JP3315657B2 - 液体クロマトグラフィー用フィルター、液体クロマトグラフィー用カラム及びヘモグロビン類の測定方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィー用フィルター、液体クロマトグラフィー用カラム
及び該フィルター又はカラムを用いるヘモグロビン類の
測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】有機化学、生化学、医学などの分野にお
ける試料中の成分の分離や分取に液体クロマトグラフが
汎用されている。この液体クロマトグラフは、通常、図
７のようなシステムに構成されている。溶離液などの移
動相１１が電磁弁１２を通り、送液ポンプ１３により試
料導入装置１４を経由して、フィルタ−装置１５を通り
分離カラム１６に入り、この分離カラム１６により試料
中の各成分が分離される。分離された各成分は検出器１
７によって、例えば、吸光度を測定する等によって検出
され、その結果がデーター処理装置１８により処理され
てクロマトグラム１９として表される。

【０００３】上記、分離カラム１６の上流のフィルタ−
装置１５はラインフィルタ−（例えば、後述の図４）と
呼ばれ、フィルターとそれを収容するホルダーで構成さ
れており、該フィルターによって、試料中の固形物や送
液ポンプのシール部品の摩耗物などの不溶物が濾過され
る。また、液体クロマトグラフにおいて使用されるフィ
ルタ−には、上記のラインフィルタ−の他に、分離カラ
ムの試料導入側及び試料導出側に取り付けられるフィル
ターもある。このようなフィルターが装着された液体ク
ロマトグラフィー用カラムを図８に示した。図８におい
て、符号４０は分離カラム本体、符号４１はフィルタ
ー、符号４２はエンドフィッティングである。なお、図
８は試料導入側のみを示したものであり、試料導出側を
省略しているが、試料導出側も同様に構成される。この
カラムにおいては、エンドフィッティング４２の中にフ
ィルター４１が装着され、フィルター４１とエンドフィ
ッティング４２との間隙はシール部材４３で密閉されて
いる。そして、エンドフィッティング４２と分離カラム
本体４０が螺合されることにより、分離カラム本体４０
の端部にフィルター４１が密着されている。

【０００４】このようなフィルタ−装置に用いられるフ
ィルタ−は、一般に、円板状であり、材質はステンレス
製焼結体、又は、ポリエーテルエーテルケトン製のもの
などが用いられている。

【０００５】特開平７−２６０７６３号公報には、充填
剤が収納されたカラム本体のエンドフィティングフィル
ターとして、ステンレス鋼繊維を積層し、それを焼結し
た繊維焼結フィルターを用いた高速液体クロマトグラフ
ィーカラムが提案されている。このフィルターが装着さ
れた液体クロマトグラフィーカラムを、生体試料の測定
に用いると、フィルターに生体試料が吸着し、圧力が上
昇し、連続して多数の試料を測定できない、測定再現性
が悪いなどの問題があった。

【０００６】また、上記ポリエーテルエーテルケトン製
のフィルタ−を用いたものとしては、特開平５−６０７
４２号公報に、糖化ヘモグロビン分析計において、溶離
液と接する流路構成部のうち少なくとも分離カラムのフ
ィルター部をイナートな材質で構成し、そのイナートな
材質の例としてポリエーテルエーテルケトンを用いるこ
とが記載されている。しかしながら、ポリエーテルエー
テルケトンは、コストが高く、しかも、接着性に乏しい
ために成形加工しにくい。従って、得られたフィルター
はもろくシール性が悪いという欠点がある。また、ヘモ
グロビン類の測定において連続測定をするとフィルター
の目詰まりを起こし易く、また、シール性が悪いため液
漏れが生じることなどのため、測定再現性も悪いという
問題点があった。

【０００７】液体クロマトグラフィーによる測定の一つ
として、血液中の糖化ヘモグロビン、特にヘモグロビン
Ａ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃという）が糖尿病診断の指標
となるため広く測定されている。糖化ヘモグロビンとは
血液中の糖がヘモグロビンと結合して生成したものであ
る。溶血液試料中の糖化ヘモグロビンは、過去１〜２カ
月間の血液中の平均的な糖濃度を反映するので溶血液中
の糖化ヘモグロビンは、糖尿病の診断の指標となる。

【０００８】このＨｂＡ１ｃの液体クロマトグラフィー
法による測定は、主にカチオン交換液体クロマトグラフ
ィー法により行われている（特公平８−７１９８号公報
など）。溶血液試料をカチオン交換液体クロマトグラフ
ィーにより分離すると、通常、ヘモグロビンＡ１ａ（以
下、ＨｂＡ１ａという）及びヘモグロビンＡ１ｂ（以
下、ＨｂＡ１ｂという）、ヘモグロビンＦ（以下、Ｈｂ
Ｆという）、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ並
びにヘモグロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）などの
ピークに分画できる。なお、糖尿病の診断の指標として
使用されているＨｂＡ１ｃは、上記のうちの安定型Ｈｂ
Ａ１ｃであり、全ヘモグロビンピークの面積に対する安
定型ＨｂＡ１ｃピークの面積の比率（％）として求めら
れている。

【０００９】このＨｂＡ１ｃの液体クロマトグラフィー
法による測定は、カラムとしてカチオン交換液体クロマ
トグラフィー用充填剤（例えば、カルボキシル基やスル
ホン酸基を官能基として有する充填剤）が充填されたも
のを用い、ｐＨ５．０〜９．０の溶離液を用いて行われ
ている。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
に鑑みてなされたものであり、その目的は、ポリエーテ
ルエーテルケトンのコスト高、接着性に乏しい、もろ
い、シール性が悪いという欠点を解消し、生体試料の吸
着が少なく、寿命が長く、分離性能に悪影響を与えず、
かつ測定再現性が良い液体クロマトグラフィー用フィル
ター、該フィルターを用いることにより寿命が長く、分
離性能に悪影響を与えず、かつ測定再現性が良い液体ク
ロマトグラフィー用カラム及び該フィルター又はカラム
を用いるヘモグロビン類の測定方法を提供することにあ
る。

【００１１】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
生体試料の分離に用いられる液体クロマトグラフィー用
フィルターであって、ポリエーテルケトン類と、セルロ
ース系樹脂、フッ素系樹脂、ポリエチレン、エチレンの
アルキル誘導体の重合体、アクリル系樹脂又はポリメチ
ルメタクリレートとからなることを特徴とする液体クロ
マトグラフィー用フィルターである。請求項２記載の発
明は、ポリエーテルケトン類がポリエーテルエーテルケ
トンである請求項１記載の液体クロマトグラフィー用フ
ィルターである。請求項３記載の発明は、請求項１又は
２に記載の液体クロマトグラフィー用フィルターが、更
に、ブロッキング試薬でブロッキング処理されているこ
とを特徴とする液体クロマトグラフィー用フィルターで
ある。

【００１２】請求項４記載の発明は、請求項１〜３のい
ずれかに記載の液体クロマトグラフィー用フィルターが
装着されたことを特徴とする液体クロマトグラフィー用
カラムである。請求項５記載の発明は、更に、カラム本
体がシリコーン被膜でコーティングされていることを特
徴とする請求項４記載の液体クロマトグラフィー用カラ
ムである。請求項６記載の発明は、更に、カラム本体が
ブロッキング試薬でブロッキング処理されていることを
特徴とする請求項５記載の液体クロマトグラフィー用カ
ラムである。

【００１３】請求項７記載の発明は、請求項１〜３のい
ずれかに記載の液体クロマトグラフィー用フィルターを
用いることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法であ
る。請求項８記載の発明は、請求項４〜６のいずれかに
記載の液体クロマトグラフィー用カラムを用いることを
特徴とするヘモグロビン類の測定方法である。

【００１４】以下、本発明の液体クロマトグラフィー用
フィルターについて詳述する。本発明の液体クロマトグ
ラフィー用フィルターは、ポリエーテルケトン類とポリ
エーテルケトン類以外の以下に限定される高分子材料か
らなることを特徴とする。

【００１５】上記ポリエーテルケトン類とは、フェニル
ケトンとフェニルエーテルの組み合わせ構造からなる超
耐熱性の結晶性高分子であり、例えば、以下の化学式
（１）で表されるポリエーテルエーテルケトン（通常、
ＰＥＥＫ樹脂と称される）；ポリアリルエーテルケト
ン；ポリエーテルケトンケトン；ポリエーテルケトンエ
ーテルケトンケトンなどが挙げられる。特に、ポリエー
テルエーテルケトンが好ましい。

【００１６】

【化１】

【００１７】上記ポリエーテルケトン類以外の高分子材
料としては、生体試料を吸着しにくく、イナート（不活
性）な材質である、セルロース系樹脂、フッ素系樹脂、
ポリエチレン、エチレンのアルキル誘導体の重合体、ア
クリル系樹脂又はポリメチルメタクリレートである。

【００１８】上記セルロース系樹脂には、例えば、酢酸
セルロース、三酢酸セルロース、セルロース、硝酸セル
ロースなどが挙げられる。上記フッ素系樹脂には、例え
ば、ポリ四フッ化エチレン、四フッ化エチレン−パーフ
ルオロアルキルビニルエーテル共重合体、四フッ化エチ
レン−六フッ化プロピレン共重合体、ポリ三フッ化塩化
エチレン、ポリフッ化ビニリデン、四フッ化エチレン−
エチレン共重合体、三フッ化塩化エチレン−エチレン共
重合体などが挙げられる。

【００１９】上記ポリエチレンには、例えば、低密度ポ
リエチレン、高密度ポリエチレン、超高分子量ポリエチ
レンが挙げられる。上記エチレンのアルキル誘導体の重
合体としては、例えば、ポリプロピレン、ポリブチレン
が挙げられる。上記アクリル系樹脂には、例えば、アク
リル共重合体が挙げられる。

【００２０】本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターにおいて、ポリエーテルケトン類とポリエーテルケ
トン類以外の高分子材料との混合比率は、１〜９：９〜
１が好ましく、２〜８：８〜２がより好ましく、３〜
７：７〜３がより一層好ましく、４〜６：６〜４が最も
好ましい。

【００２１】本発明のフィルターは、必要に応じて、シ
リコーンコーティングされてもよい。

【００２２】本発明のフィルターは、上記の液体クロマ
トグラフィー用フィルターが、更に、ブロッキング試薬
でブロッキング処理されていることが好ましい。上記ブ
ロッキング試薬としては、例えば、ウシ血清アルブミ
ン、カゼイン、ゼラチン、ヘモグロビン、ミオグロビン
などの蛋白質；例えば、リン脂質等の極性脂質；例え
ば、ＳＤＳ、ポリエチレングリコールモノ−４−オクチ
ルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）などの界面
活性剤などが挙げられる。

【００２３】本発明のフィルターの形状は、液体の流れ
を乱さない構造であれば、特に限定されない。例えば、
図１に示すような、（イ）円柱状、（ロ）円錐状、
（ハ）円錐台状の凸部を有するもの、（ニ）円錐状の凸
部と円柱部分を組み合わせた形状、（ホ）円錐台状の凸
部と円柱部分を組み合わせた形状、（ヘ）２つの円錐
の、底面同士を接触したような形状が挙げられる。図１
において、符号１は本発明の液体クロマトグラフィー用
フィルター、符号２は必要に応じて使用されるシール部
材である。上記凸部の位置は、液体流入側又は液体流出
側のどちらでもよく、また上記の両側でもよい。

【００２４】本発明のフィルターのサイズは、直径は１
〜１０００ｍｍが好ましく、２〜５０ｍｍがより好まし
い。厚さは０．１〜１００ｍｍが好ましく、０．２〜１
０ｍｍがより好ましい。濾過孔径は、公知の孔径でよ
く、０．１〜２０μｍが好ましく、０．２〜１０μｍが
より好ましい。

【００２５】本発明のフィルターを製造するには、上記
記載の素材を用いる以外は、公知の方法でよく、例え
ば、上記の素材の粒子を加熱成形する方法（焼結加
工）；上記の素材の所定の粒度の高分子粒体を成形金型
の中である面積をもって融合させ、３次元的網目構造を
形成させる方法；上記の素材の繊維を積層し加圧加熱成
形する方法などがある。

【００２６】また、本発明のフィルターを製造するに
は、特開平２−２６２０５４号公報に記載あるような濾
過孔径の異なるフィルターを組み合わせてもよい。すな
わち、溶液の流入側に濾過孔径の大きなものを使用し、
溶液の流出側に濾過孔径の小さなものを使用して組み合
わせる。このように、濾過孔径の異なるフィルターを組
み合わせたものを製造するには、それぞれのフィルター
を製造後、貼り合わせてもよいが、直径の太い繊維を液
体の流入側に用い、直径の細い繊維を液体の流出側に用
いて、積層した状態で型に入れて焼結するのが好まし
い。積層数は、特に限定されないが、通常、２〜３層で
よく、必要に応じて増やしてもよい。

【００２７】また、本発明のブロッキング試薬でブロッ
キング処理されているフィルターを製造するには、請求
項１又は２に記載の液体クロマトグラフィー用フィルタ
ーを、濃度０．０１〜５重量％程度のブロッキング試薬
溶液と接触させればよい。上記接触方法としては、上記
フィルターに上記ブロッキング試薬溶液を通液する方法
が挙げられる。

【００２８】本発明のフィルターの用途としては、液体
クロマトグラフィーのラインフィルター、カラムの試料
導入側及び試料導出側のフィルターなどがある。

【００２９】本発明のフィルターをラインフィルターと
して用いる場合について以下説明する。ラインフィルタ
ーは、フィルターがホルダー内に装着されて構成されて
いる。本発明のフィルターがラインフィルター中に装着
される態様は、従来の態様と同様である。

【００３０】図２は、本発明のフィルターが装着される
ホルダーの一例を示す断面図である。ホルダー３は半体
３ａ及び３ｂからなり（図２に矢印で示したように、半
体３ａ側を液体流入側とし、半体３ｂ側を液体流出側と
する）、半体３ａには内面の一部に雌ねじが設けられて
おり、半体３ｂにはその外周面に上記雌ねじに螺合する
雄ねじが設けられている。各半体３ａ及び３ｂは、液体
の通流方向に並設されている。半体３ａの内部には、そ
れぞれ開口部が相互に対向するように形成された円柱状
の空間部３１ａと円錐状の空間部３２ａが設けられ、更
に、該空間部３２ａの先端には薄い円板状の空間部３３
ａが設けられており、また、円柱状の空間部３１ａを形
成している部分の半体３ａの内面には雌ねじが設けら
れ、この雌ねじに溶離液などの液体が通流するための配
管がネジ止めされ得るようにされている。また、半体３
ｂの内部にも、それぞれ開口部が相互に対向するように
形成された円柱状の空間部３１ｂと円錐状の空間部３２
ｂが設けられ、円柱状の空間部３１ｂを形成している部
分の半体３ｂの内面には雌ねじが設けられ、この雌ねじ
に液体が通流するための配管がネジ止めされ得るように
されている。

【００３１】上記円錐状の空間部３２ａ及び３２ｂの円
錐の頂角Ａは、試料をフィルター全体に導くことにより
フィルター全体で濾過されるようにし、しかも、試料の
拡散を最小に抑える大きさであることが好ましい。上記
頂角Ａは、９０度よりも小さくなると、空間部が大きく
なり、試料の拡散が起こり易くなり、１７９度よりも大
きくなると、更に、空間部が大きくなり、試料の拡散が
起こり易くなるので、９０〜１７９度が好ましく、１０
０〜１７０度がより好ましい。

【００３２】ホルダー３の形状は、例えば、円柱状、立
方体状など特に限定されない。

【００３３】また、ホルダー３は、フィルター交換時に
工具を使う必要がないように、図３に示すように、半体
３ａと３ｂの外周面を、それぞれ円筒形の被覆部３４ａ
と３４ｂで被覆することにより、ホルダーの大きさを大
きくして、手で十分締められるようにしてもよい。

【００３４】ホルダーの材質としてはステンレス等の金
属；ポリエチレン、ポリエーテルエーテルケトン、フッ
素樹脂、ポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂の混
合物等のプラスチックなどが挙げられるが、生体試料の
吸着が少ないポリエーテルエーテルケトンやフッ素樹脂
が好ましい。また、本発明のフィルターの素材に用いら
れるものも必要に応じて用いられ得る。また、生体試料
の吸着が起こり易い材質のもの、例えば、ステンレスの
ようなものは、シリコーン被膜又はセラミック被膜でコ
ーティングしてもよい。

【００３５】図４は、本発明のフィルター１がホルダー
３内に装着されて構成されているラインフィルター５の
断面図である。ラインフィルター５においては、ホルダ
ー３の半体３ａの薄い円板状の空間部３３ａに本発明の
フィルター１が収められている。

【００３６】ホルダー３とフィルター１との間の気密性
を十分保てない場合は、ホルダー３とフィルター１の間
にシール部材２を設ける必要がある。具体的には、ホル
ダー３とフィルター１の間に隙間ができないように、図
５（イ）、（ロ）に示すように、フィルター１をシール
部材２で囲む方法がある。

【００３７】上記シール部材の材質は、フィルターを保
持できる強度を有するものであれば特に限定されず、例
えば、ポリエーテルエーテルケトン、フッ素樹脂、ポリ
エーテルエーテルケトンとフッ素樹脂の混合物、ステン
レスなどが挙げられる。シール部材の大きさ及び形状に
ついては、フィルターの形状にフィットした形状が好ま
しく、しかも、試料の拡散を起こさない大きさ及び形状
が好ましい。

【００３８】本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィルターが装
着されたことを特徴とする。以下、本発明の液体クロマ
トグラフィー用カラムについて説明する。

【００３９】本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
は、本発明のフィルターがカラムの試料導入側及び試料
導出側のフィルターとして装着されている。すなわち、
本発明の液体クロマトグラフィー用カラムは、図６に示
すように、フィルター１として本発明のフィルターが装
着されている他は、図８に示した従来の液体クロマトグ
ラフィー用カラムと同様である。

【００４０】本発明のフィルター及びカラムは、生体試
料の吸着が特に少ない。従って、本発明のフィルター又
はカラムを用いた液体クロマトグラフィーは、生体試料
の分離に特に適している。上記生体試料とは、血液、血
清、血漿、尿などの生体由来の試料を指し、その中に
は、蛋白質や脂質などが含まれているものである。

【００４１】本発明のフィルターを用いた液体クロマト
グラフィー用カラムにおいて、カラム本体（カラムの管
部分）の材質は、カラム本体としての強度を有するもの
であれば特に限定されず、例えば、ステンレス、チタン
等の金属；ポリエーテルエーテルケトン等のプラスチッ
ク；ガラス；ステンレス等の金属の内面をフッ素樹脂又
はポリエーテルエーテルケトン等で被覆したものなどが
挙げられる。

【００４２】上記カラム本体の試料が接する部位は、本
発明のフィルターとして用いる素材で被覆されてもよ
い。

【００４３】上記カラム本体は、必要に応じて、シリコ
ーン被膜でコーティングされてもよい。上記シリコーン
被膜とは、シリコーンから得られる被膜であれば特に限
定されない。上記シリコーンとしては、被膜を形成でき
るものであれば特に限定されず、例えば、オイル、ワニ
ス、ゴム、シランなどの種類がある。好ましくは、硬化
型シリコーンゴムである。シリコーン被膜を形成させる
方法には、室温又は加熱して、図１１に示すようなベー
スポリマーと架橋剤（図１１におけるＸは、例えば、メ
トキシ基、ケトオキシム基、アセトキシ基のような加水
分解性の有機基）を縮合、又は、付加反応、又は、ＵＶ
硬化反応などさせる方法があり、いずれも用いることが
できる。好ましくは、縮合、又は、付加反応が良い。

【００４４】シリコーン被膜の厚さは、好ましくは、
０．１ｎｍ〜１００μｍ、より好ましくは、０．５ｎｍ
〜１０μｍ、最も好ましくは、０．７ｎｍ〜２μｍであ
る。

【００４５】上記シリコーン被膜でカラム本体をコーテ
ィングする場合、カラム本体全体をコーティングする必
要はなく、少なくとも分析試料が接触する部分（すなわ
ち、カラム本体内側）がコーティングされていればよ
い。カラム本体内側のコーティングの割合は、内側部の
全表面積に対して、好ましくは、１０％以上、より好ま
しくは、３０％以上、最も好ましくは、６０％以上であ
る。

【００４６】上記のシリコーン被膜でコーティングされ
たカラム本体を製造するには、上記記載のカラム本体に
硬化型シリコーンを塗布、又はコーティングし、室温、
又は、加温して硬化させる方法が挙げられる。

【００４７】また、上記カラム本体は、必要に応じて、
ブロッキング試薬でブロッキングされてもよい。上記ブ
ロッキング試薬及びブロッキング方法としては、フィル
ターに用いられるブロッキングとして前述したものと同
様である。

【００４８】本発明のフィルターを用いた液体クロマト
グラフィーにおいて、溶離液などの移動相は、公知のも
のでよい。また、液体クロマトグラフ装置も公知のもの
でよい。

【００４９】本発明のカラムを用いた液体クロマトグラ
フィーにおいて、溶離液などの移動相は、公知のもので
よく、また、液体クロマトグラフ装置も公知のものでよ
い。

【００５０】本発明の請求項７記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いることを特徴とする。

【００５１】本発明の請求項８記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用カラム
を用いることを特徴とする。

【００５２】

【作用】本発明のフィルターは、生体試料の吸着が起こ
りにくい材質で構成されているので、フィルター寿命が
長く、同様に、試料の吸着が少ないので、フィルター中
で試料の拡散が起こりにくいため、分離性能に悪影響を
与えず、また、生体試料の測定再現性に悪影響を与えな
い。また、ポリエーテルエーテルケトンの欠点である接
着性が悪いという問題がないため成形加工し易く、その
ためシール性がよく、測定再現性もよい。更に、ブロッ
キング試薬でブロッキング処理されているフィルターに
おいては、上記の作用の全てを奏すると共に、更に、よ
り一層、生体試料の吸着が起こりにくいため、生体試料
の液体クロマトグラフ測定に使用すると、測定の最初か
ら正確な測定値を得ることができる。

【００５３】本発明のカラムは、本発明のフィルターを
装着しているので、寿命が長く、分離性能に悪影響を与
えず、また、生体試料の測定再現性に悪影響を与えな
い。

【００５４】本発明の請求項７記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いているため、ヘモグロビン類がフィルターに
吸着しにくいので、フィルター寿命が長く、同様に、ヘ
モグロビン類がフィルターに吸着しにくいので、フィル
ター中でのヘモグロビン類の拡散が少なくヘモグロビン
類の分離性能に悪影響を与えない。また、ヘモグロビン
類の分離に適したｐＨ範囲において、ヘモグロビン類の
吸着が非常に起こりにくいので、ヘモグロビン類の分離
性能に悪影響を与えない。また、ヘモグロビン類の測定
再現性に悪影響を与えない。

【００５５】本発明の請求項８記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いたカラムを用いるので、ヘモグロビン類が吸
着しにくいため、カラム寿命が長く、同様に、フィルタ
ーにヘモグロビン類が吸着しにくいので、カラム中でヘ
モグロビン類の拡散が少なく、ヘモグロビン類を効果的
に分離できる。また、ヘモグロビン類の分離に適したｐ
Ｈ範囲において、ヘモグロビン類の吸着が非常に起こり
にくいので、ヘモグロビン類が効果的に分離できる。ま
た、ヘモグロビン類の測定再現性に悪影響を与えない。

【００５６】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明する。

【００５７】（実施例１）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂
（テフロン）を１：１で混合焼結加工して製造した。そ
の構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍｍの円柱
体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、このフィ
ルター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部材２に
挿入した後、図４に示すように、ステンレス製ホルダー
３（頂角Ａ＝９０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ同
士をネジ結合して、ラインフィルター５を作製した。

【００５８】（実施例２）実施例１と同様にして得られ
たフィルター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部
材２に挿入した後、ポリエーテルエーテルケトン製のホ
ルダー３（頂角Ａ＝１５０度）に嵌め込み、半体３ａ及
び３ｂ同士をネジ結合して、ラインフィルター５を作製
した。

【００５９】（比較例１）図１（イ）に示したフィルタ
ー１を、ステンレス焼結体の一体成形品として製造し
た。その構造の詳細は、直径５ｍｍ、厚さが１．５ｍｍ
の円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、こ
のフィルター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部
材２に挿入した後、ステンレス製ホルダー３（頂角Ａ＝
９０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ同士をネジ結合
して、ラインフィルター５を作製した。

【００６０】実施例１、２及び比較例１で得られたライ
ンフィルターを用いて以下のようにして、（１）吸着性
の評価、及び（２）生体試料の吸着性とｐＨ（ｐＨ５．
０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０）の関係の評価を行った。

【００６１】（１）吸着性の評価 以下に示した測定条件を用い、実施例１、２又は比較例
１で作製したラインフィルターのみを用いて（すなわ
ち、カラムは使用せず）、ヘモグロビン類の測定をする
ことにより、生体試料の吸着性について検討した。 測定条件 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜３分の間は溶離液Ａを流し、３〜５分の間は溶離液Ｂを流し 、５〜１０分の間は溶離液Ａを流した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００６２】測定試料 以下のようにして調製した糖負荷血液を用いた。血液抗
凝固剤としてフッ化ナトリウムを用いて採血した健常人
血に、５００ｍｇ／ｄｌとなるようグルコース水溶液を
添加し、３７℃で３時間反応させた後、溶血希釈液Ｘ
（０．１重量％トリトンＸ−１００のリン酸緩衝液溶
液、ｐＨ７．０）で溶血し、１５０倍に希釈して測定試
料とした。

【００６３】測定結果 上記測定条件により、測定試料を測定して得られた代表
的なクロマトグラムを図９（イ）（ラインフィルター使
用せず）、図９（ロ）（実施例１又は２のラインフィル
ター使用）、図９（ハ）（比較例１のラインフィルター
使用）に示した。ピーク６１はヘモグロビン類のピーク
を示す（なお、カラムで分離されていないので単一のピ
ークとなっている）。ピーク６２は、溶離液Ａではフィ
ルタに吸着したヘモグロビン類が溶離液Ｂによって脱着
したために表れたピークと思われる。

【００６４】評価方法ラインフィルターを装着せずに、
測定試料を測定したときのヘモグロビン類の ピーク面積を１００％として、実施例１、実施例２、比
較例１のラインフィルターを用いて測定したときのヘモ
グロビン類のピーク面積（ピーク６１の面積）から、以
下の式により溶離液Ａによる回収率を求め、結果を表１
に示した。 回収率（％）＝（ラインフィルター装着時のヘモグロビ
ン類のピーク面積）÷（ラインフィルター装着なし時の
ヘモグロビン類のピーク面積）×１００

【００６５】

【表１】

【００６６】比較例１では、回収率の平均値が５７．４
％であったのが、実施例１及び２では、回収率の平均値
がそれぞれ９５．３％、９８．５％であった。以上よ
り、実施例１及び２のラインフィルターを用いたもので
は、比較例１のラインフィルターを用いたものに比べて
ヘモグロビン類の吸着が少なかったことがわかる。

【００６７】また、表１（及び後述の表２）における、
ＣＶ（％）とは変動係数（すなわち、ＣＶ（％）＝標準
偏差÷平均値×１００）のことであるが、比較例１のラ
インフィルターを用いたものは、実施例１又は２のライ
ンフィルターを用いたものに比較してＣＶがはるかに大
きく、ヘモグロビン類の吸着量のばらつきが大きいこと
が分かる。

【００６８】（２）生体試料の吸着性とｐＨの関係の評
価 以下に示した測定条件を用い、実施例１、２又は比較例
１で作製したラインフィルターのみを用いて（すなわ
ち、カラムは使用せず）、ヘモグロビン類の測定をする
ことにより、生体試料の吸着性とｐＨ（ｐＨ５．０、ｐ
Ｈ６．０、ｐＨ７．０）の関係を評価した。

【００６９】 測定条件 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ ７．０） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜３分の間は溶離液Ａを流し、３〜５分の間は溶離液Ｂを流し 、５〜１０分の間は溶離液Ａを流した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００７０】測定試料 血液抗凝固剤としてフッ化ナトリウムを用いて採血した
健常人血を、溶血希釈液Ｘ（０．１重量％トリトンＸ−
１００のリン酸緩衝液溶液、ｐＨ７．０）で溶血し、１
５０倍に希釈して測定試料とした。

【００７１】評価方法 ラインフィルターを装着せずに、測定試料を測定したと
きのヘモグロビン類のピーク面積を１００％として、実
施例１、実施例２又は比較例１で得られたラインフィル
ターを用いて測定（ｎ＝５）したときのヘモグロビン類
のピーク面積から、以下の式により溶離液Ａによる回収
率を求め、結果を表２に示した。 回収率（％）＝（ラインフィルター装着時のヘモグロビ
ン類のピーク面積）÷（ラインフィルター装着なし時の
ヘモグロビン類のピーク面積）×１００

【００７２】

【表２】

【００７３】比較例１では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、
ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均１３．５６％、７
６．５２％、９１．９８％であった。また、ＣＶ％は、
ｐＨが低くなるほど悪くなり、ｐＨ５．０で、３７．２
７％であった。実施例１では、ｐＨ５．０、ｐＨ６．
０、ｐＨ７．０での回収率がそれぞれ平均９７．４２
％、９７．８２％、９７．２０％であった。実施例２で
は、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０での回収率が
それぞれ平均９８．５６％、９８．７６％、９８．８２
％であった。また、実施例１及び実施例２でのＣＶ％
は、いずれのｐＨにおいても、１％以下であった。

【００７４】以上より、比較例１のステンレス製フィル
ターではヘモグロビン類の吸着性は、ｐＨの影響を非常
に強く受けることが明らかになった。また、ヘモグロビ
ン類の定量には、通常、ｐＨ５〜９程度の溶離液を用い
るのが一般的であるので、ステンレス製フィルターでは
ヘモグロビン類の吸着が極めて大きくなり、吸着率も大
きくばらつくので、ステンレス製フィルターをヘモグロ
ビン類の測定に用いるとフィルター寿命が短くなり、デ
ーターのばらつく原因になると考えられる。実施例１及
び実施例２のポリエーテルエーテルケトンを含む材料か
らなるフィルターでのヘモグロビン類の吸着性は、ｐＨ
９．０から酸性側５．０付近までのｐＨの影響を受け
ず、回収率もほぼ１００％であった。以上より、ヘモグ
ロビン類の測定に用いるフィルターとしては、広いｐＨ
の範囲でヘモグロビン類の吸着が殆どないポリエーテル
エーテルケトンを含む材料からなるフィルターを用いた
方がよいことが明らかである。

【００７５】（実施例３）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂
（テフロン）を１：１で混合焼結加工して製造した。そ
の構造の詳細は、直径４．８ｍｍ、厚さが２ｍｍの円柱
体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、このフィ
ルター１をフッ素樹脂（テフロン）製のシール部材２
（外径６．３ｍｍ、内径４．８ｍｍ、厚さ２ｍｍ）に挿
入した後、これを図６に示したステンレス製カラム本体
４０（直径４．８ｍｍ、長さ３０ｍｍ）のカラム両端に
取り付けるためのエンドフィッティング４２に装着し
た。

【００７６】上記のカラム本体４０に、以下のようにし
て調製した充填剤を、以下に示すカラムの作製の項で述
べるようにして充填して、本発明の液体クロマトグラフ
ィー用カラムを製造した。 ・充填剤の調製 テトラエチレングリコールジメタクリレート（新中村化
学社製）４００ｇ及びメタクリル酸（和光純薬社製）１
５０ｇの混合物にベンゾイルパーオキサイド（重合開始
剤、和光純薬社製）１．５ｇを溶解した。これを、４重
量％ポリビニルアルコール（日本合成化学社製）水溶液
２５００ｍｌに分散させ、攪拌しながら窒素雰囲気下で
７５℃に昇温し、８時間重合した。重合後、洗浄し、乾
燥した後、分級して平均粒径６μｍの粒子を得た。 ・カラムの作製 カラム１本あたり、上記充填剤１．０ｇを、５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌに分散し、５分間超
音波処理した後、よく攪拌した。全量を上記のステンレ
ス製カラム本体４０（４．６φ×３０ｍｍ）を接続した
パッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカー（梅谷
精機社製）に送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接続し、
上記充填剤を上記ステンレス製カラム本体４０に圧力３
００ｋｇ／ｃｍ² で定圧充填した後、エンドフィッティ
ング４２とカラム本体４０を螺合して本発明の液体クロ
マトグラフィー用カラムを製造した。

【００７７】（比較例２）実施例３における、フィルタ
ー１を、ポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂（テ
フロン）を１：１で混合焼結加工して製造したことの代
わりに、ステンレス焼結体の一体成形品として製造した
ことの他は、実施例３と全く同様にして液体クロマトグ
ラフィー用カラムを製造した。

【００７８】実施例３及び比較例２で得られた液体クロ
マトグラフィー用カラムを用いて以下のようにして、ヘ
モグロビン類の測定を行うことにより、該カラムの分離
性能に与える評価を行った（なお、ラインフィルターは
用いなかった）。 測定条件 得られたカラムを以下の液体クロマトグラフに取り付け
た後、以下の測定を行った。 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜５分の間は溶離液Ａを流し、５〜６分の間は溶離液Ｂを流し 、６〜１０分の間は溶離液Ａを流した。 流速：１．６ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００７９】測定試料 実施例１の（１）吸着性の評価の項で用いた測定試料と
同様の方法で調製したもの。

【００８０】測定結果 上記測定条件により、試料を測定して得られたクロマト
グラムを図１０（イ）（実施例３の液体クロマトグラフ
ィー用カラムを用いたもの）、図１０（ロ）（比較例２
の液体クロマトグラフィー用カラムを用いたもの）に示
した。ピーク５１はＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク
５２はＨｂＦ、ピーク５３は不安定型ＨｂＡ１ｃ、ピー
ク５４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５５はＨｂＡ０を示
す。この結果、実施例３の液体クロマトグラフィー用カ
ラムを用いたものでは、比較例２の液体クロマトグラフ
ィー用カラムを用いたものに比較して分離性能に優れて
いることが分かる。

【００８１】（実施例４）図１（イ）に示した形状のフ
ィルター１をポリエーテルエーテルケトンとフッ素樹脂
（テフロン）を１：１で混合焼結加工して製造した。そ
の構造の詳細は、直径４．８ｍｍ、厚さが１．５ｍｍの
円柱体からなり、濾過孔径は２μｍとした。次に、この
フィルター１をポリエーテルエーテルケトン製のシール
部材２に挿入した後、図４に示すように、ポリエーテル
エーテルケトン製ホルダー３（頂角Ａ＝１２０度）に嵌
め込み、半体３ａ及び３ｂ同士をネジ結合して、ライン
フィルター５を作製した。

【００８２】（比較例３）図１（イ）に示した形状のフ
ィルターを、ポリエーテルエーテルケトンのみを焼結加
工して製造した。その構造の詳細は、直径４．８ｍｍ、
厚さが１．５ｍｍの円柱体からなり、濾過孔径は２μｍ
とした。次に、このフィルターをポリエーテルエーテル
ケトン製のシール部材２に挿入した後、図４に示すよう
に、ポリエーテルエーテルケトン製ホルダー３（頂角Ａ
＝１２０度）に嵌め込み、半体３ａ及び３ｂ同士をネジ
結合して、ラインフィルター５を作製した。

【００８３】フィルターの耐久性評価 実施例４及び比較例３で得られたラインフィルターのみ
を用いて（すなわち、カラムは使用せず）、以下に示し
た測定条件により、ヘモグロビン類の測定を連続して行
い、測定検体２００検体毎にラインフィルターの圧力を
測定し、ラインフィルターの圧力の上昇と測定検体数と
の関係を調べた。 （測定条件） システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜２分の間は溶離液Ａを流し、２〜３分の間は溶離液Ｂを流し 、３〜５分の間は溶離液Ａを流した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００８４】測定試料 実施例１の（１）吸着性の評価の項で用いた測定試料と
同様の方法で調製したもの。

【００８５】測定結果 結果を表３に示した。

【００８６】

【表３】

【００８７】実施例４のラインフィルターでは、６００
検体を測定した場合でも、圧力上昇は２ｋｇｆ／ｃｍ²
であったが、比較例３のラインフィルターでは、２００
検体を測定した場合でも１０．２ｋｇｆ／ｃｍ² の圧力
上昇があり、６００検体では４８．９ｋｇｆ／ｃｍ² の
圧力上昇があった。

【００８８】（実施例５）実施例４と同様にして製造し
たフィルター（すなわち、直径４．８ｍｍ、厚さが１．
５ｍｍの円柱体、濾過孔径は２μｍ）１をポリエーテル
エーテルケトン製のシール部材２（外径６．３ｍｍ、内
径４．８ｍｍ、厚さ１．５ｍｍ）に挿入した後、これを
図６に示したステンレス製カラム本体４０（内径４．６
ｍｍ、長さ３５ｍｍ）のカラム両端に取り付けるための
エンドフィッティング４２に装着した。

【００８９】上記のカラム本体４０に、以下のようにし
て調製した充填剤を、以下に示すカラムの作製の項で述
べるようにして充填して、本発明の液体クロマトグラフ
ィー用カラムを製造した。 ・充填剤の調製 テトラエチレングリコールジメタクリレート（新中村化
学社製）４００ｇ及び２−アクリルアミド−２−メチル
スルホン酸（和光純薬社製）１５０ｇの混合物にベンゾ
イルパーオキサイド（重合開始剤、和光純薬社製）１．
５ｇを溶解した。これを、４重量％ポリビニルアルコー
ル（日本合成化学社製）水溶液２５００ｍｌに分散さ
せ、攪拌しながら窒素雰囲気下で７５℃に昇温し、８時
間重合した。重合後、洗浄し、乾燥した後、分級して平
均粒径６μｍの粒子を得た。 ・カラムの作製 カラム１本あたり、上記充填剤１．０ｇを、５０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌに分散し、５分間超
音波処理した後、よく攪拌した。全量を上記のステンレ
ス製カラム本体４０（内径４．６φ×３５ｍｍ）を接続
したパッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカー
（梅谷精機社製）に送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接
続し、上記充填剤を上記ステンレス製カラム本体４０に
圧力３００ｋｇ／ｃｍ² で定圧充填した後、エンドフィ
ッティング４２とカラム本体４０を螺合して本発明の液
体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００９０】（比較例４）実施例４と同様にして製造し
たフィルターの代わりに、比較例３と同様にして製造し
たフィルターを用いた他は、実施例５と全く同様にして
液体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【００９１】測定再現性評価 実施例５及び比較例４で得られた液体クロマトグラフィ
ー用カラムを用いて以下のようにして、ヘモグロビン類
の測定を行うことにより、該カラムの安定型ＨｂＡ１ｃ
測定の再現性評価を行った（なお、ラインフィルターは
用いなかった）。 測定条件 得られたカラムを以下の液体クロマトグラフに取り付けた後、以下の測定を行 った。 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８） 溶離液Ｂ：３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８） 測定開始より０〜５分の間は溶離液Ａを流し、５〜６分の間は溶離液Ｂを流し 、６〜１０分の間は溶離液Ａを流した。 流速：１．６ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００９２】測定試料 実施例１の（１）吸着性の評価の項で用いた測定試料と
同様の方法で調製したもの。

【００９３】評価方法 実施例５及び比較例４で得られた液体クロマトグラフィ
ー用カラムの安定型ＨｂＡ１ｃ測定の再現性を評価する
ために、まず、それぞれのカラムで測定試料を１０回測
定し、安定型ＨｂＡ１ｃ測定値の平均値とそのＣＶ
（％）〔変動係数、すなわち、ＣＶ（％）＝標準偏差÷
平均値×１００〕を求め初期値とした。その後、それぞ
れのカラムで上記測定試料を連続して測定し、２００検
体毎に引き続く１０回の測定値の平均値とそのＣＶ
（％）を求めた。なお、安定型ＨｂＡ１ｃ濃度（％）
は、上記測定条件により、試料を測定して得られたクロ
マトグラムから以下の式により求めた。 安定型ＨｂＡ１ｃ濃度（％）＝（安定型ＨｂＡ１ｃピー
クの面積）÷（全ヘモグロビンピークの面積の和）×１
００

【００９４】測定結果 測定結果を表４に示した。

【００９５】

【表４】

【００９６】安定型ＨｂＡ１ｃ測定再現性は、実施例５
のカラムでは６００検体測定しても安定型ＨｂＡ１ｃ濃
度は一定で、ＣＶ（％）も１％以下であった。ところ
が、比較例４では、測定開始の測定値は、実施例５と同
じであったが、連続測定することにより、安定型ＨｂＡ
１ｃ測定値が低下し、ＣＶ（％）も高くなりバラツキが
大きくなることがわかる。

【００９７】（実施例６）実施例４で得られたフィルタ
ーを、図６に示したステンレス製カラム本体４０（シリ
コーン処理済、直径４．６ｍｍ、長さ３５ｍｍ）のカラ
ム両端に取り付けるためのエンドフィッティング４２に
装着した。

【００９８】なお、上記のシリコーン処理済ステンレス
製カラム本体は、以下のようにして作製した。２液型硬
化型シリコーンを用い、上記カラム本体をシリコーンコ
ーティングした後、１００℃で３０分間加熱して、乾燥
・硬化させ、均一なコーティング層を形成させた。

【００９９】上記のカラム本体４０に、実施例５と同様
の充填剤を実施例５と同様にして充填し、上記エンドフ
ィッティングをセットして、本発明の液体クロマトグラ
フィー用カラムを製造した。

【０１００】（実施例７）実施例４で得られたフィルタ
ーに、０．１重量％ヘモグロビン水溶液を通液し、ブロ
ッキング処理した。また、カラム本体は、実施例６と同
様にシリコーンコーティングした。上記フィルター及び
カラム本体を用いた以外は、実施例５と同様にして本発
明の液体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【０１０１】（実施例８）実施例４で得られたフィルタ
ーに、０．１重量％ウシ血清アルブミン水溶液を通液
し、ブロッキング処理した。また、カラム本体は、実施
例６と同様にシリコーンコーティングした。上記フィル
ター及びカラム本体を用いた以外は、実施例５と同様に
して本発明の液体クロマトグラフィー用カラムを製造し
た。

【０１０２】（実施例９）実施例４で得られたフィルタ
ーに、０．１重量％カゼイン水溶液を通液し、ブロッキ
ング処理した。また、カラム本体は、実施例６と同様に
シリコーンコーティングした。上記フィルター及びカラ
ム本体を用いた以外は、実施例５と同様にして本発明の
液体クロマトグラフィー用カラムを製造した。

【０１０３】（比較例５）比較例３で得られたフィルタ
ーを用いた以外は、実施例５と同様にして液体クロマト
グラフィー用カラムを製造した。

【０１０４】実施例５〜９及び比較例５で得られた液体
クロマトグラフィー用カラムを用いて、実施例５と同様
にして、ヘモグロビン類の測定を行うことにより、該カ
ラムの安定型ＨｂＡ１ｃ測定値の評価を行った。

【０１０５】測定試料 健常人血液を溶血したものであって、前述の定義による
安定型ＨｂＡ１ｃ濃度が４．５％であるものを用いた。

【０１０６】測定結果 試料を５回連続して測定し、得られたクロマトグラムか
ら、前述の定義による安定型ＨｂＡ１ｃ濃度を求め、測
定回数と安定型ＨｂＡ１ｃ濃度の関係を表５に示した。

【０１０７】

【表５】

【０１０８】比較例５のカラムでは、安定型ＨｂＡ１ｃ
濃度は、測定１回目から５回目にかけて、３．９％から
４．３％に上昇した。すなわち、このカラムでは、測定
初期では安定な値が得られないことがわかる。一方、実
施例５のカラムでは、測定１回目〜３回目までは安定型
ＨｂＡ１ｃ濃度は４．４％であったが、測定４回目と５
回目では、４．５％となり、正確な値が得られた。実施
例６のカラムでは、測定１回目と２回目までは安定型Ｈ
ｂＡ１ｃ濃度は４．４％であったが、測定３〜５回目で
は、４．５％となり、正確な値が得られた。更に、ブロ
ッキングしたフィルター及びシリコーンコーティングし
たカラム本体を用いた実施例７〜９のカラムでは、測定
１回目から安定型ＨｂＡ１ｃ濃度は４．５％と正確な値
が得られた。

【０１０９】

【発明の効果】本発明の液体クロマトグラフィー用フィ
ルターの構成は、上記の通りであり、生体試料の吸着が
起こりにくい材料で構成されているので、フィルター性
能の寿命が長く、分離性能に悪影響を与えず、また、生
体試料の測定再現性がよい。更に、ブロッキング試薬で
ブロッキング処理されているフィルターにおいては、上
記の作用の全てを奏すると共に、更に、より一層、生体
試料の吸着が起こりにくいため、生体試料の液体クロマ
トグラフ測定に使用すると、測定の最初から正確な測定
値を得ることができる。

【０１１０】本発明のカラムは、本発明のフィルターを
装着しているので、寿命が長く、分離性能に悪影響を与
えず、生体試料の測定再現性がよい。

【０１１１】本発明の請求項７記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いているため、ヘモグロビン類がフィルターに
吸着しにくいので、フィルター寿命が長く、分離性能に
悪影響を与えず、また、ヘモグロビン類の測定再現性が
よい。

【０１１２】本発明の請求項８記載のヘモグロビン類の
測定方法は、本発明の液体クロマトグラフィー用フィル
ターを用いたカラムを用いるので、ヘモグロビン類が吸
着しにくいため、カラム寿命が長く、分離性能に悪影響
を与えず、また、ヘモグロビン類の測定再現性がよい。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の液体クロマトグラフィー用フィルター
の例を示す断面図。

【図２】本発明のフィルターが装着されるホルダーの一
例を示す断面図。

【図３】本発明のフィルターが装着されるホルダーの他
の例を示す断面図。

【図４】本発明のフィルターがホルダー内に装着されて
構成されているラインフィルターの断面図。

【図５】本発明の液体クロマトグラフィー用フィルター
を示す図であり、図５（イ）はその断面図。図５（ロ）
は平面図。

【図６】本発明の液体クロマトグラフィー用カラムを示
す断面図。

【図７】液体クロマトグラフのシステムの構成を示す説
明図。

【図８】従来の液体クロマトグラフィー用カラムを示す
断面図。

【図９】測定試料を測定して得られたクロマトグラム。

【図１０】測定試料を測定して得られたクロマトグラ
ム。

【図１１】シリコーン被膜を形成させるための反応の例
を示す図。

【符号の説明】

１ 液体クロマトグラフィー用フィルター ２ シール部材 ３ ホルダー ３ａ、３ｂ 半体 ３１ａ、３１ｂ 円柱状の空間部 ３２ａ、３２ｂ 円錐状の空間部 ３３ａ 円板状の空間部 ３４ａ、３４ｂ 被覆部 ５ ラインフィルター

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−60742（ＪＰ，Ａ) 実開 平６−7060（ＪＰ，Ｕ) 特表 平５−508877（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 30/00 - 30/96

Claims (8)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 生体試料の分離に用いられる液体クロマ
   トグラフィー用フィルターであって、ポリエーテルケト
   ン類と、セルロース系樹脂、フッ素系樹脂、ポリエチレ
   ン、エチレンのアルキル誘導体の重合体、アクリル系樹
   脂又はポリメチルメタクリレートとからなることを特徴
   とする液体クロマトグラフィー用フィルター。
2. 【請求項２】 ポリエーテルケトン類がポリエーテルエ
   ーテルケトンである請求項１記載の液体クロマトグラフ
   ィー用フィルター。
3. 【請求項３】 請求項１又は２に記載の液体クロマトグ
   ラフィー用フィルターが、更に、ブロッキング試薬でブ
   ロッキング処理されていることを特徴とする液体クロマ
   トグラフィー用フィルター。
4. 【請求項４】 請求項１〜３のいずれかに記載の液体ク
   ロマトグラフィー用フィルターが装着されたことを特徴
   とする液体クロマトグラフィー用カラム。
5. 【請求項５】 更に、カラム本体がシリコーン被膜でコ
   ーティングされていることを特徴とする請求項４記載の
   液体クロマトグラフィー用カラム。
6. 【請求項６】 更に、カラム本体がブロッキング試薬で
   ブロッキング処理されていることを特徴とする請求項５
   記載の液体クロマトグラフィー用カラム。
7. 【請求項７】 請求項１〜３のいずれかに記載の液体ク
   ロマトグラフィー用フィルターを用いることを特徴とす
   るヘモグロビン類の測定方法。
8. 【請求項８】 請求項４〜６のいずれかに記載の液体ク
   ロマトグラフィー用カラムを用いることを特徴とするヘ
   モグロビン類の測定方法。