JP4897282B2 - 生体試料分析用の液体クロマトグラフィー用フィルタ及び生体試料の分析方法 - Google Patents
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Description
(実施例1)
孔径が12μmのフィルタ層1(外層)、孔径が3μmのフィルタ層2(内層)及び孔径が12μmのフィルタ層3(外層)が、この順に積層された3層構造を有するステンレス製の液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。なお、得られたフィルタのフィルタ層1及び3の厚みは各々0.25mm、フィルタ層2の厚みは0.50mmであり、全体の厚みは1mmであった。また、フィルタの外径は5mmであった。
(実施例2)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.15mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.70mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(実施例3)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.35mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.30mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(実施例4)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.10mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.80mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(実施例5)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.40mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.20mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(比較例1)
孔径が12μmのフィルタ層1、孔径が3μmのフィルタ層2が、積層された2層構造を有するステンレス製の液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。なお、得られたフィルタのフィルタ層1の厚みは0.50mm、フィルタ層2の厚みは0.50mmであり、全体の厚みは1mmであった。また、フィルタの外径は5mmであった。
(比較例2)
孔径が3μmのフィルタ層1の1層からなるステンレス製の液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。なお、得られたフィルタの全体の厚みは1mmであった。また、フィルタの外径は5mmであった。
(比較例3)
フィルタ層1の孔径を12μmとした以外は、比較例2と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(比較例4)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.05mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.90mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(比較例5)
フィルタ層1及び3(外層)の厚みを各々0.45mm、フィルタ層2(内層)の厚みを0.10mmとした以外は、実施例1と同様にして、液体クロマトグラフィー用フィルタを作製した。
(評価)
実施例1〜5及び比較例1〜5で得られた液体クロマトグラフィー用フィルタについて、以下の評価を行った。
(1)液体クロマトグラフィー用フィルタ及びメンブランフィルタの圧力上昇の評価
得られた液体クロマトグラフィー用フィルタをPEEK製パッキンにはめ込み、流路に接続できるねじ部を設けたPEEK製ホルダに装着した後、図2に示す液体クロマトグラフィーに設置した。
(2)Hbの非特異吸着抑制効果の評価
実施例1の液体クロマトグラフィー用フィルタを、0.01%のウシ血清アルブミンのリン酸緩衝溶液に40℃で1時間浸漬することによって表面処理を行った。次いで、上記表面処理をした液体クロマトグラフィー用フィルタ及び上記表面処理をしていない液体クロマトグラフィー用フィルタを用いて、液体クロマトグラフィーシステム(島津社製LC−6Aシステム)によって、以下の条件でHb回収率試験を行った。
B液=500mMリン酸緩衝液(pH5)
流速:1.5ml/分
検出波長:415nm
測定検体: ヒト健常人血(界面活性剤を含むリン酸緩衝液(pH7)による200倍希釈品)
2、4 外層
3 内層
5 液体クロマトグラフィー
6 移動層
7 送液ポンプ
8 試料注入装置
9 液体クロマトグラフィー用フィルタ
10 メンブランフィルタ
Claims (6)
- 外層、内層及び外層が、この順で積層された3層構造からなる液体クロマトグラフィー用フィルタであって、前記外層は、前記内層よりも孔径が大きく、外層の孔径は7〜20μm、内層の孔径は0.1〜7μmであり、かつ、全体の厚みを100としたときの厚みの比が、外層:内層:外層=15〜35:30〜70:15〜35であることを特徴とする生体試料分析用の液体クロマトグラフィー用フィルタ。
- 生体試料が血液であることを特徴とする請求項1記載の液体クロマトグラフィー用フィルタ。
- 全体の厚みが0.1〜10mmであることを特徴とする請求項1又は2記載の液体クロマトグラフィー用フィルタ。
- 表面処理が施されていることを特徴とする請求項1、2又は3記載の液体クロマトグラフィー用フィルタ。
- 表面処理は、疎水性物質の非特異吸着を抑制するものであることを特徴とする請求項4記載の液体クロマトグラフィー用フィルタ。
- 液体クロマトグラフィーによる生体試料の分析方法において、請求項1に記載された液体クロマトグラフィー用フィルタをプレフィルタ又はカラムエンドフィルタとして流路に設置することを特徴とする、生体試料の分析方法。
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