JP2550261B2 - 酸化カルボキシメチルマンノグルカンードキソルビシン複合体 - Google Patents
酸化カルボキシメチルマンノグルカンードキソルビシン複合体Info
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- JP2550261B2 JP2550261B2 JP4127499A JP12749992A JP2550261B2 JP 2550261 B2 JP2550261 B2 JP 2550261B2 JP 4127499 A JP4127499 A JP 4127499A JP 12749992 A JP12749992 A JP 12749992A JP 2550261 B2 JP2550261 B2 JP 2550261B2
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Description
【０００１】［発明の背景］
【産業上の利用分野】本発明は、酸化カルボキシメチル
マンノグルカンに抗癌剤であるドキソルビシンを担持さ
せた複合体に関する。
マンノグルカンに抗癌剤であるドキソルビシンを担持さ
せた複合体に関する。
【０００２】
【従来の技術】水溶性高分子を薬物担体として使用する
ことは、従来からとりわけ製剤の分野において試みら
れ、関連する多くの技術が提供されてきた。本発明者ら
は先に、多糖高分子であるカルボキシメチル化したマン
ノグルカン及びその誘導体を薬物担体として提案してい
る（ＰＣＴ／ＪＰ９２／００１８４）。
ことは、従来からとりわけ製剤の分野において試みら
れ、関連する多くの技術が提供されてきた。本発明者ら
は先に、多糖高分子であるカルボキシメチル化したマン
ノグルカン及びその誘導体を薬物担体として提案してい
る（ＰＣＴ／ＪＰ９２／００１８４）。
【０００３】［発明の概要］
【発明が解決しようとする課題】今般、本発明者らは、
先に提案した担体の一つである酸化カルボキシメチルマ
ンノグルカンと抗癌剤であるドキソルビシンとを組み合
わせた複合体により、ドキソルビシンに関し優れた血中
消失速度の遅延および癌組織指向性が得られることを見
出し、本発明を完成した。すなわち、本発明はドキソル
ビシンに関し優れた血中消失速度の遅延および癌組織指
向性が得られる担体−ドキソルビシン複合体を提供する
ことを目的としている。
先に提案した担体の一つである酸化カルボキシメチルマ
ンノグルカンと抗癌剤であるドキソルビシンとを組み合
わせた複合体により、ドキソルビシンに関し優れた血中
消失速度の遅延および癌組織指向性が得られることを見
出し、本発明を完成した。すなわち、本発明はドキソル
ビシンに関し優れた血中消失速度の遅延および癌組織指
向性が得られる担体−ドキソルビシン複合体を提供する
ことを目的としている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明による酸化カルボ
キシメチルマンノグルカン−ドキソルビシン複合体及び
その塩は、下記の一般式（Ｉ）で表される単位及び／又
は下記の一般式（II）で表される単位から構成されるも
の、である。
キシメチルマンノグルカン−ドキソルビシン複合体及び
その塩は、下記の一般式（Ｉ）で表される単位及び／又
は下記の一般式（II）で表される単位から構成されるも
の、である。
【化３】 〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同
一又は異なっていてもよく、それぞれ水素原子又は基−
ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、Ｗ１及びＷ２はそれぞれ基＝
０又はドキソルビシン残基を表わし、Ａ１、Ａ２、Ａ３
及びＡ４は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ下
記式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）又は式（VI）を表わ
すが、ただし、分子が前記一般式（Ｉ）のみからなる場
合、分子中のＡ１及びＡ２の全てが式（III ）を表わす
ことはない。
一又は異なっていてもよく、それぞれ水素原子又は基−
ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、Ｗ１及びＷ２はそれぞれ基＝
０又はドキソルビシン残基を表わし、Ａ１、Ａ２、Ａ３
及びＡ４は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ下
記式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）又は式（VI）を表わ
すが、ただし、分子が前記一般式（Ｉ）のみからなる場
合、分子中のＡ１及びＡ２の全てが式（III ）を表わす
ことはない。
【化４】 （ここで、Ｘi1、Ｘi2、Ｘi3、Ｘi4、Ｘi5、Ｘi6、
Ｘi7、Ｘi8及びＸi9は、同一又は異なっていてもよく、
それぞれ水素原子又は基−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、Ｗ
i1、Ｗi2、Ｗi3、Ｗi4、Ｗi5及びＷi6は同一又は異なっ
ていてもよく、それぞれ基＝０又はドキソルビシン残基
を表わすが、ただし、式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）
及び式（VI）のそれぞれにおいてＸi1〜Ｘi9及びＷi1〜
Ｗi6の添字ｉは１〜４の整数を表わし、Ａ１、Ａ２、Ａ
３及びＡ４のそれぞれを一般にＡｉと記すものとす
る。）〕。
Ｘi7、Ｘi8及びＸi9は、同一又は異なっていてもよく、
それぞれ水素原子又は基−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、Ｗ
i1、Ｗi2、Ｗi3、Ｗi4、Ｗi5及びＷi6は同一又は異なっ
ていてもよく、それぞれ基＝０又はドキソルビシン残基
を表わすが、ただし、式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）
及び式（VI）のそれぞれにおいてＸi1〜Ｘi9及びＷi1〜
Ｗi6の添字ｉは１〜４の整数を表わし、Ａ１、Ａ２、Ａ
３及びＡ４のそれぞれを一般にＡｉと記すものとす
る。）〕。
【０００５】［発明の具体的説明］本発明による複合体
を構成する酸化カルボキシメチルマンノグルカンは、本
発明者らによって先に出願されたＰＣＴ／ＪＰ９２／０
０１８４に記載されたものをそのまま利用することがで
きる。
を構成する酸化カルボキシメチルマンノグルカンは、本
発明者らによって先に出願されたＰＣＴ／ＪＰ９２／０
０１８４に記載されたものをそのまま利用することがで
きる。
【０００６】簡単に説明すれば、酸化カルボキシメチル
マンノグルカンとは、下記の一般式（Ｖ）：
マンノグルカンとは、下記の一般式（Ｖ）：
【化５】 （式中、Ｒ*1、Ｒ*2、Ｒ*3、Ｒ*4、Ｒ*5、Ｒ*6、Ｒ*7、
Ｒ*8、Ｒ*9、Ｒ*10 、Ｒ*11 およびＲ*12 は、同一また
は異なっていてもよく、それそれ水素原子または基−Ｃ
Ｈ２ＣＯＯＨを表す。）で表されるカルボキシメチルマ
ンノグルカンを構成するテトラサッカライド単位の一部
又は全部のマンノースを開裂し、さらに主鎖を構成する
グルコースのうちマンノースが分岐していないグルコー
スの一部又は全部を開裂することによって得られた、ア
ルデヒド基を開裂末端に有する構造のものである。
Ｒ*8、Ｒ*9、Ｒ*10 、Ｒ*11 およびＲ*12 は、同一また
は異なっていてもよく、それそれ水素原子または基−Ｃ
Ｈ２ＣＯＯＨを表す。）で表されるカルボキシメチルマ
ンノグルカンを構成するテトラサッカライド単位の一部
又は全部のマンノースを開裂し、さらに主鎖を構成する
グルコースのうちマンノースが分岐していないグルコー
スの一部又は全部を開裂することによって得られた、ア
ルデヒド基を開裂末端に有する構造のものである。
【０００７】ここで、Ｒ*1〜Ｒ*12 がカルボキシメチル
基である程度は、糖残基一つあたりのカルボキシメチル
基の数として定義される「置換度」として表すことがで
きる。すなわち、 と表せる。
基である程度は、糖残基一つあたりのカルボキシメチル
基の数として定義される「置換度」として表すことがで
きる。すなわち、 と表せる。
【０００８】この置換度の上限は全てのＲ*1〜Ｒ*12 が
カルボキシメチル化された場合の３であるが、本発明に
よる複合体の担体として好ましい酸化カルボキシメチル
マンノグルカンの置換度は０．０１以上が好ましく、よ
り好ましくは０．４〜１である。なお、本発明による複
合体にあっては、分子中に少なくとも１つのカルボキシ
メチル基が存在していることが必要であり、この意味で
置換度が０である化合物は除かれる。
カルボキシメチル化された場合の３であるが、本発明に
よる複合体の担体として好ましい酸化カルボキシメチル
マンノグルカンの置換度は０．０１以上が好ましく、よ
り好ましくは０．４〜１である。なお、本発明による複
合体にあっては、分子中に少なくとも１つのカルボキシ
メチル基が存在していることが必要であり、この意味で
置換度が０である化合物は除かれる。
【０００９】一般式（Ｉ）において、Ａ１及びＡ２は、
前記式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）又は式（VI）を表
す。ここで、分子が前記一般式（Ｉ）のみからなり、か
つ、Ａ１及びＡ２が全て式（III ）である場合は除かれ
る。式（IV) 、式（Ｖ）及び式（VI）で表される単位
は、それぞれ式（III ）で表されるマンノース残基の２
位と３位の間の結合が開裂したもの、３位と４位の間の
結合が開裂したもの、そして２位と３位の間の結合およ
び３位と４位の間の結合が開裂したものであるといえ
る。
前記式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）又は式（VI）を表
す。ここで、分子が前記一般式（Ｉ）のみからなり、か
つ、Ａ１及びＡ２が全て式（III ）である場合は除かれ
る。式（IV) 、式（Ｖ）及び式（VI）で表される単位
は、それぞれ式（III ）で表されるマンノース残基の２
位と３位の間の結合が開裂したもの、３位と４位の間の
結合が開裂したもの、そして２位と３位の間の結合およ
び３位と４位の間の結合が開裂したものであるといえ
る。
【００１０】また、一般式（II）において、Ａ３及びＡ
４は、前記式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）又は式（V
I）を表す。さらに式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）及
び式（VI）のそれぞれにおいてＸi1〜Ｘi9及びＷi1〜Ｗ
i6の添字i は１〜４の整数を表し、Ａ１、Ａ２、Ａ３及
びＡ４のそれぞれを一般にＡi と記すものとする。この
ことは、例えば、同一のＤ−グルコースから分岐してい
るＡ１及びＡ２のそれぞれに式（IV）で表される単位が
結合している場合、Ｘi5、すなわちＸ15とＸ25とは独立
しており、それぞれが異なっている場合も本発明の範囲
に包含されることを意味する。また、一般式（Ｉ）及び
／又は一般式（II）で表される単位において、分子中で
相隣り合うＲ１〜Ｒ６及びＡ１〜Ａ４並びにＸi1〜Ｘi9
及びＷi1〜Ｗi6が異なっていてもよい。
４は、前記式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）又は式（V
I）を表す。さらに式（III ）、式（IV) 、式（Ｖ）及
び式（VI）のそれぞれにおいてＸi1〜Ｘi9及びＷi1〜Ｗ
i6の添字i は１〜４の整数を表し、Ａ１、Ａ２、Ａ３及
びＡ４のそれぞれを一般にＡi と記すものとする。この
ことは、例えば、同一のＤ−グルコースから分岐してい
るＡ１及びＡ２のそれぞれに式（IV）で表される単位が
結合している場合、Ｘi5、すなわちＸ15とＸ25とは独立
しており、それぞれが異なっている場合も本発明の範囲
に包含されることを意味する。また、一般式（Ｉ）及び
／又は一般式（II）で表される単位において、分子中で
相隣り合うＲ１〜Ｒ６及びＡ１〜Ａ４並びにＸi1〜Ｘi9
及びＷi1〜Ｗi6が異なっていてもよい。
【００１１】分子中における一般式（Ｉ）と一般式（I
I）の存在比、さらには式（III ）、式（IV) 、式
（Ｖ）及び式（VI）の存在比は特に限定されないが、ド
キソルビシンの導入の程度を考慮して決定されてよい。
また、ドキソルビシンの導入の程度は特に限定されない
が、１〜３０％で５〜２０％程度が好ましく、より好ま
しくは８〜１５重量％程度である。
I）の存在比、さらには式（III ）、式（IV) 、式
（Ｖ）及び式（VI）の存在比は特に限定されないが、ド
キソルビシンの導入の程度を考慮して決定されてよい。
また、ドキソルビシンの導入の程度は特に限定されない
が、１〜３０％で５〜２０％程度が好ましく、より好ま
しくは８〜１５重量％程度である。
【００１２】本発明による複合体の分子量は特に限定さ
れないが、１×１０4 〜２×１０6程度が好ましく、よ
り好ましくは１×１０5 程度である。本発明による複合
体はその塩として存在することができる。好適な塩の例
としてはナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩のよ
うなアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、アルギニ
ン塩、リジン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができ
る。本発明による複合体は、ドキソルビシン単体に比較
して、血中からの消失速度が小さく、癌組織指向性を有
しており、制癌剤として優れた性質を有しているといえ
る。
れないが、１×１０4 〜２×１０6程度が好ましく、よ
り好ましくは１×１０5 程度である。本発明による複合
体はその塩として存在することができる。好適な塩の例
としてはナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩のよ
うなアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、アルギニ
ン塩、リジン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができ
る。本発明による複合体は、ドキソルビシン単体に比較
して、血中からの消失速度が小さく、癌組織指向性を有
しており、制癌剤として優れた性質を有しているといえ
る。
【００１３】本発明による複合体の担体としての酸化カ
ルボキシメチルマンノグルカンは、前記一般式（Ｖ）で
表される単位から構成されるカルボキシメチルマンノグ
ルカンを酸化して開環することによって得ることができ
る。まず、このカルボキシメチルマンノグルカンに酸化
剤（例えば過ヨウ素酸またはそれらの塩）を氷冷下に加
え、室温または室温以下の温度で穏やかに反応させる。
酸化カルボキシメチルマンノグルカンは、例えば反応液
を水に対して透析し、析出助剤としての酢酸ナトリウム
を加えて、エタノール中に滴下して析出沈殿として得る
ことができる。ここで、加える過ヨウ素酸又はその塩の
量を変化させることによって分岐マンノース残基と主鎖
グルコース残基とを種々の程度にアルデヒド化すること
が可能であり、それによって所望の量のドキソルビシン
が結合し得る担体とすることができる。その他、反応時
間、反応温度によってもアルデヒド化の程度を制御する
ことが可能である。なお、アルデヒド化についてはInou
e K. et al.,CarbohydrateRes. 123, 305-314(1983)
の記載を参照することができる。以上のようにして得た
酸化カルボキシメチルマンノグルカンへのドキソルビシ
ンの導入は、好ましくはドキソルビシン塩酸塩とホウ酸
緩衝液（ｐＨ８）−エタノール混合溶液中で反応させる
ことによって実施することができる。
ルボキシメチルマンノグルカンは、前記一般式（Ｖ）で
表される単位から構成されるカルボキシメチルマンノグ
ルカンを酸化して開環することによって得ることができ
る。まず、このカルボキシメチルマンノグルカンに酸化
剤（例えば過ヨウ素酸またはそれらの塩）を氷冷下に加
え、室温または室温以下の温度で穏やかに反応させる。
酸化カルボキシメチルマンノグルカンは、例えば反応液
を水に対して透析し、析出助剤としての酢酸ナトリウム
を加えて、エタノール中に滴下して析出沈殿として得る
ことができる。ここで、加える過ヨウ素酸又はその塩の
量を変化させることによって分岐マンノース残基と主鎖
グルコース残基とを種々の程度にアルデヒド化すること
が可能であり、それによって所望の量のドキソルビシン
が結合し得る担体とすることができる。その他、反応時
間、反応温度によってもアルデヒド化の程度を制御する
ことが可能である。なお、アルデヒド化についてはInou
e K. et al.,CarbohydrateRes. 123, 305-314(1983)
の記載を参照することができる。以上のようにして得た
酸化カルボキシメチルマンノグルカンへのドキソルビシ
ンの導入は、好ましくはドキソルビシン塩酸塩とホウ酸
緩衝液（ｐＨ８）−エタノール混合溶液中で反応させる
ことによって実施することができる。
【００１４】
【実施例】本発明を以下に実施例によって更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、以下の実施例においてＭＧ−ＣＭ４、ＭＧ−ＣＭ
５およびＭＧ−ＣＭ６とは、ＰＣＴ／ＪＰ９２／００１
８４明細書に実施例４、５および６としてそれぞれ記載
されている方法に準じて得られたカルボキシメチルマン
ノグルカンである。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、以下の実施例においてＭＧ−ＣＭ４、ＭＧ−ＣＭ
５およびＭＧ−ＣＭ６とは、ＰＣＴ／ＪＰ９２／００１
８４明細書に実施例４、５および６としてそれぞれ記載
されている方法に準じて得られたカルボキシメチルマン
ノグルカンである。
【００１５】実施例１ 酸化カルボキシメチルマンノグ
ルカンの調製 （１）ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３の調製 ６００mgのカルボキシメチルマンノグルカン（ＭＧ−Ｃ
Ｍ４、置換度０．５２）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．９０８ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１５０mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５９２mg
を得た。
ルカンの調製 （１）ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３の調製 ６００mgのカルボキシメチルマンノグルカン（ＭＧ−Ｃ
Ｍ４、置換度０．５２）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．９０８ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１５０mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５９２mg
を得た。
【００１６】（２）ＭＧ−ＣＭ５−ＡＤ３の調製 ６００mgのカルボキシメチルマンノグルカン（ＭＧ−Ｃ
Ｍ５、置換度０．８１）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．７０２ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１００mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５４４mg
を得た。
Ｍ５、置換度０．８１）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．７０２ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１００mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５４４mg
を得た。
【００１７】（３）ＭＧ−ＣＭ６−ＡＤ３の調製 ６００mgのカルボキシメチルマンノグルカン（ＭＧ−Ｃ
Ｍ６、置換度１．０）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．５９０ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１００mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５３７mg
を得た。
Ｍ６、置換度１．０）を１３０mlの水に加え攪拌溶解
後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム１．５９０ｇを含む水溶
液３０mlを加え、２０℃の水浴上で３日間反応させた。
９００μｌのエチレングリコールを加え、さらに２０℃
の水浴上で４時間反応させた。３日間水に対して透析
（ＭＷ cut off ＝１２０００）した後、透析内液を減
圧濃縮し全量を約１００mlとした。フィルター濾過
（０．４５μｍ）後、濾液を９９．５％エタノール−ア
セトン−酢酸ナトリウム飽和メタノール混液（３００ml
−３００ml−７．５ml）と攪拌下に混じ、生じた沈殿を
遠心分離により集めた。沈殿物を９９．５％エタノール
（８０ml，２回）、アセトン（８０ml）、エーテル（１
２０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末５３７mg
を得た。
【００１８】実施例２ 酸化カルボキシメチルマンノグ
ルカン−ドキソルビシン複合体の調製 （１）ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３−ＤＸＲの調製 前記実施例１（１）で得たカルボキシメチルマンノグル
カン（ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３）６００mgを１８０mlの
０．２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解
後、塩酸ドキソルビシン１８０mgを含むエタノール−
０．２Ｍホウ酸緩衝液混液（１２０ml−１２ml）を加
え、室温で２時間反応させた。３Ｍ食塩水６mlを加えた
後、冷エタノール（６００ml）に攪拌下加えた。生じた
赤色沈殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に
溶解した後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−
ｔｙｐｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．
２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２４ml、酢酸ナトリ
ウム飽和メタノール混液６mlと混じ、さらに水を加えて
全量１２０mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６５３mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図１に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１３％であった。
ルカン−ドキソルビシン複合体の調製 （１）ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３−ＤＸＲの調製 前記実施例１（１）で得たカルボキシメチルマンノグル
カン（ＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３）６００mgを１８０mlの
０．２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解
後、塩酸ドキソルビシン１８０mgを含むエタノール−
０．２Ｍホウ酸緩衝液混液（１２０ml−１２ml）を加
え、室温で２時間反応させた。３Ｍ食塩水６mlを加えた
後、冷エタノール（６００ml）に攪拌下加えた。生じた
赤色沈殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に
溶解した後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−
ｔｙｐｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．
２Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２４ml、酢酸ナトリ
ウム飽和メタノール混液６mlと混じ、さらに水を加えて
全量１２０mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６５３mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図１に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１３％であった。
【００１９】（２）ＭＧ−ＣＭ５−ＡＤ３−ＤＸＲの調
製 前記実施例１（２）で得た酸化ＣＭ−マンノグルカン
（ＭＧ−ＣＭ５−ＡＤ３）５５０mgを１６５mlの０．２
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解後、塩
酸ドキソルビシン２５０mgを含むエタノール−０．２Ｍ
ホウ酸緩衝液混液（１１０ml−１１ml）を加え、室温で
３時間反応させた。３Ｍ食塩水５．５mlを加えた後、冷
エタノール（５５０ml）に攪拌下加えた。生じた赤色沈
殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に溶解し
た後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−ｔｙｐ
ｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．２Ｍホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２２ml、酢酸ナトリウム飽
和メタノール混液５．５mlと混じ、さらに水を加えて全
量１１０mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６８３mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図２に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１１％であった。
製 前記実施例１（２）で得た酸化ＣＭ−マンノグルカン
（ＭＧ−ＣＭ５−ＡＤ３）５５０mgを１６５mlの０．２
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解後、塩
酸ドキソルビシン２５０mgを含むエタノール−０．２Ｍ
ホウ酸緩衝液混液（１１０ml−１１ml）を加え、室温で
３時間反応させた。３Ｍ食塩水５．５mlを加えた後、冷
エタノール（５５０ml）に攪拌下加えた。生じた赤色沈
殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に溶解し
た後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−ｔｙｐ
ｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．２Ｍホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２２ml、酢酸ナトリウム飽
和メタノール混液５．５mlと混じ、さらに水を加えて全
量１１０mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６８３mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図２に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１１％であった。
【００２０】（３）ＭＧ−ＣＭ６−ＡＤ３−ＤＸＲの調
製 前記実施例１（３）で得た酸化ＣＭ−マンノグルカン
（ＭＧ−ＣＭ６−ＡＤ３）５５０mgを１６５mlの０．２
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解後、塩
酸ドキソルビシン３００mgを含むエタノール−０．２Ｍ
ホウ酸緩衝液混液（１１０ml−１１ml）を加え、室温で
５時間反応させた。３Ｍ食塩水５．５mlを加えた後、冷
エタノール（５５０ml）に攪拌下加えた。生じた赤色沈
殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に溶解し
た後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−ｔｙｐ
ｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．２Ｍホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２２ml、酢酸ナトリウム飽
和メタノール混液５．５mlと混じ、さらに水を加えて全
量１００mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６０５mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図３に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１１％であった。
製 前記実施例１（３）で得た酸化ＣＭ−マンノグルカン
（ＭＧ−ＣＭ６−ＡＤ３）５５０mgを１６５mlの０．２
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に加え攪拌溶解後、塩
酸ドキソルビシン３００mgを含むエタノール−０．２Ｍ
ホウ酸緩衝液混液（１１０ml−１１ml）を加え、室温で
５時間反応させた。３Ｍ食塩水５．５mlを加えた後、冷
エタノール（５５０ml）に攪拌下加えた。生じた赤色沈
殿物を遠心分離により集め、これを１０mlの水に溶解し
た後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０ＷＸ２（Ｎａ−ｔｙｐ
ｅ、１００ml）カラムに付した。赤色分画を０．２Ｍホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２２ml、酢酸ナトリウム飽
和メタノール混液５．５mlと混じ、さらに水を加えて全
量１００mlとした。フィルター濾過（０．４５μｍ）
後、濾液を冷エタノール９００ml中に攪拌下混じ、生じ
た沈殿を遠心分離により集めた。沈殿物を９５％エタノ
ール（８０ml）、９９．５％エタノール（８０ml）、エ
ーテル（１６０ml）で洗浄した後、減圧乾燥して紫色粉
末６０５mgを得た。その紫外・可視部吸収スペクトルは
図３に示される通りである。λ＝４８５nmにおける吸収
より求めたドキソルビシン含量は１１％であった。
【００２１】抗腫瘍効果の評価試験 ウィスター系の雌性ラット（６週令、１１０ｇ前後）に
ウォーカー２５６ラット乳癌細胞を１×１０7 個鼠径部
皮下に移植し、３日後に、被検化合物として実施例２
（１）で得たＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３−ＤＸＲまたはドキ
ソルビシンを１０mMのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶
解したものを、１群５匹として尾静脈内に投与した。な
お、投与量はドキソルビシン換算で０．６２５、１．２
５、２．５および１０mg／kgとした。癌移植７日後に、
ラットを放血死させ、腫瘍を摘出し、腫瘍重量を測定す
ることにより、抗腫瘍効果を判定した。また、１０mg／
kg投与群では、被検化合物投与後から体重及び延命を測
定して、毒性・副作用の指標とした。投与量と腫瘍重量
の関係は図４に示される通りであった。図４から明らか
なように０．６２５、１．２５、２．５mg／kgいずれの
投与量の場合も、ドキソルビシンと比較して本発明によ
る複合体は優れた抗腫瘍効果を示した。また、ドキソル
ビシン２．５mg／kg投与群よりも、本発明による複合体
１．２５mg／kg投与群の方が優れた抗腫瘍効果を示して
いることから、本発明による複合体はドキソルビシンに
比べ２倍以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなっ
た。１０mg／kg投与群のラットの体重変化は図５に示さ
れる通りである。ドキソルビシン、本発明による複合体
いずれの場合も投与５日後までは体重がやや低下する傾
向が見られ、体重変化はほぼ同様に推移した。しかし、
その後複合体投与群では体重が増加し、複合体投与後８
日後には投与時の体重まで回復した。一方、ドキソルビ
シン投与群では投与５日以降も体重は減少を続け、投与
８日後までに５例中４例までが死亡した。以上の結果よ
り、本発明による複合体にあっては抗腫瘍活性の増大
と、毒性・副作用の減少が認められ、従って本発明によ
る複合体は治療係数の向上した有用な高分子医薬となり
うることが示唆された。
ウォーカー２５６ラット乳癌細胞を１×１０7 個鼠径部
皮下に移植し、３日後に、被検化合物として実施例２
（１）で得たＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３−ＤＸＲまたはドキ
ソルビシンを１０mMのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶
解したものを、１群５匹として尾静脈内に投与した。な
お、投与量はドキソルビシン換算で０．６２５、１．２
５、２．５および１０mg／kgとした。癌移植７日後に、
ラットを放血死させ、腫瘍を摘出し、腫瘍重量を測定す
ることにより、抗腫瘍効果を判定した。また、１０mg／
kg投与群では、被検化合物投与後から体重及び延命を測
定して、毒性・副作用の指標とした。投与量と腫瘍重量
の関係は図４に示される通りであった。図４から明らか
なように０．６２５、１．２５、２．５mg／kgいずれの
投与量の場合も、ドキソルビシンと比較して本発明によ
る複合体は優れた抗腫瘍効果を示した。また、ドキソル
ビシン２．５mg／kg投与群よりも、本発明による複合体
１．２５mg／kg投与群の方が優れた抗腫瘍効果を示して
いることから、本発明による複合体はドキソルビシンに
比べ２倍以上の抗腫瘍効果を示すことが明らかとなっ
た。１０mg／kg投与群のラットの体重変化は図５に示さ
れる通りである。ドキソルビシン、本発明による複合体
いずれの場合も投与５日後までは体重がやや低下する傾
向が見られ、体重変化はほぼ同様に推移した。しかし、
その後複合体投与群では体重が増加し、複合体投与後８
日後には投与時の体重まで回復した。一方、ドキソルビ
シン投与群では投与５日以降も体重は減少を続け、投与
８日後までに５例中４例までが死亡した。以上の結果よ
り、本発明による複合体にあっては抗腫瘍活性の増大
と、毒性・副作用の減少が認められ、従って本発明によ
る複合体は治療係数の向上した有用な高分子医薬となり
うることが示唆された。
【図１】実施例２（１）で得たＭＧ−ＣＭ４−ＡＤ３−
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：１９４μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：１９４μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
【図２】実施例２（２）で得たＭＧ−ＣＭ５−ＡＤ３−
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：１９２μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：１９２μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
【図３】実施例２（３）で得たＭＧ−ＣＭ６−ＡＤ３−
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：２６５μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
ＤＸＲの紫外・可視部吸収スペクトル（濃度：２６５μ
ｇ／ml、溶媒：水）を表す。
【図４】本発明による複合体またはドキソルビシン投与
量と腫瘍重量との関係を表すグラフ。
量と腫瘍重量との関係を表すグラフ。
【図５】本発明による複合体またはドキソルビシンが投
与された担癌ラットの体重変化を表すグラフ。
与された担癌ラットの体重変化を表すグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 権 正 晃 徳 千葉県柏市千代田３−８−７ ヴィヌス 柏203 (72)発明者 加治木 正 洋 千葉県流山市西初石２−928−15 ジュ ネパレス初石301
Claims (3)
- 【請求項１】下記の一般式（Ｉ）で表わされる単位及び
／又は下記の一般式（II）で表わされる単位から構成さ
れる、酸化カルボキシメチルマンノグルカン‐ドキソル
ビシン複合体及びその塩。 【化１】 〔式中、 Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同一又は異
なっていてもよく、それぞれ水素原子又は基−ＣＨ２Ｃ
ＯＯＨを表わし、 Ｗ１及びＷ２はそれぞれ基＝０又はドキソルビシン残基
を表わし、 Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４は、同一又は異なっていても
よく、それぞれ下記式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）又
は式（VI）を表わすが、 ただし、分子が前記一般式（Ｉ）のみからなる場合、分
子中のＡ１及びＡ２の全てが式（III ）を表わすことは
ない。 【化２】 （ここで、 Ｘi1、Ｘi2、Ｘi3、Ｘi4、Ｘi5、Ｘi6、Ｘi7、Ｘi8及び
Ｘi9は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ水素原
子又は基−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、 Ｗi1、Ｗi2、Ｗi3、Ｗi4、Ｗi5及びＷi6は同一又は異な
っていてもよく、それぞれ基＝０又はドキソルビシン残
基を表わすが、 ただし、式（III ）、式（IV）、式（Ｖ）及び式（VI）
のそれぞれにおいてＸi1〜Ｘi9及びＷi1〜Ｗi6の添字ｉ
は１〜４の整数を表わし、Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４の
それぞれを一般にＡｉと記すものとする。）〕。 - 【請求項２】分子量が１万〜２００万である、請求項１
記載の酸化カルボキシメチルマンノグルカン‐ドキソル
ビシン複合体及びその塩。 - 【請求項３】一糖残基あたりのカルボキシメチル基の数
として定義される置換度が０．０１〜３．０である、請
求項１又は２記載の酸化カルボキシメチルマンノグルカ
ン‐ドキソルビシン複合体及びその塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4127499A JP2550261B2 (ja) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | 酸化カルボキシメチルマンノグルカンードキソルビシン複合体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4127499A JP2550261B2 (ja) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | 酸化カルボキシメチルマンノグルカンードキソルビシン複合体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320184A JPH05320184A (ja) | 1993-12-03 |
| JP2550261B2 true JP2550261B2 (ja) | 1996-11-06 |
Family
ID=14961486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4127499A Expired - Lifetime JP2550261B2 (ja) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | 酸化カルボキシメチルマンノグルカンードキソルビシン複合体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2550261B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL424773A1 (pl) * | 2018-03-06 | 2019-09-09 | Nanovelos Spółka Akcyjna | Enkapsulowana polisacharydem antracyklina do zastosowania w leczeniu nowotworów |
-
1992
- 1992-05-20 JP JP4127499A patent/JP2550261B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05320184A (ja) | 1993-12-03 |
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