JP3146778B2 - 緩衝液及びそれを用いるアルカリホスファターゼ活性測定方法 - Google Patents
緩衝液及びそれを用いるアルカリホスファターゼ活性測定方法Info
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- JP3146778B2 JP3146778B2 JP20017193A JP20017193A JP3146778B2 JP 3146778 B2 JP3146778 B2 JP 3146778B2 JP 20017193 A JP20017193 A JP 20017193A JP 20017193 A JP20017193 A JP 20017193A JP 3146778 B2 JP3146778 B2 JP 3146778B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、一般式
【０００２】
【化９】
【０００３】で表わされるアミン誘導体（式中、Ｒ1 は
水素または置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４であり、Ｒ2 及びＲ3 は、
置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基
の炭素数は１〜４である）と、一般式
水素または置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４であり、Ｒ2 及びＲ3 は、
置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基
の炭素数は１〜４である）と、一般式
【０００４】
【化１０】
【０００５】で表わされるアミノスルホン酸誘導体（式
中、Ｒ5 及びＲ6 は、水素または置換もしくは無置換の
アルキル基を表わし、アルキル基は炭素数１〜４であ
り、Ｒ7はスルホ基で置換されたアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４である）とからなる緩衝液
及びそれを用いるアルカリホスファターゼの活性測定方
法に関する。
中、Ｒ5 及びＲ6 は、水素または置換もしくは無置換の
アルキル基を表わし、アルキル基は炭素数１〜４であ
り、Ｒ7はスルホ基で置換されたアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４である）とからなる緩衝液
及びそれを用いるアルカリホスファターゼの活性測定方
法に関する。
【０００６】
【従来の技術】従来、生体中に含まれるアルカリホスフ
ァターゼ活性を測定する目的で用いられている緩衝剤に
は、炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウム、ジエタノー
ルアミン−塩酸、２−アミノ−２−メチルプロパノール
−塩酸、２−エチルアミノエタノール−塩酸などがあ
り、何れも０．５Ｍ〜１．５Ｍと言う高濃度で使用され
ていた。
ァターゼ活性を測定する目的で用いられている緩衝剤に
は、炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウム、ジエタノー
ルアミン−塩酸、２−アミノ−２−メチルプロパノール
−塩酸、２−エチルアミノエタノール−塩酸などがあ
り、何れも０．５Ｍ〜１．５Ｍと言う高濃度で使用され
ていた。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、超微量
なアルカリホスファターゼ活性を測定する場合、前記の
高濃度の緩衝剤ではアルカリホスファターゼ活性が低下
し測定感度の低下をきたす。そのため、緩衝液濃度を下
げて測定する方法がとられているが、緩衝液の濃度を下
げると緩衝能が低下し、保存中の炭酸ガスの影響により
ｐＨが設定条件からずれる。従って、経時的なアルカリ
ホスファターゼ活性の低下が観察されるのが現状であ
る。そして、このような問題点のない緩衝液の出現が期
待されていた。
なアルカリホスファターゼ活性を測定する場合、前記の
高濃度の緩衝剤ではアルカリホスファターゼ活性が低下
し測定感度の低下をきたす。そのため、緩衝液濃度を下
げて測定する方法がとられているが、緩衝液の濃度を下
げると緩衝能が低下し、保存中の炭酸ガスの影響により
ｐＨが設定条件からずれる。従って、経時的なアルカリ
ホスファターゼ活性の低下が観察されるのが現状であ
る。そして、このような問題点のない緩衝液の出現が期
待されていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、高感度か
つ安定した測定結果が得られる緩衝液を見い出すべく鋭
意努力した結果、安定で高感度測定が可能な緩衝液を見
い出し、本発明を完成したものである。
つ安定した測定結果が得られる緩衝液を見い出すべく鋭
意努力した結果、安定で高感度測定が可能な緩衝液を見
い出し、本発明を完成したものである。
【０００９】本発明は、一般式
【００１０】
【化１１】
【００１１】で表わされるアミン誘導体（式中、Ｒ1 は
水素または置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４であり、Ｒ2 及びＲ3 は、
置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基
の炭素数は１〜４である）と、一般式
水素または置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４であり、Ｒ2 及びＲ3 は、
置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基
の炭素数は１〜４である）と、一般式
【００１２】
【化１２】
【００１３】で表わされるアミノスルホン酸誘導体（式
中、Ｒ5 及びＲ6 は、水素または置換もしくは無置換の
アルキル基を表わし、アルキル基は炭素数１〜４であ
り、Ｒ7はスルホ基で置換されたアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４である）とからなる緩衝液
及びそれを用いたアルカリホスファターゼの活性測定方
法である。
中、Ｒ5 及びＲ6 は、水素または置換もしくは無置換の
アルキル基を表わし、アルキル基は炭素数１〜４であ
り、Ｒ7はスルホ基で置換されたアルキル基を表わし、
アルキル基の炭素数は１〜４である）とからなる緩衝液
及びそれを用いたアルカリホスファターゼの活性測定方
法である。
【００１４】本発明の緩衝液を構成する前記一般式
（Ｉ）で表わされるアミン誘導体としては、例えばジエ
タノールアミン（以下ＤＥＡと略す）、ジメチルアミン
（以下ＤＭＡと略す）、ジエチルアミン（以下ＤＥｔＡ
と略す）、２−エチルアミノエタノール（以下ＥＡＥと
略す）、トリエチルアミン（以下ＴＥｔＡと略す）、ト
リエタノールアミン（以下ＴＥＡと略す）、Ｎ−エチル
ジエタノールアミン（以下ＥＤＥＡと略す）、ジイソプ
ロピルアミン（以下ＤＩＰＡと略す）等を挙げることが
できる。
（Ｉ）で表わされるアミン誘導体としては、例えばジエ
タノールアミン（以下ＤＥＡと略す）、ジメチルアミン
（以下ＤＭＡと略す）、ジエチルアミン（以下ＤＥｔＡ
と略す）、２−エチルアミノエタノール（以下ＥＡＥと
略す）、トリエチルアミン（以下ＴＥｔＡと略す）、ト
リエタノールアミン（以下ＴＥＡと略す）、Ｎ−エチル
ジエタノールアミン（以下ＥＤＥＡと略す）、ジイソプ
ロピルアミン（以下ＤＩＰＡと略す）等を挙げることが
できる。
【００１５】また、前記一般式（II）で表されるアミノ
スルホン酸誘導体としては、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ハイド
ロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（以下Ｂ
ＥＳと略す）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパ
ンスルホン酸（以下ＣＡＰＳと略す）、Ｎ−シクロヘキ
シル−２−ハイドロキシ−３−アミノプロパンスルホン
酸（以下ＣＡＰＳＯと略す）、Ｎ−シクロヘキシル−２
−アミノエタンスルホン酸（以下ＣＨＥＳと略す）、３
−｛Ｎ，Ｎ−ビス（２−ハイドロキシエチル）アミノ｝
−２−ハイドロキシプロパンスルホン酸（以下ＤＩＰＳ
Ｏと略す）、Ｎ−トリス（ハイドロキシメチル）メチル
−３−アミノプロパンスルホン酸（以下ＴＡＰＳと略
す）、２−ハイドロキシ−Ｎ−トリス（ハイドロキシメ
チル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下Ｔ
ＡＰＳＯと略す）、Ｎ−トリス（ハイドロキシメチル）
メチル−２−アミノエタンスルホン酸（以下ＴＥＳと略
す）等を挙げることができる。
スルホン酸誘導体としては、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ハイド
ロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（以下Ｂ
ＥＳと略す）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパ
ンスルホン酸（以下ＣＡＰＳと略す）、Ｎ−シクロヘキ
シル−２−ハイドロキシ−３−アミノプロパンスルホン
酸（以下ＣＡＰＳＯと略す）、Ｎ−シクロヘキシル−２
−アミノエタンスルホン酸（以下ＣＨＥＳと略す）、３
−｛Ｎ，Ｎ−ビス（２−ハイドロキシエチル）アミノ｝
−２−ハイドロキシプロパンスルホン酸（以下ＤＩＰＳ
Ｏと略す）、Ｎ−トリス（ハイドロキシメチル）メチル
−３−アミノプロパンスルホン酸（以下ＴＡＰＳと略
す）、２−ハイドロキシ−Ｎ−トリス（ハイドロキシメ
チル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下Ｔ
ＡＰＳＯと略す）、Ｎ−トリス（ハイドロキシメチル）
メチル−２−アミノエタンスルホン酸（以下ＴＥＳと略
す）等を挙げることができる。
【００１６】また、前記一般式（III ）で表わされるア
ミノスルホン酸誘導体としては、３−｛４−（２−ハイ
ドロキシエチル）−１−ピペラジニル｝プロパンスルホ
ン酸（以下ＥＰＰＳと略す）、２−｛４−（２−ハイド
ロキシエチル）−１−ピペラジニル｝エタンスルホン酸
（以下ＨＥＰＥＳと略す）、２−ハイドロキシ−３−
｛４−（２−ハイドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル｝プロパンスルホン酸（以下ＨＥＰＰＳＯと略す）、
ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）
（以下ＰＩＰＥＳと略す）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−ハイドロキシ−３−プロパンスルホン酸）（以下
ＰＯＰＳＯと略す）等を挙げることができる。
ミノスルホン酸誘導体としては、３−｛４−（２−ハイ
ドロキシエチル）−１−ピペラジニル｝プロパンスルホ
ン酸（以下ＥＰＰＳと略す）、２−｛４−（２−ハイド
ロキシエチル）−１−ピペラジニル｝エタンスルホン酸
（以下ＨＥＰＥＳと略す）、２−ハイドロキシ−３−
｛４−（２−ハイドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル｝プロパンスルホン酸（以下ＨＥＰＰＳＯと略す）、
ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）
（以下ＰＩＰＥＳと略す）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−ハイドロキシ−３−プロパンスルホン酸）（以下
ＰＯＰＳＯと略す）等を挙げることができる。
【００１７】また前記一般式（IV）で表わされるアミノ
スルホン酸誘導体としては、２−モルホリノエタンスル
ホン酸（以下ＭＥＳと略す）、３−モルホリノプロパン
スルホン酸（以下ＭＯＰＳと略す）、２−ハイドロキシ
−３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下ＭＯＰＳＯ
と略す）等を挙げることができる。
スルホン酸誘導体としては、２−モルホリノエタンスル
ホン酸（以下ＭＥＳと略す）、３−モルホリノプロパン
スルホン酸（以下ＭＯＰＳと略す）、２−ハイドロキシ
−３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下ＭＯＰＳＯ
と略す）等を挙げることができる。
【００１８】本発明は、前記緩衝液を用い、アルカリホ
スファターゼの酵素活性測定を行うものである。本発明
における酵素活性測定方法は、例えばＣｌｉｎ．Ｃｈｅ
ｍ．２３／１２、２２３６−２２７４（１９７７）に記
載の方法に従い、行うことができる。この際、前記した
緩衝液を基質液として用いることができる。
スファターゼの酵素活性測定を行うものである。本発明
における酵素活性測定方法は、例えばＣｌｉｎ．Ｃｈｅ
ｍ．２３／１２、２２３６−２２７４（１９７７）に記
載の方法に従い、行うことができる。この際、前記した
緩衝液を基質液として用いることができる。
【００１９】前記測定方法を実施するにあたって使用す
ることができる基質は、一般式
ることができる基質は、一般式
【００２０】
【化１３】
【００２１】で表わされる１，２−ジオキセタン誘導体
（式中、ＸはＨ，Ｎａ，Ｋ又はＮＨ4を表わし、Ｙは
Ｈ，Ｃｌ，Ｂｒ，メチル基又はメトキシ基を表わす）で
ある。
（式中、ＸはＨ，Ｎａ，Ｋ又はＮＨ4を表わし、Ｙは
Ｈ，Ｃｌ，Ｂｒ，メチル基又はメトキシ基を表わす）で
ある。
【００２２】前記一般式（Ｖ）で表わされる１，２−ジ
オキセタン誘導体としては、例えば
オキセタン誘導体としては、例えば
【００２３】
【化１４】
【００２４】（式中、Ｘは前記と同じである。）（以下
ＡＭＰＰＤと略す）、
ＡＭＰＰＤと略す）、
【００２５】
【化１５】
【００２６】（式中、Ｘは前記と同じである。）（以下
ＣＳＰＤと略す）、
ＣＳＰＤと略す）、
【００２７】
【化１６】
【００２８】（式中、Ｘは前記と同じである。）等を挙
げることができる。
げることができる。
【００２９】また、本方法を実施するにあたっては、一
般式
般式
【００３０】
【化１７】
【００３１】で表わされる有機高分子（式中、ｎは３０
〜６００であり、Ｒ8 ，Ｒ9 及びＲ10は、フェニル基ま
たは置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキ
ル基の炭素数は１〜１８であり、ＺはＣｌ，Ｂｒまたは
Ｉを表わす。）で表わされる増感剤の存在下に行うこと
が好ましい。前記一般式（VI）で表わされる増感剤とし
ては、例えばＲ8 ，Ｒ9 及びＲ10がブチル基、ｎが３０
〜６００であり、ＺがＣｌである有機高分子（以下ＴＢ
Ｑと略す）、Ｒ9 がベンジル基、Ｒ8 及びＲ10がメチル
基、ｎが３０〜６００であり、ＺがＣｌである有機高分
子（以下ＢＤＭＱと略す）等を挙げることができる。
〜６００であり、Ｒ8 ，Ｒ9 及びＲ10は、フェニル基ま
たは置換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキ
ル基の炭素数は１〜１８であり、ＺはＣｌ，Ｂｒまたは
Ｉを表わす。）で表わされる増感剤の存在下に行うこと
が好ましい。前記一般式（VI）で表わされる増感剤とし
ては、例えばＲ8 ，Ｒ9 及びＲ10がブチル基、ｎが３０
〜６００であり、ＺがＣｌである有機高分子（以下ＴＢ
Ｑと略す）、Ｒ9 がベンジル基、Ｒ8 及びＲ10がメチル
基、ｎが３０〜６００であり、ＺがＣｌである有機高分
子（以下ＢＤＭＱと略す）等を挙げることができる。
【００３２】
実施例−１ １．０ｍＭ−ＭｇＣｌ2 、０．０５％−ＮａＮ3 、０．
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含むｐＨ
＝１０．００±０．０５の緩衝液を表−１の通り調製し
た。
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含むｐＨ
＝１０．００±０．０５の緩衝液を表−１の通り調製し
た。
【００３３】
【表１】
【００３４】実施例−２ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．１〜Ｎｏ．９、
各基質緩衝液２００μｌにアルカリホスファターゼ（１
ｎｇ／ｍｌ）１０μｌを加え、室温で２０分間放置した
後、クリニルーマットでアルカリホスファターゼ活性を
測定した。その結果を表−２に示した。
各基質緩衝液２００μｌにアルカリホスファターゼ（１
ｎｇ／ｍｌ）１０μｌを加え、室温で２０分間放置した
後、クリニルーマットでアルカリホスファターゼ活性を
測定した。その結果を表−２に示した。
【００３５】
【表２】
【００３６】実施例−３ １．０ｍＭ−ＭｇＣｌ2 、０．０５％−ＮａＮ3 、０．
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含む各種
ｐＨ、０．１ＭＤＥＡ−ＢＥＳ緩衝液を表−３の通り調
製した。
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含む各種
ｐＨ、０．１ＭＤＥＡ−ＢＥＳ緩衝液を表−３の通り調
製した。
【００３７】
【表３】
【００３８】実施例−４ 抗ヒトα−フェトプロテイン固相化磁性粒子及び抗ヒト
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を実施例−３で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
１に示した。
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を実施例−３で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
１に示した。
【００３９】比較例−１ １．０ｍＭ−ＭｇＣｌ2 、０．０５％−ＮａＮ3 、０．
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含む各種
ｐＨ、０．１ＭＤＥＡ−ＨＣｌ緩衝液を表−４の通り調
製した。
０２％−ＡＭＰＰＤ、０．０４％−ＢＤＭＱを含む各種
ｐＨ、０．１ＭＤＥＡ−ＨＣｌ緩衝液を表−４の通り調
製した。
【００４０】
【表４】
【００４１】比較例−２ 抗ヒトα−フェトプロテイン固相化磁性粒子及び抗ヒト
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を比較例−１で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
２に示した。
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を比較例−１で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
２に示した。
【００４２】実施例−５ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．３およびＮｏ．
４を表−５の通り調製した。
４を表−５の通り調製した。
【００４３】
【表５】
【００４４】実施例−６ 抗ヒトα−フェトプロテイン固相化磁性粒子及び抗ヒト
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を実施例−５で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
３に示した。
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を実施例−５で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
３に示した。
【００４５】比較例−３ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．１およびＮｏ．
２を表−６の通り調製した。
２を表−６の通り調製した。
【００４６】
【表６】
【００４７】比較例−４ 抗ヒトα−フェトプロテイン固相化磁性粒子及び抗ヒト
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を比較例−３で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
４に示した。
α−フェトプロテインアルカリホスファターゼ標識体を
用いて、α−フェトプロテインの免疫測定を実施し、酵
素反応を比較例−３で調製した基質緩衝液６種を用いて
アルカリホスファターゼ活性を測定した。その結果を図
４に示した。
【００４８】比較例−５ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．１を３７℃で１
週間の負荷を行なった。
週間の負荷を行なった。
【００４９】比較例−６ 抗ヒトＴＳＨ固相化磁性粒子及び抗ヒトＴＳＨアルカリ
ホスファターゼ標識体を用いてＴＳＨの免疫測定を実施
し、酵素反応を比較例−５で行なった負荷後基質緩衝液
を用いてアルカリホスファターゼ活性を測定した。対象
として、負荷をしていない基質緩衝液を用いて前記と同
様の操作を行なった。その結果を図５に示した。
ホスファターゼ標識体を用いてＴＳＨの免疫測定を実施
し、酵素反応を比較例−５で行なった負荷後基質緩衝液
を用いてアルカリホスファターゼ活性を測定した。対象
として、負荷をしていない基質緩衝液を用いて前記と同
様の操作を行なった。その結果を図５に示した。
【００５０】実施例−７ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．９を３７℃で１
週間の負荷を行なった。
週間の負荷を行なった。
【００５１】実施例−８ 抗ヒトＴＳＨ固相化磁性粒子及び抗ヒトＴＳＨアルカリ
ホスファターゼ標識体を用いてＴＳＨの免疫測定を実施
し、酵素反応を実施例−７で行なった負荷後基質緩衝液
を用いてアルカリホスファターゼ活性を測定した。対象
として、負荷をしていない基質緩衝液を用いて前記と同
様の操作を行なった。その結果を図６に示した。
ホスファターゼ標識体を用いてＴＳＨの免疫測定を実施
し、酵素反応を実施例−７で行なった負荷後基質緩衝液
を用いてアルカリホスファターゼ活性を測定した。対象
として、負荷をしていない基質緩衝液を用いて前記と同
様の操作を行なった。その結果を図６に示した。
【００５２】比較例−７ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．１を４℃で３日
間および７日間フタを開けたまま放置し、炭酸ガスの吸
収負荷を行ない、ｐＨを測定した。その結果を図７に示
した。
間および７日間フタを開けたまま放置し、炭酸ガスの吸
収負荷を行ない、ｐＨを測定した。その結果を図７に示
した。
【００５３】実施例−９ 実施例−１で調製した基質緩衝液Ｎｏ．９を４℃で３日
間および７日間フタを開けたまま放置し、炭酸ガスの吸
収負荷を行ない、ｐＨを測定した。その結果を図８に示
した。
間および７日間フタを開けたまま放置し、炭酸ガスの吸
収負荷を行ない、ｐＨを測定した。その結果を図８に示
した。
【００５４】
【発明の効果】本発明の方法は、実施例および参考例に
示された通り前記一般式（Ｉ）、（II）、（III ）、
（IV）で表される基質緩衝液を用いることにより、高感
度かつ安定したアルカリホスファターゼ活性を測定する
ことが可能である。従来の方法に比べ１．４〜１．６倍
の感度で行なうことができる。また、炭酸ガスによるｐ
Ｈの変化も５／９と小さい。
示された通り前記一般式（Ｉ）、（II）、（III ）、
（IV）で表される基質緩衝液を用いることにより、高感
度かつ安定したアルカリホスファターゼ活性を測定する
ことが可能である。従来の方法に比べ１．４〜１．６倍
の感度で行なうことができる。また、炭酸ガスによるｐ
Ｈの変化も５／９と小さい。
【図１】実施例−４で行なった至適ｐＨの測定図であ
る。
る。
【図２】比較例−２で行なった至適ｐＨの測定図であ
る。
る。
【図３】実施例−６で行なった緩衝液濃度の測定図であ
る。
る。
【図４】比較例−４で行なった緩衝液濃度の測定図であ
る。
る。
【図５】比較例−６で行なった温度負荷による基質安定
性の測定図である。
性の測定図である。
【図６】実施例−８で行なった温度負荷による基質安定
性の測定図である。
性の測定図である。
【図７】比較例−７で行なった空気中の炭酸ガスによる
ｐＨ変化の測定図である。
ｐＨ変化の測定図である。
【図８】実施例−９で行なった空気中の炭酸ガスによる
ｐＨ変化の測定図である。
ｐＨ変化の測定図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/66
Claims (7)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 で表わされるアミン誘導体（式中、Ｒ1 は水素または置
換もしくは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基の
炭素数は１〜４であり、Ｒ2 及びＲ3 は、置換もしくは
無置換のアルキル基を表わし、アルキル基の炭素数は１
〜４である）と、 一般式 【化２】 で表わされるアミノスルホン酸誘導体（式中、Ｒ5 及び
Ｒ6 は、水素または置換もしくは無置換のアルキル基を
表わし、アルキル基は炭素数１〜４であり、Ｒ7はスル
ホ基で置換されたアルキル基を表わし、アルキル基の炭
素数は１〜４である）とからなる緩衝液を用いるアルカ
リホスファターゼの活性測定方法。 - 【請求項２】一般式 【化３】 で表わされる基質（式中、Ｘは、Ｈ，Ｎａ，Ｋ又はＮＨ
4 を表わし、Ｙは、Ｈ，Ｃｌ，Ｂｒ，メチル基またはメ
トキシ基を表わす）を用いる請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】基質が、 【化４】 （式中、Ｘは前記と同じである。）である請求項２に記
載の方法。 - 【請求項４】基質が、 【化５】 （式中、Ｘは前記と同じである。）である請求項２に記
載の方法。 - 【請求項５】増感剤として、一般式 【化６】 で表わされる有機高分子（式中、ｎは３０〜６００であ
り、Ｒ8 ，Ｒ9 及びＲ10は、ベンジル基または置換もし
くは無置換のアルキル基を表わし、アルキル基の炭素数
は１〜１８であり、ＺはＣｌ，ＢｒまたはＩを表わ
す。）を用いる請求項２に記載の方法。 - 【請求項６】増感剤が、 【化７】 （式中ｎは３０〜６００であり、ＺはＣｌである。）で
ある請求項２に記載の方法。 - 【請求項７】増感剤が、 【化８】 （式中ｎは３０〜６００であり、ＺはＣｌである。）で
ある請求項２に記載の方法。
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| JP20017193A JP3146778B2 (ja) | 1993-07-21 | 1993-07-21 | 緩衝液及びそれを用いるアルカリホスファターゼ活性測定方法 |
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| JP20017193A JP3146778B2 (ja) | 1993-07-21 | 1993-07-21 | 緩衝液及びそれを用いるアルカリホスファターゼ活性測定方法 |
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