JP3251689B2 - ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物 - Google Patents
３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物Info
- Publication number
- JP3251689B2 JP3251689B2 JP3193393A JP3193393A JP3251689B2 JP 3251689 B2 JP3251689 B2 JP 3251689B2 JP 3193393 A JP3193393 A JP 3193393A JP 3193393 A JP3193393 A JP 3193393A JP 3251689 B2 JP3251689 B2 JP 3251689B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- producing
- hsd
- hydroxysteroid dehydrogenase
- same
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、３α−ヒドロキシステ
ロイドデヒドロゲナーゼ（以下、３α−ＨＳＤと略称す
る）の新規な製造法およびこれに用いる微生物に関す
る。
ロイドデヒドロゲナーゼ（以下、３α−ＨＳＤと略称す
る）の新規な製造法およびこれに用いる微生物に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】３α−ＨＳＤは、３α位にヒドロキシル
基を持つステロイド化合物のヒドロキシル基に作用し、
カルボニル基に酸化する酵素であり、これが補酵素ＮＡ
Ｄ （ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）の共存
下で３α−ヒドロキシステロイドに作用すると、３α−
ヒドロキシステロイドが３−オキソステロイドに変換さ
れると同時にＮＡＤ がＮＡＤＨになるため、この反応
を応用して、例えば、血液中の胆汁酸を定量する臨床検
査に用いることができる。
基を持つステロイド化合物のヒドロキシル基に作用し、
カルボニル基に酸化する酵素であり、これが補酵素ＮＡ
Ｄ （ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）の共存
下で３α−ヒドロキシステロイドに作用すると、３α−
ヒドロキシステロイドが３−オキソステロイドに変換さ
れると同時にＮＡＤ がＮＡＤＨになるため、この反応
を応用して、例えば、血液中の胆汁酸を定量する臨床検
査に用いることができる。
【０００３】３α−ＨＳＤを用いて血中胆汁酸を測定す
る方法は古くから知られているが、血中胆汁酸は、肝疾
患、胆道疾患時に異常な増加を示し、これら疾患の診断
の示標として非常に重要であり、臨床検査薬の反応試薬
として工業的安価に入手できるのが望ましい。
る方法は古くから知られているが、血中胆汁酸は、肝疾
患、胆道疾患時に異常な増加を示し、これら疾患の診断
の示標として非常に重要であり、臨床検査薬の反応試薬
として工業的安価に入手できるのが望ましい。
【０００４】従来、３α−ＨＳＤを生産する方法として
は、例えばシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）ＮＲＲＬ Ｂ−１１０６４、同
ＮＲＲＬ Ｂ−１１０６５、コリネバクテリウム・ハイ
ドロカーボクラスタス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｌｕ
ｍ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｃｌａｓｔｕｓ）ＮＲＲＬＢ
−１１０６８、シュードモナス・テストステロニー（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ）Ａ
ＴＣＣ １１９９６などの３α−ＨＳＤ生産菌を培養す
る方法が知られている。
は、例えばシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）ＮＲＲＬ Ｂ−１１０６４、同
ＮＲＲＬ Ｂ−１１０６５、コリネバクテリウム・ハイ
ドロカーボクラスタス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｌｕ
ｍ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｃｌａｓｔｕｓ）ＮＲＲＬＢ
−１１０６８、シュードモナス・テストステロニー（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ）Ａ
ＴＣＣ １１９９６などの３α−ＨＳＤ生産菌を培養す
る方法が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記菌
の３α−ＨＳＤ生産能は充分に満足し得るものではな
く、工業的安価に３α−ＨＳＤを製造するために、更に
生産能の高い菌が望まれていた。
の３α−ＨＳＤ生産能は充分に満足し得るものではな
く、工業的安価に３α−ＨＳＤを製造するために、更に
生産能の高い菌が望まれていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】斯かる実情において、本
発明者らは、３α−ＨＳＤ生産能の高い菌を得るべく天
然界から検索を行っていたところ、福島県五色沼付近の
土壌中より新たに分離した微生物が既知の３α−ＨＳＤ
生産菌よりも生産能が高いことを見いだし、本発明を完
成した。
発明者らは、３α−ＨＳＤ生産能の高い菌を得るべく天
然界から検索を行っていたところ、福島県五色沼付近の
土壌中より新たに分離した微生物が既知の３α−ＨＳＤ
生産菌よりも生産能が高いことを見いだし、本発明を完
成した。
【０００７】本菌株は下記の菌学的性質を有する。
【０００８】
【表１】 （１）形態 細胞の大きさ ０．３〜０．５×１．６〜１．９μｍ 細胞の形 短桿菌 細胞の多形性 なし 運動性の有無 あり べん毛の有無 周べん毛８本（Ｌｅｉｆｓｏｎ法） グラム染色性 陰性
【０００９】
【表２】 （２）各培地における生育状況 肉汁寒天平板培養 適度の生育、円形、隆起状、全縁不均一、 乳光沢 肉汁寒天斜面培養 帯状に生育、なめらかで乳光沢 肉汁液体培養 生育し、混濁する。 肉汁ゼラチン培養 表層がやや液化する。 リトマス・ミルク やや青変する。凝固しない。
【００１０】
【表３】 （３）生理学的性質 硝酸塩の還元 − ＶＰテスト − インドールの生成 − ＩＰＡ反応 − 硫化水素の生成 − 色素の生成 − ウレアーゼ ＋ （クリステンゼン培地） オキシダーゼ ＋ 生育の範囲 温度 ２０〜３７℃で生育する。 pH ６．８〜７．２ 酸素に対する態度 好気的 ＯＦテスト − ガスの生成 − （クリグラー培地） アシルアミダーゼ ＋ ＤＮａｓｅ ＋ 耐塩性 ＮａＣｌ ２％で生育するが５％で生育し ない 糖から酸の生成 グルコース − マルトース − キシロース − マンニトール − 乳糖分解 − デカルボキシラーゼ反応 リジン ＋ オルニチン ＋ アルギニン加水分解試験 − クエン酸の利用 − 炭素源の資化 Ｄ−グルコース ± Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−フルクトース − Ｄ−マンニトール − Ｌ−アルギニン ＋ Ｌ−オルニチン ＋ Ｌ−リジン ＋ クエン酸 − 酢酸 ＋ グリセリン ± コール酸 −
【００１１】以上の菌学的諸性質を、バージーズ・マニ
ュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）の記載に照し
て検討すると、本菌株は短桿菌、グラム陰性であり、周
べん毛があること、アラビノース及びキシロースを資化
しないことから、アルカリゲネス属に属する。しかし、
本菌株はアルギニン、オルニチンを利用し、クエン酸、
マンニトールを利用しない点で、アルカリゲネス属に属
する１１種の既知菌と相違することから、本菌株をアル
カリゲネス属に属する新菌種と判断し、アルカリゲネス
・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００３（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｓｐ．ＤＰ−Ｂ−１００３）と命名し、工業技術
院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１３４１２
として寄託した。
ュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）の記載に照し
て検討すると、本菌株は短桿菌、グラム陰性であり、周
べん毛があること、アラビノース及びキシロースを資化
しないことから、アルカリゲネス属に属する。しかし、
本菌株はアルギニン、オルニチンを利用し、クエン酸、
マンニトールを利用しない点で、アルカリゲネス属に属
する１１種の既知菌と相違することから、本菌株をアル
カリゲネス属に属する新菌種と判断し、アルカリゲネス
・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００３（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ ｓｐ．ＤＰ−Ｂ−１００３）と命名し、工業技術
院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１３４１２
として寄託した。
【００１２】従って、本発明は、アルカリゲネス属に属
する３α−ＨＳＤ生産菌を培養し、培養物から３α−Ｈ
ＳＤを採取することを特徴とする３α−ＨＳＤの製造法
を提供するものである。更にまた、本発明は、この３α
−ＨＳＤの製造に使用する新規な微生物のアルカリゲネ
ス・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００３を提供するものであ
る。
する３α−ＨＳＤ生産菌を培養し、培養物から３α−Ｈ
ＳＤを採取することを特徴とする３α−ＨＳＤの製造法
を提供するものである。更にまた、本発明は、この３α
−ＨＳＤの製造に使用する新規な微生物のアルカリゲネ
ス・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００３を提供するものであ
る。
【００１３】本発明のアルカリゲネス・エスピー ＤＰ
−Ｂ−１００３は例えば後記参考例に記載の方法により
土壌中より分離することができる。
−Ｂ−１００３は例えば後記参考例に記載の方法により
土壌中より分離することができる。
【００１４】本発明方法により３α−ＨＳＤを製造する
には、本菌を適当な培地中で培養する。培地としては、
炭素源、窒素源、無機塩類等を含有する培地にコール酸
を加えたものを使用することができ、培地のpHは６．５
〜７程度が好ましい。培養はアルカリゲネス属に属する
菌の培養に一般に使用される条件、例えば２８〜３０℃
の温度で、約２４時間通気攪拌するのが好ましい。
には、本菌を適当な培地中で培養する。培地としては、
炭素源、窒素源、無機塩類等を含有する培地にコール酸
を加えたものを使用することができ、培地のpHは６．５
〜７程度が好ましい。培養はアルカリゲネス属に属する
菌の培養に一般に使用される条件、例えば２８〜３０℃
の温度で、約２４時間通気攪拌するのが好ましい。
【００１５】このようにして培養するとき、３α−ＨＳ
Ｄは主として菌体中に産生されるので、培養物中から菌
体を集め、超音波破砕などの公知の方法で菌体を破砕
し、その破砕液から公知の方法、例えば硫安塩析、疎水
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等
によって分離精製すれば３α−ＨＳＤが得られる。
Ｄは主として菌体中に産生されるので、培養物中から菌
体を集め、超音波破砕などの公知の方法で菌体を破砕
し、その破砕液から公知の方法、例えば硫安塩析、疎水
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等
によって分離精製すれば３α−ＨＳＤが得られる。
【００１６】
【発明の効果】本発明のアルカリゲネス属に属する３α
−ＨＳＤ生産菌は高い３α−ＨＳＤ生産能を有し、これ
を使用すれば工業的有利に３α−ＨＳＤを製造すること
ができる。
−ＨＳＤ生産菌は高い３α−ＨＳＤ生産能を有し、これ
を使用すれば工業的有利に３α−ＨＳＤを製造すること
ができる。
【００１７】
【実施例】次に実施例を挙げて更に詳細に本発明を説明
する。
する。
【００１８】参考例 土壌０．１〜０．２ｇを０．５Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4−ＫＨ
2ＰＯ4緩衝液（pH６．８）８０ml／ｌ、Ｈｕｎｔｅｒ無
機塩溶液２０ml／ｌ、グルコース１ｇ、酵母エキス０．
１ｇ、コール酸ナトリウム１ｇ／ｌ、乳酸ナトリウム１
ml／ｌからなる培地１０mlに懸濁し、２８℃で２〜３日
間振盪培養する。２〜３日毎に、同培地に２回植え換え
を行った後、更に同培地に１．５％の寒天を加えた培地
上に塗布し、２８℃で培養を行い菌を得た。この様にし
て得た菌を、コーンスティープリカー７７ｇからアルカ
リ沈澱物を除去した上清、リン酸１アンモニウム１ｇ／
ｌ、リン酸２アンモニウム１ｇ／ｌ、リン酸１カリウム
２ｇ／ｌ、コール酸ナトリウム０．８ｇ／ｌから成り、
pH６．８に調節した液体培地に接種し、２８℃２日間振
盪培養を行い菌体を得た。この菌体を４０mM トリス−
塩酸バッファー（pH８．０）に懸濁し、超音波破砕した
のち、菌体破砕液上清の３α−ＨＳＤの活性をアンドロ
ステロンを基質としてニトロテトラゾリウムブルー発色
法で測定し、特に高い３α−ＨＳＤ活性を与えた菌株を
採取してアルカリゲネス・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００
３株を得た。
2ＰＯ4緩衝液（pH６．８）８０ml／ｌ、Ｈｕｎｔｅｒ無
機塩溶液２０ml／ｌ、グルコース１ｇ、酵母エキス０．
１ｇ、コール酸ナトリウム１ｇ／ｌ、乳酸ナトリウム１
ml／ｌからなる培地１０mlに懸濁し、２８℃で２〜３日
間振盪培養する。２〜３日毎に、同培地に２回植え換え
を行った後、更に同培地に１．５％の寒天を加えた培地
上に塗布し、２８℃で培養を行い菌を得た。この様にし
て得た菌を、コーンスティープリカー７７ｇからアルカ
リ沈澱物を除去した上清、リン酸１アンモニウム１ｇ／
ｌ、リン酸２アンモニウム１ｇ／ｌ、リン酸１カリウム
２ｇ／ｌ、コール酸ナトリウム０．８ｇ／ｌから成り、
pH６．８に調節した液体培地に接種し、２８℃２日間振
盪培養を行い菌体を得た。この菌体を４０mM トリス−
塩酸バッファー（pH８．０）に懸濁し、超音波破砕した
のち、菌体破砕液上清の３α−ＨＳＤの活性をアンドロ
ステロンを基質としてニトロテトラゾリウムブルー発色
法で測定し、特に高い３α−ＨＳＤ活性を与えた菌株を
採取してアルカリゲネス・エスピー ＤＰ−Ｂ−１００
３株を得た。
【００１９】実施例１ （１）コーンスティープリカー７７ｇからアルカリ沈澱
物を除去した上清、リン酸１アンモニウム１ｇ／ｌ、リ
ン酸２アンモニウム１ｇ／ｌ、リン酸１カリウム２ｇ／
ｌ、コール酸ナトリウム０．８ｇ／ｌから成り、pH６．
８に調節した液体培地を試験管に１０ml分注し、滅菌後
参考例で得たアルカリゲネス・エスピーＤＰ−Ｂ−１０
０３株又は比較菌を１白金耳接種し、２８℃で２４時間
振盪培養した。
物を除去した上清、リン酸１アンモニウム１ｇ／ｌ、リ
ン酸２アンモニウム１ｇ／ｌ、リン酸１カリウム２ｇ／
ｌ、コール酸ナトリウム０．８ｇ／ｌから成り、pH６．
８に調節した液体培地を試験管に１０ml分注し、滅菌後
参考例で得たアルカリゲネス・エスピーＤＰ−Ｂ−１０
０３株又は比較菌を１白金耳接種し、２８℃で２４時間
振盪培養した。
【００２０】（２）上と同じ液体培地を三角フラスコに
１００ml分注し、滅菌後、（１）で得られた培養液を３
ml接種し、２８℃で２４時間振盪培養した。培養液２５
mlを遠心し菌体を集め、超音波破砕した。この破砕液を
更に遠心し、上清を酵素活性測定の酵素液とした。
１００ml分注し、滅菌後、（１）で得られた培養液を３
ml接種し、２８℃で２４時間振盪培養した。培養液２５
mlを遠心し菌体を集め、超音波破砕した。この破砕液を
更に遠心し、上清を酵素活性測定の酵素液とした。
【００２１】（３）１．０mM ＮＡＤ、０．０２５％
ニトロテトラゾリウムブルー、０．４％ トリトンＸ−
１００、５ｕｎｉｔ／ml ジアホラーゼ、４０mM トリ
ス−塩酸バッファー（pH８．０）からなる反応液０．５
mlに酵素液２０μｌと２０mM アンドロステロンメタノ
ール溶液を２５μｌ加えて３７℃で５分間反応させ、
０．５％ラウリル硫酸ナトリウム２．５mlで反応を終了
させた後、アンドロステロン溶液にかえてメタノールを
２５μｌ加えて反応を行わせたものをブランクとして５
５０nmで吸光度を測定し、得られた活性値を表４に示し
た。
ニトロテトラゾリウムブルー、０．４％ トリトンＸ−
１００、５ｕｎｉｔ／ml ジアホラーゼ、４０mM トリ
ス−塩酸バッファー（pH８．０）からなる反応液０．５
mlに酵素液２０μｌと２０mM アンドロステロンメタノ
ール溶液を２５μｌ加えて３７℃で５分間反応させ、
０．５％ラウリル硫酸ナトリウム２．５mlで反応を終了
させた後、アンドロステロン溶液にかえてメタノールを
２５μｌ加えて反応を行わせたものをブランクとして５
５０nmで吸光度を測定し、得られた活性値を表４に示し
た。
【００２２】
【表４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:05） Ｃ１２Ｒ 1:05） (56)参考文献 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （1985）Ｖｏｌ．260，Ｎｏ．25，ｐ. 13648−13655 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 9/04 C12N 1/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＷＰＩ／Ｌ（ＱＵＥＳＴＥＬ)
Claims (3)
- 【請求項１】 アルカリゲネス属に属する３α−ヒドロ
キシステロイドデヒドロゲナーゼ生産菌を培養し、培養
物から３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを
採取することを特徴とする３α−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼの製造法。 - 【請求項２】 ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲ
ナーゼ生産菌が、アルカリゲネス・エスピー ＤＰ−Ｂ
−１００３（ＦＥＲＭ Ｐ−１３４１２）である請求項
１記載の製造法。 - 【請求項３】 ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲ
ナーゼ生産能を有するアルカリゲネス・エスピー ＤＰ
−Ｂ−１００３（ＦＥＲＭ Ｐ−１３４１２）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3193393A JP3251689B2 (ja) | 1993-02-22 | 1993-02-22 | ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3193393A JP3251689B2 (ja) | 1993-02-22 | 1993-02-22 | ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06245765A JPH06245765A (ja) | 1994-09-06 |
| JP3251689B2 true JP3251689B2 (ja) | 2002-01-28 |
Family
ID=12344776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3193393A Expired - Fee Related JP3251689B2 (ja) | 1993-02-22 | 1993-02-22 | ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3251689B2 (ja) |
-
1993
- 1993-02-22 JP JP3193393A patent/JP3251689B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８５）Ｖｏｌ．２６０，Ｎｏ．２５，ｐ．１３６４８−１３６５５ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06245765A (ja) | 1994-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS61104784A (ja) | ペルオキシダ−ゼの製造法 | |
| JPH0516833B2 (ja) | ||
| JP2993767B2 (ja) | Ｆｏ−１２８９ａ物質およびその製造法 | |
| JP2850515B2 (ja) | グルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| JP3858505B2 (ja) | Ｒ−３−キヌクリジノールの製造方法 | |
| JP3251689B2 (ja) | ３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの製造法およびこれに用いる微生物 | |
| JP3216739B2 (ja) | ソルビトールオキシダーゼ、その製法及びその用途 | |
| JPS6117465B2 (ja) | ||
| EP0015552B1 (en) | Process for producing sphingomyelinase, sphingomyelinase and the use thereof | |
| JP2926249B2 (ja) | アルギン酸リアーゼの製造法 | |
| US5100795A (en) | Bile acid sulfate sulfatase, process for its preparation and method for assaying bile acid | |
| JPH01148192A (ja) | カルニチンの製造法 | |
| JPH0249720B2 (ja) | ||
| JP3602162B2 (ja) | ３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素の製造法 | |
| JPH09247A (ja) | Ｄ−乳酸脱水素酵素およびその製造法 | |
| JP3152855B2 (ja) | 新規なソルビトールデヒドロゲナーゼ、その製造方法並びに該酵素を用いたソルビトールの定量のための試薬及び方法 | |
| JP2588707B2 (ja) | サルコシン・オキシダーゼの製造法 | |
| JP3413294B2 (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
| JP2827002B2 (ja) | アシルカルニチンの測定法 | |
| JPH0661278B2 (ja) | ミオイノシトールの高感度定量法および定量用組成物 | |
| JPH0657148B2 (ja) | クレアチン・アミジノ−ロラ−ゼの製造法 | |
| JPS5889183A (ja) | Ｎａｄ（ｐ）依存性コレステロ−ル脱水素酵素の製造法 | |
| JP2901458B2 (ja) | ゲンチアノースの製造方法 | |
| JPH04148681A (ja) | アシルカルニチンエステラーゼ及びその製造法 | |
| JP3035685B2 (ja) | ステロイドβ−硫酸サルファターゼ、その製造法及び胆汁酸３β−硫酸エステルの定量法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |