JP2510724B2 - ホエイたん白濃縮物による動物の宿主抵抗性の改良方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （１）発明の分野 羊の赤血球に対する免疫応答、微生物感染に対する宿
主の抵抗性、腫瘍の発育および老化の進行に及ぼす食餌
ホエイたん白の効果に関する。

ホエイおよびホエイたん白は古来から栄養目的に対し
利用されている。さらに、ホエイは各種疾病の治療に対
し人々および古代の医薬として推奨され、一例としてホ
エイたん白食餌によるハムスターの終生給餌は全く説明
を加えずに長寿を助長することが示された。ホエイ給餌
は特異的に羊の赤血球に対するマウスの免疫応答、肺炎
球菌に対する抵抗性を増進し、結腸癌の発生を抑制し、
その栄養特質と無関係に老化の進行を遅延させることを
最初に対照試験でわれわれは示した。

ホエイたん白給餌による免疫応答の可能な機作に対す
る調査は、ホエイたん白が癌に対する感受性、老化病お
よび環境作用物質の一般的解毒を含む保護的性質の一層
広汎な生物学的効果に寄与できる可能性への誘導をわれ
われに示した。すべてのこれらの条件はスーパーオキシ
ドラジカルおよび他の有毒作用物質に対し保護的効果を
作用させる遍在要素であるグルタチオンの変化に何らか
で関連するものと思われる。われわれの研究は、免疫応
答の増進の観察はカゼイン又はシステインの豊富なカゼ
イン食餌を給餌したマウスに比較して、ホエイたん白を
給餌した免疫性を与えたマウスの脾グルタチオンの一層
大きい生産に関連することを示した。通常以上のグルタ
チオンレベルの誘導における食物システインの効果は遊
離システインとしてよりもホエイたん白て受け渡しされ
る場合一層大きい。グルタチオンは相当するカゼイン食
餌を給餌したマウス又はpurina Mouse Chowに比較し
て、ホエイたん白給餌の老令マウスの心臓および肝臓に
一層高レベルで見出された。老令マウスでは食物ホエイ
たん白は老化病の発生を遅延させることがわかつた。

（２）規定 （ａ）ホエイたん白はpH4.6および20℃でカゼインを沈
澱させた後「乳清」又はホエイに溶解して存する乳たん
白群である。牛乳の主要ホエイたん白は量の多いものか
らベーターラクトグロブリン（βＬ）、アルフアーラク
トアルブミン（αＬ）、免疫グロブリンおよび乳清アル
ブミン（SA）である。（７） ホエイからこのたん白混合物の工業的分離生成物は
「ホエイたん白濃縮物」（W.P.C.）又は分離物と呼ばれ
る。われわれの試験で使用したWPCは牛乳からのもので
ある（LACPRODAN−80,DENMARK PROTEIN A.S）。ラクト
アルブミン（Ｌ）はW.P.Cを規定するために伝統的に使
用される術語である。

（ｂ）Ｃ＝カゼイン、 （ｃ）SRBC＝羊赤血球 （ｄ）PFC＝血小板形成細胞（脾）： 脾のPFCの計算はSRBC注射に対する液素性免疫応答を
算定するために使用される、 （ｅ）GSHグルタチオン（γ−グルタミル−システイニ
ル−グリシン）、 および （ｆ）特記しない限り、試験食蝕の規定処方はたん白の
タイプのみを変えた。

（ｇ）牛乳のホエイは１につき約6gのたん白、大部分
の乳糖、ミネラルおよび水溶性ビタミンを含有する。

ホエイたん白濃縮物の適当な起源は商品名PROMODとし
て既知の物質であり、これはROSS Laboratories,a Divi
sion of Abbott Labora−tories U.S.A.により粉末形で
供されるたん白補充物である。これは高品質たん白の濃
縮源であり、これはたん白要求の増加した人、又は通常
の食事ではタン白要求を満たすことができない人に対し
特別のたん白を供するのに有用である。これはホエイた
ん白濃縮物および大豆レシチンを含有する。次の栄養素
を有する： 栄養素 たん白5gについて（１すくい） たん白 5.0g 脂肪 0.60gを超えない用量 炭水化物 0.67gを超えない用量 分 0.60gを超えない用量 カルシウム 23mgを超えない用量（1.15ミリ当量） ナトリウム 13mgを超えない用量（0.57ミリ当量） カリウム 65mgを超えない用量（1.66ミリ当量） 燐 22mgを超えない用量 カロリー 28 これは100gたん白につき次の代表的アミノ酸組成を有
する。100gのPROMODたん白は約105gのアミノ酸を与え
る。

100gたん白につき代表的アミノ酸組成 必須アミノ酸： ヒスチジン,1.9g イソロイシン,6.2g ロイシン,10.8g リジン,9.3g メチオニン,2.2g フエニルアラニン,3.6g スレオニン,7.3g トリプトフアン,1.9g バリン,60g 非−必須アミノ酸：アラニン,5.3g アルギニン,2.6g アスパラギン酸,11.2g システイン,2.6g グルタミン酸,18.2g グリシン,2.1g プロリン,6.5g セリン,5.6g チロシン,3.4g 食餌： われわれの試験（の大部分）で使用した規定処方餌料
のいくつかのビタミン濃度は第１表（餌料１）に示す。
餌料は次のように製造する:20gの選択した純粋たん白、
56gの生成物80056、たん白を含まない食物粉末（Mead−
Johnson co.Jnc.,U.S.A.）、18gのコーン澱粉、2gの小
麦麸、0.05gNutramigen、ビタミン−鉄プレミツクス（B
ristol−Myers,Ontario,Canada）,2.65gKCl,0.84gNaC
l。特記しない限り、各種精製餌料の唯一の変化はたん
白のタイプであつた。

（３）先行研究 酪農製品は栄養のすぐれた起源として広く使用され
る。さらに、醗酵全乳（ヨーグルト）はいくつかのタイ
プの腸感染種の治療に有利である効果に対し請求がなさ
れている。規定された培養酪農生成物に基づくある種の
食事療法はソビエト連邦のある地域（グルジアなど）に
おける長命期待と関連するといわれる。

はるか以前から、乳清又はホエイに対するラチン（la
tin）,serum lactisは多数の不快さの治療に対して病人
に投与された。1603年にBaricelli（７）は牛乳又は山
羊乳乳清を、時折蜂蜜又はハーブと混合して治療に使用
することについて報告した。ホエイにより治療する疾病
のスペクトルは黄疸、皮膚の感染病変、膿を分泌する性
器−泌尿管系の感染病変、淋病、てんかん、四日熱およ
び異る起源の他の熱病を含んだ。実際に、これらの疾病
の大部分の公分母は敗血症性状態であると思われる。古
代および中世代の双方の医師はホエイ治療を数日間にわ
たつて行なうべきことに同意したが、見解の差は所定の
１日量に関して存在すると思われた。Galen,Hippocrate
sおよびDioscorideは12オンスのラチン リブラス（lib
ras）２つを最少１日量に、そして胃の許容度に従つて
１日に５つのリブラスまでを主張した。これは１日につ
き１〜2lのホエイを表わす。他方、Baricelliは彼の時
代の傾向を反映して、空の胃に用量を分けて与えて１日
につき１リブラに所定量を限定した。

翌年に、Costaei（７）は気管支肺炎および高熱を有
する下痢を含むいくつかの無関係の症候群に対しホエイ
の効力について記載した。不幸なことに、後の長い論文
で著者は乳および乳清による治療間の差を明白に区別す
ることができなかつた。

それ以来、17世紀、18世紀および19世紀を通してヨー
ロッパで刊行された多数の論文はホエイの治療的使用を
主唱した。19世紀半ば、科学的医薬の夜明けに刊行され
たイタリーの教科書では、興味ある区別が全乳と乳清間
になされている。乳は胃腸管の狭窄を有する患者に特に
栄養物として先づ第一に推奨される。この点で著者は、
悪液質および結核の当時普及した「乳治療」は乳の栄養
的性質にのみ基づくことを強調する。第二に、乳は毒物
治療に処方された。何故なら乳成分は摂取した毒物を多
分中和するであろうからである。第三に、乳治療法は胃
腸管の潰瘍を被覆し、和らげるためにこの流体の主張さ
れた能力に対し提案された。

他方、乳清はその認められた低栄養性にも拘らず、肺
炎、腸管および尿性器系統の急性炎症の治療に主唱され
た。最後に、著者は神経系統の不調の治療にはホエイは
無効であることを強調した。

ホエイ（serum lactis）および全乳間の根本的差は、
前者ではカゼイン、カゼイン結合カルシウムおよびホス
フエート、大部分の脂肪および脂溶性ビタミンをほとん
ど含まないことである。ホエイ中の「ホエイたん白」の
実際の濃度は乳中のものより約５％高いだけである。従
つて、ホエイおよび乳間の定量的差はホエイ治療の主張
された治療効果に鍵因子を表わすとは解釈できなかつ
た。何故なら、何かあるとするなら、これらはホエイ中
にある重要な栄養素を欠くことを意味するからである。
われわれのデータ7,14は「serum lactis」により徹底的
治療の推定利点に対し科学的背景を供することができ
る。

WPCの免疫増進効果においてホエイたん白濃縮物の特
徴的アミノ酸プロフイルの重要性をわれわれは示した。
カゼインは牛乳の全たん白含量の80％を表わすが、WPC
は20％に過ぎない。従つて、カゼインからホエイ中にWP
Cを分離することは、決定的品質の変化を表わすが、考
えられることである。何故ならこれは一度消化方法がす
べての摂取たん白から遊離アミノ酸を遊離すると、ホエ
イたん白のアミノ酸プロフイルはカゼインのものにより
変更されないからである。（７） 臨床試験は全く報告されていないが、いくつかの興味
ある情報はヒトの被験者に対するデータから集めること
ができる。

新生児の栄養におけるホエイたん白： 乳児の給与研究はホエイの優勢な処方は離乳児でカゼ
インの優勢な処方8,9より代謝的にすぐれていることを
示す。

長寿： NebraskaのEppley Cancer Centerで行なつた研究10,1
1は４週令から給餌して20週にわたつて測定した雌およ
び雄の生存ハムスター（自然病に対する抵抗性）は、20
g/100gのメチオニンおよびシステイン補足カゼイン餌料
と比較して20g/100g（g/100g）のWPC餌料の場合もつと
も良かつた。体重増加は双方の群で同一であつた。終生
給餌研究では、10,20および40gWPC/100g餌料を給与した
雌および雄ハムスターの平均および最大寿命は、市販の
実験室餌料（各種起源からのたん白を24％と見積もる）
を給与したものと比較して増加した。生存動物は20％WP
C餌料で最良であつた。雄では寿命は50％だけ増加し
た。餌料摂取、最高体重および長寿間に有意の関係は全
く記録されなかつた。

（４）われわれの研究 免疫系に対するアミノ酸摂取の効果のわれわれの興味
は数年前に行なつた観察により喚起された（１）。われ
われはカゼインを複製した遊離アミノ酸混合物を含有す
る規定処方餌料をマウスに給与した。マウスの別の群に
は同じ餌料を給与したが、フエニルアラニンおよびチロ
シンを適度に制限し、非−必須アミノ酸混合物に相当す
る増加をして補つた。第２群のマウスはカゼインに等し
い混合物又はPurina monse chowを給餌したマウスと同
じ割合で体重が増加した。しかし羊赤血球の投与では、
これらのマウスはPurina又はカゼインに等しい餌料を給
餌したマウスより羊赤血球に対し一層覆い抗体および血
小板形成細胞を産生した。

こうして明らかになつた新しい概念、すなわち餌料の
アミノ酸プロフイルの変化は宿主の栄養状態に及ぼす任
意の本組織効果とは無関係に免疫応答に影響を与えるこ
とができる。しかしさらに重要なことは、アミノ酸プロ
フイルの変化、すなわち、たん白のタイプは「正常」の
応答を表わすと伝統的に考えられたもの以上に液素性免
疫応答を増進すると想像できる。

次に栄養的に適当な餌料の異るタイプのたん白が免疫
応答に及ぼす効果を評価した。20％又は28％のラクトア
ルブミン（WPC）を含有する処方餌料を給餌したマウス
は各種起源から約22％のたん白を含有し、同様の栄養効
率を有するPurina mause chowを給餌したマウスより羊
赤血球に対し一層多い血小板形成細胞を産生することが
わかつた。ラクトアルブミンの免疫増進効果は20％濃度
で最高であつた（２）。20g正味たん白/100g餌料は免疫
系に及ぼすたん白のタイプの効果を評価する好適方法を
供する。このレベルでたん白の大部分は成長中のマウス
に対しすべての不可欠アミノ酸の最小１日所要量を供給
する。そしてこれはアミノ酸分配が妥当にではなく調査
中に変動するので重要である。

次の研究では食物ラクトアルブミン（ホエイたん白）
の効果を同じ栄養効率を有する処方餌料で他の精製たん
白の効果と比較した。C3H/HeNマウスの免疫応答性に対
する餌料のラクトアルブミン（Ｌ）、カゼイン（Ｃ）、
大豆（Ｓ）、小麦（Ｗ）たん白およびPurina rodent ch
ow（飼育餌料）の傾斜料の効果を羊赤血球（SRBC）およ
び馬赤血球（HRBC）に対する特異的液素性免疫応答を測
定することにより調査した。これらの食餌の栄養効率は
正常で、同様であった。

WPC餌料を給与したマウスの免疫応答は相当すＣ餌料
を与えたマウスの応答よりほとんど５倍高いことがわか
つた。C,S,およびＷ餌料を給与したマウスの液素性免疫
応答は実質的に飼育餌料を給与したマウスの応答より低
いが、Ｌ餌料が給与したマウスの応答より高かつた。す
べての試験たん白の上記免疫効果は20g/100g濃度で得ら
れ、餌料の100g中のたん白濃度を30gおよび40gにしても
それ以上の増加効果は得られなかつた（４）。

Ｌ〔ホエイたん白（W.P.）〕は限定数のたん白と比較
試験を行なつたため、ホエイたん白餌料を給与した５つ
の（５）マウスの無関係血統で観察した液素性免疫応答
の増進は絶対的表現でホエイたん白による真の免疫増進
か、又は他の試験餌料たん白による免疫低下によるもの
かをその時点で確かめることができなかつた。

実際に、ホエイたん白混合物に対し「対照」として使
用するこれらの少数の食物たん白（カゼイン、大豆およ
び小麦）は次に試験する他の精製食物たん白のすべてと
比較した場合、餌料中の20％濃度で栄養的に適切であ
り、同様であるが、免疫抑圧性であつたことを回顧して
述べることができる。

事実、次にホエイたん白を、大部分市販品として入手
できる精製食物たん白（カゼイン、大豆、小麦、コー
ン、卵白、牛肉、魚たん白、ガンマグロブリン、ベータ
ーラクトグロブリン、アルフアーラクトアルブミン、血
清アルブミン、spirulina maxima又はscenedesmus alga
eたん白）に対し試験した。そして実際にホエイたんし
白を給餌したマウスは異種抗原（SRBC）に対し最高の免
疫応答を示すこがわかつた（12）（第１図）。これらの
たん白は20g/100g餌料濃度で栄養的に同様で、適当であ
る。

特許により保護を希望するわれわれが新しく発見した
ホエイたん白の免疫増進性および宿主の抵抗助長性はこ
のたん白の即知の栄養特性には関しないと結論した。実
際に、われわれの試験で使用した20gたん白/100g餌料濃
度のホエイたん白の栄養性は他の試験たん白のものと同
じである。

図面の簡単な記載 本明細書の一部を形成する図面において、第１図およ
び第２図はSRBCにより免疫性を与えられた後のPFCのピ
ーク生産を示す当日の血小板形成細胞−脾（PFC）を示
す。

第３図は28％ホエイたん白餌料により記録された免疫
応答の増加を示す。

第４図はSRBCにより免疫を得た後のGSHに対するホエ
イたん白の効果を示す。

第５図および第６図はそれぞれ、等しいＣ餌料又はCP
urina Mouse Chowを給与したマウスと比較してホエイた
ん白（WP）餌料を給与した老令Ｃ−57BL/GNIAマウスで
観察した心臓および肝臓のGSHレベルを示す。

第７図は７ヶ月間Purina laboratory Chow,カゼイン
およびホエイを給与したマウスの相対的脂肪率を示す生
存カーブである。

第８図は第１表に示す各種ビタミンレベルを有する餌
料を給与したマウスの羊赤血球（SRBC）に対する血小板
形成細胞（PFC）応答に対する26日の餌料治療の効果を
示す。

現在および以前の研究を示す引用リストの引例３で示
すように、12％ホエイたん白（ラクトアルブミン）およ
び28％ホエイたん白餌料間に身体成長に有意な差は見ら
れないが、カゼイン含量を12％から28％に増加した場
合、身体成長にも免疫応答にも影響を与えないカゼイン
餌料の場合とは異なつて、免疫応答の劇的増進が28％ホ
エイたん白餌料について記録されたことを実証できる。
実際に、改良された結果は約20％でカーブの平坦域に達
するらしいこがわかつた。第３図は効果を例示する。第
３図では、５×10⁶羊赤血球により免疫法後５日の血小
板形成細胞（PFC）数／脾に対するラクトアルブミン
（ホエイたん白）加水分解物（無地棒）又はカゼイン加
水分解物（斜線棒）による３週の餌料処理の効果を示
す。各値は10匹のマウス±SEM.28％Ｌ餌料対12％Ｌ餌料
の平均値：スチユーデントｔ−試験によりＰ0.01を表
わす。マウスの両血統に対し二次元分散分析（Ｆ試験）
によりたん白の品質効果（Ｌ対Ｃ）は非常に有意であ
る。Ｐ0.001。

リストの参考12で示すようにSRBCに対する免疫応答に
大きな差があるに拘らず、20g/100g餌料濃度で各種精製
たん白を給与したマウスのうち餌料消費、最終体重およ
び血清たん白には全く差が認められないことは明らかで
ある。（第２表参照）。

第２表、引例３において、データは異る餌料の栄養効
率で示す。Purina chowおよび12又は28％ＣおよびＬ餌
料を給与したマウスは3.5g〜3.8g/24時間の範囲の餌量
消費量と畧々同量だけ体重を増加した。血清たん白値お
よび白色細胞数で餌料群間に有意の差は全く認められな
かつた（データは示さず）。

ホエイたん白餌料を給与したマウスの自然死はカゼイ
ン餌料又はPurina（第７表）を給与したマウスの自然死
に比較して発現の遅れることは３つの餌料群間の餌料消
費又は体重における何らかの差と関連しない興味ある観
察をした（第８表）。

第１図は10⁶SRBCによる免疫を得た後のPFCのピーク生
産を示す日の血小板形成細胞−脾（FPC）を示す。20g/1
00g餌料のラクトアルブミン（Ｌ）、カゼイン（Ｃ）、S
pirulina maximaたん白（SP）、大豆たん白（Ｓ）、小
麦たん白（Ｗ）、Scenedesmusたん白（SC）、コーンた
ん白（CO）、卵アルブミン（Ｅ）、牛肉たん白（Ｂ）、
魚たん白（Ｆ）、Purina mouse chow（Ｐ）か、又は20g
/100g餌料の50％Ｌおよび50％Ｓ（L/S）、又80％Ｌおよ
び20％Ｃ、又は20％Ｌおよび80％Ｃ（L/C）を含有する
混合物による２週の餌料治療効果。各値は平均±SDを表
わす。統計上の有意差に対し明細書（引例12）参照。Ｌ
＝ホエイたん白濃縮物。

第２図は10⁶SRBCによる免疫後のPFCのピーク生産を示
す日の血小板形成細胞／脾（FPC）を示す。20g/100g餌
料のホエイたん白濃縮物（WPC）、カゼイン（Ｃ）、ホ
エイたん白濃縮物加水分解物、カゼイン加水分解物、ベ
ーターラクトグロブリン（βＬ）、アルフア−ラクトア
ルブミン（αＬ）、ガンマーグロブリン（γＧ）、又は
牛血清アルブミン（SA）による３週の餌料治療効果。各
値は平均±SDを表わす。

餌料のホエイたん白の免疫増進性効果の原因要因 われわれの研究はＣに比較してWPCの免疫増進効果は
これらの２種のたん白をパンクレアチン加水分解物（遊
離アミノ酸および1000より小さい分子量を有するオリゴ
ペプチド）により処方餌料で置換する場合維持されるこ
とを示す（第２図）（7,12）。われわれの結果もWPC混
合物の４つの所要なたん白成分のいずれか１つを含有す
る餌料を給与したマウスは相当するホエイたん白混合物
を給餌したマウスのものより劣るSRBCに対するPFC応答
を発現したことを示す。こうしてWPCの観察した免疫増
進効果はすべてのそのたん白成分の寄与に依存すると結
論できる。

これらの理由に対しこの現象は乳たん白アレルギー又
は経口免疫法の何らかの他の発現には関連しないと仮定
できる。

餌料のホエイたん白の免疫増進効果の原因となる機作 過去数年にわたつてわれわれは直接又は間接に液素性
免疫応答性に影響することができる餌料たん白のタイプ
により誘導される変化を確認しようと試みた。免疫刺激
を受けないマウスでは餌料のたん白タイプは試験した多
種多様のパラメータにほとんど、又は全く作用を有しな
いことがわかつた。こうして、身体の成長、餌料消費、
血清たん白、ミネラルおよび微量金属、循環白血球およ
び特に骨髄Ｂリンパ球の発生はすべて通常の限度内にあ
つた（３−７）。これらの発見は20g/100g餌料濃度で、
たん白は成長中のマウスに対し必須アミノ酸の適当な１
日供給量を供することを確証する。たん白タイプの唯一
の有意の効果は血漿アミノ酸プロフイルの変化であるこ
とがわかつた。これは特にシステインを除いて、摂取た
ん白のアミノ酸組成に本質的に従がうことである。（第
３表，第４表）。

WPCのシステイン含量が８倍高いにも拘らず、WPC餌料
給餌マウスのシステインの血漿レベルはＣ餌料給餌対応
マウスのものと変らないという発見により特に興味をそ
そられる。過剰のシステインの運命は興味のある問題で
あつた。餌料システインはリンパ球の増殖に必要である
グルタチオン（GSH）の合成に対し速度限定基質であ
る。リンパ球の酸化還元状態は球状GMPの細胞間濃度を
調整することができ、環状GMPはリンパ球増殖に緊密に
含まれることが知られている。

われわれの研究は免疫応答の観察された増進はカゼイ
ン又はシステインを強化したカゼイン餌料を給与したマ
ウスと比較してホエイたん白を給与した免疫マウスの脾
グルタチオンの生産が一層大きいことと関連することを
示した。脾グルタチオンレベルの誘導における餌料シス
テインの効果は遊離システインとしてよりもホエイたん
白で供される場合一層大きい（14）（第４図参照）。

ホエイたん白給餌による免疫増進の可能な機作に対す
る探索はホエイたん白が癌に対する感受性、老化病およ
び環境作用物質の一般的解毒を含む保護的性質を有する
一層広汎な生物学的効果に寄与できる刺激的可能性をわ
れわれに示した。すべてこれらの条件はスーパーオキシ
ドラジカルおよび他の有毒物質に対し保護的効果を作用
させる遍在的要素であるグルチタオンの低下に何らかで
関連していると思われる。

心臓および肝臓のGSHレベルの増加は同等のＣ餌料又
はPurina Mouse Chowを給与したマウスと比較してホエ
イたん白（WP）餌料を給与したＣ−57BL/GNIA老令マウ
スで観察された。（第５図、第６図）、（引例16）。

結論として上記すべての実験状況でホエイたん白の免
疫増進効果はその栄養的性質に依存しないことを実証し
た。

ホエイたん白餌料および細菌感染 われわれの研究は餌料たん白のタイプが液素性免疫応
答に影響することを示したので、次に肺炎球菌感染に対
するマウスの抵抗性に対する餌料のWPCの効果を調査し
た。この感染に対する獲得免疫は液素性免疫応答に大き
く依存する。20gWPC/100g餌料を含有する餌料を給餌し
たC3H/He3マウスは同様の栄養効率を有する20gC/100g餌
料を給餌したマウスと比較してStreptococcus pneumoni
aeタイブ３によるi.v.感染後の生存数の改良を示した
（７）（第５表）。

われわれの各種研究に基づいて、Streptococcus pneu
moniaeタイプ３による感染に対しホエイたん白餌料を給
餌したマウスの抵抗性の増強は感染時の動物の体重およ
び感染前に増加した体重（動物は感染前２週間餌料を給
餌した）に関係のないことが示された。これに関連して
引例は第２表および他の場所で引例７に対しなされる。

ホエイたん白餌料および実験的腫瘍 20gWPC/100g餌料は同じ栄養効果を有する20gC/100g餌
料又はPurina mouse chowと比較してねずみの結腸にジ
メチルヒドラジン（DMH）により誘発される腫瘍の頻度
および大きさを有意に抑止することをわれわれは最近観
察した。これは発癌物質に長期間暴露された後発現する
高免疫原タイプの腫瘍である。DMH−誘発結腸腫瘍は病
変のタイプおよび化学療法応答の特徴に関する限りヒト
に見出されるものと同じらしい。WPC給餌マウスの液素
性免疫応答の増進の記載（異型赤血球）はこの免疫原タ
イプの腫瘍（15）に対しマウスに給餌したWPCの認めら
れた抵抗性に対する免疫学的機作および第６表を実証す
る。

３つの餌料群（ホエイたん白、カゼイン餌料およびPu
rina）間の体重カーブの類似性は他のマウス血統におけ
る研究と一致することは注目すべきである（２−7,12−
14）。この効果は顕著で、腫瘍の発現における観察され
た差異に対し通例の栄養的因子を除外することは明らか
である。引用は同封リストの引例15に対しなされる。

老化 組織グルタチオン（16） 雄C57/BL/6NIAマウスは17ケ月加令から20ケ月加令の
３ケ月後にぎせいにするまで20gホエイたん白/100g餌
料、又は20gカゼイン/100g餌料又はPurina mouse chow
を自由に給餌した。GSH（グルタチオン）含量はカゼイ
ン餌料又はPurina給餌対応マウスと比較してホエイたん
白給餌マウスの肝臓および心臓で一層高いことがわかつ
た（第５図および第６図）。Purina laboratory chowを
給餌したマウスの心臓および肝臓におけるGSH値は17ケ
月および20ケ月加令でほとんど同一であつた。年令関連
減衰はこの期間中には注目されない。さらにPurina給餌
マウスの17ケ月および20ケ月加令時のGSH値は10週令マ
ウスのものと同じである。実際にホエイたん白餌料は３
ケ月後心臓および肝臓のGSH含量を「通常」値以上に増
進すると思われる。ホエイたん白餌料、カゼイン餌料又
はPurina餌料を給餌したマウスの３ケ月にわたる平均±
SD体重変化は初めの重量の％として表わして、それぞれ
98.90±17.7、100.38±15.99および99.30±18.50であつ
た。しこのように各種餌料群間の体重に有意差は全く注
目されない。餌料消費も、ホエイたん白餌料群の3.4±
0.3g/24時間からPurina給餌マウスの3.8±0.4g/24時間
に変化するが普通である。

生存研究（16） 雄c57BL/6NIAマウスは病原体を含まない環境で老衰の
初めに20gWPC/100g餌料を自由に給餌した。21ケ月加令
（ヒトの55才に相当する）から死亡率が55％に達する28
ケ月加令（ヒトの80才に相当する）まで７ケ月の観察期
間にわたつてPurina laboratory chowを給餌したマウス
と比較して死亡率が遅れることを示す。たん白のタイプ
のみがホエイたん白餌料と異る規定処方対照餌料（20g
カゼイン/100g餌料）を給餌したマウスの平均生存期間
はPurina給餌対照マウスのものとほとんど同一である
（第７図、第７表）。餌料群間に試験中一貫して平均体
重変化に有意差は認められない（第８表）。ホエイたん
白餌料群の平均餌料消費は2.8±0.4g/24時間で、カゼイ
ン餌料群では3.0±0.4g/24時間であつた。Purina粉末の
より大量のこぼれ落ちる量はこの特別の群における餌料
消費の現実的評価を実質的に妨害する。ビタミンＥのよ
うな他の抗酸化剤は抗酸化剤の合成又は吸収に異常に不
足する動物で主として有効であることが示されたが、ホ
エイたん白餌料は組織GSHの一層の高レベルを促進し、
通常の野性型動物の老化病の初まりを遅延させる重要な
要素を表わすことがわかる。これらの長命研究では、老
化病および組織グルタチオンに対するホエイたん白の効
果は栄養素としてのホエイたん白の品質には関係しな
い、これは20gWPC/100g餌料濃度で他の試験たん白のも
のと同じであることが明らかであることを強調すること
が重要である。同様の結論はSRBCに対するPFC応答、感
染に対する抵抗性および腫瘍の発現についてのホエイた
ん白餌料効果に関するわれわれの以前の研究において得
ている。

ホエイたん白濃縮物餌料の免疫増進効果におけるビタミ
ンB₂，B₁の相剰的役割 第23〜第26頁セクシヨン30および引例14において脾細
胞GSHに及ぼすホエイたん白の効果および脾GSHおよびSR
BCに対するPFC応答間の関係が論議される。

ホエイたん白はシステインの最適起源を表わすが、GS
H、ビタミンB₂およびB₁の生合成に対する速度限定物質
はGSHレドツクス サイクルの機能における重要な要素
である。

組織のグルタチオン（GSH）の状態は主として還元状
態（GSH:GSSG,250）で維持され、これはNADP⁺/NADPHレ
ドツクス ペアに連結した有効なGSHパーオキシダーゼ
およびレダクターゼ システムにより達成される。内因
性有毒H₂O₂はGSHがGSHパーオキシダーゼにより触媒され
GSSGに酸化することによりH₂Oに還元される。細胞NADPH
のぎせいで、GSSGはNADPH:GSSGレダクターゼによりGSH
に効果的に還元され、こうしてチオールバランスを維持
する。その結果、GSSGレダクターゼは内因性活性酸素種
による酸素毒性に対し細胞を保護する大きな能力を有す
る。

ビタミンB₁（チアミン）はNADPHおよびペントースを
与えるペントースホスフエート側路のトランスケトラー
ゼ反応に含まれる。

ビタミンB₂（リボフラビン）：リボフラビンの酵素誘
導体、フラビンモノニユクレオチド（FMN）およびフラ
ビンアデニンジニユクレオチド（FAD）はリボフラビン
から結果として合成される。ビタミンB₂欠乏動物はGSH
レダクターゼのようなFMNおよびNAD−必要酵素の活性が
著しく減少することを示す。

この意味でこれらすべての水溶性ビタミンは天然にホ
エイに含まれ、われわれの実験に示されるように、ホエ
イたん白摂取量が一層高レベルのGSHを合成し、組織に
貯蔵される場合、特にGSHレドツクスサイクルの最適機
能に対し本質的役割を演ずることが想像できる。

われわれの研究（第８図）は推奨許容度（第１表、餌
料5,6）より僅かに高いビタミンB₁，B₂の餌料レベルは
餌料のホエイたん白濃度の免疫増進効果に寄与すること
を示す。ホエイたん白は、限定物質（システイン）の最
適生物利用性を供することによりGSHの合成および貯蔵
を増強する。他方、通常より高いビタミンB₁およびB₂の
摂取量は通常より高いレベルのGSHレドツクスサイクル
を維持するために必要であり、こうしてSRBCに対する通
常より良好な免疫応答が発現できる。ホエイたん白給餌
マウスにおける各ビタミンの個々の効果は限定される。
しかしホエイたん白給餌マウスの免疫応答に及ぼすこけ
らの相剰効果は明らかである（第８図、餌料5,6餌料
１）。同じビタミンはカゼイン餌料給餌マウスの免疫応
答に対し無効である。これらすべての水溶性ビタミンは
ホエイに含まれるが、単一のもつとも有効なビタミン、
リボフラビンの主要な天然起源はホエイであり、ホエイ
に対しビタミンB₂はその特徴的相を与えることを注目す
ることは興味がある。

結論として、ビタミンB₁の餌料摂取量、特に推奨１日
許容量以上のB₂摂取量はホエイたん白給餌動物の免疫応
答の増進発現に寄与する：ビタミンB₂＋B₁は最強効果を
生ずると思われる。これらのビタミンの摂取量はこれら
のレベルか、又は僅かに低い場合、身体成長および動物
の外観は正常であるが、免疫挑戦に対する応答はホエイ
たん白給餌マウスの最高可能性以下である。

胃では、ホエイは胃液の作用により乳から分離され
る。水溶性ビタミンおよびホエイたん白の通過および吸
収は凝固乳（カード）のたん白（カゼイン）およびビタ
ミン成分のものより一層早く行なわれることは想像でき
る。従つて、ホエイたん白およびビタミンB₁およびB₂を
含むビタミンは他の乳成分のものとは異なる速度で体循
環に入り、免疫系およびGSHレドツクスサイクルに対し
相剩効果を表わすことができる。

本出願に記載したホエイたん白餌料の免疫増進性およ
び他の特異的生物性質は熱に不安定で、たん白の未変性
（自然のままの）状態（これは烈しい振盪、溶媒、極端
なpH変化などにより影響されうる）に依存し、変性方法
により変らないその栄養特質には無関係である。

変性している大部分の他の商業的に入手できるホエイ
たん白と異り、デンマークで製造した（Lacprodan−8
0）、われわれの試験で使用したホエイたん白は90％が
未変性である（第８図のU.D.）。このたん白は加熱下に
その遊離スルフヒドリル基をさらすことにより変性する
最大傾向を示す（17）。非常に暑く、湿度のある気候に
（1988年夏）デンマークからアメリカを経て長期の表面
輸送後受取つたW.P.C.のバツチを使用して試験を行つた
場合、W.P.C.の免疫増進性は失なわれた（第８図、2d−
8d）。これらの試験は、ビタミンB₁およびB₂の相剩的役
割を餌料の免疫増進効果で示すが、多分部分変性したホ
エイたん白の負の効果も示す。以前の研究はホエイたん
白餌料の免疫増進性は最適の細胞間輸送およびグルタチ
オン合成に対する限定前駆体であるシステインの利用性
に多分関連するであろうことを示した（14）。このたん
白の部分変性はその栄養的特質には何らの影響なく、シ
ステインの細胞間輸送およびGSH合成に対し決定的なシ
ステイン結合を変えることによりその特異的生物学的性
質の損失をもたらすことは考えうることである。

結論として、「Denmark Protein」Lacprodan−80とし
て製造れたホエイたん白濃縮物の製造は1985年以前に又
は比較できる適当な様式で製造され、求める生物学的活
性を産出した。この活性はわれわれの試験で使用したPE
C分析と直接相関する。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図はSRBCにより免疫性を与えられた後
のピーク生産を示す日のPFC/脾を示す。 第３図は28％ホエイたん白餌料により得た免疫応答の増
加を示す。 第４図はSRBCによる免疫法後のGSHに対するホエイたん
白の効果を示す。 第５図および第６図はホエイたん白餌料、Ｃ餌料又はPu
rina mouse chowを給与したマウスの心臓および肝臓のG
SHのレベルの比較を示す。 第７図はPurina、カゼイン及びホエイを７ケ月間給餌し
た時の相対的死亡率を示す。 第８図は各種ビタミンレベルを有する餌料を給餌したマ
ウスのSRBCに対するPFC応答に対する26日の餌料治療効
果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 パトリシア エル．コングシャブン カナダ国 ケベック，セント ランバー ト，メープル アベニュー 332 (56)参考文献 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕ ｔｖｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ，113，Ｎｏ. ７（1983），Ｐ1415−1421 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕ ｔｖｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ，115，Ｎｏ. 11（1985），Ｐ1409−1417 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍｏｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ，32，Ｎｏ. ４（1982），Ｐ363−366

Claims (9)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】治療的にまたは予防的に有効量の、実質的
   に未変性のホエイたん白濃縮物と、所望ならば一または
   それ以上の薬学的に許容される担体とを含んでなる、ほ
   乳類の器官のグルタチオンの合成割合、補充割合、およ
   び／または濃度を増加させるための医薬組成物。
2. 【請求項２】ホエイたん白濃縮物が牛ホエイたん白濃縮
   物である、請求項１記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】ホエイたん白濃縮物が山羊または羊ホエイ
   たん白濃縮物である、請求項１記載の医薬組成物。
4. 【請求項４】ホエイたん白濃縮物が牛、山羊、または羊
   ホエイたん白濃縮物の混合物である、請求項１記載の医
   薬組成物。
5. 【請求項５】ホエイたん白濃縮物がヒトホエイたん白濃
   縮物である、請求項１記載の医薬組成物。
6. 【請求項６】ホエイたん白濃縮物が、その未変性の程度
   が95％以上のものである、請求項１記載の医薬組成物。
7. 【請求項７】ホエイたん白濃縮物の活性が熱不安定であ
   り、かつホエイに含まれるたん白の未変性状態に依存し
   ているものである、請求項１記載の医薬組成物。
8. 【請求項８】１日最低必要量以上のビタミンB1を含んで
   なるビタミン補充物をさらに含んでなる、請求項１記載
   の医薬組成物。
9. 【請求項９】ビタミン補充物がさらに１日最低必要量以
   上のビタミンB2を含んでなるものである、請求項８記載
   の医薬組成物。