JP2590983B2 - 難水溶性抗原の免疫測定方法 - Google Patents
難水溶性抗原の免疫測定方法Info
- Publication number
- JP2590983B2 JP2590983B2 JP62312183A JP31218387A JP2590983B2 JP 2590983 B2 JP2590983 B2 JP 2590983B2 JP 62312183 A JP62312183 A JP 62312183A JP 31218387 A JP31218387 A JP 31218387A JP 2590983 B2 JP2590983 B2 JP 2590983B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- poorly water
- antigen
- soluble antigen
- antibody
- soluble
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 難水溶性抗原として例えば、コルチゾール，プロゲス
テロン，テストステロン等の副腎皮質や生殖腺から分泌
されるステロイド ホルモン等が知られている。これら
の生体内での濃度を知ることで、副腎皮質や生殖腺の機
能異常等の臨床医学上、極めて有意義な情報を得ること
ができる。
テロン，テストステロン等の副腎皮質や生殖腺から分泌
されるステロイド ホルモン等が知られている。これら
の生体内での濃度を知ることで、副腎皮質や生殖腺の機
能異常等の臨床医学上、極めて有意義な情報を得ること
ができる。
本発明はこれら低分子難水溶性抗原の免疫測定法に関
するものである。
するものである。
（従来の技術とその問題点） 従来、難水溶性抗原を免疫学的に測定する方法とし
て、一般に放射性物質を使用せず、しかも高感度の測定
法である、酵素免疫測定方法が採用されている。
て、一般に放射性物質を使用せず、しかも高感度の測定
法である、酵素免疫測定方法が採用されている。
しかし、難水溶性抗原は、その名の通り水に溶解しに
くいという性質を持ち、分泌器官より分泌された後は、
血液中の蛋白質に結合したり脂質に取り込まれた状態で
生体内に存在している。このため、血液等を試料とし
て、前述した酵素免疫測定を行う場合には、使用する抗
体が試料中の抗原と充分に反応せず、高感度の測定が行
えないという問題点がある。この場合には、抗原と抗体
の反応を充分に行なわせるために、有機溶媒等を用いて
試料中の難水溶性抗原をあらかじめ抽出してから測定を
行うことも可能であるが、この場合には操作の複雑さ，
操作に要する時間等の問題が生じる。
くいという性質を持ち、分泌器官より分泌された後は、
血液中の蛋白質に結合したり脂質に取り込まれた状態で
生体内に存在している。このため、血液等を試料とし
て、前述した酵素免疫測定を行う場合には、使用する抗
体が試料中の抗原と充分に反応せず、高感度の測定が行
えないという問題点がある。この場合には、抗原と抗体
の反応を充分に行なわせるために、有機溶媒等を用いて
試料中の難水溶性抗原をあらかじめ抽出してから測定を
行うことも可能であるが、この場合には操作の複雑さ，
操作に要する時間等の問題が生じる。
本発明者は、異常の様な問題点について鋭意検討を行
った結果、抗体と試料中の低分子難水溶性抗原を反応さ
せる際に、シクロデキストリンを共存させることで、充
分な抗原抗体反応を行なわせられることを見い出し、本
発明を完成させた。すなわち本発明は、試料中の難水溶
性抗原を抗体を用いて測定する免疫測定方法において、
抗原と抗体を反応させる溶液中にシクロデキストリンを
共存させることを特徴とする難水溶性抗原の免疫測定方
法を提供するものであり、以下詳細に説明する。
った結果、抗体と試料中の低分子難水溶性抗原を反応さ
せる際に、シクロデキストリンを共存させることで、充
分な抗原抗体反応を行なわせられることを見い出し、本
発明を完成させた。すなわち本発明は、試料中の難水溶
性抗原を抗体を用いて測定する免疫測定方法において、
抗原と抗体を反応させる溶液中にシクロデキストリンを
共存させることを特徴とする難水溶性抗原の免疫測定方
法を提供するものであり、以下詳細に説明する。
（問題点を解決するための手段） 本発明で言う免疫測定法とは、例えば固定化抗体ある
いは固定化抗原を使用し、B/F（バウンド／コリー）分
離を伴う、いわゆるサンドウィチ法，競争法等や抗原と
抗体との反応を溶液状態で行う方法等、難水溶性抗原と
その抗体を用いる免疫測定法を意味する。低分子難水溶
性抗原としては、例えばステロイドホルモン甲状腺ホル
モン等を例示することができる。これら難水溶性抗原を
含む試料としては、血液，血清，唾液，乳汁，尿等、一
般に免疫測定の対象となり得るものであれば制限はな
い。
いは固定化抗原を使用し、B/F（バウンド／コリー）分
離を伴う、いわゆるサンドウィチ法，競争法等や抗原と
抗体との反応を溶液状態で行う方法等、難水溶性抗原と
その抗体を用いる免疫測定法を意味する。低分子難水溶
性抗原としては、例えばステロイドホルモン甲状腺ホル
モン等を例示することができる。これら難水溶性抗原を
含む試料としては、血液，血清，唾液，乳汁，尿等、一
般に免疫測定の対象となり得るものであれば制限はな
い。
シクロデキストリンはグルコース分子が環状に結合し
たドーナツ型の構造を持つ多糖類で、内部の疎水性の空
洞に難水溶性抗原を取り込むと考えらえる。しかもシク
ロデキストリンは水に溶解し易い性質を持つため、結果
としてステロイドホルモン，甲状腺ホルモン等の低分子
難水溶性抗原と抗体の反応を容易にすると考えられる。
シクロデキストリはグルコース６分子を持つα−シクロ
デキストリン，グルコース７分子を持つβ−シクロデキ
ストリン，グルコール８分子を持つγ−シクロデキスト
リンのうち、少なくとも１種を用いれば良い。
たドーナツ型の構造を持つ多糖類で、内部の疎水性の空
洞に難水溶性抗原を取り込むと考えらえる。しかもシク
ロデキストリンは水に溶解し易い性質を持つため、結果
としてステロイドホルモン，甲状腺ホルモン等の低分子
難水溶性抗原と抗体の反応を容易にすると考えられる。
シクロデキストリはグルコース６分子を持つα−シクロ
デキストリン，グルコース７分子を持つβ−シクロデキ
ストリン，グルコール８分子を持つγ−シクロデキスト
リンのうち、少なくとも１種を用いれば良い。
これらのシクロデキストリンは、難水溶性抗原と抗体
を反応させる溶液中に共存していれば良く、具体的には
試料に添加しても良いし、抗体を添加する際に添加して
も良いし、さらには単独で添加しても良い。また、本発
明では反応液中の他の成分については何ら特別の制限は
ない。シクロデキストリンは、一般的なステロイドホル
モンを例にとると反応液中で最終的な濃度が0.001％
（重量／体積）以上好ましくは0.01％（重量／体積）以
上になるように添加すれば良いが、測定しようとする抗
原の性質，予想される濃度範囲等の諸条件に合わせて実
施者が経験的に決定すれば良い。添加されたシクロデキ
ストリンが0.001％（重量／体積）以下の場合は、前述
した様な効果が小さくなる。
を反応させる溶液中に共存していれば良く、具体的には
試料に添加しても良いし、抗体を添加する際に添加して
も良いし、さらには単独で添加しても良い。また、本発
明では反応液中の他の成分については何ら特別の制限は
ない。シクロデキストリンは、一般的なステロイドホル
モンを例にとると反応液中で最終的な濃度が0.001％
（重量／体積）以上好ましくは0.01％（重量／体積）以
上になるように添加すれば良いが、測定しようとする抗
原の性質，予想される濃度範囲等の諸条件に合わせて実
施者が経験的に決定すれば良い。添加されたシクロデキ
ストリンが0.001％（重量／体積）以下の場合は、前述
した様な効果が小さくなる。
（発明の効果） 本発明により、ステロイドホルモン，甲状腺ホルモン
等の難水溶性抗原を有機溶媒等で抽出する操作なしに高
感度で免疫測定をすることができる。このことは、例え
ばこれら難水溶性抗原の免疫測定を自動化する際に多大
な効果を発揮するものである。
等の難水溶性抗原を有機溶媒等で抽出する操作なしに高
感度で免疫測定をすることができる。このことは、例え
ばこれら難水溶性抗原の免疫測定を自動化する際に多大
な効果を発揮するものである。
以下本発明をさらに詳細に説明するため、実施例を示
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
（実施例） 実施例１ ヌンク社製96ウェルマイクロタイタープレートに、ウ
サギを免疫して作製した抗プロゲステロン抗体を１μg/
ウェルずつ分注して吸着させ、５％BSA溶液でブロッキ
ングした。それぞれのウェルに、プロゲステロンを除去
したヒト血清50μとアルカリ性フォスファターゼで標
識したプロゲステロン（以下コンジュゲートと言う）を
含む反応溶液を100μずつ分注し、30分間室温で反応
させた。なお、反応溶液は、10mM Tris−HCl（pH8.6）,
1％（重量／体積）ゼラチン水解物,0.1％（重量／体
積）NaN3及びβ−シクロデキストリンを０％,0.05％,0.
1％（重量／体積）含む３種類のものを用いた。
サギを免疫して作製した抗プロゲステロン抗体を１μg/
ウェルずつ分注して吸着させ、５％BSA溶液でブロッキ
ングした。それぞれのウェルに、プロゲステロンを除去
したヒト血清50μとアルカリ性フォスファターゼで標
識したプロゲステロン（以下コンジュゲートと言う）を
含む反応溶液を100μずつ分注し、30分間室温で反応
させた。なお、反応溶液は、10mM Tris−HCl（pH8.6）,
1％（重量／体積）ゼラチン水解物,0.1％（重量／体
積）NaN3及びβ−シクロデキストリンを０％,0.05％,0.
1％（重量／体積）含む３種類のものを用いた。
反応後、３％Tween20を含むリン酸緩衝液250μで３
回洗浄し、反応溶液を除去したウェルに、アルカリ性フ
ォスファターゼの基質として0mM p−ニトロフェニルホ
スフェイト（pH10.0）を100μずつ分注し、20分間反
応させた後、405nmでの吸光度を測定した。この結果を
もとに、0,0.05,0.1％各濃度のβ−シクロデキストリン
共存下で405nmで吸光度がほぼ等しくなる様なコンジュ
ゲート量を決定した。
回洗浄し、反応溶液を除去したウェルに、アルカリ性フ
ォスファターゼの基質として0mM p−ニトロフェニルホ
スフェイト（pH10.0）を100μずつ分注し、20分間反
応させた後、405nmでの吸光度を測定した。この結果を
もとに、0,0.05,0.1％各濃度のβ−シクロデキストリン
共存下で405nmで吸光度がほぼ等しくなる様なコンジュ
ゲート量を決定した。
実施例２ 異なる濃度のプロゲステロンを含むヒト血清を用い、
実施例１で決定された0,0.05,0.1％各濃度のβ−シクロ
デキストリン光存下でほぼ同一の405nmでの吸光度を示
すためのコンジュゲートを含む３種類の反応溶液につい
て、実施例１と同様の操作を行った。本発明で提供され
る測定方法と従来の方法との感度の差を比較するため、
試料がプロゲステロンを含まない場合（実施例１）の40
5nmでの吸光度をBoとし、Boを1/2に減少させるのに要す
るプロゲステロンの濃度をＣとして表１に示した。表中
Ｃが大きくなることは、405nmの吸光度を1/2に減少させ
るのに大量のプロゲステロンを有すること、すなわち、
一定量のプロゲステロンの濃度変化当りの吸光度変化が
小さいことを示す。尚、Ｐ−ニトロフェニルホスフェイ
トはアルカリ性フォスファターゼの酵素作用により405n
mでの吸光を示す物質に変化する基質である。
実施例１で決定された0,0.05,0.1％各濃度のβ−シクロ
デキストリン光存下でほぼ同一の405nmでの吸光度を示
すためのコンジュゲートを含む３種類の反応溶液につい
て、実施例１と同様の操作を行った。本発明で提供され
る測定方法と従来の方法との感度の差を比較するため、
試料がプロゲステロンを含まない場合（実施例１）の40
5nmでの吸光度をBoとし、Boを1/2に減少させるのに要す
るプロゲステロンの濃度をＣとして表１に示した。表中
Ｃが大きくなることは、405nmの吸光度を1/2に減少させ
るのに大量のプロゲステロンを有すること、すなわち、
一定量のプロゲステロンの濃度変化当りの吸光度変化が
小さいことを示す。尚、Ｐ−ニトロフェニルホスフェイ
トはアルカリ性フォスファターゼの酵素作用により405n
mでの吸光を示す物質に変化する基質である。
Claims (1)
- 【請求項１】試料中の難水溶性抗原を、該難水溶性抗原
と免疫学的に均一な標識抗原及びこれらに対する抗体と
混合し、抗体と結合した又は結合していない標識量を測
定する難水溶性抗原の免疫測定方法において、免疫反応
をシクロデキストリンを含む反応液中で行うことを特徴
とする方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62312183A JP2590983B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | 難水溶性抗原の免疫測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62312183A JP2590983B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | 難水溶性抗原の免疫測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01153961A JPH01153961A (ja) | 1989-06-16 |
| JP2590983B2 true JP2590983B2 (ja) | 1997-03-19 |
Family
ID=18026218
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62312183A Expired - Lifetime JP2590983B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | 難水溶性抗原の免疫測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2590983B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1629845A3 (en) * | 2000-11-02 | 2006-03-22 | Akzo Nobel N.V. | Use of cortisol-sequestering agents for the treatment of hypercortisolaemia related disorders |
| JP6226624B2 (ja) * | 2013-08-08 | 2017-11-08 | 田中貴金属工業株式会社 | 溶血性レンサ球菌診断イムノクロマト試薬、キット及び検出方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6014766B2 (ja) * | 1976-04-05 | 1985-04-16 | 直哉 緒方 | 包接ポリアミド及びその製造方法 |
| JPS5774099A (en) * | 1980-10-28 | 1982-05-10 | Kanto Kagaku Kk | Reagent for measuring activity of gamma-cultanyl transpeptidase |
-
1987
- 1987-12-11 JP JP62312183A patent/JP2590983B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01153961A (ja) | 1989-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1040082B (en) | Process for the demonstration and determination of reaction components having specific binding affinity for each other | |
| DE2744835C3 (de) | Immunchemisches Meßverfahren | |
| US3850752A (en) | Process for the demonstration and determination of low molecular compounds and of proteins capable of binding these compounds specifically | |
| USRE29169E (en) | Process for the demonstration and determination of reaction components having specific binding affinity for each other | |
| EP0397113B1 (de) | Verfahren zum Nachweis spezifisch bindefähiger Substanzen in Körperflüssigkeiten | |
| US4243749A (en) | Immunoassay employing an enzyme label | |
| US4273867A (en) | Method and reagent for counteracting lipemic interference | |
| JPS58117456A (ja) | 特定の結合活性を持つ蛋白質とこれに対応して結合する物質との反応の一つの成分を検出及び定量する試薬セツト | |
| JP2005503534A (ja) | ビタミンｄアッセイ | |
| JPS6343711B2 (ja) | ||
| JPS61502417A (ja) | ポリクロナ−ル抗体、製法と用途 | |
| DE69232801T2 (de) | Abtrennungsverfahren | |
| JP2832083B2 (ja) | アシル化タンパク質凝集体および免疫検定における干渉の抑制についてのそれらの使用 | |
| DE69619257T2 (de) | Die konjugation von liganden an immobilisierte proteine in einem organischen lösungsmittel | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| JP2590983B2 (ja) | 難水溶性抗原の免疫測定方法 | |
| EP2660603B1 (en) | Immunological assay method | |
| FR2523311A1 (fr) | Produit de couplage entre une albumine et un ligand specifique, obtention et applications dans le domaine biologique | |
| JPS61250558A (ja) | 免疫分析方法 | |
| DE69715014T2 (de) | Glycolipid-komplexe und ihre anwendung. | |
| EP0253270B1 (en) | Method for diagnostic immunoassay by solid phase separation | |
| JP2994739B2 (ja) | 微量成分の迅速測定方法 | |
| JPH0694716A (ja) | 免疫測定法 | |
| US5229268A (en) | Method for diagnostic immunoassay by solid phase separation | |
| JP2807831B2 (ja) | 免疫学的測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |