader:Bio RAD社製) を
用いて測定し、下記計算式に従って，細胞増殖度を算出
した。

【００５４】

【数１】 さらに下記計算式に従って、コリアンダー抽出物の毛包
上皮系細胞増殖促進作用を判定した。

【００５５】

【数２】

【００５６】７．結果：判定したコリアンダー抽出物の
上記細胞増殖度は、ヒト由来毛包上皮系培養細胞におい
ては０．５及びラット由来毛包上皮系培養細胞において
も０．５であった。この結果より、コエンドロ属に属す
る植物の抽出物であるコリアンダー抽出物に毛包上皮系
培養細胞の増殖活性が明らかに認められることが判明し
た。

【００５７】すなわち、コエンドロ属に属する植物の抽
出物には、毛髪成長期延長活性が認められることが明ら
かになった。以下、本発明毛髪成長期延長剤の処方を実
施例として示し、さらにこれらの育毛効果の検討を行っ
た。

【００５８】〔実施例１〕 液状毛髪成長期延長剤の調
製 上述したコリアンダーの７０％メタノール抽出乾燥物
０．１％を、７０％エタノール９０％、オレイン酸ナト
リウム０．１％、ドデシルベンゼンスルホン酸０．４９
％、硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物
０．５％及びイオン交換水（残余）と混合攪拌して溶解
させた。さらにイオン交換水（１０％）を添加混合し
て、液状の毛髪成長期延長剤を得た。この液状の毛髪成
長期延長剤の処方において、上述したバクモンドウの１
０％エタノール抽出物の乾燥物０．１％を、上記のコリ
アンダーの７０％メタノール抽出乾燥物に代えて調製し
た液状の剤を対照として調製した（比較例１）。

【００５９】〔実施例２〕 乳液状毛髪成長期延長剤の
調製 上述したコリアンダー抽出物の製造工程において，７０
％メタノールに代えてエタノールを用いた抽出物を得
て、これを以下の処方の乳液状毛髪成長期延長剤におい
て用いた。 配合成分 配合量（重量％） （Ａ相） コリアンダー抽出乾燥物 １．０ ポリオキシエチレン（６０モル）付加硬化ヒマシ油 ２．０ グリセリン １０．０ ジプロピレングリコール １０．０ １，３−ブチレングリコール ５．０ ポリエチレングリコール１５００ ５．０ （Ｂ相） セチルイソオクタネート １０．０ スクワラン ５．０ ワセリン ２．０ プロピルパラベン ２．０ （Ｃ相） カルボキシビニルポリマー１％水溶液 ３０．０ ヘキサメタリン酸ソーダ ０．０３ イオン交換水 ８．３５ （Ｄ相） イオン交換水 ４．５ （Ｅ相） ＫＯＨ ０．１２ イオン交換水 ５．０

【００６０】＜製造法＞Ａ相、Ｂ相をそれぞれ６０℃で
加熱溶解し、混合してホモミキサー処理しゲルを作る。
これにＤ相を徐々に添加しホモミキサーで分散した。次
にこれに溶解したＣ相を加え、最後に溶解したＥ相を添
加し，ホモミキサーで乳化してＯ／Ｗ乳液型の毛髪成長
期延長剤を調製した。

【００６１】〔実施例３〕 クリーム状毛髪成長期延長
剤の調製 実施例２と同様に、コリアンダーのエタノール抽出乾燥
物を，以下の処方のクリーム状毛髪成長期延長剤におい
て用いた。 配合成分 配合量（重量％） （Ａ相） 流動パラフィン ５．０ セトステアリルアルコール ５．５ グリセリルモノステアレート ３．０ ＥＯ（２０モル）−２−オクチルドデシルエーテル ８．０ プロピルパラベン ０．３ 香料 ０．１ （Ｂ相） コリアンダー抽出乾燥物 ５．０ グリセリン ８．０ ジプロピレングリコール ２０．０ ポリエチレングリコール４０００ ５．０ ドデシル硫酸ナトリウム ０．１ ヘキサメタリン酸ソーダ ０．００５ イオン交換水 ３９．９９５

【００６２】＜製造法＞Ａ相、Ｂ相をそれぞれ加熱溶解
し混合し、ホモミキサーで乳化して、クリーム状の毛髪
成長期延長剤を得た。

【００６３】〔試験例２〕 本発明毛髪成長期延長剤の
育毛作用の検討 本発明毛髪成長期延長剤の脱毛防止、発毛効果等の育毛
作用を調べるために、以下の方法でヒトに対してトリコ
グラム試験及び実使用テストを実施した。被験試料及び
対照試料は、実施例１〜３の本発明毛髪成長期延長剤、
比較例１の剤及び７０％エタノールである。

【００６４】試験方法 上記試料の使用前と使用後の抜去毛髪の毛根を顕微鏡下
で観察し、毛根の形態から，成長の止まった毛の毛根で
ある「休止期毛根」数を計数し、その割合の増減によっ
てこれらの試料の育毛作用を比較した。すなわち、被験
試料及び対照試料をそれぞれ男性被験者１０名の頭皮に
１日２回，１回２mlずつ６カ月間連続して塗布し、塗布
直前及び６カ月間塗布終了直後に、被験者１名につき１
００本ずつ毛髪を抜去し、それぞれの毛根を顕微鏡下で
観察した。また、上記試料の育毛効果が有効か又は無効
かに関する実使用テストを行った。これらの試験の結果
を、下記第１表に示す。

【００６５】

【表１】

【００６６】この第１表の結果から、本発明毛髪成長期
延長剤には、その有効成分の毛髪成長期延長効果に基づ
く育毛効果が認められた。

【００６７】

【発明の効果】本発明により、毛包上皮系細胞増殖の活
発化により、毛周期における成長期を延長する毛髪成長
期延長剤が提供される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 順 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株式会社資生堂 第２リサーチセンター 内 (72)発明者 中沢 陽介 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株式会社資生堂 第１リサーチセンター 内 (72)発明者 田島 正裕 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株式会社資生堂 第１リサーチセンター 内 (56)参考文献 特開 昭61−103833（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−176031（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 7/00 - 7/50 A61K 35/78

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】コエンドロ属に属する植物の全草又は果実
   の抽出物を有効成分とする毛髪成長期延長剤。
2. 【請求項２】コエンドロ属に属する植物が、コリアンダ
   ー サチバムである、請求項１記載の毛髪成長期延長
   剤。
3. 【請求項３】毛包系上皮細胞に、コエンドロ属に属する
   植物の全草又は果実の抽出物を接触させて当該細胞増殖
   を亢進させる、毛包系上皮細胞の増殖方法。