JP3037809B2 - 耐アルコール性プロテアーゼ - Google Patents
耐アルコール性プロテアーゼInfo
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- JP3037809B2 JP3037809B2 JP1793692A JP1793692A JP3037809B2 JP 3037809 B2 JP3037809 B2 JP 3037809B2 JP 1793692 A JP1793692 A JP 1793692A JP 1793692 A JP1793692 A JP 1793692A JP 3037809 B2 JP3037809 B2 JP 3037809B2
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な耐アルコール性
プロテアーゼに関する。
プロテアーゼに関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、動植物由来のタンパク質を加水分
解して、食品、医薬品の原料として利用する試みが盛ん
になってきた。これらのタンパク質は腐敗しやすいの
で、加水分解反応は、高温下で、あるいは酸性条件下で
実施されたり、さらに防腐剤を添加した状態で実施され
ている。食品向けの用途に許容される防腐剤としては、
安全性の観点から食塩およびエチルアルコールが多用さ
れている。しかし、食塩は食品の味を変えるという欠点
があり、さらに食塩が使用された場合には、必要に応じ
て後で除去する必要があり、製品としての工業設計が行
いにくい。さらに、健康上減塩指向の傾向があることな
どから、食塩はあまり用いられず、化学合成品以外の防
腐剤としてはエチルアルコールが最も多く使用されてい
る。エチルアルコールには、酒類の主成分でもあるよう
に食品としての安全性が高いこと、低濃度では食品に含
まれるエチルアルコール以外の官能性成分に影響を与え
ないこと、食品に付与する方法が簡単であること、必要
に応じて後で除去する場合には操作が容易であること、
比較的安価であることなどの利点がある。エチルアルコ
ールを浸漬、噴霧などの方法で食品に付与する場合に
は、その成分表示が免除されることなどから、これから
ますますその利用は増すものと思われる。
解して、食品、医薬品の原料として利用する試みが盛ん
になってきた。これらのタンパク質は腐敗しやすいの
で、加水分解反応は、高温下で、あるいは酸性条件下で
実施されたり、さらに防腐剤を添加した状態で実施され
ている。食品向けの用途に許容される防腐剤としては、
安全性の観点から食塩およびエチルアルコールが多用さ
れている。しかし、食塩は食品の味を変えるという欠点
があり、さらに食塩が使用された場合には、必要に応じ
て後で除去する必要があり、製品としての工業設計が行
いにくい。さらに、健康上減塩指向の傾向があることな
どから、食塩はあまり用いられず、化学合成品以外の防
腐剤としてはエチルアルコールが最も多く使用されてい
る。エチルアルコールには、酒類の主成分でもあるよう
に食品としての安全性が高いこと、低濃度では食品に含
まれるエチルアルコール以外の官能性成分に影響を与え
ないこと、食品に付与する方法が簡単であること、必要
に応じて後で除去する場合には操作が容易であること、
比較的安価であることなどの利点がある。エチルアルコ
ールを浸漬、噴霧などの方法で食品に付与する場合に
は、その成分表示が免除されることなどから、これから
ますますその利用は増すものと思われる。
【０００３】ところが、例えば、アルコールで防腐処理
がなされたタンパク質を酵素、特にプロテアーゼを用い
て分解しようとしても、アルコールの存在下で加温する
と、このような酵素は速やかに失活するのが一般的であ
る。このように、耐アルコール性のプロテアーゼは知ら
れていない。
がなされたタンパク質を酵素、特にプロテアーゼを用い
て分解しようとしても、アルコールの存在下で加温する
と、このような酵素は速やかに失活するのが一般的であ
る。このように、耐アルコール性のプロテアーゼは知ら
れていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記従来の
課題を解決するものであり、その目的とするところは、
耐アルコール性プロテアーゼおよびその製造方法を提供
することにある。
課題を解決するものであり、その目的とするところは、
耐アルコール性プロテアーゼおよびその製造方法を提供
することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】発明者らは、Bacillus属
に属する新菌株から、耐アルコール性の酸性プロテアー
ゼを見い出し、本発明を完成するに至った。
に属する新菌株から、耐アルコール性の酸性プロテアー
ゼを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】本発明のプロテアーゼは、次の性質を有す
る。
る。
【０００７】作用：プロテアーゼ活性を有する。 至適pH：約3.0。 安定pH範囲：30℃にて24時間保持した場合、pH3.0〜
6.0 において比較的安定である。 作用適温の範囲：至適温度は約60℃である。 熱安定性：pH3.0にて30分間保持した場合に、40℃ま
で安定である。 耐アルコール性：20％エチルアルコールの存在下
で、pH5.0、30℃にて保持した場合に、少なくとも30日
間安定である。 分子量：ソディウムドデシルサルフェート（SDS）電
気泳動法により測定した分子量は、約75000である。 等電点：等電点電気泳動法により測定した等電点は約
3.6である。
6.0 において比較的安定である。 作用適温の範囲：至適温度は約60℃である。 熱安定性：pH3.0にて30分間保持した場合に、40℃ま
で安定である。 耐アルコール性：20％エチルアルコールの存在下
で、pH5.0、30℃にて保持した場合に、少なくとも30日
間安定である。 分子量：ソディウムドデシルサルフェート（SDS）電
気泳動法により測定した分子量は、約75000である。 等電点：等電点電気泳動法により測定した等電点は約
3.6である。
【０００８】本発明のプロテアーゼの製造法は、上記プ
ロテアーゼを生産する微生物を培地に培養し、培養物よ
り該酵素を採取する工程を包含する。
ロテアーゼを生産する微生物を培地に培養し、培養物よ
り該酵素を採取する工程を包含する。
【０００９】本発明のプロテアーゼは、バシルス（Baci
llus）属菌、特に、Bacillus coagulans J-4 株（微工
研菌寄託第12725号；FERM P-12725）により生産され
る。この菌株は、発明者らが、滋賀県の土壌から分離し
た新菌株である。この菌株の菌学的性質を次に示す。
llus）属菌、特に、Bacillus coagulans J-4 株（微工
研菌寄託第12725号；FERM P-12725）により生産され
る。この菌株は、発明者らが、滋賀県の土壌から分離し
た新菌株である。この菌株の菌学的性質を次に示す。
【００１０】(1)形態および生理学的性質 本菌を培養した結果を表１および表２に示す。特に、記
載のない限り培養温度は38℃である。本菌の形態は、Ｎ
Ｙ培地での培養により調べた。ＮＹ培地の組成を以下に
示す：1% 可溶性デンプン、0.5% ポリペプトン、0.5%
酵母エキス、0.1% Ｋ2ＨＰＯ4、0.02% ＭｇＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ、pH 5.0。
載のない限り培養温度は38℃である。本菌の形態は、Ｎ
Ｙ培地での培養により調べた。ＮＹ培地の組成を以下に
示す：1% 可溶性デンプン、0.5% ポリペプトン、0.5%
酵母エキス、0.1% Ｋ2ＨＰＯ4、0.02% ＭｇＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ、pH 5.0。
【００１１】
【表１】
【００１２】
【表２】
【００１３】表１および表２の菌学的性質をもとに、Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology 第２巻（W
illiams and Wilkins, Baltimore, 1986）を参照して、
本菌はBacillus coagulansに属する新菌株であることが
わかった。発明者らは本菌株をBacillus coagulans J-4
株と命名した。
rgey's Manual of Systematic Bacteriology 第２巻（W
illiams and Wilkins, Baltimore, 1986）を参照して、
本菌はBacillus coagulansに属する新菌株であることが
わかった。発明者らは本菌株をBacillus coagulans J-4
株と命名した。
【００１４】次に、本菌から本発明のプロテアーゼを採
取するための条件について説明する。
取するための条件について説明する。
【００１５】（培養条件）本菌の培養条件は特に限定さ
れない。通常の液体培地および固体培地を用いて培養が
なされる。例えば、炭素源として、可溶性デンプン、コ
ーンスターチ、ポテトスターチ液化液などのデンプン類
が用いられる。窒素源としては、ポリペプトン、コーン
スティープリカー、各種大豆タンパク分解物、酵母エキ
ス、肉エキスなどが用いられる。さらに、必要に応じて
各種塩類、ビタミン類が用いられる。これらを加えて得
た培地をpH5.0〜 5.5に調整し、滅菌する。この培地を
用いて、35〜45℃の温度で、１〜３日間、静置、振盪ま
たは通気攪拌しながら培養を行う。本酵素は培地中に分
泌される。
れない。通常の液体培地および固体培地を用いて培養が
なされる。例えば、炭素源として、可溶性デンプン、コ
ーンスターチ、ポテトスターチ液化液などのデンプン類
が用いられる。窒素源としては、ポリペプトン、コーン
スティープリカー、各種大豆タンパク分解物、酵母エキ
ス、肉エキスなどが用いられる。さらに、必要に応じて
各種塩類、ビタミン類が用いられる。これらを加えて得
た培地をpH5.0〜 5.5に調整し、滅菌する。この培地を
用いて、35〜45℃の温度で、１〜３日間、静置、振盪ま
たは通気攪拌しながら培養を行う。本酵素は培地中に分
泌される。
【００１６】（酵素の採取法）上記培養液から本発明酵
素を採取・精製するには既知の精製法が単独でもしくは
併用して利用され得る。例えば、培養液を濾過または遠
心分離にかけて菌体を除去し、上清液をエバポレータ
ー、限界濾過、逆浸透法などにより濃縮または透析す
る。次に、硫安などによる塩析、エタノールなどによる
有機溶媒沈澱を行なうことにより本酵素が得られる。こ
の酵素は、各種クロマトグラフィー〔例えば、Sp-セフ
ァデックスC-50（ファルマシア製）〕、ゲル濾過などに
よる処理を行うことにより精製される。
素を採取・精製するには既知の精製法が単独でもしくは
併用して利用され得る。例えば、培養液を濾過または遠
心分離にかけて菌体を除去し、上清液をエバポレータ
ー、限界濾過、逆浸透法などにより濃縮または透析す
る。次に、硫安などによる塩析、エタノールなどによる
有機溶媒沈澱を行なうことにより本酵素が得られる。こ
の酵素は、各種クロマトグラフィー〔例えば、Sp-セフ
ァデックスC-50（ファルマシア製）〕、ゲル濾過などに
よる処理を行うことにより精製される。
【００１７】（活性測定法）pH3.0、温度60℃の条件下
で、厚生省薬務局審査課長通知 薬審第523号のタンパク
消化力試験法に従って測定する。
で、厚生省薬務局審査課長通知 薬審第523号のタンパク
消化力試験法に従って測定する。
【００１８】（酵素の性質）以下に示す本酵素の各性質
は、後述の実施例の(B)で得られた精製酵素を用いて調
べられた。
は、後述の実施例の(B)で得られた精製酵素を用いて調
べられた。
【００１９】作用 プロテアーゼ活性を有する。
【００２０】至適ｐＨ 本酵素を用い pH2〜5.5の条件下で、活性測定法の方法
に準じて、0.5%カゼインを基質として60℃にて10分間酵
素反応を行った。酵素の相対活性を図１に示す。図１か
ら至適ｐＨは約3.0であることがわかる。
に準じて、0.5%カゼインを基質として60℃にて10分間酵
素反応を行った。酵素の相対活性を図１に示す。図１か
ら至適ｐＨは約3.0であることがわかる。
【００２１】安定ｐＨ範囲 本酵素を図２に示す各種ｐＨ条件下、30℃にて１時間保
持した後、あるいは24時間保持した後に残存活性を測定
した。それぞれの残存活性を図２に示す。図２から安定
ｐＨ範囲は30℃で3.0〜6.0であることがわかる。
持した後、あるいは24時間保持した後に残存活性を測定
した。それぞれの残存活性を図２に示す。図２から安定
ｐＨ範囲は30℃で3.0〜6.0であることがわかる。
【００２２】作用適温の範囲 本酵素の活性を図３に示す各温度において、活性測定法
の方法に準じて、0.5％カゼインを基質として酵素反応
を行い、相対活性を測定した。その結果を図３に示す。
図３から至適温度は約60℃であることがわかる。
の方法に準じて、0.5％カゼインを基質として酵素反応
を行い、相対活性を測定した。その結果を図３に示す。
図３から至適温度は約60℃であることがわかる。
【００２３】熱安定性 本酵素を、pH3.0の条件下、30℃、40℃、50℃、および6
0℃で30分間保持した後、残存活性を測定した。その結
果を図４に示す。図４から、本酵素はpH3.0で30分保持
した場合に40℃まで安定であることがわかる。
0℃で30分間保持した後、残存活性を測定した。その結
果を図４に示す。図４から、本酵素はpH3.0で30分保持
した場合に40℃まで安定であることがわかる。
【００２４】耐アルコール性 本酵素を、20%エタノールの存在下で30℃、pH5.0にて保
持し、残存活性を経時的に測定した。その結果を図９に
示す。図９から、本酵素はこの条件下で少なくとも約30
日間安定であることがわかる。
持し、残存活性を経時的に測定した。その結果を図９に
示す。図９から、本酵素はこの条件下で少なくとも約30
日間安定であることがわかる。
【００２５】本発明の酵素および他のプロテアーゼの耐
エタノール性についての比較を次のように行った。本酵
素および次に示す各種プロテアーゼを各種エタノール濃
度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時間保持した
後、残存活性を測定した。その結果を図５〜図８に示
す。残存活性の測定は、活性測定法に準じて行った。 比較した酵素：(a)ニューラーゼＦ（天野製薬(株)） (b)プロテアーゼＭ「アマノ」（天野製薬(株)） (c)スミチームＡＰ（新日本化学工業(株)） さらに、上記の酵素を、温度30℃、pH5.0、20%エタノー
ル濃度で所定日数保持した後、残存活性を調べた。その
結果を図９に示す。但し、残存活性の測定は、pH3.0、
温度40℃、酵素反応時間30分の条件下で行った。
エタノール性についての比較を次のように行った。本酵
素および次に示す各種プロテアーゼを各種エタノール濃
度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時間保持した
後、残存活性を測定した。その結果を図５〜図８に示
す。残存活性の測定は、活性測定法に準じて行った。 比較した酵素：(a)ニューラーゼＦ（天野製薬(株)） (b)プロテアーゼＭ「アマノ」（天野製薬(株)） (c)スミチームＡＰ（新日本化学工業(株)） さらに、上記の酵素を、温度30℃、pH5.0、20%エタノー
ル濃度で所定日数保持した後、残存活性を調べた。その
結果を図９に示す。但し、残存活性の測定は、pH3.0、
温度40℃、酵素反応時間30分の条件下で行った。
【００２６】このように本酵素は、これまでの酸性プロ
テアーゼには見られない耐アルコール性を有することが
明かである。
テアーゼには見られない耐アルコール性を有することが
明かである。
【００２７】阻害、活性化および安定化 （i）金属塩の影響 本酵素を用いて、表３に示す金属塩を5mMの割合で含有
する溶液中で、活性測定法の方法に準じて酵素反応を行
い、それぞれの残存活性を測定した。その結果を表３に
示す。
する溶液中で、活性測定法の方法に準じて酵素反応を行
い、それぞれの残存活性を測定した。その結果を表３に
示す。
【００２８】
【表３】
【００２９】（ii）プロテアーゼインヒビターの影響 ジアゾアセチル-DL-ノルロイシンメチルエステル（ＤＡ
Ｎ）、1,2-エポキシ-3-（ｐ-ニトロフェノキシ）プロパ
ン（ＥＰＮＰ）、ペプスタチン、フェニルメタンスルホ
ニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ｐ-クロロマーキュリー
ベンゾエイト（ｐ-ＣＭＢ）、エチレンジアミンテトラ
酢酸（ＥＤＴＡ）、ストレプトマイセスズブチリシンイ
ンヒビター（ＳＳＩ、セリンプロテアーゼ阻害剤）、お
よびストレプトマイセスメタロープロティナーゼインヒ
ビター（ＳーＭＰＩ、金属プロテアーゼ阻害剤）のいず
れによっても阻害されない。
Ｎ）、1,2-エポキシ-3-（ｐ-ニトロフェノキシ）プロパ
ン（ＥＰＮＰ）、ペプスタチン、フェニルメタンスルホ
ニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ｐ-クロロマーキュリー
ベンゾエイト（ｐ-ＣＭＢ）、エチレンジアミンテトラ
酢酸（ＥＤＴＡ）、ストレプトマイセスズブチリシンイ
ンヒビター（ＳＳＩ、セリンプロテアーゼ阻害剤）、お
よびストレプトマイセスメタロープロティナーゼインヒ
ビター（ＳーＭＰＩ、金属プロテアーゼ阻害剤）のいず
れによっても阻害されない。
【００３０】分子量 ＳＤＳ電気泳動法により測定した分子量は、約75000で
あった。
あった。
【００３１】等電点 等電点電気泳動法により測定した値は、約3.6であっ
た。
た。
【００３２】
【実施例】以下に本発明を実施例につき説明する。
【００３３】(A)Bacillus coagulans J-4 株の培養 可溶性デンプン 7%、エスサンミート（味の素（株）製
大豆タンパク分解物） 4%、コーンスチープリカー 0.5
%、酵母エキス 0.5%、肉エキス 0.2%、Ｋ2ＨＰＯ4 0.15
%、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ 0.02%、ＭｎＣｌ2 0.02%、ビオ
チン 20ppm、およびビタミンＢ12 5ppmを含有する培地
を、pH5に調整した後、ヒダ付三角フラスコに入れ、本
菌を接種した。これを45℃で、48時間振盪培養した。
大豆タンパク分解物） 4%、コーンスチープリカー 0.5
%、酵母エキス 0.5%、肉エキス 0.2%、Ｋ2ＨＰＯ4 0.15
%、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ 0.02%、ＭｎＣｌ2 0.02%、ビオ
チン 20ppm、およびビタミンＢ12 5ppmを含有する培地
を、pH5に調整した後、ヒダ付三角フラスコに入れ、本
菌を接種した。これを45℃で、48時間振盪培養した。
【００３４】得られた培養液について、活性測定法に従
ってプロテアーゼ活性を測定したところ、培養液1ml当
り42単位であった。
ってプロテアーゼ活性を測定したところ、培養液1ml当
り42単位であった。
【００３５】(B)酵素の採取および精製 (A)項で得られた培養液を遠心分離にかけ、菌体を除去
した。上澄液に2mM ＭｎＣｌ2を加え、pH3.0に調整した
後、この液に100ml当り硫酸アンモニウム38gを加えて塩
析した。沈澱物を遠心分離により採取した。得られた沈
澱物を2mM ＭｎＣｌ2を含むpH3.0、10mMの酢酸緩衝液に
再溶解した。この溶液を、同じ緩衝液に対して5℃で24
時間透析した。得られた透析内液を、2mM ＭｎＣｌ2を
含むpH3.0、50mM酢酸緩衝液で平衡化したSp-セファデッ
クスC-50カラムクロマトグラフィーにかけた。次に、0
〜0.6MのＮａＣｌ濃度勾配溶出法で溶出して、プロテア
ーゼ活性画分を得た。
した。上澄液に2mM ＭｎＣｌ2を加え、pH3.0に調整した
後、この液に100ml当り硫酸アンモニウム38gを加えて塩
析した。沈澱物を遠心分離により採取した。得られた沈
澱物を2mM ＭｎＣｌ2を含むpH3.0、10mMの酢酸緩衝液に
再溶解した。この溶液を、同じ緩衝液に対して5℃で24
時間透析した。得られた透析内液を、2mM ＭｎＣｌ2を
含むpH3.0、50mM酢酸緩衝液で平衡化したSp-セファデッ
クスC-50カラムクロマトグラフィーにかけた。次に、0
〜0.6MのＮａＣｌ濃度勾配溶出法で溶出して、プロテア
ーゼ活性画分を得た。
【００３６】このプロテアーゼ活性画分を、2mM ＭｎＣ
ｌ2を含む、pH3.0、50mM 酢酸緩衝液で平衡化したバイ
オゲルP-150カラムを用いたゲル濾過法により精製し
た。その結果、酸性プロテアーゼ活性を示す単一ピーク
が得られた。このプロテアーゼの性質を調べたところ、
本明細書の酵素の性質の項に記載の各性質を有すること
がわかった。
ｌ2を含む、pH3.0、50mM 酢酸緩衝液で平衡化したバイ
オゲルP-150カラムを用いたゲル濾過法により精製し
た。その結果、酸性プロテアーゼ活性を示す単一ピーク
が得られた。このプロテアーゼの性質を調べたところ、
本明細書の酵素の性質の項に記載の各性質を有すること
がわかった。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば、このように、耐アルコ
ール性を有する新規酸性プロテアーゼ、およびその製造
方法が提供される。このプロテアーゼは、20%のエタノ
ールの存在下、30℃、pH5.0において少なくとも30日間
安定である。このような酵素は、消化酵素のような医薬
品として、あるいは、エタノールが保存料として使用さ
れているタンパク質を分解して、オリゴペプチドやアミ
ノ酸を生成するための試薬あるいは工業用のプロテアー
ゼとして、広く利用され得る。
ール性を有する新規酸性プロテアーゼ、およびその製造
方法が提供される。このプロテアーゼは、20%のエタノ
ールの存在下、30℃、pH5.0において少なくとも30日間
安定である。このような酵素は、消化酵素のような医薬
品として、あるいは、エタノールが保存料として使用さ
れているタンパク質を分解して、オリゴペプチドやアミ
ノ酸を生成するための試薬あるいは工業用のプロテアー
ゼとして、広く利用され得る。
【図１】本酵素を用いpH2〜5.5の条件で、0.5%カゼイン
を基質として、60℃にて10分間酵素反応を行ったとき
の、酵素の相対活性を示す。
を基質として、60℃にて10分間酵素反応を行ったとき
の、酵素の相対活性を示す。
【図２】本酵素をpH3〜8の条件下、30℃にて１時間保持
した後、あるいは24時間保持した後に測定したときの残
存活性を示す。
した後、あるいは24時間保持した後に測定したときの残
存活性を示す。
【図３】本酵素の活性を40〜70℃において、0.5%カゼイ
ンを基質として酵素反応を行ったときの相対活性を示
す。
ンを基質として酵素反応を行ったときの相対活性を示
す。
【図４】本酵素を、pH3.0の条件下、30〜60℃で30分間
保持した後測定したときの残存活性を示す。
保持した後測定したときの残存活性を示す。
【図５】本酵素を各種エタノール濃度の緩衝液中、温度
30℃、pH5.0にて20時間保持した後に測定したときの残
存活性を示す。
30℃、pH5.0にて20時間保持した後に測定したときの残
存活性を示す。
【図６】ニューラーゼＦ（天野製薬(株)）を各種エタノ
ール濃度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時間保持
した後に測定したときの残存活性を示す。
ール濃度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時間保持
した後に測定したときの残存活性を示す。
【図７】プロテアーゼＭ「アマノ」（天野製薬(株)）を
各種エタノール濃度の緩液中、温度30℃、pH5.0にて20
時間保持した後に測定したときの残存活性を示す。
各種エタノール濃度の緩液中、温度30℃、pH5.0にて20
時間保持した後に測定したときの残存活性を示す。
【図８】スミチームＡＰ（新日本化学工業(株)）を各種
エタノール濃度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時
間保持した後に測定したときの残存活性を示す。
エタノール濃度の緩衝液中、温度30℃、pH5.0にて20時
間保持した後に測定したときの残存活性を示す。
【図９】本発明の酵素、ニューラーゼＦ、プロテアーゼ
Ｍ「アマノ」、およびスミチームＡＰを、温度30℃、pH
5.0、20%エタノール濃度で所定日数保持した後に測定し
たときの残存活性を示す。
Ｍ「アマノ」、およびスミチームＡＰを、温度30℃、pH
5.0、20%エタノール濃度で所定日数保持した後に測定し
たときの残存活性を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:07） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 9/00 - 9/99 C12N 1/00 - 1/38 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (7)
- 【請求項１】下記の性質を有するプロテアーゼ： 作用：プロテアーゼ活性を有する； 至適pH：約3.0； 安定pH範囲：30℃にて24時間保持した場合、pH3.0〜
6.0において比較的安定である； 作用適温の範囲：至適温度は約60℃である； 熱安定性：pH3.0にて30分間保持した場合に、40℃ま
で安定である； 耐アルコール性：20％エチルアルコールの存在下
で、pH5.0、30℃にて保持した場合に、少なくとも30日
間安定である； 分子量：ソディウムドデシルサルフェート（SDS）電
気泳動法により測定した分子量は、約75000である； 等電点：等電点電気泳動法により測定した等電点は約
3.6である。 - 【請求項２】Bacillus属菌由来である請求項１に記載の
プロテアーゼ。 - 【請求項３】Bacillus coagulans由来である請求項１に
記載のプロテアーゼ。 - 【請求項４】Bacillus coagulans J-4 株（微工研菌寄
第12725号）由来である、請求項２に記載のプロテアー
ゼ。 - 【請求項５】Bacillus属に属し、請求項１のプロテアー
ゼを生産する微生物を培地に培養し、培養物より該酵素
を採取する工程を包含する、プロテアーゼの製造法。 - 【請求項６】前記微生物がBacillus coagulansに属す
る、請求項５に記載の製造法。 - 【請求項７】前記微生物がBacillus coagulans J-4 株
（微工研菌寄第12725号）である、請求項５の製造法。
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| JP1793692A JP3037809B2 (ja) | 1992-02-03 | 1992-02-03 | 耐アルコール性プロテアーゼ |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1793692A JP3037809B2 (ja) | 1992-02-03 | 1992-02-03 | 耐アルコール性プロテアーゼ |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05211869A JPH05211869A (ja) | 1993-08-24 |
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1992
- 1992-02-03 JP JP1793692A patent/JP3037809B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| JPH05211869A (ja) | 1993-08-24 |
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