JP2603434B2

JP2603434B2 - 液体クロマトグラフィーの被検成分採取方法及び液体クロマトグラフィー用の被検成分採取装置

Info

Publication number: JP2603434B2
Application number: JP5320236A
Authority: JP
Inventors: 精二郎穴原
Original assignee: 精二郎穴原
Priority date: 1993-12-20
Filing date: 1993-12-20
Publication date: 1997-04-23
Anticipated expiration: 2012-04-23
Also published as: JPH07174750A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は液体クロマトグラフィ
ー(Liquid chromatography，以下、単にＬＣと略記す
る。）の被検成分採取方法及びＬＣ装置における被検成
分採取装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】一般に、ＬＣは成分分離用のカラムにサ
ンプルを供給し、溶離液（溶出液）を流し続けることに
よりサンプル中の各成分を分離する手法である。通常、
カラム出口側には分離した各成分を光学的に検知する検
出器が配置され、検出器には記録計が接続され、検出器
で検知した各成分を光電管等にて電気的に測定し電気的
指示を記録計に伝え、記録計の記録紙にグラフとして連
続的に記録される。そして、このＬＣにて分離した成分
を他の試験等のために採取する場合は、検出器を経た溶
離液をフラクションコレクターに導いて分画し該コレク
ターの試験管に被検成分の液を得るようにしている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ここに、少ないサンプ
ルから、微量成分を検出する場合には、特に細管カラム
を用いる液体クロマトグラフィー（CapiLlary column L
iquid chromatography,以下、単にＣＣＬＣと略記す
る。）が用いられる。しかし、ＣＣＬＣにて扱うサンプ
ル量を極少量とした場合はフラクションコレクターの１
分画で得る液量が、たとえば１〜１０μｌの微量とな
り、これを試験管に確実に分取することは不可能に近い
困難な問題である。また、クロマトグラム上の１ピーク
に対応する液量も極少量となるため、試験管内に液滴と
して滴下させて採取していたのでは、カラムクロマトグ
ラフィーにより濃縮された被検成分も希釈されてしまう
ことになる。そこで、本発明者はこの問題点を解決し得
る方法として先に細管カラム液体クロマトグラフィーの
被検成分採取方法（特開平５−２６４３５２号公報）を
発明した。この発明にあっては、カラムから溶出した被
検成分を含む溶離液を記録計上のクロマトグラムに配置
した吸着紙に順次吸着させることを特徴とする。すなわ
ち、溶離液をクロマトグラフィーの流路の末端から滴下
することなく吸着紙に連続的に採取し、この吸着紙の必
要部分を切り取って確保することにより、被検成分の溶
離の状況に忠実に微量の被検成分を分取することができ
るものである。

【０００４】しかし、この方法にあっては、溶離液を吸
着紙に吸収させて採取するため、その後の処理に際して
吸着紙から被検成分を抽出する必要がある。したがっ
て、抽出操作の手間、並びに抽出効率の問題や、さらに
吸着紙から被検成分を効率よく吸着させるための技術等
が必要とされていた。このように、この方法は、その後
の処理にかならずしも都合のよいものではなかった。ま
た、被検成分の溶出が近接している場合には、吸着紙上
の切断箇所の選択が困難である場合もあった。

【０００５】そこで、本発明は上記した問題点を解決す
るためになされたものであって、本発明が解決しようと
する課題は、１本の分取用チューブに被検成分の溶離パ
ターンに正確に対応して確実に被検成分を含む溶離液部
分を採取分離でき、しかも、採取した被検成分の取り扱
いに都合がよい被検成分採取方法及び装置を提供するこ
とである。

【０００６】本発明者は、上記した技術的課題を解決す
るべく、以下の発明を創作した。すなわち、本発明者
は、液体クロマトグラフィーによって分離された被検成
分を採取する方法であって、分離用担体を充填したカラ
ムに１以上の被検成分を供給して、溶離液を流し続け、
被検成分が分離された溶離液を得る工程と、前記溶離液
のうち被検成分を含む溶離液部分を、溶離液の流路の端
末に接続された分取用チューブ内に流入させる工程と、
前記分取用チューブ内の前記溶離液部分の後部に気体を
注入する工程、とを備え、分離された各被検成分を含む
複数の溶離液部分を、順次前記分取用チューブ内に採取
し、各溶離液部分間に気体を介在させることにより、前
記分取用チューブ内に複数の溶離液部分を相互に分離し
た状態で保持することを特徴とする液体クロマトグラフ
ィーの被検成分採取方法を創作した。また、試料注入部
と、カラム部と、検出部と及びこれらを接続する配管部
とからなる液体クロマトグラフィーよって分離された被
検成分を採取する装置であって、カラムからの溶離液の
流路の端末に接続され、分離された被検成分を含む溶離
液部分を分取するための分取用チューブと、この分取用
チューブに気体を注入するための気体注入手段と、カラ
ムからの流路を経て送られる溶離液又は気体注入手段か
ら気体流路を経て送られる気体のいずれか一方を、前記
分取用チューブに取り入れ、他方をドレイン側に放出す
るように切換え作動されるバルブ、とを備え、分離され
た各被検成分を含む複数の溶離液部分を、順次前記分取
用チューブ内に採取し、各溶離液部分間に気体を介在さ
せることにより、前記分取用チューブ内に複数の溶離液
部分を相互に分離した状態で保持することを特徴とする
液体クロマトグラフィーにおける被検成分採取装置を創
作した。

【０００７】前記カラムは、通常ＬＣに用いるカラムで
あれば使用することができるが、特に、たとえば内径１
８０μｍ〜３２０μｍ程度の細管を使用するのが好まし
い。分離用担体は、サンプル中の成分を結合（吸着）
し、溶離液により適度に溶離する性質の微細粒子であ
り、たとえば化学的に特定物質と結合力を持つ反応基を
粒子表面に導入したシリカゲルの微粒子などが用いられ
る。前記溶離液はカラムの分離用担体に吸着したサンプ
ル中の成分を溶離させる作用をなす。溶離液は、ＬＣに
通常用いられるものを適宜選択して使用することができ
る。たとえば水とアセトニトリルなど、二液の混合液よ
りなるものでもよく、二液の比率は適宜調整され、ある
いは分析時間の経過に応じて調整される。

【０００８】前記被検成分を含む溶離液部分とは、具体
的には、クロマトグラム上でピークとして溶出する溶離
液部分をいう。

【０００９】前記分取用チューブは、両端が開放された
細長い筒状で、バルブに設けられた分取側ポートから溶
離液を導入する分取用配管等を介して接続されている。
分取用チューブとしては、被検成分を含んだ溶離液部分
を分取用チューブ内部に保持できる材質及び形状を有す
るものを用いるが、湾曲あるいは屈曲するものであって
もよい。かかる分取用チューブの一例として、テフロン
製の内径２５０μｍの細管を用いることができる。この
テフロン製の細管の内表面は、ぬれにくい性質を有して
おり、表面張力で細管内部に溶離液を保持しやすい。し
たがって、この分取用チューブ内に保持された溶離液
は、分取用チューブを曲げたり、振ったりしても保持さ
れた状態が維持される。また、テフロン製の細管である
分取用チューブは、その弾性によりピーク用の配管を外
嵌することによりピーク用配管に接続することができ、
接続器具によるデッドボリュームを排除して、採取液の
拡散を防止するのに効果的であるとともに、脱着が容易
で取扱いに便利である。さらに、分取用チューブが透明
あるいは半透明である場合には、分取用チューブに採取
した溶離液部分の位置を溶離に判別することができて便
利である。

【００１０】なお、ＬＣ装置には、ピークセンサを含め
ることができる。ピークセンサは、検出器からの電気信
号を受信して、任意に設定した電気信号の増大あるいは
電気信号の変化量等によりカラムからの被検成分の溶出
を検出する。すなわち、記録計やモニタ等によって描か
れるクロマトグラムにおける被検成分のピークを検出す
る。さらに、被検成分の検出が開始に伴うピーク検出開
始信号及び被検成分の検出の終了に伴うピーク検出終了
信号をバルブや記録計に送信することができる。なお、
ピークの検出を記録するために記録計やモニタを用いる
ことができる。

【００１１】前記バルブは、カラムから溶出された溶離
液あるいはエア注入手段からのエアを分取用チューブ側
に取り入れ、あるいはドレイン側に排出するように切換
え作動可能に形成され、ピークセンサからのピーク検出
開始若しくは終了信号により機械的あるいは電気的操作
により又は手動により操作される。例えば、４ポート切
換えバルブを用いる。この被検成分を含む溶離液を検出
した場合には、バルブの作動により検出器通過後の溶離
液部分を分取用チューブに導入し、エアをドレイン側に
排出する。一方、この溶離液部分の溶出が終了後には、
バルブの作動により溶離液をドレイン側に排出し、エア
を分取用チューブに導入する。

【００１２】

【作用】被検成分を含む溶離液部分が溶離液の流路の端
末から、そのまま分取用チューブに流入されるため、こ
の溶離液部分が微量であっても、確実にかつ採取され
る。また、気体の注入により、その後の溶離液部分と正
確に分離される。そして、１本の分取用チューブに、被
検成分を含む複数の溶離液部分が順次、流入されるとと
もに気体が注入されるため、被検成分の溶離パターンに
正確に対応して、複数の溶離液部分が相互に分離されて
採取される。分取用チューブに採取された各溶離液部分
では、クロマトグラフィーにより被検成分が濃縮された
状態にある。

【００１３】

【実施例】次に、本発明の実施例を図１ないし図３に基
づいて説明する。本実施例では、複数のタンパク質を含
むサンプルをＣＣＬＣにより分離して採取する場合につ
いて説明する。図１は、本実施例で使用するＣＣＬＣ及
びＣＣＬＣにおいて分離したサンプルの被検成分を分離
採取する装置全体の構成の概略図を示している。図１に
示すように、ＣＣＬＣ装置は、溶離液を送液するポンプ
２Ａ，２Ｂ、サンプルの被検成分を分離するカラム６、
分離したサンプル中の成分を検出する検出器８、記録計
２０を主体としてなる。

【００１４】ＣＣＬＣ装置においては、液槽３Ａ，３
Ｂ、ポンプ２Ａ，２Ｂ、ミキサー４、インジェクタバル
ブ５、カラム６及び検出器８はキャピラリーチューブＴ
にて適宜に接続され、溶離液が順次流れるようにされて
いる。

【００１５】本例で用いるカラム６は、内径３２０μ
ｍ、長さ１５ｃｍのチューブにシリカゲルを主成分とし
た微粒状の分離用担体を充填したものである。本例の検
出器８としては、分光光度計（米国、スペクトラフィジ
ックス社製、ＳＣ−１００（フローセルＵＺ−ＬＩタイ
プ）を使用する。検出器８は、光源１０、セル１４、フ
ィルター１２及び受光部１６とから形成されており、セ
ル１４内を通過する溶離液に光源１０からの光がフィル
ター１２を通過して照射される。

【００１６】記録計２０は、受光部１６からの信号を受
信して、記録紙上等にクロマトグラムＣを記録するもの
である。また、この記録計２０は、後述するピークセン
サ１８からのピーク検出開始信号及びピーク検出終了信
号を受信して、図３に示すようにクロマトグラム上にピ
ークＰとともにピーク検出開始信号及びピーク検出終了
信号に対応するイベントマークＥ１，Ｅ２を記録するこ
とができるようになっている。

【００１７】このＣＣＬＣ装置に付加される採取装置
は、図１に示すように、ピークセンサ１８、溶離液切換
えバルブ２２、分取用チューブ２６及びエア注入手段３
０を主体としてなる。ピークセンサ１８は、検出器８の
受光部１６により測定した吸光度を電気信号として受信
し、所定の吸収波長による吸光度の増加等から光を吸収
する成分の溶出を検出して、その検出信号をバルブ２
２、記録計２０及びエア注入手段３０に送信するように
なっている。

【００１８】バルブ２２は、図２に示すように、４個の
ポートＡ〜Ｄを有して切換え可能に形成されている。ポ
ートＡは、フェラルＦを介して検出器８からの溶離液の
流路に接続され、ポートＢは、同様にフェラルＦを介し
て装置の系外へ溶離液あるいはエアを排出するドレイン
流路Ｄに接続され、ポートＣは、同様にエア注入手段３
０に接続され、ポートＤは、分取用チューブ２６に接続
されている。そして、このバブル２２は、ピークセンサ
１８からの電気信号に応じた電磁スイッチの作動によ
り、ポートＡからの溶離液をポートＢのドレイン流路Ｄ
あるいはポートＤの分取用チューブ２６へ流路を切換え
することができ、またポートＣからのエアをドレイン流
路Ｄあるいは分取用チューブ２６へ切換えすることがで
きるようになっている。すなわち、ピークを検出してい
ない状態にあっては、溶離液は、ドレイン流路Ｄへ、エ
アは分取用チューブ２６へ導入され、ピーク検出状態に
あっては、溶離液は、分取用チューブ２６へ、エアはド
レイン流路Ｄへ導入されるようになっている。なお、本
実施例においては、ピークセンサ１８からの電気信号の
受信により自動的にバルブ２２が作動するようにした
が、これに限らず、手動によって切換えするものであっ
てもよい。

【００１９】分取用チューブ２６は、テフロン製で内径
２５０μｍのものを用いる。この分取用チューブ２６
は、ピーク分取用の配管である内径５０μｍで外径２８
０μｍのシリカ製チューブ２７及びこのシリカ製チュー
ブ２７をを外嵌してフェラルＦ内に挿入される細管２８
を介してバルブ２２のポートＤに接続されている。

【００２０】図１に示すように、エア注入手段３０は、
本実施例においてはガスタイトシリンジ３１のロッド３
２がスクリュウ３３によりシリンジ内に押し込み可能に
形成されて、ニードルＮの先端側がバルブ２２のポート
Ｃに接続されている。エア注入手段３０は、ピークセン
サ１８からの電気信号を受信し、ピークを検出していな
い状態にあっては、一定量のエアをポートＣを介して作
動するバルブ２２内の流路Ｖ１を介して一定量のエアを
分取用チューブ２６へ導入可能となっている。また、ピ
ークセンサ１８によるピークの検出終了信号とピーク検
出開始信号との間隔が非常に短い場合には、その間のピ
ーク非検出状態において１μＬのエアを強制的に排出
し、分取用チューブ２６に導入可能となっている。

【００２１】次に、このようなＣＣＬＣ装置及びＣＣＬ
Ｃ用の被検成分採取装置の使用例について説明する。サ
ンプルを装置の系内に注入前には、溶離液が流されて、
装置系内を溶離液で十分に置換する。本実施例の溶離液
は蒸留水ＨとアセトニトリルＲとの混合液よりなり、サ
ンプルの注入後、分析時間の経過に伴ってアセトニトリ
ルＲの比率を順次増大するように変化させ、たとえば１
〜１０μｌ／分の一定の流速で流される。また、サンプ
ルの注入に先立って、検出器８等にも通電して安定化さ
せておく。

【００２２】シリンジに採取したサンプルの一定量を、
インジェクターバルブ５に注入し、溶離液によりカラム
６側に導入する。サンプルは溶離液とともにカラム６に
至り、分離用担体との吸脱着により各成分に分離されて
カラム６から溶出される。したがって、サンプル注入時
から所定時間経過後の溶離液には、分離された被検成分
がそれぞれ含まれている。カラム６から溶出した溶離液
は、検出器８のフローセル１４に入り、フィルタ１２を
経た所定波長の光により透過される。受光部１６は、フ
ローセル１４の透過光を検出し吸光度として測定する。
さらにこの測定値は電気信号に変換されて、記録計２０
及びピークセンサ２８に送信される。記録計２０にあっ
ては、受信した吸光度を所定のスケールで記録紙上にク
ロマトグラムＣとして順次記録する。なお、図３の
（Ａ）には、クロマトグラムＣを示し、図３の（Ｂ）
は、ピークセンサ１８におけるピーク検出状態を示し、
図３の（Ｃ）は、分取用チューブ２６内での各溶離液部
分Ｍ１〜Ｍ５を示している。図３においては、クロマト
グラムＣ、ピーク検出状態及び分取用チューブ２６内の
各溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５が対応させて示されている。

【００２３】ピークセンサ１８では、分析・分取条件に
応じて設定されたピーク検出感度を越えれば、電気信号
の変化等をピークＰとして検出し、ピーク検出感度を越
えない場合には、ピークＰとして検出しないようになっ
ている。したがって、サンプル注入後、タンパク質成分
が溶出しない間は、ピーク非検出状態であり、バルブ２
２は流路Ｖ１の状態にあり、溶離液はバルブ２２を介し
てドレイン流路Ｄに導かれ排出される。一方、分取用チ
ューブ２６には、エア注入手段３０により毎分一定量の
エアが導入されている。

【００２４】しかる後、所定量の溶離液がカラム６から
溶出され、タンパク質成分が溶出されてくると、検出器
８からの電気信号の増大等により、ピークセンサ１８に
より電気信号の変化がピークＰ１として検出され、バル
ブ２２にその信号が伝わる。これにより、バルブ２２で
は、図２に示すように流路Ｖ２に切替えが行われ、フロ
ーセル１４からの溶離液部分Ｍ１は、分取用チューブ２
６に導入される。同時に、エアはドレイン流路Ｄに排出
される。なお、実際には、フローセル１４においてタン
パク質成分の溶出を検出してしばらく経過した後、その
タンパク質を含む溶離液部分がバルブ２２に到達するた
め、ピークセンサ１８によるピーク検出とバルブ２２の
作動には一定のリレータイムが設定されている。一方、
図３（Ａ）に示すように、記録計２０にも同時にその信
号を送り、記録計２０のクロマトグラムＣ上には、ピー
ク検出開始のイベントマークＥ１が記録されるととも
に、ピークＰ１が記録されていく。

【００２５】また、ピークセンサ１８で受信した電気信
号がピーク検出感度を下回った場合には、ピークＰ１と
しての検出はされなくなり、ピーク検出終了信号が発せ
られる。これにより、バルブ２２にあっては、所定のリ
レータイム後に、図２に示す流路Ｖ２に切り換わり、再
び被検成分を含まない溶離液はドレイン流路Ｄに排出さ
れ、エアが分取用チューブ２６に導入される。この結
果、タンパク質を含む溶離液部分Ｍ１のみが、分取用チ
ューブ２６に採取される。一方、ピーク検出終了の信号
は記録計２０に送られ、クロマトグラムＣ上にピーク検
出終了のイベントマークＥ２が記録される（図３（Ａ）
参照）。

【００２６】このようにして第１のピークＰ１が溶出し
た後に、所定時間をおいて第２のピークＰ２が溶出さ
れ、さらに所定時間経過後には第３のピークＰ３が溶出
される。そして、各ピークＰ１〜Ｐ３に対応する溶離液
部分Ｍ１〜Ｍ３は、それぞれの溶出液量が、各溶出時間
と溶出時間の間に導入されたエアによって介在されて分
取用チューブ１６内に採取される（図３（Ｃ）参照）。

【００２７】さらに、第４及び第５のピークＰ４，Ｐ５
の分取について説明する。第４のタンパク質がカラム６
から溶出されることにより、受光部１６により検出され
る吸光度が増大し、その結果、ピークセンサ１８により
ピークＰ４として検出され、ピーク検出開始信号がバル
ブ２２及び記録計２０に送られる。バルブ２２は先のピ
ークＰ１〜Ｐ３と同様に、ピーク検出開始信号を受けて
切り換えられ、溶離液部分Ｍ４は分取用チューブ２６に
導入される。そして第４のピークＰ４のピーク検出が終
了するやいなや第５のタンパク質の溶出により再びピー
クＰ５が検出される。この場合、これらの信号に対応し
てバルブ２２は切換えされるが、第４のピーク検出終了
信号と、第５のピーク検出開始信号との間は極めて短時
間ゆえ、通常のエア注入量では、分取用チューブ２６に
十分なエアを導入できず、分取用チューブ２６において
第４の溶離液部分Ｍ４と第５の溶離液部分Ｍ５とが十分
に分離しない場合がある。このため、ピーク検出終了信
号とピーク検出開始信号との時間的間隔が一定時間以内
の場合には、エア注入手段３０は、強制的に１μＬのエ
アを排出し、分取用チューブ２６において、第４の溶離
液部分Ｍ４と第５の溶離液部分Ｍ５との間に１μＬのエ
アにより２ｃｍの間隔を確保できるようになっている
（図３（Ｃ）参照）。なお、本実施例では、１μＬのエ
アを排出することとしたが、エア量は適宜設定すること
ができる。

【００２８】そして、第５のピークＰ５の溶離液部分Ｍ
５は分取用チューブ２６に採取される。この後、ピーク
検出終了後には、所定の分析時間終了まで、毎分一定量
のエアが分取用チューブ２６に導入される。分析が終了
した後には、ピーク用配管２７から分取用チューブ２６
を取り外す。

【００２９】図３に対応して示すように、取り外した分
取用チューブ２６には、クロマトグラムＣ上のイベント
マークＥ１，Ｅ２が記録されたピークＰ１〜５に対応す
る溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５がほぼクロマトグラムＣ上のピ
ーク間隔に対応して分離ししてかつ連続的に分取されて
いる。分取用チューブ２６が透明であるため、容易に各
被検成分の位置やクロマトグラムＣとの対応を確認する
ことができる。また、各溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５は、表面
張力により分取用チューブ２６内に保持されており、分
取用チューブ２６を巻いたり、上下に振ったりしても、
分離状態が保持され、取扱いが都合がよい。さらに、こ
のチューブ２６ごと、保存することができ、冷凍保存も
可能である。

【００３０】これら分取した各溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５中
のタンパク質のアミノ酸分析等をする場合には、溶離液
部分Ｍ１〜Ｍ５間に介在させたエア部分で分取用チュー
ブ２６をカットして各溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５をそれぞれ
含んだチューブに分離することもできる。

【００３１】このように、溶離液の流路Ｔから滴下させ
ることなく連続的に液体のまま溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５を
採取することとしたため、ＬＣにおいて従来にない新た
な被検成分採取方法となっている。また、溶離液を吸着
紙の吸収させて採取するのと異なり、タンパク質の変性
や分解、損失のおそれが少なくなく、抽出操作する必要
もない。また、クロマトグラフィーにより有効に濃縮さ
れた状態で被検成分を得ることができるため、その後の
処理が迅速でかつ無駄なく行うことができる。また、ク
ロマトグラムＣ上で近接したピークＰ４，Ｐ５であって
も、バルブ２２の切換えと、エアの瞬間的注入により確
実に分離して採取することができる。さらに、クロマト
グラムＣと対応させなくても、各ピークＰ１〜Ｐ５に対
応する溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５を分離分取することがで
き、透明の分取用チューブ２６であるため分断する箇所
を明確に把握することができる。

【００３２】なお、本実施例にあっては、ピークセンサ
１８によりピークの検出を常に監視して、バルブ２２の
作動を自動的に行うこととしたが、これに限るものでは
ない。すなわち、一定の分析条件下で、一定の溶離液量
で流出することが予め知ることができる場合には、ピー
クセンサ１８によることなく、タイマーセットすること
により、一定時間ごとにバルブ２２の切換えを行うこと
もできる。さらに、手動でバルブ２２の切換えを行うこ
ともできる。

【００３３】また、本実施例にあっては、ピーク非検出
状態にあっては、エア注入手段から常時一定量のエアを
分取用チューブ２６に導入するものとしたがこれに限る
ものではない。すなわち、溶離液部分を分取用チューブ
２６に採取後に、次に溶離液部分と分離できる程度の一
定量のエアを導入するように形成してもよい。

【００３４】また、分取用チューブ２６からの溶離液部
分Ｍ１〜Ｍ５を取り出すには、分取用チューブ２６を分
断してシリンジで吸い出す他、、分取用チューブ２６の
一方から順次エアを送って、他端から溶離液部分Ｍ１〜
Ｍ５をシリンジで吸入するとか、あるいは流下させるこ
ともできる。また、直ちにマススペクトル装置やガスク
トマトグラフ装置に溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５を導入する場
合には、分取用チューブ２６にエアを導入することによ
り、順次、溶離液部分Ｍ１〜Ｍ５をマススペクトル装置
等のインジェクタに送るようにすることもできる。本実
施例はＣＣＬＣの場合であるが、ＬＣに広く適用するこ
とができる。

【００３５】

【発明の効果】本発明方法及び装置によれば、１本の分
取用チューブに被検成分の溶離パターンに正確に対応し
て確実に被検成分を含む溶離液部分を採取分離でき、し
かも、採取した被検成分の取り扱いに都合がよい。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例の装置概要図である。

【図２】図１の装置におけるバルブのポートの切換え方
向を示す図である。

【図３】クロマトグラム（Ａ）とピークセンサによるピ
ーク検出信号状態（Ｂ）と分取用チューブ内における各
被検成分を含む溶離液部分（Ｃ）の対応図である。

【符号の説明】

６…カラム２６…分取用チューブ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】液体クロマトグラフィーによって分離され
た被検成分を採取する方法であって、分離用担体を充填したカラムに１以上の被検成分を供給
して、溶離液を流し続け、被検成分が分離された溶離液
を得る工程と、前記溶離液のうち被検成分を含む溶離液部分を、溶離液
の流路の端末に接続された分取用チューブ内に流入させ
る工程と、前記分取用チューブ内の前記溶離液部分の後部に気体を
注入する工程、とを備え、分離された各被検成分を含む複数の溶離液部
分を、順次前記分取用チューブ内に採取し、各溶離液部
分間に気体を介在させることにより、前記分取用チュー
ブ内に複数の溶離液部分を相互に分離した状態で保持す
ることを特徴とする液体クロマトグラフィーの被検成分
採取方法。
【請求項２】試料注入部と、カラム部と、検出部と及び
これらを接続する配管部とからなる液体クロマトグラフ
ィーよって分離された被検成分を採取する装置であっ
て、カラムからの溶離液の流路の端末に接続され、分離され
た被検成分を含む溶離液部分を分取するための分取用チ
ューブと、この分取用チューブに気体を注入するための気体注入手
段と、カラムからの流路を経て送られる溶離液又は気体注入手
段から気体流路を経て送られる気体のいずれか一方を、
前記分取用チューブに取り入れ、他方をドレイン側に放
出するように切換え作動されるバルブ、とを備え、分離された各被検成分を含む複数の溶離液部
分を、順次前記分取用チューブ内に採取し、各溶離液部
分間に気体を介在させることにより、前記分取用チュー
ブ内に複数の溶離液部分を相互に分離した状態で保持す
ることを特徴とする液体クロマトグラフィーにおける被
検成分採取装置。