JP3374146B2

JP3374146B2 - 蛋白質検出用キット

Info

Publication number: JP3374146B2
Application number: JP2001095452A
Authority: JP
Inventors: 雅之沼間; 誠彦山崎
Original assignee: バイオトレースリミテッド
Priority date: 1995-04-19
Filing date: 2001-03-29
Publication date: 2003-02-04
Anticipated expiration: 2016-04-11
Also published as: JP2001305143A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は蛋白質の検出方法及び蛋
白質検出用キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】人間生活を営んでいく物質的条件の３大
要素である衣、食、住のうち衣、住は環境、その他の条
件である程度は閑却できるが、食は日常、必須不可欠で
ある。

【０００３】従って食物は生命維持の根源としてつねに
適度な栄養源を含むと共に、健康に危害を与えることが
あってはならない。我が国の公衆衛生状態はめざましく
進歩改善をみせているが、こと食品衛生の面では、質的
観点から完全に衛生的とは言えない。

【０００４】飲食に起因する衛生上の危害が発生しない
様、飲食関連の添加物、容器、包装環境等は衛生的に品
質、性状を管理する必要がある。

【０００５】しかし、従来の蛋白質検出方法は試料（対
象物）に直接反応試薬を付着させるため、検体の汚染、
残留試薬の安全性が問題であり、反応試薬の着色物が検
体に残り、水等で簡単に落とせない等の問題もあった。
また上記検出方法では定量性に乏しく、検出結果がでる
までに３〜７２時間以上かかる場合があった。

【０００６】また、試料表面の検出対象部分を、検出媒
体に移しとって蛋白質の有無を検出する方法が特開平８
−２１８３７号に記載されており、試料の汚染、残留試
薬の安全性に優れ、且つ定量性があり、反応試薬の着色
物が試料に残ることがなく、蛋白質の検出時間が迅速で
あった。しかし、検出媒体の吸水部の材質は、天然セル
ロース（綿花、綿糸など）が主であり、これらの繊維を
絡めるなど吸水保水性を高めたもの、即ち綿棒などが用
いられてきた。その結果、バックグラウンドが高いの
で、測定レンジが狭く、また再現性が悪いなどの問題点
があった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、バックグラウンドが低く、再現性の高い蛋白質の検
出方法及び蛋白質検出用キットを提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明の上記課題は以下
の構成により達成される。

【０００９】１）蛋白質を発色させる試薬が封入され
た小容器、蛋白質を移しとるポリエステルからなる検出
部分を有する検出媒体及び前記試薬と検出媒体とが接触
する容器とが組み合わされて一つに収納されてなる蛋白
質検出用キットであって、前記試薬と検出媒体との接触
が、蛋白質を検出媒体に移しとった後に、前記試薬の封
入された容器を潰すことにより起こることを特徴とする
蛋白質検出用キット。

【００１０】２）前記試薬の封入された容器が可撓性
部材からなることを特徴とする請求項１記載の蛋白質検
出用キット。

【００１１】３）前記検出媒体のポリエステルからな
る検出部分が吸水性であることを特徴とする請求項１〜
２いずれかに記載の蛋白質検出用キット。

【００１２】４）前記検出部分が繊維状のポリエステ
ル又は微細な多孔部を無数に有するポリエステルからな
ることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の蛋
白質検出用キット。

【００１３】５）前記検出部分が試料表面の対象部分
を移し取る前に予め水性媒体で湿潤されていることを特
徴とする請求項１〜４いずれかに記載の蛋白質検出用キ
ット。

【００１４】以下本発明を詳述する。本発明は試料表面
の対象部分から蛋白質を検出媒体に該蛋白質を移し、予
め調製された蛋白質反応発色試薬溶液中に蛋白質が転移
した検出媒体を好ましくは２０〜８０℃、更に好ましく
は３０〜６０℃、１〜６０分間接触させた後、発色した
濃度を、例えば蛋白質量に対応した発色濃度を示す色見
本（蛋白質定量のための）、検量線（蛋白質量−発色濃
度）、分光光度計、カラーメーターで該試料に付着した
蛋白質量を１〜６０分間の短時間で定量できる蛋白質の
検出方法である。

【００１５】本発明に使用される試料とは表面に蛋白質
が付着しているか調べたいものである。

【００１６】本発明の検出媒体としては試料の表面の蛋
白質を移しとれる水に溶けない合成高分子が好ましい。
本発明に用いられる合成高分子としは、繊維又は薄層状
に容易に加工しうる合成高分子が好ましく、主に合成繊
維が用いられる。合成繊維としては例えば、・ナイロン：−（ＮＨ（ＣＨ2）ｘＮＨ−ＣＯ（ＣＨ
2）ｙ−ＣＯ）− ・ポリエステル：−（ＣＯ−Ｏ）−多価アルコールと
多塩基酸の重縮合体・アクリル：アクリロニトリルＣＨ2＝ＣＨＣＮのポ
リマー・ポリビニルアルコール：−（ＣＨ2Ｃ（ＯＨ）Ｈ）
− ・ポリウレタン：−（ＮＨＣＯＯ）−いわゆるウレタ
ン結合を有するポリマー・ポリ塩化ビニリデン：−（ＣＨ2ＣＨＣｌ2）−塩化
ビニリデンのラジカル重合体・ポリ塩化ビニル：−（ＣＨ2ＣＨＣｌ）−塩化ビニ
ルの重合体・ポリフルオロエチレン：・ポリプロピレン：−（ＣＨ3ＣＨＣＨＣＨ2）−プロ
ピレンの重合体・ポリエチレン：−（ＣＨ2ＣＨ2）− 及びこれらの組み合わせによる共重合体などが挙げられ
る。

【００１７】このうち好ましいのは、ポリエステル、ポ
リビニルアルコール、ポリ塩化ビニリデン、ポリ塩化ビ
ニル、ポリプロピレン、ポリエチレンである。中でもバ
ックグランドレベルが低く、再現性が特に好ましいのは
ポリエステル、ポリプロピレン、ポリエチレンである。

【００１８】また、合成高分子の形態については蛋白質
が吸着すればどのようなものでもよいが、吸水部に吸水
保水性を持たせることが好ましい。例えば材質が繊維状
のものを寄せ集め、棒状の支持体の先端につけ綿棒のよ
うな形状にすると好ましい。膜状のものは微細な孔をも
うける、スリットを入れる等の加工で十分吸水保水性の
機能は確保出来る。検出媒体に用いられる吸着材料の形
態としては、例えば、綿状、布状、スポンジ状、フィル
ター状などが挙げられる。

【００１９】前記試料表面の蛋白質を前記検出媒体に移
しとる方法としては例えば、ぬぐう、圧着させる、吸い
とる方法等がある。ぬぐう方法としては例えば綿棒等綿
状の検出媒体を付けたスワブを使う、或いはメンブレン
フィルター等を使う方法がある。圧着させる方法として
は例えば布状の検出媒体をつけたテープ、押面にスポン
ジ状の検出媒体をつけたスタンプ、プラスチックフィル
ムを適当な大きさ（例えば２×５ｃｍ）にカットしたも
のの１部分に綿状、布状、或いはスポンジ状の検出媒体
をつけたストリップベース等で圧着させる方法がある。
更に、検出媒体をつけたローラで圧着させる方法があ
る。吸いとる方法としては例えば、吸水性の綿棒、フィ
ルターで吸いとる、スポイト等でサンプルを直接吸いと
り、本発明の検出媒体に移しとる方法がある。

【００２０】吸いとる方法の場合、例えば試料表面に界
面活性剤水溶液を垂らしてしばらく時間をおいた後、該
表面の蛋白質を浮かせて吸いとることが本発明の効果を
奏する。

【００２１】また前記本発明の検出媒体は水性媒体で湿
潤しうる性質を有していることが好ましく、かつ本発明
の検出媒体は予め水性媒体で湿潤されていることが好ま
しい。

【００２２】上記水性媒体としては、例えば生理食塩
水、精製水（例えば蒸留水、脱イオン水等）、界面活性
剤水溶液、水溶性有機溶媒（例えば、アセトン、エタノ
ール、プロピルアルコール、メチルエチルケトン等）水
溶液（１〜９５％溶液）が挙げられる。

【００２３】前記界面活性剤水溶液中の界面活性剤とし
ては例えば以下のものが具体的に挙げられる。

【００２４】非イオン系活性剤１．ソルビタン脂肪酸エステル２．グリセリン脂肪酸エステル３．デカグリセリン脂肪酸エステル４．ポリグリセリン脂肪酸エステル５．プロピレングリコール・ペンタエリスリトール脂肪
酸エステル６．ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル７．ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル８．ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル９．ポリエチレングリコール脂肪酸エステル１０．ポリオキシエチレンアルキルエーテル１１．ポリオキシエチレンフィトステロール・フィトス
タノール１２．ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキ
ルエーテル１３．ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル１４．ポリオキシエチレンヒマシ油・硬化ヒマシ油１５．ポリオキシエチレンラノリン・ラノリンアルコー
ル・ミツロウ誘導体１６．ポリオキシエチレンアルキルアミン・脂肪酸アミ
ド１７．ポリオキシエチレンアルキルフェニルホルムアル
デヒド縮合物１８．単一鎖長ポリオキシエチレンアルキルエーテル上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数１〜１８を
表す。

【００２５】アニオン界面活性剤１．アルキル硫酸塩２．ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩３．Ｎ−アシルアミノ酸、その塩４．Ｎ−アシルメチルタウリン塩５．ポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩６．アルキルスルホカルボン酸塩、α−オレフィンスル
ホン酸塩７．アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテルリン酸塩上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数１〜８を表
す。

【００２６】カチオン界面活性剤１．アルキルアンモニウム塩２．アルキルベンジルアンモニウム塩上記のアルキルとしては直鎖、分岐の炭素数１〜８を表
す。

【００２７】両性界面活性剤１．酢酸ベタイン、イミダゾリニウムベタイン２．レシチンまた上記界面活性剤の市販品としては例えば以下のもの
が挙げられる。

【００２８】非イオン界面活性剤：ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００（和光純薬工業（株）、Ｔｗｅｅｎ−２０（和光
純薬工業（株）、ＮｏｎｉｄｅｔＰ−４０（ベーリン
ガー・マンハイム山之内（株））アニオン界面活性剤：ＴｒｉｔｏｎＸ−７７０（シグ
マ）カチオン界面活性剤：塩化ベンザルコニウム両性界面活性剤：ＡＭ−３０１（日光ケミカルズ
（株））本発明の蛋白質検出方法は当業界公知の方法が適用され
る。薬品を使った蛋白質検出方法としては、ビウレット
反応法、ローリー法、クマシー法、ＢＣＡ法、ニンヒド
リン反応方法などが挙げられる。これらの方法に用いら
れる試薬は適宜調合し、蛋白質反応発色試薬溶液として
本発明の蛋白質の検出に使用される。

【００２９】蛋白質反応発色試薬を調製する際、検出蛋
白質量の感度を高める、発色反応時間の短縮等の目的で
ほう酸ナトリウムを０．１％〜５％添加することもあ
る。

【００３０】本発明の蛋白質検出用キットは、例えば、
検出媒体、蛋白質反応発色用試薬、蛋白質反応発色試薬
調製容器、蛋白質を移しとった検出媒体と蛋白質反応発
色試薬溶液と反応させる容器（例えばキャップがついて
いるガラス又はプラスチックチューブ）、蛋白質反応発
色試薬滴定用プレート、色見本、試薬の表面の蛋白質を
検出媒体に移させる為に、こする面積が一定になるよう
な枠体が一式となっているものをいい、具体的には実施
例で詳述する。

【００３１】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明す
るが、本発明の態様はこれに限定されない。

【００３２】実施例１．試薬調製蛋白質反応発色試薬Ｒの調製下記組成の試薬Ａ、Ｂを調製し、試薬Ａと試薬Ｂを１０
０対２の割合で混合したものを蛋白質反応発色試薬Ｒと
して用いる。発色液は波長５６２ｎｍにおいて、その吸
光度を測定する。

【００３３】試薬Ａの調製次の組成の脱イオン水溶液を試薬Ａとして用いる。（数
値は各重量％）２，２′ビシンコニン酸２ナトリウム１Ｎａ2ＣＯ3・Ｈ2Ｏ２酒石酸ナトリウム０．１６ＮａＯＨ０．４ＮａＨＣＯ3 ０．９５また、ｐＨ調整は５％ＮａＯＨ水溶液又はＮａＨＣＯ
3を添加溶解することでｐＨ１１．２５に合わせる。

【００３４】試薬Ｂの調製４重量％ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏの脱イオン水溶液を試薬Ｂ
として用いる。

【００３５】尚、上記試薬Ａ、試薬Ｂを下記に詳述する
各キットに使用した。

【００３６】２．キットの形態と測定手順以下に蛋白質検出のキットの形態及び測定手順を示す。

【００３７】キットの操作時において、何れも蛋白質サ
ンプリング時には指、手などが試薬、サンプリングの媒
体に、直接触れないように十分注意する。

【００３８】２−１．標準型キット本発明の一例を示す蛋白質検出用キット構成（図１）
は、次の構成である。即ち、図１（ａ）中の５の試薬Ｂ
（点眼ビン形状の容器に充填）、６の生理食塩水（点眼
ビン形状の容器に充填）、サンプリングスワブ１（形
状：綿棒状のもの、綿球は綿状ポリエステル、柄はプラ
スティック製２ｍｍφ長さ７．５ｃｍ）、キャップ２が
ついた３のガラスチューブ１０φ×７０ｍｍ（４の試薬
Ａを１ｍｌ充填してある）から構成されている。

【００３９】その他に、恒温槽（ブロックヒーターな
ど、温度が６０℃に安定設定できるもの）、分光光度計
（波長５６２ｎｍ吸光度が測定可能のもの）、カラーメ
ーター（図１（ｂ））、標準カラースケール（図１
（ｃ））、試験管立てを用意する。

【００４０】本キットの場合カラーメーター（図１
（ｂ））、標準カラースケール（図１（ｃ））がセット
されている。図１（ｂ）、図１（ｃ）において１ａは標
準カラースケール、１ｂはライト、１ｃは比色窓、１ｄ
は標準カラースケールホルダー、１ｅは試験管ホルダ
ー、１ｆは蛋白質量表示、１ｇは比色の度合を示すもの
である。

【００４１】キット操作法ガラスチューブ３のキャップ２を開け、５の試薬Ｂを２
滴添加し、軽く振とうして混ぜる。サンプリングスワブ
１に生理食塩水６を２〜３滴（１００μｌ程度）を含ま
せ、試料のおよそ７ｃｍ平方の面積をくまなく拭う。そ
の際、目安として、拭う強さはサンプリングスワブ１の
柄がしなう程度、拭き取り動作が２０往復で目的面積を
くまなく拭える程度で、サンプリングスワブ１を往復さ
せる。先のガラスチューブ３に、そのサンプリングスワ
ブ１をそのまま浸す。ブランクとして未処理のサンプリ
ングスワブ１を用意し、同様にガラスチューブ３に浸
す。次いでそれぞれガラスチューブを恒温槽で６０℃、
５分間の条件で加温する。ガラスチューブを室温で冷ま
し、カラーメーターにて発色度合をブランクと比較す
る。このとき、カラーメーターには標準カラースケール
を予め用意しておき、これと比較することによりサンプ
リングスワブ１に吸着した蛋白質の半定量が可能であ
る。

【００４２】また、分光光度計を用いて、５６２ｎｍ波
長の吸光度を測定する事により、予め求めておいた蛋白
質検量線から、サンプリングスワブ１に吸着した蛋白質
量を正確に測定することができる。

【００４３】２−２．標準改良型キット本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成（図２）
と準備本キットは次の構成である。即ち、１０φ×７５ｍｍガ
ラスチューブ９に生理食塩水１０が５００μｌが入って
おり、キャップ７の下段には８、１２の試薬Ａ、Ｂを封
入した可撓性ケース１１が装着してある。キャップ７の
底には、サンプリングスワブ１３が固定されている。キ
ャップ７の両側を握ることにより可撓性ケース１１が潰
れ、中の上記試薬Ａ、Ｂがガラスチューブ９内へ落ち、
サンプリングスワブ１３と接触する仕組みとなってい
る。１４は検出部分である。

【００４４】その他に、恒温槽（ブロックヒーターな
ど、温度が６０℃に安定設定できるもの）、分光光度
計：波長５６２ｎｍ吸光度が測定可能のもの、カラーメ
ーター、標準カラースケール（必要に応じて）、試験管
立てを用意する。

【００４５】キット操作法図２においてキャップ７を外し、サンプリングスワブ１
３の先端に対し、上記標準型キット（２−１）のキット
操作法に示した要領で試料からサンプルする。サンプリ
ングスワブ１３をガラスチューブへ戻し、キャップ７を
閉める。８、１２の試薬Ａ、Ｂの入った可撓性ケース１
１を潰して、該試薬Ａ、Ｂをガラスチューブ９内へ落と
す。該ガラスチューブを軽く振って上記試薬Ａ、Ｂを撹
拌した後、該ガラスチューブを恒温槽で６０℃、５分間
の条件で加温する。該ガラスチューブを室温で冷まし、
カラーメーターにて発色程度をブランクと比較する。こ
のとき、カラーメーターには標準カラースケールを予め
用意しておき、これと比較することによりサンプリング
スワブに吸着した蛋白質の半定量が可能である。

【００４６】また、分光光度計を用いて、５６２ｎｍ波
長の吸光度を測定する事により、予め求めておいた蛋白
質検量線から、サンプリングスワブ１３に吸着した蛋白
量を正確に測定することができる。１４は検出部分であ
る。

【００４７】２−３．簡易型キット本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成（図３）
と準備本キットは次の構成である。即ち、１５の試薬Ａ、５の
試薬Ｂ（点眼ビン形状の容器に充填）、試薬Ｒ充填容器
１７（点眼ビン形状の容器）、生理食塩水６（点眼ビン
形状の容器に充填）、サンプリングスワブ１（形状は２
−１標準型キット内備品と同様）、ガラスチューブ：１
０φ×７０ｍｍである。

【００４８】その他に、恒温槽（ブロックヒーターな
ど、温度が６０℃に安定設定できるもの）、カラーメー
ター、標準カラースケール（必要に応じて）、試験管立
てを用意する。

【００４９】キット操作法試薬Ｒ充填容器１７に、１５の試薬Ａを１ｍｌ、５の試
薬Ｂを２〜３滴落とし、軽く混ぜる。こうして作った試
薬Ｒは常温で１０日間は安定である。サンプリングスワ
ブ１に生理食塩水６を２〜３滴落とし湿らせた後、上記
標準型キット（２−１）のキット操作法の要領で試料か
らサンプリングスワブ１にサンプルする。次いで試薬Ｒ
充填容器１７から試薬Ｒ２〜３滴をサンプリングスワブ
１の先端に落とす。直ちにサンプリングスワブ１の先端
で発色反応が開始するので、先端が汚れないように基盤
等に立てかけ、室温あるいは、必要に応じてガラスチュ
ーブに入れて恒温槽で６０℃、１〜３０分間の条件で加
温する。サンプリングスワブ１に吸着した蛋白質量に応
じて、サンプリングスワブ１の先端がごく薄い緑から赤
紫へ着色する。必要があれば、標準カラースケールで発
色の度合を比較することにより、半定量が可能である。

【００５０】２−４．プレート型キット本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成（図４）
と準備本キットは次の構成である。即ち、１５の試薬Ａ、５の
試薬Ｂ（点眼ビン形状の容器に充填）、生理食塩水６
（点眼ビン形状の容器に充填）、サンプリングスワブ２
０（綿状ポリエステルを綿球状にしたもの）、発色反応
トレイ１９、ピンセット１８である。

【００５１】その他に、恒温槽（ブロックヒーターな
ど、温度が６０℃に安定設定できるもの）、カラーメー
ター、標準カラースケール（必要に応じて）を用意す
る。

【００５２】キット操作法発色反応トレイ１９の窪みに１５の試薬Ａを１ｍｌ入
れ、次いで５の試薬Ｂを２〜３滴添加する。発色反応ト
レイ１９を軽く振とうして、該試薬Ａ、Ｂを混ぜる。サ
ンプリングスワブ２０（綿球）をピンセット１８で摘
み、該サンプリングスワブに生理食塩水６を２〜３滴含
ませる。上記標準型キット（２−１）のキット操作法に
ある要領で試料からサンプリングスワブにサンプルす
る。サンプリングスワブ２０（綿球）を上記発色反応ト
レイ１９の窪みに落とす。室温で、必要であれば恒温槽
で６０℃、１〜３０分間の条件でトレイを加温する。室
温で冷まし、カラーメーターにて発色の度合をブランク
と比較する。このとき、カラーメーターには標準カラー
スケールを予め用意しておき、これと比較することによ
りサンプリングスワブに吸着した蛋白質の半定量が可能
である。

【００５３】２−５．ストリップ型キット本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成（図５）
と準備本キットは次の構成である。即ち図５（ａ）、（ｂ）に
おいて、１５の試薬Ａ、５の試薬Ｂ（それぞれ点眼ビン
形状の容器に充填）、試薬Ｒ充填容器１７（点眼ビン形
状の容器）、生理食塩水６（点眼ビン形状の容器に充
填）、ポリエチレンフィルムベースを２×５ｃｍにカッ
トし、端部を２ｃｍ残して手で持つ部分とし、残部にポ
リエステルをフィルター状に成型したものを接着したサ
ンプリングフィルターストリップ、発色反応プレートか
ら構成されている。

【００５４】その他に、恒温槽（ブロックヒーターな
ど、温度が６０℃に安定設定できるもの）、カラーメー
ター、標準カラースケール（必要に応じて）を用意す
る。

【００５５】キット操作法試薬Ｒ充填容器１７（点眼ビン形状の容器）に、１５の
試薬Ａ（点眼ビン形状の容器に充填）を１ｍｌ、５の試
薬Ｂ（点眼ビン形状の容器に充填）を２〜３滴落とし、
軽く混ぜる。こうして作った試薬Ｒは常温で１０日間は
安定である。次いで、ストリップをチャック付きケース
２４から取り出し、サンプリングフィルター２１に生理
食塩水６（点眼ビン形状の容器に充填）を２〜３滴落と
し湿らせる。ストリップベースホルダー２３を持ち、サ
ンプリングフィルター２１の面を試料にあてて、擦り付
ける。要領は上記標準型キット（２−１）のキット操作
法に示したサンプリング方法に従う。ステンレス製又は
ガラス製の平らな蛋白質反応発色試薬滴定用プレート
に、サンプルしたストリップベース２２を乗せ、試薬Ｒ
充填容器１７から試薬Ｒを２〜３滴落とす。その後、室
温で、又は必要であれば恒温槽で６０℃、１〜３０分間
の条件で発色反応トレイを加温する。標準カラースケー
ルを予め用意しておき、これと発色の度合を比較するこ
とによりサンプリングフィルター２１に吸着した蛋白質
の半定量が可能である。

【００５６】２−６．スタンプ型キット本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット構成（図６）
と準備本キットは２−５．備品のサンプリングフィルター２
１をスタンプホルダーに装着したもので、その他は２−
５と同様である。

【００５７】キット操作法図６（ａ）、（ｂ）において、試薬Ｒ充填容器１７（点
眼ビン形状の容器）に、１５の試薬Ａ（点眼ビン形状の
容器に充填）を１ｍｌ、５の試薬Ｂ（点眼ビン形状の容
器に充填）を２〜３滴落とし、軽く混ぜる。こうして作
った試薬Ｒは常温で１０日間は安定である。次いでスタ
ンプホルダー２５を取り出し、サンプリングフィルター
２６に生理食塩水６（点眼ビン形状の容器に充填）を２
〜３滴落とし湿らせる。スタンプホルダー２５を持ち、
サンプリングフィルター２６の面を試料にあてて、擦り
付ける。要領は上記標準型キット（２−１）のキット操
作法に示したサンプリング方法に従う。フィルター面
に、試薬Ｒを２〜３滴落とす。その後、室温で、又は必
要であれば恒温槽で６０℃、１〜３０分間の条件でホル
ダーを加温する。標準カラースケールを予め用意してお
き、これと発色の度合を比較することによりフィルター
に吸着した蛋白質の半定量も可能である。

【００５８】３．吸水部の材料差におけるバックグラウ
ンドと発色形態の比較検討発色形態と試料からのサンプリング方法について比較し
た。検討には前記、標準型の測定キット（２−１）を用
いた。

【００５９】＜試料＞先ず、シャーレに蛋白質としてＢ
ＳＡ（ウシ血清アルブミン）水溶液（１００ｍｇ／ｍ
ｌ）を１ｍｌ入れて均一に延ばし、乾燥機内で乾燥させ
た。対照（ブランク）としてＢＳＡを含まない水溶液に
対して同様な処理を行った。これらを試料として供し
た。

【００６０】＜サンプリングスワブの吸水部の材質＞ａ．ポリエステルｂ．ポリエチレンｃ．天然綿糸
（比較対象）をそれぞれ使用した。

【００６１】＜蛋白質のサンプリング＞各サンプリング
スワブをそのままチューブへ入れて、手順に従い検出反
応を行った。ブランクにはサンプリングスワブを入れな
いものを用いた。分光光度計を用いて、５６２ｎｍ波長
の吸光度を測定することにより、発色反応及びバックグ
ラウンドのレベルを調べ結果を表１に示す。

【００６２】

【表１】

【００６３】表１から、天然セルロースは分子中に存在
する基の影響を受け、発色反応の吸光度は高いが、バッ
クグラウンドも高く、合成繊維系スワブに比べて測定誤
差が大きくなる。一方、合成繊維系スワブはバックグラ
ウンドが低いので、相対的に正確な測定ができる。

【００６４】実施例２再現性試験材質の差による結果再現性への影響を調べ
た。

【００６５】＜サンプリングスワブ＞吸水部の材質とし
て実施例１と同様に、ａ．ポリエステルｂ．ポリビニルアルコールｃ．天
然綿糸（比較対象）を使用した。

【００６６】＜蛋白質のサンプリング＞各サンプリング
スワブ吸水部に対し、蛋白質標準液（ＢＳＡ水溶液（ウ
シ血清アルブミン、蛋白質濃度１ｍｇ／ｍｌ））を５０
μｌずつゆっくり完全に吸収させた。各スワブに対し、
ｎ＝１０で調べた。次いで、標準型キット（２−１）を
用いて用法に従い蛋白質を検出した。測定には実施例１
と同様に分光光度計を用いた。ｎ＝１０の測定値（吸光
度）のばらつきを表２に示した。

【００６７】

【表２】

【００６８】合成繊維系の吸水部を持つスワブは天然綿
糸と比べると明らかにばらつきが少なく良好である。

【００６９】実施例３バックグラウンドの減少サンプリングスワブ自身に起因
する蛋白質検出に対するノイズを調べた。

【００７０】＜サンプリングスワブ＞吸水部の材質とし
て実施例１と同様に、ａ．ポリエステルｂ．ポリビニルアルコールｃ．天
然綿糸（比較対象）を使用した。

【００７１】＜バックグラウンドの比較＞前記、簡易型
キット（２−３）を用い、各サンプリングスワブに試薬
のみを滴下して、手順に従い検出反応を行った。目視に
より、バックグラウンドのレベルを調べた。目視による
確認は、発色が緑（未反応の試薬の色）であれば−、緑
にきわめて薄い紫色が混ざった色は±、更に紫色の濃度
順に＋〜＋＋＋とし５段階で示した。結果を表３に示し
た。

【００７２】

【表３】

【００７３】バックグラウンドは明らかに天然セルロー
スと比べて、合成繊維系スワブ特にポリエステル繊維か
らなる吸水部を有するサンプリングスワブのバックグラ
ウンドが低いことがわかる。

【００７４】

【発明の効果】本発明による蛋白質の検出方法及び蛋白
質検出用キットは、バックグラウンドが低く、再現性の
高い良好な効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一例を示す蛋白質検出用キット（標準
型）構成図である。

【図２】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット（改
良型）構成図である。

【図３】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット（簡
易型）構成図である。

【図４】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット（綿
球型）構成図である。

【図５】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット（ス
トリップ型）構成図である。

【図６】本発明の他の例を示す蛋白質検出用キット（ス
タンプ型）構成図である。

【符号の説明】

１サンプリングスワブ２キャップ３ガラスチューブ４試薬Ａ５試薬Ｂ６生理食塩水７キャップ８試薬Ａ９ガラスチューブ１０生理食塩水１１可撓性ケース１２試薬Ｂ１３サンプリングスワブ１４検出部分１５試薬Ａ１７試薬Ｒ充填容器１８ピンセット１９発色反応トレイ２０サンプリングスワブ（綿球）２１サンプリングフィルター２２ストリップベース２３ベースホルダー２４チャック付きケース２５スタンプホルダー２６サンプリングフィルター

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/68 G01N 33/02 G01N 33/52

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】蛋白質を発色させる試薬が封入された小
容器、蛋白質を移しとるポリエステルからなる検出部分
を有する検出媒体及び前記試薬と検出媒体とが接触する
容器とが組み合わされて一つに収納されてなる蛋白質検
出用キットであって、前記試薬と検出媒体との接触が、
蛋白質を検出媒体に移しとった後に、前記試薬の封入さ
れた容器を潰すことにより起こることを特徴とする蛋白
質検出用キット。
【請求項２】前記試薬の封入された容器が可撓性部材
からなることを特徴とする請求項１記載の蛋白質検出用
キット。
【請求項３】前記検出媒体のポリエステルからなる検
出部分が吸水性であることを特徴とする請求項１〜２い
ずれかに記載の蛋白質検出用キット。
【請求項４】前記検出部分が繊維状のポリエステル又
は微細な多孔部を無数に有するポリエステルからなるこ
とを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の蛋白質
検出用キット。
【請求項５】前記検出部分が試料表面の対象部分を移
し取る前に予め水性媒体で湿潤されていることを特徴と
する請求項１〜４いずれかに記載の蛋白質検出用キッ
ト。