JP2700088B2 - 免疫抑制剤 - Google Patents
免疫抑制剤Info
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- amino acid
- cysteine protease
- seq
- acid sequence
- cysteine
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
- C12N9/6405—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals not being snakes
- C12N9/641—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、臓器移植の際の拒絶反
応抑制、自己免疫疾患の抑制等に用いる免疫抑制剤に関
するものである。
応抑制、自己免疫疾患の抑制等に用いる免疫抑制剤に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】現在、医療目的で使用されている免疫抑
制剤としては、アザチオプリン、サイクロスポリンＡ、
ＦＫ−５０１、１５−デオキシスペルグアリン等が知ら
れており、いずれもその抑制効果は強力である。
制剤としては、アザチオプリン、サイクロスポリンＡ、
ＦＫ−５０１、１５−デオキシスペルグアリン等が知ら
れており、いずれもその抑制効果は強力である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これら従来の
免疫抑制剤は、いずれも免疫的寛容を誘導するものでは
ないため、長期間の継続的な投与が必要であり、その結
果、副作用として腎尿細管障害、血管炎、肝障害、膵外
分泌障害、消化管障害等をもたらすという問題点があ
る。
免疫抑制剤は、いずれも免疫的寛容を誘導するものでは
ないため、長期間の継続的な投与が必要であり、その結
果、副作用として腎尿細管障害、血管炎、肝障害、膵外
分泌障害、消化管障害等をもたらすという問題点があ
る。
【０００４】そこで本発明は、長期間の継続的な投与な
しに抗原や移植組織に対する抗体産生を抑制し、抗原や
移植組織に対する免疫的寛容を誘導しうる免疫抑制剤を
提供することを目的とする。
しに抗原や移植組織に対する抗体産生を抑制し、抗原や
移植組織に対する免疫的寛容を誘導しうる免疫抑制剤を
提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の発明者らは、人
体内寄生虫とりわけ寄生蠕虫類の耐免疫作用に関する詳
細な研究の結果、寄生蠕虫の組織に蓄積する分泌蛋白質
であるシステインプロテアーゼが生体の細胞性および液
性免疫を抑制し、免疫的寛容を誘導することを知見し、
本発明を完成するに至った。
体内寄生虫とりわけ寄生蠕虫類の耐免疫作用に関する詳
細な研究の結果、寄生蠕虫の組織に蓄積する分泌蛋白質
であるシステインプロテアーゼが生体の細胞性および液
性免疫を抑制し、免疫的寛容を誘導することを知見し、
本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、配列番号１で表され
るアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたもの
を含み、抗原特異的免疫抑制活性を有するシステインプ
ロテアーゼである。さらに、本発明は、配列番号１で表
されるアミノ酸配列と少なくとも９０％ホモロジーを有
し、抗原特異的免疫抑制活性を有するシステインプロテ
アーゼである。 さらに、本発明は、配列番号１で表され
るアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたもの
を含み、免疫的寛容を誘導する活性を有するシステイン
プロテアーゼである。 さらに、本発明は、配列番号１で
表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％ホモロジーを
有し、免疫的寛容を誘導する活性を有するシステインプ
ロテアーゼである。 前記欠失、置換又は挿入等の変異
は、公知の部位特異的突然変異誘発手法等により導入す
ることができる。前記システインプロテアーゼとして
は、塩基性アミノ酸量よりも酸性アミノ酸量が多いも
の、中性領域の水素イオン濃度において活性であるも
の、寄生蠕虫の感染幼虫より抽出したものが挙げられ
る。
るアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたもの
を含み、抗原特異的免疫抑制活性を有するシステインプ
ロテアーゼである。さらに、本発明は、配列番号１で表
されるアミノ酸配列と少なくとも９０％ホモロジーを有
し、抗原特異的免疫抑制活性を有するシステインプロテ
アーゼである。 さらに、本発明は、配列番号１で表され
るアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたもの
を含み、免疫的寛容を誘導する活性を有するシステイン
プロテアーゼである。 さらに、本発明は、配列番号１で
表されるアミノ酸配列と少なくとも９０％ホモロジーを
有し、免疫的寛容を誘導する活性を有するシステインプ
ロテアーゼである。 前記欠失、置換又は挿入等の変異
は、公知の部位特異的突然変異誘発手法等により導入す
ることができる。前記システインプロテアーゼとして
は、塩基性アミノ酸量よりも酸性アミノ酸量が多いも
の、中性領域の水素イオン濃度において活性であるも
の、寄生蠕虫の感染幼虫より抽出したものが挙げられ
る。
【０００７】さらに、本発明は、配列番号１で表される
アミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたものを
含み、抗原特異的免疫抑制活性を有するポリペプチドを
コードするシステインプロテアーゼ遺伝子である。 さら
に、本発明は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％ホモロジーを有するポリペプチドをコー
ドするシステインプロテアーゼ遺伝子である。 さらに、
本発明は、配列番号２で表される塩基配列を有するシス
テインプロテアーゼ遺伝子である。さらに、本発明は、
前記システインプロテアーゼを有効成分として含有する
免疫抑制剤である。
アミノ酸配列、又は該アミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは挿入されたものを
含み、抗原特異的免疫抑制活性を有するポリペプチドを
コードするシステインプロテアーゼ遺伝子である。 さら
に、本発明は、配列番号１で表されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％ホモロジーを有するポリペプチドをコー
ドするシステインプロテアーゼ遺伝子である。 さらに、
本発明は、配列番号２で表される塩基配列を有するシス
テインプロテアーゼ遺伝子である。さらに、本発明は、
前記システインプロテアーゼを有効成分として含有する
免疫抑制剤である。
【０００８】本発明において用いる「システインプロテ
アーゼ」の語は、本蛋白質のアミノ酸配列においてＮ末
端から２２、２５、５６、６３、９６、１５４および２
０２等の残基がシステインであり、また１６１残基がヒ
スチジンであって、活性中心残基がシステインおよびヒ
スチジンである蛋白質分解酵素を意味する。しかして、
本発明に係る免疫抑制剤は、無脊椎動物の寄生蠕虫をは
じめ脊椎動物の哺乳動物に至る各種動物の細胞および組
織から抽出したシステインプロテアーゼのほか、それら
の培養細胞およびそれら由来のシステインプロテアーゼ
の遺伝子組換え体から遺伝子工学的手段（組換ＤＮＡ技
法）で得られたもの、および化学的合成により得られた
ものをも含むものである。
アーゼ」の語は、本蛋白質のアミノ酸配列においてＮ末
端から２２、２５、５６、６３、９６、１５４および２
０２等の残基がシステインであり、また１６１残基がヒ
スチジンであって、活性中心残基がシステインおよびヒ
スチジンである蛋白質分解酵素を意味する。しかして、
本発明に係る免疫抑制剤は、無脊椎動物の寄生蠕虫をは
じめ脊椎動物の哺乳動物に至る各種動物の細胞および組
織から抽出したシステインプロテアーゼのほか、それら
の培養細胞およびそれら由来のシステインプロテアーゼ
の遺伝子組換え体から遺伝子工学的手段（組換ＤＮＡ技
法）で得られたもの、および化学的合成により得られた
ものをも含むものである。
【０００９】
【作用】抗原を注射する当日、数日前および数日後に本
発明のシステインプロテアーゼ（以下「本システインプ
ロテアーゼ」という。）を注射すると、その抗原に対す
る細胞性および液性抗体産生は抑制され、さらに、その
細胞性免疫は長期に亘って抑制される。また本システイ
ンプロテアーゼをあらかじめ注射し、異種の組織を移植
すると、長期に亘りその組織の生着が可能になり、移植
組織に対して免疫的寛容を誘導することができる。
発明のシステインプロテアーゼ（以下「本システインプ
ロテアーゼ」という。）を注射すると、その抗原に対す
る細胞性および液性抗体産生は抑制され、さらに、その
細胞性免疫は長期に亘って抑制される。また本システイ
ンプロテアーゼをあらかじめ注射し、異種の組織を移植
すると、長期に亘りその組織の生着が可能になり、移植
組織に対して免疫的寛容を誘導することができる。
【００１０】この作用の詳細は必ずしも明らかでない
が、生体に投与した本発明の免疫抑制剤が、免疫細胞の
抗原提示、レセプターおよびサプレサーＴ細胞に関与す
ることによって、生体の抗体産生の抑制と免疫的寛容の
誘導とを行うものと考えられる。
が、生体に投与した本発明の免疫抑制剤が、免疫細胞の
抗原提示、レセプターおよびサプレサーＴ細胞に関与す
ることによって、生体の抗体産生の抑制と免疫的寛容の
誘導とを行うものと考えられる。
【００１１】
【実施例】本発明実施例について以下に説明する。ま
ず、寄生蠕虫からシステインプロテアーゼを抽出・精製
する工程を説明する。本実施例のシステインプロテアー
ゼは、５０mM imidazole-HCl(PH 7.0)でウェステルマン
肺吸虫メタセルカリア（Paragonimus westerman metace
caria)から抽出し、105.000gで６０分遠心し、その上清
をarginine-Sepharose CL-4Bアフィニティークロマトグ
ラフィーにかけ、さらにこれをUltrogel AcA-54 ゲルで
ろ過し、さらにDEAE-toyopearl S(DE-32) カラムクロマ
トグラフィーにかけて精製する。得られる精製された天
然のシステインプロテアーゼのＮ末端の25個のアミノ酸
配列は配列番号５に示すとおりである。
ず、寄生蠕虫からシステインプロテアーゼを抽出・精製
する工程を説明する。本実施例のシステインプロテアー
ゼは、５０mM imidazole-HCl(PH 7.0)でウェステルマン
肺吸虫メタセルカリア（Paragonimus westerman metace
caria)から抽出し、105.000gで６０分遠心し、その上清
をarginine-Sepharose CL-4Bアフィニティークロマトグ
ラフィーにかけ、さらにこれをUltrogel AcA-54 ゲルで
ろ過し、さらにDEAE-toyopearl S(DE-32) カラムクロマ
トグラフィーにかけて精製する。得られる精製された天
然のシステインプロテアーゼのＮ末端の25個のアミノ酸
配列は配列番号５に示すとおりである。
【００１２】次に、本システインプロテアーゼの構造に
ついて説明する。上述の工程によって抽出・精製した本
システインプロテアーゼを、フロインドの完全アジュバ
ントに懸濁した後、これをウサギに注射して免疫を行
い、本システインプロテアーゼに対する抗血清を得た。
メタセルカリアの約２ｘ104 をｍＲＮＡを得るために用
いた。全ＲＮＡ（約100 μｇ）を前記メタセルカリアの
破砕物のフェノール抽出により得、そして、ポリＡ＋Ｒ
ＮＡ( 約２μｇ）を全ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セルロー
スカラムを通過させることにより得た。このようにして
得られたｍＲＮＡがcDNAライブラリーをλgt11ベクター
をもちいて構築するさいに用いた。このcDNAライブラリ
ーを抗血清によりスクリーニングし、300 〜600bp 長の
挿入部を含む25個の陽性クローンを得た。この25のクロ
ーンの内、最も長いｃＤＮＡ配列を持つ二つのクローン
をλＰＷ６及びλＰＷ24と命名した。この二つのクロー
ンをｐＵＣ118 を用いてサブクローンし、この二つのサ
ブクローンをそれぞれｐＰＷ６及びｐＰＷ24と命名し
た。それから二つのクローンの塩基配列がＴ７シークウ
エンシングキット（United States Biochemicals,U.S.
A.)を用いたジデオキシ・ヌクレオチドシークウエンシ
ング法により決定された。
ついて説明する。上述の工程によって抽出・精製した本
システインプロテアーゼを、フロインドの完全アジュバ
ントに懸濁した後、これをウサギに注射して免疫を行
い、本システインプロテアーゼに対する抗血清を得た。
メタセルカリアの約２ｘ104 をｍＲＮＡを得るために用
いた。全ＲＮＡ（約100 μｇ）を前記メタセルカリアの
破砕物のフェノール抽出により得、そして、ポリＡ＋Ｒ
ＮＡ( 約２μｇ）を全ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セルロー
スカラムを通過させることにより得た。このようにして
得られたｍＲＮＡがcDNAライブラリーをλgt11ベクター
をもちいて構築するさいに用いた。このcDNAライブラリ
ーを抗血清によりスクリーニングし、300 〜600bp 長の
挿入部を含む25個の陽性クローンを得た。この25のクロ
ーンの内、最も長いｃＤＮＡ配列を持つ二つのクローン
をλＰＷ６及びλＰＷ24と命名した。この二つのクロー
ンをｐＵＣ118 を用いてサブクローンし、この二つのサ
ブクローンをそれぞれｐＰＷ６及びｐＰＷ24と命名し
た。それから二つのクローンの塩基配列がＴ７シークウ
エンシングキット（United States Biochemicals,U.S.
A.)を用いたジデオキシ・ヌクレオチドシークウエンシ
ング法により決定された。
【００１３】E.coli MV1184 をサブクローンｐＰＷ６で
形質転換した形質転換微生物（Escherichia coli MV118
4/pPW6) を工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し
た。そして、この寄託番号は微工研条寄第３９３７号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−３９３７）である。ｐＰＷ６及びｐ
ＰＷ24の塩基配列及び推定アミノ酸配列は、それぞれ配
列番号３及び配列番号４に示される。さらに、このクロ
ーンの両端に近い部分にプライマーを設定し、inverse
ＰＣＲ法を用いてライブラリーを再スクリーンし、ほぼ
全長鎖にわたる塩基配列を決定した（配列番号２）。こ
のｍＲＮＡは有為の長さを持つオープンリーディングフ
レームを含んでいる。これから推定されるアミノ酸配列
は配列番号１に示されている。また、別のいくつかのｃ
ＤＮＡクローンの塩基配列からこのプロテアーゼは僅か
ずつアミノ酸構造の異なるファミリーをなすことが強く
示唆された。これにより本システインプロテアーゼの成
熟型はアミノ酸２１５個よりなっていることが分かっ
た。
形質転換した形質転換微生物（Escherichia coli MV118
4/pPW6) を工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し
た。そして、この寄託番号は微工研条寄第３９３７号
（ＦＥＲＭ ＢＰ−３９３７）である。ｐＰＷ６及びｐ
ＰＷ24の塩基配列及び推定アミノ酸配列は、それぞれ配
列番号３及び配列番号４に示される。さらに、このクロ
ーンの両端に近い部分にプライマーを設定し、inverse
ＰＣＲ法を用いてライブラリーを再スクリーンし、ほぼ
全長鎖にわたる塩基配列を決定した（配列番号２）。こ
のｍＲＮＡは有為の長さを持つオープンリーディングフ
レームを含んでいる。これから推定されるアミノ酸配列
は配列番号１に示されている。また、別のいくつかのｃ
ＤＮＡクローンの塩基配列からこのプロテアーゼは僅か
ずつアミノ酸構造の異なるファミリーをなすことが強く
示唆された。これにより本システインプロテアーゼの成
熟型はアミノ酸２１５個よりなっていることが分かっ
た。
【００１４】次に、このようにして判明した本システイ
ンプロテアーゼにおけるアミノ酸配列の特徴を説明す
る。本システインプロテアーゼと、これに近似する他種
システインプロテアーゼ（以下「近似システインプロテ
アーゼ」という）との第一構造の比較によると、図１の
枠で囲んだ部分は他の近似システインプロテアーゼと共
通したアミノ酸配列を持ち、Ｎ末端から２２、２５、５
６、６３、９６、１５４および２０２等の残基がシステ
インよりなり、また１６１の残基がヒスチジンよりな
り、いずれもシステインプロテアーゼの一般的特徴を示
している。しかしアンダーラインの部分は他のすべての
近似システインプロテアーゼと異なるアミノ酸配列を示
している。
ンプロテアーゼにおけるアミノ酸配列の特徴を説明す
る。本システインプロテアーゼと、これに近似する他種
システインプロテアーゼ（以下「近似システインプロテ
アーゼ」という）との第一構造の比較によると、図１の
枠で囲んだ部分は他の近似システインプロテアーゼと共
通したアミノ酸配列を持ち、Ｎ末端から２２、２５、５
６、６３、９６、１５４および２０２等の残基がシステ
インよりなり、また１６１の残基がヒスチジンよりな
り、いずれもシステインプロテアーゼの一般的特徴を示
している。しかしアンダーラインの部分は他のすべての
近似システインプロテアーゼと異なるアミノ酸配列を示
している。
【００１５】さらに、別のいくつかのｃＤＮＡクローン
の塩基配列決定の結果から、アミノ酸残基の入れ替えが
ある場合が確認された。本システインプロテアーゼの場
合、Ｎ末端（始端）から１５番目はＡｌａ→Ｐｒｏ、１
８番目はＡｓｎ→Ａｓｐ、２１番目はＳｅｒ→Ｇｌｕ、
５８番目はＡｒｇ→Ｍｅｔ、５９番目はＶａｌ→Ａｌ
ａ、６１番目はＧｌｎ→Ｇｌｕ、６９番目はＡｌａ→Ｓ
ｅｒ、７７番目はＴｙｒ→Ａｓｐというように入れ替え
られる。これらのことから、本システインプロテアーゼ
は、その一次構造が少なくとも９０％程度相同し、僅か
ずつアミノ酸構造を異にする一群のファミリーを成すこ
とが強く示唆された。この所見は線虫類で明らかにされ
ているセリンプロテアーゼ類における多様性とも一致す
るものであって、寄生蠕虫全般に共通する性質であるこ
とが考えられる。
の塩基配列決定の結果から、アミノ酸残基の入れ替えが
ある場合が確認された。本システインプロテアーゼの場
合、Ｎ末端（始端）から１５番目はＡｌａ→Ｐｒｏ、１
８番目はＡｓｎ→Ａｓｐ、２１番目はＳｅｒ→Ｇｌｕ、
５８番目はＡｒｇ→Ｍｅｔ、５９番目はＶａｌ→Ａｌ
ａ、６１番目はＧｌｎ→Ｇｌｕ、６９番目はＡｌａ→Ｓ
ｅｒ、７７番目はＴｙｒ→Ａｓｐというように入れ替え
られる。これらのことから、本システインプロテアーゼ
は、その一次構造が少なくとも９０％程度相同し、僅か
ずつアミノ酸構造を異にする一群のファミリーを成すこ
とが強く示唆された。この所見は線虫類で明らかにされ
ているセリンプロテアーゼ類における多様性とも一致す
るものであって、寄生蠕虫全般に共通する性質であるこ
とが考えられる。
【００１６】また本システインプロテアーゼでは、Ｎ末
端から数えて５６番目のシステインから次のシステイン
までの配列アミノ酸残基の数はパパイン、キモパパイン
およびパパイヤプロティナーゼと同じ６残基であるが、
カテプシンＬおよびカテプシンＨの場合の８残基とは異
なっていた。さらに本システインプロテアーゼでは既知
のパパインの立体構造から推測判断して−Ｓ−Ｓ−結合
は２２−６３、５６−９６番及び154-202に、活性部位
残基は２５番目のシステインおよび１６１番目のヒスチ
ジンにあると考えられる。
端から数えて５６番目のシステインから次のシステイン
までの配列アミノ酸残基の数はパパイン、キモパパイン
およびパパイヤプロティナーゼと同じ６残基であるが、
カテプシンＬおよびカテプシンＨの場合の８残基とは異
なっていた。さらに本システインプロテアーゼでは既知
のパパインの立体構造から推測判断して−Ｓ−Ｓ−結合
は２２−６３、５６−９６番及び154-202に、活性部位
残基は２５番目のシステインおよび１６１番目のヒスチ
ジンにあると考えられる。
【００１７】一方、本システインプロテアーゼを構成し
ているアミノ酸組成は酸性アミノ酸（グルタミン酸およ
びアスパラギン酸、７．０８〜８．３７モル％）より塩
基性アミノ酸（リジンおよびアルギニン、１３．６６〜
１４．２９モル％）が多いパパイン、キモパパインおよ
びパパイヤプロティナーゼと異なり、カテプシンＬおよ
びＨのように塩基性アミノ酸（リジンおよびアルギニ
ン、１０．１７〜１０．２３モル％）より酸性アミノ酸
（グルタミン酸およびアスパラギン酸、１４．８９〜１
４．９６モル％）が多かった（表１）。酸性アミノ酸の
含有率が高いことは、中性もしくは弱酸性の生体内にお
いて有利に作用するための条件であり、本システインプ
ロテアーゼにのみが免疫抑制効果を有し、他のパパイン
などの近似システインプロテアーゼが免疫抑制作用を持
たないのはこのためであると考えられる。
ているアミノ酸組成は酸性アミノ酸（グルタミン酸およ
びアスパラギン酸、７．０８〜８．３７モル％）より塩
基性アミノ酸（リジンおよびアルギニン、１３．６６〜
１４．２９モル％）が多いパパイン、キモパパインおよ
びパパイヤプロティナーゼと異なり、カテプシンＬおよ
びＨのように塩基性アミノ酸（リジンおよびアルギニ
ン、１０．１７〜１０．２３モル％）より酸性アミノ酸
（グルタミン酸およびアスパラギン酸、１４．８９〜１
４．９６モル％）が多かった（表１）。酸性アミノ酸の
含有率が高いことは、中性もしくは弱酸性の生体内にお
いて有利に作用するための条件であり、本システインプ
ロテアーゼにのみが免疫抑制効果を有し、他のパパイン
などの近似システインプロテアーゼが免疫抑制作用を持
たないのはこのためであると考えられる。
【００１８】またロイシンの含有量が多く（８．１０〜
８．１４モル％）、アスパラギンおよびチロシンの含有
量が少ない（３．３６〜３．８６および５．９５〜〜
６．５８モル％）点も、他の近似システインプロテアー
ゼに対する特徴となっている。
８．１４モル％）、アスパラギンおよびチロシンの含有
量が少ない（３．３６〜３．８６および５．９５〜〜
６．５８モル％）点も、他の近似システインプロテアー
ゼに対する特徴となっている。
【００１９】
【表１】
【００２０】次に、本システインプロテアーゼによる細
胞性免疫および液性免疫の抑制に関する実験について説
明する。１２週令のマウスC57BL/6,♀) を１０群に分け
（各群６頭）、対照群を除いて抗原を注射するまで経時
的に当日、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、
６日前、７日前および８日前、本システインプロテアー
ゼ（１００ｎｇ／マウス一頭あたり、これは足蹠反応を
抑えるに必要な濃度）をマウス腹腔に投与し、その後当
日、抗原として１０８羊赤血球（SRBC）を含むリン酸緩
衝液（PBS)０．１ｍｌをそれぞれのマウス腹腔に注射し
て免疫する。さらに、その５日後に５×１０７SRBCを含
むPBS ０．０５ｍｌをその足蹠に注射して、その足蹠の
腫れ（厚さ）を測定した（表２に示す実験計画１）。
胞性免疫および液性免疫の抑制に関する実験について説
明する。１２週令のマウスC57BL/6,♀) を１０群に分け
（各群６頭）、対照群を除いて抗原を注射するまで経時
的に当日、１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、
６日前、７日前および８日前、本システインプロテアー
ゼ（１００ｎｇ／マウス一頭あたり、これは足蹠反応を
抑えるに必要な濃度）をマウス腹腔に投与し、その後当
日、抗原として１０８羊赤血球（SRBC）を含むリン酸緩
衝液（PBS)０．１ｍｌをそれぞれのマウス腹腔に注射し
て免疫する。さらに、その５日後に５×１０７SRBCを含
むPBS ０．０５ｍｌをその足蹠に注射して、その足蹠の
腫れ（厚さ）を測定した（表２に示す実験計画１）。
【００２１】
【表２】
【００２２】その結果、抗原注射１日前に本システイン
プロテアーゼを投与した群では、対照群のそれに比較し
てその足蹠反応（腫れ）が有意に抑えられ（Ｐ＜０．０
１）本プロテアーゼ投与がＳＲＢＣに対する細胞性免疫
である遅延型過敏症反応を抑制していることを示した
（図２）。さらに、これらの各群のマウスにおけるＳＲ
ＢＣに対する血清中の抗体価（ＨＡ）を測定した。その
結果、抗原注射４−５日前にプロテアーゼを投与した群
では対照群のそれに比較して抗体産生が有意に抑制され
たことを示した（表３）。
プロテアーゼを投与した群では、対照群のそれに比較し
てその足蹠反応（腫れ）が有意に抑えられ（Ｐ＜０．０
１）本プロテアーゼ投与がＳＲＢＣに対する細胞性免疫
である遅延型過敏症反応を抑制していることを示した
（図２）。さらに、これらの各群のマウスにおけるＳＲ
ＢＣに対する血清中の抗体価（ＨＡ）を測定した。その
結果、抗原注射４−５日前にプロテアーゼを投与した群
では対照群のそれに比較して抗体産生が有意に抑制され
たことを示した（表３）。
【００２３】
【表３】
【００２４】次に、本システインプロテアーゼによる免
疫的寛容の誘導に関する実験について説明する。１２週
令のマウス（Ｂ５７ＢＬ／６，♂♀）腹腔に本プロテア
ーゼ（１００ｎｇマウス一頭当たり）を投与し、その１
日後にＳＲＢＣまたはウエステルマン肺吸虫成虫抗原を
注射した群では（表４に示す実験計画２）そのＳＲＢＣ
またはウェステルマン肺吸虫成虫抗原に対する足蹠反応
の抑制は、最初の免疫から１年後においても認められた
（図３，４）。しかし、これらの群ではその１年の期間
中最初に注射した抗原に対してのみ特異的に免疫抑制が
みられ、それ以外の抗原に対しては足蹠反応の抑制は認
められなかった（図３，４）。
疫的寛容の誘導に関する実験について説明する。１２週
令のマウス（Ｂ５７ＢＬ／６，♂♀）腹腔に本プロテア
ーゼ（１００ｎｇマウス一頭当たり）を投与し、その１
日後にＳＲＢＣまたはウエステルマン肺吸虫成虫抗原を
注射した群では（表４に示す実験計画２）そのＳＲＢＣ
またはウェステルマン肺吸虫成虫抗原に対する足蹠反応
の抑制は、最初の免疫から１年後においても認められた
（図３，４）。しかし、これらの群ではその１年の期間
中最初に注射した抗原に対してのみ特異的に免疫抑制が
みられ、それ以外の抗原に対しては足蹠反応の抑制は認
められなかった（図３，４）。
【００２５】
【表４】
【００２６】一方、表５に示す実験計画３のように、移
植１日および４日前に本システインプロテアーゼ（合計
１．５μｇ）を投与した１０週令のマウス（Ｃ３Ｈ／Ｈ
ｅ，♀）に８週令の他種マウス（ＡＫＲ，♀）の皮フを
移植した場合、その対照群のそれ（平均生存時間（ＭＳ
Ｔ）、１８±０．５日）に比較して、有意（Ｐ＜０．０
５−０．０１）に長期間（平均生存時間、１００±３６
日）に亘って皮膚を生着させることができた（表６）。
植１日および４日前に本システインプロテアーゼ（合計
１．５μｇ）を投与した１０週令のマウス（Ｃ３Ｈ／Ｈ
ｅ，♀）に８週令の他種マウス（ＡＫＲ，♀）の皮フを
移植した場合、その対照群のそれ（平均生存時間（ＭＳ
Ｔ）、１８±０．５日）に比較して、有意（Ｐ＜０．０
５−０．０１）に長期間（平均生存時間、１００±３６
日）に亘って皮膚を生着させることができた（表６）。
【００２７】
【表５】
【００２８】
【表６】
【００２９】これらの結果から、本システインプロテア
ーゼのマウス腹腔投与はその直後に注射または移植され
た抗原や組織に対する免疫的寛容を誘導することを示し
た。次に、他種プロテアーゼによる免疫抑制効果につい
て検討する。各種プロテアーゼ（Plasmin, Trypsin, Ca
thepsin B1, PapainおよびCollagenase,１００ｎｇ／マ
ウス１頭当り）の１２週令のマウス（C57BL/6,♀）腹腔
投与では、ほとんどのプロテアーゼで、ＳＲＢＣに対す
る免疫抑制効果は示さなかった（図５）。しかしCollag
enase 投与群において、やや足蹠反応が抑制されたが、
１年後では、やはり免疫抑制効果はみられなかった。
ーゼのマウス腹腔投与はその直後に注射または移植され
た抗原や組織に対する免疫的寛容を誘導することを示し
た。次に、他種プロテアーゼによる免疫抑制効果につい
て検討する。各種プロテアーゼ（Plasmin, Trypsin, Ca
thepsin B1, PapainおよびCollagenase,１００ｎｇ／マ
ウス１頭当り）の１２週令のマウス（C57BL/6,♀）腹腔
投与では、ほとんどのプロテアーゼで、ＳＲＢＣに対す
る免疫抑制効果は示さなかった（図５）。しかしCollag
enase 投与群において、やや足蹠反応が抑制されたが、
１年後では、やはり免疫抑制効果はみられなかった。
【００３０】以上の実験から、本システインプロテアー
ゼの投与が抗原および移植組織に対する抗体産生を抑制
し、生体の免疫的寛容を誘導することが確認された。こ
のような本プロテアーゼの免疫抑制作用を治療的目的で
利用する医薬は、本実施例のような注射溶液のほか、吸
入剤、軟膏、凍結乾燥体等の各種の形態を採用すること
が可能であり、またその投与量は投与形態および治療目
的により異なる。
ゼの投与が抗原および移植組織に対する抗体産生を抑制
し、生体の免疫的寛容を誘導することが確認された。こ
のような本プロテアーゼの免疫抑制作用を治療的目的で
利用する医薬は、本実施例のような注射溶液のほか、吸
入剤、軟膏、凍結乾燥体等の各種の形態を採用すること
が可能であり、またその投与量は投与形態および治療目
的により異なる。
【００３１】なお、本実施例においては、本システイン
プロテアーゼは寄生蠕虫より直接抽出したものを用いた
が、寄生蠕虫１匹あたり抽出できる本システインプロテ
アーゼは非常に少量であり、その寄生蠕虫からの単離お
よび精製には長時間と多くの費用を必要とするため、本
発明の商業的規模の実施には動物の培養細胞および組織
由来の遺伝子組換え体から遺伝子工学的手段（組換ＤＮ
Ａ技法）で大量調製することが好ましい。
プロテアーゼは寄生蠕虫より直接抽出したものを用いた
が、寄生蠕虫１匹あたり抽出できる本システインプロテ
アーゼは非常に少量であり、その寄生蠕虫からの単離お
よび精製には長時間と多くの費用を必要とするため、本
発明の商業的規模の実施には動物の培養細胞および組織
由来の遺伝子組換え体から遺伝子工学的手段（組換ＤＮ
Ａ技法）で大量調製することが好ましい。
【００３２】
【発明の効果】本発明の免疫抑制剤は、以上のとおり構
成したので、従来の免疫抑制剤の欠点である長期間の投
与によらず、数回の投与によって抗原および移植組織に
対する抗体産生を抑制し、またそれらに対する免疫的寛
容を誘導することができる。したがって、従来の免疫抑
制剤の欠点である長期的投与の必要性はなく、副作用の
虞を解消できるという優れた効果を奏するものである。
成したので、従来の免疫抑制剤の欠点である長期間の投
与によらず、数回の投与によって抗原および移植組織に
対する抗体産生を抑制し、またそれらに対する免疫的寛
容を誘導することができる。したがって、従来の免疫抑
制剤の欠点である長期的投与の必要性はなく、副作用の
虞を解消できるという優れた効果を奏するものである。
【００３３】
【配列表】１．配列番号１ （１）配列の長さ：２１５ （２）配列の型：アミノ酸 （３）トポロジー：直鎖状 （４）配列の種類：ペプチド （５）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎ
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （６）配列の特徴 （ｉ）存在位置：５ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｉｌｅ又はＭｅｔ （ｉｉ） 存在位置：１５ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｌａ又はＰｒｏ （ｉｉｉ） 存在位置：２１ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｓｅｒ又はＧｌｕ （ｉｖ） 存在位置：５８ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｒｇ又はＭｅｔ （ｖ） 存在位置：５９ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｖａｌ又はＡｌａ （ｖｉ） 存在位置：６１ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｇｌｎ又はＧｌｕ （ｖｉｉ） 存在位置：６９ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｌａ又はＳｅｒ （ｖｉｉｉ） 存在位置：７７ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｔｙｒ又はＡｓｐ （７）配列 ２．配列番号２ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （５）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ
ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （６）配列の特徴 （ｉ） 存在位置：１５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｉｉ） 存在位置：４３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＣ （ｉｉｉ） 存在位置：４８ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｉｖ） 存在位置：６１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｖ） 存在位置：６２ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＡ （ｖｉ） 存在位置：６６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｖｉｉ） 存在位置：１２３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ａ又はＧ （ｖｉｉｉ） 存在位置：１７３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＴ （ｉｘ） 存在位置：１７６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘ） 存在位置：１８１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＧ （ｘｉ） 存在位置：２０５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＴ （ｘｉｉ） 存在位置：２１３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＡ （ｘｉｉｉ） 存在位置：２２９ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｘｉｖ） 存在位置：２３７ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｘｖ） 存在位置：３０６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＡ （ｘｖｉ） 存在位置：３６６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｘｖｉｉ） 存在位置：３７０ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘｖｉｉｉ） 存在位置：３７５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ａ又はＴ （ｘｉｘ） 存在位置：４７１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘｘ） 存在位置：４８９ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （７）配列 ３．配列番号３ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ
ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列 ４．配列番号４ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎ
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列 ２１５ ５．配列番号５ （１）配列の長さ：２５ （２）配列の型：アミノ酸 （３）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ペプチド （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎ
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列の特徴 第２２番目及び第２５番目の残基のＸａａはシステイン
と思われるが、ＰＴＨアナライザーシステムでは検知さ
れなかった。 （８）配列
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （６）配列の特徴 （ｉ）存在位置：５ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｉｌｅ又はＭｅｔ （ｉｉ） 存在位置：１５ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｌａ又はＰｒｏ （ｉｉｉ） 存在位置：２１ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｓｅｒ又はＧｌｕ （ｉｖ） 存在位置：５８ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｒｇ又はＭｅｔ （ｖ） 存在位置：５９ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｖａｌ又はＡｌａ （ｖｉ） 存在位置：６１ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｇｌｎ又はＧｌｕ （ｖｉｉ） 存在位置：６９ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ａｌａ又はＳｅｒ （ｖｉｉｉ） 存在位置：７７ 特徴を表わす記号：Ｘａａ＝Ｔｙｒ又はＡｓｐ （７）配列 ２．配列番号２ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （５）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ
ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （６）配列の特徴 （ｉ） 存在位置：１５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｉｉ） 存在位置：４３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＣ （ｉｉｉ） 存在位置：４８ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｉｖ） 存在位置：６１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｖ） 存在位置：６２ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＡ （ｖｉ） 存在位置：６６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｖｉｉ） 存在位置：１２３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ａ又はＧ （ｖｉｉｉ） 存在位置：１７３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＴ （ｉｘ） 存在位置：１７６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘ） 存在位置：１８１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＧ （ｘｉ） 存在位置：２０５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＴ （ｘｉｉ） 存在位置：２１３ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＡ （ｘｉｉｉ） 存在位置：２２９ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （ｘｉｖ） 存在位置：２３７ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｘｖ） 存在位置：３０６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｇ又はＡ （ｘｖｉ） 存在位置：３６６ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｃ又はＴ （ｘｖｉｉ） 存在位置：３７０ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘｖｉｉｉ） 存在位置：３７５ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ａ又はＴ （ｘｉｘ） 存在位置：４７１ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＣ （ｘｘ） 存在位置：４８９ 特徴を表わす記号：Ｎ＝Ｔ又はＧ （７）配列 ３．配列番号３ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ
ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列 ４．配列番号４ （１）配列の長さ：６４８ （２）配列の型：核酸 （３）鎖の数：一本鎖 （４）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ｃＤＮＡ （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎ
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列 ２１５ ５．配列番号５ （１）配列の長さ：２５ （２）配列の型：アミノ酸 （３）トポロジー：直鎖状 （５）配列の種類：ペプチド （６）起源 生物名：Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎ
ｉ ｍｅｔａｃｅｃａｒｉａ （７）配列の特徴 第２２番目及び第２５番目の残基のＸａａはシステイン
と思われるが、ＰＴＨアナライザーシステムでは検知さ
れなかった。 （８）配列
【図１】本システインプロテアーゼと他の近似システイ
ンプロテアーゼにおける第１構造の比較を示す図であ
る。
ンプロテアーゼにおける第１構造の比較を示す図であ
る。
【図２】本システインプロテアーゼ注射後の種々の時間
に羊赤血球を注射した雌マウスにおける足蹠反応（足蹠
の腫れ）を示すグラフである。
に羊赤血球を注射した雌マウスにおける足蹠反応（足蹠
の腫れ）を示すグラフである。
【図３】本システインプロテアーゼ注射１日後に羊赤血
球（ａ）で免疫した雌マウスにおけるウェステルマン/
肺吸虫抗原（ｂ，６カ月後）及び羊赤血球（ｃ，一年
後）に対する足蹠反応を示すグラフである。
球（ａ）で免疫した雌マウスにおけるウェステルマン/
肺吸虫抗原（ｂ，６カ月後）及び羊赤血球（ｃ，一年
後）に対する足蹠反応を示すグラフである。
【図４】本システインプロテアーゼ注射１日後にウェス
テルマン肺吸虫抗原（ａ）で免疫した雄マウスにおける
羊赤血球（ｂ，６カ月後）ウェステルマン肺吸虫抗原
（ｃ，一年後）に対する足蹠反応を示すグラフである。
テルマン肺吸虫抗原（ａ）で免疫した雄マウスにおける
羊赤血球（ｂ，６カ月後）ウェステルマン肺吸虫抗原
（ｃ，一年後）に対する足蹠反応を示すグラフである。
【図５】各種プロテアーゼの注射１日後において羊赤血
球で免疫した雌マウスにおける羊赤血球に対する足蹠反
応を示すグラフである。
球で免疫した雌マウスにおける羊赤血球に対する足蹠反
応を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鶴 純明 東京都練馬区田柄３丁目９番７−303 (72)発明者 山上 和夫 東京都世田谷区深沢１丁目39番地11号
Claims (8)
- 【請求項１】 配列番号１で表されるアミノ酸配列、又
は該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは挿入されたものを含み、抗原特異的
免疫抑制活性を有するシステインプロテアーゼ。 - 【請求項２】 配列番号１で表されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％ホモロジーを有し、抗原特異的免疫抑制
活性を有するシステインプロテアーゼ。 - 【請求項３】 配列番号１で表されるアミノ酸配列、又
は該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは挿入されたものを含み、免疫的寛容
を誘導する活性を有するシステインプロテアーゼ。 - 【請求項４】 配列番号１で表されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％ホモロジーを有し、免疫的寛容を誘導す
る活性を有するシステインプロテアーゼ。 - 【請求項５】 配列番号１で表されるアミノ酸配列、又
は該アミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは挿入されたものを含み、抗原特異的
免疫抑制活性を有するポリペプチドをコードするシステ
インプロテアーゼ遺伝子。 - 【請求項６】 配列番号１で表されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％ホモロジーを有するポリペプチドをコー
ドするシステインプロテアーゼ遺伝子。 - 【請求項７】 配列番号２で表される塩基配列を有する
システインプロテアーゼ遺伝子。 - 【請求項８】 請求項１〜４のいずれか１項に記載のシ
ステインプロテアーゼを有効成分として含有する免疫抑
制剤。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20854691 | 1991-07-25 | ||
| JP3-208546 | 1991-07-25 | ||
| JP4-57189 | 1992-02-12 | ||
| JP5718992 | 1992-02-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05304956A JPH05304956A (ja) | 1993-11-19 |
| JP2700088B2 true JP2700088B2 (ja) | 1998-01-19 |
Family
ID=26398209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4197310A Expired - Lifetime JP2700088B2 (ja) | 1991-07-25 | 1992-07-23 | 免疫抑制剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5776758A (ja) |
| EP (1) | EP0524834A2 (ja) |
| JP (1) | JP2700088B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5795768A (en) * | 1991-02-12 | 1998-08-18 | Heska Corporation | Filariid nematode cysteine protease proteins, nucleic acid molecules and uses thereof |
| US6419923B1 (en) | 1991-02-12 | 2002-07-16 | Heska Corporation | Filariid nematode cysteine protease proteins, and uses thereof |
| GB9302302D0 (en) * | 1993-02-05 | 1993-03-24 | Pitman Moore Inc | Process |
| EP0647138A4 (en) * | 1993-02-05 | 1996-03-06 | Daratech Pty Ltd | POLYPEPTIDES AVAILABLE FROM FASCIOLA SPECIES, AND VACCINE, THERAPY PROCEDURES AND DNA SEQUENCES ENCODING THESE PEPTIDES. |
| US6265198B1 (en) | 1994-05-26 | 2001-07-24 | Heska Corporation | Parasite astacin metalloendopeptidase proteins |
| US6281345B1 (en) | 1994-05-26 | 2001-08-28 | Heska Corporation | Parasite astacin metalloendopeptidase nucleic acid molecules and uses thereof |
| EP0766693A4 (en) * | 1994-05-26 | 2002-10-30 | Heska Corp | NOVEL GENES AND PROTEINS OF PEST PROTEASES |
| JPH09121858A (ja) * | 1995-11-06 | 1997-05-13 | Fusanori Hamashima | 免疫的寛容誘導剤 |
| KR980008240A (ko) * | 1996-07-27 | 1998-04-30 | 최윤 | 치료용 생체 벡터 |
| DE19726254C2 (de) * | 1997-06-20 | 1999-10-21 | Mucos Pharma Gmbh & Co | Toleranzinduktion durch Proteasen |
| PT1749534E (pt) * | 1997-12-31 | 2013-09-13 | Univ Iowa Res Found | Utilização de agentes biológicos parasitas para a prevenção e o controlo de doenças auto-imunes |
| WO2002094228A1 (en) * | 2001-05-23 | 2002-11-28 | David Follansbee | Prevention and treatment of allergies by helminthic regulation of ige |
| CN102864134A (zh) * | 2012-06-28 | 2013-01-09 | 江苏天福莱集团有限公司 | 鱿鱼内脏酶的提取工艺 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1181005A (en) * | 1981-02-10 | 1985-01-15 | Haruo Ohnishi | Therapeutic agent for treatment of allergic diseases, immune complex diseases and tumors |
| JPS6238329B1 (ja) * | 1982-02-09 | 1987-08-17 | Mochida Pharm Co Ltd | |
| ATE92331T1 (de) * | 1989-10-06 | 1993-08-15 | Mucos Emulsions Gmbh | Verwendung katabolischer enzyme zur bekaempfung einer hiv-erst-infektion. |
-
1992
- 1992-07-23 JP JP4197310A patent/JP2700088B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 EP EP92306803A patent/EP0524834A2/en not_active Ceased
-
1995
- 1995-05-26 US US08/451,409 patent/US5776758A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BIOCHEM SOC TRANSACT 19-1=1991 * |
| MOLECUIAR AND BIOCHEMICAL PARASITOLOGY 39-1=1990 * |
| PROC SOC EXP BIOL MED 145-4=1974 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05304956A (ja) | 1993-11-19 |
| US5776758A (en) | 1998-07-07 |
| EP0524834A3 (ja) | 1994-03-16 |
| EP0524834A2 (en) | 1993-01-27 |
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