JP2960830B2 - サーモアクチノミセス エス・ピー ｕａｔ−８，これを用いたアルドースレダクターゼ阻害剤の製造法及びアルドースレダクターゼ阻害剤 - Google Patents
サーモアクチノミセス エス・ピー ｕａｔ−８，これを用いたアルドースレダクターゼ阻害剤の製造法及びアルドースレダクターゼ阻害剤Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なサーモアクチノ
ミセス エス・ピー ＵＡＴ−８と、それを用いたアル
ドースレダクターゼ阻害剤の製造法およびアルドースレ
ダクターゼ阻害剤に関するものである。
ミセス エス・ピー ＵＡＴ−８と、それを用いたアル
ドースレダクターゼ阻害剤の製造法およびアルドースレ
ダクターゼ阻害剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】糖尿病性合併症には、例えば、糖尿病性
神経症、糖尿病性白内障、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎
症、糖尿病性循環器障害等が知られている。これら各種
合併症の成因として、グルコースの代謝経路であるポリ
オール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積が注目さ
れている。糖尿病のような高血糖状態では、アルドース
レダクターゼの活性が高くなり、ソルビトールなどのポ
リオールが異常蓄積することにより、細胞内浸透圧が上
昇して組織障害を起こすと考えられている。従って、ア
ルドースレダクターゼを阻害し、ポリオールの生産や蓄
積を低下させることが糖尿病性合併症の治療に有効であ
ると考えられる。従来、アルドースレダクターゼ阻害剤
としては、チアゾリン誘導体（特開昭５７−２８０７３
号公報）やフェニルアラニン誘導体（特開平２−１９１
２０９号公報）等、多くの化合物が知られている。ま
た、アルドースレダクターゼ阻害剤を生産する微生物と
しては、アクチノシネマ属Ｃ−３０４株（特開昭６３−
３０４９３号公報）や、コニオケータエリプソイデアＭ
４５２９株（特開昭６４−８３０９０号公報）が知られ
ているが、いずれも特に高い活性を持つアルドースレダ
クターゼ阻害剤を生産するものではなかった。
神経症、糖尿病性白内障、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎
症、糖尿病性循環器障害等が知られている。これら各種
合併症の成因として、グルコースの代謝経路であるポリ
オール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積が注目さ
れている。糖尿病のような高血糖状態では、アルドース
レダクターゼの活性が高くなり、ソルビトールなどのポ
リオールが異常蓄積することにより、細胞内浸透圧が上
昇して組織障害を起こすと考えられている。従って、ア
ルドースレダクターゼを阻害し、ポリオールの生産や蓄
積を低下させることが糖尿病性合併症の治療に有効であ
ると考えられる。従来、アルドースレダクターゼ阻害剤
としては、チアゾリン誘導体（特開昭５７−２８０７３
号公報）やフェニルアラニン誘導体（特開平２−１９１
２０９号公報）等、多くの化合物が知られている。ま
た、アルドースレダクターゼ阻害剤を生産する微生物と
しては、アクチノシネマ属Ｃ−３０４株（特開昭６３−
３０４９３号公報）や、コニオケータエリプソイデアＭ
４５２９株（特開昭６４−８３０９０号公報）が知られ
ているが、いずれも特に高い活性を持つアルドースレダ
クターゼ阻害剤を生産するものではなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】前記したように、各種
のアルドースレダクターゼ阻害剤生産菌およびその生産
物であるアルドースレダクターゼ阻害剤が見いだされて
いるが、これらの多くは毒性を持つことや、あまり活性
が高くないという点で解決すべき課題をもっていた。本
発明は毒性が低く、高い活性を持つアルドースレダクタ
ーゼ阻害剤を生産する菌を提供することを目的とするも
のであり、さらにその菌からのアルドースレダクターゼ
阻害剤の製造法およびアルドースレダクターゼ阻害剤を
提供することを目的とする。
のアルドースレダクターゼ阻害剤生産菌およびその生産
物であるアルドースレダクターゼ阻害剤が見いだされて
いるが、これらの多くは毒性を持つことや、あまり活性
が高くないという点で解決すべき課題をもっていた。本
発明は毒性が低く、高い活性を持つアルドースレダクタ
ーゼ阻害剤を生産する菌を提供することを目的とするも
のであり、さらにその菌からのアルドースレダクターゼ
阻害剤の製造法およびアルドースレダクターゼ阻害剤を
提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決するために鋭意検討を重ね、高い活性をもつア
ルドースレダクターゼ阻害剤を生産する菌を求めて、広
く自然界を対象にスクリーニングを行った結果、サーモ
アクチノミセス エス・ピーに属する菌が、高い活性を
示すアルドースレダクターゼ阻害剤を生産することを発
見し、本発明に到達した。
題を解決するために鋭意検討を重ね、高い活性をもつア
ルドースレダクターゼ阻害剤を生産する菌を求めて、広
く自然界を対象にスクリーニングを行った結果、サーモ
アクチノミセス エス・ピーに属する菌が、高い活性を
示すアルドースレダクターゼ阻害剤を生産することを発
見し、本発明に到達した。
【０００５】すなわち、本発明はサーモアクチノミセス
エス・ピー（Termoactinomycessp.）に属し、２−ヒ
ドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドースレダ
クターゼ阻害剤生産能を有するサーモアクチノミセス
エス・ピー ＵＡＴ−８、サーモアクチノミセス エス
・ピー ＵＡＴ−８株を培養することを特徴とする２−
ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドースレ
ダクターゼ阻害剤の製造法および２−ヒドロキシフェニ
ル酢酸を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害剤
を要旨とするものである。
エス・ピー（Termoactinomycessp.）に属し、２−ヒ
ドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドースレダ
クターゼ阻害剤生産能を有するサーモアクチノミセス
エス・ピー ＵＡＴ−８、サーモアクチノミセス エス
・ピー ＵＡＴ−８株を培養することを特徴とする２−
ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドースレ
ダクターゼ阻害剤の製造法および２−ヒドロキシフェニ
ル酢酸を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害剤
を要旨とするものである。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。まず、本
発明の菌株であるサーモアクチノミセス エス・ピー
ＵＡＴ−８の菌学的性質を示す。この菌学的性質の検討
には、放線菌の同定実験法（日本放線菌学会編、日本放
線菌学会発行）、微生物の分類と同定（長谷川武治編
著、財団法人東京大学出版会発行）に記載されている方
法、培地組成を用いた。また、寒天培地の場合には、寒
天を２％（重量）加えた。
発明の菌株であるサーモアクチノミセス エス・ピー
ＵＡＴ−８の菌学的性質を示す。この菌学的性質の検討
には、放線菌の同定実験法（日本放線菌学会編、日本放
線菌学会発行）、微生物の分類と同定（長谷川武治編
著、財団法人東京大学出版会発行）に記載されている方
法、培地組成を用いた。また、寒天培地の場合には、寒
天を２％（重量）加えた。
【０００７】（形態的所見） ５０℃、４８時間培養 １．胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝 ２．形態：波状 ３．胞子の数：単胞子 ４．胞子の表面構造：平滑 ５．胞子の形状及び大きさ：ほぼ球状，０．７２〜０．
７８×０．７８〜０．８１μｍ ６．鞭毛胞子：なし ７．胞子嚢：なし
７８×０．７８〜０．８１μｍ ６．鞭毛胞子：なし ７．胞子嚢：なし
【０００８】（生育状態） 以下の１０種類の培地を用いて、５０℃、４８時間培養
した結果を表１に示した。 １：シュクロース・硝酸塩寒天培地、２：グルコース・
アスパラギン寒天培地、３：グリセリン・アスパラギン
寒天培地、４：スターチ寒天培地、５：チロシン寒天培
地、６：栄養寒天培地、７：イースト・麦芽寒天培地、
８：オートミール寒天培地、９：ベネッテ寒天培地、１
０：トリプトン・麦芽寒天培地
した結果を表１に示した。 １：シュクロース・硝酸塩寒天培地、２：グルコース・
アスパラギン寒天培地、３：グリセリン・アスパラギン
寒天培地、４：スターチ寒天培地、５：チロシン寒天培
地、６：栄養寒天培地、７：イースト・麦芽寒天培地、
８：オートミール寒天培地、９：ベネッテ寒天培地、１
０：トリプトン・麦芽寒天培地
【０００９】
【表１】
【００１０】（生理学的性質） １．生育温度範囲：３５℃〜６５℃（至適生育温度：５
０℃） ２．ゼラチンの液化：ゼラチンは液化する。 ３．脱脂牛乳の凝固・ペプトン化：脱脂牛乳の凝固およ
びそれに続くペプトン化が観察された。 ４．メラニン様色素の生成：なし ５．細胞壁タイプ：III
０℃） ２．ゼラチンの液化：ゼラチンは液化する。 ３．脱脂牛乳の凝固・ペプトン化：脱脂牛乳の凝固およ
びそれに続くペプトン化が観察された。 ４．メラニン様色素の生成：なし ５．細胞壁タイプ：III
【００１１】（炭素源の資化性） 基本培地（カゼイン 0.03%, KNO3 0.2%, NaCl 0.2%, Mg
SO4 ・ 7H2O 0.005%, CaCO3 0.002%, FeSO4 0.001%, 寒
天1.5%, pH 7.2，残部は水， %は重量% ）に以下の１０
種類の炭素源を１％となるように加え、その資化性を調
べた。D-アラビノース，D-キシロース, D-グルコース，
D-フルクトース，シュクロース，L-ラムノース, ガラク
トース，イノシトール，D-マンニトール, 可溶性デンプ
ン炭素源の資化性試験の結果、D-マンニトール以外の糖
はすべて資化することがわかった。
SO4 ・ 7H2O 0.005%, CaCO3 0.002%, FeSO4 0.001%, 寒
天1.5%, pH 7.2，残部は水， %は重量% ）に以下の１０
種類の炭素源を１％となるように加え、その資化性を調
べた。D-アラビノース，D-キシロース, D-グルコース，
D-フルクトース，シュクロース，L-ラムノース, ガラク
トース，イノシトール，D-マンニトール, 可溶性デンプ
ン炭素源の資化性試験の結果、D-マンニトール以外の糖
はすべて資化することがわかった。
【００１２】以上の菌学的性質から、放線菌の同定実験
法（日本放線菌学会発行）に基づき検索した結果、本発
明の菌株と類似の菌株としてはサーモアクチノミセス
ヴルガリスＩＦＯ１２５１６（財団法人発酵研究所保管
株）が認められた。しかしながら、本発明のサーモアク
チノミセス エス・ピー ＵＡＴ−８は高い活性を持つ
アルドースレダクターゼ阻害剤を生産するのに対し、上
記のサーモアクチノミセス ヴルガリスはアルドースレ
ダクターゼ阻害剤を生産しない。
法（日本放線菌学会発行）に基づき検索した結果、本発
明の菌株と類似の菌株としてはサーモアクチノミセス
ヴルガリスＩＦＯ１２５１６（財団法人発酵研究所保管
株）が認められた。しかしながら、本発明のサーモアク
チノミセス エス・ピー ＵＡＴ−８は高い活性を持つ
アルドースレダクターゼ阻害剤を生産するのに対し、上
記のサーモアクチノミセス ヴルガリスはアルドースレ
ダクターゼ阻害剤を生産しない。
【００１３】そこで、本発明者らはＵＡＴ−８をサーモ
アクチノミセス エス・ピーに属する新放線菌と判断
し、サーモアクチノミセス エス・ピー ＵＡＴ−８と
命名し、平成５年１月１９日に通産省工業技術院微生物
工業研究所へ寄託した。その微生物受託番号は微工研菌
寄第１３３７２号である。
アクチノミセス エス・ピーに属する新放線菌と判断
し、サーモアクチノミセス エス・ピー ＵＡＴ−８と
命名し、平成５年１月１９日に通産省工業技術院微生物
工業研究所へ寄託した。その微生物受託番号は微工研菌
寄第１３３７２号である。
【００１４】本発明のＵＡＴ−８を培養するに際して用
いられる培地としては、放線菌の一般的培地であれば良
く、液体培地、固体培地どちらを用いても良い。この培
地の栄養源において炭素源としては、Ｄ−マンニトール
以外の糖（例えば、グルコース、シュクロース、フルク
トース、アラビノース等）が使用でき、窒素源として
は、例えば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、ファー
マメディア等が使用できる。さらに、無機塩類として
は、例えば、各種りん酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄
等が使用されるが、天然物を含む培地では必ずしも添加
を必要としない。更にまた、栄養要求を必要とする変異
株を用いる場合には、その栄養要求を満たす物質を培地
に添加しなければならない。
いられる培地としては、放線菌の一般的培地であれば良
く、液体培地、固体培地どちらを用いても良い。この培
地の栄養源において炭素源としては、Ｄ−マンニトール
以外の糖（例えば、グルコース、シュクロース、フルク
トース、アラビノース等）が使用でき、窒素源として
は、例えば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、ファー
マメディア等が使用できる。さらに、無機塩類として
は、例えば、各種りん酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄
等が使用されるが、天然物を含む培地では必ずしも添加
を必要としない。更にまた、栄養要求を必要とする変異
株を用いる場合には、その栄養要求を満たす物質を培地
に添加しなければならない。
【００１５】これらの培地を用いて、本菌株を３５℃〜
６５℃、好ましくは４０℃〜５５℃、最適には４５℃〜
５０℃で、３〜５日間振盪または通気攪はんすれば良
い。培養時のｐＨとしては、ｐＨ２〜９、好ましくはｐ
Ｈ４〜８、最適にはｐＨ５〜７．５に調節し、その後は
培養にまかせれば良い結果が得られる。また、培養中に
通気量を多くすれば菌が増殖し、アルドースレダクター
ゼ阻害剤生産量も増す。
６５℃、好ましくは４０℃〜５５℃、最適には４５℃〜
５０℃で、３〜５日間振盪または通気攪はんすれば良
い。培養時のｐＨとしては、ｐＨ２〜９、好ましくはｐ
Ｈ４〜８、最適にはｐＨ５〜７．５に調節し、その後は
培養にまかせれば良い結果が得られる。また、培養中に
通気量を多くすれば菌が増殖し、アルドースレダクター
ゼ阻害剤生産量も増す。
【００１６】更に、培養物中からアルドースレダクター
ゼ阻害剤を単離するには、後記実施例に示す如く、一般
の有機化合物の採取および精製の手段に準じて行うこと
ができる。例えば、培養物を遠心分離、ろ過または分相
等に付して、培養液を分取し、必要があればＨＰ−２０
（疏水性吸着剤，三菱化成（株）製）カラムクロマトグ
ラフィー等により培養液を濃縮する。次いでこの培養液
を酢酸エチル等の有機溶媒を用いて抽出し、この抽出物
からシリカゲルカラムクロマトグラフィー等の方法によ
り、不純物を取り除いた後、更に、高速液体カラムクロ
マトグラフィー等の方法により分別精製する。このよう
にして、単離されたアルドースレダクターゼ阻害剤は、
２−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするものであ
る。２−ヒドロキシフェニル酢酸は植物毒素として知ら
れているものであるが、アルドースレダクターゼを阻害
することは知られていない。
ゼ阻害剤を単離するには、後記実施例に示す如く、一般
の有機化合物の採取および精製の手段に準じて行うこと
ができる。例えば、培養物を遠心分離、ろ過または分相
等に付して、培養液を分取し、必要があればＨＰ−２０
（疏水性吸着剤，三菱化成（株）製）カラムクロマトグ
ラフィー等により培養液を濃縮する。次いでこの培養液
を酢酸エチル等の有機溶媒を用いて抽出し、この抽出物
からシリカゲルカラムクロマトグラフィー等の方法によ
り、不純物を取り除いた後、更に、高速液体カラムクロ
マトグラフィー等の方法により分別精製する。このよう
にして、単離されたアルドースレダクターゼ阻害剤は、
２−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするものであ
る。２−ヒドロキシフェニル酢酸は植物毒素として知ら
れているものであるが、アルドースレダクターゼを阻害
することは知られていない。
【００１７】
【実施例】次に、本発明のアルドースレダクターゼ阻害
剤の有効成分である２−ヒドロキシフェニル酢酸が、ア
ルドースレダクターゼ阻害作用を有することを実施例を
挙げて説明する。また、％は重量％を示す。
剤の有効成分である２−ヒドロキシフェニル酢酸が、ア
ルドースレダクターゼ阻害作用を有することを実施例を
挙げて説明する。また、％は重量％を示す。
【００１８】実施例１ 変性でんぷん１８０ｇ，シュクロース１８０ｇ，グルコ
ース１８０ｇ，ファーマメディア１８０ｇ、ペプトン９
０ｇ，大豆粉９０ｇ，炭酸カルシウム３６ｇを水道水約
１７Ｌに溶解し、２０分間加圧蒸気殺菌（１２１℃、１
気圧）した。次に、培地を４５℃に冷却後、同組成の培
地（１．２Ｌ）に生育した、サーモアクチノミセス エ
ス・ピー ＵＡＴ−８を植菌し、４５℃で通気攪はん培
養（丸菱バイオエンジ社製、３０Ｌ ＪＡＲファーメン
ター）を開始した。約９７時間培養したところ、対数増
殖後期に達したので、培養を中止し、培養液をろ過し、
得られたろ液をＨＰ−２０（疏水性吸着剤，三菱化成
（株）製）カラムクロマトグラフィーにより濃縮後、酢
酸エチル抽出を行い、抽出液（約３ｇ）を得た。
ース１８０ｇ，ファーマメディア１８０ｇ、ペプトン９
０ｇ，大豆粉９０ｇ，炭酸カルシウム３６ｇを水道水約
１７Ｌに溶解し、２０分間加圧蒸気殺菌（１２１℃、１
気圧）した。次に、培地を４５℃に冷却後、同組成の培
地（１．２Ｌ）に生育した、サーモアクチノミセス エ
ス・ピー ＵＡＴ−８を植菌し、４５℃で通気攪はん培
養（丸菱バイオエンジ社製、３０Ｌ ＪＡＲファーメン
ター）を開始した。約９７時間培養したところ、対数増
殖後期に達したので、培養を中止し、培養液をろ過し、
得られたろ液をＨＰ−２０（疏水性吸着剤，三菱化成
（株）製）カラムクロマトグラフィーにより濃縮後、酢
酸エチル抽出を行い、抽出液（約３ｇ）を得た。
【００１９】この抽出液を、あらかじめクロロホルムで
平衡化したシリカゲルカラムに通じ、クロロホルム−メ
タノールの溶媒系で徐々にメタノール濃度を増して溶出
せしめると、メタノール濃度１．５％で目的のアルドー
スレダクターゼ阻害活性画分が溶出した。この画分を集
め、濃縮後、メタノールで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０（Pharmacia 社製）カラムに通し、メタノー
ルで溶出を行ったところ、アルドースレダクターゼ阻害
活性画分が得られた。この画分を分取用高速液体クロマ
トグラフィー（逆相系カラム（ＲＣＭ），２５×１００
ｍｍ，Ｗａｔｅｒｓ社製）に付し、水：アセトニトリル
９０：１０から６０：４０の曲線的勾配で溶出を行っ
たところ、目的の物質約１８ｍｇを得た。得られた化合
物は 1Ｈ−ＮＭＲ，13Ｃ−ＮＭＲ，ガスマススペクトル
および紫外吸収スペクトルにより同定した。
平衡化したシリカゲルカラムに通じ、クロロホルム−メ
タノールの溶媒系で徐々にメタノール濃度を増して溶出
せしめると、メタノール濃度１．５％で目的のアルドー
スレダクターゼ阻害活性画分が溶出した。この画分を集
め、濃縮後、メタノールで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０（Pharmacia 社製）カラムに通し、メタノー
ルで溶出を行ったところ、アルドースレダクターゼ阻害
活性画分が得られた。この画分を分取用高速液体クロマ
トグラフィー（逆相系カラム（ＲＣＭ），２５×１００
ｍｍ，Ｗａｔｅｒｓ社製）に付し、水：アセトニトリル
９０：１０から６０：４０の曲線的勾配で溶出を行っ
たところ、目的の物質約１８ｍｇを得た。得られた化合
物は 1Ｈ−ＮＭＲ，13Ｃ−ＮＭＲ，ガスマススペクトル
および紫外吸収スペクトルにより同定した。
【００２０】1Ｈ−ＮＭＲをＣＤ3 ＯＤ中、３００ＭＨ
ｚで測定すると、図１のようなピークが観察された。
３．５７ｐｐｍのピークから、得られた化合物はメチレ
ン基とカルボニル基の結合した構造を有すると推定され
た。13Ｃ−ＮＭＲをＣＤ3 ＯＤ中、７５ＭＨｚで測定す
ると、図２のようなピークが観察された。３９．５ｐｐ
ｍ（ｔ）のピークはメチレン基、１１６〜１３５ｐｐＭ
のピークは芳香環、１７９ｐｐｍ（ｓ）のピークはカル
ボニル基と推定された。ガスマススペクトルを測定し、
観察される各ピーク（図３）に相当する組成式を算出し
た。この結果と上記 1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲの結果
から、本化合物は２−ヒドロキシフェニル酢酸と推定さ
れた。
ｚで測定すると、図１のようなピークが観察された。
３．５７ｐｐｍのピークから、得られた化合物はメチレ
ン基とカルボニル基の結合した構造を有すると推定され
た。13Ｃ−ＮＭＲをＣＤ3 ＯＤ中、７５ＭＨｚで測定す
ると、図２のようなピークが観察された。３９．５ｐｐ
ｍ（ｔ）のピークはメチレン基、１１６〜１３５ｐｐＭ
のピークは芳香環、１７９ｐｐｍ（ｓ）のピークはカル
ボニル基と推定された。ガスマススペクトルを測定し、
観察される各ピーク（図３）に相当する組成式を算出し
た。この結果と上記 1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲの結果
から、本化合物は２−ヒドロキシフェニル酢酸と推定さ
れた。
【００２１】そこで、２−ヒドロキシフェニル酢酸の 1
Ｈ−ＮＭＲ，13Ｃ−ＮＭＲ，ガスマススペクトルおよび
紫外吸収スペクトルを測定したところ、本化合物と同様
な結果が得られた。ガスマススペクトルにおいて、本化
合物と２−ヒドロキシフェニル酢酸は、どちらも測定中
に水酸基と水素基がはずれ、脱水縮合がおこるため、ピ
ークの値がＭ−１８となっていることがわかった。以上
の結果、本化合物は２−ヒドロキシフェニル酢酸である
と同定された。
Ｈ−ＮＭＲ，13Ｃ−ＮＭＲ，ガスマススペクトルおよび
紫外吸収スペクトルを測定したところ、本化合物と同様
な結果が得られた。ガスマススペクトルにおいて、本化
合物と２−ヒドロキシフェニル酢酸は、どちらも測定中
に水酸基と水素基がはずれ、脱水縮合がおこるため、ピ
ークの値がＭ−１８となっていることがわかった。以上
の結果、本化合物は２−ヒドロキシフェニル酢酸である
と同定された。
【００２２】このようにして得られた２−ヒドロキシフ
ェニル酢酸のアルドースレダクターゼ阻害活性（Ｉ
Ｃ50）は７．７×１０-6（Ｍ）であった。なお、ＩＣ50
の測定は下記の方法で行った。
ェニル酢酸のアルドースレダクターゼ阻害活性（Ｉ
Ｃ50）は７．７×１０-6（Ｍ）であった。なお、ＩＣ50
の測定は下記の方法で行った。
【００２３】 （アルドースレダクターゼ阻害活性測定法） 牛眼球より水晶体を摘出し、３倍量の冷純水でホモゲナ
イズし、１００００×ｇで１５分間遠心分離を行った。
その上澄みをアルドースレダクターゼ活性の測定に用い
た。
イズし、１００００×ｇで１５分間遠心分離を行った。
その上澄みをアルドースレダクターゼ活性の測定に用い
た。
【００２４】アルドースレダクターゼ活性測定は、ハイ
マンと木下(Hayman and Kinoshita)の方法〔ザ・ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（The Jour
nalof Biological Chemistry)第２４０巻、第８７７〜
８８２頁、１９６５年〕に基づいて、多少の修正を加え
た方法で行った。すなわち、５０ｍＭリン酸バッファー
（ｐＨ６．２）、４００ｍＭ硫酸リチウム、０．１２５
ｍＭＮＡＤＰＨ、アルドースレダクターゼと阻害剤もし
くは培地の混合液を２５℃で５分間、３４０ｎｍの吸光
度の減少を追跡して、その時のｔａｎθ値を求めた。阻
害剤を添加したときのｔａｎθ値をＡとし、培地を添加
した時のｔａｎθをＢとして、次式によって阻害率
（％）を求めた。 阻害率５０％のときの阻害濃度をＩＣ50として求めた。
マンと木下(Hayman and Kinoshita)の方法〔ザ・ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（The Jour
nalof Biological Chemistry)第２４０巻、第８７７〜
８８２頁、１９６５年〕に基づいて、多少の修正を加え
た方法で行った。すなわち、５０ｍＭリン酸バッファー
（ｐＨ６．２）、４００ｍＭ硫酸リチウム、０．１２５
ｍＭＮＡＤＰＨ、アルドースレダクターゼと阻害剤もし
くは培地の混合液を２５℃で５分間、３４０ｎｍの吸光
度の減少を追跡して、その時のｔａｎθ値を求めた。阻
害剤を添加したときのｔａｎθ値をＡとし、培地を添加
した時のｔａｎθをＢとして、次式によって阻害率
（％）を求めた。 阻害率５０％のときの阻害濃度をＩＣ50として求めた。
【００２５】
【発明の効果】本発明のサーモアクチノミセス エス
ピー ＵＡＴ−８は毒性が低く、高いアルドースレダク
ターゼ阻害活性を有する２−ヒドロキシフェニル酢酸を
産生する能力を有する。また、本発明の方法によると２
−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドース
レダクターゼを容易に得ることができる。さらに、本発
明のアルドースレダクターゼ阻害剤は、高いアルドース
レダクターゼ阻害活性を有しており、糖尿病性合併症の
予防、治療剤として有用である。
ピー ＵＡＴ−８は毒性が低く、高いアルドースレダク
ターゼ阻害活性を有する２−ヒドロキシフェニル酢酸を
産生する能力を有する。また、本発明の方法によると２
−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドース
レダクターゼを容易に得ることができる。さらに、本発
明のアルドースレダクターゼ阻害剤は、高いアルドース
レダクターゼ阻害活性を有しており、糖尿病性合併症の
予防、治療剤として有用である。
【図１】本発明のアルドースレダクターゼ阻害剤の 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを示す。
−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】本発明のアルドースレダクターゼ阻害剤の13Ｃ
−ＮＭＲスペクトルを示す。
−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】本発明のアルドースレダクターゼ阻害剤のガス
マススペクトルを示す。
マススペクトルを示す。
【図４】本発明のアルドースレダクターゼ阻害剤の紫外
部吸収スペクトルを示す。
部吸収スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 7/54 Ｃ１２Ｒ 1:01） (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 1/20 - 1/21 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】 サーモアクチノミセス エス・ピー（Te
rmoactinomyces sp.）に属し、２−ヒドロキシフェニ
ル酢酸を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害剤
生産能を有するサーモアクチノミセス エス・ピー Ｕ
ＡＴ−８。 - 【請求項２】 サーモアクチノミセス エス・ピー（Te
rmoactinomyces sp.）を培養することを特徴とする２
−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分とするアルドース
レダクターゼ阻害剤の製造方法。 - 【請求項３】 ２−ヒドロキシフェニル酢酸を有効成分
とするアルドースレダクターゼ阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5042227A JP2960830B2 (ja) | 1993-02-05 | 1993-02-05 | サーモアクチノミセス エス・ピー ｕａｔ−８，これを用いたアルドースレダクターゼ阻害剤の製造法及びアルドースレダクターゼ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5042227A JP2960830B2 (ja) | 1993-02-05 | 1993-02-05 | サーモアクチノミセス エス・ピー ｕａｔ−８，これを用いたアルドースレダクターゼ阻害剤の製造法及びアルドースレダクターゼ阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06225756A JPH06225756A (ja) | 1994-08-16 |
| JP2960830B2 true JP2960830B2 (ja) | 1999-10-12 |
Family
ID=12630152
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5042227A Expired - Lifetime JP2960830B2 (ja) | 1993-02-05 | 1993-02-05 | サーモアクチノミセス エス・ピー ｕａｔ−８，これを用いたアルドースレダクターゼ阻害剤の製造法及びアルドースレダクターゼ阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2960830B2 (ja) |
-
1993
- 1993-02-05 JP JP5042227A patent/JP2960830B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06225756A (ja) | 1994-08-16 |
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