JP2024512217A - エフェクター分子を含む標的化コンジュゲート及びその使用 - Google Patents

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Abstract

標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされており、エフェクター分子は、切断を介して標的化コンジュゲートから放出され得る、標的化コンジュゲートを提供する。また、標的化コンジュゲートを使用する処置または診断の組成物及び方法が提供される。

Description

本出願は、エフェクター分子を含む標的化コンジュゲート及びその使用に関する。
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月２５日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０７７８６４、及び２０２１年４月０１日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０８４９５２の利益を主張し、これらの両方の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１９９８７２０００２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年２月２４日、サイズ：１６３ＫＢ）。
抗体は、多様な疾患のための治療剤及び診断剤として成功裏に使用されてきた。ネイティブ抗体は、特定の標的に結合するによって作用する。しかしながら、抗体標的は、罹患（例えば、腫瘍）組織及び正常組織の両方で発現し得る。抗体が患者の正常な組織に発現した標的に結合する場合、患者は、望ましくない毒性の副作用を経験し得、これは、軽度から重度またはさらに生命を脅かす強度の範囲であり得る。そのような副作用は、抗体の有効な投薬量の減少につながり得、これはその治療的有効性を低下させ得る。抗体処置は、いくつかの場合では、抗体治療剤がヒト患者への利用を不可能とする副作用により中止されることさえあり得る。よって、罹患細胞及び組織上の標的に優先的に結合する抗体を操作するアンメットニーズが存在する。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗体によって認識される表面抗原を発現する罹患組織に薬物（「ペイロード」）を優先的に仕向けるように設計された標的化治療剤である。ＡＤＣは、しばしば、罹患環境において治療的活性剤の放出を可能とする化学的リンカーを介して、治療的活性剤（例えば、細胞傷害薬）に連結された抗体から構成される。現在、５つのＡＤＣが治療的使用のためにＦＤＡによって承認されており、１００種超が臨床的調査中である。がん処置において最も広く使用されているＡＤＣには、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））及びブレンツキシマブベドチン（ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標））がある（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ（２０１５）３２：３４５８－３４６９を参照されたい）。現在承認されているまたは臨床的評価を受けているＡＤＣの大部分は、小分子薬物－抗体コンジュゲートである。現在のＡＤＣは、標準的な化学療法剤、例えば、抗有糸分裂剤及び代謝拮抗剤（アウリスタチンモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、カリケアミシン、及びメイタンシン１の誘導体（ＤＭ１）を含む）を組み込んでいる。例えば、Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｖ，２０１６，６８（１）３－１９を参照されたい。
ＡＤＣは、概念的利点及び有望な臨床的結果を有するが、有効なＡＤＣ治療剤の開発は、依然として著しく困難である。ＡＤＣの全体的設計、標的組織の選定、抗体、化学的リンカー、薬物結合の部位、及びカーゴの特質はすべて、ＡＤＣの有効性及びリスクに影響を及ぼす（例えば、Ｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ２０１９；３９４：７９３－８０４を参照されたい）。例えば、臨床試験中の早期ＡＤＣは、使用されたマウス抗体の免疫原性に悩まされており、ＡＤＣの開発における最近の進歩は、ヒト化抗体に依存する。ＡＤＣにおけるに他の未解決の課題には、ａ）薬物カーゴの無効力；ｂ）有効性の喪失及び毒性につながる薬物の早期放出；ｃ）標的発現のレベル；ｄ）準最適な標的選択性；ｅ）ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）及びＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）で見られるような血小板減少症及びニューロパシー等の副作用が含まれる。これらの制限は、高い効力のペイロード、安定な化学的リンカー、効率的で非常に特異的なカーゴ放出、ならびに増加した抗体－標的選択性を求めてＡＤＣのさらなる改善に対するニーズを強調する。
ｉｎ ｖｉｖｏでの非常に特異的なカーゴ送達システムとしてのＡＤＣプラットフォームは、小分子薬物送達を超えた用途に役立つ。例えば、ｓｉＲＮＡが抗体に融合され、ｉｎ ｖｉｖｏでのｍＲＮＡノックダウンのための効率的な方法へと開発され得る（Ｂａｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１６，１１：２２－３６を参照されたい）。そのような抗体媒介ｓｉＲＮＡ送達は、結腸癌処置において有望な結果を示した（Ｂａｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１５ １５；２１（６）：１３８３－９４を参照されたい。）。ＡＤＣプラットフォームにおける設計、抗体のタイプ、及び治療剤の広がりのより広い範囲が依然として必要とされている。
Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ（２０１５）３２：３４５８－３４６９ Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｖ，２０１６，６８（１）３－１９ Ｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ２０１９；３９４：７９３－８０４ Ｂａｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１６，１１：２２－３６ Ｂａｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１５ １５；２１（６）：１３８３－９４
本出願は、標的化部位及び１つ以上のエフェクター分子を含む標的化コンジュゲート、その組成物、調製方法及び使用方法を提供する。
いくつかの実施形態では、標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされており、エフェクター分子は、切断を介して標的化コンジュゲートから放出され得る、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、式Ｉの構造：

（式中、Ａ１は、第１の標的化部位であり；Ａ２は、第２の標的化部位であり；Ｐ１は、第１の切断部位であり；Ｐ２は、第２の切断部位であり；Ｐ３は、第３の切断部位であり；Ｃは、コンジュゲーション部位であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、エフェクター分子であり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１であり；ａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む。いくつかの実施形態では、ｚ＝０である。いくつかの実施形態では、ｚ＝１である。いくつかの実施形態では、ｙ＝０である。いくつかの実施形態では、ｙ＝１である。いくつかの実施形態では、ｘ＝０である。いくつかの実施形態では、ｘ＝１である。いくつかの実施形態では、ｕ＝０である。いくつかの実施形態では、ｕ＝１である。いくつかの実施形態では、ａは、１以上である。いくつかの実施形態では、ｂは、１以上である。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、標的化ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体、ダイアボディ、ナノボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びｄｓＦｖからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗体－ペプチド融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｆｃ領域のＣ末端に融合されている。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、標的部位で標的分子（例えば、細胞表面分子）に特異的に結合する標的化部位を含む。いくつかの実施形態では、標的部位は、疾患の部位である。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、標的分子は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔｒｏｐ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、４－１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＲ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７９、インテグリンαｖβ３、αｖβ６、ＭＵＣ１、ＰＭＳＡ、ｕＰＡＲ、及びアンジオペプ－２からなる群から選択される。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、切断は、標的化部位のための標的部位での条件によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、標的部位での条件は、プロテアーゼ、ｐＨ変化、酸化還元変化、低酸素、酸化ストレス、温熱、及び細胞外ＡＴＰ濃度からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、標的部位は、疾患の部位である。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍である。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、切断は、プロテアーゼによる。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、レグマイン、プラスミン、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＰＲＳＳ６、ＭＭＰｌ、ＭＭＰ２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－１４、ＭＴ１－ＭＭＰ、カテプシンＤ、カテプシンＫ、カテプシンＳ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭＴＳ、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４、ＴＡＣＥ、ヒト好中球エラスターゼ、ベータ－セクレターゼ、線維芽細胞関連タンパク質、マトリプターゼ、ＰＳＭＡ及びＰＳＡからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、ｕＰＡである。いくつかの実施形態では、切断部位は、配列番号５０～５５のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、エフェクター分子は、治療剤、オリゴヌクレオチド、及び検出可能な標識からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、タンパク質ベースの薬物、小分子薬物、細胞傷害剤、毒素、免疫調節剤、抗炎症剤、抗感染症剤、及びエピジェネティック調節剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２～約１００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、小干渉ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びＣｐＧ（シトシン－ホスホジエステル－グアニン）オリゴヌクレオチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６～６７からなる群から選択される核酸配列を含む。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、２つ以上のエフェクター分子を含む。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、エフェクター分子は、アントラサイクリン、アウリスタチン、カンプトテシン、コンブレタスタチン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エンジイン、ゲルダナマイシン、インドリノ－ベンゾジアゼピン二量体、メイタンシン、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、タキサン、ビンカアルカロイド、チューブリシン、ヘミアステリン、スプリセオスタチン、プラジエノライド、及びそれらの立体異性体、アイソステア、アナログ、または誘導体からなる群から選択される細胞傷害剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、ＳＮ３８またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、ＭＭＡＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、式（１）～（７）の化合物から選択される。いくつかの実施形態では、標的コンジュゲートは、２つ以上の小分子エフェクター分子を含む。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、式Ｉの構造を含み、Ａ１は、第１の標的分子を認識する第１の標的化ペプチド、または第１の抗体もしくはその抗原結合断片であり、Ａ２は、第２の標的分子を認識する第２の標的化ペプチド、または第２の抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、第１の標的分子及び第２の標的分子は、同じである。いくつかの実施形態では、第１の標的分子及び第２の標的分子は、異なる。いくつかの実施形態では、Ａ１は、コンジュゲーション部位（Ｃ）のＮ末端に接続されており、Ａ２は、コンジュゲーション部位（Ｃ）のＣ末端に接続されている。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、共有結合性コンジュゲーション部位である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、内因性コンジュゲーション部位である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位に導入された操作されたコンジュゲーション部位である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位に融合されたペプチドに存在する。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、例えば、グルタミン含有タグである。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、互いにタンデムで融合された複数のグルタミン含有タグを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、配列番号１～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、非共有結合性コンジュゲーション部位である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、ＣｐＧ結合ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、配列番号５６～６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
標的化コンジュゲートが式Ｉの構造を含む上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、Ｌは、式：ＳＨ２－スペーサー、ＭＡＬ－スペーサー、ＮＨ２－スペーサー、またはＯｓｕ－スペーサー（Ｏｓｕ：オキシスクシンイミド）によって表される。いくつかの実施形態では、Ｌは、式：（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－ＶＣ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式ＩＩ）（式中、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋ＝０または１である）によって表される。いくつかの実施形態では、Ｌは、式：（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式中、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋ＝０または１である）によって表される。いくつかの実施形態では、Ｌは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｐ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式ＩＩＩ）（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋ＝０または１であり、Ｐは、切断部位である）によって表される。
いくつかの実施形態では、式（１）～（７）の化合物からなる群から選択される式を有する治療剤にコンジュゲートされた標的化部位を含む標的化コンジュゲートが提供される。
また、本明細書では、複数の上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つを含む組成物が記載される。いくつかの実施形態では、組成物におけるエフェクター分子及び標的化部位の平均比は、少なくとも約１：１である。いくつかの実施形態では、組成物における標的化コンジュゲートの少なくとも２つは、異なる数のエフェクター分子を含む。エフェクター分子が治療剤またはオリゴヌクレオチドであるいくつかの実施形態では、組成物は、薬学的組成物である。エフェクター分子が検出可能な標識であるいくつかの実施形態では、組成物は、診断組成物である。
いくつかの実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、有効量の上述した薬学的組成物のいずれか１つを個体に投与することを含む、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、個体における疾患を診断する方法であって、有効量の上述した診断組成物を個体に投与することを含み、検出可能な標識の検出は、疾患の存在を示す、方法が提供される。
また、本明細書では、上述した標的化コンジュゲートのいずれか１つを作製する方法であって、方法は、エフェクター分子を標的化部位にコンジュゲートすることを含む、方法が提供される。
Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝１；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝１；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝１；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝０；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝１；ｚ＝１；ｕ＝１；ｖ＝１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 Ａ１：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第１の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ａ２：プロテアーゼ切断部位を有するまたは有しない第２の標的化部位、例えば、抗体もしくは抗原結合断片または標的化ペプチド（多重特異的抗体及び融合タンパク質を含む）；Ｄ：エフェクター分子、例えば、小分子またはオリゴヌクレオチド；Ｐ１：プロテアーゼ切断部位１；Ｐ２：プロテアーゼ切断部位２；Ｐ３：プロテアーゼ切断部位３；Ｃ：コンジュゲーション部位、例えば、共有結合性コンジュゲーション部位、または非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、カチオン性ペプチドまたは中性電荷ペプチド）；Ｌ：リンカー；ｘ＝０または１；ｙ＝０または１；ｚ＝０または１；ｕ＝０または１；ｖ＝０または１；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０を含む例示的な標的化コンジュゲートの概略構造を示している。例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝１；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝０；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝０；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 例示的な標的化コンジュゲート（式中、ｘ＝０；ｙ＝１；ｚ＝０；ｕ＝１；ｖ＝０；ａ＝１～２０；ｂ＝１～２０）を示している。 抗体に非共有結合でコンジュゲートされたＣｐＧ ＯＤＮリンカーについてのゲルシフトアッセイを示している。 抗体に共有結合でコンジュゲートされたＣｐＧ ＯＤＮリンカーについてのゲルシフトアッセイを示している。 抗体に共有結合でコンジュゲートされたＣｐＧ ＯＤＮリンカーについてのゲルシフトアッセイを示している。 ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫遮断レポーターアッセイの用量反応曲線を示している。 ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１細胞を使用した化合物の用量反応細胞傷害曲線を示している。 ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１細胞を使用した抗体の用量反応細胞傷害曲線を示している。 ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１細胞を使用したＡＤＣの反応細胞傷害曲線を示している。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＣＤＸモデルにおける抗体及びコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示している。 ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用した薬物の用量反応細胞傷害曲線を示している。 ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用したＡＤＣの用量反応細胞傷害曲線を示している。 ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用した薬物の用量反応細胞傷害曲線を示している。 ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２マウス同系腫瘍モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示している。 ＰＢＭＣｓ－ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示している。 ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示している。 異なるＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞の反応を示している。 ＡＯＣに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞の反応を示している。 ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１マウス同系腫瘍モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示している。
本出願は、標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートを使用する処置または診断の組成物及び方法あって、エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされており、エフェクター分子は、切断を介して標的化コンジュゲートから放出され得る、組成物及び方法が提供される。標的化部位は、罹患組織または罹患細胞（例えば、腫瘍細胞）に発現した細胞表面分子等の標的を特異的に認識し、それに結合する。標的化部位が標的に結合すると、標的化コンジュゲートにおける１つ以上の切断部位の切断が引き起され得、これは、標的部位でのエフェクター分子の放出につながる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、多重特異的である。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、第１の標的化部位及び第２の標的化部位を含み、第１の標的化部位及び第２の標的化部位は、１つ以上のエフェクター分子がコンジュゲートされたコンジュゲーション部位を介して互いに融合されている。例えば、標的化部位は、向上した臨床的利益を提供するために標的認識における多重特異性を提供するために１つ以上のｓｃＦｖまたはｓｃＦａｂを、証明された臨床的有効性及び安全性を有するモノクローナル抗体（例えば、抗ＰＤＬ１ ｍＡｂまたは抗Ｔｒｏｐ２ ｍＡｂ）に融合することによって設計され得る。本明細書に記載の標的化コンジュゲートは、コンジュゲーション部位にコンジュゲートされた複数のタイプのカーゴ（例えば、オリゴヌクレオチド及び小分子薬物）を有し得、標的化部位は、標的化ペプチド、もしくは抗体もしくはその抗原結合断片（多重特異的抗体を含む）、またはそれらの組み合わせであり得る。よって、本明細書に記載の標的化コンジュゲートは、従来のＡＤＣと比較して向上した選択的標的認識能力及び有効性を有し得る。複数のコンジュゲーション部位及び異なるタイプのカーゴを１つの標的化コンジュゲートに組み込むことは、より強力な治療効果の潜在性を切り開く。オリゴヌクレオチド及び他の治療剤（例えば、小分子薬物）の組み合わせの可能性は、本明細書に記載の標的化コンジュゲートによって標的とされ得る疾患の範囲を拡大させる。
したがって、本出願の１つの態様は、標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされており、エフェクター分子は、切断を介して標的化コンジュゲートから放出され得る、標的化コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態では、切断は、細胞の外で行われる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、式（Ｉ）の構造（式中、ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１であり；ａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む。
また、上述した方法のいずれか１つで使用するための組成物、キット及び製造品が提供される。
Ｉ．定義
用語は、以下のように別途定義されない限り、当該技術分野で一般的に使用されているように本明細書で使用される。
用語「標的化部位」は、本明細書で使用される場合、標的分子に特異的に結合するポリペプチドベースの結合分子、または特異的結合に寄与するその一部を指す。抗体ベース及び非抗体ベースの両方の結合分子またはその一部が本明細書で企図される。
用語「治療剤」は、本明細書で使用される場合、治療効果を有する分子を指す。治療剤は、オリゴヌクレオチドを除く、任意の好適な分子実体のものであり得る。
用語「エフェクター分子」は、本明細書で使用される場合、治療及び／または診断目的のために使用され得る分子を指す。例示的なエフェクター分子には、治療剤、診断標識及びオリゴヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない。
用語「コンジュゲーション」は、２つの化学基または部位を１つ以上の共有結合または非共有結合を介して互いに化学的に接続させることを指す。コンジュゲーションは、２つの化学基または部位間で直接的であり得、または２つの化学基または部位を架橋する第３の化学基または部位（例えば、リンカー）を介して間接的であり得る。
用語「コンジュゲーション部位」は、２つの化学的部位を直接的に接続させる部位を指す。
用語「抗体」は、そのもっとも広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、全長抗体及びそれらの抗原結合断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。用語「抗体部位」は、全長抗体またはその抗原結合断片を指す。抗体及び／または抗原結合断片は、ネズミ抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、完全ヒト化抗体、ラクダ科動物抗体可変ドメイン及びヒト化バージョン、サメ抗体可変ドメイン及びヒト化バージョン、ならびにラクダ科動物化抗体可変ドメインに由来し得る。
全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与する。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称され得る。両鎖における可変領域は通常、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変のループを含有する（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体及び抗原結合断片についてのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則によって定義または同定され得る（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９；Ｋａｂａｔ １９８７；Ｋａｂａｔ １９９１）。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存されており、かつ超可変ループを支持するための骨格を形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として知られている隣接伸長部間に挟まれている。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、これは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在によって特性化される。主要な抗体クラスの一部は、サブクラス、例えば、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、またはｌｇＡ２（α２重鎖）に分けられる。
用語「抗原結合断片」は、本明細書で使用される場合、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された多重特異的抗体、ラクダ化シングルドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが、完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体または親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ以上の異なるヒト抗体からのフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体からの１つ以上のＣＤＲを含み得る。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインが緊密に非共有結合的に会合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、かつ抗原結合特異性を抗体に付与する６つの超可変ループ（重鎖及び軽鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのみのＣＤＲを含むＦｖの半分）でさえも、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能とする。ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖の両方のポリペプチドの可変領域内に見られる非連続的抗原結合部位を意味することが意図されている。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）；及びＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）によって記載されており、定義には、互いに対して比較された場合にアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体もしくはグラフト抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのいずれの定義の適用も、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内であることが意図されている。例えば、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）；及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）を含む、ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースが当該技術分野で知られているこの段落において引用される参考文献の内容は、本出願において使用するために及び本明細書における１つ以上の請求項における可能性のある包含のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義に基づく。例えば、ＣＤＲ配列は、ＶＢＡＳＥ２ツールによって決定され得る（ｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ／ｖｂａｓｅ２．ｐｈｐ、Ｒｅｔｔｅｒ Ｉ，Ａｌｔｈａｕｓ ＨＨ，Ｍｕｎｃｈ ＲＭ，ＭＭｕｌｌｅｒＭ Ｗ：ＶＢＡＳＥ２，ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｖ ｇｅｎｅ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５ Ｊａｎ １；３３（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ６７１－４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）も参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、臨床結果を含む有益なまたは望ましい結果を得るためのアプローチである。本出願の目的のため、有益なまたは所望の臨床的結果には、以下のうちの１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：疾患に起因する１つ以上の症状を軽減すること、疾患の程度を減弱させること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防または遅延させること）、疾患の広がりを予防または遅延させること、疾患の発生または再発を予防または遅延させること、疾患の進行を遅延または減速させること、疾患状態を改善すること、疾患の寛解（部分的であるか全体的であるかにかかわらない）を提供すること、疾患を処置するために必要とされる１つ以上の他の医薬品の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を向上させること、及び／または生存期間を延長させること。「処置」には疾患の病理学的帰結の減少も包含される。本出願の方法は、処置のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。
用語「個体」、「対象」及び「患者」は、ヒトを含む哺乳動物を記載するために本明細書で互換的に使用される。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、個体は、疾患または病態（例えば、がん）に罹患している。いくつかの実施形態では、個体は、処置を必要とする。
当該技術分野において理解されるように、「有効量」は、所望の治療的アウトカム（例えば、がんの重症度または継続期間を減少させること、がんの重症度を安定化すすること、またはがんの１つ以上の症状を排除すること）または所望の診断的アウトカムをもたらすのに十分な薬剤（例えば、標的化コンジュゲート）の量を指す。治療的使用のため、有益なまたは所望の結果には、例えば、疾患（生化学的、組織学的及び／または行動的）に起因する１つ以上の症状（疾患の進行中に呈されるその合併症及び中間病理学的表現型を含む）を減少させること、疾患に罹患している者の生活の質を向上させること、疾患を処置するために必要とされる他の医薬品の用量を減少させること、別の医薬品の効果を増強すること、疾患の進行を遅延させること、及び／または患者の生存期間を延長させることが含まれる。いくつかの実施形態では、薬剤の有効量は、生存期間（全体的生存期間及び進行のない生存期間を含む）を延ばし；客観的反応（完全反応または部分的反応を含む）をもたらし；疾患または病態の１つ以上の兆候または症状をある程度軽減し；及び／または対象の生活の質を改善し得る。
本明細書で同定されるポリペプチド及び抗体配列に関して「アミノ酸配列同一率（％）」は、任意の保存的置換を配列同一性の一部とみなして配列をアライメントした後に、比較されているポリペプチドにおけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一率を決定する目的のためのアライメントは、例えば、公共に利用可能なコンピュータソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、またはＭＵＳＣＬＥソフトウエアを使用して当該技術分野の技術の範囲内の様々な方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定し得る。しかしながら、本明細書における目的のため、アミノ酸配列同一％値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４；Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４（これらの各々は、それらの全体がすべての目的のために参照により本明細書に組み込まれる））を使用して生成される。
アミノ酸置換には、ポリペプチドにおけるあるアミノ酸の別のアミノ酸での置換が含まれ得るがこれらに限定されない。例示的な置換が表１に示されている。アミノ酸置換は、対象となる抗体に導入され、生成物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、低下した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。



アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化され得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うことになる。
用語「ポリペプチド」または「ペプチド」は、すべての長さタンパク質断片、融合タンパク質及び修飾されたタンパク質（限定されないが、糖タンパク質、ならびにすべての他のタイプの修飾されたタンパク質（例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ＰＥＧ化、ビオチン化等に起因するタンパク質）を含む）を含むすべての種類の天然に存在する及び合成タンパク質を包含するために本明細書で使用される。
用語「融合」は、単一の連続ポリペプチド（「融合ポリペプチド」）を提供するために２つのポリペプチド断片を遺伝子的に接続させることを指す。２つのポリペプチド断片は、互いに直接的に接続され、またはそれらの間に配置された別のポリペプチドを介して接続され得る。融合ポリペプチドを遺伝子的にコードする核酸を提供するために慣用の組換えＤＮＡ技術または化学的遺伝子合成が使用され得る。
用語「エピトープ」は、本明細書で使用される場合、抗体が結合する抗原上の特定の原子またはアミノ酸の群を指す。２つの抗体または抗原結合断片は、それらが抗原に対する競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。
本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」、「特異的に認識する」及び「特異的である」は、標的と標的化部位（例えば、標的化ペプチドまたは抗体もしくはその抗原結合断片）との間の測定可能で再現可能な相互作用、例えば、結合を指す。所定の実施形態では、特異的結合は、生物学的分子（例えば、細胞表面受容体）を含む、分子の異種集団の存在下で標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープであり得る）を特異的に認識する標的化部位は、他の分子に対するその結合と比べてより高い親和性、アビディティで、より容易に、及び／またはより長い継続期間でこの標的に結合する標的化部位（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、関連しない分子への標的化部位の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、標的への標的化部位の結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する標的化部位は、≦１０－５Ｍ、≦１０－６Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦１０－９Ｍ、≦１０－１０Ｍ、≦１０－１１Ｍ、または≦１０－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、異なる種からのタンパク質間で保存されたタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、それを必要としない。標的化部位の結合特異性は、当該技術分野で知られている方法によって実験的に決定され得る。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＣＬ、ＩＲＭＡ、ＥＩＡ、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ及びペプチドスキャンを含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「連結させる」、「コンジュゲートする」、「ライゲートする」、及び「融合する」は、共有結合または非共有結合のいずれかでの２つの化学的部位の接続を指すために互換的に使用される。接続は、直接的または間接的、例えば、リンカーを介する場合がある。
用語「薬学的組成物」は、調製物であって、それに含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態にあり、かつ製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほどに有毒である追加の成分を含有しない、調製物を指す。
「薬学的に許容可能な担体」は、対象に非毒性である、活性成分以外の薬学的製剤における１つ以上の成分を指す。薬学的に許容可能な担体には、緩衝液、賦形剤、安定化剤、抗凍結剤、等張化剤、防腐剤、及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。薬学的に許容可能な担体または賦形剤は、好ましくは、毒性及び製造試験の必要な基準を満たしており、及び／または、米国食品医薬品局または他の州／邦政府によって作成された非活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に含まれており、または哺乳動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方または他の一般的に認識されている薬局方に列挙されている。
用語「パッケージ挿入物」は、そのような治療製品の使用に関する適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／または警告に関する情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに習慣的に含まれる指示書を指すために使用される。
「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患または病態（例えば、がん）の処置のための薬品、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造物（例えば、パッケージまたは容器）またはキットである。所定の実施形態では、製造物またはキットは、本明細書に記載の方法を実施するための単位として促進、分配、または販売され得る。
本明細書に記載の本発明の実施形態は、実施形態「からなる」及び／または「から本質的になる」を含むことが理解される。
本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体に対する変動を含む（かつ記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
本明細書で使用される場合、値またはパラメータ「ではない」との言及は、通常、値またはパラメータ「以外」を意味し、記載する。例えば、方法がタイプＸの疾患を処置するために使用されないことは、方法が、Ｘ以外のタイプの疾患を処置するために使用されることを意味する。
本明細書で使用される用語「約Ｘ－Ｙ」は、「約Ｘ～約Ｙ」と同じ意味を有する。
本明細書で使用される場合、及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」には、文脈が別途明らかに示さない限り、複数の指示対象が含まれる。
本明細書で使用される用語「及び／または」、「Ａ及び／またはＢ」等の語句は、Ａ及びＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、本明細書で使用される用語「及び／または」、「Ａ、Ｂ及び／またはＣ」等の語句は、以下の実施形態の各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
ＩＩ．標的化コンジュゲート
本出願の１つの態様は、標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされており、エフェクター分子は、切断を介して標的化コンジュゲートから放出され得る、標的化コンジュゲートを提供する。切断は、罹患部位、例えば、腫瘍微小環境において行われ得る。いくつかの実施形態では、切断は、細胞の外、例えば、腫瘍微小環境における腫瘍細胞の外で行われる。
いくつかの実施形態では、式Ｉの構造：

（式中、Ａ１は、第１の標的化部位であり；Ａ２は、第２の標的化部位であり；Ｐ１は、第１の切断部位であり；Ｐ２は、第２の切断部位であり；Ｐ３は、第３の切断部位であり；Ｃは、コンジュゲーション部位であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、エフェクター分子であり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり、ｖ＝０または１であり；ａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む標的化コンジュゲートが提供される。
例示的な標的化コンジュゲートが図１Ａ～１０Ｃに示されており、以下のセクションＥ「例示的な標的化コンジュゲート」に記載されている。
本出願の標的化部位（Ａ１）は、治療剤、オリゴヌクレオチド、検出可能な標識及びそれらの組み合わせであり得る１つ以上のエフェクター分子（Ｄ）にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、リンカー（Ｌ）を介してコンジュゲーション部位（Ｃ）で標的化部位にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、リンカー（Ｌ）を用いずにコンジュゲーション部位（Ｃ）で標的化部位に直接的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、切断部位（Ｐ１、例えば、プロテアーゼ切断部位）が、コンジュゲーション部位（Ｃ）とエフェクター分子（Ｄ）との間に配置される。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位（Ｃ）とエフェクター分子（Ｄ）との間に配置される切断部位（Ｐ１、例えば、プロテアーゼ切断部位）は存在しない。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、第２の標的化部位（Ａ２）を含む。いくつかの実施形態では、第２の標的化部位（Ａ２）は、切断部位（Ｐ２、例えば、プロテアーゼ切断部位）を介してコンジュゲーション部位（Ｃ）に融合される。いくつかの実施形態では、第２の標的化部位（Ａ２）とコンジュゲーション部位（Ｃ）との間に配置される切断部位（Ｐ２、例えば、プロテアーゼ切断部位）は存在しない。いくつかの実施形態では、エフェクター分子（Ｄ）は、切断部位（Ｐ３、例えば、プロテアーゼ切断部位）を介してリンカーに融合される。いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）とエフェクター分子（Ｄ）との間に配置される切断部位（Ｐ３、例えば、プロテアーゼ切断部位）は存在しない。
いくつかの実施形態では、式Ｉの構造：

（式中、Ａ１は、第１の抗体またはその抗原結合断片であり；Ａ２は、第２の抗体またはその抗原結合断片であり；Ｐ１は、第１の切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位、例えば、ｕＰＡ切断部位）であり；Ｐ２は、第２の切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位、例えば、ｕＰＡ切断部位）であり；Ｐ３は、第３の切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位、例えば、ｕＰＡ切断部位）であり；Ｃは、コンジュゲーション部位（例えば、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位）であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、エフェクター分子（例えば、治療剤、オリゴヌクレオチドまたは検出可能な標識）であり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１であり；ａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、Ａ１は、免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体または抗原結合断片（例えば、全長抗体）である。いくつかの実施形態では、Ａ２は、腫瘍抗原、例えば、ＴＲＯＰ－２に特異的に結合する抗体または抗原結合断片（例えば、全長抗体）である。
いくつかの実施形態では、（ａ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の重鎖、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び抗ＴＲＯＰ２抗体の第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド鎖；（ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の重鎖、第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び抗ＴＲＯＰ２抗体の第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド鎖；（ｃ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖；（ｄ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の軽鎖を含む第４のポリペプチド鎖；（ｅ）第１のリンカーを介して第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされた第１のエフェクター分子；及び（ｆ）第２のリンカーを介して第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされた第２のエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び抗ＴＲＯＰ２抗体の第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含み、第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、第４のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び抗ＴＲＯＰ２抗体の第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖、プロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、及び抗ＴＲＯＰ２抗体の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、プロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び抗ＴＲＯＰ２抗体の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、及び抗ＴＲＯＰ２抗体の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、同一である。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、異なる。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子（第１のリンカーを含む）、及び／または第２のエフェクター分子（第２のリンカーを含む）は、ＳＮ３８、ＭＭＡＥ及びそれらの誘導体から選択される治療剤、例えば、式（１）～（７）の化合物である。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号６６～６７からなる群から選択される核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、検出可能な標識である。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子は、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び／または第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び／または第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位は、配列番号１～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のプロテアーゼ切断部位及び／または第２のプロテアーゼ切断部位は、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドは、配列番号１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、及び１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％、または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド及び／または第４のポリペプチドは、配列番号１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％、または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の重鎖及び第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖；（ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の重鎖及び第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド鎖；（ｃ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖；（ｄ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の軽鎖を含む第４のポリペプチド鎖；（ｅ）第１のリンカーを介して第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされた第１のエフェクター分子；及び（ｆ）第２のリンカーを介して第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされた第２のエフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）及び第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含み、第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第２の重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）及び第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗ＰＤ－Ｌ１抗体の第１の重鎖及び第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、同一である。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、異なる。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子（第１のリンカーを含む）、及び／または第２のエフェクター分子（第２のリンカーを含む）は、ＳＮ３８、ＭＭＡＥ及びそれらの誘導体から選択される治療剤、例えば、式（１）～（７）の化合物である。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号６６～６７からなる群から選択される核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、検出可能な標識である。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子は、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び／または第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、第１のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及び／または第２のトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位は、配列番号１～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のプロテアーゼ切断部位及び／または第２のプロテアーゼ切断部位は、配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュラバルマブ、アテゾリジマブまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドは、配列番号１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、及び１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％、または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチド及び／または第４のポリペプチドは、配列番号１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、及び１１３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％、または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、任意の好適な数のエフェクター分子（Ｄ）、コンジュゲーション部位（Ｃ）、プロテアーゼ切断部位（Ｐ１、Ｐ２、及びＰ３）、及びリンカー（Ｌ）を含み得る。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位Ｃの数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、エフェクター分子（Ｄ）の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、第１のプロテアーゼ切断部位Ｐ１の数は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、第２のプロテアーゼ切断部位Ｐ２の数は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、第３のプロテアーゼ切断部位Ｐ３の数は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーＬの数は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０のうちのいずれか１つであり得る。
標的コンジュゲートは、以下に記載のセクションＡ～Ｄに記載の標的化部位、エフェクター分子、コンジュゲーション部位、切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位）、及びリンカーのいずれか１つを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、単一のエフェクター分子を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、複数のエフェクター分子を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、エフェクター分子の単一分子を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、同じエフェクター分子の２つ以上を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、２つ以上の異なるエフェクター分子を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、各エフェクター分子の単一コピーを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、各エフェクター分子の２つ以上のコピーを含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、高い薬物搭載を有する。用語「薬物搭載」は、標的化コンジュゲートにおける標的化部位（例えば、抗体またはその抗原結合断片）に対するエフェクター分子の数の間の比を指す。例えば、合計で８つのエフェクター分子にコンジュゲートされた抗体は、８つの薬物搭載を有する。標的化コンジュゲートの各分子は、整数値の薬物搭載を有する。しかしながら、組成物において、標的化コンジュゲートの異なる分子が、異なる薬物搭載の値を有し得る。よって、組成物は、整数値または非整数値の平均薬物搭載を有し得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、少なくとも約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１７：１、１８：１、１９：１、または２０：１のうちのいずれか１つのエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、または１：１のうちのいずれか１つ以下のエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、約１：１～２：１、２：１～４：１、４：１～８：１、１：１～１０：１、１：１～１６：１、４：１～２０：１、１０：１～２０：１、１：１～２０：１、または２：１～２０：１のうちのいずれか１つのエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの薬物搭載は、少なくとも約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、６０：１、７０：１、８０：１、９０：１、１００：１またはそれ以上のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの薬物搭載は、約１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０：１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、または２：１のうちのいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの薬物搭載は、約２：１～４：１、２：１～８：１、２：１～１０：１、２：１～１６：１、４：１～２０：１、１０：１～２０：１、２０：１～４０：１、４０：１～１００：１、２：１～２０：１、２：１～４０：１、または１０：１～４０：１のうちのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、少なくとも約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１７：１、１８：１、１９：１、または２０：１のうちのいずれか１つのオリゴヌクレオチドの標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、または１：１のうちのいずれか１つ以下のオリゴヌクレオチドの標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。いくつかの実施形態では標的化コンジュゲートは、約１：１～２：１、２：１～４：１、４：１～８：１、１：１～１０：１、１：１～１６：１、４：１～２０：１、１０：１～２０：１、１：１～２０：１、または２：１～２０：１のうちのいずれか１つのオリゴヌクレオチドの標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する比を有する。
また、標的化コンジュゲートを調製する方法であって、エフェクター分子を標的化部位にコンジュゲートすることを含む、方法が提供される。
Ａ．標的化部位
本出願の標的化コンジュゲートは、１つ以上の標的化部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、第１の標的分子に特異的に結合する第１の標的化部位、第２の標的分子に特異的に結合する第２の標的化部位、及びコンジュゲーション部位を含み、第１の標的化部位は、コンジュゲーション部位を介して第２の標的化部位に融合されている。いくつかの実施形態では、第１の標的化部位及び第２の標的化部位は、同一である。いくつかの実施形態では、第１の標的化部位及び第２の標的化部位は、異なる。いくつかの実施形態では、第１の標的化部位及び第２の標的化部位は、同じ標的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の標的化部位及び第２の標的化部位は、異なる標的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位）が、第１の標的化部位とコンジュゲーション部位との間に配置される。いくつかの実施形態では、切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位）が、第２の標的化部位とコンジュゲーション部位との間に配置される。
抗体またはその抗原結合断片
いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗体、またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、標的部位は、抗体またはその抗原結合断片を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、全長抗体である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗原結合断片である。例示的な抗原結合断片には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、シングルドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆｖ－Ｆｃ融合、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合、ダイアボディ、トリボディ、及びテトラボディが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端にかけて：ＶＬ－ＶＨ（式中、ダッシュは、結合またはペプチドリンカーである）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端にかけて：ＶＨ－ＶＬ（式中、ダッシュは、結合またはペプチドリンカーである）を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、ｓｃＦｖを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ｓｃＦｖ－全長抗体融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＮ末端は、全長抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端に共有結合で融合される。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、ＦａｂまたはＦａｂ’である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、（通常はポリペプチドのＦａｂ部分のカルボキシル末端で）野生型ヒンジ配列の一部またはすべてを含み得るＦａｂ含有ポリペプチドである。Ｆａｂ含有ポリペプチドは、任意の好適な免疫グロブリンから得られ、またはそれに由来し得る。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ含有ポリペプチドは、Ｆａｂ断片を融合パートナー、例えば、受容体の標的結合領域、接着分子、リガンド、酵素、サイトカイン、ケモカイン、またはいくつかの他のタンパク質もしくはタンパク質ドメインと組み合わせるＦａｂ－融合タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、標的化ペプチドは、標的タンパク質のドメインまたは一部である。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）としても知られているナノボディを含む。例示的なｓｄＡｂには、重鎖のみの抗体（例えば、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ）からの重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠いている結合分子、従来の４鎖抗体に由来するシングルドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、重鎖のみのヒト化抗体、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットによって生成されるヒトｓｄＡｂ、ならびに抗体に由来するもの以外の操作されたドメイン及びシングルドメイン骨格が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、標的化部位は、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、多重特異的抗体を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、多重特異的抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、二重特異的抗体である。例示的な二重特異的抗体には、全長及びＦａｂ２コンストラクト、ならびにダイアボディが含まれる。いくつかの実施形態では、ダイアボディは、ペプチドリンカーによって接続された一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片の非共有結合性二量体である。いくつかの実施形態では、ダイアボディの別の形態は、２つのｓｃＦｖ断片が互いに共有結合で連結されている一本鎖（Ｆｖ）である。いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、三重特異的抗体である。例示的な三重特異的抗体には、Ｆａｂ３及びトリアボディが含まれ、後者は、ダイアボディの３ｓｃＦｖバージョンである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ－Ｆｃは、インタクトＦｃ領域に融合した２つの連結した一本鎖可変断片から作製される。いくつかの実施形態では、ミニボディは、ｓｃＦｖ－Ｆｃと同様であるが、全Ｆｃ領域ではなくＣＨ１ドメインのみを含有する。他の多価コンストラクトには、ＩｇＮＡＲ及びｈｃＩｇＧが含まれる。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、完全ヒト化、または半合成抗体である。抗体及び／または抗体断片は、ネズミ抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、完全ヒト化抗体、ラクダ科動物抗体可変ドメイン及びヒト化バージョン、サメ抗体可変ドメイン及びヒト化バージョン、ならびにラクダ化抗体可変ドメインに由来し得る。いくつかの実施形態では、標的化部位は、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、アゴニスト抗体またはその抗原結合断片である。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の抗体定常領域、例えば、ヒト抗体定常領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプの物である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が所望である場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む抗体が選択され得る。いくつかの実施形態では、エフェクター機能が所望ではない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含む抗体が選択され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、安定化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、安定化ドメインは、Ｆｃドメインを含む。用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ」は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端非抗原結合領域を指す。その用語には、ネイティブＦｃ領域及びバリアントＦｃ領域が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭのＦｃ断片、ならびにそれらの組み合わせ及びハイブリッドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のＦｃドメイン、または組み合わせもしくはハイブリッドＩｇＧを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、対応する野生型Ｆｃドメインと比較して減少したエフェクター機能（例えば、抗体依存的細胞傷害（ＡＤＣＣ）のレベルによって測定される場合、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％減少したエフェクター機能）を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からカルボキシル末端まで伸長する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を及ぼさずに、存在する場合があり、または存在しない場合がある。いくつかの実施形態では、標的化部位は、野生型ＩｇＧまたは野生型抗体のＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するバリアントＦｃ領域を含む。
抗体は、２つの同一の軽タンパク質鎖（軽鎖）及び２つの同一の重タンパク質鎖（重鎖）からなり得、すべてが鎖間ジスルフィド結合によって互いに共有結合で保持されている。軽鎖及び重鎖のＮ末端領域は一緒に、抗体の抗原認識部位を形成し得る。構造的に、抗体の様々な機能は、別個のタンパク質ドメインまたは領域に制約され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨを含む重鎖及びＶＬを含む軽鎖を含む抗原結合部分を含む。一本鎖抗体を含む抗原結合抗原結合断片は、可変領域（複数可）を単独で、または次のもの：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインの全体または一部と組み合わせて含み得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または低下させるために改変される。抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が生成または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることによって好都合に達成され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体上の反応性官能基の反応性を増加または低下させるために改変される。いくつかの実施形態では、抗体は、反応性官能基の数を加または低下させるために改変される。いくつかの実施形態では、抗体は、反応性官能基が曝露される程度を増加または低下させるために改変される。反応性官能基は、抗体のアミノ酸のＮ末端、Ｃ末端、または側鎖にあり得る。反応性官能基は、抗体に天然に存在し、または組み込まれ得る。反応性官能基は、アミンもしくはその誘導体、カルボキシル基もしくはその誘導体、ニトロ、または他の官能基であり得る。いくつかの実施形態では、反応性官能基は、アミンである。いくつかの実施形態では、アミンは、抗体のＦｃ領域にある。
標的分子に特異的に結合する抗体は、当該技術分野で知られている方法を使用して、例えば、非ヒト哺乳動物を免疫し、それからハイブリドーマを得ることによって、または当該技術分野で知られている分子生物学的技術を使用した抗体のライブラリのクローニングと、その後の選択によってまたはファージディスプレイを使用することによって得られ得る。本明細書に記載の抗体または抗原結合断片のいずれか１つをコードする核酸コンストラクト、ベクター、及び調製のための宿主細胞も提供される。
標的化ペプチド
いくつかの実施形態では、標的化部位は、標的化ペプチドを含む。用語「標的化ペプチド」は、標的分子、例えば、細胞表面分子に標的部位で特異的に結合する非抗体ベースのポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、標的化部位は、標的化ペプチドに融合した抗体またはその抗原結合断片を含む融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、標的化ポリペプチドは、非抗体骨格を含む。非抗体骨格は、異なる種類の標的に対する特異性をもたらす操作されたタンパク質骨格である。抗体と比較して、操作されたタンパク質骨格は、組換え遺伝子発現、２官能性融合タンパク質の構築、及び組織浸透を容易化する非常により小さなサイズでより単純な構造を提供する。例えば、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２００７，１８：２９８－３０４を参照されたい。５０種を超える異なる非抗体骨格が報告されている。例えば、Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｒｏｄｒｉｇｏ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｔｏｄａｙ ２０．１０（２０１５）：１２７１－１２８３を参照されたい。例示的な非抗体骨格には、リポカリン、アンチカリン（ヒトリポカリンに由来する人工抗体ミメティックタンパク質）、「Ｔ－ｂｏｄｙ」、ペプチド（例えば、ＢＩＣＹＣＬＥ（商標）ペプチド）、アフィボディ（アルファヘリックス、例えば、３ヘリックス束から構成される抗体ミメティック）、ペプチボディ（ペプチド－Ｆｃ融合）、ＤＡＲＰｉｎ（リピートモチーフを構成する操作された抗体ミメティックタンパク質である設計されたアンキリンリピートタンパク質）、アフィマー、アビマー、ノッチン（３つのジスルフィド橋を含有するタンパク質構造モチーフ）、モノボディ、親和性クランプ、エクトドメイン、受容体エクトドメイン、受容体、サイトカイン、リガンド、イムノサイトカイン、及びセントリインが含まれるがこれらに限定されない。例えば、ＷＯ２０１９０８４０６０（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、アンチカリンを含む。ＣＴＬＡ－４、ヘプシジン、肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ；ＭＥＴ）、ＩＬ－４Ｒａ及びＩＬ－２３／ＩＬ－１７に対して仕向けられた前臨床試験中の多数のリード化合物を伴って、より活動的に開発された非抗体骨格の中にはアンチカリンがある。ＰＲＳ－０５０（ＡＮＧＩＯＣＡＬ（登録商標）；ピエリス）は、現在第Ｉ相臨床的調査を受けているＶＥＧＦ－Ａを標的とする抗血管新生アンチカリンである。ＶＥＧＦ－Ａを標的とするＤＡＲＰｉｎであるレチナール抗血管新生障害を標的とするＭＰ０１１２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ／Ａｌｌｅｒｇａｎ）も現在、臨床研究において評価されている。ＦＤＡが承認した単一非抗体骨格には、遺伝性血管性浮腫の処置のために使用される血漿カリクレイン阻害剤であるクーニッツドメインＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）（エカランチド；Ｄｙａｘ）；ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ－Ｂｅｈｒｉｎｇ）、及びＣＩＮＲＹＺＥ（登録商標）（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ／Ｓｈｉｒｅ）、ならびにブラジキニン受容体アンタゴニストＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標）（Ｓｈｉｒｅ）が含まれる。例えば、Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｒｏｄｒｉｇｏ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｔｏｄａｙ ２０．１０（２０１５）：１２７１－１２８３を参照されたい。
いくつかの実施形態では、標的化ペプチドは、標的分子の受容体またはリガンドに由来するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化ポリペプチドは、標的分子及びそのリガンドまたは受容体の結合を完全にまたは部分的に（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のうちのいずれか１つ）遮断する阻害性ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、標的化ペプチドは、長さが少なくとも約２、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００またはそれ以上のアミノ酸のうちのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、標的化ペプチドは、安定化ドメインを含む。安定化ドメインは、標的化ペプチドを安定化する任意の好適なドメインであり得る。いくつかの実施形態では、安定化ドメインは、ｉｎ ｖｉｖｏでの標的化ペプチドの半減期を延長させる。いくつかの実施形態では、安定化ドメインは、Ｆｃドメイン、例えば、「抗体またはその抗原結合断片」のセクションに記載のＦｃドメインのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、安定化ドメインは、アルブミンドメインである。いくつかの実施形態では、標的化ペプチド及び安定化ドメインは、リンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して互いに融合される。
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列、または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列が、リンカーとして使用され得る。ペプチドリンカーは、任意の好適な長さのものであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、剛性三次元構造を採用しない傾向があるが、むしろポリペプチドに対して柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、柔軟性リンカーである。例示的な柔軟性リンカーには、グリシンポリマー、グリシン－セリンポリマー、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で知られている他の柔軟性リンカーが含まれる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、酵素反応のための基質配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、標的化ペプチド及び安定化ドメインをライゲーションする酵素のための基質配列を含む。
標的化ペプチドは、当該技術分野における既知の方法を使用して、例えば、ポリペプチドのスクリーニングライブラリによって得られ得る。ポリペプチドは、化学的合成を使用して調製され、または組換えＤＮＡ技術を使用して生成され得る。本明細書に記載の標的化ペプチドのいずれか１つをコードする核酸コンストラクト、ベクター、及び調製のための宿主細胞も提供される。
標的分子及び例示的な標的化部位
標的化部位は、１つ以上の標的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、単一特異的であり、すなわち、単一標的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、多重特異的であり、すなわち、単一標的分子における２つ以上の異なる標的部位、または２つ以上の異なる標的分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、単一標的結合部位を有する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、２つ以上の標的結合部位を有する。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、細胞表面分子に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、標的部位における細胞表面分子である。いくつかの実施形態では、標的部位は、疾患の部位である。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、疾患は、炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、線維性疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、感染症である。いくつかの実施形態では、疾患は、自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、免疫不全疾患である。
例示的な標的分子には、タンパク質、グリカン、脂質、他の小分子、またはそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、腫瘍特異的マーカー／腫瘍抗原である。本明細書に記載される場合、「腫瘍特異的マーカー」または「腫瘍抗原」は、新生物腫瘍細胞上及び／または腫瘍微小環境内に発現し得る分子マーカーを指す。腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原及び／または腫瘍関連抗原であり得る。例えば、腫瘍抗原は、腫瘍に関連する細胞、例えば、新生物細胞、間質細胞、内皮細胞、線維芽細胞、または腫瘍浸潤免疫細胞に発現した抗原であり得る。例えば、腫瘍抗原Ｈｅｒ２／Ｎｅｕは、所定のタイプの乳癌及び卵巣癌によって過剰発現し得る。腫瘍抗原はまた、腫瘍によって異所的に発現され、細胞周期の制御不全、減少したアポトーシス、転移、及び／または免疫監視からの逃避に寄与する。腫瘍抗原は通常、それに由来するタンパク質またはポリペプチドであるが、グリカン、脂質、または他の小さな有機分子であり得る。また、腫瘍抗原は、正常細胞と比較してがん細胞によって示される翻訳後プロセシング、例えば、タンパク質グリコシル化、タンパク質脂質化、タンパク質リン酸化、またはタンパク質アセチル化の増加又減少を介して生じ得る。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、細胞表面炭水化物である。いくつかの実施形態では、細胞表面炭水化物は、単糖である。いくつかの実施形態では、細胞表面グリカンは、オリゴ糖である。いくつかの実施形態では、細胞表面炭水化物は、多糖である。いくつかの実施形態では、細胞表面炭水化物は、グリカンである。いくつかの実施形態では、細胞表面炭水化物は、複合糖質、例えば、糖タンパク質、糖脂質、またはプロテオグリカンである。いくつかの実施形態では、細胞表面グリカンは、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ｓＬｅ、ポリシアル酸、フコシルＧＭｌ、Ｔｎ、ＳＴｎ、ＢＭ３、またはＧｌｏｂｏＨからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、細胞表面タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞表面タンパク質は、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＢＣＭＡ、ＣＳ－１、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌｌ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、ＨＬＡ－ＤＲ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、ＭＵＣ１６、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ｄｅ２－７ ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮成長因子、ａｖβ３、ＷＴｌ、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＬＰ－３、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異体、ｇｐｌ００、ｐ５３変異体、ＰＲＩ、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、スルビビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、ＳＴＮＩ、ＴＮＣ、肉腫転座切断点融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡＩ ７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＹＰＩＢＩ、ＰＬＡＶＩ、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＥＴＶ６－ＡＮ１Ｌ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳＩ、精液タンパク質１７、ＬＣＫ、ＭＡＧＥ Ｃ２、ＭＡＧＥ Ａ４、ＧＡＧＥ、ＴＲＡＩＬＩ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ３、ＰＡＧＥ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴＩ、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＥＰＣＡＭ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、クローディン－６（ＣＬＤＮ６）、クローディン－１６（ＣＬＤＮ１６）、ＣＬＤＮ１８．２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ウロプラキン－ＩＢ（ＵＰＫＩＢ）、ＬＩＶＩ、ＲＯＲＩ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＩＶ１ＰＲＳＳ４、ＴＩＶ１ＥＭ２３８、Ｃｌｏｒｆ１８６、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲＩ、エンドグリン、ＶＴＣＮＩ（Ｂ７－Ｈ４）、ＶＩＳＴＡ、及びそれらの断片からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、Ｔｒｏｐ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、４－１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＲ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７９、インテグリンαｖβ３、αｖβ６、ＭＵＣ１、ＰＭＳＡ、ｕＰＡＲ、及びアンジオペプ－２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、Ｔｒｏｐ２である。上皮糖タンパク質－１、胃腸抗原７３３－１、膜成分表面マーカー－１、及び腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質－２としても知られているＴｒｏｐ－２は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子のタンパク質産物である。Ｔｒｏｐ－２は、Ｔｒｏｐ－２発現のベースラインレベルとは無関係にすべてのがんタイプにおいて上方制御される膜貫通糖タンパク質である。Ｔｒｏｐ－２は、それが多様な腫瘍で過剰発現する細胞外ドメインを有する膜貫通タンパク質であり、正常細胞と比べて発現が上方制御されるため、標的化治療剤のための理想的な候補である。例えば、Ｏｎｃｏ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ．２０１９；１２：１７８１－１７９０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、標的分子は、線維性または炎症性疾患に関連する。いくつかの実施形態では、標的分子は、カドヘリン１１、ＰＤＰＮ、ＬＲＲＣ１５、インテグリンａ、４ｆ３７、インテグリンａ２ｆ３１、ＭＡＤＣＡＭ、ネフリン、ポドシン、ＩＦＮＡＲＩ、ＢＤＣＡ２、ＣＤ３０、ｃ－ＫＩＴ、ＦＡＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３８、ＰＤＧＦＲｆ３、インテグリンａｖｆ３１、インテグリンａｖｆ３３、インテグリンａｖｆ３８、ＧＡＲＰ、エンドシアリン、ＣＴＧＦ、インテグリンａｖｆ３６、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＮＦＲ２、ＤＥＣ２０５、ＤＣＩＲ、ＣＤ８６、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＯ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ２５、ＬＲＲＣ１５、ＭＭＰ１４、ＧＰＸ８、及びＦ２ＲＬ２からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、標的分子は、感染症または免疫不全疾患に関連する。いくつかの実施形態では、標的分子は、感染性物質、例えば、病原性細菌またはウイルスのタンパク質である。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する。免疫チェックポイントタンパク質は、免疫活性化を制御する。しかしながら、いくつかのがんは、免疫チェックポイント標的を刺激することによって攻撃からそれ自体を保護し得る。例えば、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃａｎｃｅｒ．１２（４）：２５２－６４を参照されたい。阻害性チェックポイント分子は、複数のタイプのがんにおいて使用するためのそれらの潜在性により、がん免疫療法のための標的である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、免疫チェックポイント阻害剤を含む。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫系の制御メカニズムの活性を阻害する化合物である。免疫系チェックポイント、または免疫チェックポイントは、免疫系における阻害経路であり、これは通常、自己寛容を維持し、または生理的免疫反応の継続期間及び規模を調節して、側副組織損傷を最小限にするように作用する。免疫チェックポイント阻害剤は、刺激性チェックポイント分子の活性を刺激し、または経路における阻害性チェックポイント分子の活性を阻害することによって免疫系チェックポイントを阻害し得る。免疫系チェックポイント分子には、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム細胞死１タンパク質（ＰＤ－１）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶ－ドメイン免疫グロブリン（Ｉｇ）含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、及びＡ２Ａアデノシン受容体（Ａ２ａＲ）が含まれるがこれらに限定されない。このように、免疫チェックポイント阻害剤には、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、及びＴＩＭ３のアンタゴニストが含まれる。例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｂ７－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、またはＴＩＭ３に結合し、それらの機能をアンタゴナイズする抗体は、免疫チェックポイント阻害剤である。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、当該技術分野で知られている任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体に由来する。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ（イミフィンジ）、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＳＨＲ－１３１６（ＨＴＩ－１０８８）、ＣＫ－３０１、ＢＭＳ－９３６５５９、エンバフォリマブ（ＫＮ０３５、ＡＳＣ２２）、ＣＳ１００１、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、ＬＹ３３０００５４、ＳＴＩ－Ａ１０１４、ＦＡＺ０５３、ＣＸ－０７２、ＩＮＣＢ０８６５５０、ＧＮＳ－１４８０、ＣＡ－１７０、ＣＫ－３０１、Ｍ－７８２４、ＨＴＩ－１０８８（ＨＴＩ－１３１、ＳＨＲ－１３１６）、ＭＳＢ－２３１１、ＡＫ－１０６、ＡＶＡ－００４、ＢＢＩ－８０１、ＣＡ－３２７、ＣＢＡ－０７１０、ＣＢＴ－５０２、ＦＰＴ－１５５、ＩＫＴ－２０１、ＩＫＴ－７０３、１０－１０３、ＪＳ－００３、ＫＤ－０３３、ＫＹ－１００３、ＭＣＬＡ－１４５、ＭＴ－５０５０、ＳＮＡ－０２、ＢＣＤ－１３５、ＡＰＬ－５０２（ＣＢＴ－４０２またはＴＱＢ２４５０）、ＩＭＣ－００１、ＫＤ－０４５、ＩＮＢＲＸ－１０５、ＫＮ－０４６、ＩＭＣ－２１０２、ＩＭＣ－２１０１、ＫＤ－００５、ＩＭＭ－２５０２、８９Ｚｒ－ＣＸ－０７２、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－６Ｅ１１、ＫＹ－１０５５、ＭＥＤＩ－１１０９、ＭＴ－５５９４、ＳＬ－２７９２５２、ＤＳＰ－１０６、Ｇｅｎｓｃｉ－０４７、ＲＥＭＤ－２９０、Ｎ－８０９、ＰＲＳ－３４４、ＦＳ－２２２、ＧＥＮ－１０４６、ＢＨ－２９ｘｘ、ＦＳ－１１８、それらのバイオシミラー、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１への結合についてこれらの当該技術分野で認識されている抗体のいずれかと競合する抗体も使用され得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか１つの誘導体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブからなる群から選択される抗体に由来する。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブに由来する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、デュルバルマブと同じまたは実質的に同じエピトープに競合的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３を含み、ＶＬは、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖：及び／または配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブに由来する。いくつかの実施形態では、標的化部位は、アテゾリズマブと同じまたは実質的に同じエピトープに競合的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、及び配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３を含み、ＶＬは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、本明細書に記載の標的化部位のバリアントを含む。例えば、抗体のバリアントは、抗体アミノ酸配列の全体分子構造を保存しながら、例示的な抗体（「親抗体」）のアミノ酸配列の１つ以上の修飾を含み得る。フレームワーク領域、ＣＤＲ領域、または定常領域等の親抗体鎖の任意の領域のアミノ酸配列が修飾され得る。修飾のタイプには、親抗体の１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、親抗体の対応するＣＤＲと少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、またはＣＤＲ Ｌ３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、親抗体のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％のうちのいずれか１つ）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗体バリアントは、親抗体のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％のうちのいずれか１つ）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの特定の実施形態では、抗体バリアントは、親抗体のＶＨ、ＶＬ、重鎖または軽鎖のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の保存的または非保存的置換、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の付加及び／または欠失を含む。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、カルシウムシグナル伝達物質に特異的に結合する。細胞内カルシウムシグナル伝達物質は、細胞シグナル伝達、遊走、増殖、及び分化に関与する。細胞内カルシウムシグナル伝達物質は、様々ながん原遺伝子及び細胞周期関連経路を上方制御するその能力を介して発がん潜在性を有することが示されている。いくつかの実施形態では、細胞内カルシウムシグナル伝達物質は、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質である。腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質は、複数のタイプのがんにおけるそれらの異なる発現のため、がん免疫療法のための標的である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２（Ｔｒｏｐ－２）に特異的に結合する。
Ｔｒｏｐ－２は、トロホブラスト細胞表面抗原２、Ｍ１Ｓ１、ＧＡ７３３－１、ＥＧＰ－１、またはＴＡＣＳＴＤ２としても知られている。Ｔｒｏｐ－２は、ヒト胎盤トロホブラストにおいて元々同定された細胞表面糖タンパク質であり、その後、ほとんどのヒトがんにおいて高度に発現することが見出されたが、正常な成人組織では制限されたまたは限定された発現しか示さなかった。例えば、Ｖａｒｕｇｈｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１２２：１７１－１７７，２０１１を参照されたい。いかなる理論または仮説によっても縛られることなく、Ｔｒｏｐ－２は、いくつかの細胞シグナル伝達経路に関与し、これらの多くは腫瘍形成に関連する。例えば、甲状腺癌細胞浸潤において、Ｔｒｏｐ－２シグナル伝達は、ＥＲＫ及びＪＮＫ経路の下流効果として確認されている。Ｓｔｏｙａｎｏｖａらは、Ｔｒｏｐ－２がｂ－カテニンシグナル伝達を介して増殖及び自己複製を制御するので、Ｔｒｏｐ－２シグナル伝達は、がん細胞の幹細胞様特性を向上させることを実証した。Ｔｒｏｐ－２の細胞質ドメインは、プロテインキナーゼＣリン酸化部位と重複するＰＩＰ２結合配列を含有するので、ホスファチジルイノシトール４，５－ビスホスフェート（ＰＩＰ２）は、Ｔｒｏｐ－２リン酸化及びカルシウムシグナル伝達を制御し得ると推測されている。例えば、Ｚａｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ．２０１９；１２：１７８１－１７９０を参照されたい。Ｔｒｏｐ－２は、腫瘍進行及び転移において役割を果たすことが示されている。例えば、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１２ Ｊｕｎ；４（６）：４７２－８５を参照されたい。Ｔｒｏｐ－２の上昇した発現レベルは、前立腺癌を含むがん再発のための予測となることが示されている。例えば、Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０２０；１１７（４）：２０３２－２０４２を参照されたい。Ｔｒｏｐ－２は、複数のがんにおけるその過剰発現のため、有望な治療標的として現れている。ＤＮＡ複製を標的とする細胞傷害剤であるＳＮ－３８にコンジュゲートされた抗Ｔｒｏｐ２抗体であるサシツズマブゴビテカン（ＩＭＭＵ－１３２）は、トリプルネガティブ乳癌、進行非小細胞肺癌、及び転移性白金耐性尿路上皮癌を含むいくつかの悪性腫瘍において治療的活性を示した。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗Ｔｒｏｐ－２抗体またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦａｂを含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗Ｔｒｏｐ－２ナノボディを含む。抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディは、当該技術分野で知られている任意の抗Ｔｒｏｐ－２抗体に由来し得る。例示的な抗Ｔｒｏｐ－２抗体には、ｈＲＳ７、１６２－４６．２、ＭＡＢ６５０、Ｋ５－７０、Ｋ５－１０７、Ｋ５－１１６－２－１、Ｔ６－１６、Ｔ５－８６、ＢＲ１１０、３Ｅ９、６Ｇ１１、７Ｅ６、１５Ｅ２、１８Ｂ１、７７２２０、ＫＭ４０９７、ＫＭ４５９０、Ａ１、Ａ３、１６２－２５．３、ならびにハイブリドーマＡＲ４７Ａ６．４．２、ＡＲ５２Ａ３０１．５、ＰＴＡ－１２８７１、ＰＴＡ－１２８７２、ＰＤ０８０１９、ＰＤ０８０２０、及びＰＤ０８０２１によって生成される抗体、それらのバイオシミラー、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｔｒｏｐ－２への結合についてこれらの当該技術分野で認識されている抗体のいずれかと競合する抗体も使用され得る。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディは、本明細書に記載の抗Ｔｒｏｐ－２抗体のいずれか１つの誘導体である。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディは、ｈＲＳ７、１６２－４６．２及びＭＡＢ６５０からなる群に由来する。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディは、ｈＲＳ７に由来する。
いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）は、ｈＲＳ７に由来する。例えば、米国特許第７，２３８，７８５号を参照されたい。いくつかの実施形態では、標的化部位は、ｈＲＳ７と同じまたは実質的に同じエピトープに競合的に結合する。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはｓｃＦａｂ）は、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ２、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｈ３を含み、ＶＬは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ２、及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはｓｃＦａｂ）は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または配列番号１４１、１４２、または１４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖは、配列番号１３１、１３２、または１３３を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦａｂは、配列番号１３０を含む。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ及びナノボディからなる群から選択される抗原結合断片に融合した全長抗体を含む多重特異的抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディに融合した全長抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖のＣ末端は、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖のＣ末端は、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、標的化部位は、本明細書に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか１つを含む。
Ｂ．エフェクター分子
標的化コンジュゲートは、１つ以上のエフェクター分子を含む。例示的なエフェクター分子には、治療剤、オリゴヌクレオチド、及び検出可能な標識が含まれるがこれらに限定されない。標的化コンジュゲートは、単一タイプのエフェクター分子、または異なるタイプのエフェクター分子を含み得る。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上の治療剤を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上の検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、治療剤及びオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、検出可能な標識及び治療剤を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、検出可能な標識及びオリゴヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子を含む。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子（例えば、治療剤）と第２のエフェクター分子（例えば、オリゴヌクレオチド）との間の比は、少なくとも約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子（例えば、治療剤）と第２のエフェクター分子（例えば、オリゴヌクレオチド）との間の比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、または１：１０のうちのいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、第１のエフェクター分子（例えば、治療剤）と第２のエフェクター分子（例えば、オリゴヌクレオチド）との間の比は、約１：１０～１０：１、１：９～約９：１、１：８～８：１、１：７～７：１、１：６～６：１、１：５～５：１、１：４～４：１、１：３～３：１、１：２～２：１、１：１０～１：５、１：５～１：１、１：１～５：１、または５：１～５：１０のうちのいずれか１つである。
治療剤
いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、治療剤である。例示的な治療剤には、薬物、毒素、免疫調節剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、酵素阻害剤、放射性核種、血管新生阻害剤、化学療法剤等が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、治療剤は、小分子薬物である。いくつかの実施形態では、治療剤は、化学療法剤である。
多様な化学療法剤は、本実施形態に従って使用され得る。「化学療法剤」は、がんの処置において投与される化合物または組成物を指す。これらの薬剤または薬物は、細胞内の活性のそれらの態様、例えば、それらが細胞周期に影響を及ぼすかどうか及びどの段階で影響を及ぼすかによって分類される。代替的には、薬剤は、ＤＮＡを直接的に架橋する、ＤＮＡにインターカレートする、または核酸合成に影響を及ぼすことによって染色体及び分裂異常を導入するその能力に基づいて特性化され得る。
例示的な化学療法剤には、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、及びウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファミド、及びウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマル（ｇａｍｍａｌｌ）及びカリケアミシンオメガル（ｏｍｅｇａｌｌ））；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモミシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、及びゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、プテロプテリン、及びトリメトトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、及びチオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、及びフロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトン；抗アドレナール剤、例えば、ミトタン及びトリロスタン；葉酸補給剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセル及びドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－ｌ ｌ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファメシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、及び上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、治療剤は、キナーゼ阻害剤である。標的とされるキナーゼの群は、受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｂ－Ｒａｆ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２／ＥｒｂＢ２、ＩＧＦ－ＩＲ、ＰＤＧＦＲ－ａ、ＰＤＧＦＲ－β、ｃＫｉｔ、Ｆｌｔ－４、Ｆｌｔ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＣＳＦ１Ｒ、ｃ－Ｍｅｔ、ＲＯＮ、ｃ－Ｒｅｔ、ＡＬＫ、細胞質チロシンキナーゼ、例えば、ｃ－ＳＲＣ、ｃ－ＹＥＳ、Ａｂｌ、ＪＡＫ－２、セリン／トレオニンキナーゼ、例えば、ＡＴＭ、オーロラＡ＆Ｂ、ＣＤＫｓ、ｍＴＯＲ、ＰＫＣｉ、ＰＬＫｓ、ｂ－Ｒａｆ、Ｓ６Ｋ、ＳＴＫ１ １／ＬＫＢ１及び脂質キナーゼ、例えば、ＰＩ３Ｋ、ＳＫＩを含む。例示的な小分子キナーゼ阻害剤には、例えば、ＰＨＡ－７３９３５８、ニロチニブ、ダサチニブ、及びＰＤ１６６３２６、ＮＳＣ７４３４１ １、ラパチニブ（ＧＷ－５７２０１６）、カネルチニブ（ＣＩ－１０３３）、セマキシニブ（ＳＵ５４１６）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４）、ステント（ＳＵ１ １２４８）、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３－９００６）及びレフルノミド（ＳＵ１０１）が含まれる。さらなる情報については、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．２００９：Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ ９，２８－３９．”を参照されたい。
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、抗ＤＮＡ修復剤である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ損傷修復及び反応阻害剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＲＡＤ５１阻害剤、及びＣＨＣＫ１、ＡＴＭ、またはＡＴＲから選択されるＤＮＡ損傷反応キナーゼの阻害剤を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、トポイソメラーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン及び関連化合物を含む。トポイソメラーゼＩ（ＴＯＰ１）酵素は、転写、複製及びクロマチンリモデリングによって生成されるＤＮＡ超らせん形成を緩めるために必要とされるので、高等真核生物において必須である。トポイソメラーゼは、それらの切断反応中にトポイソメラーゼＩ阻害剤に対して特に脆弱であり、それがＤＮＡを切断するときに抗がん薬によって捕捉され得る。中国の木であるＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔｅから単離されアルカロイドであるカンプトテシンは、ＴＯＰ１が唯一の細胞標的である天然生成物である。いかなる理論または仮説によっても縛られることなく、カンプトテシン及びその誘導体は、ＴＯＰ１活性の阻害によって機能し、ＤＮＡ二重鎖切断及び細胞死をもたらす。臨床的使用のためにカンプトテシンの誘導体が開発されてきた。例示的なカンプトテシン誘導体には、トポテカン塩酸塩（イカムチン）、イリノテカン塩酸塩（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、ＳＮ－３８（イリノテカンの活性形態）、９－ＮＣ、９－ＡＣ、ＤＥ－３１０、ルルトテカンＧＩ－１４７２１１ ＮＸ ２１１、ギマテカン（ＳＴ－１４８１）、ＰＥＧ－カンプトテシン、ＢＮＰ－１３５０、ＤＢ－６７、ＢＮ ８０９１５が含まれるがこれらに限定されない。２つのカンプトテシン誘導体が、ＦＤＡによって最近承認された：卵巣についてのトポテカンならびに肺癌及び大腸癌についてのイリノテカン。例えば、Ｐｏｍｍｉｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ ６，７８９－８０２（２００６）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、治療剤は、７－エチル－１０－ヒドロキシ－２０（Ｓ）－カンプトテシン（ＳＮ－３８）である。ＳＮ－３８は、イリノテカンの活性代謝産物であるが、イリノテカン自体よりも１０００倍高い活性を有する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイは、イリノテカンと比べてＳＮ－３８の効力が２～２０００倍変わることを示す。その低い溶解性及び超毒性により、ＳＮ－３８は、より良好な治療効果のために薬物コンジュゲートへと開発された。例えば、米国特許第７，９９９，０８３号及び第８，０８０，２５０号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＳＮ－３８は、その１０－ヒドロキシル位置で標的化部位にコンジュゲートされる。ＣＰＴアナログ、例えば、ＳＮ－３８を含む薬物－リンカー前駆体の調製におけるＣ－２０カルボネートの存在下での１０－ヒドロキシル基の選択的再生のための方法は、当該技術分野で知られている。例えば、米国特許第１０，２６６，６０５号を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＳＮ－３８は、２０－ヒドロキシル位置で標的化コンジュゲートにコンジュゲートされる。薬物における反応性ヒドロキシル基、例えば、ＳＮ－３８におけるフェノール性ヒドロキシルのための他の保護基、例えば、ｔ－ブチルジメチルシリルまたはｔ－ブチルジフェニルシリルも使用され得、これらは、誘導体化された薬物を抗体カップリング部位に連結する前にテトラブチルアンモニウムフルオリドによって脱保護される。ＣＰＴアナログの１０－ヒドロキシル基は、エステルまたはカルボネートとして代替的に保護される。いくつかの実施形態では、ＳＮ－３８は、リンカーを介して標的化部位にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、治療剤は、分裂阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、チューブリン破壊剤を含む。微小管／チューブリン阻害剤は、それらの作用メカニズムに従って２つの主要なカテゴリー：チューブリン重合を促進し、かつ微小管構造を安定化する薬剤（例えば、パクリタキセル）及びチューブリン重合を阻害し、かつ微小管構造を脱安定化する薬剤（例えば、メイタンシノイド、アウリスタチン、ビンブラスチン及びビンクリスチン）に分類され得る。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２２：１２８１，２０１７を参照されたい。例示的なチューブリン破壊剤には、アウリスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、クリプトフィシン、メイタンシノイド、ヘミアステリン、及び他のチューブリン破壊剤が含まれるがこれらに限定されない。アウリスタチンは、天然生成物ドラスタチンの誘導体である。例示的なアウリスタチンには、ドラスタチン－１０、ＭＭＡＥ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－ノルエフェドリン）及びＭＭＡＦ（Ｎ－メチルバリン－バリン－ドライソロイイン－ドラプロイン－フェニルアラニン）、及びそれらの誘導体が含まれる。ＷＯ２０１５／０５７６９９は、ＭＭＡＥを含むペグ化アウリスタチンを記載している。使用するために企図される追加のドラスタチン誘導体は、米国特許第９，３４５，７８５号（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。チューブリシンには、チューブリシンＤ、チューブリシンＭ、チューブフェニルアラニン、チューブチロシン、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。コルヒチン類には、コルヒチン、ＣＡ－４、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。ビンカアルカロイドには、ビンブラスチン（ＶＢＬ）、ビノレルビン（ＶＲＬ）、ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンデシン（ＶＤＳ）、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。タキサンには、パクリタキセル、ドセタキセル、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。クリプトフィシンには、クリプトフィシン－１、クリプトフィシン－５２、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。メイタンシノイドには、メイタンシン、メイタンシノール、メイタンシンアナログ、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、アンサマトシン－２、及びそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない。例示的なメイタンシノイド薬物部位には、修飾された芳香族環を有するもの、例えば、Ｃ－１９－デクロロ（アンサマイトシンＰ２の水素化アルミニウムリチウム還元によって調製される）；Ｃ－２０－ヒドロキシ（またはＣ－２０－デメチル）＋／－Ｃ－１９－デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号及び第４，３０７，０１６号）（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓまたはＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓを使用する脱メチル化またはＬＡＨを使用する脱塩素によって調製される）；及びＣ－２０－デメトキシ、Ｃ－２０－アシルオキシ（－ＯＣＯＲ）、＋／－デクロロ（アシルクロリドを使用するアシル化によって調製される）、ならびにそれらの誘導体が含まれる。
チューブリン破壊剤は、白血病のための抗体薬物コンジュゲートにおいて使用されている。例えば、ブレンツキシマブベドチンは、プロテアーゼ切断性リンカーによって微小管破壊剤であるモノメチルアウリスタチンＥにコンジュゲートされた抗ＣＤ３０モノクローナル抗体から構成される抗体－薬物コンジュゲートである。ブレンツキシマブベドチンは、自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）の失敗の後またはＡＳＣＴ候補ではない患者における少なくとも２回の先行多剤化学療法レジメンの失敗の後の古典的ホジキンリンパ腫患者の処置のため、及び再燃／進行の増加したリスクがあるホジキンリンパ腫患者のためのＡＳＣＴ後の安定化として承認された。ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）の米国の処方情報（Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）及びＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）の欧州の製品特性の概要（Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）を参照されたい。それはまた、少なくとも１回の先行多剤化学療法レジメンの失敗の後の全身性未分化大細胞型リンパ腫のために承認された。
いくつかの実施形態では、チューブリン破壊剤は、アウリスタチンを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。ＭＭＡＥは、ドラスタチン１０の合成誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって極めて強力な抗分裂剤として機能する。ＭＭＡＥの合成及び構造は、米国特許第６，８８４，８６９号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
いくつかの実施形態では、治療剤は、薬物リンカーをさらに含む。いくつかの実施形態では、薬物リンカーは、切断可能なリンカーを介して治療剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬物リンカーは、非切断性リンカーを介して治療剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミンドナー基リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、非切断性リンカーである。好適な非切断性リンカーには、ＮＨ２―Ｒ―Ｘ、ＮＨ２ＮＨ―Ｒ―Ｘ、及びＮＨ２―Ｏ―Ｒ―Ｘ（式中、Ｒは、アルキルまたはポリエチレングリコール基（ＰＥＧとも称される）であり、Ｘは、活性部位である）が含まれるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコール基またはＰＥＧ基は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（式中、ｎは、少なくとも１の整数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上）である）の式を有し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。好適な切断可能なリンカーには、Ｌｙｓ―Ｐｈｅ―Ｘ、Ｌｙｓ―Ｖａｌ―Ｃｉｔ―ＰＡＢ―Ｘ、ＮＨ２―（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ―Ｖａｌ―Ｃｉｔ―ＰＡＢ―Ｘ、及びＮＨ２―（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ―（Ｖａｌ―Ｃｉｔ―ＰＡＢ―Ｘ）２（式中、Ｘは、活性部位であり、ｎは、少なくとも１の整数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上）である）が含まれるがこれらに限定されない。ＰＡＢは、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニルを指す。Ｃｉｔは、シトルリンを指す。他の例示的なアミンドナー基－リンカーには、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ、アミノカプロン酸、Ａｃ－Ｌｙｓ－ベータ－Ａｌａ、アミノ－ＰＥＧ２（ポリエチレングリコール）－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ３－Ｃ２、アミノ－ＰＥＧ６－Ｃ２、Ａｃ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ（バリン）－Ｃｉｔ（シトルリン）－ＰＡＢ（ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル）、アミノカプロイル－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、プトレシン、及びＡｃ－Ｌｙｓ－プトレシンが含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－ＶＣ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式ＩＩ）（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋは、０または１である）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－ＶＣ－ＰＡＢ（式中、ｎ、及びｍは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２である）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋは、０または１である）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ（式中、ｎ及びｍは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２である）。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｐ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式ＩＩＩ）（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋは、０または１であり、Ｐは、切断部位である）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｐ－ＰＡＢ（式中、ｎ及びｍは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり）である。
いくつかの実施形態では、リンカーは、分岐状である。いくつかの実施形態では、リンカーは、線状である。いくつかの実施形態では、リンカーは、治療剤の結合のための複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）の結合部位を有する。これらの治療剤は、互いに同じまたは異なる場合がある。
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（１）の化合物として示されるグリシン３－アミド－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－フェノール連結ＳＮ３８（式中、リンカーは、ＳＮ３８の位置１０に接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である：
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（２）の化合物として示されるグリシン３－アミド－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－α－ヒドロキシラクトン連結ＳＮ３８（式中、リンカーは、ＳＮ３８の位置２０に接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である：
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（３）の化合物として示される（グリシン）３－（ＰＥＧ）４－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（式中、リンカーは、ＭＭＡＥに接続されており、４－ＰＥＧスペーサーを有する）である：
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（４）の化合物として示される（グリシン）３－（ＰＥＧ）８－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（式中、リンカーは、ＭＭＡＥに接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である：
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（５）の化合物として示される（グリシン）３－アミド－ＰＥＧ８－ＬＧＧＳＧＲＮＡＱＶＲＬＥ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－フェノール連結ＳＮ３８である：

式（５）の化合物は、ｕＰＡによって切断され得るリンカーを含有する。
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（６）の化合物として示される（グリシン）３－アミド－ＰＥＧ８－ＬＧＧＳＧＲＮＡＱＶＲＬＥ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－α－ヒドロキシラクトン連結ＳＮ３８である：

式６の化合物は、ｕＰＡによって切断され得るリンカーを含有する。
いくつかの実施形態では、治療剤は、以下の式（７）の化合物として示される（グリシン）３－アミド－ＰＥＧ８－ＬＧＧＳＧＲＮＡＱＶＲＬＥ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである：

式（７）の化合物は、ｕＰＡによって切断され得るリンカーを含有する。
いくつかの実施形態では、治療剤は、グリシン３－アミド－ＰＥＧ８－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－フェノール連結ＳＮ３８（式中、リンカーは、ＳＮ３８の位置１０に接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である。
いくつかの実施形態では、治療剤は、グリシン３－アミド－ＰＥＧ８－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＤＭＡＥ－α－ヒドロキシラクトン連結ＳＮ３８（式中、リンカーは、ＳＮ３８の位置２０に接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である。
いくつかの実施形態では、治療剤は、（グリシン）３－（ＰＥＧ）４－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（式中、リンカーは、ＭＭＡＥに接続されており、４－ＰＥＧスペーサーを有する）である。
いくつかの実施形態では、治療剤は、（グリシン）３－（ＰＥＧ）８－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ（式中、リンカーは、ＭＭＡＥに接続されており、８－ＰＥＧスペーサーを有する）である。
また、式（１）～（７）の化合物の構造を有する化合物、及びこれらの化合物を含む標的化コンジュゲート（例えば、抗体薬物コンジュゲート）が提供される。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、標的化部位にコンジュゲートされた約１～８０個の治療剤を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、標的化部位にコンジュゲートされた約１～４、１～５、５～１０、４～１０、１０～２０、１～２０、１０～２０、２０～４０、または４０～８０個の治療剤のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、または８０個の治療剤のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、約８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の治療剤のうちのいずれか１つ以下を含む。
オリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１５０、２００またはそれ以上のヌクレオチドまたは塩基対長のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２００、１５０、１２０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５または２ヌクレオチドまたは塩基対長のうちのいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２～１０、５～１０、１０～２０、１０～４０、１０～６０、１０～８０、１０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２０～４０、４０～８０、８０～１００、１００～２００、１０～１５０、１０～２００、２～２０、２～５０、または２～１００ヌクレオチドまたは塩基対長のうちのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、一本鎖ＤＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、合成ＤＮＡである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡである。例示的なＲＮＡには、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子干渉（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡが含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、合成ＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、免疫調節性ポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、免疫細胞を活性化し得る病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）または他のモチーフである。ＰＡＭＰは、様々な病原体に関連する分子であり、トル様受容体（ＴＬＲ）及び先天性免疫反応を活性化する他のパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって認識される。病原体の非存在下でＰＡＭＰが免疫系を動員する能力は、自然免疫系反応の使用を介して細胞破壊を伴う多様な疾患を処置するためのストラテジー（例えば、抗がん療法）を提供する。多様な治療用途のために調査されたＰＡＭＰの１つのクラスは、免疫刺激性ポリヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）（例えば、アガトリモド）である。ＣｐＧ ＯＤＮは、免疫細胞（例えば、Ｂ細胞、単球、及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ））におけるＴＬＲ９二量体化を媒介してサイトカイン（例えば、Ｉ型インターフェロン及びインターロイキン）を上方制御し、それによりナチュラルキラー細胞を活性化すると考えられる。例示的なＰＡＭＰには、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＹ）ＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡが含まれるがこれらに限定されない。さらに、オリゴヌクレオチドには、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはマイクロＲＮＡを含むがこれらに限定されない、遺伝子発現を停止させ、または細胞内死シグナル伝達を誘導する１つ以上の核酸配列が含まれ得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、ＣｐＡ、ＣｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴ、及びＴｐＧオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧ ＯＤＮである。ＣｐＧ ＯＤＮは、シトシン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｃ」）とそれに続くグアニン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｇ」）を含有する短い一本鎖合成ＤＮＡ分子である。「ｐ」は、連続ヌクレオチド間のホスホジエステル結合を指す。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、修飾されたホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有し、例えば、ＣｐＧ ＯＤＮにおけるすべてのヌクレオチドまたはヌクレオチドの一部は、ＰＳ骨格を有する。ＣｐＧモチーフがメチル化されない場合、それらは、免疫刺激剤として作用する。ＣｐＧモチーフは、それらが微生物ゲノムにおいて豊富に存在するが、それらが脊椎動物ゲノムでは稀なため、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と考えられる。ＣｐＧ－ＯＤＮは、トル様受容体９（ＴＬＲ９）に結合し、それを活性化させ、その後の適応免疫の進展をサポートする先天性免疫反応を開始させる。ＣｐＧ－ＯＤＮは、所望の免疫調節及び相乗的免疫反応を得るためにワクチンアジュバントとして使用されている。ＣｐＧ ＯＤＮは通常、３つのクラス：クラスＡ、クラスＢ、及びクラスＣに分けられる。クラスＡのＣｐＧ－ＯＤＮは、典型的には、３’及び５’末端でホスホロチオエート骨格を有するポリ－Ｇ尾部及びホスフェート骨格を含む中央回文配列を含有する。クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮは、典型的には、中央回文配配列内にＣｐＧを含有する。クラスＢのＣｐＧ－ＯＤＮには、典型的には、完全ホスホロチオエート骨格が含まれ、クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮの５’末端における配列は、しばしば、ＴＬＲ９活性化に重要である。クラスＣのＣｐＧ－ＯＤＮには、二本鎖の形成を可能とする３’末端配列を有する完全ホスホロチオエート骨格が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ－ＯＤＮは、メチル化されている。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ－ＯＤＮは、メチル化されていない。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、複数のＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、同じ配列を有するＣｐＧモチーフの複数のリピートを含むオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、異なる配列を有する複数のＣｐＧ－ＯＤＮにコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、そのＣｐＧ－ＯＤＮは、それらの免疫刺激活性を実質的に犠牲にせずに主にヌクレオシド間ホスフェート（例えば、５０％を超えるヌクレオシド間ホスフェート）を含有するＣｐＧ－ＯＤＮのものよりも優れた安定性（例えば、ヌクレアーゼに対する安定性）を示し得る。この効果は、少なくとも５０％（例えば、少なくとも７０％）のヌクレオシド間ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートを組み込むことによってまたはヌクレオシド間ホスホトリエステル及び／またはヌクレオシド間無塩基スペーサーの包含を介して達成され得る。ホスホトリエステル及び無塩基スペーサーはまた、標的化部位へのコンジュゲーションに好都合である。ホスフェートベースのホスホトリエステル及び無塩基スペーサーもまた、完全ホスホロチオエート骨格を有するポリヌクレオチドと比べたオフターゲット活性の減少のために使用され得る。理論に縛られることを望むものではなく、この効果は、標的細胞への標的化部位媒介送達を妨害することなく自己送達を減少させることによって達成され得る。したがって、オリゴヌクレオチドには、約１５以下の連続ヌクレオシド間ホスホロチオエート（例えば、約１４以下、約１３以下、約１２以下、約１１以下、または約１０以下の連続ヌクレオシド間ホスホロチオエート）が含まれ得る。例えば、合計で約１２～約１６ヌクレオシドを含有するＣｐＧ－ＯＤＮは、約１０以下の連続ヌクレオシド間ホスホロチオエートを含有し得る。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、例えば、一方または両方の末端で（例えば、６個の５’末端ヌクレオシドまたは６個の３’末端ヌクレオシド内で）１つ以上のホスホロチオエート（例えば、約１～約６または約１～約４）を含む。１つ以上のヌクレオシド間ホスホトリエステル及び／またはホスホロチオエートの包含は、エキソヌクレアーゼ媒介分解の速度を減少させることによってポリヌクレオチドの安定性を向上させ得る。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、１つ以上（例えば、１～６、１～１２、１～１８、１～２４）の補助部位（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））をさらに含む。補助部位は、キャッピング基、生物可逆基、または非生物可逆基の一部であり得る。補助部位は、リンカー（例えば、免疫調節性（例えば、免疫刺激性）ポリヌクレオチドにおけるホスフェート、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートに結合したリンカーに結合され得る）。ＣｐＧ ＯＤＮにおける補助部位（例えば、ＰＥＧ）の包含は、そのような補助部位を欠く参照コンジュゲートと比べて標的化コンジュゲートの薬物動態及び／または生体内分布特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、切断可能なリンカーに連結される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及び結合したリンカーは、５’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮ（式ＩＶ）の構造（式中、スペーサーは、（ＣＨ２）ｎ－（ＰＥＧ）ｍであり、ｈ、ｎ及びｍは、整数であり、ｈ＝０または１であり、ｎ≧１であり、ｍ≧０であり、Ｐは、切断部位である）を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及び結合したリンカーは、３’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮ（式Ｖ）の構造（式中、スペーサーは、（ＣＨ２）ｎ－（ＰＥＧ）ｍであり、ｈ、ｎ及びｍは、整数であり、ｈ＝０または１であり、ｎ≧１であり、ｍ≧０であり、Ｐは、切断部位である）を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’－ＴＣＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＡＴ－３’（配列番号６６）及び５’－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号６７）（式中、＊は、ホスホロチオエート結合を表す）からなる群から選択される核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及びその結合したリンカーは、以下から選択される構造を含む：
５’アミノ修飾体－（ＣＨ２）１２－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号６８）、
５’アミノ修飾体－（ＣＨ２）１２－チオール（ＣＨ２）６－Ｓ－Ｓ－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号６９）、
５’アミノ修飾体－（ＣＨ２）６－（ＰＥＧ）６－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号７０）、
５’アミノ修飾体－（ＣＨ２）１２－（ＰＥＧ）６－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号７１）、
５’チオール修飾体－（ＣＨ２）６－Ｓ－Ｓ－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－３’（配列番号７２）、
５’－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ＊－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２）６－３’チオール修飾体（配列番号７３）、及び式ＶＩＩＩ：
５’アミノ修飾体－ＬＧＧＳＧＲＮＡＱＶＲＬＥＧＳＧ（配列番号１４７）－（ＰＥＧ）１２－Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ａ＊Ｔ（配列番号１５７）、
（式中、＊は、ホスホロチオエート結合を表す）。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号６６または６７の核酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有する核酸配列を有する。また、配列番号６６または６７の核酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有する核酸配列を含むＣｐＧオリゴヌクレオチドが提供される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リンカー、例えば、化学的リンカーまたはペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＳＨ２－スペーサー、ＭＡＬ－スペーサー、ＮＨ２－スペーサー、及びＯｓｕ－スペーサーからなる群から選択される。スペーサーは、本明細書で使用される場合、存在する場合は、標的化部位をエフェクター分子に直接的または間接的に連結させる。例えば、ＵＳ２０１０００４０６３７Ａ１を参照されたい。いくつかの実施形態では、リンカーは、ポリ－ＰＥＧリンカーである。
検出可能な標識
いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、検出可能な標識である。本明細書で使用される場合、標識は、標的化部位の検出を容易化する及び／または標的化部位が結合する分子の検出を容易化する部位である。非限定的な例示的な標識には、放射性同位体、蛍光基、酵素基、化学発光基、ビオチン、エピトープタグ、金属結合タグ等が含まれるがこれらに限定されない。当業者は、意図される用途に従って好適な標識を選択し得る。
診断目的の場合、標識は、放射性核種、放射性造影剤、常磁性イオン、金属、蛍光標識、化学発光標識、超音波造影剤及び光活性剤であり得る。そのような診断標識は、よく知られており、任意のそのような既知の標識が使用され得る。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、放射性核種である。「放射性核種」は、しばしば、「放射性同位体（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｉｓｏｔｏｐｅ）」または「放射性同位体（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅ）」と称される。本明細書に記載の標的化部位に結合され得る例示的な放射性核種または安定な同位体には、１１０Ｉｎ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、９４ｍＴｃ、９４Ｔｃ、９９ｍＴｃ、１２０Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１５４－１５８Ｇｄ、３２Ｐ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、５１Ｍｎ、５２ｍＭｎ、５５Ｃｏ、７２Ａｓ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、８２ｍＲｂ、８３Ｓｒ、または他のガンマ、ベータ、または陽電子放出体が含まれるがこれらに限定されない。
用いられる常磁性イオンには、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）またはエルビウム（ＩＩＩ）が含まれ得る。金属造影剤には、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）またはビスマス（ＩＩＩ）が含まれ得る。放射線不透過性診断剤は、化合物、バリウム化合物、ガリウム化合物、及びタリウム化合物から選択され得る。フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリスリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、オフタルデヒド及びフルオレサミンを含むがこれらに限定されない多様な蛍光標識が当該技術分野で知られている。用いられる化学発光標識には、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩またはシュウ酸エステルが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、放射性核種をキレートするキレート化合物を含む。いくつかの実施形態では、キレート化合物は、放射性金属をキレートする。いくつかの実施形態では、キレート化合物は、金属１８Ｆをキレートする。いくつかの実施形態では、キレート化合物は、親水性キレート化合物であり、これは、金属イオンに結合し、ｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの確保を補助し得る。特に有用な金属－キレート化合物の組み合わせには、放射性イメージングのための１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、１８Ｆ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９Ｔｃ、９４Ｔｃ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７６Ｂｒ等の、６０～４，０００ｋｅＶの一般的エネルギー範囲の診断同位体と共に使用される、２－ベンジル－ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸）及びそのモノメチル及びシクロヘキシルアナログが含まれる。同じキレート化合物は、非放射性金属、例えば、マンガン、鉄及びガドリニウムと錯体化した場合、ＭＲＩに有用である。大環状キレート化合物、例えば、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸）、ＴＥＴＡ（ブロモアセトアミド－ベンジル－テトラエチルアミン四酢酸）及びＮＥＴＡ（｛４－［２－（ビス－カルボキシメチル－アミノ）－エチル］－７－カルボキシメチル－［１，４，７］トリアゾナン－１－イル｝－酢酸）は、多様な診断用放射性金属、例えば、ガリウム、イットリウム及び銅と共に用いられる。そのような金属キレート錯体は、環サイズを対象となる金属に対して調整することによって極めて安定となり得る。
いくつかの実施形態では、キレート化合物は、標的化部位にコンジュゲートされ得る官能基を含む。いくつかの実施形態では、キレート化合物は、標的化部位における第１級アミン（－ＮＨ２）基と反応性である官能基を含む。標的化部位の第１級アミン、例えば、リジン側鎖にコンジュゲートされ得る例示的な官能基には、イソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、スルホニルクロリド、アルデヒド、グリオキサール、エポキシド、オキシラン、カルボネート、アリールハライド、イミドエステル、カルボジイミド、無水物、及びフルオロフェニルエステルが含まれるがこれらに限定されない。これらの官能基のほとんどは、アシル化またはアルキル化のいずれかによってアミンにコンジュゲートする。
いくつかの実施形態では、キレート化合物は、標的化部位におけるシステイン側鎖（すなわち、スルフヒドリル基）と反応性である官能基を含む。例示的なスルフヒドリル反応性基には、ハロアセチル、マレイミド、アジリジン、アクリロイル、アリール化剤、ビニルスルホン、ピリジルジスルフィド、ＴＮＢ－チオール及びジスルフィド還元剤が含まれるがこれらに限定されない。これらの基のほとんどは、アルキル化（通常はチオエーテル結合の形成）またはジスルフィド交換（ジスルフィド結合の形成）のいずれかによってスルフヒドリルにコンジュゲートする。
Ｃ．コンジュゲーション部位
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上のコンジュゲーション部位を含む。コンジュゲーション部位は、標的化部位へのエフェクター分子の共有結合または非共有結合を可能とする。コンジュゲーション部位は、標的化部位の一部であり、または標的化部位に導入された化学的部位に存在し得る。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、第１の標的化部位と第２の標的化部位との間に配置されたコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。
コンジュゲーション部位は、共有結合性コンジュゲーションのための１つ以上の反応性基を含み得る。タンパク質における一般的な反応性基には、第１級アミン（－ＮＨ２）、カルボキシル（－ＣＯＯＨ）、スルフヒドリル（－ＳＨ）及びカルボニル（糖タンパク質における炭水化物基を酸化することによって生成され得る－ＣＨＯ）が含まれる。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位のポリペプチド鎖内にある。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位のアミノ酸残基の側鎖にある。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位のポリペプチド鎖のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位のポリペプチド鎖のＣ末端にある。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位上の内因性コンジュゲーション部位である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位に導入された操作されたコンジュゲーション部位である。例えば、コンジュゲーション部位は、標的化部位に融合されたペプチド、例えば、タグに存在し得る。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、二重特異的または二価であり、標的化部位は、（１）コンジュゲーション部位を含むコンジュゲーション部位Ｃ、及び（２）２つの標的結合部位Ａ１及びＡ２を含み、Ａ１は、第１の標的分子を認識する標的化ペプチドまたは抗体もしくはその抗原結合断片であり、Ａ２は、第２の標的分子を認識する標的化ペプチドまたは抗体もしくはその抗原結合断片であり、Ａ１は、ＣのＮ末端に融合さており、Ａ２は、ＣのＣ末端に融合されている。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２は、異なる。いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２は、同じである。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位の反応性チオール基、例えば、システイン残基を含む。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション部位は、標的化部位の反応性アミン基（「アミンコンジュゲーション部位」）、例えば、リジンまたはアルギニン残基を含む。第１級アミンが各ポリペプチド鎖のＮ末端ならびにリジン及びアルギニン（Ｌｙｓ、Ｋ）残基の側鎖に存在する。これらの第１級アミンは、生理学的ｐＨで正に荷電している；そのため、それらは主に、水性媒体に導入されたコンジュゲーション試薬に容易に接近可能な天然のタンパク質三次構造の表面外に存在する。さらに、典型的な生物学的またはタンパク質サンプルにおいて利用可能な官能基の中で、第１級アミンは特に求核性であり；これにより、それらは、いくつかの反応性基とのコンジュゲーションのための標的となることが容易となる。最も特異的で効率的な試薬の１つは、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳエステル）反応性基を使用するものである。いくつかの実施形態では、スルフヒドリル基は、試薬、例えば、トラウト試薬（２－イミノチオラン）、ＭＢＳ、ＳＰＤＰ、ＳＡＴＡ、及びそれらの誘導体での修飾によって第１級アミン（特にリジン残基のもの）の部位で導入され得る。
トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位
いくつかの実施形態では、エフェクター分子（例えば、治療剤）は、標的化部位におけるトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位及びエフェクター分子は、イソペプチド結合を介して互いにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位及びエフェクター分子は、トランスグルタミン化反応によって互いにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、トランスグルタミン化反応は、トランスグルタミナーゼによって触媒される。
トランスグルタミナーゼコンジュゲーションは、例えば、ＷＯ２０１９０５７７７２及びＷＯ２０１２０５９８８２に記載されている。トランスグルタミナーゼは、タンパク質－グルタミンγ－グルタミルトランスフェラーゼであり、これは、典型的には、グルタミン残基とリジン残基とのｐＨ依存的トランスアミド化を触媒する。トランスグルタミナーゼは、多様な供給源から入手または作製され、または１つ以上の内因性グルタミン残基と、１つ以上の反応性アミンを含有する１つ以上のリジン残基またはアミンドナー剤とのトランスアミド化を触媒するように操作され得る。トランスグルタミナーゼは、アシルドナーグルタミンのγ－グルタミニルを、アシルアクセプターアミン基、例えば、第１級アミンまたはリジンのε－アミノ基に転移させ、アシルドナーグルタミン及びアシルアクセプター残基を接続させるイソペプチド結合をもたらす。トランスグルタミナーゼ触媒作用によって形成されるイソペプチド結合は、プロテアーゼ活性に対して非常に安定であり、必ずしもＮ及びＣ末端に局在しているわけではない。いくつかの実施形態では、トランスグルタミナーゼは、アシルアクセプター基を有するアミノ酸残基を保有するペプチド配列、及びアシルドナー基を有するアミノ酸残基を保有するペプチド配列を優先的に認識する。アシルアクセプター基を有するアミノ酸残基は、本明細書において「アシルアクセプター残基」（例えば、リジン、Ｎ末端グリシン）と称され、アシルドナー基を有するアミノ酸残基は、本明細書において「アシルドナー残基」（例えば、グルタミン）と称される。
いくつかの実施形態では、アシルドナー残基は、内因性Ｇｌｎである。いくつかの実施形態では、内因性Ｇｌｎ部位は、標的化部位（例えば、抗体またはその抗原結合断片）のＦｃ領域にある。いくつかの実施形態では、標的化部位のＦｃにおけるＧｌｎは、脱グリコシル化される。いくつかの実施形態では、内因性Ｇｌｎ部位は、Ｆｃ領域にはない。いくつかの実施形態では、標的化部位において複数の内因性アシルドナーＧｌｎが存在する。いくつかの実施形態では、内因性Ｇｌｎは、標的化部位のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、内因性Ｇｌｎは、標的化部位のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、内因性Ｇｌｎは、標的化部位の内部位置にある。
いくつかの実施形態では、アシルドナー残基は、標的化部位に導入された操作されたＧｌｎ残基である。いくつかの実施形態では、非内因性Ｇｌｎは、アミノ酸修飾、例えば、挿入または置換を介して標的化部位に組み込まれる。いくつかの実施形態では、置換は、野生型アミノ酸を別のもの（例えば、非野生型アミノ酸残基）で置き換えることを含む。いくつかの実施形態では、挿入は、１つ以上のアミノ酸（複数可）を挿入すること（例えば、１、２、３またはそれ以上のアミノ酸を挿入すること）を含む。
いくつかの実施形態では、非内因性Ｇｌｎは、タグにある。いくつかの実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、少なくとも１つのＧｌｎを含む。いくつかの実施形態では、タグは、同じ配列の複数のコピーを含む。いくつかの実施形態では、標的化部位に連結された複数のＧｌｎ含有タグが存在する。いくつかの実施形態では、タグは、ペプチドリンカーを介して標的化部位に連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、または少なくとも２０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、タグは、精製タグをさらに含み得る。例示的な精製タグには、ＦＬＡＧ、ＧＳＴ、ＨＡ、ポリ－ヒスチジン、Ｍｙｃ、Ｔ７、ＡＵ１エピトープ、ＡＵ５エピトープ、ＡＢＰ、ストレプトアビジン／ビオチン、カルモジュリン結合ペプチド、ＭＢＰ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、キチン結合ドメイン、ガラクトース結合タンパク質、ＥＥ－タグ、ヒスチジン親和性タグ等が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、アミノ酸配列（ＸｒＱｓＸｔ－Ｌｐ）ｑ（式ＶＩ、配列番号１５４）（式中、ｒ≧０、ｔ≧０、ｓ≧１、ｐ＝０または１、ｑ≧１、Ｌは、リンカーであり、Ｘは、任意のアミノ酸（例えば、通常のアミノ酸Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、もしくはＴｒｐまたは非通常アミノ酸）である）を含む。いくつかの実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、アミノ酸配列（ＸＱＸＸ－Ｌｐ）ｑ（式ＶＩＩ、配列番号１５５）（式中、ｐ＝０または１、ｑ≧１、Ｌは、アミノ酸リンカーであり、Ｘは、任意のアミノ酸（例えば、従来のアミノ酸Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、もしくはＴｒｐまたは非通常アミノ酸）である）を含む。いくつかの実施形態では、アシルドナーグルタミン含有タグは、Ｑ、ＬＱＧ、ＬＬＱ、ＬＱＳＰ（配列番号１５３）、ＬＬＱＧＧ（配列番号１３）、ＬＬＱＧ（配列番号１４）、ＧＬＬＱＧ（配列番号１５）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号１６）、ＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号１７）、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ（配列番号１８）、ＧＬＬＱＧＧＧ（配列番号１９）、ＧＬＬＱＧＧ（配列番号２０）、ＧＬＬＱ（配列番号２１）、ＬＬＱＬＬＱＧＡ（配列番号２２）、ＬＬＱＧＡ（配列番号２３）、ＬＬＱＹＱＧＡ（配列番号２４）、ＬＬＱＧＳＧ（配列番号２５）、ＬＬＱＹＱＧ（配列番号２６）、ＬＬＱＬＬＱＧ（配列番号２７）、ＳＬＬＱＧ（配列番号２８）、ＬＬＱＬＱ（配列番号２９）、ＬＬＱＬＬＱ（配列番号３０）、ＬＬＱＧＲ（配列番号３１）、ＬＬＱＧＰＰ（配列番号３２）、ＬＬＱＧＰＡ（配列番号３３）、ＧＧＬＬＱＧＰＰ（配列番号３４）、ＧＧＬＬＱＧＡ（配列番号３５）、ＬＬＱＧＰＧＫ（配列番号３６）、ＬＬＱＧＰＧ（配列番号３７）、ＬＬＱＧＰ（配列番号３８）、ＬＬＱＰ（配列番号３９）、ＬＬＱＰＧＫ（配列番号４０）、ＬＬＱＡＰＧＫ（配列番号４１）、ＬＬＱＧＡＰＧ（配列番号４２）、ＬＬＱＧＡＰ（配列番号４３）、ＬＬＱＬＱＧ（配列番号４４）、ＱＶＱＬＫＥ（配列番号４５）、ＶＱＬＫＥ（配列番号４６）、ＬＱＱＰ（配列番号４７）、ＰＱＱＦ（配列番号４８）、及びＧＱＱＱＬ（配列番号４９）、ＬＬＱＧＬＬＱＧＬＬＱＧ（配列番号１）、ＬＬＱＧＧＳＧＬＬＱＧＧＳＧＬＬＱＧ（配列番号２）、ＬＱＳＰＬＱＳＰＬＱＳＰ（配列番号３）、ＬＱＳＰＧＳＧＬＱＳＰＧＳＧＬＱＳＰ（配列番号４）、ＰＮＰＱＬＰＦＰＮＰＱＬＰＦＰＮＰＱＬＰＦ（配列番号５）、ＰＮＰＱＬＰＦＧＳＧＰＮＰＱＬＰＦＧＳＧＰＮＰＱＬＰＦ（配列番号６）、ＰＫＰＱＱＦＭＰＫＰＱＱＦＭＰＫＰＱＱＦＭ（配列番号７）、ＰＫＰＱＱＦＭＧＳＧＰＫＰＱＱＦＭＧＳＧＰＫＰＱＱＦＭ（配列番号８）、ＧＱＱＱＬＧＧＱＱＱＬＧＧＱＱＱＬＧ（配列番号９）、ＧＱＱＱＬＧＧＳＧＧＱＱＱＬＧＧＳＧＧＱＱＱＬＧ（配列番号１０）、ＲＬＱＱＰＲＬＱＱＰＲＬＱＱＰ（配列番号１１）、ＲＬＱＱＰＧＳＧＲＬＱＱＰＧＳＧＲＬＱＱＰ（配列番号１２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むトランスグルタミナーゼコンジュゲーションペプチドが提供される。いくつかの実施形態では、標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、エフェクター分子は、配列番号１～１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むトランスグルタミナーゼコンジュゲーションペプチドを介して標的化部位にコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。
いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ含有タグは、標的化部位のＮ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ含有タグは、標的化部位のＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ含有タグは、標的化部位の内部位置にある。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、抗体操作によってトランスアミド化反応において反応性となった少なくとも１つの内因性グルタミン残基を含む。いくつかの実施形態では、抗体操作は、抗体脱グリコシル化（例えば、酵素脱グリコシル化）；または抗体におけるアミノ酸欠失、挿入、置換、変異、またはそれらの任意の組み合わせを含むアミノ酸修飾である。例えば、抗体における位置２９７の野生型アミノ酸Ａｓｎ（Ｎ）は、アミノ酸Ａｌａ（Ａ）で置換され、または置き換えられ得、位置２９７での非グリコシル化及び位置２９５での反応性内因性グルタミン（Ｑ）をもたらす。別の例では、抗体におけるアミノ酸修飾は、位置２９７でのＮからＱへのアミノ酸置換であり、位置２９７での非グリコシル化、位置２９５での反応性内因性Ｑ、及びトランスグルタミナーゼの存在下でのＮ２９７Ｑ及びＱ２９５と１つ以上のアミンドナー剤との間のこれらの２つの部位での部位特異的コンジュゲーションをもたらす。いくつかの実施形態では、抗体は、グリコシル化部位を除去するように操作され得る。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーションについて反応性である内因性グルタミン残基を含む。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、エフェクター分子におけるアミン基へのコンジュゲーションについて反応性である複数のグルタミン残基を有するトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む。いくつかの実施形態では、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位は、タンデムで複数のグルタミンを含有するタグ配列を含み、複数（例えば、２、３、４、５、６、またはそれ以上）のエフェクター分子が、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。
オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド（ＯＢＰ）
いくつかの実施形態では、標的化部位に導入されたオリゴヌクレオチド結合ポリペプチドを介して標的化部位に非共有結合でオリゴヌクレオチドがコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、電荷－電荷相互作用を介してオリゴヌクレオチド結合ポリペプチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドは、カチオン性ペプチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドは、中性荷電ペプチドである。
多くの核酸結合タンパク質は、特定の配列または特定のコンフォメーションのいずれかを有し得る、それらの標的を認識する際の特異性を提供するための短いペプチド配列を使用する。交互リジンを含有するペプチドは、Ｚコンフォメーションのポリ（ｄＧ－ｄ５ｍｅＣ）に結合し、より高いエネルギー形態を安定化することが示されている。例えば、Ｈ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２７９，２５３－２５５ ａｎｄ Ｈ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３６，６１０－６１７を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、正に荷電している。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、１つ以上の正に荷電したアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、極性アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、複数の正に荷電したアミノ酸残基を含む短いモチーフを含む。いくつかの実施形態では、短いモチーフは、タンデムの正に荷電したアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ペプチドは、Ｎ末端で修飾をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ペプチドは、Ｎ末端でアミノ安息香酸を含む。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、ＲＳＱＳＲＳＲＹＹＲＱＲＱＲＳＲＲＲＲＲＲＳ（配列番号５６）；ＲＲＲＬＨＲＩＨＲＲＱＨＲＳＣＲＲＲＫＲＲ（配列番号５７）；ＭＰＲＲＲＲＳＳＳＲＰＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲＲＲ（配列番号５８）；ＫＫＳＡＫＫＴＰＫＫＡＫＫＰＫＫＳＡＫＫＴＰＫＫＡＫＫＰ（配列番号５９）；ＡＫＫＡＫＳＰＫＫＡＫＡＡＫＰＫＫＡＰＫＳＰＡＫＡＫ（配列番号６０）；ＭＲＲＡＨＨＲＲＲＲＡＳＨＲＲＭＲＧＧ（配列番号６１）；ＫＨＫＨＫＨＫＨＫＫＫＨＫＨＫＨＫＨＫＫＫＨＫＨＫＨＫＨＫＫ（配列番号６２）；ＫＧＫＧＫＧＫＧＫＫＫＧＫＧＫＧＫＧＫＫＫＧＫＧＫＧＫＧＫＫ（配列番号６３）；ＫＫＡＬＬＡＬＡＬＨＨＬＡＨＬＡＬＨＬＡＬＡＬＫＫＡ（配列番号６４）；及びＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＹＳＰＴＳＰＳＹ（配列番号６５）からなる群から選択される。配列番号５６～６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣｐＧ結合ポリペプチドも提供される。いくつかの実施形態では、標的化部位、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、及びＣｐＧ結合ポリペプチドを含む標的化コンジュゲートであって、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧ結合ポリペプチドを介して標的化部位にコンジュゲートされており、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、配列番号５６～６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、標的化コンジュゲートが提供される。
いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、標的化部位に融合される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、標的化部位のポリペプチド鎖の１つ以上のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、標的化部位のポリペプチド鎖の１つ以上のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、標的化部位のポリペプチド鎖の１つ以上の内部位置に融合される。標的化部位が抗体または抗原結合断片であるいくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、例えば、単一のペプチド結合またはリンカーを介して、抗体または抗原結合断片の重鎖のＣ末端に融合される。標的化部位が抗体または抗原結合断片であるいくつかの実施形態では、ＣｐＧ結合ポリペプチドは、例えば、単一のペプチド結合またはリンカーを介して、抗体または抗原結合断片の軽鎖のＣ末端に融合される。
Ｄ．切断部位
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上の切断部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、標的化部位におけるまたはそれに連結された１つ以上の切断部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、１つ以上の切断部位を含まない。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、エフェクター分子におけるまたはそれに連結された１つ以上の切断部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドにおけるまたはそれに連結された１つ以上の切断部位を含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートにおける１つ以上の切断部位は、標的部位、例えば、罹患部位で切断される。いくつかの実施形態では、切断は、標的部位での条件、例えば、プロテアーゼ、ｐＨの変化、酸化還元レベル、低酸素、酸化ストレス、温熱、及び／または細胞外ＡＴＰ濃度によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートにおける１つ以上の切断部位は、非標的部位で、例えば、正常なまたは健康な組織において切断されない。いくつかの実施形態では、標的部位で切断部位の切断を引き起こす条件は、非標的部位では見られない。いくつかの実施形態では、切断部位の切断を引き起こす条件は、非標的部位での条件よりも少なくとも約１．５、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００倍またはそれ以上のうちのいずれか１つ高いレベルで標的部位で存在する。例えば、切断部位を切断するプロテアーゼ（例えば、ｕＰＡ）は、非標的部位でのプロテアーゼの濃度よりも少なくとも約１．５、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００倍またはそれ以上のうちのいずれか１つ高い濃度で標的部位で存在する。いくつかの実施形態では、標的部位における細胞外ＡＴＰ濃度は、非標的部位における細胞外ＡＴＰ濃度よりも少なくとも約１．５、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００倍またはそれ以上のうちのいずれか１つ高い。いくつかの実施形態では、標的部位におけるｐＨは、非標的部位におけるｐＨよりも少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、または３のうちのいずれか１つ低い。いくつかの実施形態では、標的部位におけるｐＨは、非標的部位におけるｐＨよりも少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、または３のうちのいずれか１つ高い。
いくつかの実施形態では、切断部位は、プロテアーゼ切断部位である。いくつかの実施形態では、切断部位は、疾患特異的プロテアーゼ、例えば、腫瘍特異的プロテアーゼによって切断可能である。いくつかの実施形態では、腫瘍特異的プロテアーゼは、正常な組織と比較して、罹患組織、例えば、腫瘍組織において上昇したレベルで発現する。例えば、研究は、腫瘍組織が特定のプロテアーゼの増加した活性及び対立する内因性阻害因子の低下した活性を呈することを示している（Ｓｅｖｅｎｉｃｈ Ｌ ａｎｄ Ｊｏｙｃｅ ＪＡ．Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ．２０１４．２８：２３３１－２３４７．２０１４）。いくつかの実施形態では、腫瘍特異的プロテアーゼは、マトリプターゼ（ＭＴＳＰ１）、尿型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、レグマイン、ＰＳＡ（ＫＬＫ３、カリクレイン関連ペプチダーゼ－３とも呼ばれる）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－２（ＭＭＰ－２）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－９（ＭＭＰ９）、ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）、プロテイナーゼ３（Ｐｒ３）、カテプシンＢ及びカテプシンＫからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、切断は、腫瘍部位で、例えば、腫瘍微小環境において生じる。いくつかの実施形態では、切断は、細胞の外、例えば、腫瘍微小環境における腫瘍細胞の外で行われる。
いくつかの実施形態では、切断部位は、レグマイン、プラスミン、ＴＭＰＲＳＳ－３／４、ＭＭＰ－９、ＭＴｌ－ＭＭＰ、カテプシン、カスパーゼ、ヒト好中球エラスターゼ、ベータ－ベータセクレターゼ、ｕＰＡ、及びＰＳＡからなる群から選択される酵素の基質である。
いくつかの実施形態では、切断部位は、ｕＰＡ基質ペプチドである。ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化システム（ｕＰＡＳ）の一部であるセリンプロテアーゼである。ｕＰＡは、腫瘍進行及び転移を含む、基底膜（ＢＭ）及び／または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）リモデリングを必要とする多数の生理病理学的プロセスに関与する、セリンプロテアーゼプラスミンにおけるプロ酵素プラスミノーゲンを変換する。いくつかの実施形態では、ｕＰＡ切断部位は、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号５０）、ＳＧＲＳＡ（配列番号５１）、ＬＧＧＳＧＲＳＡＮＡＩＬＥ（配列番号５２）、ＬＧＧＳＧＲＮＡＱＶＲＬＥ（配列番号５３）、ＧＳＧＲＮＡＱＶ（配列番号５４）、及びＳＧＲ（配列番号５５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。配列番号５０～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むｕＰＡ切断ペプチドも提供される。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、疾患特異的プロテアーゼ、例えば、ｕＰＡによって切断可能な単一のペプチド基質、例えば、配列番号５０～５５のいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、疾患特異的プロテアーゼによって切断可能なペプチド基質の２つ以上のコピー（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上のうちのいずれか１つ）を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、複数（例えば、２、３、４、またはそれ以上のいずれか）の疾患特異的プロテアーゼによって切断され得るペプチド基質を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、１つ以上（例えば、２、３、４、またはそれ以上のいずれかのいずれか）の疾患特異的プロテアーゼによって切断可能な２つ以上（例えば、２、３、４、またはそれ以上のいずれか）のペプチド基質を含む。本明細書に開示されるプロテアーゼペプチド基質配列（例えば、配列番号５０～５５）のいずれか１つは、標的（例えば、疾患）部位でのエフェクター分子の放出のための最適なメカニズム及び動態を有する疾患感知放出性部位を提供するために混合及び調和され得る。異なるプロテアーゼ基質配列またはそのコピーは、好適な切断部位を提供するためにペプチドリンカーを介して互いに融合され得る。
Ｅ．例示的な標的化コンジュゲート
いくつかの実施形態では、標的化部位、コンジュゲーション部位を介して標的化部位にコンジュゲートされた１つ以上のエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、各エフェクター分子は、１つ以上のリンカー、及び／または１つ以上のプロテアーゼ切断部位を介してコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、標的化部位に共有結合でコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、標的化部位に非共有結合でコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、２つ以上のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、プロテアーゼ切断部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、第１の標的化部位、第２の標的化部位、ならびに第１の標的化部位及び第２の標的化部位を連結させるコンジュゲーション部位を含み、１つ以上のエフェクター分子が、コンジュゲーション部位にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断は、細胞の外で行われる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、式Ｉの構造を有する。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１２を含む抗体重鎖及び配列番号１１３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第１のコンジュゲーション部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第２のコンジュゲーション部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位、第２のコンジュゲーション部位、第４のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１及び／または第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第２及び／または第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図２Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１２を含む抗体重鎖及び配列番号１１３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１２を含む抗体重鎖及び配列番号１１３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（５）の化合物、式（６）の化合物、及び式（７）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第１のコンジュゲーション部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第２のコンジュゲーション部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３の切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第４の切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図２Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（５）の化合物、式（６）の化合物、及び式（７）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位、第２のコンジュゲーション部位、第４のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第５の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第６の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のエフェクター分子及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第５のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第６の切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図２Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図３Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のコンジュゲーション部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のコンジュゲーション部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図３Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１４または１２２を含む抗体重鎖及び配列番号１１５または１２３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のコンジュゲーション部位、第１のプロテアーゼ切断部位、第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図３Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカー及び第１の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第２の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１の切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第２の切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図４Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（５）の化合物、式（６）の化合物、及び式（７）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第１の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第２の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１の切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第２の切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図４Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１４または１２２を含む抗体重鎖及び配列番号１１５または１２３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（１）の化合物、式（２）の化合物、式（３）の化合物、及び式（４）からなる群から選択される治療剤を含み得る。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１４または１２２を含む抗体重鎖及び配列番号１１５または１２３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに式（５）の化合物、式（６）の化合物、及び式（７）の化合物からなる群から選択される治療剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のコンジュゲーション部位、第１のプロテアーゼ切断部位、第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断部位を含む第１のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断部位を含む第２のエフェクター分子（例えば、小分子薬物）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のエフェクター分子は、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のエフェクター分子は、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３の切断部位の切断後、第１のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出され；第４の切断部位の切断後、第２のエフェクター分子は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のエフェクター分子が、第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図４Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図５Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１２を含む抗体重鎖及び配列番号１１３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位；ならびに配列番号６８～７３からなる群から選択される核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第１のコンジュゲーション部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第２のコンジュゲーション部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図５Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位ならびに配列番号６８～７３からなる群から選択される核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位、第２のコンジュゲーション部位、第４のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図５Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断部位を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断部位を含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第３の切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第４の切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図６Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１２を含む抗体重鎖及び配列番号１１３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、配列番号１５７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ、及び配列番号１４７のアミノ酸配列を含む切断部位を含み得、切断部位は、抗体重鎖とＣｐＧ ＯＤＮとの間に配置されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第１のコンジュゲーション部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位（例えば、ｕＰＡ切断部位）、第２のコンジュゲーション部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂまたはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断部位を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断部位を含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３の切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第４の切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図６Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、配列番号１５７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ、及び配列番号１４７のアミノ酸配列を含む切断部位を含み得、切断部位は、抗体重鎖とＣｐＧ ＯＤＮとの間に配置されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位、第２のコンジュゲーション部位、第４のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第５の切断部位を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第６の切断部位を含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第５の切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第６の切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図６Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図７Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位ならびに配列番号６８～７３からなる群から選択される核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図７Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１４または１２２を含む抗体重鎖及び配列番号１１５または１２３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位ならびに配列番号６８～７３からなる群から選択される核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のコンジュゲーション部位、第１のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２の抗体重鎖を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカーを含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカーを含む第２のエフェクター分子（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図７Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１のコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２のコンジュゲーション部位を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のリンカー及び第１の切断部位を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第２の切断部位を含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図８Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、配列番号１５７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ、及び配列番号１４７のアミノ酸配列を含む切断部位を含み得、切断部位は、抗体重鎖とＣｐＧ ＯＤＮとの間に配置されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第１の切断部位を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第２の切断部位を含む第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図８Ｂに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１１４または１２２を含む抗体重鎖及び配列番号１１５または１２３を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、配列番号１５７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ、及び配列番号１４７のアミノ酸配列を含む切断部位を含み得、切断部位は、抗体重鎖とＣｐＧ ＯＤＮとの間に配置されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のコンジュゲーション部位、第１のプロテアーゼ切断部位及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のコンジュゲーション部位、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のリンカー及び第３の切断を含む第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のリンカー及び第４の切断を含む第２のエフェクター分子（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のリンカーを介して第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のリンカーを介して第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３の切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第４の切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図８Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、及び第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチドは、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図９Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１０６、１０８、及び１１０からなる群から選択される配列を含む抗体重鎖及び配列番号１０７、１０９及び１１１からなる群から選択される配列を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、ならびに配列番号６７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２のプロテアーゼ切断部位、第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図９Ｂに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１のプロテアーゼ切断部位、第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第３のプロテアーゼ切断部位、第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、第４のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ／ｓｃＦａｂ／ナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１のオリゴヌクレオチド及び第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第３のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２のオリゴヌクレオチド及び第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第４のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図９Ｃに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、及び第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、及び第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドを含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖；（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１０Ａに示されている。例示的な標的化コンジュゲートは、配列番号１００を含む抗体重鎖及び配列番号１０１を含む抗体軽鎖を含む標的化部位、及び配列番号６７の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含み得る。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされている、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１０Ｂに示されている。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（Ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第１の抗体重鎖、第１の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、第１のプロテアーゼ切断部位、及び第１の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第１のポリペプチド；（Ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：第２の抗体重鎖、第２の非共有結合性コンジュゲーション部位（例えば、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチド）、第２のプロテアーゼ切断部位、及び第２の抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、またはナノボディ）を含む第２のポリペプチド；（Ｃ）第１の抗体軽鎖；（Ｄ）第２の抗体軽鎖、（Ｅ）第１のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）；（Ｆ）第２のオリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）を含み、第１の抗体重鎖及び第１の抗体軽鎖は、第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し；第２の抗体重鎖及び第２の抗体軽鎖は、第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し；第１の抗原結合断片は、第３のエピトープに特異的に結合し；第２の抗原結合断片は、第４のエピトープに特異的に結合し；第１のオリゴヌクレオチドは、第１のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第２のオリゴヌクレオチドは、第２のコンジュゲーション部位に非共有結合でコンジュゲートされており；第１のプロテアーゼ切断部位の切断後、第１の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出され；第２のプロテアーゼ切断部位の切断後、第２の抗原結合断片は、標的化コンジュゲートから放出される、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第１のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、２つ以上のオリゴヌクレオチドが第２のコンジュゲーション部位にコンジュゲートされる。例示的な標的化コンジュゲートが図１０Ｃに示されている。
このセクションに記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、第１の及び第２のエフェクター分子は、同じである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のエフェクター分子は、異なる。いくつかの実施形態では、標的化部位は、単一特異的である。いくつかの実施形態では、標的化部位は、多重特異的、例えば、二重特異的、または三重特異的である。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖及びトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１００と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖及びトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０５と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、プロテアーゼ切断部位、及びオリゴヌクレオチド結合部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０６と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０７と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、プロテアーゼ切断部位、及びオリゴヌクレオチド結合部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位、プロテアーゼ切断部位、及びオリゴヌクレオチド結合部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１０と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、プロテアーゼ切断部位、及びトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及びｓｃＦａｂを含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、プロテアーゼ切断部位、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及びｓｃＦａｂを含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１６と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及びｓｃＦｖを含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖、プロテアーゼ切断部位、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位及びｓｃＦｖを含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖及びｓｃＦｖを含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２７と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）エフェクター分子であって、エフェクター分子は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位にコンジュゲートされている、エフェクター分子を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、例えば、式（１）～（７）の化合物から選択される治療剤である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号６６～７３及び１５７からなる群から選択される核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖及びトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０５と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）配列番号７０のＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、配列番号５０～５５から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む１つ以上のｕＰＡ切断部位をさらに含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、配列番号１０４を含む抗体重鎖及び配列番号１０５を含む抗体軽鎖；ならびに配列番号７０の核酸配列を含むＣｐＧ ＯＤＮを含む標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、配列番号５０～５５から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む１つ以上のｕＰＡ切断部位をさらに含む。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートであって、（ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて：抗体重鎖及びトランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位を含む第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖であって、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖；（ｂ）抗体軽鎖を含む第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖であって、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５と少なくとも８０％（例えば、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、もしくは９９％；または１００％のうちのいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖；及び（ｃ）式（１）の化合物の治療剤を含む、標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、配列番号５０～５５から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む１つ以上のｕＰＡ切断部位をさらに含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、配列番号１２４を含む抗体重鎖及び配列番号１２５を含む抗体軽鎖；ならびに式（１）の化合物の治療剤を含む標的化コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、配列番号５０～５５から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む１つ以上のｕＰＡ切断部位をさらに含む。
ＩＩＩ．使用方法
本明細書に記載の標的化コンジュゲート及びその組成物（例えば、薬学的組成物）は、固形腫瘍または血液癌を含むがん、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患等の様々な疾患を処置または診断するために使用され得る。
よって、いくつかの実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患を処置する方法であって、有効量の本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つを個体に投与することを含み、標的化コンジュゲートは、治療剤及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択されるエフェクター分子を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、甲状腺癌及び子宮癌からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、個体における疾患（例えば、がん）を処置する方法であって、有効量の式Ｉの構造：

（式中、Ａ１は、疾患に関連する第１の標的分子に特異的に結合する第１の標的化部位であり；Ａ２は、疾患に関連する第２の標的分子に特異的に結合する第２の標的化部位であり；Ｐ１は、第１の切断部位であり；Ｐ２は、第２の切断部位であり；Ｐ３は、第３の切断部位であり；Ｃは、コンジュゲーション部位であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、治療剤またはオリゴヌクレオチドであり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１でありａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む標的化コンジュゲートを個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、罹患部位は、腫瘍部位である。いくつかの実施形態では、切断は、腫瘍部位、例えば、腫瘍微小環境において行われる。いくつかの実施形態では、切断は、細胞の外、例えば、腫瘍微小環境における腫瘍細胞の外で行われる。
いくつかの実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患を診断する方法であって、有効量の本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つを個体に投与することを含み、標的化コンジュゲートは、検出可能な標識を含み、検出可能な標識の検出は、疾患の存在を示す、方法が提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、甲状腺癌及び子宮癌からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、個体における疾患（例えば、がん）を診断する方法であって、有効量の式Ｉの構造：

（式中、Ａ１は、疾患に関連する第１の標的分子に特異的に結合する第１の標的化部位であり；Ａ２は、疾患に関連する第２の標的分子に特異的に結合する第２の標的化部位であり；Ｐ１は、第１の切断部位であり；Ｐ２は、第２の切断部位であり；Ｐ３は、第３の切断部位であり；Ｃは、コンジュゲーション部位であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、検出可能な標識であり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１でありａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む標的化コンジュゲートを個体に投与することを含み、検出可能な標識の検出は、疾患の存在を示す、方法が提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、罹患部位は、腫瘍部位である。いくつかの実施形態では、切断は、腫瘍部位、例えば、腫瘍微小環境において行われる。いくつかの実施形態では、切断は、細胞の外、例えば、腫瘍微小環境における腫瘍細胞の外で行われる。
いくつかの実施形態では、エフェクター分子（例えば、治療剤、オリゴヌクレオチド及び／または検出可能な標識）を、エフェクター分子での処置または診断を必要とする個体における罹患部位に優先的に送達する方法であって、有効量の式Ｉの構造（式中、Ａ１は、疾患に関連する第１の標的分子に特異的に結合する第１の標的化部位であり；Ａ２は、疾患に関連する第２の標的分子に特異的に結合する第２の標的化部位であり；Ｐ１は、第１の切断部位であり；Ｐ２は、第２の切断部位であり；Ｐ３は、第３の切断部位であり；Ｃは、コンジュゲーション部位であり；Ｌは、リンカーであり；Ｄは、エフェクター分子であり；ｘ＝０または１であり；ｙ＝０または１であり；ｚ＝０または１であり；ｕ＝０または１であり；ｖ＝０または１であり；ａ＝１～２０であり；ｂ＝１～２０である）を含む標的化コンジュゲートを個体に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、腫瘍、感染症、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び免疫不全疾患からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、方法は、エフェクター分子での処置を必要とする個体における罹患部位でのエフェクター分子の効果的な濃度を増加させる。いくつかの実施形態では、エフェクター分子の効果的な濃度は、同じ有効量での個体へのエフェクター分子の投与と比較して罹患部位で約１０％、２０％、５０％、１×、２×、５×、１０×またはそれ以上のうちのいずれか増加する。
いくつかの実施形態では、方法は、エフェクター分子での処置を必要とする疾患を有する個体における正常な組織における標的分子へのエフェクター分子の結合を減少させる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの投与は、正常細胞上のその標的分子へのエフェクター分子の結合を、個体へのエフェクター分子の投与と比較して約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のうちのいずれか減少させる。
いくつかの実施形態では、方法は、エフェクター分子での処置を必要とする疾患を有する個体に対するエフェクター分子の毒性（例えば、標的上組織外毒性）を減少させる。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの投与は、エフェクター分子の毒性を、個体への同じ有効量でのエフェクター分子の投与と比較して約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上のうちのいずれか減少させる。
また、それを必要とする個体における疾患を処置または診断する際に使用するための本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つ、またはそれを必要とする個体における疾患を処置または診断するための薬品の調製における本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つの使用が提供される。
本明細書に記載の標的化コンジュゲートは、様々な経路を介して、例えば、標的化コンジュゲートにおける標的化部位と同じ投与経路で個体に投与され得る。例示的な投与経路には、非経口、静脈内、筋肉内、及び皮下投与が含まれるがこれらに限定されない。
個体に投与される標的化コンジュゲートの有効量、好適な用量、及び投薬スケジュールは、特定の組成物、投与経路、及び処置されている疾患の特定のタイプに応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートの有効量は、標的化部位及び／またはエフェクター分子（例えば、治療剤、オリゴヌクレオチド、及び／または検出可能な標識）の有効量に基づく。
いくつかの実施形態では、個体は、哺乳動物、例えば、ヒト、齧歯類、または霊長類である。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、標的化コンジュゲートは、単独でまたは他の抗がん処置、例えば、化学療法剤、電離放射線、ホルモン療法、サイトカイン、免疫療法、細胞療法、ワクチン、モノクローナル抗体、抗血管形成剤、標的化治療剤（小分子薬物）、または生物学的療法と組み合わせて使用される。例えば、化学療法剤には、抗腫瘍アルキル化剤、例えば、マスタード類（メクロレタミンＨＣｌ、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、ブスルファン）、ニトロソウレア（ＢＣＮＵ／カヌスチン、ＣＣＮＵ／ロムスチン、ＭｅＣＣＮＵ／セムスチン、フォテムスチントレプトゾトシン）、テトラジン（ダカルバジン、ミトゾロミド、テモゾロミド）、アジリジン（チオテパ、マイトマイシンＣ、ＡＺＱ／ジアジコン）、プロカルバジンＨＣｌ、ヘキサメチルメラミン、アドゼレシン；シスプラチン及びそのアナログ、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン；代謝拮抗剤、メトトレキサート、他の抗葉酸剤、５－フルオロピリミジン（５－フルオロウラシル／５－ＦＵ）、シタラビン、アザシチジン、ゲムシタビン、６－チオプリン（６－メルカプトプリン、チオグアニン）、ヒドロキシウレア；トポイソメラーゼ相互作用剤エピポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、カンプトテシンアナログ（トポテカンＨＣｌ、イリノテカン、９－アミノカンプトテシン）、アントラサイクリン及び関連化合物（ドキソルビシンＨＣｌ、リポソームエピルビシン、ダウノルビシンＨＣｌ、ダウノルビシンＨＣｌシトレートリポソーム、エピルビシン、イダルビシン）、ミトキサントロン、ロソキサントロン、アクチノマイシン－Ｄ、アムサクリン、ピラゾロアクリジン；抗微小管剤ビンカアルカロイド（ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン）、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、エストラムスチン；フルダラビン、２－クロロデオキシアデノシン、２’－デオキシコホルマイシン、ホモハリングトニン、スラミン、ブレオマイシン、Ｌ－アスパラギナーゼ、フロクスウリジン、カペシタビン、クラドリビン、ロイコボリン、ペントスタチン、レチノイド（オールトランスレチノイン酸、１３－ｃｉｓ－レチノイン酸、９－ｃｉｓ－レチノイン酸、イソトレチノイン、トレチノイン）、パミドロネート、サリドマイド、シクロスポリン；ホルモン療法抗エストロゲン剤（タモキシフェン、トレミフェン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテート）、アロマターゼ阻害剤（アミノグルテチミド、レトロゾール／フェマーラ、アナストロゾール／アリルニデックス（ａｒｉｒｎｉｄｅｘ）、エキセメスタン／アロマシン、ボロゾール）、ゴナドトロピン放出ホルモンアナログ、抗アンドロゲン剤（フルタミド、カソデックス）、フルオキシメテロン、ジエチルスチルベストロール、オクトレオチド、酢酸リュープロリド、ゾラデックス；ステロイダル及び非ステロイド性抗炎症剤（デキサメタゾン、プレドニゾン）；抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体（ハーセプチン／トラスツズマブ）、抗ＥＧＦＲ抗体（セツキシマブ／アービタックス、ＡＢＸ－ＥＧＦ／パニツムマブ、ニモツズルナブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｒｎａｂ））、抗ＣＤ２０抗体（リツキサン／リツキシマブ、イブリツモマブ／ゼバリン、トシツモマブ／ベキサール）、抗ＣＤ３３抗体（ゲムツズマブ／マイロターグ）、アレムツズマブ／キャンパス、ベバシズマブ／アバスチンを含むがこれらに限定されないモノクローナル抗体；ならびに小分子阻害剤が含まれるがこれらに限定されない。
ＩＶ．薬学的組成物、キット及び製造品
本明細書に開示される標的化コンジュゲートのいずれか１つを含む組成物（例えば、薬学的組成物）、キット、及び製造品が本出願によってさらに提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つ及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、薬学的組成物）は、それを必要とする個体への組成物の投与を容易化し得る担体、希釈剤、または賦形剤を含む。担体、希釈剤、及び賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、例えば、ラクトース、またはデンプンのタイプ、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール及び生理的に適合性の溶媒が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、複数の標的化コンジュゲートを含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物における標的化コンジュゲート分子は、同じの数のエフェクター分子を有しない。いくつかの実施形態では、薬学的組成物における標的化コンジュゲートの少なくとも２つは、異なる数のエフェクター分子を含む。薬学的組成物におけるエフェクター分子と標的化部位との間の比は、薬学的組成物が規制承認を受けるために所定の範囲内である。
いくつかの実施形態では、薬学的組成物の平均薬物搭載は、少なくとも約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、６０：１、７０：１、８０：１、９０：１、１００：１またはそれ以上のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、薬学的組成物の平均薬物搭載は、約１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０：１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、または２：１のうちのいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物の平均薬物搭載は、約２：１～４：１、２：１～８：１、２：１～１０：１、２：１～１６：１、４：１～２０：１、１０：１～２０：１、２０：１～４０：１、４０：１～１００：１、２：１～２０：１、２：１～４０：１、または１０：１～４０：１のうちのいずれか１つである。
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、少なくとも約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１７：１、１８：１、１９：１、または２０：１のうちのいずれか１つのエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する平均比を有する。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、または１：１のうちのいずれか１つ以下のエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する平均比を有する。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、約１：１～２：１、２：１～４：１、４：１～８：１、１：１～１０：１、１：１～１６：１、４：１～２０：１、１０：１～２０：１、１：１～２０：１、または２：１～２０：１のうちのいずれか１つのエフェクター分子の標的化部位（例えば、第１の標的化部位及び／または第２の標的化部位）に対する平均比を有する。
本明細書に記載の薬学的組成物は、一般的に許容される手順に従って成分を混合することによって調製され得る。例えば、選択された成分は、混和機または他の標準的なデバイス内で単純に混合されて濃縮混合物が生成され得、これは次いで、水または増粘剤及び場合によってはｐＨをコントロールするための緩衝液または張力をコントロールするための追加の溶質の添加によって最終濃度及び粘度に調整され得る。
他の薬学的に許容可能な担体及びそれらの製剤化は、標準的な製剤化の文献、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。Ｙ．Ｊ．ａｎｄ Ｈａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．“Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｎｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ（１９８８）も参照されたい。
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、液体懸濁液である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌組成物である。
また、本明細書に記載の標的化コンジュゲートのいずれか１つを含むキットが提供される。本発明のキットは、好適な包装内にある。好適な包装には、バイアル、ボトル、瓶、柔軟性包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）が含まれるがこれらに限定されない。キットは、追加の成分、例えば、緩衝液及び説明情報を任意に提供し得る。よって、本出願は、バイアル（例えば、密封バイアル）、ボトル、瓶、柔軟性包装等を含む製造品を提供する。
製造品は、容器及び容器上のまたは容器に関連するラベルまたはパッケージ挿入物を含み得る。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ等が含まれる。容器は、多様な物質、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成され得る。通常、容器は、本明細書に記載される疾患を処置または診断するために有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る。標識またはパッケージ挿入物は、組成物が個体における疾患を処置または診断するために使用されることを示す。標識またはパッケージ挿入物は、組成物を個体に投与するための指示書をさらに含む。
パッケージ挿入物は、そのような治療または診断製品の使用に関する適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌及び／または警告に関する情報を含有する治療製品の商業用パッケージに習慣的に含まれる指示書を指す。いくつかの実施形態では、パッケージ挿入物は、組成物が、疾患（例えば、がん）を処置または診断するために使用されることを示す。
また、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む第２の容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの立場から望ましい他の物質をさらに含み得る。
以下の実施例は、本発明を純粋に例示することが意図され、それ故、決して、本発明を限定すると考えるべきではない。以下の例及び詳細な説明は、限定ではなく例示として提供される。
実施例１ ｕＰＡ基質ペプチドの設計及びスクリーニング
１．ペプチド切断効率
ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）基質ペプチド（配列番号５０～５４）を、ｕＰＡによる基質切断の効率、一方で組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）消化に対する耐性についてスクリーニングした。基質ペプチド及びＰＢＳを３８４プレートに添加し、ｕＰＡまたはｔＰＡと混合した。消化の効率を蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）法によって測定した。すべてのペプチド溶液を２０ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）で５０μＬに希釈した。実験設計が表２に示されている。結果が表３～５に示されている。
ｕＰＡは、以下の表３に示されるように、配列番号５０～５４のペプチドを有効に切断した：


蛍光強度においてプラトーに到達するのに要する時間が短いほど、ｕＰＡ消化がより速い。蛍光強度の増加の倍率が高いほど、ｕＰＡ消化がより効率的である。そのため、ペプチドについてのｕＰＡ消化率の順位は、配列番号５２、５４＞配列番号５３＞配列番号５０＞配列番号５１であった。反応効率の順位は、配列番号５１＞配列番号５０＞配列番号５４＞配列番号５２＞配列番号５３であった。
７．５×１０－３ｍｇ／ｍＬのｔＰＡ濃度では、表４に示されるように、配列番号５１及び５２のみが軽度に消化された：
２．２５×１０－２ｍｇ／ｍＬのｔＰＡ濃度では、配列番号５１、５２及び５４は、表５に示されるように消化された：
２．ＦＲＥＴによって測定される血漿における基質ペプチドの安定性
血漿を抗生物質（ペニシリン－ストレプトマイシン）と混合し、次いで配列番号５０～５４のペプチドを血漿混合物に添加した。反応混合物を室温でインキュベートした。サンプルをＦＲＥＴ測定のために０時間、８時間、２４時間、３２時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間及び１４４時間で取得した。実験設計が表６に示されている。
血漿における基質ペプチドの各々についての蛍光強度の増加の倍率が以下の表７に示されている：
血漿におけるペプチド安定性の順位は、およそ、配列番号５３＞配列番号５１、５２＞配列番号５０＞配列番号５４である。
３．動態測定からの血漿における基質ペプチドの安定性
実験を表８に示されるように設計した。血漿－ペプチド混合物を室温で１２時間インキュベートし、蛍光強度を連続的に測定した。結果が表９に示されている。ＰＳ：ペニシリン－ストレプトマイシン。

血漿におけるペプチド安定性の順位は、およそ配列番号５２、５３＞配列番号５０＞配列番号５１、５４であった。配列番号５２及び５３については、蛍光強度は、時間と共にそれぞれ２．０倍及び１．７倍に増加したが、１２時間以内にプラトーに到達しなかった。配列番号５０は４．８時間でプラトーに到達し、蛍光強度の増加の最大倍率は２．８倍であった。配列番号５１及び５４の蛍光強度は、それぞれ、３．６時間以内に２．３倍及び２．７倍に増加した。
４．抗体におけるｕＰＡ消化
重鎖においてｕＰＡ基質配列を含有する抗体Ａｂ３Ｃ（重鎖配列配列番号１０８、軽鎖配列配列番号１０９）、Ａｂ３Ｅ（重鎖配列配列番号１１０、軽鎖配列配列番号１１１）及びＡｂ５Ｄ（重鎖配列配列番号１２４、軽鎖配列配列番号１２５）を使用して、抗体におけるｕＰＡ消化効率を試験した。ｕＰＡ基質配列を含有しない抗体Ａｂ５Ｃ（重鎖配列配列番号１２２、軽鎖配列配列番号１２３）を対照として使用した。実験設計が表１０に示されている。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。


１Ａｂ３Ｃ、Ａｂ３Ｅ、Ａｂ５Ｃ、及びＡｂ５Ｄの初期濃度は、それぞれ、２．１２ｍｇ／ｍＬ、１．０７ｍｇ／ｍＬ、９．２ｍｇ／ｍＬ、及び７．８ｍｇ／ｍＬであった。２ｕＰＡの初期濃度は、０．２５ｍｇ／ｍＬであった。３ＥＤＴＡの濃度は、１ｍＭであった。
ｕＰＡ消化生成物をＬＣ－ＭＳで分析した。Ａｂ３Ｃ、Ａｂ３Ｅ及びＡｂ５Ｄの重鎖をｕＰＡによって切断して、予期された分子量の断片を生成した。Ａｂ５Ｃは、ｕＰＡによって切断しなかった。
実施例２．薬物－リンカーの設計、合成及び分析
１．実験の目的
（１）異なる分子量のＰＥＧスペーサーを含有するＭＭＡＥ薬物－リンカーを設計し、ポリペプチド及び抗体へのＭＭＡＥ薬物－リンカーのＴＧａｓｅ酵素で触媒されるコンジュゲーションのカップリング効率を調査し、高いカップリング効率を有するＰＥＧスペーサー及び薬物－リンカーについてスクリーニングする。（２）ＳＮ－３８の異なる位置に接続させるためのリンカーを設計し、高いカップリング効率、安定性及び高い生物活性を有するＳＮ－３８薬物－リンカーについてスクリーニングする。
２．薬物リンカーの合成
式（１）～（７）の化合物を化学的に合成し、ＨＰＬＣ、ＬＣ－ＭＳ、及びＨ－ＮＭＲによって試験した。薬物リンカーを、品質標準を満たした後に後続の実験において使用した。
３．カテプシンＢによる薬物－リンカーの制限酵素消化
生理的条件下の薬物の放出をシミュレートするために、薬物－リンカーをカテプシンＢによる切断に供し、その後、脱離反応が生じ、未修飾薬物を放出させた。
３．１ 反応のメカニズム
（１）式（１）の化合物の消化
（２）式（２）の化合物の消化
３．２ 実験方法
凍結乾燥したカテプシンＢ酵素粉末を１３０μＬの純水に溶解し、それぞれ１０μＬの１３本のチューブに分けた。この時、各チューブの濃度は、０．１５ｍｇ／ｍｌ（４．１５μＭ）であった。次いで活性化緩衝液（２０ｍＭの酢酸ナトリウム、３０ｍＭのＤＴＴ、１５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ５．５）を、酵素のチューブに添加して、酵素を室温で１時間活性化した。活性化した酵素を酵素消化緩衝液（２５ｍＭの酢酸ナトリウム、１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ５．５）で１２５ｎＭに希釈した。薬物－リンカーを活性化した酵素に６２．５μＭの最終濃度まで添加し、３７℃で３時間インキュベートした。
３．３ 結果及び結論
式（１）及び（２）の化合物はいずれとも有効に消化された。式（１）の化合物を消化してＳＮ３８を放出させ、式（２）の化合物を消化してＳＮ３８誘導体を放出させた。
４．安定性調査
異なるｐＨの緩衝液、血漿及び動的ｐＨ溶液において式（１）の化合物、式（２）の化合物及びＳＮ－３８におけるラクトン及びラクトン開環の生成物を測定することによって薬物の安定性を試験した。
４．１ ＳＮ－３８の安定性
４のｐＨを有する塩酸溶液及び１０のｐＨを有する水酸化ナトリウム溶液をそれぞれ調製した。５ｍｇのＳＮ－３８を５ｍＬのアセトニトリルに溶解した。ＳＮ－３８を室温でｐＨ＝１０で１０分間振盪し、次いでｐＨを調整して４に戻し、サンプリングの前に室温で１０分間振盪することによってｐＨを変化させた（ｐＨ＝１０からｐＨ＝４まで）溶液中のＳＮ－３８の安定性を測定した。次いでＳＮ－３８を室温で一晩（１６時間）振盪機上でインキュベートし、その後アッセイした。
４．２ 緩衝液における式（１）及び（２）の化合物の安定性
ｐＨ＝７．４を有する２０ｍＭリン酸緩衝液（１Ｌ）の調製：８．０ｇの塩化ナトリウム、０．２ｇの塩化カリウム、７．３ｇのリン酸水素二ナトリウム十二水和物、及び０．４８ｇのリン酸二水素カリウムを水に溶解し、ｐＨ７．４で１Ｌに希釈した。
緩衝液を飽和リン酸溶液及び水酸化ナトリウム溶液でｐＨ９．０、７．０及び５．０に調整した。ｐＨが変化する（９から５）溶液における薬物の安定性を調査する場合、式（１）／（２）の化合物を室温でｐＨ９で１０分間振盪機上でインキュベートした。溶液ｐＨを調整して５に戻し、一晩室温で（１６ｈ）振盪してから試験した。
４．３ 血漿における式（１）及び（２）の化合物の安定性
タンパク質沈殿溶液の調製：１ｇのＮａＣｌを３ｍＬのメタノール及び５ｍＬのアセトニトリルに添加し、１時間撹拌し、次いで使用前に室温で１時間放置した。
次いで２００μＬのタンパク質沈殿溶液を反応溶液に添加し、８０００ｇで１０分間遠心分離した。上清を分析のために収集した。
４．４ 結果及び結論
ＳＮ－３８は、酸性条件（９４％）下ではラクトンとして、アルカリ条件下ではラクトン開環形態（９２％）として存在していた。ＳＮ－３８をアルカリ条件に１０分間供し、次いで酸性条件に供してから試験した後、５６％のＳＮ－３８がラクトンの形態で存在し、４２％のラクトン開環生成物が存在していた。一晩インキュベートした後、８６％がラクトンの形態であり、１３％がラクトン開環生成物の形態で存在していた。
式（１）の化合物は主に、酸性条件下ではラクトンの形態で存在し（８８％）、アルカリ条件下では、それは主に、開環の形態のラクトンとして存在する（９２％）。式（１）の化合物を１０分間アルカリ条件に供し、次いで酸性条件に供してから試験した後、９８％がラクトンの形態であり、０．２１％がラクトン開口生成物の形態であった。式（１）の化合物は、血漿中で部分的に加水分解され、主にラクトン開口の形態であった；
式（２）の化合物は、ｐＨによってあまり影響を受けず、９８％が緩衝液中でラクトンの形態で存在していた。血漿中の式（２）の化合物の安定性はまた、式（２）の化合物のものよりも良好であった。式（２）の化合物は主に、血漿中でラクトンの形態であり、開環生成物は基本的に不可視であった。
実施例３．ＣｐＧ－ＯＤＮ－リンカーの設計及び合成
配列番号６６～７３のＣｐＧ ＯＤＮ（シトシン－ホスホジエステル－グアニンオリゴデオキシヌクレオチド）及びリンカー、ならびに式ＶＩＩＩを設計し、合成し、ＴＧａｓｅの触媒作用時のＴＧａｓｅ基質配列に対するそれらのカップリング効率について試験した。ＣｐＧ－ＯＤＮをホスホロアミダイト化学で合成し、電気泳動及び質量分析によって特性化した。ＣｐＧ ＯＤＮリンカーの式は、５’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮ（式ＩＶ）及び３’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮ（式Ｖ）（式中、スペーサーは、（ＣＨ２）ｎ－（ＰＥＧ）ｍであり、ｈ、ｎ及びｍは、整数であり、ｈ＝０または１であり、ｎ≧１であり、ｍ≧０であり、Ｐは、切断部位である）であった。
実施例４．ＴＧａｓｅコンジュゲーションペプチドの設計及びスクリーニング
１．実験の目的
ＴＧａｓｅ（トランスグルタミナーゼ）を使用した基質ペプチド（配列番号１～１２）と小分子毒素（薬物－リンカー、式ＩＩ～Ｖ）との間のカップリング効率を調査した。高いカップリング効率を有する基質ペプチドをペプチドコンジュゲート、タンパク質コンジュゲート及び抗体コンジュゲートの開発のために選択した。
２．ペプチド合成及び分析
ペプチドを従来の固相合成法によって分析し、ＨＰＬＣ及びＬＣ－ＭＳによって合成した。
３．ペプチド合成及び分析
微生物／細菌トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ／ＢＴＧ）を本明細書で使用した。ＭＴＧ／ＢＴＧの酵素活性を当該技術分野における従来の方法によって決定した。次いでＴＧａｓｅを、薬物リンカーを配列番号１～１２のペプチドと架橋させるために使用した。ペプチドと薬物リンカーとの間の反応性を生成物のＨＰＬＣピーク面積によって決定した。
ペプチドをｐＨ＝７．４のＰＢＳで１０ｍｇ／ｍＬに希釈した。薬物リンカー（式（１）～（４）の化合物）をＤＭＳＯで３１ｍｇ／ｍＬに希釈した。反応混合物は、１ｍｇ／ｍＬの最終濃度のペプチド、２０％のＤＭＳＯの最終濃度を含有し、ペプチド：薬物リンカーのモル比は、１：５であった。ＴＧａｓｅを反応混合物に添加して２５Ｕ／ｍＬの最終濃度とした。室温で１６時間後に反応をＲＰ－ＨＰＬＣによって測定した。結果が表１５に示されている。


４．結論
ＳＮ－３８薬物間で、位置１０におけるヒドロキシル基でリンカーと反応する式（１）の化合物は、位置２０でリンカーと反応する式（２）の化合物と比較してより高い反応性を有していた。２つのＭＭＡＥ薬物間で、式（４）の化合物（８ＰＥＧスペーサー）は、式（３）の化合物（４ＰＥＧスペーサー）と比較してより高い反応性を有していた。
式（１）の化合物は、ＤＰＲ＝４で配列番号７～１０に、ＤＰＲ＝３で配列番号１～６及び１１～１２に（一部はＤＰＲ＝２の生成物を伴って）架橋することができた。ペプチドの架橋反応性の全体の順序は、およそ、配列番号９≒配列番号１０＞配列番号７≒配列番号８＞配列番号５≒配列番号４≒配列番号３＞配列番号２＞配列番号６＞配列番号１２≒配列番号１１＞配列番号１であった。
式（２）の化合物は、ＤＰＲ＝３で配列番号１に、ＤＰＲ＝２で配列番号２、５、及び６に、及びＤＰＲ＝１で試験された他のペプチドに架橋することができた。ペプチドの架橋反応性の全体の順序は、およそ：配列番号１＞配列番号５＞配列番号６＞配列番号４＞配列番号２＞配列番号１２＞配列番号３＞配列番号：８、９、１０、１１＞配列番号７。
式（３）の化合物はほとんど、ＤＰＲ＝１でペプチドに架橋した。ペプチドの架橋反応性の全体の順序は、およそ、配列番号８、９、１０、１２＞配列番号５、７＞配列番号４、６＞配列番号１１＞配列番号３＞配列番号１、２であった。
式（４）の化合物は、ＤＰＲ＝３で配列番号２、３、４、及び７に、ＤＰＲ＝２で配列番号６、８、１１に架橋することができた。ペプチドの架橋反応性の全体の順序は、およそ、配列番号２、３、４、７＞配列番号８＞配列番号６、１１＞配列番号１＞配列番号５、１０＞配列番号９、１２であった。
実施例５．抗体の特性化
単一特異的ＰＤ－Ｌ１抗体Ａｂ２Ｂ（重鎖配列番号１００、軽鎖配列番号１０１）、Ａｂ３Ａ（重鎖配列番号１０４、軽鎖配列番号１０５）、Ａｂ３Ｂ（重鎖配列番号１０６、軽鎖配列番号１０７）、Ａｂ３Ｃ（重鎖配列番号１０８、軽鎖配列番号１０９）、Ａｂ３Ｅ（重鎖配列番号１１０、軽鎖配列番号１１１）、Ａｂ３Ｆ（重鎖配列番号１１２、軽鎖配列番号１１３）、及び二重特異的ＰＤ－Ｌ１／Ｔｒｏｐ－２抗体Ａｂ４Ａ（重鎖配列番号１１４、軽鎖配列番号１１５）、Ａｂ４Ｂ（重鎖配列番号１１６、軽鎖配列番号１１７）、Ａｂ５Ａ（重鎖配列番号１１８、軽鎖配列番号１１９）、Ａｂ５Ｂ（重鎖配列番号１２０、軽鎖配列番号１２１）、Ａｂ５Ｃ（重鎖配列番号１２２、軽鎖配列番号１２３）、Ａｂ５Ｄ（重鎖配列番号１２４、軽鎖配列番号１２５）、Ａｂ５Ｅ（重鎖配列番号１２６、軽鎖配列番号１２７）、及びＡｂ５Ｆ（重鎖配列番号１２８、軽鎖配列番号１２９）を発現させ、ヒトＰＤ－Ｌ１／Ｂ７－Ｈ１／ＣＤ２７４に対する親和性及びさらに二重特異的抗体についてはヒトＴｒｏｐ－２／ＴＡＣＳＴＤ２タンパク質に対する親和性について試験した。ＰＤ－Ｌ１に対する親和性の結果が表２０に示されている。Ｔｒｏｐ－２に対する親和性の結果が表２１に示されている。結果は、単一特異的及び二重特異的抗体の両方が、抗原（複数可）に対する高い親和性を維持していたことを示している。



実施例６．抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の合成及び特性化
１．単一特異的抗体の抗体－薬物コンジュゲーション
薬物－リンカー（式（１）及び（２）の化合物）を、配列番号１０４（重鎖及びＴＧａｓｅ基質配列を含む）及び１０５（軽鎖）の抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ａｂ３Ａ、または配列番号１１２（重鎖、ｕＰＡ基質ペプチド、及びＴＧａｓｅ基質配列を含む）及び１１３（軽鎖）の抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ａｂ３Ｆにコンジュゲートした。コンジュゲーション実験の実験設計が表１８に示されている。反応混合物を室温で１６時間インキュベートし、コンジュゲーション生成物の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を質量分析によって決定した。
ＡＤＣ Ａｂ３Ａ－ＣＤ－１について、ＤＡＲ値 は３．９３であり、Ａｂ３Ａ－ＣＤ－２について、ＤＡＲ値は３．７７であった。ＡＤＣ Ａｂ３Ｆ－ＣＤ－１について、ＤＡＲ値は４．９８であり、Ａｂ３Ｆ－ＣＤ－２について、ＤＡＲ値は４．８５であった。
２．二重特異的抗体の抗体－薬物コンジュゲーション
薬物リンカー（式（１）及び（２）の化合物）を、抗ＰＤ－Ｌ１及び抗Ｔｒｏｐ－２二重特異的抗体Ａｂ５Ｃ（重鎖配列番号１２２、軽鎖配列番号１２３）及びＡｂ５Ｄ（重鎖配列番号１２４、軽鎖配列番号１２５）にコンジュゲートした。コンジュゲーション生成物の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を質量分析によって決定した。反応混合物を室温で１６時間インキュベートした。コンジュゲーション実験の実験設計及びＡＤＣのＤＡＲ値が表１９に示されている。


３．ＡＤＣの抗原結合能力
本例におけるＡＤＣをヒトＰＤ－Ｌ１／Ｂ７－Ｈ１／ＣＤ２７４に対するそれらの親和性について試験し、二重特異的抗体－薬物リンカーコンジュゲートをヒトＴｒｏｐ－２／ＴＡＣＳＴＤ２に対するそれらの親和性についてさらに試験した。結果が表２０に示されている。


実施例７．抗体オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）の合成及び特性化
１．非共有結合性抗体－ＣｐＧ ＯＤＮコンジュゲーション
配列番号６７のＣｐＧ ＯＤＮを抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ａｂ３Ｂ（重鎖配列番号１０６及び軽鎖配列番号１０７）、Ａｂ３Ｃ（重鎖配列番号１０８及び軽鎖配列番号１０９）、及びＡｂ３Ｅ（重鎖配列番号１１０及び軽鎖配列番号１１１）に非共有結合でコンジュゲートした。コンジュゲーション実験の設計が表２１に示されている。反応混合物を室温で１６時間インキュベートし、コンジュゲーション生成物の薬物対抗体比（ＤＡＲ）をゲルシフトアッセイによって決定した。結果が図１１に示されている。
図１１は、配列番号６７が抗体に有効に非共有結合で結合したことを示している。結合効率の順序は、Ａｂ３Ｃ＞Ａｂ３Ｂ＞Ａｂ３Ｅであった。また、ｍＡｂ：ＣｐＧのモル比が２：１を超える場合、すべてのＣｐＧ ＯＤＮがＡｂ３Ｃに結合された。
２．共有結合性抗体－ＣｐＧ ＯＤＮコンジュゲーション
配列番号６８、６９及び７１のＣｐＧ配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーをＴＧａｓｅによってそれぞれＡｂ３Ａ（重鎖配列番号１０４、軽鎖配列番号１０５）に共有結合でコンジュゲートした。ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーを４０：１のモル比でＡｂ３Ａと混合した。ＴＧａｓｅを反応混合物に５Ｕ／ｍＬの最終濃度まで添加し、反応混合物を室温で１６時間インキュベートした。コンジュゲーション生成物をゲルシフトアッセイによって分析した。結果が図１２及び１３に示されている。
図１２及び１３は、ＴＧａｓｅが、ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーとＴＧａｓｅ基質配列を有する抗体との間のコンジュゲーションを触媒することができたことを示している。配列番号７１の配列を含むＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーは、最も高いコンジュゲーション効率を示し、それに配列番号６８及び６９のＣｐＧ ＯＤＮが続いた。これらの結果は、リンカーの長さがコンジュゲーション効率に影響を及ぼし、３つのうち最も長いものが最も高いカップリング効率を有することを示唆していた。
実施例８．ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断についての免疫チェックポイントバイオアッセイ
ＮＦＡＴ経路の活性化に対するＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を遮断することのメカニズム分析のためにルシフェラーゼレポーターアッセイを使用した。バイオアッセイは、２つの遺伝子的に操作された細胞株：ＮＦＡＴプロモーターのコントロール下でヒトＰＤ－１及びルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２）であるＰＤ－１エフェクター細胞；ヒトＰＤ－Ｌ１を発現する２９３Ｔ－ＯＳ８細胞であるＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ／２９３Ｔ－ＯＳ８細胞からなっていた。簡潔には、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２－ＰＤ１安定エフェクター細胞及び２９３Ｔ－ＯＳ８－ＰＤ－Ｌ１安定細胞株を、１：１の比で連続希釈抗体の存在下で三連で６時間３７℃、５％ＣＯ２で共培養した。発光をＯＮＥ－Ｓｔｅｐ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して測定した。
結果及び結論
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫遮断レポーターアッセイから得られたＩＣ５０値が表２２にまとめられている。薬物の用量反応曲線が図１４に示されている。結果は、融合抗体Ａｂ３Ａ、二重特異的抗体Ａｂ５Ｃ及びＡｂ５Ｄ（すべて抗体Ａｂ２Ｂに基づいて構築された）が、Ａｂ２Ｂと同様の免疫遮断効力を有し、これはまた、参照抗体アテゾリズマブと同様であることを明らかにした。
実施例９．ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害研究
細胞株構築及び培養条件
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子を安定的に発現するヒト大腸腺癌ＨＣＴ１５細胞株を生成した。細胞株をＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１と命名した。１０％ＦＢＳに加えて、１μｇ／ｍｌのピューロマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０培地を使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
細胞傷害研究
ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって製造業者の指示書に従って決定した。簡潔には、細胞を１００μＬの完全培地中で１ウェル当たり２×１０３細胞で９６ウェルプレートに播種し、次いで３７℃で５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。未処置細胞が対照として機能した。１００μＬの培地中のＡＤＣ、抗体、またはペイロードを１ｕＭの濃度でそれぞれ開始する２倍希釈系列を用いて様々な濃度で二連で添加した。細胞を試験品に５日間曝露した。吸光度を４５０ｎｍでマイクロプレートリーダーによって測定した。細胞生存率（％）を以下の式：サンプル／対照×１００％を使用して計算した。用量－反応曲線を生成し、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を非線形回帰分析によって計算した。
結果及び結論


ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害研究から得られたＩＣ５０値が表２３にまとめられている。薬物の用量反応細胞傷害曲線が図１５に示されている。Ａｂ３Ａ－ＣＤ－１は、抗体Ａｂ３Ａ及び式（１）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートであり、Ａｂ３Ａ－ＣＤ－２は、抗体Ａｂ３Ａ及び式（２）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートであり、Ａｂ３Ｆ－ＣＤ－１は、抗体Ａｂ３Ｆ及び式（１）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートであり、Ａｂ３Ｆ－ＣＤ－２は、抗体Ａｂ３Ｆ及び式（２）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートである。
ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害の結果は、ＳＮ３８が連結された式（１）の化合物及び式（２）の化合物の細胞傷害効力がＳＮ３８のものよりも有意に低かったことを明らかにした。式（２）の化合物の細胞傷害効力は、式（１）の化合物のものよりも良好であった（図１５Ａに示されている）。細胞傷害は、抗体Ａｂ２Ｂ、Ａｂ３Ａ及びＡｂ３Ｆでは見られなかった（図１５Ｂに示されている）。式（２）の化合物を含有するＡｂ３Ａ－ＣＤ－２及びＡｂ３Ｆ－ＣＤ－２の細胞傷害効力は、式（１）の化合物を含有するＡｂ３Ａ－ＣＤ－１及びＡｂ３Ｆ－ＣＤ－１のものよりも有意に良好であった（図１５Ｃに示されている）。
実施例１０．ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＣＤＸモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株
１０％ＦＢＳが補充されたライボビッツＬ－１５培地を使用してＣＯ２を用いずに３７℃でＡＴＣＣからのヒト乳房腺癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を培養した。
動物
ＣＲＯ社（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）で特定病原体不在（ＳＰＦ）グレードの動物ケア施設で重度に免疫不全のＭ－ＮＳＧマウスを飼育し、生かした。実験開始時点で６～８週齢のマウスを、標準的な実験用餌及び水を自由に与えて生かした。会社の組織動物ケアガイドラインに従ってすべての動物実験が承認され、実施された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株由来異種移植片（ＣＤＸ）モデルについて、３０％マトリゲルを有する１００μＬのＰＢＳに懸濁された１×１０７個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をＭ－ＮＳＧ雌マウスの右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が８０～２００ｍｍ３に達したときに、マウスを同様の平均腫瘍体積及び体重でグループ化し、表２４に記載の用量でサンプルを腹腔内注射した。グループ化及び投薬の日を０日目として示した。腫瘍体積を研究の継続期間全体にわたって週２回測定した。腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５に従って決定した。
すべての実験のデータをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウエアによって平均値±標準偏差（ＳＤ）として示した。２つの群間の統計的有意性を二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くスチューデントのｔ検定を使用して決定した。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。
結果及び結論
図１６に示されているように、ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＣＤＸモデルにおいて、４つすべてのＡＤＣが、抗体Ａｂ２Ｂと比較してより良好な腫瘍阻害効果を有することを明らかにした。同じ式（１）の化合物または式（２）の化合物とコンジュゲートされた場合、抗体Ａｂ３Ａ及びＡｂ３Ｆは、同様の腫瘍阻害効果を示した。式（１）の化合物を含有するＡｂ３Ａ－ＣＤ－１及びＡｂ３Ｆ－ＣＤ－１は、式（２）の化合物を含有するＡｂ３Ａ－ＣＤ－２及びＡｂ３Ｆ－ＣＤ－２と比較してｉｎ ｖｉｖｏでより良好な腫瘍阻害効果を実証した。そのため、式（１）の化合物を、後のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究においてＡＤＣにおけるモデル薬物－リンカー化合物としてさらに研究した。
実施例１１．二重特異的ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害研究
細胞株構築及び培養条件
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）及びヒトＴＲＯＰ２（ＮＭ＿００２３５３．２）遺伝子配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子及びヒトＴＲＯＰ２遺伝子を安定的に発現するヒト前立腺癌ＰＣ３細胞株を生成した。細胞株をＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２と命名した。１０％ＦＢＳに加えて、１μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１００ｕｇ／ｍｌのハイグロマイシンが補充されたハムＦ１２Ｋ培地を使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）及びヒトＴＲＯＰ２（ＮＭ＿００２３５３．２）遺伝子配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子及びヒトＴＲＯＰ２遺伝子を安定的に発現するヒト大腸腺癌ＨＣＴ１５細胞株を生成した。細胞株をＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２と命名した。１０％ＦＢＳに加えて、１μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１００ｕｇ／ｍｌのハイグロマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０培地を使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
細胞傷害研究
ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって製造業者の指示書に従って決定した。簡潔には、細胞を１００μＬの完全培地中で１ウェル当たり２×１０３細胞で９６ウェルプレートに播種し、次いで３７℃で５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。未処置細胞が対照として機能した。１００μＬの培地中のＡＤＣ、抗体、またはペイロードを１ｕＭの濃度でそれぞれ開始する２倍希釈系列を用いて様々な濃度で二連で添加した。細胞を試験品に５日間曝露した。吸光度を４５０ｎｍでマイクロプレートリーダーによって測定した。細胞生存率（％）を以下の式：サンプル／対照×１００％を使用して計算した。用量－反応曲線を生成し、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を非線形回帰分析によって計算した。
結果及び結論
ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害研究から得られたＩＣ５０値が表２５にまとめられている。薬物の用量反応細胞傷害曲線が図１７及び１８に示されている。Ａｂ３Ａ－ＣＤ－１は、抗体Ａｂ３Ａ及び式（１）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートであり、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１は、Ｆｃ領域でｕＰＡ切断部位を有しない二重特異的抗体Ａｂ５Ｃ及び式（１）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートであり、Ａｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、Ｆｃ領域でｕＰＡ切断部位を含有する二重特異的抗体Ａｂ５Ｄ及び式（１）の薬物－リンカー化合物のコンジュゲートである。
ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害の結果は、ＳＮ３８が連結された式（１）の化合物及び式（２）の化合物の細胞傷害効力がＳＮ３８のものよりも有意に低かったことを明らかにした。式（２）の化合物の細胞傷害効力は、式（１）の化合物のものよりも良好であった。細胞傷害は、抗体Ａｂ２Ｂ、二重特異的抗体Ａｂ５Ｃ及びＡｂ５Ｄでは見られなかった。Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１の細胞傷害効力は、Ａｂ３Ａ－ＣＤ－１のものよりも有意に高かった。Ａｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１よりも良好な細胞傷害効力を有し、二重特異的抗体のＦｃ領域におけるｕＰＡ切断部位がｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害を改善することを示している。
ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害研究から得られたＩＣ５０値が表２６にまとめられている。薬物の用量反応細胞傷害曲線が図１９に示されている。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害結果は、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１の細胞傷害効力が、Ａｂ３Ａ－ＣＤ－１のものよりも有意に高いことを実証している。Ａｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１よりも良好な細胞傷害効力を有し、二重特異的抗体のＦｃ領域におけるｕＰＡ切断部位がｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害を改善することを示している。
実施例１２．ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２マウス同系腫瘍モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）及びヒトＴＲＯＰ２（ＮＭ＿００２３５３．２）遺伝子配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子及びヒトＴＲＯＰ２遺伝子を安定的に発現するネズミ結腸腺癌ＭＣ３８細胞株を生成した。細胞株をＭＣ３８－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２と命名した。１０％ＦＢＳ、１％グルタミン及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンが補充されたＤＭＥＭ培地を使用して３７℃で５％ＣＯ２で細胞を培養した。
動物
ＣＲＯ社（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）で特定病原体不在（ＳＰＦ）グレードの動物ケア施設でヒトＰＤ－Ｌ１を発現するトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス系であるＣ５７ＢＬ／６－ｈＰＤＬ１マウスを飼育し、生かした。実験開始時点で６～８週齢のマウスを、標準的な実験用餌及び水を自由に与えて生かした。会社の組織動物ケアガイドラインに従ってすべての動物実験が承認され、実施された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
同系腫瘍マウスモデルについて、１００μＬのＰＢＳに懸濁された５×１０６個のＭＣ３８－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞をＣ５７ＢＬ／６－ｈＰＤＬ１雌マウスの右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が１００～１５０ｍｍ３に達したときに、マウスを同様の平均腫瘍体積及び体重でグループ化し、表２７に記載の用量でサンプルを静脈内注射した。グループ化及び投薬の日を０日目として示した。腫瘍体積を研究の継続期間全体にわたって週２回測定した。腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５に従って決定した。
すべての実験のデータをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウエアによって平均値±標準偏差（ＳＤ）として示した。２つの群間の統計的有意性を二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くスチューデントのｔ検定を使用して決定した。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。
結果及び結論
ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２マウス同系腫瘍モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究の結果が図２０に示されている。Ａｂ６Ａ－ＡＤＣは、抗ＴＲＯＰ２ ｈＲＳ７抗体及び薬物－リンカーＣＬ２Ａ－ＳＮ３８のコンジュゲートである参照ＡＤＣ薬物であった。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究は、抗体Ａｂ２Ｂ、ＡＤＣ Ａｂ６Ａ ＡＤＣ、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１を含むすべての試験薬物が、ビヒクルよりも良好な腫瘍阻害効果を有することを示した。二重特異的抗体ＡＤＣであるＡｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、抗体Ａｂ２Ｂ及びＡＤＣ Ａｂ６Ａ ＡＤＣよりも良好な腫瘍阻害効果を有する。１週当たり１５ｍｇ／ｋｇを２回または１週当たり３５ｍｇ／ｋｇを１回の異なる投薬レジメンでは、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、研究期間内で腫瘍阻害の有意な差を有しない。
実施例１３．ＰＢＭＣｓ－ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）及びヒトＴＲＯＰ２（ＮＭ＿００２３５３．２）遺伝子配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子及びヒトＴＲＯＰ２遺伝子を安定的に発現するヒト前立腺癌ＰＣ３細胞株を生成した。細胞株をＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２と命名した。１０％ＦＢＳに加えて、１μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１００ｕｇ／ｍｌのハイグロマイシンが補充されたハムＦ１２Ｋ培地を使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
動物
ＣＲＯ社（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）で特定病原体不在（ＳＰＦ）グレードの動物ケア施設で重度に免疫不全のＭ－ＮＳＧマウスを飼育し、生かした。実験開始時点で６～８週齢のマウスを、標準的な実験用餌及び水を自由に与えて生かした。会社の組織動物ケアガイドラインに従ってすべての動物実験が承認され、実施された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
末梢血単核細胞及び細胞株由来異種移植片（ＰＢＭＣｓ－ＣＤＸ）モデルについて、３０％マトリゲルを有する１００μＬのＰＢＳに懸濁された１×１０７個のＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞をＭ－ＮＳＧ雌マウスの右脇腹に皮下注射し、続いて２００μＬのＰＢＳに懸濁された５×１０６個のヒトＰＢＭＣを静脈内に注射した。腫瘍体積が８０～１６０ｍｍ３に達したときに、マウスを同様の平均腫瘍体積及び体重でグループ化し、表２８に記載の用量でサンプルを静脈内注射した。グループ化及び投薬の日を０日目として示した。腫瘍体積を研究の継続期間全体にわたって週２回測定した。腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５に従って決定した。
すべての実験のデータをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウエアによって平均値±標準偏差（ＳＤ）として示した。２つの群間の統計的有意性を二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くスチューデントのｔ検定を使用して決定した。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。
結果及び結論
ＰＢＭＣｓ－ＰＣ３－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究の結果が図２１に示されている。ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究は、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１が抗体Ａｂ２Ｂよりも良好な腫瘍阻害効果を有することを示した。１週当たり１５ｍｇ／ｋｇを２回または１週当たり３５ｍｇ／ｋｇを１回の異なる投薬レジメンでは、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１及びＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１は、研究期間内で腫瘍阻害の有意な差を有しない。しかしながら、３５ｍｇ／ｋｇの投薬レジメンでは、３匹マウス（３／８）がＡｂ５Ｃ－ＣＤ－１の最初の投与後９日目、１１日目、及び１５日目に死亡し、研究された同じ期間内でＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１の投与後に死亡したマウスはなく（０／８）、Ｆｃ領域におけるｕＰＡ切断部位を含有するＡｂ５Ｄ－ＣＤ－１が、Ｆｃ領域におけるｕＰＡ切断部位を有しないＡｂ５Ｃ－ＣＤ－１よりも良好な安全性を有することを示している。
実施例１４．ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）及びヒトＴＲＯＰ２（ＮＭ＿００２３５３．２）遺伝子配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子及びヒトＴＲＯＰ２遺伝子を安定的に発現するヒト大腸腺癌ＨＣＴ１５細胞株を生成した。細胞株をＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２と命名した。１０％ＦＢＳに加えて、１μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１００ｕｇ／ｍｌのハイグロマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０培地を使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
動物
ＣＲＯ社（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）で特定病原体不在（ＳＰＦ）グレードの動物ケア施設で重度に免疫不全のＢ－ＮＤＧマウスを飼育し、生かした。実験開始時点で８～１０週齢のマウスを、標準的な実験用餌及び水を自由に与えて生かした。会社の組織動物ケアガイドラインに従ってすべての動物実験が承認され、実施された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株由来異種移植片（ＣＤＸ）モデルについて、１００μＬのＰＢＳに懸濁された１×１０６個のＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２細胞をＢ－ＮＤＧ雌マウスの右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が８０～１２０ｍｍ３に達したときに、マウスを同様の平均腫瘍体積及び体重でグループ化し、表２９に記載の用量でサンプルを静脈内注射した。グループ化及び投薬の日を０日目として示した。腫瘍体積を研究の継続期間全体にわたって週２回測定した。腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５に従って決定した。
すべての実験のデータをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウエアによって平均値±標準偏差（ＳＤ）として示した。２つの群間の統計的有意性を二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くスチューデントのｔ検定を使用して決定した。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。
結果及び結論
ＨＣＴ１５－ｈＰＤＬ１－ｈＴＲＯＰ２ ＣＤＸモデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究の結果が図２２に示されている。ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究は、Ａｂ５Ｄ－ＣＤ－１が、Ａｂ５Ｃ－ＣＤ－１よりも良好な長期腫瘍阻害効果を有することを示し、二重特異的抗体のＦｃ領域におけるｕＰＡ切断部位がまたｉｎ ｖｉｖｏ効力を改善することを示している。
実施例１５．ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーによるｉｎ ｖｉｔｒｏＴＬＲ９活性化
細胞培養
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９細胞は、ヒトＴＬＲ９及びＮＦ－ｋＢ－誘導性ＳＥＡＰ（分泌胎盤アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を安定的に共発現する操作されたＨＥＫ２９３細胞である。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎアッセイは、６５５ｎｍで光学的密度（ＯＤ）を読み取ることによってＴＬＲ９活性化後のＳＥＡＰ生成の検出を可能とする。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９細胞をＩｎｖｉｖｏＧｅｎから得た。４．５ｇ／ｌグルコース、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌのＮｏｒｍｏｃｉｎ（商標）、１０ｍｇ／ｍｌのブラストサイジン及び１００ｍｇ／ｍｌのＺｅｏｃｉｎ（商標）が補充されたＤＭＥＭ培地において３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿空気中で製造業者の指示書に従って細胞を培養した。
ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９細胞の反応
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９細胞をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎにおいて２×１０５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎは、レポータータンパク質が細胞によって分泌された場合にＳＥＡＰの検出を可能とする細胞培地である。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９細胞をＣｐＧ ＯＤＮ ＣｐＧＢ、ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーＣｐＧＣ、ＣｐＧＤ、ＣｐＧＥ、及びＣｐＧＦで０．６ｍｇ／ｍＬの最終濃度で刺激した。１６時間のインキュベート後、サンプルの光学的密度（ＯＤ）をマイクロプレートリーダーを使用して６５５ｎｍの波長で測定した。データをゼロとして未処置細胞で正規化した。各データ点は、２つの再現の平均及び標準偏差を表していた。
結果及び結論
異なるＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞の反応が図２３に示されている。０．６ｍｇ／ｍｌの同じ濃度で、ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーＣｐＧＥ及びＣｐＧ ＯＤＮ ＣｐＧＢは、同様のｉｎ ｖｉｔｒｏ効力を有し、ＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーＣｐＧＣ、ＣｐＧＤ、及びＣｐＧＦよりも良好であった。
実施例１６．抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）によるｉｎ ｖｉｔｒｏ ＴＬＲ９活性化
細胞株構築及び培養条件
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子を安定的に発現するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９細胞株を生成した。構築した細胞株をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１と命名した。４．５ｇ／ｌグルコース、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、１μｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１０ｕｇ／ｍｌのブラストサイジンが補充されたＤＭＥＭを使用して５％ＣＯ２で３７℃で細胞を培養した。
抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）に対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞の反応
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎにおいて１×１０５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎは、レポータータンパク質が細胞によって分泌された場合にＳＥＡＰの検出を可能とする細胞培地である。次いでＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞を、示されるように異なる濃度のＡｂ３Ａ ＡＯＣで、陽性及び陰性対照としてそれぞれＣｐＧ ＯＤＮ ＣｐＧＢ及び抗体Ａｂ２Ｂで処置した。１８時間のインキュベート後、サンプルの光学的密度（ＯＤ）をマイクロプレートリーダーを使用して６５５ｎｍの波長で測定した。データをゼロとして未処置細胞で正規化した。各データ点は、２つの再現の平均及び標準偏差を表していた。
結果及び結論
ＡＯＣに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９－ｈＰＤＬ１細胞の反応が図２４に示されている。Ａｂ３Ａ ＡＯＣは、抗体Ａｂ３ＡとＣｐＧ ＯＤＮ－リンカーＣｐＧＥとのコンジュゲートである。ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＴＬＲ９活性化研究の結果は、Ａｂ３Ａ ＡＯＣが、６μＭの同じ濃度で、抗体Ａｂ２Ｂ及びＣｐＧ ＯＤＮ ＣｐＧＢそれぞれよりも良好な効力を有することを明らかにしている。
実施例１７．ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１マウス同系腫瘍モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
細胞株
ヒトＰＤＬ１遺伝子（ＮＭ＿０１４１４３）配列を有するレンチウイルスプラスミドを使用して外因性ヒトＰＤＬ１遺伝子を安定的に発現するネズミ結腸腺癌ＭＣ３８細胞株を生成した。細胞株をＭＣ３８－ｈＰＤＬ１と命名した。１０％ＦＢＳ、１％グルタミン及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンが補充されたＤＭＥＭ培地を使用して３７℃で５％ＣＯ２で細胞を培養した。
動物
ＣＲＯ社（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）で特定病原体不在（ＳＰＦ）グレードの動物ケア施設でヒトＰＤ－Ｌ１を発現するトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス系であるＣ５７ＢＬ／６－ｈＰＤＬ１マウスを飼育し、生かした。実験開始時点で６～８週齢のマウスを、標準的な実験用餌及び水を自由に与えて生かした。会社の組織動物ケアガイドラインに従ってすべての動物実験が承認され、実施された。
ｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究
同系腫瘍マウスモデルについて、１００μＬのＰＢＳに懸濁された１×１０６個のＭＣ３８－ｈＰＤＬ１細胞をＣ５７ＢＬ／６－ｈＰＤＬ１雌マウスの右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が１００～１５０ｍｍ３に達したときに、マウスを同様の平均腫瘍体積及び体重でグループ化し、表３０に記載の用量でサンプルを静脈内注射した。グループ化及び投薬の日を０日目として示した。腫瘍体積を研究の継続期間全体にわたって週２回測定した。腫瘍体積を式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５に従って決定した。
すべての実験のデータをＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウエアによって平均値±標準偏差（ＳＤ）として示した。２つの群間の統計的有意性を二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くスチューデントのｔ検定を使用して決定した。０．０５未満のｐ値を統計的に有意とみなした。
結果及び結論
ＭＣ３８－ｈＰＤＬ１マウス同系腫瘍モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ治療的有効性研究の結果が図２５に示されている。抗体Ａｂ２Ｂ及びＡＯＣＡｂ３Ａ ＡＯＣは、ビヒクルと比較してより良好な腫瘍阻害効果を実証した。ＡＯＣ Ａｂ３Ａ ＡＯＣは、抗体Ａｂ２Ｂと比較してより良好な腫瘍阻害を示した。

Claims (58)

  1. 標的化部位及びエフェクター分子を含む標的化コンジュゲートであって、前記エフェクター分子は、コンジュゲーション部位を介して前記標的化部位にコンジュゲートされており、前記エフェクター分子は、切断を介して前記標的化コンジュゲートから放出され得る、前記標的化コンジュゲート。
  2. 前記標的化コンジュゲートは、以下の構造：

    （式中、
    Ａ１は、第１の標的化部位であり；
    Ａ２は、第２の標的化部位であり；
    Ｐ１は、第１の切断部位であり；
    Ｐ２は、第２の切断部位であり；
    Ｐ３は、第３の切断部位であり；
    Ｃは、前記コンジュゲーション部位であり
    Ｌは、リンカーであり；
    Ｄは、前記エフェクター分子であり；
    ｘ＝０または１であり；
    ｙ＝０または１であり；
    ｚ＝０または１であり；
    ｖ＝０または１であり；
    ｕ＝０または１であり；
    ａ＝１～２０であり；
    ｂ＝１～２０である）
    を含む、請求項１に記載の標的化コンジュゲート。
  3. 前記標的化部位は、標的化ペプチド、または抗体もしくはその抗原結合断片を含む、請求項１または２に記載の標的化コンジュゲート。
  4. 前記抗体もしくはその抗原結合断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体、ダイアボディ、ナノボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びｄｓＦｖからなる群から選択される、請求項３に記載の標的化コンジュゲート。
  5. 前記標的化部位は、抗体－ペプチド融合タンパク質を含む、請求項３～４に記載の標的化コンジュゲート。
  6. 前記標的化部位は、標的部位で標的分子に特異的に結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  7. 前記切断は、前記標的化部位のための標的部位での条件によって引き起こされる、請求項１～６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  8. 前記標的部位での条件は、プロテアーゼ、ｐＨ変化、酸化還元変化、低酸素、酸化ストレス、温熱、及び細胞外ＡＴＰ濃度からなる群から選択される、請求項７に記載の標的化コンジュゲート。
  9. 前記標的部位は、疾患の部位である、請求項７または８に記載の標的化コンジュゲート。
  10. 前記疾患は、腫瘍である、請求項９に記載の標的化コンジュゲート。
  11. 前記切断は、プロテアーゼによる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  12. 前記プロテアーゼは、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、レグマイン、プラスミン、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＰＲＳＳ６、ＭＭＰｌ、ＭＭＰ２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－１４、ＭＴ１－ＭＭＰ、カテプシンＤ、カテプシンＫ、カテプシンＳ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭＴＳ、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４、ＴＡＣＥ、ヒト好中球エラスターゼ、ベータ－セクレターゼ、線維芽細胞関連タンパク質、マトリプターゼ、ＰＳＭＡ及びＰＳＡからなる群から選択される、請求項１１に記載の標的化コンジュゲート。
  13. 前記エフェクター分子は、治療剤、オリゴヌクレオチド、及び検出可能な標識からなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  14. 前記エフェクター分子は、治療剤である、請求項１３に記載の標的化コンジュゲート。
  15. 前記治療剤は、タンパク質ベースの薬物、小分子薬物、細胞傷害剤、毒素、免疫調節剤、抗炎症剤、抗感染症剤、及びエピジェネティック調節剤からなる群から選択される、請求項１４に記載の標的化コンジュゲート。
  16. 前記エフェクター分子は、オリゴヌクレオチドである、請求項１３に記載の標的化コンジュゲート。
  17. 前記オリゴヌクレオチドは、約２～約１００ヌクレオチド長である、請求項１６に記載の標的化コンジュゲート。
  18. 前記オリゴヌクレオチドは、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びＣｐＧオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１６または１７のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  19. 前記オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである、請求項１８に記載の標的化コンジュゲート。
  20. 前記標的化コンジュゲートは、５’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮの構造（式中、スペーサーは、（ＣＨ２）ｎ－（ＰＥＧ）ｍであり、Ｐは、切断部位であり、ｈ、ｎ及びｍは、整数であり、ｈ＝０または１であり、ｎ≧１であり、ｍ≧０である）を有する部位を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  21. 前記標的化コンジュゲートは、３’アミノ修飾体－スペーサー－Ｐｈ－ＣｐＧ ＯＤＮの構造（式中、スペーサーは、（ＣＨ２）ｎ－（ＰＥＧ）ｍであり、Ｐは、切断部位であり、ｈ、ｎ及びｍは、整数であり、ｈ＝０または１であり、ｎ≧１であり、ｍ≧０である）を有する部位を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  22. 前記標的化コンジュゲートは、２つ以上のエフェクター分子を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  23. ｚは、０である、請求項２～２２のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  24. ｚは、１である、請求項２～２２のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  25. ｙは、０である、請求項２～２４のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  26. ｙは、１である、請求項２～２４のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  27. ｘは、０である、請求項２～２６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  28. ｘは、１である、請求項２～２６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  29. ｕは、０である、請求項２～２８のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  30. ｕは、１である、請求項２～２８のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  31. ｖは、０である、請求項２～３０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  32. ｖは、１である、請求項２～３０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  33. ａは、１～２０である、請求項２～３２のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  34. ｂは、１～２０である、請求項２～３３のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  35. ａは、２～１０である、請求項２～３４のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  36. ｂは、２～１０である、請求項２～３５のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  37. Ａ１は、第１の標的分子を認識する第１の標的化ペプチド、または第１の抗体もしくはその抗原結合断片であり、Ａ２は、第２の標的分子を認識する第２の標的化ペプチド、または第２の抗体もしくはその抗原結合断片である、請求項２～３６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  38. 前記第１の標的分子及び前記第２の標的分子は、同じである、請求項３７に記載の標的化コンジュゲート。
  39. 前記第１の標的分子及び前記第２の標的分子は、異なる、請求項３７に記載の標的化コンジュゲート。
  40. Ａ１は、ＣのＮ末端に接続されており、Ａ２は、ＣのＣ末端に接続されている、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  41. 前記コンジュゲーション部位は、共有結合性コンジュゲーション部位である、請求項１～４０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  42. 前記コンジュゲーション部位は、トランスグルタミナーゼコンジュゲーション部位である、請求項４１に記載の標的化コンジュゲート。
  43. 前記コンジュゲーション部位は、互いにタンデムで融合された複数のグルタミン含有タグを含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  44. 前記コンジュゲーション部位は、非共有結合性コンジュゲーションである、請求項１～４０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  45. 前記コンジュゲーション部位は、オリゴヌクレオチド結合ポリペプチドのための結合部位である、請求項４３に記載の標的化コンジュゲート。
  46. Ｌは、式：ＳＨ２－スペーサー、ＭＡＬ－スペーサー、ＮＨ２－スペーサー、またはＯｓｕ－スペーサーによって表される、請求項２～４５のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  47. Ｌは、式（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－ＶＣ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋまたは（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、ｎ≧１であり、ｍ≧２であり、ｋは、０または１である）によって表される、請求項２～４６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  48. Ｌは、式：（Ｇｌｙ）ｎ－（ＰＥＧ）ｍ－Ｐ－ＰＡＢ－（ＤＭＡＥ）ｋ（式中、ｎ、ｍ及びｋは、整数であり、≧１であり、ｍ≧２であり、ｋは、０または１であり、Ｐは、切断部位である）によって表される、請求項２～４６のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲート。
  49. 前記治療剤は、式（１）～（７）の化合物からなる群から選択される、請求項１４に記載の標的化コンジュゲート。
  50. 式（１）～（７）の化合物からなる群から選択される式を有する治療剤にコンジュゲートされた標的化部位を含む標的化コンジュゲート。
  51. 請求項１～５０のいずれか１項に記載の複数の標的化コンジュゲートを含む組成物。
  52. 前記組成物における前記エフェクター分子及び前記標的化部位の平均比は、少なくとも約１：１である、請求項５１に記載の組成物。
  53. 前記組成物における前記標的化コンジュゲートの少なくとも２つは、異なる数のエフェクター分子を含む、請求項５１または５２に記載の組成物。
  54. 前記エフェクター分子は、治療剤またはオリゴヌクレオチドであり、前記組成物は、薬学的組成物である、請求項５１～５３のいずれか１項に記載の組成物。
  55. 個体における疾患を処置する方法であって、有効量の請求項５４に記載の薬学的組成物を前記個体に投与することを含む、前記方法。
  56. 前記エフェクター分子は、検出可能な標識であり、前記組成物は、診断組成物である、請求項５１～５３のいずれか１項に記載の組成物。
  57. 個体における疾患を診断する方法であって、有効量の請求項５６に記載の診断組成物を前記個体に投与することを含み、前記検出可能な標識の検出は、前記疾患の存在を示す、前記方法。
  58. 請求項１～５０のいずれか１項に記載の標的化コンジュゲートを作製する方法であって、前記方法は、前記エフェクター分子を前記標的化部位にコンジュゲートすることを含む、前記方法。
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