JP2983166B2 - 毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド - Google Patents
毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチドInfo
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- JP2983166B2 JP2983166B2 JP8011327A JP1132796A JP2983166B2 JP 2983166 B2 JP2983166 B2 JP 2983166B2 JP 8011327 A JP8011327 A JP 8011327A JP 1132796 A JP1132796 A JP 1132796A JP 2983166 B2 JP2983166 B2 JP 2983166B2
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- reaction
- peptide
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- papilla cell
- hair papilla
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、発毛、育毛促進
および脱毛防止の育毛剤として有用な毛乳頭細胞増殖促
進作用を有するペプチドに関する。
および脱毛防止の育毛剤として有用な毛乳頭細胞増殖促
進作用を有するペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】脱毛の原因として、男性ホルモン関与に
よる毛包機能の低下、毛包・毛球部の新陳代謝機能の低
下、頭皮生理機能の低下、頭皮緊張による局所血流障
害、栄養不良、ストレス、薬物による副作用、遺伝等の
要因があげられるが、まだ脱毛の原因は完全には解明さ
れていない。このため、市販の育毛剤に含まれる有効成
分は、頭皮の血行促進、毛根の刺激や毛包賦活等の作用
により、二次的に毛関連細胞を活性化させるものであ
る。この出願人は、先に各種柑橘類の果皮およびアロエ
の日本酒による抽出液の混合液が育毛効果のあることを
見い出した（特開平３−２２７９１１）が、薬効の本体
までは解明されていなかった。
よる毛包機能の低下、毛包・毛球部の新陳代謝機能の低
下、頭皮生理機能の低下、頭皮緊張による局所血流障
害、栄養不良、ストレス、薬物による副作用、遺伝等の
要因があげられるが、まだ脱毛の原因は完全には解明さ
れていない。このため、市販の育毛剤に含まれる有効成
分は、頭皮の血行促進、毛根の刺激や毛包賦活等の作用
により、二次的に毛関連細胞を活性化させるものであ
る。この出願人は、先に各種柑橘類の果皮およびアロエ
の日本酒による抽出液の混合液が育毛効果のあることを
見い出した（特開平３−２２７９１１）が、薬効の本体
までは解明されていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】発毛や脱毛メカニズム
の基礎的な研究に基づいて直接毛関連細胞を活性化する
育毛剤が要望されている。この発明の目的は、上記の観
点から、発毛のメカニズムを担っている毛乳頭細胞に直
接作用して、該細胞の増殖を促進するペプチドを提供す
るものである。
の基礎的な研究に基づいて直接毛関連細胞を活性化する
育毛剤が要望されている。この発明の目的は、上記の観
点から、発毛のメカニズムを担っている毛乳頭細胞に直
接作用して、該細胞の増殖を促進するペプチドを提供す
るものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この発明者は、天然産物
中に毛乳頭細胞増殖促進作用を示す生理活性物質を広範
囲に探索した結果、柑橘類の果皮、果肉エキスから得ら
れた新規ペプチドが該活性を有することを見い出した。
中に毛乳頭細胞増殖促進作用を示す生理活性物質を広範
囲に探索した結果、柑橘類の果皮、果肉エキスから得ら
れた新規ペプチドが該活性を有することを見い出した。
【０００５】この発明のペプチドは、柑橘類から得られ
る、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するもので、次の物理
化学的性質を有する。 （１）分子量 ２，０００〜４，０００（ゲルろ過法による） （２）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：図１に示す
とおりであり、３，３５６、３，０８０、１，６７６、
１，６４７、１，６１４、１，５００、１，４２５、
１，４０２、１，３５８、１，３３６、１，２５０、
１，１５１、１，０７２、９８５cm-1に吸収帯を有す
る。紫外線吸収スペクトル（水中）は、２００nmまで特
徴的な吸収極大を示さない。 （３）溶解性 水に可溶。エーテル、ベンゼン、クロロホルムに難溶。 （４）呈色反応 ニンヒドリン反応およびニトロプルシドナトリウム反応
は陽性；アニスアルデヒド反応、フェノール硫酸反応お
よびドラーゲンドルフ反応は陰性。 （５）塩基性、中性、酸性の区別 中性 （６）性状 白色の結晶または結晶性粉末であって、わずかに特有の
臭いを有する。 （７）構成アミノ酸 ホスホセリン、アスパラギン酸、セリン、グルタミン
酸、グリシン、アラニン、バリン、シスチン、メチオニ
ン、オキシリシン、オルニチン、リシンおよびヒスチジ
ンを含み、そのモル比はリシンを１とした場合、それぞ
れ約８：９，１７４：８４：４：６：４：４：１７：
２：１３，６０６：２：１：２であり、オキシリシンお
よびアスパラギン酸を多く含む。他にタウリン、ホスホ
エタノールアミン、尿素を含む。
る、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するもので、次の物理
化学的性質を有する。 （１）分子量 ２，０００〜４，０００（ゲルろ過法による） （２）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：図１に示す
とおりであり、３，３５６、３，０８０、１，６７６、
１，６４７、１，６１４、１，５００、１，４２５、
１，４０２、１，３５８、１，３３６、１，２５０、
１，１５１、１，０７２、９８５cm-1に吸収帯を有す
る。紫外線吸収スペクトル（水中）は、２００nmまで特
徴的な吸収極大を示さない。 （３）溶解性 水に可溶。エーテル、ベンゼン、クロロホルムに難溶。 （４）呈色反応 ニンヒドリン反応およびニトロプルシドナトリウム反応
は陽性；アニスアルデヒド反応、フェノール硫酸反応お
よびドラーゲンドルフ反応は陰性。 （５）塩基性、中性、酸性の区別 中性 （６）性状 白色の結晶または結晶性粉末であって、わずかに特有の
臭いを有する。 （７）構成アミノ酸 ホスホセリン、アスパラギン酸、セリン、グルタミン
酸、グリシン、アラニン、バリン、シスチン、メチオニ
ン、オキシリシン、オルニチン、リシンおよびヒスチジ
ンを含み、そのモル比はリシンを１とした場合、それぞ
れ約８：９，１７４：８４：４：６：４：４：１７：
２：１３，６０６：２：１：２であり、オキシリシンお
よびアスパラギン酸を多く含む。他にタウリン、ホスホ
エタノールアミン、尿素を含む。
【０００６】この発明のペプチドは、次のようにして得
ることができる。甘夏カン、イヨカン、ハッサク、ミカ
ン、レモン系の柑橘類の果皮をメタノール、エタノール
のようなアルコールで抽出し、抽出液をろ過して得たろ
液からアルコールを留去し、乾燥物を得る。この乾燥物
を精製水に溶解して水溶液とする。果肉の場合は、粗果
汁液として絞り、粗果汁液をろ過して得たろ液を果汁溶
液とする。
ることができる。甘夏カン、イヨカン、ハッサク、ミカ
ン、レモン系の柑橘類の果皮をメタノール、エタノール
のようなアルコールで抽出し、抽出液をろ過して得たろ
液からアルコールを留去し、乾燥物を得る。この乾燥物
を精製水に溶解して水溶液とする。果肉の場合は、粗果
汁液として絞り、粗果汁液をろ過して得たろ液を果汁溶
液とする。
【０００７】得られた水溶液または果汁溶液を更にイオ
ン交換樹脂等に吸着させ、希アンモニア水等の溶出溶媒
で溶出し、得られた溶出液を減圧濃縮することにより粗
物質を得る。イオン交換樹脂の担体の具体例としては強
酸性陽イオン交換樹脂のアンバーライトＩＲ−１２０Ｂ
等が挙げられる。
ン交換樹脂等に吸着させ、希アンモニア水等の溶出溶媒
で溶出し、得られた溶出液を減圧濃縮することにより粗
物質を得る。イオン交換樹脂の担体の具体例としては強
酸性陽イオン交換樹脂のアンバーライトＩＲ−１２０Ｂ
等が挙げられる。
【０００８】得られた粗物質は、更に水溶性物質の精製
において通常用いられている公知の方法、例えば活性
炭、セルロース、セファデックスＧ−２５、シリカゲ
ル、ゲルろ過等の担体を用いるカラムクロマトグラフィ
ーまたはイオン交換担体を用いる高速液体クロマトグラ
フィーにより精製することができる。
において通常用いられている公知の方法、例えば活性
炭、セルロース、セファデックスＧ−２５、シリカゲ
ル、ゲルろ過等の担体を用いるカラムクロマトグラフィ
ーまたはイオン交換担体を用いる高速液体クロマトグラ
フィーにより精製することができる。
【０００９】
実施例１；甘夏果皮の細片に２〜４倍量のメタノールを
加えてよく撹拌し、果皮抽出エキス１．８L を得た。こ
の抽出エキスをろ過し、沈殿物を除いたろ液１．７L を
減圧下メタノールを留去し、濃縮乾固して粗抽出物を得
た。この粗抽出物を精製水１．７L に溶解して水溶液と
し、活性炭カラムに通塔させ、通過液と水洗画分を一緒
にして、強酸性陽イオン交換樹脂アンバーライトＩＲ−
１２０Ｂ〔Ｈ+ 〕のカラムに吸着させ、０．５N のアン
モニア水で活性画分を溶出し、粗粉末７．６６ｇを得
た。この粗粉末をセルロースカラムクロマトグラフィー
にかけ、ブタノール：酢酸：水＝２０：１：１、１０：
１：１および５：１：１の各２L でカラムを洗浄後、ブ
タノール：酢酸：水＝３：１：１の溶出液２L で活性物
質を溶出させ、粗精製物２．１ｇを得た。この粗精製物
をセファデックスＧ−２５を担体とするゲルろ過（展開
溶媒：水）にかけ、粗精製物１．１２ｇを得た。次いで
セルロースカラムクロマトグラフィーにかけ、エタノー
ル：水＝７．５：１および５：１の各０．５L で洗浄
後、エタノール：水＝３：１〜１：１の溶出液１L で活
性物質を溶出させ、粗精製物４６０mgを得た。更に陽イ
オン交換系の高速液体クロマトグラフィー（展開溶媒：
水）により、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド
３００mgを得た。
加えてよく撹拌し、果皮抽出エキス１．８L を得た。こ
の抽出エキスをろ過し、沈殿物を除いたろ液１．７L を
減圧下メタノールを留去し、濃縮乾固して粗抽出物を得
た。この粗抽出物を精製水１．７L に溶解して水溶液と
し、活性炭カラムに通塔させ、通過液と水洗画分を一緒
にして、強酸性陽イオン交換樹脂アンバーライトＩＲ−
１２０Ｂ〔Ｈ+ 〕のカラムに吸着させ、０．５N のアン
モニア水で活性画分を溶出し、粗粉末７．６６ｇを得
た。この粗粉末をセルロースカラムクロマトグラフィー
にかけ、ブタノール：酢酸：水＝２０：１：１、１０：
１：１および５：１：１の各２L でカラムを洗浄後、ブ
タノール：酢酸：水＝３：１：１の溶出液２L で活性物
質を溶出させ、粗精製物２．１ｇを得た。この粗精製物
をセファデックスＧ−２５を担体とするゲルろ過（展開
溶媒：水）にかけ、粗精製物１．１２ｇを得た。次いで
セルロースカラムクロマトグラフィーにかけ、エタノー
ル：水＝７．５：１および５：１の各０．５L で洗浄
後、エタノール：水＝３：１〜１：１の溶出液１L で活
性物質を溶出させ、粗精製物４６０mgを得た。更に陽イ
オン交換系の高速液体クロマトグラフィー（展開溶媒：
水）により、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド
３００mgを得た。
【００１０】実験例１ ウサギ髭培養毛乳頭細胞に対す
る効果；日本白色系ウサギから分離した髭毛乳頭をコラ
ーゲン（タイプIV）コートしたシャーレ表面に接着し、
勝岡らの方法（Katuoka, K., et al.: Arch. Dermatol.
Res., 279, 20-25 (1986)）を改変した２０％牛胎児血
清（ＦＢＳ）および抗生物質添加Dulbecco変法Eagle 培
地（ＤＭＥＭ）にて培養を行い、髭毛乳頭より遊走した
初代培養細胞を得た。この細胞を更に１０％ＦＢＳ−Ｄ
ＭＥＭにて継代培養し、培養毛乳頭細胞とした。アッセ
イ法は培養毛乳頭細胞を１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭに浮遊
させて９６穴プレートに播き、実施例１で得たペプチド
の所定濃度水溶液を２回添加して、６日間培養した。培
養毛乳頭細胞の増殖の有無はＭＴＴ法で調べた。その結
果を表１に示した。
る効果；日本白色系ウサギから分離した髭毛乳頭をコラ
ーゲン（タイプIV）コートしたシャーレ表面に接着し、
勝岡らの方法（Katuoka, K., et al.: Arch. Dermatol.
Res., 279, 20-25 (1986)）を改変した２０％牛胎児血
清（ＦＢＳ）および抗生物質添加Dulbecco変法Eagle 培
地（ＤＭＥＭ）にて培養を行い、髭毛乳頭より遊走した
初代培養細胞を得た。この細胞を更に１０％ＦＢＳ−Ｄ
ＭＥＭにて継代培養し、培養毛乳頭細胞とした。アッセ
イ法は培養毛乳頭細胞を１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭに浮遊
させて９６穴プレートに播き、実施例１で得たペプチド
の所定濃度水溶液を２回添加して、６日間培養した。培
養毛乳頭細胞の増殖の有無はＭＴＴ法で調べた。その結
果を表１に示した。
【００１１】
【表１】
【００１２】この結果から、本発明のペプチドが培養毛
乳頭細胞を１５０％増殖促進する濃度は、１．４μg/ml
と低濃度で有効であることがわかる。
乳頭細胞を１５０％増殖促進する濃度は、１．４μg/ml
と低濃度で有効であることがわかる。
【図１】本発明のペプチドの赤外線吸収スペクトルを示
す。
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平４−342517（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−310923（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 14/415 A61K 7/06 A61K 35/78 A61K 38/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】 柑橘類から得られる、毛乳頭細胞増殖促
進作用を有する、次の物理的化学的性質を有するペプチ
ド。 （１）分子量 ２，０００〜４，０００（ゲルろ過法による） （２）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：図１に示す
とおり （３）溶解性 水に可溶。エーテル、ベンゼン、クロロホルムに難溶 （４）呈色反応 ニンヒドリン反応およびニトロプルシドナトリウム反応
は陽性；アニスアルデヒド反応、フェノール硫酸反応お
よびドラーゲンドルフ反応は陰性 （５）塩基性、中性、酸性の区別 中性 （６）性状 無色の結晶または白色の結晶性粉末であって、わずかに
特有の臭いを有する （７）ペプチドの構成アミノ酸 アスパラギン酸およびオキシリシンを含む - 【請求項２】 構成アミノ酸として、ホスホセリン、ア
スパラギン酸、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラ
ニン、バリン、シスチン、メチオニン、オキシリシン、
オルニチン、リシンおよびヒスチジンを含む、請求項１
のペプチド。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8011327A JP2983166B2 (ja) | 1996-01-25 | 1996-01-25 | 毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド |
| US09/107,449 US6093402A (en) | 1996-01-25 | 1998-06-30 | Peptides and hair growers having actions of promoting proliferation of hair papilla cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8011327A JP2983166B2 (ja) | 1996-01-25 | 1996-01-25 | 毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09202798A JPH09202798A (ja) | 1997-08-05 |
| JP2983166B2 true JP2983166B2 (ja) | 1999-11-29 |
Family
ID=11774942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8011327A Expired - Fee Related JP2983166B2 (ja) | 1996-01-25 | 1996-01-25 | 毛乳頭細胞増殖促進作用を有するペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2983166B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002322050A (ja) * | 2001-04-25 | 2002-11-08 | Kenji Uehara | 発毛剤 |
| NZ524868A (en) * | 2003-03-21 | 2005-09-30 | Velvet Antler Res New Zealand | Process for purifying low molecular weight proteins from tissue in situ |
| JP2008179540A (ja) * | 2005-01-07 | 2008-08-07 | Noevir Co Ltd | 細胞分化、発生、増殖を制御する物質および該物質を含む細胞分化・発生・増殖調節剤 |
-
1996
- 1996-01-25 JP JP8011327A patent/JP2983166B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09202798A (ja) | 1997-08-05 |
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