TW202009005A - 具抗氧化活性之組合物 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，組合物包含有效劑量之一紅景天萃取物及一甘油磷酸膽鹼及其醫藥可接受載劑或醫藥可接受鹽。經動物實驗證實，透過紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼的混合，能有效降低動物體內的體脂肪，還可提高抗氧化的效果。

Description

具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物及其用途

本發明係關於一種組合物，尤指一種具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物及其用途。

查，人類生長荷爾蒙(human growth hormone，hGH)，係腦下垂體所分泌而成的胜肽類激素。人體內的人類生長荷爾蒙具有幫助組織細胞的修補再生、維持各項器官活化的功能、提高骨質密度及降低體脂肪與膽固醇的效果。然而，人體內的人類生長荷爾蒙的分泌量會在25歲之後逐年減少，加上生活壓力與環境惡化影響，導致體內機能逐漸衰退及老化。

對於上述人體肥胖及機能老化的問題，可透過飲食及運動的方式改善，若無成效時，才需透過藥物進行治療。而且，許多學者為了達到抑制脂肪形成以及延緩老化的目的，進行多項生化實驗。其中經研究發現，紅景天植物中具有抗缺氧、抗疲勞、延緩衰老及調節內分泌系統的效果，因而許多減肥及抗老化的複方都會添加紅景天的成分。

如美國發明公告專利US9737580B2，其揭示一種提升腦功能的組合物及其方法，其組合物包含石杉鹼甲，長春西汀，乙酰基-L-肉鹼和紅景天，其經臨床證實，在特定優選的比例中可增加情緒的認知，而且達到控制體重為目的。然而，上述揭示組合物的成分雖能有效調控體重，但主要目的在於增強腦部功能，進而提升腦內記憶及情緒認知的效果，同樣也並未明確證實能夠達到延緩機能老化的目的。

又如台灣發明公告專利第I441643號，揭示一種調整血脂及保護心血管之組合物，其組合物含有紅景天複方粉、紅麴、植物醇、納豆及維生素B群，其經動物實驗證實，能達到調整血脂及保護心血管的功效，而且，在給予特定比例劑量下，能顯著地達到降低體重的效果；但也未明確證實能夠有效達到抗氧化的效果。

本發明之主要目的在於解決習知組成物無法同時改善人體脂肪堆積及機能老化的問題。

為達到上述目的，本發明提供一種具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，組合物包含有效劑量之一紅景天萃取物及一甘油磷酸膽鹼及其醫藥可接受載劑或醫藥可接受鹽。

再者，本發明之另一項實施例提供一種上述組合物用於製備治療肥胖之藥物的用途。

藉此，經由誘導肥胖及老化實驗證實，紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼能有效降低動物的體重以及體脂肪，甚至還可提升動物體內的抗氧化作用，進而達到有效減肥及延緩老化的目的。

為便於說明本發明於上述發明內容一欄中所表示的中心思想，茲以具體實施例表達。

本發明提供一種具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，組合物包含有效劑量之一紅景天萃取物及一甘油磷酸膽鹼及其醫藥可接受載劑或醫藥可接受鹽。

紅景天，係屬於多年草木或灌木植物。紅景天萃取物含有多量東莨宕鹼、山萘酚等具有抗菌消炎成份，而且還具有抗缺氧、抗疲勞、延緩衰老及調節內分泌系統的作用。

甘油磷酸膽鹼(alpha-Glycerophosphocholine, alpha-GPC)，是一種小分子營養素。甘油磷酸膽鹼主要存在於人體細胞和母乳中，或者可由非基改大豆中透過去乙醯化技術和特殊離子交換技術萃取獲得。經研究證實，甘油磷酸膽鹼能幫助組織成長重建、器官的活化、恢復缺乏循環的大腦功能、維護大腦注意力、集中力和記憶力等生理功能。根據目前的臨床試驗研究顯示：甘油磷酸膽鹼透過口服方式可提高血液中膽鹼與乙醯膽鹼的濃度，進而降低可體松(cortison)濃度，達到進一步提高體內人類生長荷爾蒙（hGH）濃度的目的。

其中，紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：1至1：6，於本發明較佳實施例中，紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：3。

此外，組合物更包含一白藜蘆醇及一瓜拿納。白藜蘆醇，廣泛存在於桑葚、花生、葡萄等多種植物中，尤其以葡萄含量為高。經研究發現，白藜蘆醇具有極佳的抗氧化活性，不但能保護人體不受自由基侵襲，當植物受到環境壓力、真菌和細菌感染時，也會產生抗毒素來對抗外界的侵襲。

瓜拿納，是一種興奮刺激物質，其可增加精神和肌肉強度的抵抗力、忍耐力，且能夠減少運動和物理的疲倦。瓜拿納中咖啡因和咖啡鹼所含的黃嘌呤，能夠提供最快速並最穩定的思考。

本發明之組合物可製作成粉末狀、顆粒狀或液體狀，更可經加工處理，進而將本發明之組合物製作成膠囊之形式；特別說明的是，膠囊形式可為動物性膠囊或植物性膠囊。動物性膠囊可由動物膠(gelatin)所製成，而植物性膠囊可由羧甲基纖維素納(sodium carboxymethyl cellulose)所製成，提供使用者口服食用。

本發明所用之術語「醫藥可接受鹽」包含水溶性及水不溶性鹽，可保留組合物之生物學功效及性質。本發明所用之術語「醫藥可接受載劑」意指涉及將醫藥製劑自機體之一器官或一部份運送或運輸至機體之另一器官或另一部份的物質、組合物或媒劑，其涵蓋有調味劑、增味劑、防腐劑、抗氧化劑、螯合劑、滲透劑、潤滑劑、錠劑佐劑、著色劑、保濕劑、結合劑、及等效載劑。

本發明實施例以動物實驗作為驗證，證實本發明之組合物具有抑制脂肪形成及抗氧化活性的功效。 動物實驗

(1)動物飼育

實驗之一受試者來自國家衛生研究院國家實驗動物中心，受試者係採用雄性6-8週齡之C57BL/6(B6 )60隻小鼠，起始體重約20克，以10隻受試者為一組。每組受試者分別飼養在22±2°C的動物房中，並以定時器控制光照時間及黑暗時間，其中，光照時間與黑暗時間各為12小時。由於受試者通常於黑暗時段進食，移除飼料之最佳時刻為開始要轉明亮時，空腹時間可設定為12±2小時。

(2)飼料餵食

受試者以口服給予高脂飼料，並以注射方式施予D-半乳糖。值得說明的是，高脂飼料係為了誘發受試者體重肥胖；注射過量的D-半乳糖，會使受試者的體內產生大量活性氧類，進而破壞體內活性氧類濃度的平衡狀態，藉以誘導受試者體內產生過氧化效應。

(3)投藥設定

於6-8週齡的受試者依體重隨機分成六組，每組10隻，每隻受試者先於動物房給予高脂飼料以及注射D-半乳糖後，每隻受試者再經由口服給予本發明含有紅景天萃取物及甘油磷酸膽鹼之組合物，進行實驗12週，實驗期間每週測量且記錄體重。本發明所用之術語「給予」係指向個體直接投與組合物或組合物之醫藥可接受鹽，其可於個體的體內形成等效量之活性組合物。

實驗各組主要可分為：(1)正常組：自由攝食正常飼料，給予無菌逆滲透水10 ml/kg。(2)對照組：自由攝食高脂飼料，頸背部皮下注射方式注射0.3-1.2g/kg bw 之D-半乳糖；給予無菌逆滲透水10 ml/kg。(3)實驗組1：自由攝食高脂飼料，頸背部皮下注射0.3-1.2 g/kg bw 之D-半乳糖；給予1倍劑量之紅景天萃取物，其中，紅景天萃取物的含量為88.4毫克/公斤體重/天。(4)實驗組2：自由攝食高脂飼料，頸背部皮下注射0.3-1.2 g/kg bw 之D-半乳糖；給予低劑量之本發明組合物(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：1)，其中，本發明組合物的紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼組合之有效劑量為187毫克/公斤體重/天(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：1)，依體表面積比，相對人體口服0.91克/天劑量。(5)實驗組3：自由攝食高脂飼料，頸背部皮下注射0.3-1.2 g/kg bw 之D-半乳糖；給予中劑量之本發明組合物(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：3)，其中，本發明組合物的紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼組合之有效劑量為384.4毫克/公斤體重/天(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：3)，依體表面積比，相對人體口服1.87克/天 劑量。(6)實驗組4：自由攝食高脂飼料，頸背部皮下注射0.3-1.2 g/kg bw之D-半乳糖；給予高劑量之本發明組合物(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：6)，其中，本發明組合物的紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼組合之有效劑量為680.4毫克/公斤體重/天(紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：6)，依體表面積比，相對人體口服3.31克/天劑量。

實驗動物與人體間試驗劑量之換算：本評估方法的人體與實驗動物間劑量之換算，原則上根據2005年美國食品藥物管理局所公告之實驗初期估算方法（Estimating the maximum safe starting dose ininitial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers），而以60公斤之成人為基準，使用實驗動物進行試驗時，有效劑量之換算原則上以人體每日每公斤體重之建議攝取量（/kg bw/day）依等效劑量換算之。

由於動物會隨著體重之增加而增加其攝食量，所以上述二項換算的方式，動物每天所獲得受試樣品的攝取量相差不大，因此都可採用。試驗組與對照組飼料必須含近似等量之熱量、蛋白質、脂肪、鈣質等礦物質或維生素。

動物試驗結果換算為人體之建議劑量：綜合動物試驗之統計結果求得最適有效劑量，如單位為飼料中之%時，則以同%為人類在一天中佔總飲食攝取量（500克乾重）之%為1倍劑量，例如飼料中含1%受試產品組獲得最佳綜合結果時，視同人類亦攝取1%（5克）為最佳的1 倍劑量。如實驗是採用每公斤體重（/kg b.w.）為單位時，則一律乘上60kg作為成人之1倍有效劑量。

(4)採樣分析

(A)體重變化：

實驗期間每週至少要精秤體重1次（宜固定於每天動物室燈光要轉暗，並給予飼料前），並觀察每組受試者的體重變化。體重變化換算方式為：體重改變量（weight change）＝結束體重–起始體重。 表1.每組受試者之體重變化

*P ＜0.05, **P ＜0.01, ***P ＜0.001

請參閱表1所示，其係為本實施例之各組受試者之體重變化表。由表1結果顯示，隨著實驗週數增加，所有實驗的受試者平均體重皆穩定上升，其中，又以對照組的平均體重增加最為明顯；然而，對於實驗組2~4來說，受試者經給予本發明之組合物後，其平均體重相較於對照組有顯然降低，其中，更以實驗組3而言，其受試者的平均體重相比於對照組具有明顯降低約7公克的效果；顯而得知，本發明藉由紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼的混合餵食，能有效降低受試者體重，而且，又以給予紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：3之實驗組3，其整體的減重效果為最佳。

(B)臟器與體脂肪重量變化：

動物犧牲時，小心取出腹膜腔內之副睾脂肪、腎臟周圍脂肪及腸繫脂肪進行精秤重量，並計算體脂肪率。體脂肪率計算公式如下： 體脂肪率＝[體脂肪量（g）/體重（g）]×100%。於實際計算時，體脂肪量（g）＝副睾脂肪（g）+腎臟周圍脂肪（g）+腸繫膜脂肪（g）。體脂肪量的測定盡量由同一人以同方法處理所有的動物，以降低動物個體間的誤差。 表2.每組受試者的臟器與體脂肪重量變化

*P ＜0.05, **P ＜0.01, ***P ＜0.001

請配合參閱表2所示，其係為本實施例之各組受試者之臟器與體脂肪重量變化表。由表2結果顯示，實驗經過12週後，所有實驗受試者的體脂肪率及脂肪總量皆有上升趨勢，其中，又以對照組上升最為明顯 (P ＜0.05)；然而，相較於實驗組2~4來說，受試者經給予本發明之組合物後，其體脂肪率及脂肪總量相較於對照組有顯然降低(P ＜0.05)；也就是說，本發明之組成物能有效抑制肥胖與脂肪累積的效果。

(C)血液中各項生化數值變化：

利用血液生化分析體內不易形成體脂肪功能的各項生化數值。其生化分析項目如下：

(a).血脂質：每組受試者禁食12小時後，以異氟醚(isofurane)進行麻醉，收集腹腔動脈的血液，並將其離心收集血清，後續透過血清生化儀分析偵測血清中三酸甘油酯、膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白的濃度。

(b).肝臟脂質：腹腔動脈採血結束後，以生理食鹽水沖洗腹腔，再透過氯仿-甲醇萃取法進一步萃取體內脂質，並測量肝臟三酸甘油酯與膽固醇的濃度。

(c).血糖：腹腔動脈採血結束後，利用酵素法及比色原理測量血清中血糖濃度。

(d).腎功能：腹腔動脈採血結束後，利用酵素法及比色原理測量血清中肌酸酐的濃度。 表3.每組受試者之血液生化值變化

*P ＜0.05, **P ＜0.01, ***P ＜0.001

請配合參閱表3所示，其係為本實施例之各組受試者之血液生化值變化表。如上述表3所示，實驗經過12週後，血糖結果顯示，對照組的血糖濃度相較於正常組有顯著性增加(P ＜0.05)；然而，實驗組1~4的血糖濃度比對對照組些微降低。膽固醇結果顯示，實驗組1~4血清中的膽固醇濃度比對對照組有顯著性的降低(P ＜0.05)。肌酸酐(Creatinine)結果顯示，實驗組1~3血清中的肌酸酐濃度比對對照組有略微降低趨勢，其中，實驗組4的肌酸酐濃度顯著地低於對照組(P ＜0.05)。低密度脂蛋白(LDL)結果顯示，實驗組1~4中低密度脂蛋白濃度比對對照組有顯著性地降低(P ＜0.05)。高密度脂蛋白(HDL)結果顯示，實驗組1~4中高密度脂蛋白濃度比對對照組有顯著性地增高(P ＜0.05)。藉此，透過表3的經實驗結果顯示，本發明之組成物能夠有效抑制形成體脂肪的多項生化活性，有效達到降低體脂率的效果。

(D)血液抗氧化指標變化：

利用酵素法及比色原理測量血清中超氧化物歧化酵素(SOD)、麩胱甘肽過氧化酵素(GSH Px)濃度含量及G6PD(Glucose-6-phosphate dehydrogenase)的活性濃度。 表4.每組受試者之血液抗氧化指標變化

*P ＜0.05, **P ＜0.01, ***P ＜0.001

請配合參閱表4所示，其係為本實施例之每組受試者之血液抗氧化指標變化表。由上述表4所示，實驗經過12週後，超氧化物歧化酵素(SOD)、麩胱甘肽過氧化酵素(GSH Px)及G6PD的結果顯示，實驗組2~4比對對照組有顯著性的增加(P ＜0.05)，其中，又以實驗組3之紅景天萃取物：甘油磷酸膽鹼=1：3的實施例中，超氧化物歧化酵素(SOD)、麩胱甘肽過氧化酵素(GSH Px)及G6PD測得濃度含量為最高。顯而得知，本發明透過給予紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼，能有效提升抗氧化力的效果，進而達到清除體內過氧化分子與自由基的目的，經實驗證實，實驗組3的抗氧化效果為最好，進而有助於延緩衰老的效果。

(E)血液中生長賀爾蒙變化：

人類生長荷爾蒙(human growth hormone，hGH)分析：以human growth hormone ELISA kit分析血清中hGH濃度。 表5.每組受試者之生長賀爾蒙變化

*P ＜0.05, **P ＜0.01, ***P ＜0.001

請配合參閱表5所示，其係為本實施例之每組受試者之生長賀爾蒙變化表。由上述表5所示，實驗經過12週後，於血液中生長賀爾蒙的結果顯示，對照組血清中的生長賀爾蒙濃度相對正常組有顯著性降低(P ＜0.05)，但實驗組1~4比對對照組有顯著性的增加(P ＜0.05)。進一步說明，受試者在經過老化與肥胖的誘導下，透過給予紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼，還更相對提升體內生長賀爾蒙的作用，達到有助於受試者減肥的效果。

(F)組織切片染色觀察

(1).每組受試者以D-半乳糖誘導老化後，需觀察毛色變化情形，如果有老化情形，毛髮會變白色，因此需要拍照記錄。請配合圖參閱圖1所示，其係為本實施例之每組受試者的皮膚組織進行毛囊與皮下脂肪染色之影像圖。如圖1所示，對照組的毛囊組織相較於正常組來說，有明顯發生鬆散情況，且對照組的皮下脂肪厚度也顯著高於正常組；然而，經過試驗後的實驗組1~4發現，實驗組1~4的毛囊組織相較於對照組來說，有逐漸復原成縝密狀態，而且其皮下脂肪厚度比例也產生顯著性地降低情形。 表6.每組受試者之皮下脂肪厚度變化

請配合圖1及上述表6結果所示，更進一步地發現，實驗組2~4通過給予紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼的受試者，相比於實驗組1給予單一紅景天萃取物的受試者來說，實驗組2~4之組織切片測得的皮下脂肪厚度更有明顯降低皮下脂肪的效果，其中，又以實驗組3測得皮下脂肪厚度的降低效果為最佳。據以說明，受試者經給予紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼之組合，除了能有效增加皮膚的毛囊組織，以提升毛髮含量的效果之外，還能進一步達到降低體內皮下脂肪厚度的目的。

(2).採集各組受試者的皮膚，並浸泡於10%福馬林溶液中固定後，以進行4-HNE(4-hydroxynonenal)染色實驗；特別說明的是，受試者經注射D-半乳糖而誘導體內發生脂質過氧化現象，而脂質過氧化過程會產生丙二醛(Malonaldehyde, MDA)和4-羥基壬烯酸(4-hydroxynonenal,HNE)，進而導致細胞膜的流動性和通透性以及細胞結構和功能的改變；是以，本發明可藉由4-HNE染色實驗，觀察各組受試者體內過氧化狀態，其中，4-HNE染色測得的沉積量顏色越深時，代表受試者體內過氧化物含量越高；換言之，4-HNE染色測得的沉積量顏色越淺時，代表受試者體內過氧化物含量越低。請配合圖參閱圖2所示，其係為本實施例之每組受試者的皮膚組織進行免疫染色之影像圖。

如圖2所示，對照組的4-HNE染色實驗相較於對正常組來說，其沉積量顏色有顯著較深的現象，也就是說，對照組之受試者的體內組織發生嚴重過氧化現象；然而，經過試驗後的實驗組2~4而言，其經4-HNE染色的沉積量顏色相較於對照組來說，沉積量顏色有明顯較淺的趨勢，又以實驗組3測得4-HNE染色的沉積量顏色又為更淺，而且沉積量的染色面積更小，進而說明實驗組3的抗過氧化的效果為最佳；因此，表示本發明之紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼之組合，更能進一步達到提升抗過氧化作用的效果及目的。

綜上所述，本發明經過實驗證實，紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼之組合，除了能有效降低受試者的體重以及體脂肪之外，甚至還可提升體內抗過氧化作用的效果，其中，又以紅景天萃取物與甘油磷酸膽鹼的組合配比為1：3時，抑制體脂肪、降低體重及抗氧化作用的效果為最佳；藉此，本發明之組合物能夠作為製備治療肥胖的藥物，還可提升體內組織抗過氧化作用而達到延緩老化的效果。

藉此以上所舉實施例僅用以說明本發明而已，非用以限制本發明之。舉凡不違本發明精神所從事的種種修改或變化，俱屬本發明意欲保護之範疇。

無

圖1係為本發明於每組受試者的皮膚組織進行毛囊與皮下脂肪染色之影像圖。 圖2係為本發明於每組受試者的皮膚組織進行免疫染色之影像圖。

Claims (10)

1. 一種具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，該組合物包含有效劑量之一紅景天萃取物及一甘油磷酸膽鹼及其醫藥可接受載劑或醫藥可接受鹽。
2. 如請求項1所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該紅景天萃取物：該甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：1至1：6。
3. 如請求項2所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該紅景天萃取物：該甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：1至1：6時，該組合物的有效劑量為187至680毫克/公斤體重/天。
4. 如請求項2所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該紅景天萃取物：該甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：3。
5. 如請求項4所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該紅景天萃取物：該甘油磷酸膽鹼間之重量比例為1：3時，該組合物的有效劑量為384毫克/公斤體重/天。
6. 如請求項1所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該組合物更包含一白藜蘆醇。
7. 如請求項6所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該組合物更包含一瓜拿納。
8. 如請求項7所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該組合物呈膠囊形式。
9. 如請求項1所述之具抑制脂肪形成及抗氧化活性之組合物，其中，該組合物係呈粉末狀、顆粒狀或液體狀。
10. 一種如請求項1之組合物用於製備治療肥胖之藥物的用途。

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