JP2024056823A - 審美的用途のための美容用タンパク質をコードする組換え核酸 - Google Patents

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Abstract

【課題】皮膚老化の根底にある構造変化、具体的には、コラーゲンの損傷または喪失に対処した、皮膚ＥＣＭ成分（例えば、ヒトコラーゲン）を補充、強化、または置き換えるための組成物、およびそれらの使用法を提供する。【解決手段】本開示は、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸、この組換え核酸を含むウイルス、この組換え核酸及び／またはウイルスを含む組成物（例えば、美容用配合物）、それらの使用法、ならびにそれらの製品またはキットを提供する。【選択図】図２３Ｂ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年４月２７日に出願された米国仮出願第６２／６６３，４７６号の優先権利益を主張する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形態（ＣＲＦ）（ファイル名：７６１３４２０００６４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１９年４月２６日、サイズ：４３７ＫＢ）。
発明の分野
本開示は、部分的には、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸、組換え核酸を含むウイルス、組換え核酸及び／またはウイルスを含む組成物（例えば、美容用配合物）、それらの使用法、ならびにそれらの製品またはキットに関する。
背景
皮膚は、人体の全ての臓器と同様に、時間の経過とともに連続的かつ多くの場合累積的な変化を受ける。皮膚の老化は、皮膚内の固有の変化、皮膚に作用する重力及び顔面筋肉の影響、軟組織の喪失またはシフト、ならびに組織弾性の喪失を含む多くの要因の結果として生じる。興味深いことに、皮膚の「老化した」表現型は、環境要因、最も顕著には、（例えば、太陽からの）紫外線照射への長期曝露によって加速され得る。臨床的には、皮膚の老化した表現型は、しわになっている、たるんでいる、及び／または一般的にその若い対応物よりも弾性及び弾力性が低いといわれ得るが、この表現型内の変動は、自然な経時的老化と光による老化との間に存在する。
皮膚細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は、皮膚の大部分を構成し、強度及び弾力性の両方を付与する。皮膚に支持を提供する結合組織の主要成分であるコラーゲンは、人が加齢するにつれて減少する。老化した皮膚では、コラーゲン原線維は高レベルの分解及び断片化を示し、減少した速度で皮膚線維芽細胞によって補充される。これらの分解及び断片化されたコラーゲン束は緩くなり、強度を失い（皮膚ＥＣＭの構造組織を破壊する）、皮膚の「老化」兆候と密接なつながりがある。
ヒトの皮膚の外観を改善するための多数のスキンケア製品が開発されている。しわ及び皮膚のひだは、一般に、審美的顔面フィラーの皮膚及び皮下注射で治療されるが、かかる表面アプローチは、皮膚老化の根底にある構造変化、具体的には、コラーゲンの損傷または喪失に対処しない。したがって、皮膚老化の生理学的作用への対抗またはその逆転を望む個体における、皮膚ＥＣＭ成分（例えば、ヒトコラーゲン）を補充、強化、または置き換えるための代替の戦略が明らかに必要とされている。
特許出願、特許刊行物、非特許文献、及びＮＣＢＩ／ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受入番号を含む本明細書に引用される全ての参照文献は、個々の参照文献が各々参照により組み込まれると具体的かつ個別に示されるかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
概要
これら及び他の要求を満たすために、審美的／美容的用途（例えば、しわの治療）のためのウイルス（例えば、ヘルペスウイルス）、組成物、配合物、薬剤、及び／または方法における使用のための１つ以上の美容用タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、組換えヘルペスウイルスゲノム）が本明細書に提供される。本発明者らは、本明細書に記載の組換え弱毒化ウイルスが、（１）ヒト表皮／真皮細胞に効果的に形質導入することができ、（２）コードされた外因性ヒトコラーゲン（ｍＲＮＡ及びタンパク質）を首尾よく発現させることができること、次いで、このタンパク質が皮膚等価物器官型培養物中の適切な領域に局在することができることを示した（例えば、実施例２を参照のこと）。さらに、本発明者らは、本明細書に記載のウイルスが著しい宿主細胞毒性なしに局所的または皮内のいずれかで首尾よく投与され得ることを示し、これらのウイルスから発現されたヒトコラーゲンが皮膚への観察可能な損傷なしにインビボ投与後に皮膚ＥＣＭの適切な領域に局在することを可能にした（例えば、実施例３及び実施例７を参照のこと）。加えて、本発明者らは、ヒトコラーゲンを発現させるウイルスを構築するために複数の異なるＨＳＶ骨格を使用することができること（例えば、実施例２を参照のこと）、単一の組換えゲノムから２つ以上のヒトコラーゲンタンパク質を首尾よく発現させるために複数の戦略を用いることができること（例えば、実施例５を参照のこと）、及び経時的なまたは紫外線により誘発された皮膚老化の複数の関連するインビトロ及びインビボモデルにおいて候補ウイルスがヒトコラーゲンタンパク質を首尾よく発現させることができること（例えば、実施例６及び実施例７を参照のこと）を示した。さらに、本発明者らは、本明細書に記載のウイルスが、インビトロ及びインビボの両方で他の美容用タンパク質（例えば、ヒトラミニン）を発現させるように首尾よく操作され得、これらのタンパク質が皮膚ＥＣＭの適切な領域に局在する（例えば、実施例８を参照のこと）ことを示した。理論に拘束されることを望むことなく、本明細書に記載のデータは、本開示の組換え核酸及び／またはウイルスが、美容用タンパク質（例えば、ヒトコラーゲン１及びヒトコラーゲン３等のヒトコラーゲンタンパク質）を送達するための新規の手段、具体的には、審美的用途において天然のヒト皮膚ＥＣＭタンパク質を補充または置き換えるための（例えば、年齢または光により誘発されたしわの外観を減少させるための）新規の手段を構成し得るという強力な証拠を提供する。
したがって、本開示のある特定の態様は、第１の美容用タンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換えヘルペスウイルスゲノムに関する。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、第１のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、複製欠損である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム、組換え水痘帯状疱疹ウイルスゲノム、組換えヒトサイトメガロウイルスゲノム、組換えヘルペスウイルス６Ａゲノム、組換えヘルペスウイルス６Ｂゲノム、組換えヘルペスウイルス７ゲノム、組換えカポジ肉腫関連ヘルペスウイルスゲノム、及びそれらの任意の誘導体から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）ゲノム、組換え単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ－２）ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）ゲノムである。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、不活性化変異は、単純ヘルペスウイルス遺伝子に存在する。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、単純ヘルペスウイルス遺伝子のコード配列の欠失である。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルス遺伝子は、感染細胞タンパク質（ＩＣＰ）０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）４１、及びＵＬ５５から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、連結領域に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、連結領域の欠失を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方内に第１のポリヌクレオチドを含む。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、第１のコラーゲンタンパク質、第１のフィブロネクチンタンパク質、第１のエラスチンタンパク質、第１のルミカンタンパク質、第１のビトロネクチンタンパク質、第１のビトロネクチン受容体タンパク質、第１のラミニンタンパク質、第１の神経調節タンパク質、及び第１のフィブリリンタンパク質から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、配列番号１５～２１及び５３～６４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、ラミニンタンパク質、フィブリリンタンパク質等）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質、ヒトエラスチンタンパク質、ヒトフィブロネクチンタンパク質、またはヒトラミニンタンパク質）である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、ヒトコラーゲンタンパク質である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、コラーゲンアルファ－１（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ３）、コラーゲンアルファ－１（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－３）、コラーゲンアルファ－４（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－４）、コラーゲンアルファ－５（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－５）、コラーゲンアルファ－６（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－６）、コラーゲンアルファ－１（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－２）、コラーゲンアルファ－３（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－３）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－３）、コラーゲンアルファ－４（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－４）、コラーゲンアルファ－５（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－５）、コラーゲンアルファ－６（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－６）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ８）、コラーゲンアルファ－１（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－３）、コラーゲンアルファ－１（Ｘ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－１）、コラーゲンアルファ－２（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１７）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１８）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１９）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２１）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２７）、及びコラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２８）から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、及びＣＯＬ１７から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ３である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、ヒトＣＯＬ３である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のコラーゲンタンパク質は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）ではない。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質から本質的になる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、（ａ）第１の美容用タンパク質、（ｂ）さらなる美容用タンパク質、及び（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、さらなる美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、エラスチンタンパク質、ルミカンタンパク質、ビトロネクチンタンパク質、ビトロネクチン受容体タンパク質、ラミニンタンパク質、神経調節タンパク質、及びフィブリリンタンパク質から選択される。いくつかの実施形態では、さらなる美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、ラミニンタンパク質、フィブリリンタンパク質等）である。いくつかの実施形態では、さらなる美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質、ヒトエラスチンタンパク質、ヒトフィブロネクチンタンパク質、またはヒトラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、さらなるコラーゲンタンパク質（例えば、さらなるヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるコラーゲンタンパク質（例えば、さらなるヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質は異なる。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質はＣＯＬ１－１（例えば、ヒトＣＯＬ１－１）であり、さらなる美容用タンパク質はＣＯＬ１－２（例えば、ヒトＣＯＬ１－２）である。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、切断可能なリンカーポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２８～３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｂ）追加の美容用タンパク質をコードする第２のＯＲＦ、及び（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、追加の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、エラスチンタンパク質、ルミカンタンパク質、ビトロネクチンタンパク質、ビトロネクチン受容体タンパク質、ラミニンタンパク質、神経調節タンパク質、及びフィブリリンタンパク質から選択される。いくつかの実施形態では、追加の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、ラミニンタンパク質、フィブリリンタンパク質等）である。いくつかの実施形態では、追加の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質、ヒトエラスチンタンパク質、ヒトフィブロネクチンタンパク質、またはヒトラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、追加のコラーゲンタンパク質（例えば、追加のヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、追加のコラーゲンタンパク質（例えば、追加のヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と追加の美容用タンパク質は異なる。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質はＣＯＬ１－１（例えば、ヒトＣＯＬ１－１）であり、追加の美容用タンパク質はＣＯＬ１－２（例えば、ヒトＣＯＬ１－２）である。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳをコードする核酸配列は、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、第２の美容用タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、エラスチンタンパク質、ルミカンタンパク質、ビトロネクチンタンパク質、ビトロネクチン受容体タンパク質、ラミニンタンパク質、神経調節タンパク質、及びフィブリリンタンパク質から選択される。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、ラミニンタンパク質、フィブリリンタンパク質等）である。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質、エラスチンタンパク質、フィブロネクチンタンパク質、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質、ヒトエラスチンタンパク質、ヒトフィブロネクチンタンパク質、またはヒトラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、第２のコラーゲンタンパク質（例えば、第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、第２のコラーゲンタンパク質（例えば、第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と第２の美容用タンパク質は異なる。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質はＣＯＬ１－１（例えば、ヒトＣＯＬ１－１）であり、第２の美容用タンパク質はＣＯＬ１－２（例えば、ヒトＣＯＬ１－２）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質はＣＯＬ１－１（例えば、ヒトＣＯＬ１－１）であり、第２の美容用タンパク質はＣＯＬ３（例えば、ヒトＣＯＬ３）である。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、標的細胞に導入された場合、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムと比較して減少した細胞毒性を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、表皮細胞及び／または真皮細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、線維芽細胞である。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノムのうちのいずれかを含むヘルペスウイルスに関する。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、弱毒化されている。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、対応する野生型ヘルペスウイルスと比較して減少した細胞毒性を有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス６Ａ、ヘルペスウイルス６Ｂ、ヘルペスウイルス７、及びカポジ肉腫関連ヘルペスウイルスから選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ－２）、またはそれらの任意の誘導体である。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）である。
本開示の他の態様は、（ａ）本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノムのうちのいずれか及び／または本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれかと、（ｂ）賦形剤と、を含む、組成物に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、無菌である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、局所、経皮、皮下、皮内、経口、鼻腔内、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、吸入、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、腹腔内、経粘膜、硝子体内、網膜下、関節内、関節周囲、局部、または皮膚上投与に好適である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、皮内投与に好適である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、表面注射に好適である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、美容用組成物である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、スキンケア製品である。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノムのうちのいずれか及び／または本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれかの、薬剤（例えば、審美的効能のため）としての使用に関する。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノムのうちのいずれか及び／または本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれかの、療法（例えば、審美的または美容的治療）としての使用に関する。
本開示の他の態様は、皮膚科学的老化の１つ以上の兆候または症状の治療に有用な薬剤の製造における、本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノムのうちのいずれか及び／または本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれかの使用に関する。
本開示の他の態様は、対象における１つ以上の皮膚細胞外マトリックスタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。
本開示の他の態様は、対象における１つ以上のコラーゲンタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコラーゲンタンパク質は、コラーゲン３である。いくつかの実施形態では、内因性コラーゲン３レベルは、経時的老化または光による老化の結果として低下する。
本開示の他の態様は、対象の軟組織を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、対象の軟組織に注射される。
本開示の他の態様は、皮膚の状態、質、及び／または外観の改善を必要とする対象における皮膚の状態、質、及び／または外観を改善する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、日光による損傷もしくは他の紫外線曝露、粗いきめ、皮膚のたるみ、しわ、またはそれらの任意の組み合わせの、１つ以上の部位に投与される。
本開示の他の態様は、皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観の減少を必要とする対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、皮膚における１つ以上の表面陥凹は、鼻唇溝、目尻のしわ、眉間しわ線、額のしわ、瘢痕、眉間のしわ、眉毛下垂、眼頬溝（ｔｅａｒ ｔｒｏｕｇｈ）、鼻頬線（ｎａｓｏｊｕｇａｌ ｌｉｎｅ）、バニーライン、頬／顔面中央下垂、マリオネットライン、ポピーえくぼ形成（ｐｏｐｐｙ ｄｉｍｐｌｉｎｇ）、笑線、笑いじわ、顎のひだ、首のしわ、広頸筋帯、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
本開示の他の態様は、皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つの増加及び／または改善を必要とする対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを増加させる及び／または改善する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線光への曝露により損傷している。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
本開示の他の態様は、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減を必要とする対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する方法であって、対象に、本明細書に記載のヘルペスウイルスのうちのいずれか及び／または本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減は、（ａ）細かい線及び／またはしわの治療、減少、及び／または予防、（ｂ）皮膚の毛穴径の減少、（ｃ）皮膚の厚み、ふっくら感、及び／または張り感の改善、（ｄ）皮膚の滑らかさ、しなやかさ、及び／または柔らかさの改善、（ｅ）皮膚の色調、輝き、及び／または透明度の改善、（ｆ）プロコラーゲン及び／またはコラーゲン産生の改善、（ｇ）皮膚のきめの改善及び／または再度きめを整えること（ｒｅｔｅｘｔｕｒｉｚａｔｉｏｎ）の促進、（ｈ）皮膚輪郭の外観の改善、（ｉ）皮膚のつや及び／または明るさの復元、（ｊ）老化及び／または閉経により減退した皮膚外観の改善、（ｋ）皮膚保湿の改善、（ｌ）皮膚の弾性及び／または弾力性の増加、（ｍ）治療、軽減、及び／または予防もしくは皮膚のたるみ、（ｎ）皮膚の締まりの改善、（ｏ）色素斑、斑のある皮膚、及び／または瘢痕（座瘡瘢痕等）の減少、（ｐ）光回折または反射による皮膚の光学的特性の改善、または（ｑ）それらの任意の組み合わせによって示される。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスまたは組成物は、対象に、局所的に、経皮的に、皮下的に、皮膚上に、皮内に、経口的に、舌下に、口腔内に、直腸に、膣に、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、骨内に、心臓内に、腹腔内に、経粘膜的に、硝子体内に、網膜下に、関節内に、関節周囲に、局部的に、または吸入を介して投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスまたは組成物は、対象に皮内投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスまたは組成物は、表面注射によって投与される。
本開示の他の態様は、組換え核酸を含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であって、組換え核酸が、第１のヒトコラーゲンタンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む、前記ＨＳＶと、賦形剤と、を含む、組成物に関する。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ＨＳＶは、複製欠損である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ＨＳＶは、複製能を有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ＨＳＶは、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、またはそれらの任意の誘導体である。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、単純ヘルペスウイルスアンプリコンである。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスアンプリコンは、ＨＳＶ－１アンプリコンまたはＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンである。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンは、ＨＳＶ／ＡＡＶハイブリッドアンプリコン、ＨＳＶ／ＥＢＶハイブリッドアンプリコン、及びＨＳＶ／ＥＢＶ／ＲＶハイブリッドアンプリコン、またはＨＳＶ／スリーピングビューティーハイブリッドアンプリコンである。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換えＨＳＶ－１ゲノム、組換えＨＳＶ－２ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルス遺伝子は、感染細胞タンパク質（ＩＣＰ）０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）４１、及びＵＬ５５からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、不活性化変異は、遺伝子（複数可）のコード配列の欠失である。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ＨＳＶは、野生型単純ヘルペスウイルスと比較して減少した細胞毒性を有する。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、コラーゲンアルファ－１（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ３）、コラーゲンアルファ－１（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－３）、コラーゲンアルファ－４（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－４）、コラーゲンアルファ－５（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－５）、コラーゲンアルファ－６（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－６）、コラーゲンアルファ－１（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－２）、コラーゲンアルファ－３（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－３）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－３）、コラーゲンアルファ－４（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－４）、コラーゲンアルファ－５（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－５）、コラーゲンアルファ－６（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－６）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ８）、コラーゲンアルファ－１（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－３）、コラーゲンアルファ－１（Ｘ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－１）、コラーゲンアルファ－２（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１７）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１８）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１９）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２１）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２７）、及びコラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２８）から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、（ａ）第１のヒトコラーゲンタンパク質、（ｂ）さらなるヒトコラーゲンタンパク質、及び（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、切断可能なリンカーポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２８～３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｂ）追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のＯＲＦ、及び（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳをコードする核酸配列は、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と第２のヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムであり、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含み、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含み、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、皮膚（全身または局所）、経皮、皮下、及び／または皮内投与のために適合される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースゲルを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、皮内投与のために適合される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、リン酸緩衝液を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、グリセロールを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、脂質担体を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、賦形剤は、ナノ粒子担体を含む。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、美容用組成物である。いくつかの実施形態では、美容用組成物は、スキンケア製品である。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかと、組成物の投与に関する指示と、を含む、キットに関する。
本開示の他の態様は、対象における１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。
本開示の他の態様は、対象の軟組織を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、対象の軟組織に注射される。
本開示の他の態様は、皮膚の質、状態、及び／または外観の改善を必要とする対象における皮膚の質、状態、及び／または外観を改善する方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、状態は、日光による損傷、老化、紫外線曝露、粗いきめ、皮膚のたるみ、しわ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
本開示の他の態様は、皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観の減少を必要とする対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、組成物の投与は、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる。いくつかの実施形態では、対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観は、組成物の投与前の対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観と比較して、組成物の投与後に減少する。
本開示の他の態様は、皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つの増加及び／または改善を必要とする対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを増加させる及び／または改善する方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、組成物の投与後少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、増加した及び／または改善されたきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを維持する。いくつかの実施形態では、対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つが、組成物の投与前の対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りと比較して、組成物の投与後に増加する及び／または改善される。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線光への曝露により損傷している。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
本開示の他の態様は、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減を必要とする対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する方法であって、対象に、本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減は、（ａ）小じわ及び／またはしわの治療、減少、及び／または予防、（ｂ）皮膚の毛穴径の減少、（ｃ）皮膚の厚み、ふっくら感、及び／または張り感の改善、（ｄ）皮膚の滑らかさ、しなやかさ、及び／または柔らかさの改善、（ｅ）皮膚の色調、輝き、及び／または透明度の改善、（ｆ）プロコラーゲン及び／またはコラーゲン産生の改善、（ｇ）皮膚のきめの改善及び／または再度きめを整えることの促進、（ｈ）皮膚輪郭の外観の改善、（ｉ）皮膚のつや及び／または明るさの復元、（ｊ）老化及び／または閉経により減退した皮膚外観の改善、（ｋ）皮膚保湿の改善、（ｌ）皮膚の弾性及び／または弾力性の増加、（ｍ）治療、軽減、及び／または予防もしくは皮膚のたるみ、（ｎ）皮膚の締まりの改善、（ｏ）色素斑、斑のある皮膚、及び／または座瘡瘢痕の減少、（ｐ）光回折または反射による皮膚の光学的特性の改善、ならびに（ｑ）それらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候は、組成物の投与前の対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候と比較して、組成物の投与後に軽減される。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、対象に皮膚（全身または局所）、経皮、皮下、または皮内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、表面注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象に皮内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象に１回投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象に少なくとも２回投与される。いくつかの実施形態では、投与間で、少なくとも約１５日、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約９０日、または少なくとも約１２０日が経過している。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組成物は、対象の１つ以上の罹患領域及び／または非罹患領域に投与される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、その皮膚は、投与前に擦過される。
本開示の他の態様は、第１のヒトコラーゲンタンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸であって、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである、前記組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換えＨＳＶ－１ゲノム、組換えＨＳＶ－２ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルス遺伝子は、感染細胞タンパク質（ＩＣＰ）０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）４１、及びＵＬ５５からなる群から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、不活性化変異は、遺伝子（複数可）のコード配列の欠失である。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、ＨＳＶは、野生型単純ヘルペスウイルスと比較して減少した細胞毒性を有する。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、（ａ）第１のヒトコラーゲンタンパク質、（ｂ）さらなるヒトコラーゲンタンパク質、及び（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、切断可能なリンカーポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２８～３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、（ａ）第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｂ）追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のＯＲＦ、及び（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳをコードする核酸配列は、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする核酸配列は、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と第２のヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
前述の実施形態のうちのいずれかと組み合わせられ得るいくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含み、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に第１のポリヌクレオチドを含み、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第２のポリヌクレオチドを含む。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の組換え核酸のうちのいずれかを含む宿主細胞に関する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト細胞または非ヒト霊長類細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、補完宿主細胞である。
本開示の他の態様は、単純ヘルペスウイルスを収集する方法であって、（ａ）補完宿主細胞を本明細書に記載の組換え核酸のうちのいずれかと接触させることと、（ｂ）補完宿主細胞によって作製された単純ヘルペスウイルスを収集することと、を含む、前記方法に関する。
本開示の他の態様は、単純ヘルペスウイルスを収集する方法であって、（ａ）本明細書に記載の組換え核酸のうちのいずれかを含む宿主細胞を培養することと、（ｂ）宿主細胞によって作製された単純ヘルペスウイルスを収集することと、を含む、前記方法に関する。
[本発明1001]
第1の美容用タンパク質を含む第1のポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチドを含む、組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1002]
前記第1のポリヌクレオチドの2つ以上のコピーを含む、本発明1001の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1003]
複製能を有する、本発明1001または本発明1002の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1004]
複製欠損である、本発明1001または本発明1002の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1005]
組換え単純ヘルペスウイルスゲノム、組換え水痘帯状疱疹ウイルスゲノム、組換えヒトサイトメガロウイルスゲノム、組換えヘルペスウイルス6Ａゲノム、組換えヘルペスウイルス6Ｂゲノム、組換えヘルペスウイルス7ゲノム、組換えカポジ肉腫関連ヘルペスウイルスゲノム、及びそれらの任意の誘導体からなる群から選択される、本発明1001～1004のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1006]
組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである、本発明1001～1005のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1007]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、組換え単純ヘルペスウイルス1型（ＨＳＶ－1）ゲノム、組換え単純ヘルペスウイルス2型（ＨＳＶ－2）ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である、本発明1006の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1008]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが組換え単純ヘルペスウイルス1型（ＨＳＶ－1）ゲノムである、本発明1006または本発明1007の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1009]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが不活性化変異を含む、本発明1006～1008のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1010]
前記不活性化変異が単純ヘルペスウイルス遺伝子に存在する、本発明1009の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1011]
前記不活性化変異が、前記単純ヘルペスウイルス遺伝子のコード配列の欠失である、本発明1010の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1012]
前記単純ヘルペスウイルス遺伝子が、感染細胞タンパク質（ＩＣＰ）0、ＩＣＰ4、ＩＣＰ22、ＩＣＰ27、ＩＣＰ47、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）41、及びＵＬ55からなる群から選択される、本発明1010または本発明1011の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1013]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ4遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む、本発明1012の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1014]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ22遺伝子に不活性化変異を含む、本発明1012または本発明1013の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1015]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ41遺伝子に不活性化変異を含む、本発明1012～1014のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1016]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ0遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む、本発明1012～1015のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1017]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ27遺伝子に不活性化変異を含む、本発明1012～1016のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1018]
前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ4ウイルス遺伝子座の一方または両方内に前記第1のポリヌクレオチドを含む、本発明1006～1017のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1019]
前記第1の美容用タンパク質が、第1のコラーゲンタンパク質、第1のフィブロネクチンタンパク質、第1のエラスチンタンパク質、第1のルミカンタンパク質、第1のビトロネクチンタンパク質、第1のビトロネクチン受容体タンパク質、第1のラミニンタンパク質、第1の神経調節タンパク質、及び第1のフィブリリンタンパク質からなる群から選択される、本発明1001～1018のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1020]
前記第1の美容用タンパク質が、配列番号15～21及び53～64からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1001～1019のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1021]
前記第1の美容用タンパク質が構造的細胞外マトリックスタンパク質である、本発明1001～1020のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1022]
前記第1のコラーゲンタンパク質がヒトコラーゲンタンパク質である、本発明1019～1021のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1023]
前記第1のコラーゲンタンパク質が、コラーゲンアルファ－1（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ1－1）、コラーゲンアルファ－2（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ1－2）、コラーゲンアルファ－1（ＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ2）、コラーゲンアルファ－1（ＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ3）、コラーゲンアルファ－1（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－1）、コラーゲンアルファ－2（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－2）、コラーゲンアルファ－3（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－3）、コラーゲンアルファ－4（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－4）、コラーゲンアルファ－5（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－5）、コラーゲンアルファ－6（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ4－6）、コラーゲンアルファ－1（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ5－1）、コラーゲンアルファ－2（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ5－2）、コラーゲンアルファ－3（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ5－3）、コラーゲンアルファ－1（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－1）、コラーゲンアルファ－2（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－2）、コラーゲンアルファ－3（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－3）、コラーゲンアルファ－4（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－4）、コラーゲンアルファ－5（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－5）、コラーゲンアルファ－6（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ6－6）、コラーゲンアルファ－1（ＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ8）、コラーゲンアルファ－1（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ9－1）、コラーゲンアルファ－2（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ9－2）、コラーゲンアルファ－3（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ9－3）、コラーゲンアルファ－1（Ｘ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ10）、コラーゲンアルファ－1（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ11－1）、コラーゲンアルファ－2（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ11－2）、コラーゲンアルファ－1（ＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ12）、コラーゲンアルファ－1（ＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ13）、コラーゲンアルファ－1（ＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ14）、コラーゲンアルファ－1（ＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ15）、コラーゲンアルファ－1（ＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ16）、コラーゲンアルファ－1（ＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ17）、コラーゲンアルファ－1（ＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ18）、コラーゲンアルファ－1（ＸＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ19）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ20）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ21）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ22）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ23）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ24）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ25）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ26）、コラーゲンアルファ－1（ＸＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ27）、及びコラーゲンアルファ－1（ＸＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ28）からなる群から選択される、本発明1019～1022のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1024]
前記第1のコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ1－1、ＣＯＬ1－2、ＣＯＬ3、ＣＯＬ4－1、ＣＯＬ4－2、ＣＯＬ6－1、及びＣＯＬ17からなる群から選択される、本発明1019～1023のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1025]
第1のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1019～1024のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1026]
前記第1の美容用タンパク質がコラーゲンアルファ－1（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ7）ではない、本発明1001～1025のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1027]
前記第1のポリペプチドが、前記第1の美容用タンパク質から本質的になるか、または前記第1の美容用タンパク質からなる、本発明1001～1026のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1028]
前記第1のポリペプチドが、
（ａ）前記第1の美容用タンパク質、
（ｂ）さらなる美容用タンパク質、及び
（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチド
を含む、本発明1001～1026のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1029]
前記リンカーポリペプチドが切断可能なリンカーポリペプチドである、本発明1028の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1030]
前記リンカーポリペプチドが、配列番号28～31からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1028または本発明1029の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1031]
前記第1の美容用タンパク質と前記さらなる美容用タンパク質が異なる、本発明1028～1030のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1032]
前記第1のポリヌクレオチドが、
（ａ）前記第1のポリペプチドをコードする第1のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、
（ｂ）追加の美容用タンパク質をコードする第2のＯＲＦ、及び
（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）
を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする、本発明1001～1031のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1033]
前記ＩＲＥＳをコードする核酸配列が、配列番号22または配列番号23から選択される核酸配列と少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、または100％の配列同一性を有する、本発明1032の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1034]
前記第1の美容用タンパク質と前記追加の美容用タンパク質が異なる、本発明1032または本発明1033の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1035]
第2の美容用タンパク質をコードする第2のポリヌクレオチドをさらに含む、本発明1001～1034のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1036]
前記第1の美容用タンパク質と前記第2の美容用タンパク質が異なる、本発明1035の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1037]
標的細胞に導入された場合、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムと比較して減少した細胞毒性を有する、本発明1001～1036のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1038]
前記標的細胞が表皮細胞及び／または真皮細胞である、本発明1037の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1039]
前記標的細胞がヒト細胞である、本発明1037または本発明1038の組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1040]
前記標的細胞が線維芽細胞である、本発明1037～1039のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノム。
[本発明1041]
本発明1001～1040のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノムを含む、ヘルペスウイルス。
[本発明1042]
複製能を有する、本発明1041のヘルペスウイルス。
[本発明1043]
複製欠損である、本発明1041のヘルペスウイルス。
[本発明1044]
対応する野生型ヘルペスウイルスと比較して減少した細胞毒性を有する、本発明1041～1043のいずれかのヘルペスウイルス。
[本発明1045]
単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス6Ａ、ヘルペスウイルス6Ｂ、ヘルペスウイルス7、及びカポジ肉腫関連ヘルペスウイルスからなる群から選択される、本発明1041～1044のいずれかのヘルペスウイルス。
[本発明1046]
単純ヘルペスウイルスである、本発明1041～1045のいずれかのヘルペスウイルス。
[本発明1047]
前記単純ヘルペスウイルスが、単純ヘルペスウイルス1型（ＨＳＶ－1）、単純ヘルペスウイルス2型（ＨＳＶ－2）、またはそれらの任意の誘導体である、本発明1046のヘルペスウイルス。
[本発明1048]
（ａ）本発明1001～1040のいずれかの組換えヘルペスウイルスゲノムまたは本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスと、
（ｂ）賦形剤と
を含む、組成物。
[本発明1049]
無菌である、本発明1048の組成物。
[本発明1050]
局所、経皮、皮下、皮内、経口、鼻腔内、気管内、舌下、口腔、直腸、膣内、尿道、吸入、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、骨内、腹腔内、経粘膜、硝子体内、網膜下、関節内、関節周囲、局部、または皮膚上投与に好適である、本発明1048または本発明1049の組成物。
[本発明1051]
皮内投与に好適である、本発明1048～1050のいずれかの組成物。
[本発明1052]
表面注射に好適である、本発明1048～1051のいずれかの組成物。
[本発明1053]
美容用組成物である、本発明1048～1052のいずれかの組成物。
[本発明1054]
スキンケア製品である、本発明1048～1053のいずれかの組成物。
[本発明1055]
薬剤として使用するための、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物。
[本発明1056]
治療に使用するための、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物。
[本発明1057]
皮膚科学的老化の1つ以上の兆候もしくは症状を治療するための薬剤の製造における、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の使用。
[本発明1058]
対象における1つ以上の皮膚細胞外マトリックスタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1059]
対象における1つ以上のコラーゲンタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1060]
対象の軟組織を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1061]
前記組成物が前記対象の軟組織に注射される、本発明1060の方法。
[本発明1062]
皮膚の状態、質、及び／または外観の改善を必要とする対象における皮膚の状態、質、及び／または外観を改善する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1063]
前記組成物が、日光による損傷もしくは他の紫外線曝露、粗いきめ、皮膚のたるみ、しわ、またはそれらの任意の組み合わせの、1つ以上の部位に投与される、本発明1062の方法。
[本発明1064]
皮膚における1つ以上の表面陥凹の外観の減少を必要とする対象の皮膚における1つ以上の表面陥凹の外観を減少させる方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1065]
前記皮膚における前記1つ以上の表面陥凹が、鼻唇溝、目尻のしわ、眉間しわ線、額のしわ、瘢痕、眉間のしわ、眉毛下垂、眼頬溝（ｔｅａｒ ｔｒｏｕｇｈ）、鼻頬線（ｎａｓｏｊｕｇａｌ ｌｉｎｅ）、バニーライン、頬／顔面中央下垂、マリオネットライン、ポピーえくぼ形成（ｐｏｐｐｙ ｄｉｍｐｌｉｎｇ）、笑線、笑いじわ、顎のひだ、首のしわ、広頸筋帯、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、本発明1064の方法。
[本発明1066]
皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも1つの増加及び／または改善を必要とする対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも1つを増加させる及び／または改善する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1067]
前記対象の皮膚が、老化している皮膚である、本発明1062～1066のいずれかの方法。
[本発明1068]
前記対象の皮膚が、紫外線光への曝露により損傷している、本発明1062～1067のいずれかの方法。
[本発明1069]
前記対象の皮膚がしわになっている、本発明1062～1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
1つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減を必要とする対象における1つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する方法であって、前記対象に、本発明1041～1047のいずれかのヘルペスウイルスまたは本発明1048～1054のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
[本発明1071]
前記1つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減が、（ａ）細かい線及び／またはしわの治療、減少、及び／または予防、（ｂ）皮膚の毛穴径の減少、（ｃ）皮膚の厚み、ふっくら感、及び／または張り感の改善、（ｄ）皮膚の滑らかさ、しなやかさ、及び／または柔らかさの改善、（ｅ）皮膚の色調、輝き、及び／または透明度の改善、（ｆ）プロコラーゲン及び／またはコラーゲン産生の改善、（ｇ）皮膚のきめの改善及び／または再度きめを整えること（ｒｅｔｅｘｔｕｒｉｚａｔｉｏｎ）の促進、（ｈ）皮膚輪郭の外観の改善、（ｉ）皮膚のつや及び／または明るさの復元、（ｊ）老化及び／または閉経により減退した皮膚外観の改善、（ｋ）皮膚保湿の改善、（ｌ）皮膚の弾性及び／または弾力性の増加、（ｍ）治療、軽減、及び／または予防もしくは皮膚のたるみ、（ｎ）皮膚の締まりの改善、（ｏ）色素斑、斑のある皮膚、及び／または瘢痕の減少、（ｐ）光回折または反射による皮膚の光学的特性の改善、または（ｑ）それらの任意の組み合わせによって示される、本発明1070の方法。
[本発明1072]
前記対象がヒトである、本発明1058～1071のいずれかの方法。
[本発明1073]
前記ヘルペスウイルスまたは前記組成物が、前記対象に、局所的に、経皮的に、皮下的に、皮膚上に、皮内に、経口的に、舌下に、口腔内に、直腸に、膣に、尿道内に、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、骨内に、心臓内に、腹腔内に、経粘膜的に、硝子体内に、網膜下に、関節内に、関節周囲に、局部的に、または吸入を介して投与される、本発明1058～1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
前記ヘルペスウイルスまたは前記組成物が、前記対象に皮内投与される、本発明1058～1073のいずれかの方法。
[本発明1075]
前記ヘルペスウイルスまたは前記組成物が、表面注射によって投与される、本発明1058～1074のいずれかの方法。
本特許または本出願ファイルには、カラーで作成された少なくとも１つの図面が含まれる。カラー図面を備えた本特許または本特許出願刊行物のコピーは、要求及び必要な料金の支払いに応じて特許庁により提供される。
図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ａは、野生型単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｂは、異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。図１Ｃは、異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｄは、（１）第１の異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列及び（２）第２の異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。第１のヒトコラーゲンポリペプチドも第２のヒトコラーゲンポリペプチドもいずれも、ＤＮＡの同じ鎖上でコードされる。図１Ｅは、（１）第１の異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列及び（２）第２の異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。第１のヒトコラーゲンポリペプチドも第２のヒトコラーゲンポリペプチドもいずれも、ＤＮＡの同じ鎖上でコードされる。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｆは、（１）第１の異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列及び（２）第２の異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドは、ＤＮＡの対向する鎖上でコードされる。図１Ｇは、（１）第１の異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列及び（２）第２の異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含有するポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドは、ＤＮＡの対向する鎖上でコードされる。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｈは、異種プロモーターに作動可能に連結されたポリシストロニックｍＲＮＡをコードするポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。ポリシストロニックｍＲＮＡは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）によって分離された第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む。図１Ｉは、異種プロモーターに作動可能に連結されたポリシストロニックｍＲＮＡをコードするポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。ポリシストロニックｍＲＮＡは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）によって分離された第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｊは、異種プロモーターに作動可能に連結されたキメラポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。キメラポリペプチドは、切断可能なリンカーによって分離された第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドのアミノ酸配列を含む。図１Ｋは、異種プロモーターに作動可能に連結されたキメラポリペプチドのコード配列を含むポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれている、ＩＣＰ４のコード配列（両方のコピー）の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。キメラポリペプチドは、切断可能なリンカーによって分離された第１のヒトコラーゲンポリペプチド及び第２のヒトコラーゲンポリペプチドのアミノ酸配列を含む。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｌは、異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第１のポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれており、異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第２のポリヌクレオチドがＩＣＰ２２遺伝子座に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＩＣＰ２２のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。 図１Ａ～Ｎは、野生型及び改変された単純ヘルペスウイルスゲノムの概略図を示す。図１Ｍは、異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第１のポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれており、異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第２のポリヌクレオチドがＵＬ４１遺伝子座に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）、ＩＣＰ２２、及びＵＬ４１のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。図１Ｎは、異種プロモーターに作動可能に連結された第１のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第１のポリヌクレオチドがＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれており、異種プロモーターに作動可能に連結された第２のヒトコラーゲンポリペプチドのコード配列を含む第２のポリヌクレオチドがＵＬ４１遺伝子座に組み込まれている、ＩＣＰ４（両方のコピー）及びＵＬ４１のコード配列の欠失を含む改変された単純ヘルペスウイルスゲノムを示す。 図２Ａ～Ｂは、ヒトコラーゲン７（ＣＯＬ７）発現カセットを保有する複製欠損性単純ヘルペスウイルス１型の概略図を示す。図２Ａは、ウイルス「ＫＣＡ２１１」の概略図を示す。図２Ｂは、ウイルス「ＳＡＲ－ＣＯＬ７」の概略図を示す。 図３Ａ～Ｂは、指示されたＭＯＩでＫＣＡ２１１またはＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＨａＣａＴ細胞におけるヒトＣＯＬ７発現を示す。図３Ａは、ｑＰＣＲによって評価される、指示されたＭＯＩでＫＣＡ２１１またはＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＨａＣａＴ細胞におけるヒトＣＯＬ７発現を示す。データを、ＧＡＰＤＨに対する正規化後のＳＡＲ－ＣＯＬ７に対する変化倍率として示す。図３Ｂは、非感染ＨａＣａＴ細胞、またはウエスタンブロット分析によって評価される、指示されたＭＯＩでＫＣＡ２１１もしくはＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＨａＣａＴ細胞におけるヒトＣＯＬ７発現を示す。 図４Ａ～Ｂは、健常患者（正常）から単離された模擬感染初代ヒト細胞におけるヒトＣＯＬ７発現、及び劣性栄養障害性表皮水疱症（ＲＤＥＢ）に罹患している患者から単離された模擬またはＳＡＲ－ＣＯＬ７感染初代ヒト細胞におけるヒトＣＯＬ７発現の免疫蛍光画像を示す。図４Ａは、模擬感染野生型及びＲＤＥＢ初代ヒトケラチノサイトにおけるヒトＣＯＬ７発現、または指示された感染多重度（ＭＯＩ）でＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢ初代ヒトケラチノサイトにおけるヒトＣＯＬ７発現を示す。図４Ｂは、模擬感染野生型及びＲＤＥＢ初代ヒト線維芽細胞におけるヒトＣＯＬ７発現、または指示されたＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢ初代ヒト線維芽細胞におけるヒトＣＯＬ７発現を示す。 図５Ａ～Ｂは、健常患者から単離された模擬感染初代ヒト細胞におけるヒトＣＯＬ７発現、及び劣性栄養障害性表皮水疱症（ＥＢ）に罹患している患者から単離された模擬またはＳＡＲ－ＣＯＬ７感染初代ヒト細胞におけるヒトＣＯＬ７発現の定量的ＰＣＲ分析を示す。図５Ａは、模擬感染野生型（Ｎ－ＨＤＫ）及びＲＤＥＢ（ＥＢ－ＨＤＫ）初代ヒトケラチノサイトにおけるヒトＣＯＬ７発現、または指示されたＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢ初代ヒトケラチノサイトにおけるヒトＣＯＬ７発現を示す。ＣＯＬ７発現を、模擬感染野生型初代ヒトケラチノサイトに対する相対的変化倍率として示す。図５Ｂは、模擬感染野生型（Ｎ－ＨＤＦ）及びＲＤＥＢ（ＥＢ－ＨＤＦ）初代ヒト線維芽細胞におけるヒトＣＯＬ７発現、または指示されたＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢ初代ヒト線維芽細胞におけるヒトＣＯＬ７発現を示す。ＣＯＬ７発現を、模擬感染野生型初代ヒト線維芽細胞に対する相対的変化倍率として示す。 図６Ａ～Ｂは、非感染（対照）またはＳＡＲ－ＣＯＬ７感染ＲＤＥＢ初代ヒトケラチノサイトのマイクロウェルプレートの未処理（プラスチック）または処理ウェルへの細胞接着を示す。図６Ａは、未処理ウェル（プラスチック）または増加濃度のラット尾コラーゲン１で処理したウェルへの細胞接着を示す。図６Ｂは、未処理ウェル（プラスチック）または増加濃度のヒト血漿フィブロネクチンで処理したウェルへの細胞接着を示す。 ＳＡＲ－ＣＯＬ７感染ＲＤＥＢ初代ヒトケラチノサイト及び線維芽細胞で構築した器官型培養物における、５日目の基底膜ゾーン（ＢＭＺ）でのヒトＣＯＬ７発現及び沈着の代表的な免疫蛍光画像を示す。培養構築後、指示されたＭＯＩでケラチノサイト及び線維芽細胞の両方をインサイチュで感染させた。 図８Ａ～Ｄは、ｑＰＣＲによって評価される、非感染マウス皮膚（対照）またはＳＡＲ－ＣＯＬ７の局所または皮内送達後のマウス皮膚で観察されたヒトＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル及びゲノムレベルを示す。エラーバーは、ＳＥＭを表す。図８Ａは、感染後３日目のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１転写物レベル／総ＲＮＡ１００ｎｇを示す。図８Ｂは、感染後３日目のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡのコピー数／総ＤＮＡ１００ｎｇを示す。図８Ｃは、感染後６日目のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１転写物レベル／総ＲＮＡ１００ｎｇを示す。図８Ｄは、感染後６日目のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡのコピー数／総ＤＮＡ１００ｎｇを示す。 図９Ａ～Ｂは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の送達後のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。図９Ａは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の皮内送達後のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。図９Ｂは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の局所送達後のマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。 図１０Ａ～Ｂは、ｑＰＣＲによって評価される、ビヒクル、ＳＡＲ－ＣＯＬ７、またはＫＣＡ２１１の皮内送達後のＢＡＬＢ／ｃマウス皮膚で観察されたヒトＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル及びゲノムレベルを示す。図１０Ａは、ＢＡＬＢ／ｃマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１転写物レベル／総ＲＮＡ１００ｎｇを示す。図１０Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡのコピー数／総ＤＮＡ１００ｎｇを示す。 図１１Ａ～Ｂは、ｑＰＣＲによって評価される、ＨＳＶ－ＧＦＰ（ＧＦＰ対照）またはＳＡＲ－ＣＯＬ７の高用量皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚における各注射部位で観察されたヒトＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル及びゲノムレベルを示す。各バーは、指示された時点での単一試料を表す。図１１Ａは、ハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１転写物レベル／総ＲＮＡ１００ｎｇを示す。図１１Ｂは、ハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡのコピー数／総ＤＮＡ１００ｎｇを示す。 図１２Ａ～Ｂは、ＨＳＶ－ＧＦＰ（ＧＦＰ対照）またはＳＡＲ－ＣＯＬ７の高用量皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。図１２Ａは、１０倍及び２０倍倍率でのハイポモルフマウス１（３日目に収集）由来の対照（ＧＦＰ）及びＳＡＲ－ＣＯＬ７免疫蛍光画像を示す。図１２Ｂは、ハイポモルフマウス２及びハイポモルフマウス３（７日目に収集）由来のＳＡＲ－ＣＯＬ７免疫蛍光画像を示す。この図は、全皮膚片を捕捉する、１０倍レンズで取得した１６視野のタイル状画像を表す。 ハイポモルフマウス１、２、及び３（３日目及び３日目に収集）由来のＨ＆Ｅ染色試料を示す。これらの試料を、未処置ハイポモルフマウス皮膚及びＨＳＶ－ＧＦＰまたはＳＡＲ－ＣＯＬ７の皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚から採取した。 図１４Ａ～Ｂは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な電子顕微鏡写真画像を示す。緻密層は、画像の中央を通して示される暗い帯であり、黒色の点は、ヒトＣＯＬ７ｌの染色ＮＣドメインであり、青色の矢印は、アンカー原線維の形成を示す。図１４Ａは、ヒトＣＯＬ７（ＬＨ２４）のＮＣ２ドメインに特異的な抗体で染色された感染ハイポモルフマウス皮膚の電子顕微鏡写真画像を示す。図１４Ｂは、ヒトＣＯＬ７（ＮＰ１８５）のＮＣ１ドメインに特異的な抗体で染色された感染ハイポモルフマウス皮膚の電子顕微鏡写真画像を示す。 図１５Ａ～Ｂは、ｑＰＣＲによって評価される、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の低用量皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚における各注射部位で観察されたヒトＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル及びゲノムレベルを示す。各バーは、指示された時点での単一試料を表す。図１５Ａは、ハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１転写物レベル／総ＲＮＡ１００ｎｇを示す。図１５Ｂは、ハイポモルフマウス皮膚におけるヒトＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡのコピー数／総ＤＮＡ１００ｎｇを示す。 ＳＡＲ－ＣＯＬ７の低用量皮内送達後のハイポモルフマウス皮膚（マウス１由来）におけるヒトＣＯＬ７発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。 図１７Ａ～Ｃは、ＣＯＬ１Ａ１のみ（ＩＣＰ４遺伝子座に挿入）またはＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２（それぞれ、ＩＣＰ４遺伝子座及びＩＣＰ２２遺伝子座に挿入）をコードするＨＳＶの指示されたクローンに感染したＶｅｒｏ細胞におけるヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２核酸ならびにタンパク質分析を示す。図１７Ａは、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析によって決定される、指示されたＨＳＶクローンによる感染の５日後にＶｅｒｏ細胞中に存在するヒトＣＯＬ１Ａ１転写物のレベルを示す。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図１７Ｂは、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析によって決定される、指示されたＨＳＶクローンによる感染の５日後にＶｅｒｏ細胞中に存在するヒトＣＯＬ１Ａ２転写物のレベルを示す。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図１７Ｃは、ｑＲＴ－ＰＣＲによって決定される、指示されたＣＯＬ１Ａ１／ＣＯＬ１Ａ２陽性クローンによる感染の５日後のＶｅｒｏ細胞におけるヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２タンパク質発現のウエスタンブロット分析を示す。非感染（模擬）Ｖｅｒｏ細胞を陰性対照として使用し、ＧＡＰＤＨを負荷対照として使用した。 ＩＣＰ４遺伝子座に挿入されたＣＯＬ１Ａ１－ＩＲＥＳ－ＣＯＬ１Ａ２配列をコードするＨＳＶ単離体（ＩＲＥＳ－単離体６）による感染の５日後のＶｅｒｏ細胞におけるヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２タンパク質発現のウエスタンブロット分析を示す。ＩＲＥＳ構築物を含まない単離体（挿入なし）による感染を陰性対照として使用し、ＧＡＰＤＨを負荷対照として使用した。 図１９Ａ～Ｂは、Ｃ３ｖｅｃ０１に感染した不死化ヒトケラチノサイト（ＨａＣａＴ）におけるヒトＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図１９Ａは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後の不死化ヒトケラチノサイト（ＨＫ）中に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物のレベルを示す。非感染（模擬）細胞及びＨＳＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ感染（ｍＣｈｅｒｒｙ）細胞を陰性対照として使用した。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図１９Ｂは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染の４８時間後の不死化ヒトケラチノサイトにおけるヒトＣＯＬ３タンパク質発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用した。 図２０Ａ～Ｂは、Ｃ３ｖｅｃ０１に感染した不死化ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）におけるヒトＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２０Ａは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後の不死化ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）中に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物レベルを示す。非感染（模擬）細胞及びＨＳＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ感染（ｍＣｈｅｒｒｙ）細胞を陰性対照として使用した。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図２０Ｂは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染の４８時間後の不死化ヒト皮膚線維芽細胞におけるヒトＣＯＬ３タンパク質発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用した。 図２１Ａ～Ｄは、指示されたＭＯＩでＣ３ｖｅｃ０１に感染した、２つの異なるベンダーから調達された老化初代ヒト線維芽細胞（ＨＤＦ）におけるヒトＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２１Ａは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後に６５歳の女性患者または７３歳の男性患者のいずれかから収集された初代ＨＤＦ（ベンダー１）中に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物のレベルを示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用した。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図２１Ｂは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後に７３歳の男性患者から収集された初代ＨＤＦ（ベンダー１）におけるヒトＣＯＬ３Ａ１タンパク質発現のウエスタンブロット分析を示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用し、組換えヒトＣＯＬ３Ａ１（ｒＣＯＬ３Ａ１）を陽性対照として使用し、ＧＡＰＤＨを負荷対照として使用した。図２１Ｃは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後に７５歳の女性患者または７３歳の男性患者のいずれかから収集された初代ＨＤＦ（ベンダー２）中に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物のレベルを示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用した。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。図２１Ｄは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後に７５歳の女性患者から収集された初代ＨＤＦ（ベンダー２）におけるヒトＣＯＬ３Ａ１タンパク質発現のウエスタンブロット分析を示す。非感染（模擬）細胞を陰性対照として使用し、組換えヒトＣＯＬ３Ａ１（ｒＣＯＬ３Ａ１）を陽性対照として使用し、ＧＡＰＤＨを負荷対照として使用した。 図２２Ａ～Ｂは、紫外線曝露時の不死化ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）におけるヒトＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２２Ａは、ＥＬＩＳＡによって評価される、様々な照射量及び回数の紫外線光への曝露の２４時間後に培養ＨＤＦの上清に分泌されたＣＯＬ３の濃度を示す。並行して培養した非紫外線曝露（－紫外線）ＨＤＦから収集された上清を対照として使用した。図２２Ｂは、指示されたＭＯＩでのＣ３ｖｅｃ０１による感染後に紫外線曝露不死化ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）中に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物のレベルを示す。非感染（模擬）細胞及びＨＳＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ感染（ｍＣｈｅｒｒｙ）細胞を陰性対照として使用した。データを、２つの複製物±ＳＥＭについて提示する。 図２３Ａ～Ｃは、皮内適用の４８時間後に対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＣ３ｖｅｃ０１で処理した若年（６～８週齢）及び老年（約１３ヶ月齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスから採取された皮膚生検のＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２３Ａは、ｑＰＣＲ分析によって評価される、Ｃ３ｖｅｃ０１またはビヒクル対照のいずれかを皮内投与した４８時間後に若年マウス及び老年マウスから採取された皮膚生検に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１ ＤＮＡのレベルを示す。 図２３Ａ～Ｃは、皮内適用の４８時間後に対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＣ３ｖｅｃ０１で処理した若年（６～８週齢）及び老年（約１３ヶ月齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスから採取された皮膚生検のＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２３Ｂは、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析によって評価される、Ｃ３ｖｅｃ０１またはビヒクル対照のいずれかを皮内投与した４８時間後に若年マウス及び老年マウスから採取された皮膚生検に存在するヒトＣＯＬ３Ａ１転写物のレベルを示す。ｑＰＣＲ分析及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析における各条件について、データを、４つの組織試料（２つの複製物／組織試料）の平均±ＳＥＭとして提示する。 図２３Ａ～Ｃは、皮内適用の４８時間後に対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＣ３ｖｅｃ０１で処理した若年（６～８週齢）及び老年（約１３ヶ月齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスから採取された皮膚生検のＣＯＬ３核酸及びタンパク質分析を示す。図２３Ｃは、Ｃ３ｖｅｃ０１を皮内投与した４８時間後に若年マウス及び老年マウスから採取された皮膚生検におけるヒトＣＯＬ３発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。ビヒクルのみを皮内投与した若年マウスを陰性対照として使用した。ＤＡＰＩ染色を使用して核を可視化した。 図２４Ａ～Ｂは、指示されたウイルス単離体に感染したＶｅｒｏ細胞における野生型（ＷＴ）ヒトＬａｍＢ３の発現を示す。図２４Ａは、ｑＰＣＲ分析によって評価される、感染Ｖｅｒｏ細胞における野生型ヒトＬＡＭＢ３の発現を示す。図２４Ｂは、ウエスタンブロットによって評価される、感染Ｖｅｒｏ細胞における野生型ヒトＬａｍＢ３タンパク質の発現を示す。 ウエスタンブロットによって評価される、指示されたウイルス単離体に感染したＶｅｒｏ細胞における野生型（ＷＴ）またはコドン最適化（ＣＯ）ヒトＬａｍＢ３タンパク質の発現を示す。非感染Ｖｅｒｏ細胞を陰性対照として使用した。 ウエスタンブロットによって評価される、指示されたウイルス単離体に感染した初代ヒトケラチノサイトにおける野生型（ＷＴ）またはコドン最適化（ＣＯ）ヒトＬａｍＢ３タンパク質の発現を示す。非感染初代ケラチノサイトを陰性対照として使用した。 図２７Ａ～Ｃは、指示されたウイルス単離体に感染したＶｅｒｏ細胞における野生型（ＷＴ）及びコドン最適化（ＣＯ）ヒトＬａｍＣ２の発現を示す。図２７Ａは、ｑＰＣＲ分析によって評価される、感染Ｖｅｒｏ細胞における野生型ヒトＬＡＭＣ２の発現を示す。図２７Ｂは、ｑＰＣＲ分析によって評価される、感染Ｖｅｒｏ細胞におけるコドン最適化ヒトＬＡＭＣ２の発現を示す。図２７Ｃは、ウエスタンブロットによって評価される、感染Ｖｅｒｏ細胞における野生型及びコドン最適化ヒトＬａｍＣ２タンパク質の発現を示す。コドン最適化ＬａｍＣ２を発現する囲まれたウイルス単離体「ＬＧＡ」を追加の実験のために選択した。 指示された感染多重度（ＭＯＩ）で感染した不死化初代ヒトケラチノサイト中のウイルス単離体「ＬＧＡ」から発現されたヒトＬＡＭＣ２を示す。指示されたＭＯＩでのウイルス単離体「ＬＧＡ」による感染後の初代不死化ヒトケラチノサイト中のウイルスゲノムコピー数を示す。 指示された感染多重度（ＭＯＩ）で感染した不死化初代ヒトケラチノサイト中のウイルス単離体「ＬＧＡ」から発現されたヒトＬＡＭＣ２を示す。指示されたＭＯＩでのウイルス単離体「ＬＧＡ」による感染後に初代不死化ヒトケラチノサイトで発現されたコドン最適化ＬＡＭＣ２の転写物レベルを示す。 指示された感染多重度（ＭＯＩ）で感染した不死化初代ヒトケラチノサイト中のウイルス単離体「ＬＧＡ」から発現されたヒトＬＡＭＣ２を示す。ウエスタンブロットによって評価される、指示されたＭＯＩでのウイルス単離体「ＬＧＡ」による感染後の初代不死化ヒトケラチノサイトにおけるヒトＬａｍＣ２タンパク質の発現を示す。 図２９Ａ～Ｄは、対照（ビヒクル）マウスまたは皮内適用から７２時間後のＨＳＶ単離体「ＬＧＡ」処置マウスから採取された皮膚生検のＬＡＭＣ２核酸及びタンパク質分析を示す。図２９Ａは、処理動物上の皮内注射部位の概略図を示す。 図２９Ａ～Ｄは、対照（ビヒクル）マウスまたは皮内適用から７２時間後のＨＳＶ単離体「ＬＧＡ」処置マウスから採取された皮膚生検のＬＡＭＣ２核酸及びタンパク質分析を示す。図２９Ｂは、ｑＰＣＲ分析によって評価される、ＨＳＶ単離体ＬＧＡまたはビヒクル対照のいずれかを皮内投与した７２時間後にマウスから採取された皮膚生検に存在するヒトＬＡＭＣ２ ＤＮＡのレベルを示す。 図２９Ａ～Ｄは、対照（ビヒクル）マウスまたは皮内適用から７２時間後のＨＳＶ単離体「ＬＧＡ」処置マウスから採取された皮膚生検のＬＡＭＣ２核酸及びタンパク質分析を示す。図２９Ｃは、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析によって評価される、ＨＳＶ単離体ＬＧＡまたはビヒクル対照のいずれかを皮内投与した７２時間後にマウスから採取された皮膚生検に存在するヒトＬＡＭＣ２転写物レベルを示す。ｑＰＣＲ分析及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析における各条件について、データを、２つの複製物の平均±ＳＥＭとして提示する。 図２９Ａ～Ｄは、対照（ビヒクル）マウスまたは皮内適用から７２時間後のＨＳＶ単離体「ＬＧＡ」処置マウスから採取された皮膚生検のＬＡＭＣ２核酸及びタンパク質分析を示す。図２９Ｄは、ＨＳＶ単離体ＬＧＡを皮内投与した７２時間後にマウスから採取された皮膚生検におけるヒトＬＡＭＣ２発現の代表的な免疫蛍光画像を示す。ビヒクルのみを皮内投与した部位を陰性対照として使用した。ＤＡＰＩ染色を使用して核を可視化し、ｐＫａｌ染色を使用してマウスラミニン－３３２を可視化した。
詳細な説明
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の美容用タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、組換えヘルペスウイルスゲノム）、ならびに１つ以上の美容用タンパク質を皮膚に、例えば、皮膚上に、皮膚中に、及び／または皮膚を通じて（例えば、皮膚ＥＣＭに）送達するためのウイルス（例えば、ヘルペスウイルス中）、組成物、配合物、薬剤、及び／または方法におけるこれらの組換え核酸の使用に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の美容用タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、組換えヘルペスウイルスゲノム）、ならびに１つ以上の皮膚ＥＣＭタンパク質（例えば、１つ以上のコラーゲンタンパク質）を増加させる、増強する、及び／または補充するためのウイルス（例えば、ヘルペスウイルス中）、組成物、配合物、薬剤、及び／または方法におけるこれらの組換え核酸の使用に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の美容用タンパク質をコードする組換え核酸（例えば、組換えヘルペスウイルスゲノム）、ならびに（例えば、１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減するための）審美的状況でのウイルス（例えば、ヘルペスウイルス中）、組成物、配合物、薬剤、及び／または方法におけるこれらの組換え核酸の使用に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、組換えヘルペスウイルスベクターを含む組成物、ならびに組換えヘルペスウイルスベクターを哺乳動物の皮膚上に、その中に、及び／またはそれを通じて送達することを含む方法に関し、組換えヘルペスウイルスベクターは、哺乳動物細胞で作動可能なプロモーターと、哺乳類皮膚において美容効果を達成するために発現される異種核酸を含む。異種核酸は、哺乳動物の表皮、真皮、または皮下組織を、組換えヘルペスウイルスベクターを含む組成物と接触させることを含む、哺乳動物の哺乳類標的皮膚細胞に、組換えヘルペスウイルスベクターが、表皮、真皮、または皮下組織上に、その中に、及び／またはそれを通じて輸送され、それが発現される標的皮膚細胞に導入される条件下で送達され得る。理論に拘束されることを望むことなく、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または配合物のうちの１つ以上を個体に投与することにより、個体における機能的な皮膚ＥＣＭタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン）の産生の増加が可能になると考えられる。さらに、理論に拘束されることを望むことなく、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または配合物のうちの１つ以上を投与することによって個体における美容用タンパク質のレベルを増加させること、増強すること、及び／または補充することにより、（１）軟組織の強化、増強、及び／または補充、（２）皮膚の質、状態、及び／または外観の改善、（３）皮膚における１つ以上の表面陥凹（例えば、しわ）の減少、（４）皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、及び／または張りの改善、及び／または（５）１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減のうちの少なくとも１つがもたらされると考えられる。最終的に、理論に拘束されることを望むことなく、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、組成物、及び方法により、審美的環境において機能的美容用タンパク質を送達するための新規戦略が提供されると考えられる。
以下の記述は、例示的な方法、パラメータ等を説明する。しかしながら、かかる記述が本開示の範囲を制限するよう意図されておらず、代わりに、例示的な実施形態の記述として提供されることを認識されたい。
Ｉ．一般的な技法
本明細書に記載または参照される技法及び手順は、一般に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３））、ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．（１９９５）），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．（１９８８）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載の広く利用されている方法論等の従来の方法論を使用して、当業者により十分に理解されており、一般に用いられている。
ＩＩ．定義
本開示を詳細に説明する前に、本開示が特定の組成物または生物学的系に限定されず、これらが言うまでもなく変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定するようには意図されていないことも理解されたい。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容がそうではないと明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子（ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、２つ以上のかかる分子の組み合わせを任意に含むといった具合である。
本明細書で使用される場合、「及び／または」という用語は、関連する列記された項目のうちの１つ以上のありとあらゆる組み合わせを含み得る。例えば、「ａ及び／またはｂ」という用語は、「ａのみ」、「ｂのみ」、「ａまたはｂ」、または「ａ及びｂ」を指し得、「ａ、ｂ、及び／またはｃ」という用語は、「ａのみ」、「ｂのみ」、「ｃのみ」、「ａまたはｂ」、「ａまたはｃ」、「ｂまたはｃ」、「ａ、ｂ、またはｃ」、「ａ及びｂ」、「ａ及びｃ」、「ｂ及びｃ」、または「ａ、ｂ、及びｃ」を指し得る。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当該技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（及び説明する）。
本開示の態様及び実施形態が、態様及び実施形態を「含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」ことを含むことを理解されたい。
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「核酸配列」、「核酸」という用語、及びそれらの変形は、ポリマーが、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られるように、塩基対合及び塩基スタッキングを可能にする立体配置で核酸塩基を含むという条件で、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含む）、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含む）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ－グリコシドである任意の他のタイプのポリヌクレオチド、及び非ヌクレオチド骨格を含む他のポリマーに対して包括的でなければならない。したがって、これらの用語には、既知のタイプの核酸配列改変、例えば、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上の類似体での置換、及びヌクレオチド間改変が含まれる。
本明細書で使用される場合、核酸が別の核酸配列と機能的関係に置かれると、核酸は、「作動的に連結される」または「作動可能に連結される」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、コード配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されており、リボソーム結合部位は、翻訳を容易にするように位置付けされている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動的に連結される」または「作動可能に連結される」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続していることを意味する。
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、異種核酸の発現または複製のいずれかのために異種核酸を細胞に導入するために使用される別個の要素を指す。発現ベクターは、かかる核酸の発現をもたらすことができるプロモーター領域等の調節配列と作動的に連結された核酸を発現することができるベクターを含む。したがって、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入されたときに核酸の発現をもたらす、プラスミド、ファージ、組換えウイルス、または他のベクター等のＤＮＡまたはＲＮＡ構築物を指し得る。適切な発現ベクターは当業者に周知であり、真核細胞で複製可能なもの、及びエピソームのままであるか、または宿主細胞ゲノムに組み込まれるものを含む。
本明細書で使用される場合、「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」とは、タンパク質またはポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかの核酸の連続した伸長を指す。典型的には、核酸は、ＡＴＧまたはＡＵＧ等の翻訳開始シグナルまたは開始コドン及び終止コドンを含む。
本明細書で使用される場合、「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」とは、オープンリーディングフレームの５’末端及び／または３’末端における非翻訳核酸を指す。１つ以上のＵＴＲをポリヌクレオチドに含めることにより、転写後制御、ｍＲＮＡ安定性、及び／またはポリヌクレオチドの翻訳に影響が及ぼされ得る。
本明細書で使用される場合、「導入遺伝子」という用語は、細胞に導入された後に、ＲＮＡに転写され、適切な条件下で翻訳及び／または発現されることができるポリヌクレオチドを指す。いくつかの態様では、それが導入された細胞に所望の特性を付与するか、またはさもなければ、所望の美容、治療、または診断結果をもたらす。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」という用語は、互換的に使用され、２つ以上のアミノ酸のポリマーを指し得る。
本明細書で使用される場合、「対象」、「宿主」、または「個体」とは、ヒト、家畜及び農場動物、ならびに動物園、スポーツ、またはペット動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ならびに研究で使用される動物、例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、及び非ヒト霊長類等を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「薬学的配合物」または「薬学的組成物」という用語は、活性成分（複数可）の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、組成物または配合物が投与される対象に対して許容されないほどに毒性の追加の成分を含有しない調製物を指す。「薬学的に許容される」賦形剤（例えば、ビヒクル、添加剤）は、用いられる有効成分（複数可）の有効用量を提供するために対象に適度に投与され得るものである。
本明細書で使用される場合、「皮膚投与」または「皮膚投与する」とは、組成物を含む配合物を対象の皮膚の全て（「全身」）または一部（「局所」）に直接または別様に接触させることにより組成物を対象に送達することを指す。この用語は、局所及び経皮を含むが、これらに限定されない、いくつかの投与経路を包含する。局所投与は、組成物を対象の表皮もしくは真皮に、またはその特定の層に送達するための手段として使用され得る。
本明細書で使用される場合、「治療」とは、臨床病理の過程において治療される個体または細胞の自然経過を変化させるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患／障害／欠損進行速度の低下、疾患／障害／欠損状態の改善または緩和、及び寛解または予後の改善が含まれる。例えば、しわの減少または除去を含む、皮膚科学的老化に関連する１つ以上の症状が軽減、緩和、または除去された場合、個体は首尾よく「治療」される。
本明細書で使用される場合、疾患／障害／欠損の「進行を遅延させる」という用語は、疾患／障害／欠損（例えば、皮膚のしわ）の発症を保留する、妨げる、遅延させる、遅らせる、安定させる、及び／または延期することを指す。この遅延は、疾患／障害／欠損及び／または治療される個体の病歴に応じて、様々な長さまたは時間であり得る。当業者には明らかであるように、十分または有意な遅延は、個体が疾患／障害／欠損を発症しないという点で、実際には予防を包含し得る。
ＩＩＩ．組換え核酸
本開示のある特定の態様は、美容用タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチド（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０個以上等）を含む組換え核酸（例えば、単離された組換え核酸）に関する。例えば、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体、ラミニン、神経調節物質、フィブリリン、追加の皮膚ＥＣＭタンパク質等を含む、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の任意の好適な美容用タンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリリン等）である。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質は、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質）である。
いくつかの実施形態では、本開示は、コラーゲンタンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチド（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０個以上等）を含む組換え核酸（例えば、単離された組換え核酸）に関する。いくつかの実施形態では、コラーゲンタンパク質は、ヒトコラーゲンタンパク質である。いくつかの実施形態では、本開示は、ホモ三量体コラーゲン（例えば、ホモ三量体ヒトコラーゲン、例えば、ヒトコラーゲン３（例えば、３つのＣＯＬ３Ａ１（ＣＯＬ３）ポリペプチドを含む）またはヒトコラーゲン７（例えば、３つのＣＯＬ７Ａ１（ＣＯＬ７）ポリペプチドを含む）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ三量体コラーゲン（例えば、ヘテロ三量体ヒトコラーゲン、例えば、ヒトコラーゲン１（例えば、２つのＣＯＬ１Ａ１（ＣＯＬ１－１）ポリペプチド及び１つのＣＯＬ１Ａ２（ＣＯＬ１－２）ポリペプチドを含む）またはヒトコラーゲン４（例えば、２つのＣＯＬ４Ａ１（ＣＯＬ４－１）ポリペプチド及び１つのＣＯＬ４Ａ２（ＣＯＬ４－２）ポリペプチドを含む）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ホモ三量体コラーゲン及びヘテロ三量体コラーゲンをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸（例えば、ヒトコラーゲン１及びヒトコラーゲン３をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸）に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトコラーゲン１をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトコラーゲン３をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。
いくつかの実施形態では、本開示は、第１の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質から本質的になるか、または第１の美容用タンパク質からなる（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質から本質的になるか、または第１のヒトコラーゲンタンパク質からなる）。いくつかの実施形態では、本開示は、第１の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）、リンカーポリペプチド、及びさらなる美容用タンパク質（例えば、さらなるヒトコラーゲンタンパク質）を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質）は同じである。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質）は異なる。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、切断可能なリンカーポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、本開示は、第１の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関し、第１のポリヌクレオチドは、第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、及び追加の美容用タンパク質（例えば、追加のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする第２のＯＲＦを含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と追加の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質）は同じである。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と追加の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質）は異なる。
いくつかの実施形態では、本開示は、第１の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド、及び第２の美容用タンパク質（例えば、第２のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする第２のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と第２の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質と第２のヒトコラーゲンタンパク質）は同じである。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と第２の美容用タンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質と第２のヒトコラーゲンタンパク質）は異なる。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、ベクターである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、ヘルペスウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、単純ヘルペスウイルスアンプリコンである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換えヘルペスウイルスゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）ゲノムである。
美容用タンパク質をコードするポリヌクレオチド
コラーゲンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、コラーゲン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトコラーゲン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２７７、１２７８、１２８１、１２８２、１２８４、１２９１、１２９４、１３０８等を参照のこと）、マウスコラーゲン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８４２、１２８４３、１２８２５、１２８２６、１２８２７、１２８３３、１２８３６、１２８２１等を参照のこと）、チンパンジーコラーゲン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０４００１０５３、４５５１１７、４５９８１５、４５２６８９、４５２６６１、４５０２０４、１０１０５６８９５、１０１０５８３０６等を参照のこと）、ラットコラーゲン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２９３９３、８４３５２、８４０３２、２９０９０５、３０６６２８、２９４３３７、３０１０１２、２９４０２７等を参照のこと）、ウサギコラーゲン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００３４７５９８、１００００８９９７、１００００９１７７、１００３５８２５６、１００３５８５２２、１００３４３９４７、１００３５６５６１、１００３３９３３５等を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のコラーゲン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。例えば、ＢＬＡＳＴ（登録商標）ｂｌａｓｔｎ ｓｕｉｔｅ等の核酸配列アラインメントプログラムの使用を含む、追加の種由来のコラーゲン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のコラーゲン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のコラーゲン遺伝子のうちのいずれかのコード配列のコドン最適化バリアントを含む。いくつかの実施形態では、コラーゲン遺伝子のコード配列のコドン最適化バリアントの使用により、対応する非コドン最適化野生型配列の異種発現の安定性及び／または収率と比較して、標的細胞（表皮細胞及び／または真皮細胞等）におけるコードされたコラーゲンタンパク質の異種発現（ＲＮＡ及び／またはタンパク質）の安定性及び／または収率が増加する。例えば、Ｆａｔｈ ｅｔ ａｌ．（ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１１ Ｍａｒ ３；６（３）：ｅ１７５９６）によって説明される方法を含む、１つ以上の標的細胞（例えば、１つ以上のヒト細胞）における発現のための配列のコドン最適化を行うための当該技術分野で既知の任意の好適な方法が使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトコラーゲン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。例えば、ＣＯＬ１Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２７７、配列番号１を参照のこと）、ＣＯＬ１Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２７８、配列番号３を参照のこと）、ＣＯＬ２Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８０を参照のこと）、ＣＯＬ３Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８１、配列番号５を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８２、配列番号７を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８４を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８５を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ４遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８６を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ５遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８７を参照のこと）、ＣＯＬ４Ａ６遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８８を参照のこと）、ＣＯＬ５Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２８９を参照のこと）、ＣＯＬ５Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９０を参照のこと）、ＣＯＬ５Ａ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５０５０９を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９１、配列番号９を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９２を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９３を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ４遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３４４８７５を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ５遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５６０７６を参照のこと）、ＣＯＬ６Ａ６遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３１８７３を参照のこと）、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９４、配列番号１０を参照のこと）、ＣＯＬ８Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９５を参照のこと）、ＣＯＬ９Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９７を参照のこと）、ＣＯＬ９Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９８を参照のこと）、ＣＯＬ９Ａ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１２９９を参照のこと）、ＣＯＬ１０Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３００を参照のこと）、ＣＯＬ１１Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０１を参照のこと）、ＣＯＬ１１Ａ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０２を参照のこと）、ＣＯＬ１２Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０３を参照のこと）、ＣＯＬ１３Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０５を参照のこと）、ＣＯＬ１４Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７３７３を参照のこと）、ＣＯＬ１５Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０６を参照のこと）、ＣＯＬ１６Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０７を参照のこと）、ＣＯＬ１７Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３０８、配列番号１２を参照のこと）、ＣＯＬ１８Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８０７８１を参照のこと）、ＣＯＬ１９Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３１０を参照のこと）、ＣＯＬ２０Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５７６４２を参照のこと）、ＣＯＬ２１Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８１５７８を参照のこと）、ＣＯＬ２２Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１６９０４４を参照のこと）、ＣＯＬ２３Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９１５２２を参照のこと）、ＣＯＬ２４Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５５６３１を参照のこと）、ＣＯＬ２５Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８４５７０を参照のこと）、ＣＯＬ２６Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３６２２７を参照のこと）、ＣＯＬ２７Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８５３０１を参照のこと）、ＣＯＬ２８Ａ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３４０２６７を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適なヒトコラーゲン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）は、本開示の核酸によってコードされ得る。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトコラーゲン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）は、本明細書に記載のヒトコラーゲン遺伝子のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトコラーゲン遺伝子のコドン最適化バリアントの使用により、対応する非コドン最適化野生型配列の異種発現の安定性及び／または収率と比較して、標的細胞（ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞等）におけるヒトコラーゲンの異種発現（ＲＮＡ及び／またはタンパク質）の安定性及び／または収率が増加する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号２の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１または配列番号２の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号１または配列番号２の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００個であるが、４３９５個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号２の核酸１～４３９２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号２の核酸１～４３９２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１Ａ２遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号４の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３または配列番号４の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号３または配列番号４の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００個であるが、４１０１個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号４の核酸１～４０９８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号４の核酸１～４０９８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ３Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５または配列番号６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５または配列番号６の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５または配列番号６の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号５または配列番号６の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号５または配列番号６の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００個であるが、４４０１個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５または配列番号６の核酸１～４３９８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５または配列番号６の核酸１～４３９８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ４Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号７または配列番号８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号７または配列番号８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号７または配列番号８の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号７または配列番号８の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号７または配列番号８の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも４５００、少なくとも５０００個であるが、５０１０個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号７または配列番号８の核酸１～５００７の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号７または配列番号８の核酸１～５００７の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ６Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号９または配列番号１０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号９または配列番号１０の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号９または配列番号１０の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号９または配列番号１０の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号９または配列番号１０の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００個であるが、３０８７個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号９または配列番号１０の核酸１～３０８４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号９または配列番号１０の核酸１～３０８４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ７Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１１または配列番号１２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１１または配列番号１２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１１または配列番号１２の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１１または配列番号１２の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号１１または配列番号１２の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも４５００、少なくとも５０００、少なくとも５５００、少なくとも６０００、少なくとも６５００、少なくとも７０００、少なくとも７５００、少なくとも８０００、少なくとも８５００個であるが、８８３５個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１１または配列番号１２の核酸１～８８３２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１１または配列番号１２の核酸１～８８３２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１７Ａ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１３または配列番号１４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１３または配列番号１４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１３または配列番号１４の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１３または配列番号１４の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号１３または配列番号１４の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００個であるが、４４９４個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１３または配列番号１４の核酸１～４４９１の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１３または配列番号１４の核酸１～４４９１の配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４から選択される配列を含む。
フィブロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、フィブロネクチン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトフィブロネクチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２３３５を参照のこと）、マウスフィブロネクチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１４２６８を参照のこと）、チンパンジーフィブロネクチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５９９２６を参照のこと）、ラットフィブロネクチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５６６１を参照のこと）、ウサギフィブロネクチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００３２８５８９を参照のこと）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のフィブロネクチン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のフィブロネクチン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブロネクチン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブロネクチン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトフィブロネクチン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＦＮ１遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３５または配列番号３６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３５または配列番号３６の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３５または配列番号３６の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５または配列番号３６の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号３５または配列番号３６の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも約４５００、少なくとも約５０００、少なくとも約５５００、少なくとも約６０００、少なくとも約６５００、少なくとも約７０００個であるが、７４３４個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３５または配列番号３６の核酸１～７４３１の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３５または配列番号３６の核酸１～７４３１の配列を含む。
エラスチンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、エラスチン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトエラスチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２００６を参照のこと）、マウスエラスチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１３７１７を参照のこと）、チンパンジーエラスチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４６３９４３を参照のこと）、ラットエラスチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５０４３を参照のこと）、ウサギエラスチン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００３４４２７１を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のエラスチン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のエラスチン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のエラスチン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のエラスチン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトエラスチン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＥＬＮ遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３７または配列番号３８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３７または配列番号３８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３７または配列番号３８の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３７または配列番号３８の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号３７または配列番号３８の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２２５０個であるが、２３６１個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３７または配列番号３８の核酸１～２３５８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３７または配列番号３８の核酸１～２３５８の配列を含む。
ルミカンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、ルミカン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトルミカン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０６０を参照のこと）、マウスルミカン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１７０２２を参照のこと）、チンパンジールミカン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５２１１９を参照のこと）、ラットルミカン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８１６８２を参照のこと）、ウサギルミカン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００００８６６５を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のルミカン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のルミカン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のルミカン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のルミカン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトルミカン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬＵＭ遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９または配列番号４０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９または配列番号４０の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９または配列番号４０の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３９または配列番号４０の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号３９または配列番号４０の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００個であるが、１０１７個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９または配列番号４０の核酸１～１０１４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号３９または配列番号４０の核酸１～１０１４の配列を含む。
ビトロネクチン及びビトロネクチン受容体タンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、ビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７４４８及び３６８５を参照のこと）、マウスビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２３７０及び１６４１０を参照のこと）、チンパンジービトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７３８２６１及び４５９８０７を参照のこと）、ラットビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２９１６９及び２５７６４５を参照のこと）、ウサギビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００００９１２８及び１００００８９５６を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＶＴＮ遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４１または配列番号４２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４１または配列番号４２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４１または配列番号４２の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４１または配列番号４２の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号４１または配列番号４２の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも約１２５０個であるが、１４３７個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４１または配列番号４２の核酸１～１０３４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４１または配列番号４２の核酸１～１０３４の配列を含む。
ラミニンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、ラミニン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトラミニン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２８４２１７、３９０８、３９０９、３９１０、３９１１、３９１２、３９１３、３９１４、３９１５、３９１８、及び１０３１９を参照のこと）、マウスラミニン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１６７７４、１６７８０、及び１６７８２を参照のこと）、チンパンジーラミニン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５５３３９、４６９６６８、及び４５７５７１を参照のこと）、ラットラミニン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３０７５８２、３０５０７８、及び１９２３６２を参照のこと）、ウサギラミニン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００３４６８８６及び１００３４２９０５を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のラミニン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のラミニン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のラミニン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のラミニン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトラミニン遺伝子、例えば、ヒトＬＡＭＡ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２８４２１７を参照のこと）、ヒトＬＡＭＡ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９０８を参照のこと）、ヒトＬＡＭＡ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９０９を参照のこと）、ヒトＬＡＭＡ４遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１０を参照のこと）、ヒトＬＡＭＡ５遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１１を参照のこと）、ヒトＬＡＭＢ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１２を参照のこと）、ヒトＬＡＭＢ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１３を参照のこと）、ヒトＬＡＭＢ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１４を参照のこと）、ヒトＬＡＭＣ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１５を参照のこと）、ヒトＬＡＭＣ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１８を参照のこと）、またはヒトＬＡＭＣ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０３１９を参照のこと）のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬＡＭＡ３遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４３または配列番号４４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４３または配列番号４４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４３または配列番号４４の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４３または配列番号４４の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号４３または配列番号４４の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも約４５００、少なくとも約５０００個であるが、５１７５個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４３または配列番号４４の核酸１～５１７２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４３または配列番号４４の核酸１～５１７２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬＡＭＢ３遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４５または配列番号４６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４５または配列番号４６の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４５または配列番号４６の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４５または配列番号４６の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号４５または配列番号４６の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００個であるが、３５１９個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４５または配列番号４６の核酸１～３５１６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４５または配列番号４６の核酸１～３５１６の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬＡＭＣ２遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４７または配列番号４８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４７または配列番号４８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４７または配列番号４８の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４７または配列番号４８の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号４７または配列番号４８の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００個であるが、３５８２個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４７または配列番号４８の核酸１～３５７９の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４７または配列番号４８の核酸１～３５７９の配列を含む。
神経調節タンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、神経調節遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、クロストリジウム・ボツリナム（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）神経調節遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５１８５０６１及び３９４８３７４０を参照のこと）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意の神経調節遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来の神経調節遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の神経調節遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の神経調節遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、クロストリジウム・ボツリナム神経調節遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、クロストリジウム・ボツリナムｂｏｔＡ遺伝子（またはそのコドン最適化変異形）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４９または配列番号５０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４９または配列番号５０の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４９または配列番号５０の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４９または配列番号５０の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号４９または配列番号５０の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも約１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００個であるが、３８９１個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４９または配列番号５０の核酸１～３８８８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号４９または配列番号５０の核酸１～３８８８の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、クロストリジウム・ボツリナムｂｏｔＢ遺伝子（またはそのコドン最適化バリアント）のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５１または配列番号５２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５１または配列番号５２の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５１または配列番号５２の配列の５’切断、３’切断、または断片を含む。いくつかの実施形態では、配列番号５１または配列番号５２の配列の５’切断、３’切断、または断片は、配列番号５１または配列番号５２の少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、または少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも約１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００個であるが、３８７６個未満の連続するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５１または配列番号５２の核酸１～３８７３の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、配列番号５１または配列番号５２の核酸１～３８７３の配列を含む。
フィブリリンタンパク質をコードするポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、フィブリリン遺伝子のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。例えば、ヒトフィブリリン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２００、２２０１、及び８４４６７を参照のこと）、マウスフィブリリン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１４１１８及び１４１１９を参照のこと）、チンパンジーフィブリリン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５３４１１、４７１６２１、及び４５５６６９を参照のこと）、ラットフィブリリン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８３７２７及び６８９００８を参照のこと）、ウサギフィブリリン遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１００３５０９３１、１００３５７１２６、及び１００３５９３３６を参照のこと）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のフィブリリン遺伝子（その任意のアイソフォームを含む）のコード配列は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のフィブリリン遺伝子ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブリリン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブリリン遺伝子（及び／またはそのコード配列）のうちのいずれかのコドン最適化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトフィブリリン遺伝子、例えば、ヒトＦＢＮ１遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２００を参照のこと）、ヒトＦＢＮ２遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２０１を参照のこと）、またはヒトＦＢＮ３遺伝子（例えば、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８４４６７を参照のこと）のコード配列を含む１つ以上のポリヌクレオチド（すなわち、１つ以上の第１のポリヌクレオチド及び／または１つ以上の第２のポリヌクレオチド）に関する。
例示的なポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４または３５～５２から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４または３５～５２から選択される配列を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４、３５～３８、または４３～４８から選択される核酸配列にと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、配列番号１～１４、３５～３８、または４３～４８から選択される配列を含む。
美容用タンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、追加のコード配列及び非コード配列をさらにコードし得る。追加のコード配列及び非コード配列の例としては、追加のポリペプチドタグをコードする配列（例えば、融合タンパク質を産生するために美容用タンパク質とインフレームでコードされる）、イントロン（例えば、天然、改変、または異種イントロン）、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ（例えば、天然、改変、または異種５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）等が挙げられるが、これらに限定されない。好適なポリペプチドタグの例としては、精製タグ、例えば、ｈｉｓタグ、フラグタグ、マルトース結合タンパク質及びグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼタグ、検出タグ、例えば、測光的に検出され得るタグ（例えば、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質等）及び検出可能な酵素活性を有するタグ（例えば、アルカリホスファターゼ等）、分泌配列、シグナル配列、リーダー配列、及び／または安定化配列、プロテアーゼ切断部位（例えば、フラン切断部位、ＴＥＶ切断部位、トロンビン切断部位等）等を含むタグの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、ポリヌクレオチドの安定性、局在化、及び／または翻訳効率を増加させる。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、タンパク質発現レベル及び／または持続時間を改善する。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、オフターゲット発現を遮断または低減し得る（例えば、特定の細胞型（例えば、神経細胞）における発現を阻害する、細胞周期の特定の時点での発現を阻害する、特定の発達段階での発現を阻害する等）エレメント（例えば、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位等）を含む。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、特定の細胞型（ヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞等）における美容用タンパク質発現を強化し得るエレメント（例えば、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位等）を含む。
いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０個以上等）の調節配列に作動可能に連結されている。「調節配列」という用語は、エンハンサー、インシュレーター、プロモーター、及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含み得る。例えば、哺乳類遺伝子（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトタンパク質、インスリン等）由来のエンハンサー配列、真核細胞ウイルス由来のエンハンサー配列（例えば、複製起点の後半側（ｂｐ１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後半側のポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサー等）、及びそれらの任意の組み合わせを含む、当該技術分野で既知の任意の好適なエンハンサー（複数可）が使用され得る。例えば、ヒトインターフェロンベータ遺伝子（ＩＦＮＢ１）由来のＨＳＶクロマチン境界（ＣＴＲＬ／ＣＴＣＦ結合／インシュレーター）エレメントＣＴＲＬ１及び／またはＣＴＲＬ２、ニワトリ高感受性部位４インシュレーター（ｃＨＳ４）、ヒトＨＮＲＰＡ２Ｂ１－ＣＢＸ３ユビキタスクロマチンオープニングエレメント（ＵＣＯＥ）、足場／マトリックス結合領域（Ｓ／ＭＡＲ）、ならびにそれらの任意の組み合わせを含む、当該技術分野で既知の任意の好適なインシュレーター（複数可）が使用され得る。例えば、ウイルス（ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等）のゲノムから得られるプロモーター、異種哺乳類遺伝子由来のプロモーター（アクチンプロモーター（例えば、β－アクチンプロモーター）、ユビキチンプロモーター（例えば、ユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーター）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーター等）、同種哺乳類遺伝子から得られるプロモーター（例えば、天然ヒトコラーゲン、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクトラミン、ラミニン、及び／またはフィブリリンプロモーター等）、合成プロモーター（ＣＡＧＧプロモーター等）、及びそれらの任意の組み合わせを含む、当該技術分野で既知の任意の好適なプロモーター（例えば、哺乳類宿主細胞での転写に好適なプロモーター）が使用され得るが、但し、宿主細胞と適合性であることを条件とする。調節配列は、核酸、ならびに組織特異的調節配列及び／または誘導性もしくは抑制性配列の構成的発現を指示する配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上の異種プロモーターに作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、１つ以上の異種プロモーターは、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター、時間的プロモーター、空間的プロモーター、誘導性プロモーター、及び抑制性プロモーターのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、１つ以上の異種プロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）即時早期プロモーター、ヒト伸長因子－１（ＥＦ１）プロモーター、ヒトβ－アクチンプロモーター、ヒトＵｂＣプロモーター、ヒトＰＧＦプロモーター、合成ＣＡＧＧプロモーター、及びそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（例えば、ヒトコラーゲンタンパク質）をコードする本開示のポリヌクレオチドは、ＨＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されている。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、リシルヒドロキシラーゼ３ポリペプチド（ＬＨ３）（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ケラチンＩ型細胞骨格１７ポリペプチド（ＫＲＴ１７）（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、トランスグルタミナーゼ（ＴＧＭ）ポリペプチド（例えば、ヒトＴＧＭ１ポリペプチド等のヒトトランスグルタミナーゼポリペプチド）（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ラミニンサブユニットベータ－３ポリペプチド（ＬＡＭＢ３）（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド、リシルヒドロキシラーゼ３ポリペプチド、ケラチンＩ型細胞骨格１７ポリペプチド、及び／またはそれらの任意のキメラポリペプチド（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド、リシルヒドロキシラーゼ３ポリペプチド、ケラチンＩ型細胞骨格１７ポリペプチド、トランスグルタミナーゼ（ＴＧＭ）ポリペプチド（例えば、ヒトＴＧＭ１ポリペプチド等のヒトトランスグルタミナーゼポリペプチド）、ラミニンサブユニットベータ－３（ＬＡＭＢ３）ポリペプチド（例えば、ヒトＬａｍＢ３ポリペプチド）、及び／またはそれらの任意のキメラポリペプチド（例えば、それをコードする導入遺伝子）のコード配列を含まない。
美容用タンパク質
コラーゲンタンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長コラーゲンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトコラーゲンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２４５２、Ｐ０８１２３、Ｐ０２４６１、Ｐ０２４６２、Ｐ０８５７２、Ｐ１２１０９、Ｑ０２３８８、Ｑ９ＵＭＤ９等を参照のこと）、マウスコラーゲンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１１０８７、Ｑ０１１４９、Ｐ０８１２１、Ｐ０２４６３、Ｐ０８１２２、Ｑ０４８５７、Ｑ６３８７０、Ｑ０７５６３等を参照のこと）、チンパンジーコラーゲンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ａ０Ａ２Ｉ３ＳＭ９８、Ａ０Ａ２Ｊ８Ｌ４８３、Ｈ２ＱＪ４６、Ｋ７Ｃ８Ｐ４、Ｋ７Ｃ８Ｗ０、Ａ０Ａ２Ｊ８Ｍ８Ｕ９、Ｈ２ＱＭＪ５、Ｈ２Ｑ２Ｊ４等を参照のこと）、ラットコラーゲンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２４５４、Ｐ０２４６６、Ｐ１３９４１、Ｐ０２４６６、Ｆ１Ｍ６Ｑ３、Ｄ３ＺＵＬ３、Ｄ３ＺＥ０４、Ｄ３ＺＥ０４等を参照のこと）、ウサギコラーゲンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｇ１Ｔ４Ａ５、Ｑ２８６６８、Ｇ１Ｔ８Ｊ０、Ｇ１Ｕ９Ｒ７、Ｇ１Ｔ５４８、Ｇ１Ｔ３８０、Ｇ１Ｔ５４８等を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のコラーゲンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。例えば、ＢＬＡＳＴ（登録商標）ｂｌａｓｔｐ ｓｕｉｔｅまたはＯｒｔｈｏＤＢ等のアミノ酸配列アラインメントプログラムの使用を含む、追加の種由来のコラーゲンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のコラーゲンポリペプチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のコラーゲンポリペプチドのうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示はヒトコラーゲンタンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、コラーゲンアルファ－１（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２４５２、配列番号１５を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０８１２３、配列番号１６を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２４５８を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２４６１、配列番号１７を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２４６２、配列番号１８を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０８５７２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－３（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ０１９５５を参照のこと）、コラーゲンアルファ－４（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－４）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ５３４２０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－５（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－５）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号２９４００を参照のこと）、コラーゲンアルファ－６（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－６）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１４０３１を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２０９０８を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０５９９７を参照のこと）、コラーゲンアルファ－３（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２５９４０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１２１０９、配列番号１９を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１２１１０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１２１１１を参照のこと）、コラーゲンアルファ－４（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－４）、コラーゲンアルファ－５（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－５）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ａ８ＴＸ７０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－６（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－６）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ａ６ＮＭＺ７を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ０２３８８、配列番号２０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ８）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２７６５８を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２０８４９を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１４０５５を参照のこと）、コラーゲンアルファ－３（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１４０５０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（Ｘ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１０）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ０３６９２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１２１０７を参照のこと）、コラーゲンアルファ－２（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１３９４２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９９７１５を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ５ＴＡＴ６を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１４）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ０５７０７を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１５）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ３９０５９を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１６）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ０７０９２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１７）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９ＵＭＤ９、配列番号２１を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１８）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ３９０６０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１９）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１４９９３を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２０）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９Ｐ２１８を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２１）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９６Ｐ４４を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２２）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ８ＮＦＷ１を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２３）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ８６Ｙ２２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２４）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１７ＲＷ２を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２５）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９ＢＸＳ０を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２６）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９６Ａ８３を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２７）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ８ＩＺＣ６を参照のこと）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２８）（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ２ＵＹ０９を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適なヒトコラーゲンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトコラーゲンポリペプチドのうちのいずれかをコードする配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。例えば、ＢＬＡＳＴ（登録商標）ｂｌａｓｔｐ ｓｕｉｔｅまたはＯｒｔｈｏＤＢ等のアミノ酸配列アラインメントプログラムの使用を含む、追加のヒトコラーゲンまたはコラーゲン様ポリペプチドホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１－１タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ１－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号１５の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００個であるが、１４６４個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１－２タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ１－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１６のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号１６の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００個であるが、１３６６個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ３タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１７のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号１７の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００個であるが、１４６６個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ４－１タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ４－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ４－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ４－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１８のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号１８の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００、少なくとも１５００、少なくとも１６００個であるが、１６６９個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ６－１タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ６－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ６－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ６－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１９のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号１９の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００個であるが、１０２８個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ７タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２０のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号２０の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００、少なくとも１５００、少なくとも１６００、少なくとも１７００、少なくとも１８００、少なくとも１９００、少なくとも２０００、少なくとも２１００、少なくとも２２００、少なくとも２３００、少なくとも２４００、少なくとも２５００、少なくとも２６００、少なくとも２７００、少なくとも２８００、少なくとも２９００個であるが、２９４４個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＣＯＬ１７タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＯＬ１７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＣＯＬ１７タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号２１の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００個であるが、１４９７個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、配列番号１５～２１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、配列番号１５～２１から選択される配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、配列番号１５～１７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質、さらなるヒトコラーゲンタンパク質、追加のヒトコラーゲンタンパク質、及び／または第２のヒトコラーゲンタンパク質）は、配列番号１５～１７から選択される配列を含む。
フィブロネクチンタンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長フィブロネクチンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトフィブロネクチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０２７５１を参照のこと）、マウスフィブロネクチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１１２７６を参照のこと）、チンパンジーフィブロネクチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１１２７６を参照のこと）、ラットフィブロネクチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０４９３７を参照のこと）、ウサギフィブロネクチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０４９３７を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のフィブロネクチンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のフィブロネクチンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のフィブロネクチンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブロネクチンタンパク質のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトフィブロネクチンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトフィブロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトフィブロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトフィブロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５３のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５３の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００、少なくとも１３００、少なくとも１４００、少なくとも１５００、少なくとも１６００、少なくとも１７００、少なくとも１８００、少なくとも１９００、少なくとも２０００、少なくとも２１００、少なくとも２２００、少なくとも２３００、少なくとも２４００個であるが、２４７７個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
エラスチン及び関連タンパク質
細胞外マトリックス中の弾性繊維は、組織に弾性特性を与える。弾性繊維は、概して、２つの形態学的に異なる成分、成熟エラスチン繊維と、主にフィブリリンを含有し、かつミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、フィブリリン、及びエラスチン－ミクロフィブリル界面局在化タンパク質（ＥＭＩＬＩＮ）等のさらなるタンパク質と会合しているクロフィブリルとを含有する。エラスチン及びその可溶性前駆体トロポエラスチンは、体内の主要な構造タンパク質に属する。
いくつかの実施形態では、本開示は、トロポエラスチン、フィブリリン、ミクロフィブリル関連糖タンパク質、フィブリリン、またはエラスチン－ミクロフィブリル界面局在化タンパク質を含む、エラスチンまたはエラスチン関連タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。いくつかの実施形態では、本開示は、全長エラスチンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトエラスチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１５５０２を参照のこと）、マウスエラスチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１５５０２を参照のこと）、チンパンジーエラスチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｈ２ＱＵＱ６を参照のこと）、ラットエラスチンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９９３７２を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のエラスチンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のエラスチンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のエラスチンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のエラスチンタンパク質のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトエラスチンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトエラスチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトエラスチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトエラスチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５４のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５４の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００個であるが、７８６個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
ルミカンタンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長ルミカンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトルミカンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ５１８８４を参照のこと）、マウスルミカンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ５１８８５を参照のこと）、チンパンジールミカンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｈ２Ｑ６Ｌ３を参照のこと）、ラットルミカンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｈ２Ｑ６Ｌ３を参照のこと）、ウサギルミカンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｏ４６３７９を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のルミカンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のルミカンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のルミカンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のルミカンタンパク質のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトルミカンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトルミカンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５５の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトルミカンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５５のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトルミカンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５５のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５５の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００個であるが、３３８個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
ビトロネクチン及びビトロネクチン受容体タンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長ビトロネクチンもしくはビトロネクチン受容体タンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０４００４及びＰ０６７５６を参照のこと）、マウスビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２９７８８及びＰ４３４０６を参照のこと）、チンパンジービトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｈ２ＱＣＨ３及びＨ２Ｒ６Ｃ３を参照のこと）、ラットビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ７ＴＱ１１を参照のこと）、ウサギビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２２４５８を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のビトロネクチンまたはビトロネクチン受容体タンパク質のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトビトロネクチンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトビトロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５６の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトビトロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトビトロネクチンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５６のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５６の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００個、少なくとも４００個であるが、４７８個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
ラミニンタンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長ラミニンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトラミニンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２５３９１、Ｐ２４０４３、Ｑ１６７８７、Ｑ１６３６３、Ｏ１５２３０、Ｐ０７９４２、Ｐ５５２６８、Ｑ１３７５１、Ｐ１１０４７、Ｑ１３７５３、及びＱ９Ｙ６Ｎ６を参照のこと）、マウスラミニンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ６１７８９、Ｑ６１０８７、及びＱ６１０９２を参照のこと）、チンパンジーラミニンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｈ２ＱＥＣ７、Ｈ２Ｒ０４１、及びＨ２Ｑ０Ｒ２を参照のこと）、ラットラミニンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｄ３ＺＮ０５、Ｆ１ＬＰＩ５、及びＦ１ＬＲＨ４を参照のこと）、ウサギラミニンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｇ１ＳＹ４０及びＡ０Ａ０Ｂ５ＪＳＨ０を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のラミニンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のラミニンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のラミニンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のラミニンタンパク質のうちのいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトラミニンタンパク質、例えば、ヒトラミニンサブユニットアルファ－１（ＬａｍＡ１）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２５３９１を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットアルファ－２（ＬａｍＡ２）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ２４０４３を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットアルファ－３（ＬａｍＡ３）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１６７８７を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットアルファ－４（ＬａｍＡ４）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１６３６３を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットアルファ－５（ＬａｍＡ５）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｏ１５２３０を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットベータ－１（ＬａｍＢ１）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０７９４２を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットベータ－２（ＬａｍＢ２）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ５５２６８を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットベータ－３（ＬａｍＢ３）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１３７５１を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットガンマ－１（ＬａｍＣ１）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ１１０４７を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットガンマ－２（ＬａｍＣ２）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ１３７５３を参照のこと）、ヒトラミニンサブユニットガンマ－３（ＬａｍＣ３）ポリペプチド（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９Ｙ６Ｎ６を参照のこと）等をコードする。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬａｍＡ３ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＡ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５７の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＡ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５７のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＡ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５７のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５７の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２２５０、少なくとも２５００、少なくとも２７５０、少なくとも３０００、少なくとも３２５０個であるが、３３３３個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬａｍＢ３ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＢ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５８の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＢ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５８のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＬａｍＢ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５８のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５８の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００個であるが、１１７２個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトＬａｍＣ２ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＣ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５９の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＬａｍＣ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５９のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ＬａｍＣ２ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号５９のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号５９の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００個であるが、１１９３個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
神経調節タンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長神経調節タンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、クロストリジウム・ボツリナムタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ０ＤＰＩ０、Ｑ４５８９４、Ｐ０ＤＰＩ１、Ｐ１０８４４、及びＢ１ＩＮＰ５を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意の神経調節タンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来の神経調節物質タンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示の神経調節タンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のいずれかの神経調節タンパク質の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、クロストリジウム・ボツリナム神経調節タンパク質をコードする。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、Ａ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、Ａ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６０の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、Ａ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６０のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本開示のＡ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質は、配列番号６０の２７位に対応する位置にアラニンからバリンへの変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ａ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６０のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号６０の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００個であるが、１２９６個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、Ｂ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、Ｂ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６１の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、Ｂ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、Ｂ型クロストリジウム・ボツリナム神経毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６１のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号６１の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１１００、少なくとも１２００個であるが、１２９１個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
フィブリリンタンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、全長フィブリリンタンパク質またはその任意のアイソフォームもしくは部分をコードする１つ以上のポリヌクレオチドに関する。例えば、ヒトフィブリリンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ３５５５５、Ｐ３５５５６、及びＱ７５Ｎ９０を参照のこと）、マウスフィブリリンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ６１５５４及びＱ６１５５５を参照のこと）、チンパンジーフィブリリンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ａ０Ａ２Ｉ３ＲＴＥ４及びＫ７ＣＺＸ０を参照のこと）、ラットフィブリリンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｇ３Ｖ９Ｍ６及びＦ１Ｍ５Ｑ４を参照のこと）、ウサギフィブリリンタンパク質（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｇ１ＳＫＭ２、Ｇ１ＳＵＳ５、及びＧ１Ｔ１Ｈ４を参照のこと）等を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な種由来の任意のフィブリリンタンパク質は、本開示のポリヌクレオチドによってコードされ得る。追加の種由来のフィブリリンタンパク質ホモログ／オルソログを特定する方法は、当業者に既知である。いくつかの実施形態では、本開示のフィブリリンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のフィブリリンタンパク質のいずれかの配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトフィブリリンタンパク質をコードする。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトフィブリリン－１タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号６２の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２２５０、少なくとも２５００、少なくとも２７５０個であるが、２８７１個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトフィブリリン－２タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６３の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６３のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６３のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号６３の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２２５０、少なくとも２５００、少なくとも２７５０個であるが、２９１２個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒトフィブリリン－３タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６４の配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６４のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、ヒトフィブリリン－３タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６４のアミノ酸配列のＮ末端切断、Ｃ末端切断、または断片をコードするポリヌクレオチドである。Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、または断片は、配列番号６４の少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも７５０、少なくとも１０００、少なくとも１２５０、少なくとも１５００、少なくとも１７５０、少なくとも２０００、少なくとも２２５０、少なくとも２５００、少なくとも２７５０個であるが、２８０９個未満の連続するアミノ酸を含み得る。
例示的な美容ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）は、配列番号１５～２１または５３～６４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）は、配列番号１５～２１または５３～６４から選択される配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）は、配列番号１５～２１、５３～５４、または５７～５９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上の美容用タンパク質（例えば、第１の美容用タンパク質、さらなる美容用タンパク質、追加の美容用タンパク質、及び／または第２の美容用タンパク質）は、配列番号１５～２１、５３～５４、または５７～５９から選択される配列を含む。
第１のポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、第１の美容用タンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸に関する。第１の美容用タンパク質は、例えば、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体、ラミニン、神経調節物質、フィブリリン等を含む、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の美容用タンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリリン等）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質）である。
いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの１つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０個以上等）のコピーを含む。いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つのコピーを含む。
いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、第１のヒトコラーゲンタンパク質である。第１のヒトコラーゲンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトコラーゲンタンパク質のうちのいずれであり得る。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、またはＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ３である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－１である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－２である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ６－１である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１７である。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質から本質的になる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質からなる。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質である。
キメラポリペプチド
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質を含むキメラポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の美容用タンパク質及びさらなる美容用タンパク質を含むキメラポリペプチドである。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質を連結するリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、ｎ末端からｃ末端の方向に、第１の美容用タンパク質－リンカーポリペプチド－さらなる美容用タンパク質、を含む。例えば、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体、ラミニン、神経調節物質、フィブリリン等を含む、第１の美容用タンパク質及び／またはさらなる美容用タンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の美容用タンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質及び／またはさらなる美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリリン等）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質及び／またはさらなる美容用タンパク質は、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質は同じである。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質とさらなる美容用タンパク質は異なる。
いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、切断可能なリンカーポリペプチドである。例えば、Ｔ２Ａリンカー、Ｐ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、及びＦ２Ａリンカー等を含む、当該技術分野で既知の任意の切断可能なリンカーポリペプチドが、本開示のキメラポリペプチドに使用され得る。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、Ｔ２Ａリンカーポリペプチドである。Ｔ２Ａリンカーポリペプチドをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２４として提供される。Ｔ２Ａリンカーポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２８として提供される。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、Ｐ２Ａリンカーポリペプチドである。Ｐ２Ａリンカーポリペプチドをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２５として提供される。Ｐ２Ａリンカーポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、配列番号２９として提供される。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、Ｅ２Ａリンカーポリペプチドである。Ｅ２Ａリンカーポリペプチドをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２６として提供される。Ｅ２Ａリンカーポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、配列番号３０として提供される。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、Ｆ２Ａリンカーポリペプチドである。Ｆ２Ａリンカーポリペプチドをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２７として提供される。Ｆ２Ａリンカーポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、配列番号３１として提供される。
いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、配列番号２８～３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは配列番号２８～３１から選択される配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、第１のコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）であり、さらなる美容用タンパク質は、さらなるコラーゲンタンパク質（例えば、さらなるヒトコラーゲンタンパク質）である。第１のヒトコラーゲンタンパク質、リンカーポリペプチド、及びさらなるヒトコラーゲンタンパク質を含むキメラポリペプチドをコードする例示的な核酸配列は、配列番号３２として提供される。
いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は第１のヒトコラーゲンタンパク質であり、さらなる美容用タンパク質はさらなるヒトコラーゲンタンパク質である。さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトコラーゲンタンパク質のうちのいずれであり得る。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、またはＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ３である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－１である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－２である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ６－１である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７である。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。いくつかの実施形態では、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１７である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質は同じである。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質とさらなるヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－２である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ６－１であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ７であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ１７である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１７であり、さらなるヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ７である。
いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は、第１のラミニンタンパク質（例えば、第１のヒトラミニンタンパク質）であり、さらなる美容用タンパク質は、さらなるラミニンタンパク質（例えば、さらなるヒトラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質は第１のヒトラミニンタンパク質であり、さらなる美容用タンパク質はさらなるヒトラミニンタンパク質である。さらなるヒトラミニンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトラミニンタンパク質のうちのいずれであり得る。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、さらなるヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、さらなるヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドであり、さらなるヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、モノシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、モノシストロニックｍＲＮＡは、第１のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、ポリシストロニックｍＲＮＡは、第１のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
ポリシストロニックｍＲＮＡ
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、ポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、ポリシストロニックｍＲＮＡは、第１のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、（１）前記第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、及び（２）追加の美容用タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、ポリシストロニックｍＲＮＡは、第１のＯＲＦと第２のＯＲＦを分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリシストロニックｍＲＮＡは、５’から３’の方向に、第１のポリペプチドをコードする第１のＯＲＦ－ＩＲＥＳ－追加の美容用タンパク質をコードする第２のＯＲＦ、を含む。第１のポリペプチドは、本明細書に記載の第１のポリペプチドのうちのいずれかであり得る。追加の美容用タンパク質は、例えば、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体、ラミニン、神経調節物質、フィブリリン等を含む、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の美容用タンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、追加の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリリン等）である。いくつかの実施形態では、追加の美容用タンパク質は、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質）である。
例えば、ウイルス由来ＩＲＥＳ（例えば、ポリオウイルス、サイウイルス、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、口蹄疫ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、クラシックブタ熱ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、クリケット麻痺ウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス等に由来するＩＲＥＳ）、細胞ｍＲＮＡ由来ＩＲＥＳ（例えば、線維芽細胞増殖因子２、血小板由来増殖因子Ｂ、及び血管内皮増殖因子等の増殖因子ｍＲＮＡ由来のＩＲＥＳ、アンテナペディア、ウルトラバイソラックス、及びＮＦ－κＢ抑制因子等の転写因子ｍＲＮＡに由来するＩＲＥＳ、ｃ－ｍｙｃ、ｐｉｍ－１、及びタンパク質キナーゼｐ５８ＰＩＴＳＬＲＥ等のがん遺伝子ｍＲＮＡに由来するＩＲＥＳ等）、合成ＩＲＥＳ（例えば、ＣＰ１４８ ＩＲＥＳ）、及び他のもの（例えば、Ｍｏｋｒｅｊｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖｉｒａｌ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｒｉｂｏｓｏｍｅ Ｅｎｔｒｙ Ｓｉｔｅｓ．Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｆ ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｎｅｗ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｈａｕｐｐａｕｇｅ，ＮＹ：Ｎｏｖａ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；ｐｐ．１３３－１６６を参照のこと）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適なＩＲＥＳが、本開示のポリシストロニックｍＲＮＡに使用され得る。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳは、ＣＰ１４８ ＩＲＥＳである。ＣＰ１４８ ＩＲＥＳをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２２として提供される。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳは、ＥＭＣＶ ＩＲＥＳである。ＥＭＣＶ ＩＲＥＳをコードする例示的な核酸配列は、配列番号２３として提供される。
いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳをコードする核酸配列は、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳをコードする核酸配列は、配列番号２２または配列番号２３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）であり、追加の美容用タンパク質は、追加のコラーゲンタンパク質（例えば、追加のヒトコラーゲンタンパク質）である。第１のＯＲＦ、ＩＲＥＳ、及び第２のＯＲＦを含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする例示的な核酸は、配列番号３３または配列番号３４として提供される。追加のヒトコラーゲンタンパク質は、本明細書に記載のヒトコラーゲンタンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、またはＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ３である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－１である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－２である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ６－１である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７である。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。いくつかの実施形態では、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１７である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質は同じである。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質と追加のヒトコラーゲンタンパク質は異なる。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－２である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ６－１であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ７であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１７であり、追加のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のコラーゲンタンパク質（例えば、第１のヒトコラーゲンタンパク質）であり、追加の美容用タンパク質は、追加のコラーゲンタンパク質（例えば、追加のヒトコラーゲンタンパク質）である。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のラミニンタンパク質（例えば、第１のヒトラミニンタンパク質）であり、追加の美容用タンパク質は、追加のラミニンタンパク質（例えば、追加のヒトラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは第１のヒトラミニンタンパク質であり、追加の美容用タンパク質は追加のヒトラミニンタンパク質である。追加のヒトラミニンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトラミニンタンパク質のうちのいずれであり得る。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、追加のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、追加のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドであり、追加のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。
第２のポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示は、第２の美容用タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む組換え核酸に関する。第２の美容用タンパク質は、例えば、コラーゲンタンパク質、フィブロネクチン、エラスチン、ルミカン、ビトロネクチン／ビトロネクチン受容体、ラミニン、神経調節物質、フィブリリン等を含む、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知の美容用タンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、構造的細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリリン等）である。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、またはラミニンタンパク質）である。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と第２の美容用タンパク質は同じである。いくつかの実施形態では、第１の美容用タンパク質と第２の美容用タンパク質は異なる。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のポリヌクレオチドの１つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のポリヌクレオチドの２つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、１０個以上等）のコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第２のポリヌクレオチドの２つのコピーを含む。
いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、コラーゲンタンパク質である。いくつかの実施形態では、第２の美容用タンパク質は、第２のヒトコラーゲンタンパク質である。第２のヒトコラーゲンタンパク質は、本明細書に記載のヒトコラーゲンタンパク質のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、またはＣＯＬ２８から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ３である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－１である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ４－２である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ６－１である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７である。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ７ではない。いくつかの実施形態では、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１７である。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは第１のコラーゲンタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドは第２のコラーゲンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードし、第２のポリヌクレオチドは第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質（第１のポリヌクレオチドによってコードされる）と第２のヒトコラーゲンタンパク質（第２のポリヌクレオチドによってコードされる）は同じである。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質（第１のポリヌクレオチドによってコードされる）と第２のヒトコラーゲンタンパク質（第２のポリヌクレオチドによってコードされる）は異なる。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２である。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－２であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１－１である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ３であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ４－２である。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ６－１であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ７、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ７であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ１７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のヒトコラーゲンタンパク質はＣＯＬ１７であり、第２のヒトコラーゲンタンパク質は、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ６－１、またはＣＯＬ７から選択される。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、第１のラミニンタンパク質（例えば、第１のヒトラミニンタンパク質）をコードし、第２のポリヌクレオチドは、第２のラミニンタンパク質（例えば、第２のヒトラミニンタンパク質）をコードする。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは第１のヒトラミニンポリペプチドをコードし、第２のポリヌクレオチドは第２のヒトラミニンタンパク質をコードする。第２のヒトラミニンタンパク質は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒトラミニンタンパク質のうちのいずれであり得る。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、第２のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＡ３ポリペプチドであり、第２のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＢ３ポリペプチドであり、第２のヒトラミニンタンパク質はヒトＬａｍＣ２ポリペプチドである。
組換え核酸
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのうちのいずれか１つ以上を含む組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの１つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの１つのコピー及び第２のポリヌクレオチドの１つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの１つのコピー及び第２のポリヌクレオチドの２つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つのコピー及び第２のポリヌクレオチドの１つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１のポリヌクレオチドの２つのコピー及び第２のポリヌクレオチドの２つのコピーを含む。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、ベクター（例えば発現ベクター、ディスプレイベクター等）である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターである。一般に、対象において１つ以上のポリペプチドを産生するためにポリヌクレオチドを維持する、増殖させる、及び／または発現させるのに好適なベクターが使用され得る。好適なベクターの例としては、例えば、プラスミド、コスミド、エピソーム、トランスポゾン、及びウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、麻疹ベクター、ヘルペスウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター等）が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、ヘルペスウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、宿主細胞内で自律複製することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、宿主細胞内で自律複製することができない。いくつかの実施形態では、ベクターは、宿主ＤＮＡに組み込むことができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、宿主ＤＮＡに組み込むことができない（例えば、エピソームである）。例えば、化学合成による、または核酸の単離されたセグメントの人為的操作による（例えば、遺伝子操作技法による）、目的とする１つ以上のポリヌクレオチドを含むベクターを作製する方法は、当業者に周知である。
いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）アンプリコンである。構造的特徴及びそれを作製する方法を含むヘルペスウイルスアンプリコンは、当業者に一般に既知である（例えば、ｄｅ Ｓｉｌｖａ Ｓ．ａｎｄ Ｂｏｗｅｒｓ Ｗ．“Ｈｅｒｐｅｓ Ｖｉｒｕｓ Ａｍｐｌｉｃｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ”．Ｖｉｒｕｓｅｓ ２００９，１，５９４－６２９を参照のこと）。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスアンプリコンは、ＨＳＶ－１アンプリコンである。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスアンプリコンは、ＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンである。ＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンの例としては、ＨＳＶ／ＡＡＶハイブリッドアンプリコン、ＨＳＶ／ＥＢＶハイブリッドアンプリコン、ＨＳＶ／ＥＢＶ／ＲＶハイブリッドアンプリコン、及び／またはＨＳＶ／スリーピングビューティーハイブリッドアンプリコンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アンプリコンは、ＨＳＶ／ＡＡＶハイブリッドアンプリコンである。いくつかの実施形態では、アンプリコンは、ＨＳＶ／スリーピングビューティーハイブリッドアンプリコンである。
いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸は、組換えヘルペスウイルスゲノムである。例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム、組換え水痘帯状疱疹ウイルスゲノム、組換えヒトサイトメガロウイルスゲノム、組換えヘルペスウイルス６Ａゲノム、組換えヘルペスウイルス６Ｂゲノム、組換えヘルペスウイルス７ゲノム、組換えカポジ肉腫関連ヘルペスウイルスゲノム、及びそれらの任意の組み合わせまたは任意の誘導体を含む、組換えヘルペスウイルスゲノムは、当該技術分野で既知のＤＮＡウイルスのヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ）の任意のメンバー由来の組換えゲノムであり得る。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上等）の不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の不活性化変異は、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上等）のヘルペスウイルス遺伝子に存在する。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、（例えば、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムと比較して）弱毒化されている。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノムは、複製欠損である。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換え単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換え単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）ゲノム、組換え単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ－２）ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、組換えＨＳＶ－１ゲノムである。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上等）の不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の不活性化変異は、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０以上等）の単純ヘルペスウイルス遺伝子に存在する。本明細書で使用される場合、「不活性化変異」とは、（例えば、不活性化変異を欠く対応する配列と比較して）低下した、検出不能な、または排除された量及び／または機能を有する遺伝子またはレギュロン産物（ＲＮＡまたはタンパク質）をもたらす任意の変異を指し得る。不活性化変異の例としては、欠失、挿入、点変異、ならびに転写制御配列（プロモーター、エンハンサー、インシュレーター等）及び／または所与の遺伝子もしくはレギュロンのコード配列の再配列が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ｑＰＣＲ、ノーザンブロット、ＲＮＡｓｅｑ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ等を含む、当該技術分野で既知の遺伝子またはレギュロン産物の量を測定する任意の好適な方法が使用され得る。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、感染細胞タンパク質（または感染細胞ポリペプチド）（ＩＣＰ）０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）４１、及び／またはＵＬ５５単純ヘルペスウイルス遺伝子のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、または８つ全てに不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ３４．５単純ヘルペスウイルス遺伝子及び／またはＩＣＰ４７単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含まない（例えば、免疫刺激ウイルスの産生を回避するために）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ３４．５単純ヘルペスウイルス遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含まない。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４７単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含まない。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ３４．５単純ヘルペスウイルス遺伝子（一方または両方のコピー）及びＩＣＰ４７単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含まない。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、腫瘍溶解性ではない。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ＵＬ４１、及び／またはＵＬ５５遺伝子に開始変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、及び／またはＵＬ４１遺伝子のコード配列の欠失である。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換えヘルペス複合体ウイルスゲノムは、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ＵＬ４１、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４遺伝子（一方または両方のコピー）に不活性化変異を含み、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、及び／またはＵＬ４１遺伝子のコード配列の欠失である。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ＵＬ４１、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含み、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＩＣＰ２２及び／またはＵＬ４１遺伝子のコード配列の欠失である。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ４７、ＵＬ４１、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＩＣＰ２７遺伝子のコード配列の欠失である。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４７遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４７遺伝子に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＵＬ４１、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＩＣＰ４７遺伝子のコード配列の欠失である。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及び／またはＵＬ５５遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＵＬ４１遺伝子のコード配列の欠失である。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含み、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及び／またはＵＬ４１遺伝子に不活性化変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、不活性化変異は、ＵＬ５５遺伝子のコード配列の欠失である。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＲＬ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｅｐｅａｔ ｌｏｎｇ）領域及びＩＲＳ（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｅｐｅａｔ ｓｈｏｒｔ）領域を含む内部反復（連結）領域に不活性化変異（例えば、その欠失）を含む。いくつかの実施形態では、連結領域の不活性化（例えば、欠失）は、ＩＣＰ４遺伝子及びＩＣＰ０遺伝子の各々１つのコピーを排除する。いくつかの実施形態では、連結領域の不活性化（例えば、欠失）は、ＩＣＰ２２遺伝子及びＩＣＰ４７遺伝子のプロモーターをさらに不活性化する（例えば、欠失させる）。所望される場合、これらの遺伝子の一方または両方の発現は、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムへの即時早期プロモーターの挿入によって回復し得る（例えば、Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９９５）．Ｎａｔｕｒｅ ３７５（６５３０）：４１１－４１５、Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（１９９８）．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７（３）：３４１－３４８を参照のこと）。理論に拘束されることを望むことなく、連結領域を不活性化する（例えば、欠失させる）ことが、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムの安定性に寄与し得る、及び／または組換え単純ヘルペスウイルスゲノムがより多くの及び／またはより大きい導入遺伝子を収容することを可能にすると考えられる。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、及びＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、及びＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、及びＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、及び／またはＵＬ５５遺伝子における不活性化変異は、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、及び／またはＵＬ５５遺伝子のコード配列の欠失である。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ２２遺伝子及びＩＣＰ４７遺伝子における不活性化変異は、ＩＣＰ２２遺伝子及びＩＣＰ４７遺伝子のプロモーター領域の欠失である（例えば、ＩＣＰ２２コード配列及びＩＣＰ４７コード配列はインタクトであるが、転写的に活性ではない）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２７、及びＵＬ５５遺伝子のコード配列の欠失、ならびにＩＣＰ２２遺伝子及びＩＣＰ４７遺伝子のプロモーター領域の欠失を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０遺伝子及び／またはＵＬ４１遺伝子に不活性化変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）及びＩＣＰ４（一方または両方のコピー）遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、及びＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、及びＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、及びＵＬ５５遺伝子に不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、及び／またはＵＬ５５遺伝子における不活性化変異は、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、及び／またはＵＬ５５遺伝子のコード配列の欠失を含む。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ＩＣＰ４７遺伝子及び／またはＵＬ４１遺伝子に不活性化変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、１、２、３、４、５、６、７つ、またはそれ以上のウイルス遺伝子座内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む。好適なウイルス遺伝子座の例としては、ＩＣＰ０（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ４（一方または両方のコピー）、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ｔｋ、ＵＬ４１、及びＵＬ５５単純ヘルペスウイルス遺伝子座が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＩＣＰ２２遺伝子座内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＩＣＰ２２遺伝子座に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＩＣＰ２２遺伝子座に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＵＬ４１遺伝子座内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＵＬ４１遺伝子座に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＵＬ４１遺伝子座に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含み、ウイルスＩＣＰ２２遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド及びＩＣＰ２２遺伝子座に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド及びＩＣＰ２２遺伝子座に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含み、ウイルスＵＬ４１遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド及びＵＬ４１遺伝子座に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド及びＵＬ４１遺伝子座に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。いくつかの実施形態では、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムは、ウイルスＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含み、ウイルスＩＣＰ２２遺伝子座内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含み、ウイルスＵＬ４１遺伝子座内に本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む（例えば、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドならびにＩＣＰ２２遺伝子座及びＵＬ４１遺伝子座に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス、ＩＣＰ４遺伝子座の一方または両方に第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドならびにＩＣＰ２２遺伝子座及びＵＬ４１遺伝子座に第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドを保有する組換えウイルス等）。
いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）は、１つ以上の毒性単純ヘルペス遺伝子（ＨＳＶ ＩＣＰ０遺伝子の一方または両方のコピー、ＨＳＶ ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピー、ＩＣＰ２２遺伝子、及び／またはＵＬ４１遺伝子）の発現を低減または排除するように操作されている。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノム（例えば、野生型単純ヘルペスウイルスゲノム）と比較して、組換えゲノムの細胞毒性を低減するように操作されている（例えば、標的細胞に導入された場合）。いくつかの実施形態では、組換えウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）の細胞毒性（例えば、ヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞における）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低減される（例えば、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムに対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）単純ヘルペスウイルスゲノムの相対的細胞毒性の測定、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムに対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）／ΔＩＣＰ２２単純ヘルペスウイルスゲノムの相対的細胞毒性の測定等）。いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）の細胞毒性（例えば、ヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞における）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムと比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、少なくとも約１０００倍、またはそれ以上低減される（例えば、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムに対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）単純ヘルペスウイルスゲノムの相対的細胞毒性の測定、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムに対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）／ΔＩＣＰ２２単純ヘルペスウイルスゲノムの相対的細胞毒性の測定等）。例えば、生体色素（ホルマザン色素）、プロテアーゼバイオマーカー、ＭＴＴアッセイ（またはＸＴＴ、ＭＴＳ、水溶性テトラゾリウム塩等の関連テトラゾリウム塩を使用するアッセイ）の使用、ＡＴＰ含有量の測定等を含む、細胞毒性を測定する方法は、当業者に既知である。
いくつかの実施形態では、組換えヘルペスウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノム（例えば、野生型単純ヘルペスウイルスゲノム）と比較して、標的細胞の組換えゲノムへの曝露後の宿主細胞増殖に対するその影響を低減するように操作されている。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、表皮細胞及び／または真皮細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ケラチノサイト及び／または線維芽細胞である。いくつかの実施形態では、組換えゲノムへの曝露後の宿主細胞増殖（例えば、ヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の宿主細胞増殖と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％速い（例えば、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の細胞増殖に対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の相対的細胞増殖の測定、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の細胞増殖に対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）／ΔＩＣＰ２２単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の相対的細胞増殖の測定等）。いくつかの実施形態では、組換えゲノムへの曝露後の宿主細胞増殖（例えば、ヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞）は、対応する野生型ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の宿主細胞増殖と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１０００倍速い（例えば、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の細胞増殖に対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の相対的細胞増殖の測定、ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞（初代細胞または細胞株）における野生型単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の細胞増殖に対する組換えΔＩＣＰ４（一方または両方のコピー）／ΔＩＣＰ２２単純ヘルペスウイルスゲノムへの曝露後の相対的細胞増殖の測定等）。例えば、Ｋｉ６７細胞増殖アッセイ、ＢｒｄＵ細胞増殖アッセイ等の使用を含む、細胞増殖の測定方法は、当業者に既知である。
ベクター（例えば、ヘルペスウイルスベクター）は、宿主細胞におけるポリヌクレオチドの発現に好適な形態で本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含み得る。ベクターは、（例えば、上述のように）発現されるポリヌクレオチドに作動的に連結された１つ以上の調節配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組換え核酸（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）は、任意の配向で組換え核酸に挿入された本明細書に記載のポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む。組換え核酸が本明細書に記載の２つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上等）のポリヌクレオチドを含む場合、ポリヌクレオチドは、互いに同じ配向でまたは反対の配向で挿入され得る。理論に拘束されることを望むことなく、２つのポリヌクレオチド（例えば、２つの導入遺伝子）をアンチセンス配向で組換え核酸（例えば、ベクター）に組み込むことにより、リードスルーを回避し、各ポリヌクレオチドの適切な発現を確実にする助けとなり得る。
ＩＶ．ウイルス
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載のポリヌクレオチド及び／または組換え核酸のうちのいずれかを含むウイルスに関する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、対象（例えば、ヒト）の１つ以上の標的細胞に感染することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ポリヌクレオチド及び／または組換え核酸を対象（例えば、ヒト対象）の１つ以上の標的細胞に送達するのに好適である。いくつかの実施形態では、１つ以上の標的細胞は、１つ以上のヒト細胞である。いくつかの実施形態では、１つ以上の標的細胞は、皮膚の１つ以上の細胞（例えば、表皮、真皮、及び／または皮下の１つ以上の細胞）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞は、ケラチノサイト、メラノサイト、ランゲルハンス細胞、メルケル細胞、マスト細胞、線維芽細胞、及び／または脂肪細胞から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞は、ケラチノサイトである。いくつかの実施形態では、１つ以上の細胞は、角質層、顆粒層、有棘層、基底層、及び／または基底膜に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上の標的細胞は、１つ以上の表皮細胞である。
例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、センダイウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ワクシニアウイルス、及び／またはそれらの任意のハイブリッドウイルスを含む、当該技術分野で既知の任意の好適なウイルスが使用され得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは、弱毒化されている。いくつかの実施形態では、ウイルスは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、改変されていない野生型ウイルスの組織トロピズムに対してその組織トロピズムを変化させるように改変されている。いくつかの実施形態では、ウイルスは、対応する野生型ウイルスと比較して低減された細胞毒性を有する。組換え核酸を含むウイルスを産生するための方法は、当業者に周知である。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、例えば、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス６Ａ、ヘルペスウイルス６Ｂ、ヘルペスウイルス７、及びカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス等を含む、ＤＮＡウイルスのヘルペスウイルス科のメンバーである。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、弱毒化されている。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、対応する野生型ヘルペスウイルスと比較して低減された細胞毒性を有する。いくつかの実施形態では、ヘルペスウイルスは、腫瘍溶解性ではない。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルスである。組換え核酸を含む単純ヘルペスウイルスは、例えば、ＷＯ２０１５／００９９５２及び／またはＷＯ２０１７／１７６３３６に開示されるプロセスによって産生され得る。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、弱毒化されている。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、複製能を有する。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、複製欠損である。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ－２）、またはそれらの任意の誘導体である。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）である。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１は、弱毒化されている。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１は、対応する野生型ＨＳＶ－１と比較して低減された細胞毒性を有する。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ－１は、腫瘍溶解性ではない。
いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、改変されていない野生型単純ヘルペスウイルスの組織トロピズムに対してその組織トロピズムを変化させるように改変されている。いくつかの実施形態では、単純ヘルペスウイルスは、改変エンベロープを含む。いくつかの実施形態では、改変エンベロープは、１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上等）の変異単純ヘルペスウイルス糖タンパク質を含む。単純ヘルペスウイルス糖タンパク質の例としては、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＨ、及びｇＬが挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、改変エンベロープは、野生型単純ヘルペスウイルスに対して単純ヘルペスウイルス組織トロピズムを変化させる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の標的細胞（例えば、１つ以上のヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞）に対する本開示のウイルス（例えば、ヘルペスウイルス）の形質導入効率（インビトロ及び／またはインビボ）は、少なくとも約２５％である。例えば、１つ以上の標的細胞に対するウイルスの形質導入効率は、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、またはそれ以上であり得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、１つ以上の標的細胞（例えば、１つ以上のヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞）に対するウイルスの形質導入効率は、約８５％～約１００％である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、１つ以上の標的細胞（例えば、１つ以上のヒトケラチノサイト及び／または線維芽細胞）に対するウイルスの形質導入効率は、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％である。例えば、ｑＰＣＲ分析、ディープシーケンシング、ウエスタンブロッティング、蛍光定量分析（蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、蛍光レポーター遺伝子発現、免疫蛍光、ＦＡＣＳ等）等を含む、インビトロまたはインビボでウイルス形質導入効率を測定する方法は、当業者に周知である。
Ｖ．組成物及び配合物
本開示の特定の態様は、組換え核酸（例えば、組換えヘルペスウイルスゲノム）及び／またはウイルス（例えば、本明細書に記載の組換えゲノムを含むヘルペスウイルス（組換え単純ヘルペスウイルスゲノムを含む単純ヘルペスウイルス等）のうちのいずれかと、賦形剤または担体（例えば、薬学的に許容される賦形剤または担体）とを含む組成物及び配合物（例えば、薬学的組成物及び配合物）に関する。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、美容用組成物または配合物（例えば、スキンケア製品）である。
いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、本明細書に記載のウイルス（例えば、ヘルペスウイルス）のうちのいずれか１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、約１０４～約１０１２プラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬのウイルスを含む。例えば、組成物または配合物は、約１０４～約１０１２、約１０５～約１０１２、約１０６～約１０１２、約１０７～約１０１２、約１０８～約１０１２、約１０９～約１０１２、約１０１０～約１０１２、約１０１１～約１０１２、約１０４～約１０１１、約１０５～約１０１１、約１０６～約１０１１、約１０７～約１０１１、約１０８～約１０１１、約１０９～約１０１１、約１０１０～約１０１１、約１０４～約１０１０、約１０５～約１０１０、約１０６～約１０１０、約１０７～約１０１０、約１０８～約１０１０、約１０９～約１０１０、約１０４～約１０９、約１０５～約１０９、約１０６～約１０９、約１０７～約１０９、約１０８～約１０９、約１０４～約１０８、約１０５～約１０８、約１０６～約１０８、約１０７～約１０８、約１０４～約１０７、約１０５～約１０７、約１０６～約１０７、約１０４～約１０６、約１０５～約１０６、または約１０４～約１０５ＰＦＵ／ｍＬのウイルスを含む。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８、約１０９、約１０１０、約１０１１、または約１０１２ＰＦＵ／ｍＬのウイルスを含む。
本明細書に記載の組成物及び配合物（例えば、薬学的組成物及び配合物）は、所望の純度を有する活性成分（複数可）（組換え核酸またはウイルス等）を１つ以上の許容される担体または賦形剤と混合することによって調製され得る。許容される担体または賦形剤（例えば、薬学的に許容される担体または賦形剤）は、一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これらには、緩衝液（リン酸、クエン酸、酢酸、及び他の有機酸等）、抗酸化剤（アスコルビン酸及びメチオニン等）、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、アルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール等）、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン等）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等）、ポリオール（グリセロール等、例えば１０％グリセロールを含む配合物）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドン等）、単糖、二糖、及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）、キレート剤（ＥＤＴＡ等）、糖（スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール等）、塩形成対イオン（ナトリウム等）、金属錯体（Ｚｎ－タンパク質錯体等）、リポソーム（例えば、カチオン性脂質）、ナノ粒子担体、及び／または非イオン性界面活性剤（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）が含まれ得るが、これらに限定されない。担体の詳細な考察は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎ．Ｊ．１９９１）で見つけることができる。
いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、１つ以上の脂質（例えば、カチオン性脂質）担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、１つ以上のナノ粒子担体を含む。ナノ粒子は、カプセル化薬物（迅速放出または制御放出のための合成小分子、タンパク質、ペプチド、細胞、ウイルス、及び核酸ベースの生物学的治療薬等）を運ぶことができるサブミクロン（約１０００ｎｍ未満）のサイズの薬物送達ビヒクルである。様々な分子（例えば、タンパク質、ペプチド、組換え核酸等）は、当該技術分野で周知のプロセスを使用して、ナノ粒子中に効率的にカプセル化され得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子中に「カプセル化」された分子とは、ナノ粒子中に含有されているか、ナノ粒子の表面に付着している及び／またはそれと会合しているか、またはそれらの任意の組み合わせである分子（ウイルス等）を指し得る。本明細書に記載の組成物または配合物に使用するためのナノ粒子は、例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ、ＰＧＡ、及びそれらの任意の組み合わせを含むナノ粒子を含む、当該技術分野で既知の任意のタイプの生体適合性ナノ粒子であり得る（例えば、Ｖａｕｔｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ Ｒｅｖ．（２００３）５５：５１９－４８、ＵＳ２００７／０１４８０７４、ＵＳ２００７／００９２５７５、ＵＳ２００６／０２４６１３９、ＵＳ５７５３２３４、ＵＳ７０８１４８３、及びＷＯ２００６／０５２２８５を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、担体または賦形剤（例えば、薬学的に許容される担体または賦形剤）は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、皮膚、鼻腔内、気管内、舌下、頬、局所、経口、経皮、皮内、腹腔内、眼窩内、硝子体内、網膜下、経粘膜、関節内、表面注射による、埋め込みによる、吸入による、髄腔内、脳室内、及び／または鼻腔内投与を含む、当該技術分野で既知の任意の投与経路に適合され得るか、またはそれに好適であり得る。いくつかの実施形態では、担体または賦形剤（例えば、薬学的に許容される担体または賦形剤）は、局所、経皮、皮下、及び／または皮内投与に適合され得るか、またはそれに好適であり得る。いくつかの実施形態では、担体または賦形剤は、局所、経皮、及び／または皮内投与に適合され得るか、またはそれに好適であり得る。いくつかの実施形態では、担体または賦形剤は、表面注射に適合され得るか、またはそれに好適であり得る。
局所、経皮、皮下、表面、及び／または皮内適用／投与での使用に適合されたまたはそれに好適な担体または賦形剤の例としては、軟膏、油、ペースト、クリーム、エアロゾル、懸濁液、乳剤、脂肪性軟膏、ゲル、粉末、液体、ローション、溶液、スプレー、パッチ（例えば、経皮パッチまたはマイクロニードルパッチ）、接着ストリップ、マイクロニードルまたはマイクロニードルアレイ、及び吸入剤が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、担体または賦形剤（例えば、薬学的に許容される担体または賦形剤）は、軟膏、油、ペースト、クリーム、エアロゾル、懸濁液、乳剤、脂肪性軟膏、ゲル、粉末、液体ローション、溶液、スプレー、接着ストリップ、及び吸入剤のうちの１つ以上（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上等）を含む。いくつかの実施形態では、担体は、経皮パッチまたはマイクロニードルパッチ等のパッチ（例えば、皮膚に付着するパッチ）を含む。いくつかの実施形態では、担体は、マイクロニードルまたはマイクロニードルアレイを含む。組成物の送達に好適なマイクロニードルアレイを作製及び使用する方法は、当該技術分野で一般に既知である（Ｋｉｍ Ｙ．ｅｔ ａｌ．“Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ａｎｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ”．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１２，６４（１４）：１５４７－６８）。
いくつかの実施形態では、組成物または配合物（例えば、薬学的組成物または配合物）は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、皮膚、経口、鼻腔内、気管内、舌下、口腔内、局所、経皮、皮内、腹腔内、眼窩内、硝子体内、網膜下、経粘膜、関節内、表面注射による、埋め込みによる、吸入による、髄腔内、脳室内、及び／または鼻腔内投与を含む、当該技術分野で既知の任意の投与経路に適合されるか、またはそれに好適である。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、皮膚、局所、経皮、皮下、及び／または皮内投与に適合されるか、またはそれに好適である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物または配合物は、局所、経皮、及び／または皮内投与に適合されるか、またはそれに好適である。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、皮内投与に適合されるか、またはそれに好適である。いくつかの実施形態では、配合物の組成物は、表面注射に適合されるか、またはそれに好適である。
いくつかの実施形態では、組成物または配合物（例えば、薬学的組成物または配合物）は、１つ以上の追加の成分をさらに含む。追加の成分の例としては、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、充填剤（例えば、ラクトース及び他の糖、微結晶性セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリル酸、またはリン酸水素ナトリウム等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、水素化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等）、崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム等）、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム等）、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトーゼ、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、甘味料、香味料、香料、着色剤、保湿剤、日焼け防止剤、抗菌剤、ポリヌクレオチドを安定化させるか、またはそれらの分解を阻止することができる薬剤等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースゲルを含む。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、リン酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物または配合物は、グリセロール（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１５％等）を含む。
インビボ投与のために使用される組成物及び配合物（例えば、薬学的組成物及び配合物）は、一般に、無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって、容易に達成され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、コラーゲンタンパク質（例えば、コラーゲン３等のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを対象の１つ以上の細胞（例えば、１つ以上のコラーゲン欠損細胞）に送達するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、療法に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、コラーゲンポリペプチドの発現から利益を受けるであろう美容的または審美的状態（例えば、コラーゲン欠損に関連する美容的または審美的状態（例えば、老化及び／または紫外線損傷皮膚））の治療に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、（例えば、以下に記載される）皮膚科学的老化の治療に使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、薬剤の調製または製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、コラーゲンタンパク質（例えば、コラーゲン３等のヒトコラーゲンタンパク質）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを対象の１つ以上の細胞（例えば、１つ以上のコラーゲン欠損細胞）に送達するのに有用な薬剤の調製または製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、コラーゲンポリペプチドの発現から利益を受けるであろう美容的または審美的状態（例えば、コラーゲン欠損に関連する美容的または審美的状態（例えば、老化及び／または紫外線損傷皮膚））の治療に有用な薬剤の調製または製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、及び／または組成物もしくは配合物のいずれも、（例えば、以下に記載される）皮膚科学的老化の治療に有用な薬剤の調製または製造に使用され得る。
ＶＩ．方法
本開示のある特定の態様は、対象（例えば、対象の１つ以上の細胞）における１つ以上の皮膚細胞外マトリックスタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本開示の他の態様は、対象における皮膚細胞外マトリックスの構造及び／または組織を安定させるまたは改善する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
本開示の他の態様は、対象（例えば、対象の１つ以上の細胞）における１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、対象への組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の投与は、対象の１つ以上の対応する未処理細胞（例えば、処理前の１つ以上の細胞、処理中の１つ以上の非感染細胞等）におけるコラーゲン（複数可）の内因性レベルと比較して、対象の１つ以上の細胞におけるコラーゲン（例えば、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ１－１及びＣＯＬ１－２、ＣＯＬ１－１、及びＣＯＬ３等）レベル（転写物またはタンパク質レベル）を少なくとも約１０％増加させる。例えば、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の投与は、対象の１つ以上の対応する未処理細胞におけるコラーゲン（複数可）の内因性レベルと比較して、対象の１つ以上の細胞におけるコラーゲンレベル（転写物またはタンパク質レベル）を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、またはそれ以上増加させ得る。いくつかの実施形態では、対象への組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の投与は、対象の１つ以上の対応する未処理細胞（例えば、処理前の１つ以上の細胞、処理中の１つ以上の非感染細胞等）におけるコラーゲン（複数可）の内因性レベルと比較して、対象の１つ以上の細胞におけるコラーゲンレベル（転写物またはタンパク質レベル）を少なくとも約２倍増加させる。例えば、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の投与は、対象の１つ以上の対応する未処理細胞におけるコラーゲン（複数可）の内因性レベルと比較して、対象の１つ以上の細胞におけるコラーゲンレベル（転写物またはタンパク質レベル）を少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、少なくとも約１０００倍、またはそれ以上増加させ得る。例えば、ｑＰＣＲ、ＲＮＡｓｅｑ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、質量分析等を含む、試料由来の転写物またはタンパク質レベルを測定する方法は、当業者に周知である。
本開示の他の態様は、対象の軟組織を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、対象の軟組織に注射される。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線（例えば、太陽、タンニングベッド等由来）への曝露により損傷している。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、対象の軟組織を修復及び／または増強する方法に使用され得る。いくつかの実施形態では、「組織修復」とは、組織アーキテクチャ及び／または機能の復元を指し、組織再生及び置換を包含する。いくつかの実施形態では、軟組織の修復または増強とは、（例えば、外観が経時的な老化、または他の物理的、化学的、もしくは紫外線損傷に起因する欠陥による「老化」した皮膚と比較して）皮膚の若々しい外観を復元するために使用される手順を指す。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、例えば、しわ、線、折り目、瘢痕を満たし、真皮組織を強化する（例えば、薄い唇をふっくらとさせる、窪んだ目及び／またはこけた頬を満たす等）ための美容的軟組織用途に有用である。
本開示の他の態様は、皮膚の質、状態、及び／または外観の改善を必要とする対象における皮膚の質、状態、及び／または外観を改善する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、皮膚の状態は、日光による損傷、老化、紫外線曝露、粗いきめ、皮膚のたるみ、及び／またはしわのうちの１つ以上である。皮膚の質、状態、及び／または外観の改善（例えば、処理前と比較した）は、例えば、ＦＡＣＥ Ｑ、ＧＡＩＳ等を含む、当該技術分野で既知の任意の適切な方法またはスケールを使用して評価され得る。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線（例えば、太陽、タンニングベッド等由来）への曝露により損傷している。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
本開示の他の態様は、皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観の減少を必要とする対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の投与は、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる。いくつかの実施形態では、対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観は、組成物の投与前の対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観と比較して、組成物の投与後に減少する。いくつかの実施形態では、皮膚における１つ以上の表面陥凹は、細かい線及びしわ（例えば、額のしわ、「目尻のしわ」、目または口の縁のしわ等）のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、１つ以上の表皮陥凹の治療は、未治療皮膚と比較した、滑らかさ、水分補給、及び弾性等の皮膚のきめまたは質の改善によって測定される。いくつかの実施形態では、１つ以上の表皮陥凹の治療は、表皮陥凹の重症度（例えば、深さ）の減少及び／または皮膚の所与の領域における細かい線もしくはしわの数の減少によって測定される。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線（例えば、太陽、タンニングベッド等由来）への曝露により損傷している。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
本開示の他の態様は、対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、及び／または張りのうちの少なくとも１つを増加させる及び／または改善する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、組成物の投与後少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、増加した及び／または改善されたきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを維持する。いくつかの実施形態では、対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つが、組成物の投与前の対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りと比較して、組成物の投与後に増加する及び／または改善される。皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、及び／または張りを測定する方法は、当業者者に既知である。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、老化している皮膚である。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、紫外線（例えば、太陽、タンニングベッド等由来）への曝露により損傷している。いくつかの実施形態では、対象の皮膚は、しわになっている。
本開示の他の態様は、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減を必要とする対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する方法であって、対象に、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減には、細かい線及び／またはしわの治療、減少、及び／または予防；皮膚の毛穴径の減少；皮膚の厚み、ふっくら感、及び／または張り感の改善；皮膚の滑らかさ、しなやかさ、及び／または柔らかさの改善；皮膚の色調、輝き、及び／または透明度の改善；プロコラーゲン及び／またはコラーゲン産生の改善；皮膚のきめの改善及び／または再度きめを整えることの促進；皮膚輪郭の外観の改善；皮膚のつや及び／または明るさの復元；老化及び／または閉経により減退した皮膚外観の改善；皮膚保湿の改善；皮膚の弾性及び／または弾力性の増加；治療、軽減、及び／または予防もしくは皮膚のたるみ；皮膚の締まりの改善；色素斑、斑のある皮膚、及び／または瘢痕（座瘡瘢痕等）の減少；及び／または光回折または反射による皮膚の光学的特性の改善のうちのいずれか１つ以上が含まれる。いくつかの実施形態では、対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候は、組成物の投与前の対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候と比較して、組成物の投与後に軽減される。当該技術分野で既知の皮膚科学的老化の１つ以上の兆候を測定するための任意の好適な方法が使用され得る。
いくつかの実施形態では、対象の皮膚の１つ以上の部分は、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物のうちのいずれかの有効量での治療前に擦過されるか、またはより透過性にされる。例えば、皮膚ローラーの使用、皮膚細胞層を除去するための接着ストリップの繰り返しの使用（テープ剥離）、メスまたはブレードでの掻爬、サンドペーパーの使用、化学的透過促進剤または電気エネルギーの使用、音波エネルギーまたは超音波エネルギーの使用、光（例えば、レーザー）エネルギーの使用、表皮を完全に貫通しないが、表皮を突き刺すのに好適な長さを有するミクロンサイズの針またはブレードの使用等を含む、皮膚を擦過するか、または皮膚の透過性を増加させる任意の好適な方法が使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、皮膚における１つ以上の表面陥凹を減少させるまたは除去する、１つ以上のしわを減少させるまたは除去する、及び／または１つ以上のしわの発生または再発を予防する等の美容的用途のためのものである。いくつかの実施形態では、皮膚における１つ以上の表面陥凹またはしわは、鼻唇溝、目尻のしわ、眉間しわ線、額のしわ、瘢痕、眉間のしわ、眉毛下垂、眼頬溝、鼻頬線、バニーライン、頬／顔面中央下垂、マリオネットライン、ポピーえくぼ形成、笑線、笑いじわ、顎のひだ、首のしわ、広頸筋帯、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、「有効量」とは、特定の状態（例えば、皮膚老化等の美容状態）の１つ以上の兆候または症状の測定可能な改善または予防に影響を及ぼすのに必要とされる少なくとも最小量である。「有効量」は、患者の年齢、性別、及び体重等の要因に応じて変化し得る。有効量は、有益な効果が治療の任意の毒性作用または有害作用を上回る量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本開示の目的のために、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の有効量は、直接または間接的のいずれかで測定可能な改善を達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または組成物と併せて達成される場合も達成されない場合もある。したがって、「有効量」は、１つ以上の薬剤を投与する状況において考慮され得、１つ以上の他の薬剤と併せて望ましい結果が達成され得るか、または達成された場合、単一の薬剤が有効量で与えられたとみなされ得る。
いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、対象に１回投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、対象に少なくとも２回（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも１０回等）投与される。いくつかの実施形態では、投与間（例えば、第１の投与と第２の投与との間、第２の投与と第３の投与との間等）で、少なくとも約１５日（例えば、少なくとも約１５日、少なくとも約２０日、少なくとも約３０日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約８０日、少なくとも約９０日、少なくとも約１００日、少なくとも約１２０日等）が経過している。
本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物もしくは配合物は、経口投与、舌下投与、口腔投与、局所投与、直腸投与、吸入による投与、経皮投与、皮下注射、皮内注射、表面注射、静脈内（ＩＶ）注射、動脈内注射、筋肉内注射、心臓内注射、骨内注射、腹腔内注射、経粘膜投与、膣内投与、尿道内投与、硝子体内投与、眼窩内投与、網膜下投与、関節内投与、関節周囲投与、局部投与、皮膚上投与、またはそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の好適な方法または経路によって投与され得る。したがって、本開示は、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物のうちのいずれかを個体に送達する方法を包含する。
いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物は、対象に、皮膚、局所、経皮、皮下、または皮内投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物は、皮内及び／または皮下投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物は、表面注射を介して投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物は、局所及び／または経皮投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物は、１日１回、２回、３回、４回、５回、またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物もしくは配合物は、個体の１つ以上の罹患（例えば、皺になった）領域に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、個体の１つ以上の罹患していない領域に投与される。
いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、皮膚にある表面深さで投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約２０００ミクロン以下の深さで皮膚に導入される。例えば、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約２０００ミクロン以下、約１７５０ミクロン以下、約１５００ミクロン以下、約１２５０ミクロン以下、約１０００ミクロン以下、約９００ミクロン以下、約８００ミクロン以下、約７００ミクロン以下、約６００ミクロン以下、または約５００ミクロン以下の深さで皮膚に投与され得る。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約０．５ｍｍ～５．０ｍｍの注射深さで導入される。例えば、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約０．５ｍｍ～５．０ｍｍ、約０．５ｍｍ～４．５ｍｍ、約０．５ｍｍ～４．０ｍｍ、約０．５ｍｍ～３．５ｍｍ、約０．５ｍｍ～３．０ｍｍ、約０．５ｍｍ～２．５ｍｍ、約０．５ｍｍ～２．０ｍｍ、約０．５ｍｍ～１．５ｍｍ、約０．５ｍｍ～１．０ｍｍ、１．０ｍｍ～５．０ｍｍ、約１．０ｍｍ～４．５ｍｍ、約１．０ｍｍ～４．０ｍｍ、約１．０ｍｍ～３．５ｍｍ、約１．０ｍｍ～３．０ｍｍ、約１．０ｍｍ～２．５ｍｍ、約１．０ｍｍ～２．０ｍｍ、約１．０ｍｍ～１．５ｍｍ、１．５ｍｍ～５．０ｍｍ、約１．５ｍｍ～４．５ｍｍ、約１．５ｍｍ～４．０ｍｍ、約１．５ｍｍ～３．５ｍｍ、約１．５ｍｍ～３．０ｍｍ、約１．５ｍｍ～２．５ｍｍ、約１．５ｍｍ～２．０ｍｍ等の注射深さで導入され得る。
いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約１ｍｍ～約３０ｍｍの距離で離間された注射によって投与される。例えば、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、約１ｍｍ～３０ｍｍ、２ｍｍ～３０ｍｍ、５ｍｍ～３０ｍｍ、１０ｍｍ～３０ｍｍ、１５ｍｍ～３０ｍｍ、１ｍｍ～２０ｍｍ、２ｍｍ～２０ｍｍ、５ｍｍ～２０ｍｍ、１０ｍｍ～２０ｍｍ、１５ｍｍ～２０ｍｍ、１ｍｍ～１５ｍｍ、２ｍｍ～１５ｍｍ、５ｍｍ～１５ｍｍ、１０ｍｍ～１５ｍｍ、１ｍｍ～１０ｍｍ、２ｍｍ～１０ｍｍ、５ｍｍ～１０ｍｍ、１ｍｍ～５ｍｍ、２ｍｍ～５ｍｍ等の距離で離間された注射によって投与され得る。いくつかの実施形態では、注射は、少なくとも約１ｍｍ、少なくとも約２ｍｍ、少なくとも約５ｍｍ、少なくとも約１０ｍｍ、少なくとも約１５ｍｍ、少なくとも約２０ｍｍ、少なくとも約３０ｍｍ、またはそれ以上の距離で離間される。
例えば、顔、額、唇、頭皮、首、腕、手、脚、膝、足、胸、背中、鼠径部、臀部、大腿等を含む、身体の多数の領域が、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物で治療され得る。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、顔に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の鼻唇溝に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、片目または両目の周囲に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、１つ以上の目尻のしわに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の眉間しわ線に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の瘢痕（例えば、座瘡瘢痕）に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の眉間のしわに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の眉毛下垂に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の深い眼頬溝に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、１つ以上の鼻頬線に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、１つ以上のバニーラインに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、１つ以上の頬／顔面中央下垂に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上のマリオネットラインに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つのまたはポピーえくぼ形成部位に投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の顎のひだに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物は、１つ以上の首のしわに投与される。いくつかの実施形態では、組換え核酸、ウイルス、薬物、及び／または組成物は、１つ以上の広頸筋帯に投与される。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、組換え核酸が対象の１つ以上の標的細胞に送達されると、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）を発現する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、１つ以上の標的細胞におけるヒトコラーゲンレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、１つ以上の標的細胞によって分泌されるヒトコラーゲンレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、細胞外マトリックス中のヒトコラーゲンレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、対象における細胞外マトリックスの安定性を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、対象の軟組織を強化する、増強する、及び／または補充する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、個体の皮膚の質、状態、及び／または外観を改善する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹（例えば、しわ）を減少させる。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、及び／または張りを改善する。いくつかの実施形態では、美容用タンパク質（複数可）（例えば、ヒトコラーゲン）の発現は、対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する。
ＶＩＩ．宿主細胞
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の組換え核酸のうちのいずれかを含む１つ以上の宿主細胞に関する。例えば、真正細菌を含む原核細胞、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルミニア属（Ｅｒｍｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）（例えば、Ｓ．チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ））、セラシア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）（例えば、Ｓ．マルセセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ））、及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）等の腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ならびにＢ．サブティリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等の桿菌、真菌細胞（例えば、Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、昆虫細胞（例えば、Ｓ２細胞等）、及び哺乳類細胞（例えば、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎臓株（懸濁培養液中での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４）、サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、ヒトヘパトーマ（Ｈｅｐ Ｇ２）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＤＨＦＲ”ＣＨＯ細胞）、ならびにＮＳ０及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株）を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な宿主細胞（原核細胞または真核細胞）が使用され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒトまたは非ヒト霊長類細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｖｅｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、補完宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞（例えば、Ｖｅｒｏ細胞）は、１つ以上の単純ヘルペスウイルス遺伝子（例えば、ＩＣＰ４遺伝子）を発現する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、細胞株由来の細胞である。好適な宿主細胞または細胞株の例としては、２９３、ＨｅＬａ、ＳＨ－Ｓｙ５ｙ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＣＡＣＯ－２、Ａ５４９、Ｌ９２９、３Ｔ３、Ｋ５６２、ＣＨＯ－Ｋ１、ＭＤＣＫ、ＨＵＶＥＣ、Ｖｅｒｏ、Ｎ２０、ＣＯＳ－７、ＰＳＮ１、ＶＣａＰ、ＣＨＯ細胞等が挙げられ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、組換え核酸は、単純ヘルペスウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、単純ヘルペスウイルスアンプリコンである。いくつかの実施形態では、組換え核酸は、ＨＳＶ－１アンプリコンまたはＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンである。いくつかの実施形態では、ヘルパーウイルスを含む宿主細胞は、本明細書に記載のＨＳＶ－１アンプリコンまたはＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンと接触し、本明細書に記載の１つ以上の組換え核酸を含むウイルスの産生をもたらす。いくつかの実施形態では、ウイルスは、接触した宿主細胞の上清から収集される。ヘルパーウイルスを含む宿主細胞をＨＳＶ－１アンプリコンまたはＨＳＶ－１／ハイブリッドアンプリコンと接触させることによってウイルスを作製する方法は、当該技術分野で既知である。
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、補完宿主細胞である。いくつかの実施形態では、補完宿主細胞は、本明細書に記載のウイルスベクターのうちのいずれかにおいて不活性化される１つ以上の遺伝子を発現する。いくつかの実施形態では、補完宿主細胞は、本明細書に記載の組換えヘルペスウイルスゲノム（例えば、組換え単純ヘルペスウイルスゲノム）と接触させられる。いくつかの実施形態では、補完宿主細胞を組換えヘルペスウイルスゲノムと接触させることにより、本明細書に記載の１つ以上の組換え核酸を含むヘルペスウイルスの産生がもたらされる。いくつかの実施形態では、ウイルスは、接触した宿主細胞の上清から収集される。補完宿主細胞を組換え単純ヘルペスウイルスと接触させることによってウイルスを作製する方法は、概して、ＷＯ２０１５／００９９５２及び／またはＷＯ２０１７／１７６３３６に記載されている。
ＶＩＩＩ．製品またはキット
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載の組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物（例えば、薬学的組成物もしくは配合物）のうちのいずれかを含む製品またはキットに関する。いくつかの実施形態では、製品またはキットは、（例えば、皮膚細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン）欠乏症を治療するための及び／または１つ以上の皮膚科学的老化兆候を矯正するための）組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物の投与に関する指示を含む添付文書を含む。
組換え核酸、ウイルス、薬剤、及び／または組成物もしくは配合物に好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグ、チューブ、及びシリンジが挙げられ得る。容器は、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニルもしくはポリオレフィン等）、または金属合金（ステンレス鋼もしくはハステロイ等）等の様々な材料から形成され得る。いくつかの実施形態では、容器は、容器上にラベルを含むか、または容器に関連するラベルを含み、ラベルは、使用に関する指示を示す。製品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、添付文書等を含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
ＩＸ．列挙される実施形態
実施形態１：
（ａ）組換え核酸を含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であって、前記組換え核酸が、第１のヒトコラーゲンタンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む、前記ＨＳＶと、
（ｂ）賦形剤と
を含む、組成物。
実施形態２：前記組換え核酸が、前記第１のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む、実施形態１の組成物。
実施形態３：前記ＨＳＶが複製欠損である、実施形態１または２の組成物。
実施形態４：前記ＨＳＶが複製能を有する、実施形態１または２の組成物。
実施形態５：前記ＨＳＶが、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、またはそれらの任意の誘導体である、実施形態１～４のいずれか１つの組成物。
実施形態６：前記組換え核酸が、単純ヘルペスウイルスアンプリコンである、実施形態１～５のいずれか１つの組成物。
実施形態７：前記単純ヘルペスウイルスアンプリコンが、ＨＳＶ－１アンプリコンまたはＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンである、実施形態６の組成物。
実施形態８：前記ＨＳＶ－１ハイブリッドアンプリコンが、ＨＳＶ／ＡＡＶハイブリッドアンプリコン、ＨＳＶ／ＥＢＶハイブリッドアンプリコン、及びＨＳＶ／ＥＢＶ／ＲＶハイブリッドアンプリコン、またはＨＳＶ／スリーピングビューティーハイブリッドアンプリコンである、実施形態７の組成物。
実施形態９：前記組換え核酸が、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである、実施形態１～５のいずれか１つの組成物。
実施形態１０：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、組換えＨＳＶ－１ゲノム、組換えＨＳＶ－２ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である、実施形態９の組成物。
実施形態１１：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９または１０の組成物。
実施形態１２：前記単純ヘルペスウイルス遺伝子が、感染細胞タンパク質（ＩＣＰ）０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、チミジンキナーゼ（ｔｋ）、ロングユニーク領域（ＵＬ）４１、及びＵＬ５５からなる群から選択される、実施形態１１の組成物。
実施形態１３：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む、実施形態１２の組成物。
実施形態１４：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態１２または１３の組成物。
実施形態１５：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態１２～１４のいずれか１つの組成物。
実施形態１６：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ０遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態１２～１５のいずれか１つの組成物。
実施形態１７：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態１２～１６のいずれか１つの組成物。
実施形態１８：前記不活性化変異が、前記遺伝子（複数可）のコード配列の欠失である、実施形態１１～１７のいずれか１つの組成物。
実施形態１９：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９～１８のいずれか１つの組成物。
実施形態２０：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９～１９のいずれか１つの組成物。
実施形態２１：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９～２０のいずれか１つの組成物。
実施形態２２：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９～２１のいずれか１つの組成物。
実施形態２３：前記ＨＳＶが、野生型単純ヘルペスウイルスと比較して減少した細胞毒性を有する、実施形態１～２２のいずれか１つの組成物。
実施形態２４：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、コラーゲンアルファ－１（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｉ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２）、コラーゲンアルファ－１（ＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ３）、コラーゲンアルファ－１（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－３）、コラーゲンアルファ－４（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－４）、コラーゲンアルファ－５（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－５）、コラーゲンアルファ－６（ＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ４－６）、コラーゲンアルファ－１（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－１）、コラーゲンアルファ－２（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－２）、コラーゲンアルファ－３（Ｖ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ５－３）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－３）、コラーゲンアルファ－４（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－４）、コラーゲンアルファ－５（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－５）、コラーゲンアルファ－６（ＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ６－６）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ８）、コラーゲンアルファ－１（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－１）、コラーゲンアルファ－２（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－２）、コラーゲンアルファ－３（ＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ９－３）、コラーゲンアルファ－１（Ｘ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－１）、コラーゲンアルファ－２（ＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１１－２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１７）、コラーゲンアルファ－１（ＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１８）、コラーゲンアルファ－１（ＸＩＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ１９）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２０）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２１）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２２）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２３）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＩＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２４）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２５）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２６）、コラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２７）、及びコラーゲンアルファ－１（ＸＸＶＩＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ２８）からなる群から選択される、実施形態１～２３のいずれか１つの組成物。
実施形態２５：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態１～２４のいずれか１つの組成物。
実施形態２６：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態１～２５のいずれか１つの組成物。
実施形態２７：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態１～２６のいずれか１つの組成物。
実施形態２８：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質がＣＯＬ７ではない、実施形態１～２７のいずれか１つの組成物。
実施形態２９：前記第１のポリペプチドが、
（ａ）前記第１のヒトコラーゲンタンパク質、
（ｂ）さらなるヒトコラーゲンタンパク質、及び
（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチド
を含む、実施形態１～２８のいずれか１つの組成物。
実施形態３０：前記リンカーポリペプチドが切断可能なリンカーポリペプチドである、実施形態２９の組成物。
実施形態３１：前記リンカーポリペプチドが、配列番号２８～３１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態２９または３０の組成物。
実施形態３２：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態２９～３１のいずれか１つの組成物。
実施形態３３：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態２９～３２のいずれか１つの組成物。
実施形態３４：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態２９～３３のいずれか１つの組成物。
実施形態３５：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態２９～３４のいずれか１つの組成物。
実施形態３６：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態２９～３５のいずれか１つの組成物。
実施形態３７：前記第１のポリヌクレオチドが、
（ａ）前記第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、
（ｂ）追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のＯＲＦ、及び
（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）
を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする、実施形態１～３６のいずれか１つの組成物。
実施形態３８：前記ＩＲＥＳをコードする前記核酸配列が、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態３７の組成物。
実施形態３９：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態３７または３８の組成物。
実施形態４０：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態３７～３９のいずれか１つの組成物。
実施形態４１：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態３７～４０のいずれか１つの組成物。
実施形態４２：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態３７～４１のいずれか１つの組成物。
実施形態４３：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態３７～４２のいずれか１つの組成物。
実施形態４４：前記組換え核酸が、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態１～４３のいずれか１つの組成物。
実施形態４５：前記組換え核酸が、前記第２のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む、実施形態４４の組成物。
実施形態４６：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態４４または４５の組成物。
実施形態４７：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態４４～４６のいずれか１つの組成物。
実施形態４８：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態４４～４８のいずれか１つの組成物。
実施形態４９：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態４４～４８のいずれか１つの組成物。
実施形態５０：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態４４～４９のいずれか１つの組成物。
実施形態５１：前記組換え核酸が組換え単純ヘルペスウイルスゲノムであり、前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態４４～５０のいずれか１つの組成物。
実施形態５２：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態５１の組成物。
実施形態５３：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態５１または５２の組成物。
実施形態５４：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態５１～５３のいずれか１つの組成物。
実施形態５５：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含み、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態５１～５４のいずれか１つの組成物。
実施形態５６：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含み、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態５１～５４のいずれか１つの組成物。
実施形態５７：前記賦形剤が、皮膚（全身または局所）、経皮、皮下、及び／または皮内投与のために適合される、実施形態１～５６のいずれか１つの組成物。
実施形態５８：前記賦形剤が、ヒドロキシプロピルメチルセルロースゲルを含む、実施形態１～５７のいずれか１つの組成物。
実施形態５９：前記賦形剤が、皮内投与のために適合される、実施形態１～５８のいずれか１つの組成物。
実施形態６０：前記賦形剤が、リン酸緩衝液を含む、実施形態１～５９のいずれか１つの組成物。
実施形態６１：前記賦形剤が、グリセロールを含む、実施形態１～６０のいずれか１つの組成物。
実施形態６２：前記賦形剤が、脂質担体を含む、実施形態１～６１のいずれか１つの組成物。
実施形態６３：前記賦形剤が、ナノ粒子担体を含む、実施形態１～６２のいずれか１つの組成物。
実施形態６４：美容用組成物である、実施形態１～６３のいずれか１つの組成物。
実施形態６５：前記美容用組成物がスキンケア製品である、実施形態６４の組成物。
実施形態６６：
（ａ）実施形態１～６５のいずれか１つの組成物と、
（ｂ）前記組成物の投与に関する指示と
を含む、キット。
実施形態６７：対象における１つ以上のヒトコラーゲンタンパク質のレベルを強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態６８：対象の軟組織を強化する、増加させる、増強する、及び／または補充する方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態６９：前記組成物が、前記対象の軟組織に注射される、実施形態６８の方法。
実施形態７０：皮膚の質、状態、及び／または外観の改善を必要とする対象における皮膚の質、状態、及び／または外観を改善する方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態７１：前記状態が、日光による損傷、老化、紫外線曝露、粗いきめ、皮膚のたるみ、しわ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態７０の方法。
実施形態７２：皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観の減少を必要とする対象の皮膚における１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態７３：前記組成物の投与が、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、前記対象の皮膚における前記１つ以上の表面陥凹の外観を減少させる、実施形態７２の方法。
実施形態７４：前記対象の皮膚における前記１つ以上の表面陥凹の外観が、前記組成物の投与前の前記対象の皮膚における前記１つ以上の表面陥凹の外観と比較して、前記組成物の投与後に減少する、実施形態７２または７３の方法。
実施形態７５：皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つの増加及び／または改善の必要とする対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを増加させる及び／または改善する方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態７６：前記対象の皮膚が、前記組成物の投与後少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間にわたって、増加した及び／または改善されたきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つを維持する、実施形態７５の方法。
実施形態７７：前記対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りのうちの少なくとも１つが、前記組成物の投与前の前記対象の皮膚のきめ、滑らかさ、弾性、または張りと比較して、前記組成物の投与後に増加する及び／または改善される、実施形態７５または７６の方法。
実施形態７８：前記対象の皮膚が、老化している皮膚である、実施形態７０～７７のいずれか１つの方法。
実施形態７９：前記対象の皮膚が、紫外線光への曝露により損傷している、実施形態７０～７８のいずれか１つの方法。
実施形態８０：前記対象の皮膚がしわになっている、実施形態７０～７９のいずれか１つの方法。
実施形態８１：１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減を必要とする対象における１つ以上の皮膚科学的老化兆候を軽減する方法であって、前記対象に、実施形態１～６５のいずれか１つの組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
実施形態８２：前記１つ以上の皮膚科学的老化兆候の軽減が、（ａ）小じわ及び／またはしわの治療、減少、及び／または予防、（ｂ）皮膚の毛穴径の減少、（ｃ）皮膚の厚み、ふっくら感、及び／または張り感の改善、（ｄ）皮膚の滑らかさ、しなやかさ、及び／または柔らかさの改善、（ｅ）皮膚の色調、輝き、及び／または透明度の改善、（ｆ）プロコラーゲン及び／またはコラーゲン産生の改善、（ｇ）皮膚のきめの改善及び／または再度きめを整えることの促進、（ｈ）皮膚輪郭の外観の改善、（ｉ）皮膚のつや及び／または明るさの復元、（ｊ）老化及び／または閉経により減退した皮膚外観の改善、（ｋ）皮膚保湿の改善、（ｌ）皮膚の弾性及び／または弾力性の増加、（ｍ）治療、軽減、及び／または予防もしくは皮膚のたるみ、（ｎ）皮膚の締まりの改善、（ｏ）色素斑、斑のある皮膚、及び／または瘢痕（座瘡瘢痕）の減少、（ｐ）光回折または反射による皮膚の光学的特性の改善、ならびに（ｑ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態８１の方法。
実施形態８３：前記対象における前記１つ以上の皮膚科学的老化兆候が、前記組成物の投与前の前記対象における前記１つ以上の皮膚科学的老化兆候と比較して、前記組成物の投与後に軽減される、実施形態８１または８２の方法。
実施形態８４：前記対象がヒトである、実施形態６７～８３のいずれか１つの方法。
実施形態８５：前記組成物が、対象に皮膚（全身にまたは局所）、経皮、皮下、または皮内投与される、実施形態６７～８４のいずれか１つの方法。
実施形態８６：前記組成物が、表面注射によって投与される、実施形態６７～８５のいずれか１つの方法。
実施形態８７：前記組成物が、対象に皮下投与される、実施形態６７～８５のいずれか１つの方法。
実施形態８８：前記組成物が、対象に１回投与される、実施形態６７～８７のいずれか１つの方法。
実施形態８９：前記組成物が、前記対象に少なくとも２回投与される、実施形態６７～８７のいずれか１つの方法。
実施形態９０：前記投与間で、少なくとも約１５日、少なくとも約３０日、少なくとも約６０日、少なくとも約９０日、または少なくとも約１２０日が経過している、実施形態８９の方法。
実施形態９１：前記組成物が、前記対象の１つ以上の罹患領域及び／または非罹患領域に投与される、実施形態６７～９０のいずれか１つの方法。
実施形態９２：前記対象の皮膚が、投与前に擦過される、実施形態６７～９１のいずれか１つの方法。
実施形態９３：第１のヒトコラーゲンタンパク質を含む第１のポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含む組換え核酸であって、組換え単純ヘルペスウイルスゲノムである、前記組換え核酸。
実施形態９４：前記組換え核酸が、前記第１のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む、実施形態９３の組換え核酸。
実施形態９５：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、組換えＨＳＶ－１ゲノム、組換えＨＳＶ－２ゲノム、またはそれらの任意の誘導体である、実施形態９３または９４の組換え核酸。
実施形態９６：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、単純ヘルペスウイルス遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９３～９５のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態９７：前記単純ヘルペスウイルス遺伝子が、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ｔｋ、ＵＬ４１、及びＵＬ５５からなる群から選択される、実施形態９６の組換え核酸。
実施形態９８：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４遺伝子の一方または両方のコピーに不活性化変異を含む、実施形態９７の組換え核酸。
実施形態９９：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９７または９８の組換え核酸。
実施形態１００：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９７～９９のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０１：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ０遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９７～１００のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０２：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２７遺伝子に不活性化変異を含む、実施形態９７～１０１のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０３：前記不活性化変異が、前記遺伝子（複数可）のコード配列の欠失である、実施形態９６～１０２のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０４：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ウイルス遺伝子座内に前記第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９３～１０３のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０５：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９３～１０４のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０６：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に前記第１のポリヌクレオチドを含む、実施形態９３～１０５のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０７：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に前記第１のポリヌクレオチドを含む、９３～１０６のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０８：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態９３～１０７のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１０９：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態９３～１０８のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１０：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態９３～１０９のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１１：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態９３～１１０のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１２：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質がＣＯＬ７ではない、実施形態９３～１１１のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１３：前記第１のポリペプチドが、
（ａ）前記第１のヒトコラーゲンタンパク質、
（ｂ）さらなるヒトコラーゲンタンパク質、及び
（ｃ）（ａ）を（ｂ）に連結するリンカーポリペプチド
を含む、実施形態９３～１１２のいずれか１つの組成物。
実施形態１１４：前記リンカーポリペプチドが切断可能なリンカーポリペプチドである、実施形態１１３の組換え核酸。
実施形態１１５：前記リンカーポリペプチドが、配列番号２８～３１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態１１３または１１４の組換え核酸。
実施形態１１６：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態１１３～１１５のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１７：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態１１３～１１６のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１８：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態１１３～１１７のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１１９：前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態１１３～１１８のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２０：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記さらなるヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態１１３～１１９のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２１：前記第１のポリヌクレオチドが、
（ａ）前記第１のポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、
（ｂ）追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のＯＲＦ、及び
（ｃ）（ａ）と（ｂ）を分離する内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）
を含むポリシストロニックｍＲＮＡをコードする、実施形態９３～１２０のいずれか１つの組成物。
実施形態１２２：前記ＩＲＥＳをコードする前記核酸配列が、配列番号２２または配列番号２３から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態１２１の組換え核酸。
実施形態１２３：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態１２１または１２２の組換え核酸。
実施形態１２４：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態１２１～１２３のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２５：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態１２１～１２４のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２６：前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態１２１～１２５のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２７：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記追加のヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態１２１～１２６のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２８：前記組換え核酸が、第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドをさらに含む、実施形態９３～１２７のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１２９：前記組換え核酸が、前記第２のポリヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む、実施形態１２８の組換え核酸。
実施形態１３０：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ４－２、ＣＯＬ４－３、ＣＯＬ４－４、ＣＯＬ４－５、ＣＯＬ４－６、ＣＯＬ５－１、ＣＯＬ５－２、ＣＯＬ５－３、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ６－２、ＣＯＬ６－３、ＣＯＬ６－４、ＣＯＬ６－５、ＣＯＬ６－６、ＣＯＬ７、ＣＯＬ８、ＣＯＬ９－１、ＣＯＬ９－２、ＣＯＬ９－３、ＣＯＬ１０、ＣＯＬ１１－１、ＣＯＬ１１－２、ＣＯＬ１２、ＣＯＬ１３、ＣＯＬ１４、ＣＯＬ１５、ＣＯＬ１６、ＣＯＬ１７、ＣＯＬ１８、ＣＯＬ１９、ＣＯＬ２０、ＣＯＬ２１、ＣＯＬ２２、ＣＯＬ２３、ＣＯＬ２４、ＣＯＬ２５、ＣＯＬ２６、ＣＯＬ２７、及びＣＯＬ２８からなる群から選択される、実施形態１２８または１２９の組換え核酸。
実施形態１３１：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、ＣＯＬ１－１、ＣＯＬ１－２、ＣＯＬ３、ＣＯＬ４－１、ＣＯＬ６－１、ＣＯＬ７、及びＣＯＬ１７からなる群から選択される、実施形態１２８～１３０のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３２：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１～１４からなる群から選択される核酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する、実施形態１２８～１３１のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３３：前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が、配列番号１５～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態１２８～１３２のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３４：前記第１のヒトコラーゲンタンパク質と前記第２のヒトコラーゲンタンパク質が異なる、実施形態１２８～１３３のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３５：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１２８～１３４のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３６：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１３５の組換え核酸。
実施形態１３７：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１３５または１３６の組換え核酸。
実施形態１３８：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１３９：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含み、ＩＣＰ２２ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１３５～１３８のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１４０：前記組換え単純ヘルペスウイルスゲノムが、ＩＣＰ４ウイルス遺伝子座の一方または両方のコピー内に前記第１のポリヌクレオチドを含み、ＵＬ４１ウイルス遺伝子座内に前記第２のポリヌクレオチドを含む、実施形態１３５～１３８のいずれか１つの組換え核酸。
実施形態１４１：実施形態９３～１４０のいずれか１つの組換え核酸を含む、宿主細胞。
実施形態１４２：真核細胞である、実施形態１４１の宿主細胞。
実施形態１４３：哺乳類細胞である、実施形態１４１または１４２のホース細胞。
実施形態１４４：ヒト細胞または非ヒト霊長類細胞である、実施形態１４１～１４３のいずれか１つの宿主細胞。
実施形態１４５：Ｖｅｒｏ細胞である、実施形態１４１～１４４のいずれか１つの宿主細胞。
実施形態１４６：前記コスト細胞が補完宿主細胞である、実施形態１４１～１４５のいずれか１つの宿主細胞。
実施形態１４７：単純ヘルペスウイルスを収集する方法であって、
（ａ）補完宿主細胞を実施形態９３～１４０のいずれか１つの組換え核酸と接触させることと、
（ｂ）前記補完宿主細胞によって作製された単純ヘルペスウイルスを収集することと
を含む、前記方法。
実施形態１４８：単純ヘルペスウイルスを収集する方法であって、
（ａ）実施形態１４１～１４６のいずれか１つの宿主細胞を培養することと、
（ｂ）前記宿主細胞によって作製された単純ヘルペスウイルスを収集することと
を含む、前記方法。
本明細書は、当業者が本開示を実施することを可能にするのに十分であると考えられる。本明細書に示され、記載されるものに加えて、本開示の様々な修正は、前述の説明から当業者には明らかになり、添付の特許請求の範囲内に入るであろう。
本開示は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解される。しかしながら、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施形態が、例示のみを目的としており、それに照らして様々な修正または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。
実施例１：ヒトコラーゲンタンパク質（複数可）をコードする改変された単純ヘルペスウイルスベクター
標的哺乳類細胞（ヒトケラチノサイトまたは線維芽細胞等）においてヒトコラーゲンタンパク質（複数可）を発現させることができる改変された単純ヘルペスウイルスゲノムベクターを作製するために、単純ヘルペスウイルスゲノム（図１Ａ）を、最初に１つ以上の単純ヘルペスウイルス遺伝子を不活性化するように改変する。かかる改変は、哺乳類細胞におけるゲノムの毒性を減少させ得る。次に、ヒトコラーゲンタンパク質（複数可）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを保有するように、それらの改変／弱毒化された組換えウイルス構築物のバリアントを作製する。これらのバリアントには、（１）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｂ）、（２）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｃ）、（３）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた第１の異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び同じＤＮＡ鎖上の第２の異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｄ）、（４）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた第１の異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び同じＤＮＡ鎖上の第２の異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｅ）、（５）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた第１の異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び反対側のＤＮＡ鎖上の第２の異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｆ）、（６）各ＩＣＰ４遺伝子座に組み込まれた第１の異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び反対側のＤＮＡ鎖上の第２の異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｇ）、（７）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下のポリシストロニックｍＲＮＡをコードする発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（ポリシストロニックｍＲＮＡが第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）によって分離された第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む）（図１Ｈ）、（８）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下のポリシストロニックｍＲＮＡをコードする発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４改変ＨＳＶ－１ゲノム（ポリシストロニックｍＲＮＡが第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列及び内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）によって分離された第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む）（図１Ｉ）、（９）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下のキメラタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（キメラタンパク質が第１のヒトコラーゲンタンパク質のアミノ酸配列及びリンカーポリペプチドのアミノ酸配列によって分離された第２のヒトコラーゲンタンパク質のアミノ酸配列を含む）（図１Ｊ）、（１０）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下のキメラタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４改変ＨＳＶ－１ゲノム（キメラタンパク質が第１のヒトコラーゲンタンパク質のアミノ酸配列及びリンカーポリペプチドのアミノ酸配列によって分離された第２のヒトコラーゲンタンパク質のアミノ酸配列を含む）（図１Ｋ）、（１１）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセット及びＩＣＰ２２遺伝子座に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｌ）、（１２）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセット及びＵＬ４１遺伝子座に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２／ΔＵＬ４１改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｍ）、及び（１３）ＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第１のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセット及びＵＬ４１遺伝子座に組み込まれた異種プロモーターの制御下の第２のヒトコラーゲンタンパク質のコード配列を含む発現カセットを含む組換えΔＩＣＰ４／ΔＵＬ４１改変ＨＳＶ－１ゲノム（図１Ｎ）が含まれる。
これらの改変された単純ヘルペスウイルスゲノムベクターを、１つ以上のヘルペスウイルス遺伝子を発現するように改変された操作されたＶｅｒｏ細胞にトランスフェクトする。これらの操作されたＶｅｒｏ細胞は、改変ゲノムを内部にパッケージングしている複製欠損単純ヘルペスウイルスを上清に分泌する。その後、上清を収集し、濃縮し、５μｍフィルターを通して滅菌濾過する。
実施例２：ヒトＣＯＬ７をコードするＨＳＶ候補の構築及びインビトロ分析
コラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖タンパク質（ＣＯＬ７）は、皮膚を強化し、安定させる機能を果たす。簡潔には、ＣＯＬ７Ａ１転写物を翻訳し、結果として得られたＣＯＬ７ペプチドを、ヒドロキシル化及びグリコシル化によって翻訳後に修飾し、グリコシル化ＣＯＬ７トリペプチドが、細胞から分泌されるプロコラーゲンとして知られているトリプルヘリックスを形成する。プロコラーゲンは、分泌時に高次構造に会合し、アンカー原線維を形成し、これらは、上皮基底膜を組織化し、安定させ、かつその接着を補助する助けとなるように利用することができる。上皮基底膜は、上皮を下層疎性結合組織につなぎ留める役割を担い、真皮－表皮安定性（真皮－表皮接合部完全性）に不可欠である。栄養障害性表皮水疱症は、ＣＯＬ７Ａ１遺伝子の変異によって引き起こされる遺伝性遺伝子状態であり、この遺伝子の変異は、栄養障害性表皮水疱症患者における表皮を真皮に適切に結合するＣＯＬ７の能力を損ない、脆弱な皮膚をもたらす。表皮水疱症の最も重度な形態である劣性栄養障害性表皮水疱症（ＲＤＥＢ）は、皮膚及び粘膜の広範囲に及ぶ水疱形成及び瘢痕形成を特徴とすることが多い。
以下の実施例は、ヒトコラーゲンアルファ－１（ＶＩＩ）鎖ポリペプチド（ＣＯＬ７）を発現させるように改変された組換え単純ヘルペスウイルス１型の構築を説明し、組換えＨＳＶが、健常患者及びＲＤＥＢ患者由来の初代ヒトケラチノサイト及び線維芽細胞においてインビトロで機能性ヒトコラーゲンを発現させることができたことを示す実験をさらに提供する。
材料及び方法
ウイルス構築
「ＫＣＡ２１１」ウイルスベクター（図２Ａ）を以下のように作製した：野生型単純ヘルペスウイルスゲノムを、最初にウイルスＩＣＰ４遺伝子（ΔＩＣＰ４）の両方のコピーのコード配列を欠失させることによって改変した。ΔＩＣＰ４改変ウイルスゲノムを、ＩＣＰ４遺伝子座の各々にｍＣｈｅｒｒｙ発現カセットを含むようにも操作した。その後、ウイルスゲノムを、野生型ヒトＣＯＬ７をコードするようにさらに改変した。簡潔には、ＩＣＰ４の上流（ＵＳ）領域及び下流（ＤＳ）領域に隣接する（ｈＣＭＶプロモーターの制御下の）野生型ＣＯＬ７のコード配列を含むプラスミドを、ヘルペスウイルスＩＣＰ４遺伝子を発現するように改変されたＶｅｒｏ細胞にトランスフェクトした。その後、これらのトランスフェクト細胞を上述の改変ΔＩＣＰ４ ｍＣｈｅｒｒｙ発現ウイルスに感染させた。ＣＯＬ７に隣接するＵＳ及びＤＳ ＩＣＰ４領域は、ｍＣｈｅｒｒｙ遺伝子座の各々の二重交差及び置換を可能にした。その後、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光の非存在についての目視スクリーニングを使用して、組換えウイルスを含む細胞を特定した。
「ＳＡＲ－ＣＯＬ７」ウイルスベクター（図２Ｂ）を以下のように作製した：野生型単純ヘルペスウイルスゲノムを、最初にウイルスＩＣＰ４遺伝子の両方のコピー及びＩＣＰ２２遺伝子の単一コピー（ΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２）のコード配列を欠失させることによって改変した。ΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２改変ウイルスゲノムを、ＩＣＰ４遺伝子座の各々にｍＣｈｅｒｒｙ発現カセットを含むようにも操作した。その後、ウイルスゲノムを、野生型ヒトＣＯＬ７をコードするようにさらに改変した。簡潔には、ＩＣＰ４の上流（ＵＳ）領域及び下流（ＤＳ）領域に隣接する（ｈＣＭＶプロモーターの制御下の）野生型ＣＯＬ７のコード配列を含むプラスミドを、ヘルペスウイルスＩＣＰ４遺伝子を発現するように改変されたＶｅｒｏ細胞にトランスフェクトした。その後、これらのトランスフェクト細胞を上述の改変ΔＩＣＰ４／ΔＩＣＰ２２ ｍＣｈｅｒｒｙ発現ウイルスに感染させた。ＣＯＬ７に隣接するＵＳ及びＤＳ ＩＣＰ４領域は、ｍＣｈｅｒｒｙ遺伝子座の各々の二重交差及び置換を可能にした。その後、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光の非存在についての目視スクリーニングを使用して、組換えウイルスを含む細胞を特定した。
細胞培養
細胞を、日常的な外科的または診断的手技の一部として採取された皮膚生検から事前に単離した。書面によるインフォームドコンセントを、各患者から、または小児の場合には親もしくは法定後見人から得た。本試験をヘルシンキ宣言に従って行った。全ての細胞を５％ＣＯ２中３７℃で培養した。ヒト線維芽細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＰＥＡＫ（登録商標）血清、カタログ番号ＰＳ－ＦＢ１）を補充したダルベッコ改変必須培地中で成長させた。ＲＤＥＢ及び正常なケラチノサイトを、１０％ＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬ上皮成長因子、１０－１０コレラ毒素、０．４μｇ／ｍＬヒドロコルチゾン、５μｇ／ｍＬトランスフェリン、５μｇ／ｍＬインスリン、及び５μｇ／ｍＬリオチロニンを補充したＤＭＥＭ／ハムＦ１２培地（３：１）中で培養した。全ての培地は、アスコルビン酸（１５０μＭ）を含んだ。ケラチノサイトを、３Ｔ３細胞の有糸分裂活性化フィーダー層の存在下及び１０μＭのＲｈｏキナーゼ阻害剤Ｙ－２７６３２の存在下で成長させた。
ウイルス感染
ウイルスアリコートを－８０℃で保管し、使用前に組織培養層流フード下で解凍した。細胞を組織培養プラスチックから切り離し、血球計でカウントした後に、標的細胞数を感染前に決定した。感染多重度（ＭＯＩ）をウイルス力価及び標的細胞数から計算し、ウイルスストックの適切な体積を１０％血清含有ＤＭＥＭ中に希釈し、標的細胞と３７℃で２時間インキュベートした。その後、ウイルスを除去し、予め温められた培地で２回洗浄した後、新たな培地を標的細胞に供給した。
ウエスタンブロット
ケラチノサイトを１００ｍｍディッシュに８×１０５でプレーティングし、翌日に７０～８０％コンフルエンシーを達成した。感染の４８時間後、細胞を放射性免疫沈降アッセイ緩衝液で溶解した。溶解物を４℃で５分間にわたって遠心分離機に入れ、上清を６倍Ｌａｅｍｍｌｉローディング緩衝液と混合した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにロードする前に、試料を９５℃で５分間沸騰させた。ＣＯＬ７検出のために、５～３０μｇのタンパク質を６％アクリルアミドゲルにロードした。ＣＯＬ７検出のために使用した一次抗体は、ウサギ抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＨＰＡ０４２４２０）であった。分解したタンパク質をニトロセルロース膜上に移し、一次抗体の要件に従って５％乳または５％ＢＳＡを含むＰＢＳ－０．１％Ｔｗｅｅｎ中でブロックし、一次抗体と一晩インキュベートした。ＩｇＧ－ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）とインキュベートした後、膜をウエスタンブロッティング基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３２１０６）とインキュベートし、フィルム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０９０）に曝露した。
ｑＲＴ－ＰＣＲ
ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して製造業者のプロトコルに従って単離した。ＲＮＡ抽出物を、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して定量化し、１．５μｇのＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用したｃＤＮＡ合成に使用した。ｑＰＣＲの場合、ＳＹＢＲ Ｓｅｌｅｃｔ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、ｃＤＮＡ試料を１：２５に希釈して、鋳型として機能させた。実験を三連で行った。
接着アッセイ
９６ウェルプレートを、４℃で一晩、１００μＬ反応体積中１０、２０、または５０μｇ／ｍＬのラット尾コラーゲン１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはヒトフィブロネクチン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でコーティングし、その後、ＰＢＳで洗浄し、３７℃で１時間にわたってＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡでブロックした。模擬（対照）またはＳＡＲ－ＣＯＬ７感染ＲＤＥＢケラチノサイト（１００μＬのＤＭＥＭ／ＨａｍＦ１２＋０．１％ＢＳＡ中２．４×１０４細胞）をプレートに添加し、３７℃で９０分間インキュベートした。ウェルをＰＢＳで３回洗浄して、結合していない細胞を除去し、接着細胞をＰＦＥで２０分間固定した。その後、固定細胞を７０％エタノールで処理し、クリスタルバイオレットで染色し、１００％エタノール中に分解し、Ｆｌｅｘ Ｓｔａｔｉｏｎ ３プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて６３０ｎＭで吸光度を測定することによって定量化した。
器官型皮膚等価物
ウシフィブリノーゲン（９０％凝固可能、ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を１．１％ＮａＣｌ中に３７℃で４時間溶解し、その後、０．４５μｍのナイロン膜フィルターで濾過した。トリプシン及び遠心分離を使用して線維芽細胞を収集し、培地中に再懸濁して２×１０６細胞／ｍＬの最終濃度にした。細胞懸濁液の１５０μＬを１ｍＬのトロンビン（３ＩＵ－Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合し、細胞／トロンビン混合物を１：１の比率でフィブリノーゲンに添加した。混合物を、１ｍＬ／ウェルで１２ウェルプレートに迅速かつ穏やかに分布させ、３７℃でインキュベートした。２０分後、１０μｇ／ｍＬの最終濃度でアスコルビン酸及びアプロチニン（Ｓｉｇｍａ）を補充した培地を添加した。マトリックスを５～７日間成熟させ、培地を一日おきに交換した。ケラチノサイトを２×１０６細胞／ウェルで上にプレーティングし、翌日、培養物を金属グリッド上の空気－液体界面に引き上げ、アンレキサノクスでの処理を開始した。培地を、新たな薬物、アスコルビン酸、及びアプロチニンと一日おきに交換した。培養物を処理の１週間または２週間時点で収集し、液体窒素冷却イソペンタン中のＯＣＴで凍結した。クライオスタット（Ａｖａｎｔｉｋ ＱＳ１１）を使用して８μｍ切片に切断し、１：８００の希釈で、ポリクローナル抗ＣＯＬ７抗体で免疫染色した。核をＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で対比染色した。
結果
最初に、改変ＨＳＶからのＣＯＬ７発現を、ＨａＣａＴヒトケラチノサイト細胞株におけるｑＰＣＲ分析及びウエスタンブロット分析により評価して、改変ＨＳＶがそれらのカーゴを発現させることができたかを決定した。ＨａＣａＴ細胞に、０．３～１０の範囲のＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７またはＫＣＡ２１１のいずれかを形質導入した。感染の４８時間後、細胞を収集し、ｑＰＣＲ分析（図３Ａ）またはウエスタンブロット分析（図３Ｂ）のいずれかのために処理した。結果は、全長ＣＯＬ７がいずれかの改変ＨＳＶに感染したヒトケラチノサイトから用量依存的様式で発現されたことを実証した。
次に、免疫蛍光実験を行い、様々なＭＯＩ（０．１～１０の範囲）でＳＡＲ－ＣＯＬ７に２４～４８時間感染した初代ＲＤＥＢケラチノサイトまたはＲＤＥＢ線維芽細胞におけるＣＯＬ７発現を可視化した。非感染正常細胞ならびにＲＤＥＢケラチノサイト及び線維芽細胞と比較して、ケラチノサイト（図４Ａ）及び線維芽細胞（図４Ｂ）の両方について試験したＳＡＲ－ＣＯＬ７の全ての用量で強いＣＯＬ７シグナルが観察された。線維芽細胞における０．１～１のＭＯＩでのＳＡＲ－ＣＯＬ７の感染効率は、１６～３６％の範囲であった。線維芽細胞における３．０以上のＭＯＩでのＳＡＲ－ＣＯＬ７の感染効率は、９０％以上であった。
ＣＯＬ７Ａ１ ＲＮＡ発現を評価するために、ＲＤＥＢ患者由来のヒト皮膚ケラチノサイト（ＨＤＫ）及びヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）を様々なＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染させた。正常ＨＤＫ及びＨＤＦ、ならびに模擬感染ＲＤＥＢ ＨＤＫ及びＨＤＦを陰性対照として使用した。ＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＨＤＫ（図５Ａ）及びＨＤＦ（図５Ｂ）の両方において、ＣＯＬ７Ａ１転写物の用量依存的増加が観察された。感染後のＣＯＬ７Ａ１転写物発現の非感染健常ＨＤＫ（表１Ａ）または非感染健常ＨＤＦ（表１Ｂ）に対する相対的変化倍率も計算した。ＣＯＬ７Ａ１をコードするＨＳＶの使用は、ＭＯＩ３で、健常ＨＤＫ及びＨＤＦにおける野生型ＣＯＬ７Ａ１転写物レベルと比較して、ＲＤＥＢ ＨＤＫにおけるＣＯＬ７Ａ１転写物発現をおよそ２６倍増加させ、ＲＤＥＢ ＨＤＦにおけるＣＯＬ７Ａ１転写物発現をおよそ６０倍増加させることができた。
（表１Ａ）ＨＤＫにおけるＣＯＬ７Ａ１発現
Figure 2024056823000002
（表１Ｂ）ＨＤＦにおけるＣＯＬ７Ａ１発現
Figure 2024056823000003
次に、ＳＡＲ－ＣＯＬ７から発現したヒトＣＯＬ７の機能性を細胞接着アッセイにより試験した。非感染ＲＤＥＢケラチノサイト及び様々なＭＯＩでＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢケラチノサイトの、コラーゲン１またはフィブロネクチンで処理したウェルに接着する能力を研究した。興味深いことに、ＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染したＲＤＥＢケラチノサイトは、プレートベースの接着アッセイを使用の際に、用量依存的様式でコラーゲン１（図６Ａ）及びフィブロネクチン（図６Ｂ）への接着の増加を示した。
最後に、ＲＤＥＢ線維芽細胞及びケラチノサイトから成る皮膚等価物（ＳＥ）器官型培養物を使用して、基底膜ゾーン（ＢＭＺ）におけるＳＡＲ－ＣＯＬ７からのＣＯＬ７の発現を評価した。器官培養物をＲＤＥＢまたは正常の線維芽細胞及びケラチノサイトで構築した。ＲＤＥＢ細胞を器官培養物構築前にＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染させたか（データ示さず）、またはＳＡＲ－ＣＯＬ７を、空気－液体界面に引き上げる前に培養物上に滴下した（図７）。結果として得られた皮膚等価物（ＳＥ）を単離し、切片化し、免疫蛍光のために染色して、ＣＯＬ７タンパク質発現を検出した。ＣＯＬ７がＳＡＲ－ＣＯＬ７に感染した細胞由来の器官型培養物において検出され、ＢＭＺでのＣＯＬ７タンパク質沈着の開始が観察された。このデータは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７がＣＯＬ７Ａ１を送達してＣＯＬ７タンパク質を効率的に発現させることができたのみならず、インビボでのＣＯＬ７タンパク質に予期される組織化パターンと同様に、ＣＯＬ７タンパク質が器官型培養物において組織化し始めたことを示唆した。
まとめると、本明細書に提供されるデータは、複製欠損ＨＳＶが、二次元または三次元培養系のいずれにおいても明らかな毒性なしで、野生型初代ヒト細胞、ならびにコラーゲン欠乏症に罹患している患者から単離された初代ヒト細胞において、高レベルの機能性ヒトコラーゲンを効果的に送達及び発現させるためのビヒクルとして用いられ得ることを示した。
実施例３：野生型動物におけるヒトＣＯＬ７をコードするＨＳＶ候補のインビボ分析
以下の実施例は、ヒト細胞においてインビトロで構築及び検証された組換えウイルス（上の実施例２を参照のこと）が、野生型動物においてコードされたヒトコラーゲンをインビボで発現させることが可能であったことを示す実験を説明する。本研究の目的は、部分的には、健常な免疫適格動物におけるＨＳＶ媒介性コラーゲン発現の皮膚生体内分布を評価することであった。
材料及び方法
被験物質
マウスに投与した配合物中の活性成分は、ＰＢＳ＋１０％グリセロール中で配合された４．８×１０８プラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの力価での改変単純ヘルペスウイルスＳＡＲ－ＣＯＬ７またはＫＣＡ２１１（上の実施例２を参照のこと）であった。皮内投与に使用したビヒクルは、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）＋１０％グリセロールであった。局所投与に使用したビヒクルは、滅菌再蒸留水中で配合された３％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）ゲルであった。
動物
６～１０週齢の健常雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。プロトコルで使用した全ての手順は、該当する動物保護法に準拠しており、現地の機関内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）により承認されたものである。
皮内注射
被験物質投与前及び投与中に、マウスを、Ｄｅｘｄｏｍｉｔｏｒ（３０μＬまたは０．０５ｍｇ／ｍＬ）及びＴｅｌｚｏｌ（１０ｍｇ／ｍＬの５０μＬ）のカクテルを使用して麻酔した。鎮静剤をＡｎｔｉｓｅｄａｎ（０．５ｍｇ／ｍＬの５０μＬ）で無効にした。背中領域及び側腹領域を電気ペットクリッパーで剃り、アルコールワイプで拭いた。皮内注射を、シリンジ及び２７Ｇ針（ＶＷＲ、カタログ番号ＢＤ３０５６２０）を用いたＭａｎｔｏｕｘ技術を使用して行い、各部位での表面「ブレブ」の作製を確実にした。ウイルスをドライアイス上で保持し、室温で解凍し、解凍後３０分以内に投与した。皮内注射を各マウスの背中に２回投与し、「ブレブ」の縁を油性マーカーでマークした。
局所適用
局所投与を、開放創または擦過もしくは乱切した皮膚のいずれか上で行った。背中領域及び側腹領域を、電気クリッパーを使用して剃った。皮膚を機械Ｄｒｅｍｅｌで優しく擦過し、その後、２２Ｇ針で表面穿孔することにより、乱切を行った。創傷を作製するために、鋭利なはさみを使用して、皮膚の直径５～６ｍｍの生検を除去した。局所用配合物を擦過部位または創傷部位に含ませるために、１．５ｍＬの微小遠心分離管の先端を切断及びオートクレーブ処理してウェルを作製した。蓋を保持し、切断側を透明な接着剤包帯で覆った。「ウェル」を、蓋側を下にして外科用接着剤を使用して擦過／創傷領域に接着させた。１００μＬのＳＡＲ－ＣＯＬ７を２０μＬの局所ビヒクルと混合し、透明な接着剤を介して注射することにより創傷部位に適用して、創傷上に局所ゲルを含ませ、漏れを防止した。
組織の収集
ＳＡＲ－ＣＯＬ７投与後の指示された時点で、マウスを安楽死させ、８ｍｍの生検パンチを使用して注射部位を取り出した。生検の半分を、液体窒素を使用して急速凍結し、残りの半分をＯＣＴに包埋し、免疫蛍光染色のために凍結保存した。
リアルタイム定量ＰＣＲ
急速凍結した半分の生検を分析まで－８０℃で保管した。処理及び分析のために、試料を、製造業者のプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ）に従って、新たなＤＴＴで調製した３５０μＬのＲＬＴ緩衝液中に再懸濁した。試料を２５％振幅で３回超音波処理し、氷上で１分間断続的にインキュベーションし、製造業者のプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ ＡｌｌＰｒｅｐ ＤＮＡ及びＲＮＡ抽出キット）に従ってＤＮＡ及びＲＮＡ抽出を行った。ＲＮＡ試料及びＤＮＡ試料の両方を、ＲＮＡｓｅを含まない脱イオン蒸留水中に再懸濁し、Ｔａｋｅ３マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＲａｄ）上で分光光度的に定量化した。
ＣＯＬ７Ａ１導入遺伝子を特異的に検出する、ヒトＣＯＬ７Ａ１オープンリーディングフレームの３’末端及び３’ＵＴＲにわたるカスタムプライマー／プローブアッセイを使用したＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ分析により、ＣＯＬ７Ａ１ ＤＮＡコピー及びＲＮＡ転写物の絶対定量化を行った。１００ｎｇのＤＮＡ及びＲＮＡを、それぞれ、ｑＰＣＲアッセイ及びｑＲＴ－ＰＣＲアッセイに使用し、増幅される領域を含むプラスミド標準物を１００ｎｇのマウスゲノムまたはＲＮＡマトリックス中で調製した。ＧＡＰＤＨを両方の分析の対照として使用した。
免疫蛍光染色
ＯＣＴ凍結組織を５～８μｍで切片化し、最大１時間空気乾燥させた。スライドを１００％メタノール中に－２０℃で１０分間浸漬し、空気乾燥させた。メタノール固定切片を、室温でＰＢＳ中での３回の洗浄（各５分間）により再水和した。切片を、１０％血清（混合種）から成るブロッキング溶液と、湿潤チャンバ内で、室温で１時間インキュベートした。過剰なブロッキング溶液を除去し、５％ブロッキング溶液中で調製した一次抗体（抗ヒトコラーゲン７、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＨＰＡ０４２４２０、抗インテグリンアルファ６（クローンｇｏＨ３）、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５７３４）溶液を一滴、各切片（３０～５０μＬ／切片）に適用した。切片を一次抗体と４℃で１６時間インキュベートし、ＰＢＳ中で、室温で３回洗浄し（各５分間）、二次抗体（抗ウサギＡＦ－６４７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ２１２４４、抗ラットＡＦ－５９４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ１１００７）を、ＰＢＳ中１：４００の希釈で、室温で１時間にわたって湿潤チャンバ内で適用した。３回のＰＢＳ洗浄を繰り返し、その後、スライドをＨｏｅｃｈｓｔ溶液（１：１０００）中に室温で５分間浸漬した。３回のＰＢＳ洗浄を繰り返し、染色された切片を封入剤（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ Ｇ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号０１００－０１）で封入し、カバースリップで覆った。切片を、Ｗｉｄｅｆｉｅｌｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用して脱水後（およそ２４時間後）に画像化した。
結果
６つの群に分けた合計３０匹の雄ＢＡＬＢ／ｃマウスをこの研究に使用した。ＳＡＲ－ＣＯＬ７を１日目に皮内注射または局所適用のいずれかにより投与し、マウスのサブセットを３日目に収集し、残りのマウスを６日目に収集した。群２の動物は、皮内注射により同じ体積の低用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７（４．８×１０６ｐｆｕ／部位）を受け、群１は、皮内コホートの対照としての役割を果たした。群４、５、及び６では、局所ビヒクル（群４）または局所ゲル中ＳＡＲ－ＣＯＬ７（群５及び群６）を、合計体積１２０μＬで創傷領域（群４及び群６）または擦過領域（群５）のいずれかに適用した。組織を収集し、上述のｑＰＣＲ分析及び免疫蛍光分析のために処理した。
屠殺後のｑＰＣＲ分析を行った。ＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル及びＤＮＡレベルが皮内適用または局所適用のいずれかによりＳＡＲ－ＣＯＬ７を受けた全てのコホートに検出され（図８Ａ～Ｄ）、明らかな用量応答が観察された。転写物レベル及びＤＮＡレベルは、皮内コホート及び局所コホート（ＳＡＲ－ＣＯＬ７高ＩＤ、高創傷、及び高擦過）間で同等であり、局所適用が皮内注射と同程度に効率的にＣＯＬ７Ａ１を送達することを示唆した。全体的に、６日目の試料（図８Ｃ～Ｄ）のＤＮＡレベル及びＲＮＡレベルが３日目の試料（図８Ａ～Ｂ）よりも低く、これは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７がエピソームのままである（経時的に消えることが予想される）非組み込みベクターであるため、予想外ではなかった。
次に、インビボでのＳＡＲ－ＣＯＬ７感染後のＣＯＬ７発現を可視化するために免疫蛍光実験を行った。図９Ａ～Ｂに提供される代表的な画像で観察されるように、試験した両方の時点で、ＣＯＬ７が動物コホートの大半で検出された。多くの試料は、ＢＭＺで及び毛嚢周囲でＣＯＬ７の正しい局在化を示した。いくつかの場合において、具体的には、皮内適用では、恐らく皮内注射ではなく皮下注射であったため、強いＣＯＬ７発現が、下層筋膜により近い、皮膚のより深い層で観察された。同様に、ＢＭＺが擦過中に除去される可能性が高い擦過皮膚試料の多くでは（代表的なｇｏＨ３染色の欠如によって示唆されるように）、強力なＣＯＬ７染色は皮膚表面に限定された。全体的に、免疫蛍光試料中のＣＯＬ７の存在は、改変ＨＳＶ ＳＡＲ－ＣＯＬ７のロバストな有効性を強力に支持した。
加えて、ヒトＣＯＬ７を発現させるＫＣＡ２１１の能力をインビボで試験し、ＳＡＲ－ＣＯＬ７投与と比較した。ＫＣＡ２１１も免疫適格マウスにおいてインビボでＣＯＬ７導入遺伝子を発現させることが見出された（図１０Ａ～Ｂ）。
まとめると、このデータは、改変ＨＳＶが、局所投与または皮内投与後に健常免疫適格動物においてインビボでヒトコラーゲンタンパク質を送達及び発現させることができることを示し、傷ついた皮膚または開放創に局所投与したウイルス由来のコラーゲンの発現が、インタクトな皮膚への皮内投与と同等であることをさらに示した。
実施例４：ハイポモルフ動物におけるヒトＣＯＬ７をコードする低用量及び高用量のＨＳＶ候補のインビボ分析
以下の実施例は、インビトロでのヒト細胞（上の実施例２を参照のこと）において及び野生型マウス（上の実施例３を参照のこと）においてインビボで構築及び検証された組換えウイルスが、ＣＯＬ７ハイポモルフマウスにおいてインビボで機能性ヒトコラーゲンを発現させることができることを示す実験を説明する。本研究の目的は、部分的には、ＣＯＬ７欠損免疫適格動物におけるＨＳＶ媒介性コラーゲン発現の皮膚生体内分布を評価することであった。
材料及び方法
反対の指示がない限り、実験を上の実施例３に記載されるように行った。
ハイポモルフマウス
ＣＯＬ７ハイポモルフマウスモデル（Ｆｒｉｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００８ Ｍａｙ；１１８（５）：１６６９－７９）を本研究に使用した。このハイポモルフマウスモデルは、マウスが正常レベルの約１０％のＣＯＬ７を発現する、栄養障害性表皮水疱症（ＤＥＢ）の免疫適格動物モデルである。それらの表現型は、粘膜皮膚水疱形成、爪ジストロフィー、及び四肢のミトン奇形を含む、重度のヒトＤＥＢの特徴に極めて類似している。
マウスをマウスＣＯＬ７Ａ１のエクソン２のｆｌｐ／ｆｒｔ媒介除去により作製した。ＣＯＬ７「ハイポモルフマウス」と称されるＣＯＬ７Ａ１（Ｃｏｌ７ａ１ｆｌＮｅｗ／ｆｌＮｅｏ）の両方の機能的コピーを欠く動物は、正常レベルの約１０％のＣＯＬ７を発現した。合計１５匹の繁殖対から、５８匹の仔を得て、その同腹仔は２～７匹のマウス／同腹仔の範囲であった。これらの５８匹の仔のうち、６匹がハイポモルフであると遺伝子型決定した。マウスを、耳穿孔組織試料から抽出したＤＮＡで遺伝子型決定した。ＰＣＲ分析により、ＣＯＬ７Ａ１のエクソン２の上流にｌｏｘＰ部位の存在が検出された。野生型（ＷＴ）マウスは２６９塩基対（ｂｐ）でバンドを示し、ハイポモルフマウスは４３５ｂｐでバンドを示し、ヘテロ接合マウスは両方のバンドを示した。全ての手順は、該当する動物保護法に準拠しており、現地の機関内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）により承認されたものである。
皮内注射
被験物質投与前及び投与中に、マウスを、２％イソフルランを使用した吸入麻酔下で維持した。乾燥を防ぐために、眼軟膏（Ｐｕｒａｌｕｂｅ（登録商標）Ｖｅｔ）を目に適用した。３１Ｇ針を用いたＭａｎｔｏｕｘ技術を使用して、皮内注射を行った。最大４回の皮内注射を指定された用量で各マウスの背中に投与した。
組織の収集
組織収集前に、動物をＣＯ２吸入により安楽死させ、その後、頸部脱臼させた。鋭利なはさみを使用して注射部位を生検した。
ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色
凍結保存した組織を５～８μｍの厚さで切片化し、最大１時間空気乾燥させた。スライドを１００％メタノール中に－２０℃で１０分間浸漬し、空気乾燥させた。メタノール固定切片をＰＢＳ中で、室温で５分間再水和した。切片をヘマトキシリン（ワイゲルト改変ヘマトキシリン）中で、室温で５～１０分間インキュベートし、その後、ＰＢＳ中で、室温で１５分間洗浄した。その後、切片をエオシン（エオシンＹ溶液、カタログ番号ＨＴ１１０１１６）中で３回すすぎ、その後、水中で１回すすいだ。
切片を、７０％エチルアルコール中に１０回、９５％エチルアルコール中に１０回、１００％エチルアルコール中に１０回に浸漬することにより、エタノールで徐々に脱水させた。切片を乾燥させるように設定し、封入剤（Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＳＰＦ１５－１００）で封入し、カバースリップで覆った。切片を、明視野顕微鏡を使用して脱水後（およそ２４時間後）に画像化した。
電子顕微鏡検査
皮膚を、０．０５％タンニン酸を含有するダルベッコ無血清培地（ＳＦＭ）中１．５％グルタルアルデヒド／１．５％パラホルムアルデヒド中に少なくとも１時間浸漬し、その後、ＳＦＭ中で広範囲にわたってすすぎ、１％ＯｓＯ４中で６０分間後固定することにより、電子顕微鏡検査のために調製した。試料をＳＦＭ中で洗浄し、その後、１００％までの段階的エタノール系列中で脱水し、プロピレンオキシド中ですすぎ、２時間の合計時間にわたってＳｐｕｒｒエポキシ中に浸潤させ、マイクロ波エネルギーにより加速した。試料を７０℃で１８時間にわたって重合した。追加の試料を、ＳＦＭ中で広範囲にわたってすすぎ、その後、ＳＦＭ中１：５で希釈したマウスＩｇＭ ＬＨ２４抗体またはマウスＩｇＧ ＮＰ１８５抗体中に４℃で一晩浸漬することにより調製した。その後、試料をＳＦＭ中で広範囲にわたってすすぎ、金増強溶液（Ｎａｎｏｐｒｏｂｅｓ）に氷上で１５分間曝露し、その後、２５℃に急速に温め、さらに５分間インキュベートした。試料を氷冷ＳＦＭですすぎ、固定し、包埋した。
結果
３匹のハイポモルフマウスを高用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７研究に使用した。全てのマウスは、１日目に皮内注射により４．６×１０７ＰＦＵ／５０μＬ／注射部位の用量を受けた（表２）。各動物を剃り、１回の対照注射及び３回のＳＡＲ－ＣＯＬ７注射を含む注射を背中の４つの部位に行った。１匹の動物（マウス３）は、３日目に同じ４つの部位に２回目の注射を受けた。１匹のマウス（マウス１）を３日目に屠殺し、マウス２及びマウス３を７日目に屠殺した。
（表２）高用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７の皮内注射のための研究設計
Figure 2024056823000004
屠殺後のｑＰＣＲ分析を行った。ＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル（図１１Ａ）及びＤＮＡレベル（図１１Ｂ）を３つ全てのマウスの各ウイルス注射部位で検出した。全ての対照試料（ＰＢＳまたはＨＳＶ－ＧＦＰ）中の転写物レベルが本アッセイにおける検出レベル以下であったため、１つの対照（３日目、試料１、ＨＳＶ－ＧＦＰ）のみを比較のためにグラフに含めた。ＳＡＲ－ＣＯＬ７の単回投与（マウス２）後７日目までにＤＮＡレベル及び転写物レベルのいくらかの減少が観察されたが、ＳＡＲ－ＣＯＬ７の再投与（マウス３）時にＤＮＡレベル及び転写物レベルが増加した。
次に、免疫蛍光（ＩＦ）実験を行い、インビボでのＳＡＲ－ＣＯＬ７感染後のハイポモルフマウスにおけるＣＯＬ７発現を可視化した（図１２Ａ～Ｂ）。ＩＦ実験は、３日目及び７日目の両方の時点で、ロバストな広範囲のＣＯＬ７タンパク質発現がＢＭＺで観察され、毛嚢（ＨＦ）周囲でも観察されたことを実証した。ＳＡＲ－ＣＯＬ７処理試料が線維症または急性炎症の明らかな兆候のない正常な皮膚形態を示したため、（反復投与後でさえも）皮膚形態への悪影響は観察されなかった（図１３）。全体的に、免疫蛍光試料中のＣＯＬ７の存在は、下層皮膚構造で分泌され、かつ適切に組織化されることができるヒトコラーゲンを送達する際のＳＡＲ－ＣＯＬ７のロバストな有効性を強力に支持した。
３日目の生検を、電子顕微鏡検査によりアンカー原線維の形成についても評価した。適切に構造化されたアンカー原線維では、ＣＯＬ７のＮＣ１ドメイン（ＮＰ１５８抗体で染色される）が緻密層に向かって整列する一方で、ＣＯＬ７のＮＣ２ドメイン（ＬＨ２４抗体で染色される）は、緻密層から離れて整列する。ＳＡＲ－ＣＯＬ７注射マウス由来の生検は、ＬＨ２４抗体（図１４Ａ）及びＮＰ１８５抗体（図１４Ｂ）の両方でのＣＯＬ７染色を示し、重要なことに、電子顕微鏡（ＥＭ）画像は、アンカー原線維の形成を明らかにした。緻密層は、ＥＭ画像の中央を通る暗い帯として観察された。外因性ヒトＣＯＬ７のＮＣ２ドメインが緻密層から離れて配置された一方で、外因性ヒトＣＯＬ７のＮＣ１ドメインは、適切に形成されたアンカー原線維で予想されるように、緻密層に沿って配置された。このデータは、ＳＡＲ－ＣＯＬ７が、ＢＭＺで分泌されかつ適切に組織化されることができるコードされたヒトＣＯＬ７を発現させることができたことのみならず、分泌されたＣＯＬ７が機能的であり、結果として生じたアンカー原線維中に適切に配置され、ハイポモルフマウスの皮膚組織を支持したことも示した。
３匹の追加のハイポモルフマウスを低用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７試験に使用した。全てのマウスは、１日目に皮内注射により３つの部位（マウス１）または２つの部位（マウス２及びマウス３）に６．４×１０６ＰＦＵ／５０μＬ／注射部位のＳＡＲ－ＣＯＬ７の用量を受けた（表３）。
（表３）低用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７の皮内注射のための研究設計
Figure 2024056823000005
屠殺後のｑＰＣＲ分析を行った。ＣＯＬ７Ａ１の転写物レベル（図１５Ａ）及びＤＮＡレベル（図１５Ｂ）を３つ全てのマウスの各ウイルス注射部位で検出した。用量応答が観察された。これらの低用量試料におけるＣＯＬ７Ａ１のＤＮＡレベル及び転写物レベルの両方が高用量研究で観察されたものと比較して低かったが、ＣＯＬ７Ａ１発現は依然として検出可能であった。ＤＮＡまたはＲＮＡレベルのおよそ２ｌｏｇの減少にもかかわらず、ＣＯＬ７タンパク質は、低用量ＳＡＲ－ＣＯＬ７注射動物の皮膚で依然として検出可能であった（図１６）。ＣＯＬ７タンパク質は、ＢＭＺ及び毛嚢周囲の両方で観察された。このデータは、より低い投薬量であっても、改変ＨＳＶが、コードされたヒトコラーゲンタンパク質の送達及び発現に依然として有効であり、次いで、それが分泌され、皮膚の適切な領域に局在したことを示した。
まとめると、実施例に提供されるデータは、本明細書に記載の改変ＨＳＶが、以下を行うことができたことを示した：（１）インビトロ及び器官型培養下で、機能性ヒトコラーゲンを産生するように皮膚細胞に形質導入する（実施例２を参照のこと）、（２）局所適用後及び皮内適用後の両方で、健常免疫適格動物において、インビボで皮膚に形質導入し、ヒトコラーゲンを送達する（実施例３を参照のこと）、（３）コラーゲン欠損動物において、インビボで皮膚に形質導入し、ヒトコラーゲンを送達し、アンカー原線維の形成を開始する（実施例４を参照のこと）。理論に拘束されることを望むことなく、本明細書に記載の組換えベクターが、機能性ヒトコラーゲンを皮膚に送達するための望ましい戦略を提供し、美容的環境において真皮及び／または表皮を支持するための新規のアプローチを可能にすると考えられる。
実施例５：ヒトコラーゲン１をコードする複数の操作ＨＳＶの構築及び検証
以下の実施例は、ヒトコラーゲン１を首尾よく発現させるように組換えＨＳＶ－１を操作するための２つの異なるアプローチを説明する。ヒトコラーゲン１が、ＣＯＬ１Ａ１ポリペプチドの２つのコピー及びＣＯＬ１Ａ２ポリペプチドの１つのコピーを含むヘテロ三量体巨大分子であるため、ヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２の両方をコードする単一ＨＳＶゲノムを作製するための２つの異なる戦略を行った。これらの２つのアプローチを、概して、図１Ｈ～１Ｉ及び１Ｌに示し、以下に詳細に記載する。
第１のアプローチとして、組換えＨＳＶ－１を最初に操作して、異種プロモーター及びポリＡ配列を含むヒトＣＯＬ１Ａ１発現カセットを上の実施例２に記載されるようにＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込んだ。ヒトＣＯＬ１Ａ１カセットを推定上含むウイルスの複数のプラークを採取し、Ｖｅｒｏ細胞の感染によりスクリーニングして、ＣＯＬ１Ａ１発現を試験した（データ示さず）。少なくとも３つの単離体（クローン１Ａ１、２Ａ１、及び３Ａ１）がヒトＣＯＬ１Ａ１導入遺伝子発現に対して陽性であった。次に、ヒトＣＯＬ１Ａ１陽性クローン１Ａ１及び２Ａ１を操作して、ＣＯＬ１Ａ１カセットとは異なる異種プロモーター及びそれ自体のポリＡ配列を含むヒトＣＯＬ１Ａ２発現カセットを組み込み、ＩＣＰ２２遺伝子座に挿入した。その後、７つの単離体（クローン１Ａ２－１Ａ１、１Ｂ２－１Ａ１、１Ｃ１－１Ａ１、１Ｂ３－２Ａ１、３Ｂ１－１Ａ１、及び３Ｂ１－２Ａ１）をスクリーニングして、ヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２の両方、ひいては全長ヒトコラーゲン１を発現させることができる弱毒化ＨＳＶ－１ウイルスを特定した。
Ｖｅｒｏ細胞を、７つの推定ＣＯＬ１Ａ１－ＣＯＬ１Ａ２陽性単離体のうちの１つまたは３つのＣＯＬ１Ａ１のみの単離体のうちの１つ（ＣＯＬ１Ａ２発現の陰性対照として）に感染させて、両方の導入遺伝子を発現することができる組換えＨＳＶ－１クローンを特定した。Ｖｅｒｏ細胞の感染を５日間継続させ、細胞を穏やかな掻爬により収集し、細胞ペレットを６０００×ｇで５分間の遠心分離により収集した。各ペレットの半分をｑＲＴ－ＰＣＲ分析のために収集し、残りの半分をウエスタンボッティングのために処理した。ヒトＣＯＬ１Ａ１またはＣＯＬ１Ａ２オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の３’末端及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）にわたり、導入遺伝子に特異的なカスタムプライマー／プローブアッセイを使用したＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ分析により、ＣＯＬ１Ａ１またはＣＯＬ１Ａ２ ＲＮＡコピーの絶対定量化を行った。３つ全てのＣＯＬ１Ａ１のみのウイルスに感染した細胞及び７つのＣＯＬ１Ａ１－ＣＯＬ１Ａ２ウイルスのうちの６つに感染した細胞から抽出したＲＮＡは、ヒトＣＯＬ１Ａ１導入遺伝子発現に対して陽性であった（図１７Ａ）。興味深いことに、７つのＣＯＬ１Ａ１－ＣＯＬ１Ａ２ウイルスのうちの３つ（クローン１Ｂ２－１Ａ１、１Ｃ１－１Ａ１、及び１Ｂ３－２Ａ１）のみが、検出可能なレベルのヒトＣＯＬ１Ａ２も発現させた（図１７Ｂ）。これらの３つの単離体に感染した細胞溶解物におけるＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２タンパク質発現のウエスタンブロッティングを行い、これらの導入遺伝子が核酸レベル及びタンパク質レベルの両方で発現されることを確実にした。簡潔には、細胞ペレットを、Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテルを含有するＲＩＰＡ緩衝液中に再懸濁し、４℃で１０分間インキュベートし、その後、室温で１０分間にわたってベンゾナーゼで処理した。その後、試料を５％２－メルカプトエタノールを含有する４倍ＬＤＳ試料緩衝液で希釈し、トリス－グリシンゲル上で分解した。模擬感染Ｖｅｒｏ細胞溶解物を陰性対照としてゲルにロードした。タンパク質をＰＶＤＦに移し、ブロックし、その後、一次抗体（抗ヒトＣＯＬ１Ａ１、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号ＰＡ５－２９５６９、抗ヒトＣＯＬ１Ａ２、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ９６７２３、または抗ＧＡＰＤＨ、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ９４８５）で一晩染色した。その後、染色された膜を洗浄し、二次抗体とインキュベートし、その後、現像した。ｑＲＴ－ＰＣＲ分析と一致して、３つ全てのクローンが、ヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２タンパク質の両方を検出可能なレベルで発現することができた（図１７Ｃ）。
第２のアプローチを並行して続行して、ＣＯＬ１Ａ１－ＣＯＬ１Ａ２陽性組換え弱毒化ＨＳＶベクターを作製した。ここで、５’から３’の方向に、ヒトＣＯＬ１Ａ１ ＯＲＦ、合成ＩＲＥＳ、及びヒトＣＯＬ１Ａ２ ＯＲＦをコードする、ポリヌクレオチド構築物を作製した。その後、このＩＲＥＳベースの構築物（異種プロモーター及びポリＡ配列も含む発現カセットでコードされる）を、上の実施例２に記載されるように、ＩＣＰ４遺伝子座の各々に挿入した。複数のプラークを採取し、スクリーニングして、正しく挿入されたＩＲＥＳ構築物を有するベクターを特定した。簡潔には、Ｖｅｒｏ細胞を推定ＩＲＥＳウイルス単離体に感染させ、感染を５日間継続させ、細胞を収集し、ｑＰＣＲ分析及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析のために処理した。合成ＩＲＥＳを認識するカスタムプライマー／プローブアッセイを使用したＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ分析により、挿入ＤＮＡ及びＲＮＡコピーの絶対定量化を行った。１３個のウイルス単離体をｑＰＣＲ分析及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析によりスクリーニングし、これらの単離体のうちの１つ（単離体６）のみが、ＩＲＥＳ配列を含むＩＲＥＳ ＤＮＡ及びＲＮＡ転写物に対して陽性であった（データ示さず）。この単離体がヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２の両方をタンパク質レベルで発現させることができることを確認するために、感染Ｖｅｒｏ細胞を上述のようにウエスタンブロッティングのために処理した。ｑＰＣＲによる発現カセット組み込み及びｑＲＴ－ＰＣＲによる導入遺伝子発現を示さなかったウイルス単離体（単離体１）を陰性対照として使用した。ｑＰＣＲ／ｑＲＴ－ＰＣＲデータと並行して、ウイルス単離体６は、感染後にヒトＣＯＬ１Ａ１タンパク質及びＣＯＬ１Ａ２タンパク質の両方を発現させることができた（図１８）。
まとめると、この試料に示されるデータは、（１）標的細胞感染後のヒトＣＯＬ１Ａ１及びＣＯＬ１Ａ２の両方の発現において高い能力を有する複数の組換えＨＳＶ－１ベクターを首尾よく構築したこと、（２）ヘテロ三量体ヒトコラーゲンタンパク質を発現させるようにベクターを操作することができること、及び（３）複数の異なるアプローチを用いて、単一の組換えゲノムから複数のタンパク質を発現させることができることを示す。理論に拘束されることを望むことなく、組換えＨＳＶ－１ゲノムからのヒトコラーゲン１の発現の成功により、任意のヘテロ三量体コラーゲンタンパク質（例えば、ヒトコラーゲン４）を発現させるための操作ＨＳＶの使用が支持されると考えられる。
実施例６：ヒトコラーゲン３をコードする操作ＨＳＶの構築、検証、及びインビトロ特徴付け
以下の実施例は、ヒトコラーゲン３（Ｃ３ｖｅｃ０１と称される）を首尾よく発現させた組換えＨＳＶ－１の操作を説明する。加えて、以下の実施例は、用量範囲研究における不死化ヒトケラチノサイト及び線維芽細胞の使用、複数の高齢ヒト患者から生検した初代ヒト皮膚線維芽細胞のより高齢の患者におけるＣ３ｖｅｃ０１媒介コラーゲン３レスキューのモデルとしての使用、ならびにインビトロ紫外線照射不死化ヒト線維芽細胞の日光曝露／皮膚老化のモデルとしての使用を含む、Ｃ３ｖｅｃ０１の有効性の特徴付けに好適な複数の関連二次元細胞培養モデル系を確立するインビトロ実験について説明する。
ヒト皮膚は、主に、皮膚線維芽細胞によって産生、組織化、及び維持されるコラーゲン豊富な結合組織から成る。皮膚コラーゲンは、ヒト皮膚の９０％超（乾燥重量）に相当し、主に、約８５：１５の典型的な比率でＣＯＬ１原線維及びＣＯＬ３原線維から成る。これらの原線維は皮膚に強度を提供し、皮膚組織アーキテクチャの維持に重要である。
皮膚老化特徴は、主に異常なコラーゲン恒常性に起因し、純コラーゲン欠損をもたらし、コラーゲンの生合成が減少し、コラーゲン原線維の断片化が増加し、皮膚コラーゲンが進行的に喪失し、これらは全て老化表現型に寄与する。皮膚老化は、内的要因及び外的要因の両方の組み合わせに影響され、内因性要因には、時間の経過、遺伝、細胞代謝、ホルモン等があり、外因性要因には、光への長期曝露、汚染、電離放射線等がある。これらの要因は一緒に皮膚に累積的な構造的及び生理学的変化をもたらし、最終的には皮膚のしわの出現及び悪化をもたらす。
皮膚幼若化は、皮膚の凹凸（しわ等）を逆転させるまたは修復するプロセスであり、部分的には、新たなコラーゲンの合成（新コラーゲン生成（ｎｅｏｃｏｌｌａｇｅｎｅｓｉｓ））によって達成される。皮膚において、新コラーゲン生成は、コラーゲン１及びコラーゲン３の沈着、ならびにコラーゲン１とコラーゲン３との間の複雑な相互作用に影響される。ＣＯＬ３は、コラーゲン原線維形成中の初期に出現し、ＣＯＬ１によるこのＣＯＬ３のその後の置換は、コラーゲン原線維成熟及び細胞外マトリックス再編成に重要なステップである（Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，８１（２），ｐｐ．９４－１０１）。加えて、ＣＯＬ３は、ＣＯＬ１繊維の寸法を調節し（Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９４（５），ｐｐ．１８５３－６）、ＣＯＬ１弾性を強化する（Ａｓｇａｒｉ，ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｓｃｉ Ｒｅｐ，７（１），ｐ．１３９２）。したがって、初期ＣＯＬ３発現の出現及びその後のＣＯＬ１での置換は、ヒトにおける注射用顔面フィラーの有効性のマーカーとして使用されている（Ｙｕｔｓｋｏｖｓｋａｙａ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ Ｄｒｕｇｓ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１３（９），ｐｐ．１０４７－５２）。
別途言及されない限り、全ての実験を上述のように行った。
最初に、組換えＨＳＶ－１を操作して、異種プロモーター及びポリＡ配列を含むヒトＣＯＬ３Ａ１発現カセットをＩＣＰ４遺伝子座の各々に組み込んだ。ヒトＣＯＬ３Ａ１カセットを推定上含むウイルスの複数のプラークを採取し、Ｖｅｒｏ細胞の感染によりスクリーニングして、ＣＯＬ３Ａ１発現を試験した（データ示さず）。その後、Ｃ３ｖｅｃ０１と称される高発現クローンのうちの１つを、追加のインビトロ分析（以下に記載）及びインビボ分析（実施例７）のために選択した。
最初に、用量範囲研究を行い、不死化ヒトケラチノサイト（図１９）及び不死化ヒト皮膚線維芽細胞（図２０）の両方におけるＣ３ｖｅｃ０１のコードされたヒトカーゴのＣ３ｖｅｃ０１媒介送達の有効性を決定した。不死化細胞を、０．３～３の範囲の様々な感染多重度（ＭＯＩ）で４８時間感染させ、ヒトコラーゲン３発現を、複数のアッセイにより定量的及び定性的に測定した。不死化ＨＫ及び不死化ＨＤＦにおけるｑＰＣＲ分析（データは示さず）によるエフェクターＤＮＡレベル及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析によるエフェクター転写物レベルの両方の用量依存的増加が観察された（それぞれ、図１９Ａ及び図２０Ａ）。模擬感染細胞、及びＣ３ｖｅｃ０１と同じＨＳＶ－１骨格を含むが、代わりにｍＣｈｅｒｒｙエフェクターをコードするウイルスに感染した細胞を、陰性対照として使用した。これらの結果と並行して、Ｃ３ｖｅｃ０１感染後のＣＯＬ３タンパク質発現の用量依存的増加が、不死化ＨＫ（図１９Ｂ）及び不死化ＨＤＦ（図２０Ｂ）において免疫蛍光により観察された。不死化ＨＤＦは感染前は内因性ヒトＣＯＬ３を発現したが（予想通り）、低用量であってもＣ３ｖｅｃ０１による感染後に、ＣＯＬ３発現の有意な増加が観察された（一次抗ＣＯＬ３抗体、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ７７７８）。非感染不死化ケラチノサイトでは検出可能な内因性ＣＯＬ３はほとんどまたは全く観察されなかった。重要なことに、高用量であっても、Ｃ３ｖｅｃ０１に感染した不死化ケラチノサイトまたは線維芽細胞では、細胞形態または生存への有意な影響は観察されなかった。
皮膚が老化するにつれて、常在性皮膚線維芽細胞はコラーゲン３をあまり産生しなくなり、皮膚中のＣＯＬ１：ＣＯＬ３の比率は、コラーゲン１に偏る。新たなコラーゲン３の合成により皮膚幼若化をもたらすために、Ｃ３ｖｅｃ０１が老化皮膚線維芽細胞に効果的に感染し、そのコードされたヒトコラーゲン３を強力に発現させることができるかを理解することが重要であった。したがって、老化初代皮膚線維芽細胞に感染し、かつ複数のＭＯＩで外因性コラーゲン３を発現させるＣ３ｖｅｃ０１の能力を、２つの異なるベンダーから調達した細胞で試験した。以下の表４は、この研究で使用した４つの主要なＨＤＦ試料のドナー情報を提供する。
（表４）初代ヒト皮膚線維芽細胞ドナー
Figure 2024056823000006
不死化ＨＤＦと比較して、同等のまたはそれよりも高いＣＯＬ３転写物レベルで同様の用量依存的増加がベンダー１（図２１Ａ）及びベンダー２（図２１Ｃ）からの初代ＨＤＦのＣ３ｖｅｃ０１感染後に観察された。各ベンダーからの代表的な初代細胞の試料も、ウエスタンブロット分析によりＣＯＬ３発現について試験した（一次抗ＣＯＬ３抗体、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ７７７８）。Ｃ３ｖｅｃ０１は、最も低いＭＯＩで試験した場合でも、７３歳の男性患者（図２１Ｂ）及び７５歳の女性患者（図２１Ｄ）から生検した初代ＨＤＦにおける高レベルのヒトコラーゲン３発現をレスキューすることができた。
最後に、紫外線曝露不死化ヒト線維芽細胞におけるロバストなコラーゲン３発現を誘導するＣ３ｖｅｃ０１の能力を試験した。日光への曝露、及び対応する紫外線損傷が、老化皮膚表現型に対する唯一の最大の外因性寄与因子であることが知られており、複数のグループがインビトロ皮膚線維芽細胞紫外線曝露システムを用いて光老化のある特定の態様をモデル化している（例えば、Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ４６（５）：１８４９－１８６０を参照のこと）。紫外線曝露がヒト皮膚線維芽細胞に、より少ないコラーゲン３を分泌させたことを確認するために（光老化皮膚の表現型を考慮して予想されるように）、培養不死化ヒト皮膚線維芽細胞の上清中へのＣＯＬ３分泌を、３つの異なるレベルの紫外線曝露の前後にＥＬＩＳＡにより測定した（図２２Ａ）。実際には、培養線維芽細胞の紫外線照射は、内因性ＣＯＬ３発現を著しく低下させた。ＣＯＬ１発現をこの実験で並行して監視し、紫外線照射の影響を有意に受けなかったことから、タンパク質合成の包括的抑制とは対照的に、紫外線曝露がＣＯＬ３の特異的抑制を誘導したことが示された。次に、紫外線照射不死化ＨＤＦに感染し、かつ外因性ＣＯＬ３を発現させるＣ３ｖｅｃ０１の能力を試験した。ここで、不死化ＨＤＦを紫外線照射に曝露し、その後、２４時間回復させた後に、０．３または１のＭＯＩでＣ３ｖｅｃ０１に感染させた。感染の４８時間後、外因性ヒトＣＯＬ３をｑＲＴ－ＰＣＲ分析により評価した。強力なＣＯＬ３発現が、試験した両方のＭＯＩで、Ｃ３ｖｅｃ０１感染紫外線照射ＨＤＦで検出され（図２２Ｂ）、これは、Ｃ３ｖｅｃ０１が光損傷細胞に効率的に形質導入し、そのコードされたカーゴを送達したことを示す。Ｃ３ｖｅｃ０１と同じＨＳＶ－１骨格を含むが、代わりにｍＣｈｅｒｒｙエフェクターをコードするウイルスに感染した細胞を陰性対照として使用して、導入遺伝子検出の特異度を確実にした。
まとめると、この実施例に示されるデータは、組換えＨＳＶ－１ベクターＣ３ｖｅｃ０１が複数のヒト皮膚細胞型に効率的に形質導入し、高齢患者から収集された老化初代線維芽細胞におけるコラーゲン３発現をレスキューすることができ、紫外線損傷ＨＤＦからのコラーゲン３発現を回復させることができることを示す。理論に拘束されることを望むことなく、このデータが、老化皮膚のコラーゲン欠損を修正するためのヒトコラーゲン３をコードする組換えＨＳＶの使用を支持すると考えられる。
実施例７：皮内投与したＣ３ｖｅｃ０１のインビボ特徴付け
以下の実施例は、若年及び老年健常免疫適格動物においてＣ３ｖｅｃ０１を皮内投与する方法を確立するインビボ実験を記載した。
別途言及されない限り、全ての実験を上述のように行った。
この実施例で行った全ての手順は、該当する動物保護法に準拠しており、現地の機関内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）により承認されたものである。
さらなる操作の前にマウスの背中を剃った。その後、Ｃ３ｖｅｃ０１（またはビヒクル対照）をマウスの背中の４つの部位に皮内注射した。感染器官及びその後の回復期間後、動物を安楽死させ、８ｍｍパンチ生検を使用して処理部位を取り出した。各生検の半分を、ｑＰＣＲ／ｑＲＴ－ＰＣＲ分析のために液体窒素中で急速凍結し、残りの半分を免疫蛍光分析のために処理した。
組織試料を、上述のように核酸及びタンパク質分析のために処理した。ＣＯＬ３免疫蛍光染色のために、ウサギ抗ヒトコラーゲン３一次抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ７７７８）及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８コンジュゲート二次抗体を使用した。組織試料を，ＤＡＰＩを含有する封入剤で封入して、核を可視化した。
インビボ薬理学的研究を若年（６～８週齢）及び老年（およそ１３ヶ月齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスに行い、ベクターの皮内投与時の免疫適格動物におけるヒトＣＯＬ３のＣ３ｖｅｃ０１媒介発現を評価した。合計１０匹の動物をこの研究に使用した。最初に各マウスの背中を剃り、その後、４部位／動物で２×１０８ＰＦＵ／部位のＣ３ｖｅｃ０１（またはビヒクル対照）を皮内注射した。注射部位を投薬後４８時間または１週間のいずれかの時点で生検し、ｑＰＣＲ及び免疫蛍光によりヒトＣＯＬ３発現について評価した。以下の表５は、実験設計の概要を提供する。
（表５）研究設計及び被験物質投与
Figure 2024056823000007
Ｃ３ｖｅｃ０１の皮内送達は、注射後４８時間時点で収集した皮膚生検における高レベルの形質導入ベクターゲノムの検出をもたらし（図２３Ａ）、さらに、若年マウス及び老年マウスの両方に高レベルのヒトコラーゲン３転写物をもたらした（図２３Ｂ）。免疫蛍光ベースの検出は、ビヒクル処理皮膚と比較して、Ｃ３ｖｅｃ０１処理皮膚中の真皮全体にわたって顕著に増加したレベルのヒトＣＯＬ３も示し、転写物レベルと相関した（図２３Ｃ）。
まとめると、この実施例で提供されるデータは、皮膚に効率的に形質導入し、皮内注射後にインビボでヒトコラーゲン３を発現させることができることを示す。理論に拘束されることを望むことなく、ここに示されるインビボ研究が、審美的環境においてヒトコラーゲン３を送達するための新規の遺伝子療法としてのＨＳＶ－１の使用をさらに支持すると考えられる。
実施例８：ヒトラミニンをコードする改変単純ヘルペスウイルスベクターの作製及び検証
最初に、組換えヘルペスウイルスベクターを操作して、上の実施例３に記載されるように、２つのヒトラミニンタンパク質ＬＡＭＢ３またはＬＡＭＣ２の野生型バリアントまたはコドン最適化バリアントのいずれかを組み込んだ。ウイルス型毎にいくつかの単離体を採取した。ある特定の単離体が、コードされた野生型ヒトＬＡＭＢ３タンパク質を発現させることができるかを試験するために、ＩＣＰ４補完Ｖｅｒｏ細胞を６ウェルプレートにプレーティングし、感染が完了するまで野生型ＬａｍＢ３コードウイルスの１２の非力価測定ウイルス単離体に感染させた。感染後、ＲＮＡを収集し、ｃＤＮＡを作製し、各単離体由来の野生型ＬａｍＢ３の発現をｑＰＣＲにより決定した（図２４Ａ）。１２全ての単離体が、形質導入Ｖｅｒｏ細胞において様々なレベルで野生型ヒトＬａｍＢ３を発現させることができた。これらの単離体のうちの１０の単離体の、ヒトＬａｍＢ３を発現させる能力も、ウエスタンブロットにより試験した。ＩＣＰ４補完Ｖｅｒｏ細胞を６ウェルプレートにプレーティングし、感染が完了するまで野生型ＬａｍＢ３発現ウイルスの１０の非力価測定ウイルス単離体に感染させた。Ｖｅｒｏ細胞のウェルを、陽性対照としてＬａｍＢ３発現プラスミドでトランスフェクトした。感染後、細胞を穏やかな掻爬により収集し、遠心分離して細胞ペレットを収集し、培養培地を吸引し、細胞ペレットをＰＢＳで１回洗浄した。洗浄後、各細胞ペレットを、プロテアーゼ阻害剤を含有する２００μＬのＲＩＰＡ緩衝液中に再懸濁し、再懸濁液を５分毎に穏やかに撹拌しながら４℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、試料を１７，０００×ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、５％２－メルカプトメタノールを含有する４倍ＬＤＳ還元試料緩衝液を各精製上清に添加した。その後、試料を１０分間沸騰させた後、４～２０％トリス－グリシンポリアクリルアミドゲルにロードした。電気泳動後、タンパク質をＰＶＤＦ膜に移し、膜を５％乳／ＴＢＳ中で３０分間ブロックした。その後、一次ウサギ抗ＬａｍＢ３抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ１２８８６４）を、５％乳／ＴＢＳ中１：１０００希釈でＰＶＤＦ膜に添加し、室温で一晩（約１６時間）インキュベートした。その後、ブロットをＴＢＳで３回洗浄し（各５分間）、次いで、５％乳／ＴＢＳ中ＡＰコンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ３６８７）で、室温で１時間染色した。その後、膜をＴＢＳで３回洗浄し（各５分間）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴを添加し、ブロットを室温で約１０分間現像した。ｑＰＣＲデータと一致して、１０の全てのウイルス単離体が、コードされた野生型ヒトＬａｍＢ３を様々なレベルで発現させることができた（図２４Ｂ）。
ヒトＬａｍＢ３のコドン最適化バリアントをコードするウイルスも、ウエスタンブロット分析により、Ｖｅｒｏ細胞においてそれらのカーゴを発現させるそれらの能力について試験した。簡潔には、上述のように、コドン最適化（ＣＯ）ＬａｍＢ３コードウイルスの１０の非力価測定ウイルス単離体を使用してＶｅｒｏ細胞を感染させ、細胞ペレットを収集し、各ペレットを、プロテアーゼ阻害剤を含有するＲＩＰＡ緩衝液中に再懸濁し、これらの細胞溶解物を使用してウエスタンブロットを行った。１０の全てのウイルス単離体が、Ｖｅｒｏ細胞において、コードされたコドン最適化ヒトＬａｍＢ３を発現させることができた（図２５）。
次に、野生型ＬＡＭＢ３またはコドン最適化ＬＡＭＢ３のいずれかをコードする４つのウイルス単離体を、初代ヒト細胞に形質導入してそれらのカーゴを発現させるそれらの能力について、試験した。不死化初代正常ケラチノサイトを感染多重度（ＭＯＩ）１．０で４８時間感染させた。非感染細胞を陰性対照として使用した。その後、感染ヒトケラチノサイトにおけるＬａｍＢ３の発現をウエスタンブロットにより試験した。ウエスタンブロットを、一次ウサギ抗ＬａｍＢ３抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ１２８８６４）を使用して上述のように行った。Ｖｅｒｏ細胞を使用して作成されたデータと一致して、野生型ＬａｍＢ３及びコドン最適化ＬａｍＢ３のいずれかを発現させるウイルス単離体が、初代ヒトケラチノサイトに効果的に形質導入してそれらのコードされた構築物を適切なレベルで発現させることが確認された（図２６）。
ＬａｍＣ２含有単離体が、コードされた野生型またはコドン最適化ヒトＬＡＭＣ２を発現させることができるかを試験するために、ＩＣＰ４補完Ｖｅｒｏ細胞を６ウェルプレートにプレーティングし、感染が完了するまでいくつかの非力価測定野生型またはコドン最適化ＬａｍＣ２発現ウイルス単離体に感染させた。感染後、ＲＮＡを収集し、ｃＤＮＡを作製し、各単離体由来の野生型ＬａｍＣ２（図２７Ａ）またはコドン最適化ＬａｍＣ２（図２７Ｂ）の発現をｑＰＣＲにより決定した。１２の単離体のうちの８つが、形質導入Ｖｅｒｏ細胞において様々なレベルで野生型ヒトＬａｍＣ２を発現させることができた一方で、７つの単離体のうちの３つは、コドン最適化ヒトＬａｍＣ２を発現させることができた。次に、ヒトＬａｍＣ２を発現させるある特定の野生型単離体及びコドン最適化単離体の能力をウエスタンブロットにより試験した。ＩＣＰ４補完Ｖｅｒｏ細胞を６ウェルプレートにプレーティングし、感染が完了するまで非力価測定ウイルス単離体に感染させた。Ｖｅｒｏ細胞のウェルを陰性対照として非感染のままにした。感染後、細胞を穏やかな掻爬により収集し、遠心分離して細胞ペレットを収集し、培養培地を吸引し、細胞ペレットをＰＢＳで１回洗浄した。洗浄後、各細胞ペレットを、プロテアーゼ阻害剤を含有する２００μＬのＲＩＰＡ緩衝液中に再懸濁し、再懸濁液を５分毎に穏やかに撹拌しながら４℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、試料を１７，０００×ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、５％２－メルカプトメタノールを含有する４倍ＬＤＳ還元試料緩衝液を各精製上清に添加した。その後、試料を１０分間沸騰させた後、４～２０％トリス－グリシンポリアクリルアミドゲルにロードした。電気泳動後、タンパク質をＰＶＤＦ膜に移し、膜を５％乳／ＴＢＳ中で３０分間ブロックした。その後、一次ウサギ抗ＬａｍＣ２抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９６３２７）を、５％乳／ＴＢＳ中１：１０００希釈でＰＶＤＦ膜に添加し、室温で一晩（約１６時間）インキュベートした。その後、ブロットをＴＢＳで３回洗浄し（各５分間）、次いで、５％乳／ＴＢＳ中ＡＰコンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ３６８７）で、室温で１時間染色した。その後、膜をＴＢＳで３回洗浄し（各５分間）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴを添加し、ブロットを室温で約１０分間現像した。ｑＰＣＲデータと一致して、９つ全ての試験したウイルス単離体も、コードされたヒトＬａｍＣ２を発現させることができた（図２７Ｃ）。
コドン最適化ＬａｍＣ２発現ウイルス単離体「ＬＧＡ」を、ヒト細胞におけるさらなる試験のために選択した。不死化初代正常ケラチノサイトを、ＬＧＡ単離体に０．３、１．０、または３．０の感染多重度（ＭＯＩ）で４８時間感染させた。非感染細胞（対照）及びｍＣｈｅｒｒｙ発現ウイルス感染細胞を陰性対照として使用した。感染の４８時間後にＤＮＡ及びＲＮＡを不死化ケラチノサイトから抽出し、ｑＰＣＲ／ｑＲＴ－ＰＣＲを行った（図２８Ａ～Ｂ）。ＤＮＡ５０ｎｇ当たり検出されるウイルスゲノムコピーによって評価されるように、不死化ケラチノサイトにおけるＬＧＡ単離体において良好な用量応答が観察された（図２８Ａ）。興味深いことに、ＭＯＩを０．３から１．０に増加させた場合、用量応答が転写物レベルで観察されたが、ＭＯＩを１．０から３．０に増加させた場合、転写物レベルの追加の増加は観察されなかった（図２８Ｂ）。感染ヒトケラチノサイトにおけるＬａｍＣ２の発現も、ウエスタンブロットにより試験した。ウエスタンブロットを上述のように行った（一次ウサギ抗ＬａｍＣ２抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９６３２７）を使用した）。転写物分析と一致して、ＭＯＩを０．３から１．０に増加させた場合、用量応答がタンパク質レベルで観察されたが、１．０から３．０に増加させた場合には観察されなかった（図２８Ｃ）。
最後に、単離体「ＬＧＡ」がインビボで送達されたときにそのヒトラミニンを発現させることができるかを試験するために、ヒトＬＡＭＣ２発現を、動物における皮内注射後に、ｑＰＣＲ、ｑＲＴ－ＰＣＲ、及び免疫蛍光により評価した。１×１０８ＰＦＵのＰＢＳ＋１０％グリセロール（ビヒクル）中に配合したＬＧＡを、２匹のマウスの背面皮膚及び足蹠に皮内注射した。陰性対照とするために、ビヒクルのみの等価体積を１匹のマウスの背面皮膚に皮内投与した。本研究で処理したこれらの２匹の動物の注射部位の概略図を図２９Ａに提供する。
投与後７２時間時点で、全厚８ｍｍの生検を各処理部位から採取し、半分に分けた。各切片の半分を液体窒素中で急速凍結し、その後、ｑＰＣＲ分析及びｑＲＴ－ＰＣＲ分析のために処理して、背面皮膚におけるＬＡＭＣ２のＤＮＡコピー数（図２９Ｂ）及び転写物レベル（図２９Ｃ）を定量化した。各生検の残りの半分を、免疫蛍光（ＩＦ）のためにＯＣＴに包埋した。凍結切片におけるＬＡＭＣ２発現は、抗ヒトＬＡＭＣ２抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９６３２７）を使用した免疫蛍光分析により決定した。ＬＧＡから発現したヒトＬＡＭＣ２が、天然ラミニン－３３２が見られる皮膚の領域に正しく局在したことを確認するために、背面皮膚試料にマウスラミニン－３３２（ｐＫａｌ）についての対比染色も行った。ＬＧＡの皮内投与により、マウス皮膚の形質導入の成功がもたらされ、コードされたヒト導入遺伝子を表皮の正しい層にロバストに発現させた。組織学的評価は、処理部位に炎症性浸潤を示さず、この療法の安全性を実証した。
まとめると、この実施例に示されるデータは、以下を実証する：（１）ＨＳＶベクターを首尾よく操作して、ヒトラミニンタンパク質（具体的には、ヒトラミニン－３３２のβまたはγサブユニット）をロバストに発現させることができた、（２）ＨＳＶベースのベクター（ＬＧＡ）がインビボでヒトラミニン－３３２サブユニットを首尾よく送達することができた、及び（３）組換えヒトラミニン－３３２サブユニットが処理動物の表皮の適切な領域で発現され、それに局在した。
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> Krystal Biotech, Inc.
<120> RECOMBINANT NUCLEIC ACIDS ENCODING COSMETIC PROTEIN(S) FOR
AESTHETIC APPLICATIONS
<150> US 62/663,476
<151> 2018-04-27
<160> 64
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1
<211> 4395
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
atgttcagct ttgtggacct ccggctcctg ctcctcttag cggccaccgc cctcctgacg 60
cacggccaag aggaaggcca agtcgagggc caagacgaag acatcccacc aatcacctgc 120
gtacagaacg gcctcaggta ccatgaccga gacgtgtgga aacccgagcc ctgccggatc 180
tgcgtctgcg acaacggcaa ggtgttgtgc gatgacgtga tctgtgacga gaccaagaac 240
tgccccggcg ccgaagtccc cgagggcgag tgctgtcccg tctgccccga cggctcagag 300
tcacccaccg accaagaaac caccggcgtc gagggaccca agggagacac tggcccccga 360
ggcccaaggg gacccgcagg cccccctggc cgagatggca tccctggaca gcctggactt 420
cccggacccc ccggaccccc cggacctccc ggaccccctg gcctcggagg aaactttgct 480
ccccagctgt cttatggcta tgatgagaaa tcaaccggag gaatttccgt gcctggcccc 540
atgggtccct ctggtcctcg tggtctccct ggcccccctg gtgcacctgg tccccaaggc 600
ttccaaggtc cccctggtga gcctggcgag cctggagctt caggtcccat gggtccccga 660
ggtcccccag gtccccctgg aaagaatgga gatgatgggg aagctggaaa acctggtcgt 720
cctggtgagc gtgggcctcc tgggcctcag ggtgctcgag gattgcccgg aacagctggc 780
ctccctggaa tgaagggaca cagaggtttc agtggtttgg atggtgccaa gggagatgct 840
ggtcctgctg gtcctaaggg tgagcctggc agccctggtg aaaatggagc tcctggtcag 900
atgggccccc gtggcctgcc tggtgagaga ggtcgccctg gagcccctgg ccctgctggt 960
gctcgtggaa atgatggtgc tactggtgct gccgggcccc ctggtcccac cggccccgct 1020
ggtcctcctg gcttccctgg tgctgttggt gctaagggtg aagctggtcc ccaagggccc 1080
cgaggctctg aaggtcccca gggtgtgcgt ggtgagcctg gcccccctgg ccctgctggt 1140
gctgctggcc ctgctggaaa ccctggtgct gatggacagc ctggtgctaa aggtgccaat 1200
ggtgctcctg gtattgctgg tgctcctggc ttccctggtg cccgaggccc ctctggaccc 1260
cagggccccg gcggccctcc tggtcccaag ggtaacagcg gtgaacctgg tgctcctggc 1320
agcaaaggag acactggtgc taagggagag cctggccctg ttggtgttca aggaccccct 1380
ggccctgctg gagaggaagg aaagcgagga gctcgaggtg aacccggacc cactggcctg 1440
cccggacccc ctggcgagcg tggtggacct ggtagccgtg gtttccctgg cgcagatggt 1500
gttgctggtc ccaagggtcc cgctggtgaa cgtggttctc ctggccctgc tggccccaaa 1560
ggatctcctg gtgaagctgg tcgtcccggt gaagctggtc tgcctggtgc caagggtctg 1620
actggaagcc ctggcagccc tggtcctgat ggcaaaactg gcccccctgg tcccgccggt 1680
caagatggtc gccccggacc cccaggccca cctggtgccc gtggtcaggc tggtgtgatg 1740
ggattccctg gacctaaagg tgctgctgga gagcccggca aggctggaga gcgaggtgtt 1800
cccggacccc ctggcgctgt cggtcctgct ggcaaagatg gagaggctgg agctcaggga 1860
ccccctggcc ctgctggtcc cgctggcgag agaggtgaac aaggccctgc tggctccccc 1920
ggattccagg gtctccctgg tcctgctggt cctccaggtg aagcaggcaa acctggtgaa 1980
cagggtgttc ctggagacct tggcgcccct ggcccctctg gagcaagagg cgagagaggt 2040
ttccctggcg agcgtggtgt gcaaggtccc cctggtcctg ctggtccccg aggggccaac 2100
ggtgctcccg gcaacgatgg tgctaagggt gatgctggtg cccctggagc tcccggtagc 2160
cagggcgccc ctggccttca gggaatgcct ggtgaacgtg gtgcagctgg tcttccaggg 2220
cctaagggtg acagaggtga tgctggtccc aaaggtgctg atggctctcc tggcaaagat 2280
ggcgtccgtg gtctgactgg ccccattggt cctcctggcc ctgctggtgc ccctggtgac 2340
aagggtgaaa gtggtcccag cggccctgct ggtcccactg gagctcgtgg tgcccccgga 2400
gaccgtggtg agcctggtcc ccccggccct gctggctttg ctggcccccc tggtgctgac 2460
ggccaacctg gtgctaaagg cgaacctggt gatgctggtg ctaaaggcga tgctggtccc 2520
cctggccctg ccggacccgc tggaccccct ggccccattg gtaatgttgg tgctcctgga 2580
gccaaaggtg ctcgcggcag cgctggtccc cctggtgcta ctggtttccc tggtgctgct 2640
ggccgagtcg gtcctcctgg cccctctgga aatgctggac cccctggccc tcctggtcct 2700
gctggcaaag aaggcggcaa aggtccccgt ggtgagactg gccctgctgg acgtcctggt 2760
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gacctcaaga tgtgccactc tgactggaag agtggagagt actggattga ccccaaccaa 3840
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<210> 2
<211> 4395
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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<210> 5
<211> 4401
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<213> Homo sapiens
<400> 5
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<211> 4401
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
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<210> 8
<211> 5010
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 8
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tactcctttg tgatgcacac atctgccggc gcagaaggat caggacaagc ccttgctagc 4800
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<211> 3087
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<213> Homo sapiens
<400> 9
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<210> 10
<211> 3087
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 10
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<210> 11
<211> 8835
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
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tctgtcacca ttacctggac cagggttcct ggcgccacag gatacagggt ttcctggcac 2160
tcagcccacg gcccagagaa atcccagttg gtttctgggg aggccacggt ggctgagctg 2220
gatggactgg agccagatac tgagtatacg gtgcatgtga gggcccatgt ggctggcgtg 2280
gatgggcccc ctgcctctgt ggttgtgagg actgcccctg agcctgtggg tcgtgtgtcg 2340
aggctgcaga tcctcaatgc ttccagcgac gttctacgga tcacctgggt aggggtcact 2400
ggagccacag cttacagact ggcctggggc cggagtgaag gcggccccat gaggcaccag 2460
atactcccag gaaacacaga ctctgcagag atccggggtc tcgaaggtgg agtcagctac 2520
tcagtgcgag tgactgcact tgtcggggac cgcgagggca cacctgtctc cattgttgtc 2580
actacgccgc ctgaggctcc gccagccctg gggacgcttc acgtggtgca gcgcggggag 2640
cactcgctga ggctgcgctg ggagccggtg cccagagcgc agggcttcct tctgcactgg 2700
caacctgagg gtggccagga acagtcccgg gtcctggggc ccgagctcag cagctatcac 2760
ctggacgggc tggagccagc gacacagtac cgcgtgaggc tgagtgtcct agggccagct 2820
ggagaagggc cctctgcaga ggtgactgcg cgcactgagt cacctcgtgt tccaagcatt 2880
gaactacgtg tggtggacac ctcgatcgac tcggtgactt tggcctggac tccagtgtcc 2940
agggcatcca gctacatcct atcctggcgg ccactcagag gccctggcca ggaagtgcct 3000
gggtccccgc agacacttcc agggatctca agctcccagc gggtgacagg gctagagcct 3060
ggcgtctctt acatcttctc cctgacgcct gtcctggatg gtgtgcgggg tcctgaggca 3120
tctgtcacac agacgccagt gtgcccccgt ggcctggcgg atgtggtgtt cctaccacat 3180
gccactcaag acaatgctca ccgtgcggag gctacgagga gggtcctgga gcgtctggtg 3240
ttggcacttg ggcctcttgg gccacaggca gttcaggttg gcctgctgtc ttacagtcat 3300
cggccctccc cactgttccc actgaatggc tcccatgacc ttggcattat cttgcaaagg 3360
atccgtgaca tgccctacat ggacccaagt gggaacaacc tgggcacagc cgtggtcaca 3420
gctcacagat acatgttggc accagatgct cctgggcgcc gccagcacgt accaggggtg 3480
atggttctgc tagtggatga acccttgaga ggtgacatat tcagccccat ccgtgaggcc 3540
caggcttctg ggcttaatgt ggtgatgttg ggaatggctg gagcggaccc agagcagctg 3600
cgtcgcttgg cgccgggtat ggactctgtc cagaccttct tcgccgtgga tgatgggcca 3660
agcctggacc aggcagtcag tggtctggcc acagccctgt gtcaggcatc cttcactact 3720
cagccccggc cagagccctg cccagtgtat tgtccaaagg gccagaaggg ggaacctgga 3780
gagatgggcc tgagaggaca agttgggcct cctggcgacc ctggcctccc gggcaggacc 3840
ggtgctcccg gcccccaggg gccccctgga agtgccactg ccaagggcga gaggggcttc 3900
cctggagcag atgggcgtcc aggcagccct ggccgcgccg ggaatcctgg gacccctgga 3960
gcccctggcc taaagggctc tccagggttg cctggccctc gtggggaccc gggagagcga 4020
ggacctcgag gcccaaaggg ggagccgggg gctcccggac aagtcatcgg aggtgaagga 4080
cctgggcttc ctgggcggaa aggggaccct ggaccatcgg gcccccctgg acctcgtgga 4140
ccactggggg acccaggacc ccgtggcccc ccagggcttc ctggaacagc catgaagggt 4200
gacaaaggcg atcgtgggga gcggggtccc cctggaccag gtgaaggtgg cattgctcct 4260
ggggagcctg ggctgccggg tcttcccgga agccctggac cccaaggccc cgttggcccc 4320
cctggaaaga aaggagaaaa aggtgactct gaggatggag ctccaggcct cccaggacaa 4380
cctgggtctc cgggtgagca gggcccacgg ggacctcctg gagctattgg ccccaaaggt 4440
gaccggggct ttccagggcc cctgggtgag gctggagaga agggcgaacg tggaccccca 4500
ggcccagcgg gatcccgggg gctgccaggg gttgctggac gtcctggagc caagggtcct 4560
gaagggccac caggacccac tggccgccaa ggagagaagg gggagcctgg tcgccctggg 4620
gaccctgcag tggtgggacc tgctgttgct ggacccaaag gagaaaaggg agatgtgggg 4680
cccgctgggc ccagaggagc taccggagtc caaggggaac ggggcccacc cggcttggtt 4740
cttcctggag accctggccc caagggagac cctggagacc ggggtcccat tggccttact 4800
ggcagagcag gacccccagg tgactcaggg cctcctggag agaagggaga ccctgggcgg 4860
cctggccccc caggacctgt tggcccccga ggacgagatg gtgaagttgg agagaaaggt 4920
gacgagggtc ctccgggtga cccgggtttg cctggaaaag caggcgagcg tggccttcgg 4980
ggggcacctg gagttcgggg gcctgtgggt gaaaagggag accagggaga tcctggagag 5040
gatggacgaa atggcagccc tggatcatct ggacccaagg gtgaccgtgg ggagccgggt 5100
cccccaggac ccccgggacg gctggtagac acaggacctg gagccagaga gaagggagag 5160
cctggggacc gcggacaaga gggtcctcga gggcccaagg gtgatcctgg cctccctgga 5220
gcccctgggg aaaggggcat tgaagggttt cggggacccc caggcccaca gggggaccca 5280
ggtgtccgag gcccagcagg agaaaagggt gaccggggtc cccctgggct ggatggccgg 5340
agcggactgg atgggaaacc aggagccgct gggccctctg ggccgaatgg tgctgcaggc 5400
aaagctgggg acccagggag agacgggctt ccaggcctcc gtggagaaca gggcctccct 5460
ggcccctctg gtccccctgg attaccggga aagccaggcg aggatggcaa acctggcctg 5520
aatggaaaaa acggagaacc tggggaccct ggagaagacg ggaggaaggg agagaaagga 5580
gattcaggcg cctctgggag agaaggtcgt gatggcccca agggtgagcg tggagctcct 5640
ggtatccttg gaccccaggg gcctccaggc ctcccagggc cagtgggccc tcctggccag 5700
ggttttcctg gtgtcccagg aggcacgggc cccaagggtg accgtgggga gactggatcc 5760
aaaggggagc agggcctccc tggagagcgt ggcctgcgag gagagcctgg aagtgtgccg 5820
aatgtggatc ggttgctgga aactgctggc atcaaggcat ctgccctgcg ggagatcgtg 5880
gagacctggg atgagagctc tggtagcttc ctgcctgtgc ccgaacggcg tcgaggcccc 5940
aagggggact caggcgaaca gggcccccca ggcaaggagg gccccatcgg ctttcctgga 6000
gaacgcgggc tgaagggcga ccgtggagac cctggccctc aggggccacc tggtctggcc 6060
cttggggaga ggggcccccc cgggccttcc ggccttgccg gggagcctgg aaagcctggt 6120
attcccgggc tcccaggcag ggctgggggt gtgggagagg caggaaggcc aggagagagg 6180
ggagaacggg gagagaaagg agaacgtgga gaacagggca gagatggccc tcctggactc 6240
cctggaaccc ctgggccccc cggaccccct ggccccaagg tgtctgtgga tgagccaggt 6300
cctggactct ctggagaaca gggaccccct ggactcaagg gtgctaaggg ggagccgggc 6360
agcaatggtg accaaggtcc caaaggagac aggggtgtgc caggcatcaa aggagaccgg 6420
ggagagcctg gaccgagggg tcaggacggc aacccgggtc taccaggaga gcgtggtatg 6480
gctgggcctg aagggaagcc gggtctgcag ggtccaagag gcccccctgg cccagtgggt 6540
ggtcatggag accctggacc acctggtgcc ccgggtcttg ctggccctgc aggaccccaa 6600
ggaccttctg gcctgaaggg ggagcctgga gagacaggac ctccaggacg gggcctgact 6660
ggacctactg gagctgtggg acttcctgga ccccccggcc cttcaggcct tgtgggtcca 6720
caggggtctc caggtttgcc tggacaagtg ggggagacag ggaagccggg agccccaggt 6780
cgagatggtg ccagtggaaa agatggagac agagggagcc ctggtgtgcc agggtcacca 6840
ggtctgcctg gccctgtcgg acctaaagga gaacctggcc ccacgggggc ccctggacag 6900
gctgtggtcg ggctccctgg agcaaaggga gagaagggag cccctggagg ccttgctgga 6960
gacctggtgg gtgagccggg agccaaaggt gaccgaggac tgccagggcc gcgaggcgag 7020
aagggtgaag ctggccgtgc aggggagccc ggagaccctg gggaagatgg tcagaaaggg 7080
gctccaggac ccaaaggttt caagggtgac ccaggagtcg gggtcccggg ctcccctggg 7140
cctcctggcc ctccaggtgt gaagggagat ctgggcctcc ctggcctgcc cggtgctcct 7200
ggtgttgttg ggttcccggg tcagacaggc cctcgaggag agatgggtca gccaggccct 7260
agtggagagc ggggtctggc aggcccccca gggagagaag gaatcccagg acccctgggg 7320
ccacctggac caccggggtc agtgggacca cctggggcct ctggactcaa aggagacaag 7380
ggagaccctg gagtagggct gcctgggccc cgaggcgagc gtggggagcc aggcatccgg 7440
ggtgaagatg gccgccccgg ccaggaggga ccccgaggac tcacggggcc ccctggcagc 7500
aggggagagc gtggggagaa gggtgatgtt gggagtgcag gactaaaggg tgacaaggga 7560
gactcagctg tgatcctggg gcctccaggc ccacggggtg ccaaggggga catgggtgaa 7620
cgagggcctc ggggcttgga tggtgacaaa ggacctcggg gagacaatgg ggaccctggt 7680
gacaagggca gcaagggaga gcctggtgac aagggctcag ccgggttgcc aggactgcgt 7740
ggactcctgg gaccccaggg tcaacctggt gcagcaggga tccctggtga cccgggatcc 7800
ccaggaaagg atggagtgcc tggtatccga ggagaaaaag gagatgttgg cttcatgggt 7860
ccccggggcc tcaagggtga acggggagtg aagggagcct gtggccttga tggagagaag 7920
ggagacaagg gagaagctgg tcccccaggc cgccccgggc tggcaggaca caaaggagag 7980
atgggggagc ctggtgtgcc gggccagtcg ggggcccctg gcaaggaggg cctgatcggt 8040
cccaagggtg accgaggctt tgacgggcag ccaggcccca agggtgacca gggcgagaaa 8100
ggggagcggg gaaccccagg aattgggggc ttcccaggcc ccagtggaaa tgatggctct 8160
gctggtcccc cagggccacc tggcagtgtt ggtcccagag gccccgaagg acttcagggc 8220
cagaagggtg agcgaggtcc ccccggagag agagtggtgg gggctcctgg ggtccctgga 8280
gctcctggcg agagagggga gcaggggcgg ccagggcctg ccggtcctcg aggcgagaag 8340
ggagaagctg cactgacgga ggatgacatc cggggctttg tgcgccaaga gatgagtcag 8400
cactgtgcct gccagggcca gttcatcgca tctggatcac gacccctccc tagttatgct 8460
gcagacactg ccggctccca gctccatgct gtgcctgtgc tccgcgtctc tcatgcagag 8520
gaggaagagc gggtaccccc tgaggatgat gagtactctg aatactccga gtattctgtg 8580
gaggagtacc aggaccctga agctccttgg gatagtgatg acccctgttc cctgccactg 8640
gatgagggct cctgcactgc ctacaccctg cgctggtacc atcgggctgt gacaggcagc 8700
acagaggcct gtcacccttt tgtctatggt ggctgtggag ggaatgccaa ccgttttggg 8760
acccgtgagg cctgcgagcg ccgctgccca ccccgggtgg tccagagcca ggggacaggt 8820
actgcccagg actga 8835

<210> 12
<211> 8835
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 12
atgaccctga gactgctggt ggctgccctg tgtgctggaa ttctggctga ggctcctaga 60
gtgcgggccc agcatagaga aagagtgacc tgtacacggc tgtacgccgc cgatatcgtg 120
tttctgctgg atggcagcag cagcatcggc cggtccaatt tcagagaagt gcggagcttt 180
ctggaaggcc tggtgctgcc tttttctggc gctgcttctg cccagggcgt cagatttgcc 240
accgtgcagt acagcgacga ccctagaaca gagtttggcc tggatgctct cggcagcggc 300
ggagatgtga tcagagccat cagagagctg agctacaaag gcggcaatac cagaacaggc 360
gccgctattc tgcacgtggc cgaccatgtt tttctgcccc aactggctag acccggcgtg 420
ccaaaagtgt gcatcctgat cacagacggc aagagccagg acctggtgga tacagccgct 480
cagagactga aaggacaggg cgtgaaactg ttcgccgtgg gcatcaagaa cgccgatcct 540
gaggaactga agagagtggc cagccagcct accagcgatt tcttcttctt cgtgaacgac 600
ttcagcatcc tgcggaccct gctgcctctg gtgtctagaa gagtgtgtac aacagccggc 660
ggagtgcctg tgaccagacc tcctgatgat agcacaagcg cccctagaga tctggtgctg 720
tctgagccaa gcagccagag tctgagagtg cagtggacag ctgctagcgg ccctgtgaca 780
ggctacaagg tgcagtatac acctctgaca ggcctgggcc agcctctgcc ttctgagaga 840
caagaagtga acgtcccagc cggcgaaaca tctgtcagac tgagaggact gaggcccctg 900
accgagtacc aagtgacagt gatcgccctg tacgccaatt ctatcggcga ggccgtgtct 960
ggcacagcca gaacaacagc tctggaagga ccagagctga ccatccagaa cacaacagcc 1020
cattctctgc tggttgcttg gagatctgtg cctggcgcca ccggctatag agtgacttgg 1080
agagttctga gcggaggccc cacacagcag caagaacttg gacctggaca gggctccgtg 1140
ctgctgagag atctcgagcc tggcaccgat tacgaagtga ccgtgtctac cctgttcggc 1200
agatctgtgg gacctgccac aagcctgatg gccagaacag atgccagcgt ggaacagacc 1260
ctgaggcctg tgattctggg ccctacatct atcctgctga gctggaatct ggtgcccgag 1320
gccagaggct atagactgga atggcggaga gaaaccggcc tggaacctcc tcagaaagtg 1380
gtcctgccta gcgacgtgac aagataccag ctggatggac tgcagcccgg caccgagtac 1440
agactgacac tgtatacact gctcgagggc cacgaagtgg ccacaccagc tacagttgtg 1500
ccaacaggac ctgagctgcc tgtgtctcct gtgactgatc tgcaggccac agaactgcct 1560
ggccagagag tcagagttag ctggtcacct gttccaggcg ccacacagta cagaatcatc 1620
gtgcggtcta cacagggcgt cgagagaaca ctggttctgc ctggaagcca gaccgccttc 1680
gatctggatg atgtgcaggc cggactgtcc tacacagtca gagtgtctgc cagagtgggc 1740
cctagagaag gatctgcctc tgtgctgacc gtgcggagag agcctgaaac accactggca 1800
gtgcctggac tgagagtggt ggtgtcagat gccaccagag ttagagtggc ttggggacca 1860
gttcctggcg cctctggctt tagaatcagc tggtctacag gctctggccc cgaaagctct 1920
cagacactgc ctccagatag caccgccacc gatattacag gcctgcagcc tggaactacc 1980
taccaggtgg ccgttagcgt gctgagagga agagaagaag gccctgccgc cgtcatcgtg 2040
gctagaactg atcctctggg acctgtgcgg acagtgcacg tgacacaagc ctctagcagc 2100
agcgtgacca tcacctggac aagagtgcca ggcgctacag gatacagagt gtcctggcat 2160
tctgctcacg gccctgagaa gtctcagctg gtgtctggcg aagccacagt ggctgaactc 2220
gacggactgg aacctgacac agagtatact gtgcacgtgc gggctcatgt ggctggtgtt 2280
gatggacctc ctgcttctgt ggtcgtcaga acagcccctg aacctgtggg aagagtgtcc 2340
agactgcaga tcctgaatgc cagcagcgac gtgctgagga tcacatgggt tggagtgacc 2400
ggcgccacag cttatagact cgcctggggt agaagcgaag gcggccctat gagacatcag 2460
atcctgcctg gcaataccga ctccgccgag attagaggcc ttgaaggcgg agtgtcttac 2520
agcgttagag tgacagccct cgtgggcgat agagaaggca cacctgtgtc catcgtggtc 2580
accacacctc cagaagctcc tccagctctg ggaacactgc atgtggtgca gagaggcgag 2640
cactctctga gactgagatg ggaacctgtg ccacgcgctc agggatttct gctgcattgg 2700
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ctcgatggac ttgagcctgc cactcagtat agagtcagac tgtcagtgct ggggcctgcc 2820
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cttgcccttg gaccactggg acctcaggct gttcaagtgg gcctgctgtc ctactctcac 3300
agaccctctc cactgttccc tctgaacggc tctcacgacc tgggcatcat cctgcagaga 3360
atccgggaca tgccctacat ggacccctct ggcaacaatc tgggcacagc cgttgtgact 3420
gcccacagat atatgctggc cccagatgct cctggcagac gacaacatgt ccctggcgtt 3480
atggtgctgc tggtcgatga acccctgcgg ggcgatatct ttagccctat tagagaagcc 3540
caggccagcg gcctgaatgt ggttatgctt ggaatggctg gcgccgatcc agagcagctt 3600
agaaggcttg cccctggcat ggatagcgtg cagaccttct ttgccgtgga cgatggacct 3660
tctctggatc aggctgtgtc tggactggct acagcactgt gccaggcaag cttcaccaca 3720
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ggaccaagag gtccaaaagg cgaacccggt gctccaggac aagtgattgg cggagaagga 4080
cccggattgc ccggaagaaa aggcgaccct ggaccaagtg gacctccagg acctagggga 4140
cctttgggag atcccggtcc aagaggccct cctggattgc ctggtacagc catgaagggc 4200
gacaaaggcg ataggggaga aagaggacca ccaggaccag gcgaaggtgg aattgctcct 4260
ggcgaaccag ggttgcctgg actccctggc tcacctggac cacaaggacc tgttggccca 4320
cctggaaaga aaggcgaaaa gggcgattct gaggatggcg ccccagggct tcctggacaa 4380
ccaggctctc caggcgaaca aggacccaga gggcctccag gtgctattgg ccctaaaggc 4440
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cctgctggac caaggggagc tacaggcgtt caaggcgaaa ggggtccacc tggacttgtt 4740
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ccacctgggc cgccaggcgt taagggcgat ttgggacttc ctgggctgcc tggcgctcct 7200
ggcgttgtgg gatttccagg acaaactggc cctcggggag aaatgggtca acctgggcct 7260
agcggagaaa gaggccttgc cggacctcct ggaagagagg gaatacctgg accacttgga 7320
ccgcctggac ctccaggttc tgttggacct cctggcgctt caggattgaa gggcgataag 7380
ggcgaccctg gtgttggact tcccggtcct cgtggcgaaa ggggagaacc aggcattaga 7440
ggcgaagatg gacggcctgg acaagaggga cctagaggtc ttacaggccc accaggctct 7500
agaggcgaaa ggggcgagaa aggcgacgtg ggttctgcag gacttaaggg cgacaagggc 7560
gattccgctg tgattttggg accaccggga ccaagaggcg ctaaaggcga tatgggcgag 7620
agaggcccta gaggcctgga tggcgataag gggccaagag gcgacaacgg cgacccaggc 7680
gataagggat ctaaaggcga acccggcgat aagggctctg ctggactgcc aggacttcga 7740
ggacttctgg gtccacaagg ccaacctggc gccgcaggca ttcccggcga tccgggttct 7800
cctggcaaag atggtgttcc tggcatcagg ggcgaaaagg gcgacgtcgg ttttatgggc 7860
cctcgcggat tgaaaggcga gagaggtgtt aagggcgcct gtggacttga cggcgaaaaa 7920
ggcgataagg gcgaagctgg acctcctggc agacctggat tggctggaca caagggcgag 7980
atgggagagc ccggtgttcc tggacaaagt ggcgcccctg gaaaagaagg actgatcggt 8040
ccaaagggcg accgcggatt tgatggccaa ccgggtccta aaggcgatca gggcgagaaa 8100
ggcgaaagag gcactcctgg catcggaggc tttccaggac caagcggcaa tgatggatct 8160
gctggcccgc cagggcctcc tggatctgtt ggtccaagag gaccagaagg cctgcaggga 8220
caaaaaggcg agcgcggacc accaggcgaa agagttgttg gagcacccgg cgttcccggt 8280
gctcccggcg aaagaggcga acaaggcaga cctggaccag ctggccctag aggcgaaaaa 8340
ggggaagccg ctctgaccga ggacgatatc agaggctttg tgcggcaaga gatgagccag 8400
cattgtgcct gtcaggggca gtttatcgcc agcggttcta gacctctgcc tagctatgcc 8460
gctgataccg ccggatctca gctgcatgct gtgcctgtgc ttagagtgtc tcacgccgag 8520
gaagaggaaa gagtccctcc agaggacgac gagtactccg agtatagcga gtactctgtg 8580
gaagagtatc aggaccccga ggctccttgg gatagcgacg atccatgttc tctgccactg 8640
gatgagggca gctgtaccgc ctacacactg aggtggtatc acagagccgt gaccggaagc 8700
accgaggcct gccatccttt tgtttatggc ggctgcggcg gcaacgccaa tagatttgga 8760
acaagagagg cctgcgagcg gagatgccct ccaagagtgg ttcagtctca aggcaccggc 8820
actgcccagg actaa 8835

<210> 13
<211> 4494
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
atggatgtaa ccaagaaaaa caaacgagat ggaactgaag tcactgagag aattgtcact 60
gaaacagtaa ccacaagact tacatcctta ccaccaaaag gcgggaccag caatggctat 120
gctaaaacag cctctcttgg tggagggagc cggctggaga aacaaagcct gactcatggc 180
agcagcggct acataaactc aactggaagc acacgaggcc atgcctccac ctctagttac 240
aggagggctc actcacctgc ctccactctg cccaactccc caggctcaac ctttgaaagg 300
aaaactcacg ttacccgcca tgcgtatgaa gggagctcca gtggcaactc ttctccggag 360
taccctcgga aggaatttgc atcttcttca accagaggac ggagtcaaac acgagagagt 420
gaaattcgag ttcgactgca gagtgcgtcc ccatccaccc gatggacaga attggatgat 480
gttaagcgtt tgctcaaggg gagtcgatcg gcaagtgtga gccccacccg gaattcctcc 540
aacacactcc ccatccccaa gaaaggcact gtggagacca aaattgtgac agcgagctcc 600
cagtcggtgt caggcaccta cgatgcaacg atcctggatg ccaaccttcc ctcccatgtg 660
tggtcctcca ccctgcccgc ggggtcctcc atggggacct atcacaacaa catgacaacc 720
cagagctcat ccctcctcaa caccaatgcc tactctgcgg gatcagtctt cggagttcca 780
aacaacatgg cgtcctgctc acccactttg caccctggac tcagcacatc ctcctcagtg 840
tttggcatgc agaacaatct ggcccccagc ttgaccaccc tgtcccatgg caccaccacc 900
acttccacag catatggggt gaagaaaaac atgccccaga gtcctgcggc tgtgaacact 960
ggcgtttcca cctccgccgc ctgcaccaca agtgtgcaga gcgatgacct tttgcacaag 1020
gactgcaagt tcctgatcct agagaaagac aacacacctg ccaagaagga gatggagctg 1080
ctcatcatga ccaaggacag cgggaaggtc tttacagcct cccctgccag catcgctgca 1140
acttcttttt cagaagacac cctaaaaaaa gaaaagcaag ctgcctacaa tgctgactca 1200
ggcctaaaag ccgaagctaa tggagacctg aagactgtgt ccacaaaggg caagaccacc 1260
actgcagata tccacagcta cggcagcagt ggtggtggtg gcagtggagg aggtggcggt 1320
gttggtggcg ctggcggcgg cccttgggga ccagcgccag cctggtgccc ctgcggctcc 1380
tgctgcagct ggtggaagtg gctgctgggc ctgctgctca cctggctgct actcctgggg 1440
ctgctcttcg gcctcattgc tctggcggag gaggtgagga agctgaaggc gcgtgtggat 1500
gagctggaga ggatcaggag gagcatactg ccctatgggg acagcatgga tagaatagaa 1560
aaggaccgcc tccagggcat ggcacccgcg gcgggagcag acctggacaa aattgggctg 1620
cacagtgaca gccaggagga gctctggatg ttcgtgagga agaagctaat gatggaacag 1680
gaaaatggaa atctccgagg aagccctggc cctaaaggtg acatgggaag tccaggccct 1740
aaaggagatc gagggttccc tgggactcca ggtatccctg ggcccttggg ccacccaggt 1800
ccacaaggac caaagggtca aaaaggcagc gtgggagatc ctggcatgga aggccccatg 1860
ggccagagag ggcgagaagg ccccatggga cctcgtggtg aggcagggcc tcctggatct 1920
ggagagaaag gggaaagagg ggctgctggt gaaccaggtc ctcatggccc acctggtgtc 1980
ccaggttctg tgggtcccaa aggttccagc ggctctcctg gcccacaggg ccctccaggt 2040
cctgtaggtc tccaagggct ccgaggtgaa gtaggacttc ctggtgtcaa aggtgacaaa 2100
ggaccaatgg gaccaccagg acccaaaggt gaccagggtg agaaaggacc tcgaggcctc 2160
acaggcgagc ctggcatgag aggtttgcct ggtgctgttg gtgagcccgg ggctaaagga 2220
gcaatgggtc ctgctggccc agacggacac caaggcccaa gaggtgaaca aggtcttact 2280
gggatgcctg gaatccgtgg cccaccagga ccttctggag acccaggaaa gccaggtctc 2340
acaggacccc agggacctca gggacttccc ggtacccctg gccgaccagg aataaaaggt 2400
gaaccaggag ctccaggcaa gatcgtgact tcggaggggt catcgatgct cactgtccca 2460
ggccccccag gacctcctgg agccatggga cccccaggac ctccaggtgc cccaggccct 2520
gccggcccag ctggtctccc aggacatcaa gaagttctta atttacaagg tcccccaggc 2580
ccacccggcc cacgcgggcc accagggcct tccattccag gcccaccagg accccgaggc 2640
ccaccagggg agggtttgcc aggcccacca ggcccaccag gatcgttcct gtccaactca 2700
gaaaccttcc tctccggccc cccaggccca cctggccccc caggtcccaa gggagaccaa 2760
ggtcccccag gccccagagg acaccaaggc gagcaaggcc tcccaggttt ctcaacctca 2820
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cccaaaggtg acaaaggtga tccaggtgtt ccaggggctc ttggcattcc tagtggtcct 2940
tctgaagggg gatcatcaag taccatgtac gtgtcaggcc cgccagggcc ccctgggccc 3000
cctgggcctc cgggctctat cagcagctct ggccaggaga ttcagcagta catctctgag 3060
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cctggtcccc caggacctgt caccaccatc acaggcgaga ctttcgacta ctcagagctg 3180
gcaagccacg ttgtgagcta cttacggact tcggggtacg gtgtcagctt gttctcgtcc 3240
tccatctctt ctgaagacat tctggctgtg ctgcagcggg atgacgtgcg tcagtaccta 3300
cgtcagtact tgatgggccc tcggggtccg ccagggccac caggagccag tggagatggg 3360
tccctcctgt ctttggacta tgcagagctg agtagtcgca ttctcagcta catgtcgagt 3420
tctgggatca gcattgggct tcctggtccc ccggggcccc ctggcttgcc gggaacctcc 3480
tatgaggagc tcctctcctt gctgcgaggg tctgaattca gaggcatcgt tggaccccca 3540
ggtcccccgg gtccaccagg gatcccaggc aatgtgtggt ccagcatcag cgtggaggac 3600
ctctcgtctt acttacatac tgccggcttg tcattcatcc caggccctcc aggacctcct 3660
ggtcccccag ggcctcgagg gcccccgggt gtctcaggag ccctggcaac ctatgcagct 3720
gaaaacagcg acagcttccg gagcgagctg atcagctacc tcacaagtcc tgatgtgcgc 3780
agcttcattg ttggcccccc aggccctcct gggccgcagg gaccccctgg ggacagccgc 3840
ctcctgtcca cggatgcctc ccacagtcgg ggtagcagct cctcctcaca cagctcatct 3900
gtcaggcggg gcagctccta cagctcttcc atgagcacag gaggaggtgg tgcaggctcc 3960
ctgggtgcag gcggtgcctt tggtgaagct gcaggagaca ggggtcccta tggcactgac 4020
atcggcccag gcggaggcta tggggcagca gcagaaggcg gcatgtatgc tggcaatggc 4080
ggactattgg gagctgactt tgctggagat ctggattaca atgagctggc tgtgagggtg 4140
tcagagagca tgcagcgtca gggcctactg caagggatgg cctacactgt ccagggccca 4200
ccaggccagc ctgggccaca ggggccaccc ggcatcagca aggtcttctc tgcctacagc 4260
aacgtgactg cggacctcat ggacttcttc caaacttatg gagccattca aggaccccct 4320
gggcaaaaag gagagatggg cactccagga cccaaaggtg acaggggccc tgctgggcca 4380
ccaggtcatc ctgggccacc tggccctcga ggacacaagg gagaaaaagg agacaaaggt 4440
gaccaagtct atgctgggcg gagaaggaga agaagtattg ctgtcaagcc gtga 4494

<210> 14
<211> 4494
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 14
atggacgtga ccaagaagaa caagcgcgac ggcaccgaag tgaccgagag aatcgtgacc 60
gaaaccgtga ccaccagact gaccagcctg cctcctaaag gcggcacctc taatggctac 120
gccaagacag cttctctcgg cggaggcagc agactggaaa agcagtctct gacacacggc 180
agcagcggct acatcaatag caccggctct acaagaggcc acgccagcac aagcagctac 240
agaagggctc acagccctgc cagcacactg cctaatagcc caggcagcac cttcgagaga 300
aagacccacg tgaccagaca cgcctacgag ggctctagca gcggcaatag cagccctgag 360
taccccagaa aagagttcgc cagcagcagc accagaggca gaagccagac acgggaaagc 420
gagatcagag tgcggctgca gtctgctagc cctagcacca gatggaccga gctggacgac 480
gtgaagaggc tgctgaaggg aagcagatcc gccagcgtgt cccctaccag aaacagcagc 540
aacaccctgc ctattcctaa gaaaggcacc gtcgagacta agatcgtgac agccagcagc 600
cagagcgtgt ccggcacata cgatgccaca atcctggacg ccaacctgcc tagccatgtg 660
tggtcctcta cactgcctgc cggaagcagc atgggcacct accacaacaa catgaccaca 720
cagagcagca gcctgctgaa caccaatgcc tactctgccg gctccgtgtt cggcgtgcca 780
aacaatatgg ccagctgcag ccctacactg caccctggcc tgagcacaag ctcctccgtg 840
tttggaatgc agaacaatct ggcccctagc ctgacaaccc tgagccacgg aacaaccacc 900
accagcacag cctacggcgt gaagaaaaac atgcctcagt ctccagccgc cgtgaacaca 960
ggcgttagca catctgccgc ctgtaccaca agcgtgcaga gcgacgatct gctgcacaag 1020
gactgcaagt ttctgatcct ggaaaaggac aacacgcccg ccaagaaaga gatggaactg 1080
ctgatcatga ccaaggacag cggcaaggtg ttcaccgcct ctccagcctc tatcgccgcc 1140
acaagcttta gcgaggacac cctgaagaaa gaaaagcagg ccgcctacaa cgccgactct 1200
ggactgaaag ccgaggccaa cggcgacctg aaaaccgtgt ctaccaaggg caagaccacc 1260
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tgttgcagct ggtggaagtg gctgcttggc ctgctgctga cttggctgct tcttctgggc 1440
ctgctgtttg gcctgattgc cctggctgag gaagtgcgga agctgaaggc cagagtggat 1500
gagctggaac ggatcaggcg gagcatcctg ccttacggcg acagcatgga ccggatcgag 1560
aaggacagac tgcaaggcat ggctccagca gctggcgccg atctggataa gatcggactg 1620
cacagcgaca gccaagagga actctggatg ttcgtgcgga agaaactgat gatggaacaa 1680
gagaacggca acctgagagg cagccctgga cctaagggcg atatgggaag cccaggacca 1740
aaaggcgaca gaggctttcc tggcacacct ggcattccag gacctctggg acatcctggt 1800
cctcagggcc ctaaaggcca gaaaggctct gtgggagatc ccggcatgga aggccctatg 1860
ggacagagag gtagagaagg accaatgggc cctagaggcg aagctggacc tcctggatct 1920
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cctgttggac tccaaggact gaggggcgaa gttggactgc caggcgtcaa gggcgacaag 2100
ggtccaatgg gaccacctgg tccaaagggc gatcagggcg aaaagggacc tagaggactg 2160
acaggcgagc ccggaatgag aggacttcct ggtgctgttg gagagcctgg cgctaaaggt 2220
gctatgggac ctgcaggccc cgacggacat caaggaccta ggggagaaca gggcctgacc 2280
ggcatgcctg gaattagagg tcctcctgga ccttccggcg atcctggcaa accaggattg 2340
actggacctc agggaccaca gggactgcct ggaacaccag gcagacctgg aatcaaaggc 2400
gaacctggcg ctcccggcaa gattgtgaca tctgagggca gctccatgct gaccgtgcct 2460
ggtccacctg ggcctccagg cgccatgggt cctccgggtc caccaggtgc tccaggacca 2520
gccggaccag caggacttcc aggccatcaa gaagtgctga acctgcaggg gcctcctggg 2580
ccgcctggac caagagggcc accagggcca tctattccag gaccaccagg tcctagaggc 2640
cctccaggcg aaggattgcc aggtcctcca gggccacctg gcagctttct gagcaacagc 2700
gagacattcc tgagcggccc tccaggacct cctggaccac caggacctaa aggcgatcaa 2760
ggacctccag gaccgagagg acatcagggc gaacaaggac tgcctggctt tagcacaagc 2820
ggcagctcta gcttcggcct caatctgcag ggtccaccag ggccaccagg acctcaaggt 2880
cctaaaggcg ataagggcga tccaggcgtt ccaggcgctc tgggtattcc ttctggacca 2940
tctgaaggcg gctcctccag cactatgtac gtgtcaggtc caccgggtcc acctggaccg 3000
ccaggaccac ctggatctat ctctagctcc ggccaagaga tccagcagta catcagcgag 3060
tacatgcagt ctgacagcat ccggtcctac ctgtctggcg ttcaaggtcc accgggacct 3120
ccggggcctc ctggacctgt tacaacaatc accggcgaga ctttcgacta cagcgagctg 3180
gcctctcacg tggtgtccta tctgagaacc agcggctatg gcgtgtccct gttcagctcc 3240
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tctctgctga gcctggatta cgccgagctg agcagcagaa tcctgagcta catgagcagc 3420
tccggcatct ccattgggtt gcctggacct ccaggtccac caggattgcc tggcacaagc 3480
tacgaggaac tgctgtccct gctgaggggc agcgagttta gaggaatcgt tggaccacct 3540
gggccaccag gtccacctgg tatccctgga aatgtgtggt ctagcatcag cgtggaagat 3600
ctgagcagct acctgcacac agccggcctg agctttattc caggacctcc agggccgcca 3660
gggcctcctg gtcctcgggg accgcctggc gttagcggag cacttgcaac atatgccgcc 3720
gagaacagcg actccttcag aagcgagctg atctcctacc tgactagccc cgatgtgcgg 3780
agctttatcg ttggcccgcc tggtcctcca ggacctcaag gacctcctgg cgattctaga 3840
ctgctgagca cagatgccag ccacagcaga ggcagctcct ctagctctca ctccagttct 3900
gtgcggagag gctccagcta cagcagctct atgtcaacag gtggcggagg cgctggaagt 3960
cttggagctg gtggcgcttt tggagaagcc gctggcgatc gtggcccata cggaacagat 4020
attggacccg gcggtggata tggcgctgcc gctgaaggcg ggatgtatgc cggaaatggt 4080
ggactgctgg gcgccgattt tgctggcgac ctggactata atgagctggc cgtcagagtg 4140
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ccaggacagc ctggtccaca gggaccaccg ggaatcagca aagtgttctc tgcctacagc 4260
aacgtgaccg ccgacctgat ggacttcttc cagacctacg gcgccattca gggacctcca 4320
ggccaaaagg gcgaaatggg tacacctggg ccgaaaggcg accgaggacc tgctgggcca 4380
cctggacatc ccgggcctcc agggcctaga ggacacaaag gcgaaaaagg cgacaaaggg 4440
gaccaagtct acgccggcag acggcggaga agatccattg ccgtgaagcc ctaa 4494

<210> 15
<211> 1464
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Met Phe Ser Phe Val Asp Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ala Leu Leu Thr His Gly Gln Glu Glu Gly Gln Val Glu Gly Gln Asp
20 25 30
Glu Asp Ile Pro Pro Ile Thr Cys Val Gln Asn Gly Leu Arg Tyr His
35 40 45
Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu Pro Cys Arg Ile Cys Val Cys Asp
50 55 60
Asn Gly Lys Val Leu Cys Asp Asp Val Ile Cys Asp Glu Thr Lys Asn
65 70 75 80
Cys Pro Gly Ala Glu Val Pro Glu Gly Glu Cys Cys Pro Val Cys Pro
85 90 95
Asp Gly Ser Glu Ser Pro Thr Asp Gln Glu Thr Thr Gly Val Glu Gly
100 105 110
Pro Lys Gly Asp Thr Gly Pro Arg Gly Pro Arg Gly Pro Ala Gly Pro
115 120 125
Pro Gly Arg Asp Gly Ile Pro Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly Pro Pro
130 135 140
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Leu Gly Gly Asn Phe Ala
145 150 155 160
Pro Gln Leu Ser Tyr Gly Tyr Asp Glu Lys Ser Thr Gly Gly Ile Ser
165 170 175
Val Pro Gly Pro Met Gly Pro Ser Gly Pro Arg Gly Leu Pro Gly Pro
180 185 190
Pro Gly Ala Pro Gly Pro Gln Gly Phe Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro
195 200 205
Gly Glu Pro Gly Ala Ser Gly Pro Met Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Pro Gly Lys Asn Gly Asp Asp Gly Glu Ala Gly Lys Pro Gly Arg
225 230 235 240
Pro Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Ala Arg Gly Leu Pro
245 250 255
Gly Thr Ala Gly Leu Pro Gly Met Lys Gly His Arg Gly Phe Ser Gly
260 265 270
Leu Asp Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Pro Ala Gly Pro Lys Gly Glu
275 280 285
Pro Gly Ser Pro Gly Glu Asn Gly Ala Pro Gly Gln Met Gly Pro Arg
290 295 300
Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Arg Pro Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly
305 310 315 320
Ala Arg Gly Asn Asp Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Pro Pro Gly Pro
325 330 335
Thr Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Phe Pro Gly Ala Val Gly Ala Lys
340 345 350
Gly Glu Ala Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Ser Glu Gly Pro Gln Gly
355 360 365
Val Arg Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Ala Gly Pro
370 375 380
Ala Gly Asn Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly Ala Asn
385 390 395 400
Gly Ala Pro Gly Ile Ala Gly Ala Pro Gly Phe Pro Gly Ala Arg Gly
405 410 415
Pro Ser Gly Pro Gln Gly Pro Gly Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Asn
420 425 430
Ser Gly Glu Pro Gly Ala Pro Gly Ser Lys Gly Asp Thr Gly Ala Lys
435 440 445
Gly Glu Pro Gly Pro Val Gly Val Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly
450 455 460
Glu Glu Gly Lys Arg Gly Ala Arg Gly Glu Pro Gly Pro Thr Gly Leu
465 470 475 480
Pro Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Gly Pro Gly Ser Arg Gly Phe Pro
485 490 495
Gly Ala Asp Gly Val Ala Gly Pro Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly
500 505 510
Ser Pro Gly Pro Ala Gly Pro Lys Gly Ser Pro Gly Glu Ala Gly Arg
515 520 525
Pro Gly Glu Ala Gly Leu Pro Gly Ala Lys Gly Leu Thr Gly Ser Pro
530 535 540
Gly Ser Pro Gly Pro Asp Gly Lys Thr Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly
545 550 555 560
Gln Asp Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Gln
565 570 575
Ala Gly Val Met Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Ala Ala Gly Glu Pro
580 585 590
Gly Lys Ala Gly Glu Arg Gly Val Pro Gly Pro Pro Gly Ala Val Gly
595 600 605
Pro Ala Gly Lys Asp Gly Glu Ala Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Pro
610 615 620
Ala Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Glu Gln Gly Pro Ala Gly Ser Pro
625 630 635 640
Gly Phe Gln Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly
645 650 655
Lys Pro Gly Glu Gln Gly Val Pro Gly Asp Leu Gly Ala Pro Gly Pro
660 665 670
Ser Gly Ala Arg Gly Glu Arg Gly Phe Pro Gly Glu Arg Gly Val Gln
675 680 685
Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg Gly Ala Asn Gly Ala Pro Gly
690 695 700
Asn Asp Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser
705 710 715 720
Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala
725 730 735
Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly
740 745 750
Ala Asp Gly Ser Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Thr Gly Pro
755 760 765
Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Asp Lys Gly Glu Ser
770 775 780
Gly Pro Ser Gly Pro Ala Gly Pro Thr Gly Ala Arg Gly Ala Pro Gly
785 790 795 800
Asp Arg Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Phe Ala Gly Pro
805 810 815
Pro Gly Ala Asp Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly Glu Pro Gly Asp Ala
820 825 830
Gly Ala Lys Gly Asp Ala Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly
835 840 845
Pro Pro Gly Pro Ile Gly Asn Val Gly Ala Pro Gly Ala Lys Gly Ala
850 855 860
Arg Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Ala Thr Gly Phe Pro Gly Ala Ala
865 870 875 880
Gly Arg Val Gly Pro Pro Gly Pro Ser Gly Asn Ala Gly Pro Pro Gly
885 890 895
Pro Pro Gly Pro Ala Gly Lys Glu Gly Gly Lys Gly Pro Arg Gly Glu
900 905 910
Thr Gly Pro Ala Gly Arg Pro Gly Glu Val Gly Pro Pro Gly Pro Pro
915 920 925
Gly Pro Ala Gly Glu Lys Gly Ser Pro Gly Ala Asp Gly Pro Ala Gly
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450 455 460
Glu Ser Cys Leu Ile Cys Asp Ile Asp Gly Tyr Arg Gly Pro Pro Gly
465 470 475 480
Pro Gln Gly Pro Pro Gly Glu Ile Gly Phe Pro Gly Gln Pro Gly Ala
485 490 495
Lys Gly Asp Arg Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Val Ala Gly Val Pro
500 505 510
Gly Pro Gln Gly Thr Pro Gly Leu Ile Gly Gln Pro Gly Ala Lys Gly
515 520 525
Glu Pro Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys Gly
530 535 540
Asp Pro Gly Phe Pro Gly Gln Pro Gly Met Pro Gly Arg Ala Gly Ser
545 550 555 560
Pro Gly Arg Asp Gly His Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Ser Pro
565 570 575
Gly Ser Val Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Pro Pro Gly Gly Val Gly
580 585 590
Phe Pro Gly Ser Arg Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Tyr
595 600 605
Gly Pro Ala Gly Pro Ile Gly Asp Lys Gly Gln Ala Gly Phe Pro Gly
610 615 620
Gly Pro Gly Ser Pro Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Pro Gly Lys
625 630 635 640
Ile Val Pro Leu Pro Gly Pro Pro Gly Ala Glu Gly Leu Pro Gly Ser
645 650 655
Pro Gly Phe Pro Gly Pro Gln Gly Asp Arg Gly Phe Pro Gly Thr Pro
660 665 670
Gly Arg Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Ala Val Gly Gln Pro Gly
675 680 685
Ile Gly Phe Pro Gly Pro Pro Gly Pro Lys Gly Val Asp Gly Leu Pro
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Gly Asp Met Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Arg Pro Gly Phe Asn Gly
705 710 715 720
Leu Pro Gly Asn Pro Gly Val Gln Gly Gln Lys Gly Glu Pro Gly Val
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Gly Leu Pro Gly Leu Lys Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Ile Pro Gly
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Thr Pro Gly Glu Lys Gly Ser Ile Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Glu
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Gly Pro Pro Gly Leu Pro Gly Ser Val Gly Ser Pro Gly Val Pro Gly
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Ile Gly Pro Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Gly Gln Gly Pro Pro
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Gly Leu Ser Gly Pro Pro Gly Ile Lys Gly Glu Lys Gly Phe Pro Gly
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Gln Gln Gly Ala Pro Gly Ile Pro Gly Phe Pro Gly Ser Lys Gly Glu
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Met Gly Val Met Gly Thr Pro Gly Gln Pro Gly Ser Pro Gly Pro Val
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Gly Ala Pro Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Asp His Gly Phe Pro Gly
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Ser Ser Gly Pro Arg Gly Asp Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Asp
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Ser Met Lys Gly Gln Lys Gly Asp Gln Gly Glu Lys Gly Gln Ile Gly
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1155 1160 1165
Gly Leu Pro Gly Arg Gly Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ala Lys Gly Asp
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Lys Gly Ser Lys Gly Glu Val Gly Phe Pro Gly Leu Ala Gly Ser Pro
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Gly Ile Pro Gly Ser Lys Gly Glu Gln Gly Phe Met Gly Pro Pro Gly
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Gly Pro Lys Gly Asp Arg Gly Pro Gln Gly Gln Pro Gly Leu Pro Gly
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Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Phe Gln Gly Met Pro Gly Ile Gly Gly
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Gly Asp Gln Gly Asp Gln Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Leu Pro Gly
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Gly Pro Pro Gly Ile Pro Gly Phe Asp Gly Ala Pro Gly Gln Lys Gly
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<213> Homo sapiens
<400> 19
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450 455 460
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485 490 495
Gly Pro Pro Gly Asp Pro Gly Leu Met Gly Glu Arg Gly Glu Asp Gly
500 505 510
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515 520 525
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Ser Val Gly Ile Lys Asp Val Phe Asp Phe Ile Pro Gly Ser Asp Gln
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Gly Leu Ser Leu Val Lys Glu Asn Tyr Ala Glu Leu Leu Glu Asp Ala
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<211> 2944
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
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20 25 30
Arg Leu Tyr Ala Ala Asp Ile Val Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ser Ser
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Ile Gly Arg Ser Asn Phe Arg Glu Val Arg Ser Phe Leu Glu Gly Leu
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Thr Val Gln Tyr Ser Asp Asp Pro Arg Thr Glu Phe Gly Leu Asp Ala
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565 570 575
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580 585 590
Arg Glu Pro Glu Thr Pro Leu Ala Val Pro Gly Leu Arg Val Val Val
595 600 605
Ser Asp Ala Thr Arg Val Arg Val Ala Trp Gly Pro Val Pro Gly Ala
610 615 620
Ser Gly Phe Arg Ile Ser Trp Ser Thr Gly Ser Gly Pro Glu Ser Ser
625 630 635 640
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645 650 655
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725 730 735
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740 745 750
Val Arg Ala His Val Ala Gly Val Asp Gly Pro Pro Ala Ser Val Val
755 760 765
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770 775 780
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980 985 990
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Pro Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Asp Arg Gly Pro Ile Gly Leu Thr
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Gly Arg Ala Gly Pro Pro Gly Asp Ser Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly
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Asp Pro Gly Arg Pro Gly Pro Pro Gly Pro Val Gly Pro Arg Gly Arg
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Asp Gly Glu Val Gly Glu Lys Gly Asp Glu Gly Pro Pro Gly Asp Pro
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Gly Leu Pro Gly Lys Ala Gly Glu Arg Gly Leu Arg Gly Ala Pro Gly
1650 1655 1660
Val Arg Gly Pro Val Gly Glu Lys Gly Asp Gln Gly Asp Pro Gly Glu
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Asp Gly Arg Asn Gly Ser Pro Gly Ser Ser Gly Pro Lys Gly Asp Arg
1685 1690 1695
Gly Glu Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Arg Leu Val Asp Thr Gly
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Pro Gly Ala Arg Glu Lys Gly Glu Pro Gly Asp Arg Gly Gln Glu Gly
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Pro Arg Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly Leu Pro Gly Ala Pro Gly Glu
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Arg Gly Ile Glu Gly Phe Arg Gly Pro Pro Gly Pro Gln Gly Asp Pro
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Gly Val Arg Gly Pro Ala Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Pro Pro Gly
1765 1770 1775
Leu Asp Gly Arg Ser Gly Leu Asp Gly Lys Pro Gly Ala Ala Gly Pro
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Ser Gly Pro Asn Gly Ala Ala Gly Lys Ala Gly Asp Pro Gly Arg Asp
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Gly Leu Pro Gly Leu Arg Gly Glu Gln Gly Leu Pro Gly Pro Ser Gly
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Pro Pro Gly Leu Pro Gly Lys Pro Gly Glu Asp Gly Lys Pro Gly Leu
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Asn Gly Lys Asn Gly Glu Pro Gly Asp Pro Gly Glu Asp Gly Arg Lys
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Gly Glu Lys Gly Asp Ser Gly Ala Ser Gly Arg Glu Gly Arg Asp Gly
1860 1865 1870
Pro Lys Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Ile Leu Gly Pro Gln Gly Pro
1875 1880 1885
Pro Gly Leu Pro Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Gln Gly Phe Pro Gly
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Lys Gly Glu Gln Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Leu Arg Gly Glu Pro
1925 1930 1935
Gly Ser Val Pro Asn Val Asp Arg Leu Leu Glu Thr Ala Gly Ile Lys
1940 1945 1950
Ala Ser Ala Leu Arg Glu Ile Val Glu Thr Trp Asp Glu Ser Ser Gly
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Ser Phe Leu Pro Val Pro Glu Arg Arg Arg Gly Pro Lys Gly Asp Ser
1970 1975 1980
Gly Glu Gln Gly Pro Pro Gly Lys Glu Gly Pro Ile Gly Phe Pro Gly
1985 1990 1995 2000
Glu Arg Gly Leu Lys Gly Asp Arg Gly Asp Pro Gly Pro Gln Gly Pro
2005 2010 2015
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2020 2025 2030
Ala Gly Glu Pro Gly Lys Pro Gly Ile Pro Gly Leu Pro Gly Arg Ala
2035 2040 2045
Gly Gly Val Gly Glu Ala Gly Arg Pro Gly Glu Arg Gly Glu Arg Gly
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Glu Lys Gly Glu Arg Gly Glu Gln Gly Arg Asp Gly Pro Pro Gly Leu
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Gly Asp Arg Gly Val Pro Gly Ile Lys Gly Asp Arg Gly Glu Pro Gly
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Pro Arg Gly Gln Asp Gly Asn Pro Gly Leu Pro Gly Glu Arg Gly Met
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Gly Pro Val Gly Gly His Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Ala Pro Gly
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Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly Ala Ser Gly Lys Asp Gly Asp Arg Gly
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Leu Pro Gly Ala Lys Gly Glu Lys Gly Ala Pro Gly Gly Leu Ala Gly
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Pro Arg Gly Glu Lys Gly Glu Ala Gly Arg Ala Gly Glu Pro Gly Asp
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Pro Gly Glu Asp Gly Gln Lys Gly Ala Pro Gly Pro Lys Gly Phe Lys
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Gly Asp Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Pro
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Pro Gly Val Lys Gly Asp Leu Gly Leu Pro Gly Leu Pro Gly Ala Pro
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Gly Pro Pro Gly Ala Ser Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Asp Pro Gly
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Pro Pro Gly Ser Arg Gly Glu Arg Gly Glu Lys Gly Asp Val Gly Ser
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<213> Homo sapiens
<400> 21
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Pro Pro Gly Leu Pro Gly Thr Ser Tyr Glu Glu Leu Leu Ser Leu Leu
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cctgattcgt ttaatttgaa agaagaaa 148

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<212> DNA
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<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 23
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gaccctttgc aggcagcgga accccccacc tggcgacagg tgcctctgcg gccaaaagcc 240
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agttgtggaa agagtcaaat ggctcacctc aagcgtattc aacaaggggc tgaaggatgc 360
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ggacct 66

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cacggacaag aggaaggcca ggtcgaagga caggacgagg acatccctcc tatcacctgt 120
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cctggcgaaa gaggcccgcc aggaccgcaa ggcgctagag ggttgcctgg aactgcagga 780
ctgcctggca tgaagggcca cagaggcttt tctggactgg atggcgctaa gggcgacgct 840
ggaccagcag gacctaaagg cgagcctgga tctcctggcg agaatggtgc acctggacag 900
atgggtccca gaggattgcc aggcgagaga ggtagacctg gcgctccggg accagccggt 960
gctagaggaa atgatggcgc aacaggtgct gctgggcctc ctggaccaac cggaccagct 1020
ggcccacctg gatttccagg cgctgttgga gcaaagggcg aagcaggccc acaaggacct 1080
aggggatctg aaggtcctca gggcgttaga ggcgagccag ggccacctgg gcctgccggt 1140
gcagctggac ctgctggaaa ccctggtgct gatggacagc caggtgccaa aggtgctaat 1200
ggcgcccctg gaattgccgg cgctccaggt tttcccggcg caagagggcc atctggacct 1260
caaggcccag gcggacctcc gggtcctaag ggaaatagcg gagagccagg cgctcctggg 1320
agtaaaggcg atactggcgc aaaaggcgaa cccggacctg tgggagttca aggacctcct 1380
ggaccagctg gcgaggaagg caaaagaggc gctaggggag aaccaggacc aacagggctc 1440
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ggttctccag gcgaggctgg cagacccggc gaagctggac tcccaggtgc taagggactg 1620
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ggctttcctg gaccaaaagg tgcagccggc gaacctggaa aagcaggcga gaggggagtt 1800
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cagggtgttc ctggcgatct tggagcccct ggtcctagcg gagctagagg cgaaagagga 2040
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ccaaaaggcg ataggggaga tgctggtcct aagggcgctg atggctctcc tggaaaggat 2280
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ggaagagttg gaccaccggg gccaagtgga aatgctggac caccgggacc gccaggacca 2700
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gaacctggca aacagggacc atctggtgcc agcggagaga gagggccacc aggaccaatg 3000
ggtcctccag gattggcagg gcctcctggc gaatctggta gagaaggtgc tccaggcgcc 3060
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ggaaaatctg gcgacagagg cgaaactgga cccgcaggac cagccggacc tgttggacct 3240
gtgggtgcta gaggacccgc tggaccacaa ggtcctagag gcgacaaggg cgaaacaggc 3300
gagcaaggcg acagaggcat caagggacac agaggattca gcggactgca gggaccacca 3360
gggccgcctg gaagtcccgg cgagcaggga ccaagcggag ctagtggtcc cgccggacct 3420
agaggaccac ctggttctgc tggtgcaccc ggaaaggacg gactgaatgg gctccccgga 3480
cctattgggc cacctggacc tagaggaaga acaggcgacg caggaccagt tggaccacct 3540
gggccacctg gaccgcctgg tcctcctgga cctccttctg ccggattcga cttcagcttc 3600
ctgcctcagc ctcctcaaga gaaggcccat gacggcggca gatattacag agccgacgac 3660
gccaacgtcg tgcgggacag agatctggaa gtggacacca cactgaagtc cctgtctcag 3720
cagatcgaga acatcagaag ccccgagggc agcagaaaga accctgccag aacctgtcgg 3780
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ggctgcaacc tggatgccat caaggtgttc tgcaacatgg aaaccggcga gacatgcgtg 3900
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cagggctctg accctgccga tgttgctatc cagctgacct tcctgcggct gatgtctaca 4080
gaggccagcc agaacatcac ctaccactgc aagaacagcg tggcctacat ggatcagcag 4140
accggcaacc tgaagaaggc actgctgctt cagggcagca acgagatcga gatcagagcc 4200
gagggcaaca gccggttcac ctacagcgtg acagtggatg gctgcaccag ccatacaggc 4260
gcttggggca agaccgtgat cgagtacaag accaccaaga ccagcagact gcccatcatc 4320
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gtgtgcttcc tgagggccaa gaggggcagc ggcgagggca ggggcagcct gctgacctgc 4440
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cttggaggaa attttgccgc tcagtacgat ggcaaaggcg tcggacttgg ccctggacct 4740
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ggtcaacctg gcgccaaagg cgagcgggga gctaaaggtc ctaaaggcga gaatggcgtc 6720
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ggaagaacag gtcctccagg accatctggc atctctggtc caccagggcc acctggtcct 6900
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<210> 33
<211> 8644
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 33
atgttcagct tcgtggacct gagactgctg ctgctcctgg ctgctacagc cctgctgaca 60
cacggacaag aggaaggcca ggtcgaagga caggacgagg acatccctcc tatcacctgt 120
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gggcccacct gggcctccag gcttccaagg acttcccgga ccatctgggc cagcaggcga 6240
agttggaaag cctggcgaaa gaggactgca cggcgagttt ggcttgccgg gtcctgccgg 6300
tccacgggga gagagaggcc ctccaggcga atctggcgcc gcaggaccta ctggccctat 6360
cggaagcaga ggacctagtg gacctccagg acctgatggc aacaaaggcg aacctggtgt 6420
tgtgggcgct gtgggaacag ctggaccttc tggtccttct ggattgcccg gcgagcgcgg 6480
agcagctggt attcctggtg gcaaaggcga aaagggcgag cctggactca gaggcgagat 6540
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tcctagagga agtccaggcg agaggggcga agtgggaccc gctggaccca atggatttgc 6720
tgggcccgct ggcgctgctg gtcaacctgg cgccaaaggc gagcggggag ctaaaggtcc 6780
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tcctaacgga ccacctggac cagctgggtc tagaggcgac ggcggaccgc ctggaatgac 6900
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aggccctagc ggagaagctg gaactgcagg accgccggga actcccggtc ctcaaggatt 7140
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gtga 8644

<210> 34
<211> 8987
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 34
atgttcagct tcgtggacct gagactgctg ctgctcctgg ctgctacagc cctgctgaca 60
cacggacaag aggaaggcca ggtcgaagga caggacgagg acatccctcc tatcacctgt 120
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<210> 35
<211> 7434
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 35
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<211> 2361
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<213> Homo sapiens
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gccaaggtgg ctgccaaagc ccagctccga gctgcagctg ggcttggtgc tggcatccct 1740
ggacttggag ttggtgtcgg cgtccctgga cttggagttg gtgctggtgt tcctggactt 1800
ggagttggtg ctggtgttcc tggcttcggg gcaggtgcag atgagggagt taggcggagc 1860
ctgtcccctg agctcaggga aggagatccc tcctcctctc agcacctccc cagcaccccc 1920
tcatcaccca gggtacctgg agccctggct gccgctaaag cagccaaata tggagcagca 1980
gtgcctgggg tccttggagg gctcggggct ctcggtggag taggcatccc aggcggtgtg 2040
gtgggagccg gacccgccgc cgccgctgcc gcagccaaag ctgctgccaa agccgcccag 2100
tttggcctag tgggagccgc tgggctcgga ggactcggag tcggagggct tggagttcca 2160
ggtgttgggg gccttggagg tatacctcca gctgcagccg ctaaagcagc taaatacggt 2220
gctgctggcc ttggaggtgt cctagggggt gccgggcagt tcccacttgg aggagtggca 2280
gcaagacctg gcttcggatt gtctcccatt ttcccaggtg gggcctgcct ggggaaagct 2340
tgtggccgga agagaaaatg a 2361

<210> 38
<211> 2361
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 38
atggctggac tgacagccgc tgctcctaga cctggtgttc tgctgctgct cctgagcatt 60
ctgcaccctt ctagaccagg cggagtgcct ggtgctattc ctggcggagt tcccggcgga 120
gtgttttatc ctggtgctgg actgggagcc cttggcggag gtgctcttgg acctggtgga 180
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ggactcggtg ttggagtggg agtgccaggt cttggtgttg gagcaggcgt gcccggactc 1800
ggagtcggag ctggtgtccc aggttttgga gctggtgcag atgaaggcgt gcggagatct 1860
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<210> 39
<211> 1017
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 39
atgagtctaa gtgcatttac tctcttcctg gcattgattg gtggtaccag tggccagtac 60
tatgattatg attttcccct atcaatttat gggcaatcat caccaaactg tgcaccagaa 120
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ctggaggtca atcaacttga gaagtttgac ataaagagct tctgcaagat cctggggcca 900
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cttccaccgg atatgtatga atgtctacgt gttgctaacg aagtcactct taattaa 1017

<210> 40
<211> 1017
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 40
atgagcctga gcgccttcac actgtttctg gccctgatcg gcggcacaag cggccagtac 60
tacgactacg atttcccact gagcatctac ggccagagca gccctaattg cgcccctgag 120
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atcgacgaga aggcctttga gaacgtgacc gacctgcagt ggctgatcct ggaccacaac 300
ctgctggaaa acagcaagat caagggccgc gtgttcagca agctgaagca gctgaagaaa 360
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<210> 41
<211> 1437
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 41
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<210> 42
<211> 1437
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 42
atggcccctc ttagacccct gctgattctg gctctgctgg cttgggttgc cctggccgat 60
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<210> 43
<211> 5175
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 43
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caagagctgg caaagcagct ggaagagatc aagagaaacg ccagcgggga tgagctggtg 1680
cgctgtgctg tggatgccgc caccgcctac gagaacatcc tcaatgccat caaagcggcc 1740
gaggacgcag ccaacagggc tgccagtgca tctgaatctg ccctccagac agtgataaag 1800
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<210> 44
<211> 5175
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 44
atgcctcctg ctgtgcggag aagcgcctgt tctatgggat ggctgtggat ctttggcgcc 60
gctctgggac agtgtctggg ctactcttct cagcagcagc gggtgccatt tctgcagcca 120
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actgccggcg agcactgcga gagatgccaa gagggctact acggcaatgc cgtgcatggc 360
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ggcggagatg ttcggtgttc ttgcaaggcc ggctacacag gcacacagtg cgaaagatgt 480
gcccctggct actttggcaa ccctcagaag tttggcggct cctgccagcc ttgctcctgc 540
aattctaatg gccagctggg ctcttgtcac cctctgaccg gcgactgcat caatcaagag 600
cctaaggaca gcagccctgc cgaggaatgc gacgattgcg atagctgcgt gatgaccctg 660
ctgaacgacc tggccacaat gggagaacag ctgcggctgg ttaagagcca gctccaggga 720
ctgtctgcct ctgctggact gctggaacag atgcggcaca tggaaaccca ggccaaggac 780
ctgagaaacc agctgctgaa ctacagaagc gccatctcca accacggcag caagatcgaa 840
ggcctggaaa gagagctgac cgacctgaat caagagttcg agacactgca agagaaggcc 900
caagtgaaca gccggaaggc ccagactctg aacaacaacg tgaaccgggc cacacagtcc 960
gccaaagaac tggacgtgaa gatcaagaac gtgatccgga acgtgcacat cctgctgaag 1020
cagatcagcg gcacagatgg cgagggcaac aatgtgccta gcggcgactt tagcagagag 1080
tgggccgaag ctcagcggat gatgagagag ctgcggaacc ggaacttcgg caagcacctg 1140
agagaagccg aggccgacaa gagagagagc caactgctgc tcaaccggat cagaacctgg 1200
cagaaaaccc accagggcga gaacaacggc ctggccaaca gcatcagaga cagcctgaat 1260
gagtacgagg ccaagctgag cgatctgcgg gccagacttc aagaagctgc cgctcaggcc 1320
aagcaggcca acggccttaa tcaagagaac gagagagccc tgggcgccat ccagagacaa 1380
gtgaaagaga tcaacagcct gcagagcgac ttcaccaagt acctgaccac cgccgatagc 1440
agcctgctgc agacaaatat cgccctgcag ctcatggaaa agagccagaa agagtacgaa 1500
aagctggccg ccagcctgaa cgaggccagg caagaactgt ctgacaaagt gcgcgagctg 1560
agcagatccg ccggcaagac atctctggtg gaagaggccg agaagcacgc cagatctctg 1620
caagagctgg ccaaacagct ggaagagatt aagcggaacg ccagcggcga cgaactcgtc 1680
agatgtgcag tggatgccgc caccgcctac gagaacatcc tgaatgccat caaggccgcc 1740
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gccaagatga cccagaagaa actgaagcaa gaggtgtccc ctgcactgaa caacctgcag 1920
cagaccctga acatcgtgac cgtgcagaaa gaagtgatcg acaccaacct gacaaccctg 1980
agagatggcc tgcacggaat ccagagaggc gacatcgacg ccatgatcag cagcgccaag 2040
agcatggttc gaaaagccaa cgacatcacc gacgaggtgc tggacggcct gaatcctatc 2100
cagaccgacg tggaacggat caaggacacc tacggcagaa cccagaacga ggatttcaag 2160
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tggcggaaga tcgagagcat caaccagcaa ctgctccctc tgggcaacat cagcgacaac 2280
atggacagaa tccgggaact gatccagcag gccagagatg ccgcctccaa agtggctgtg 2340
cccatgagat tcaacggcaa gagcggagtg gaagtgcggc tgcccaacga tctggaagat 2400
ctgaagggct ataccagcct gagcctgttc ctgcagaggc ccaacagcag agagaatggc 2460
ggcaccgaga atatgttcgt gatgtacctg ggaaacaagg acgccagccg ggactatatc 2520
ggaatggccg ttgtggacgg ccagctgacc tgcgtgtaca acctgggaga cagagaagct 2580
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gtgaagttcc agcggatcta ccagttcgcc cggctgaatt acaccaaggg cgccacaagc 2700
agcaagcccg aaacacctgg cgtgtacgac atggacggcc ggaactctaa cactctgctg 2760
aatctggacc ccgagaacgt ggtgttttac gtcggcggct accctcctga cttcaagctg 2820
cctagcagac tgagcttccc accttacaag ggctgcatcg agctggatga cctgaacgaa 2880
aacgtgctgt ccctgtacaa cttcaaaaag accttcaacc tgaacaccac cgaggtggaa 2940
ccctgcaggc gcagaaaaga ggaatccgac aagaactact tcgaaggcac cggctacgcc 3000
agagtgccta cacaacctca cgctcccatt cctaccttcg gccagaccat ccagacaacc 3060
gtggatagag gcctgctgtt cttcgccgag aacggcgaca gattcatctc cctgaatatc 3120
gaggatggca agctgatggt ccgatacaag ctgaatagcg agctgcccaa agaaagaggc 3180
gtgggcgacg ccatcaacaa cggcagggat cacagcatcc agatcaagat cggcaaactg 3240
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gacttcagca cctactatct cggcggaatc cctatcgcca tcagagagcg gttcaatatc 3360
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ctgaatgata cagtgggcgt gaccaagaag tgcagcgagg actggaagct tgtgcggagc 3480
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catctgcagg caagcttcgg attccagacc ttccagccaa gcggaatcct gctggaccac 3600
cagacctgga ccagaaacct gcaagtgacc ctggaagatg gctacatcga actgagcacc 3660
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tacgtgtccg tgatcagcga taacagcggc ctgagactgc tgatcgacga ccagctcctg 3780
cggaacagca agcggctgaa gcacatctcc agcagcagac agagtctgag actcggcggc 3840
agcaatttcg agggctgtat cagcaacgtg ttcgtgcagc gcctgagtct gtctccagaa 3900
gtgctggacc tgaccagcaa tagcctgaag agggatgtgt ctctcggcgg ctgctccctg 3960
aacaaacctc ctttcctgat gctgctgaag ggcagcaccc ggttcaacaa gaccaagacc 4020
tttcggatca atcagctgct ccaggacacc cctgtggcta gccctagaag cgtgaaagtg 4080
tggcaggacg cctgcagtcc cctgcctaaa acacaggcca atcacggggc tctgcagttc 4140
ggcgatatcc ccacaagcca tctgctgttt aagctgcccc aagagctgct caagcctcgg 4200
agccagttcg ctgtggatat gcagaccacc tcctccagag gactggtgtt tcacaccggc 4260
accaagaaca gcttcatggc cctgtacctg agcaaaggca ggctggtgtt tgccctgggc 4320
accgacggaa agaaactgcg gatcaagagc aaagagaagt gcaacgacgg caagtggcac 4380
accgtggtgt tcggacacga tggcgagaaa ggcagactcg tggtggatgg cctgagagcc 4440
agagagggat ctctgcctgg caactccacc atctccatca gagcccctgt gtatctgggc 4500
agccctccta gcggaaagcc taagagcctg cctaccaact ccttcgtggg ctgtctgaag 4560
aactttcagc tggacagcaa gcctctgtac acccctagca gcagctttgg cgtgtcctcc 4620
tgtctcggag gccctctgga aaagggcatc tacttctctg aggaaggcgg ccacgttgtc 4680
ctggctcatt ctgttctgct gggccccgag ttcaagctgg tgttctctat ccggcctaga 4740
agcctgaccg gcatcctgat tcacatcggc agccagcctg ggaagcacct gtgtgtgtat 4800
ctcgaggccg gcaaagtgac cgccagcatg gattctggtg ctggcggcac aagcacctcc 4860
gtgacaccta agcagagcct gtgtgatggc cagtggcaca gtgtggccgt gacaatcaag 4920
cagcacattc tgcacctgga actggacacc gacagcagct ataccgccgg acagatccca 4980
tttcctccag ccagcacaca agagcctctg caccttggag gcgcccctgc caatctgacc 5040
acactgagaa tccccgtgtg gaagtccttc ttcggctgcc tgcggaatat ccatgtgaac 5100
cacattccag tgcctgtgac agaggccctg gaagtgcagg gacccgtgtc tctgaatgga 5160
tgccccgatc agtga 5175

<210> 45
<211> 3519
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
atgagaccat tcttcctctt gtgttttgcc ctgcctggcc tcctgcatgc ccaacaagcc 60
tgctcccgtg gggcctgcta tccacctgtt ggggacctgc ttgttgggag gacccggttt 120
ctccgagctt catctacctg tggactgacc aagcctgaga cctactgcac ccagtatggc 180
gagtggcaga tgaaatgctg caagtgtgac tccaggcagc ctcacaacta ctacagtcac 240
cgagtagaga atgtggcttc atcctccggc cccatgcgct ggtggcagtc acagaatgat 300
gtgaaccctg tctctctgca gctggacctg gacaggagat tccagcttca agaagtcatg 360
atggagttcc aggggcccat gcccgccggc atgctgattg agcgctcctc agacttcggt 420
aagacctggc gagtgtacca gtacctggct gccgactgca cctccacctt ccctcgggtc 480
cgccagggtc ggcctcagag ctggcaggat gttcggtgcc agtccctgcc tcagaggcct 540
aatgcacgcc taaatggggg gaaggtccaa cttaacctta tggatttagt gtctgggatt 600
ccagcaactc aaagtcaaaa aattcaagag gtgggggaga tcacaaactt gagagtcaat 660
ttcaccaggc tggcccctgt gccccaaagg ggctaccacc ctcccagcgc ctactatgct 720
gtgtcccagc tccgtctgca ggggagctgc ttctgtcacg gccatgctga tcgctgcgca 780
cccaagcctg gggcctctgc aggcccctcc accgctgtgc aggtccacga tgtctgtgtc 840
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cactatttcc ggaaccggcg cccgggagct tccattcagg agacctgcat ctcctgcgag 1140
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tgtgcctgcg acccgcacaa ctccctcagc ccacagtgca accagttcac agggcagtgc 1500
ccctgtcggg aaggctttgg tggcctgatg tgcagcgctg cagccatccg ccagtgtcca 1560
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gggccccgct gtgaccagtg ccagcgaggc tactgtaatc gctacccggt gtgcgtggcc 1740
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tgccctggtg agctatgtcc ccaagacaat ggcacagcct gtggctcccg ctgcaggggt 2460
gtccttccca gggccggtgg ggccttcttg atggcggggc aggtggctga gcagctgcgg 2520
ggcttcaatg cccagctcca gcggaccagg cagatgatta gggcagccga ggaatctgcc 2580
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cagggtgccc ggatccagag tgtgaagaca gaggcagagg agctgtttgg ggagaccatg 3360
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atgctgcgct cagcggacct gacaggactg gagaagcgtg tggagcagat ccgtgaccac 3480
atcaatgggc gcgtgctcta ctatgccacc tgcaagtga 3519

<210> 46
<211> 3519
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 46
atgaggccct tcttcctgct gtgctttgcc ctgcctggac tgctgcatgc tcagcaggct 60
tgtagcagag gcgcctgcta tcctcctgtg ggcgatctgc ttgtgggcag aaccagattc 120
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gtgaaccccg ttagcctgca gctggacctg gacagacggt ttcagctgca agaagtgatg 360
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aagacctggc gggtgtacca gtatctggcc gccgattgca ccagcacatt ccccagagtt 480
agacagggca gaccccagag ctggcaggat gttcgttgtc agtctctgcc ccagcggcct 540
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ttcacccggc tggctcccgt tcctcagaga ggatatcatc ctcctagcgc ctactacgcc 720
gtgtctcagc ttagactgca gggcagctgc ttctgtcacg gccacgctga tagatgcgcc 780
cctaaacctg gtgcctctgc cggaccttct acagccgtgc aagtgcacga tgtgtgcgtg 840
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cacagcgaga catgccactt tgaccctgcc gtgtttgccg cttctcaggg cgcttatggc 1020
ggcgtgtgtg acaactgcag agatcacacc gagggcaaga actgcgagcg ctgtcagctg 1080
cactacttcc ggaatagaag gccaggcgcc agcatccaag agacatgcat cagctgcgag 1140
tgcgatcccg atggtgctgt tcctggcgct ccttgtgatc ctgtgacagg ccagtgcgtg 1200
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tgtgcctgcg atccccacaa cagcctgtct ccacagtgca accagttcac cggccagtgt 1500
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ggccccagat gtgaccagtg tcagcggggc tactgcaaca gataccctgt gtgtgtggcc 1740
tgccatcctt gcttccagac ctacgacgcc gacctgagag aacaggccct gagattcggc 1800
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gatctggaaa gcctggatcg gagcttcaac ggcctgctga caatgtacca gagaaagaga 2100
gagcagttcg agaagatcag cagcgccgat cctagcggcg ccttcagaat gctgagcaca 2160
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ggaacaggat ctcctaaact ggtggccctg cggctggaaa tgtcctctct gcctgatctg 2340
acccctacct tcaacaagct gtgcggcaac agccggcaga tggcctgcac acctattagc 2400
tgtcctggcg agctgtgccc tcaggataat ggaaccgcct gcggctccag atgtagaggc 2460
gttttgccaa gagccggcgg agcctttctg atggctggac aagttgccga gcagctgaga 2520
ggcttcaacg ctcagctgca gcggaccaga cagatgatta gagccgccga ggaaagcgcc 2580
agccagattc aatctagcgc ccagagactg gaaacccagg tgtccgccag cagatcccag 2640
atggaagaag atgtgcggcg gacaagactg ctgatccagc aagtgcggga cttcctgacc 2700
gatcctgata ccgatgccgc cacaatccaa gaggtgtccg aagctgttct ggcactgtgg 2760
ctgcctaccg atagcgctac agtgctgcag aagatgaacg agatccaggc aatcgccgcc 2820
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cagggcgcca gaattcagag cgtgaaaaca gaggccgagg aactgttcgg cgagacaatg 3360
gaaatgatgg accggatgaa ggacatggaa ctggaactgc tgaggggcag ccaggccatc 3420
atgctgagaa gtgccgatct gacaggcctg gaaaagagag tggaacagat ccgggaccac 3480
atcaacggcc gggtgctgta ctacgccaca tgcaagtaa 3519

<210> 47
<211> 3582
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 47
atgcctgcgc tctggctggg ctgctgcctc tgcttctcgc tcctcctgcc cgcagcccgg 60
gccacctcca ggagggaagt ctgtgattgc aatgggaagt ccaggcagtg tatctttgat 120
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gatggcattc actgcgagaa gtgcaagaat ggcttttacc ggcacagaga aagggaccgc 240
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cggtgcagct gtaaaccagg tgtgacagga gccagatgcg accgatgtct gccaggcttc 360
cacatgctca cggatgcggg gtgcacccaa gaccagagac tgctagactc caagtgtgac 420
tgtgacccag ctggcatcgc agggccctgt gacgcgggcc gctgtgtctg caagccagct 480
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cctgagggct gtacccagtg tttctgctat gggcattcag ccagctgccg cagctctgca 600
gaatacagtg tccataagat cacctctacc tttcatcaag atgttgatgg ctggaaggct 660
gtccaacgaa atgggtctcc tgcaaagctc caatggtcac agcgccatca agatgtgttt 720
agctcagccc aacgactaga ccctgtctat tttgtggctc ctgccaaatt tcttgggaat 780
caacaggtga gctatggtca aagcctgtcc tttgactacc gtgtggacag aggaggcaga 840
cacccatctg cccatgatgt gattctggaa ggtgctggtc tacggatcac agctcccttg 900
atgccacttg gcaagacact gccttgtggg ctcaccaaga cttacacatt caggttaaat 960
gagcatccaa gcaataattg gagcccccag ctgagttact ttgagtatcg aaggttactg 1020
cggaatctca cagccctccg catccgagct acatatggag aatacagtac tgggtacatt 1080
gacaatgtga ccctgatttc agcccgccct gtctctggag ccccagcacc ctgggttgaa 1140
cagtgtatat gtcctgttgg gtacaagggg caattctgcc aggattgtgc ttctggctac 1200
aagagagatt cagcgagact ggggcctttt ggcacctgta ttccttgtaa ctgtcaaggg 1260
ggaggggcct gtgatccaga cacaggagat tgttattcag gggatgagaa tcctgacatt 1320
gagtgtgctg actgcccaat tggtttctac aacgatccgc acgacccccg cagctgcaag 1380
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<210> 48
<211> 3582
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 48
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<212> DNA
<213> Clostridium botulinum
<400> 49
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<210> 51
<211> 3876
<212> DNA
<213> Clostridium botulinum
<400> 51
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tctgataaag atatggaaaa agaatataga ggtcagaata aagctataaa taaacaagct 1260
tatgaagaaa ttagcaagga gcatttggct gtatataaga tacaaatgtg taaaagtgtt 1320
aaagctccag gaatatgtat tgatgttgat aatgaagatt tgttctttat agctgataaa 1380
aatagttttt cagatgattt atctaaaaac gaaagaatag aatataatac acagagtaat 1440
tatatagaaa atgacttccc tataaatgaa ttaattttag atactgattt aataagtaaa 1500
atagaattac caagtgaaaa tacagaatca cttactgatt ttaatgtaga tgttccagta 1560
tatgaaaaac aacccgctat aaaaaaaatt tttacagatg aaaataccat ctttcaatat 1620
ttatactctc agacatttcc tctagatata agagatataa gtttaacatc ttcatttgat 1680
gatgcattat tattttctaa caaagtttat tcattttttt ctatggatta tattaaaact 1740
gctaataaag tggtagaagc aggattattt gcaggttggg tgaaacagat agtaaatgat 1800
tttgtaatcg aagctaataa aagcaatact atggataaaa ttgcagatat atctctaatt 1860
gttccttata taggattagc tttaaatgta ggaaatgaaa cagctaaagg aaattttgaa 1920
aatgcttttg agattgcagg agccagtatt ctactagaat ttataccaga acttttaata 1980
cctgtagttg gagccttttt attagaatca tatattgaca ataaaaataa aattattaaa 2040
acaatagata atgctttaac taaaagaaat gaaaaatgga gtgatatgta cggattaata 2100
gtagcgcaat ggctctcaac agttaatact caattttata caataaaaga gggaatgtat 2160
aaggctttaa attatcaagc acaagcattg gaagaaataa taaaatacag atataatata 2220
tattctgaaa aagaaaagtc aaatattaac atcgatttta atgatataaa ttctaaactt 2280
aatgagggta ttaaccaagc tatagataat ataaataatt ttataaatgg atgttctgta 2340
tcatatttaa tgaaaaaaat gattccatta gctgtagaaa aattactaga ctttgataat 2400
actctcaaaa aaaatttgtt aaattatata gatgaaaata aattatattt gattggaagt 2460
gcagaatatg aaaaatcaaa agtaaataaa tacttgaaaa ccattatgcc gtttgatctt 2520
tcaatatata ccaatgatac aatactaata gaaatgttta ataaatataa tagcgaaatt 2580
ttaaataata ttatcttaaa tttaagatat aaggataata atttaataga tttatcagga 2640
tatggggcaa aggtagaggt atatgatgga gtcgagctta atgataaaaa tcaatttaaa 2700
ttaactagtt cagcaaatag taagattaga gtgactcaaa atcagaatat catatttaat 2760
agtgtgttcc ttgattttag cgttagcttt tggataagaa tacctaaata taagaatgat 2820
ggtatacaaa attatattca taatgaatat acaataatta attgtatgaa aaataattcg 2880
ggctggaaaa tatctattag gggtaatagg ataatatgga ctttaattga tataaatgga 2940
aaaaccaaat cggtattttt tgaatataac ataagagaag atatatcaga gtatataaat 3000
agatggtttt ttgtaactat tactaataat ttgaataacg ctaaaattta tattaatggt 3060
aagctagaat caaatacaga tattaaagat ataagagaag ttattgctaa tggtgaaata 3120
atatttaaat tagatggtga tatagataga acacaattta tttggatgaa atatttcagt 3180
atttttaata cggaattaag tcaatcaaat attgaagaaa gatataaaat tcaatcatat 3240
agcgaatatt taaaagattt ttggggaaat cctttaatgt acaataaaga atattatatg 3300
tttaatgcgg ggaataaaaa ttcatatatt aaactaaaga aagattcacc tgtaggtgaa 3360
attttaacac gtagcaaata taatcaaaat tctaaatata taaattatag agatttatat 3420
attggagaaa aatttattat aagaagaaag tcaaattctc aatctataaa tgatgatata 3480
gttagaaaag aagattatat atatctagat ttttttaatt taaatcaaga gtggagagta 3540
tatacctata aatattttaa gaaagaggaa gaaaaattgt ttttagctcc tataagtgat 3600
tctgatgagt tttacaatac tatacaaata aaagaatatg atgaacagcc aacatatagt 3660
tgtcagttgc tttttaaaaa agatgaagaa agtactgatg agataggatt gattggtatt 3720
catcgtttct acgaatctgg aattgtattt gaagagtata aagattattt ttgtataagt 3780
aaatggtact taaaagaggt aaaaaggaaa ccatataatt taaaattggg atgtaattgg 3840
cagtttattc ctaaagatga agggtggact gaataa 3876

<210> 52
<211> 3876
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Construct
<400> 52
atgcccgtga ccatcaacaa cttcaactac aacgacccca tcgacaacaa caacatcatt 60
atgatggaac cgcctttcgc cagaggcaca ggccggtact acaaggcctt caagatcacc 120
gaccggatct ggatcatccc cgagagatac accttcggct acaagcccga ggacttcaac 180
aagagcagcg gcatcttcaa ccgggacgtg tgcgagtact acgaccccga ctacctgaac 240
accaacgaca agaagaacat cttcctgcag accatgatca agctgttcaa ccggatcaag 300
agcaagcccc tgggcgagaa gctgctggaa atgatcatca acggcatccc ttacctgggc 360
gacagaagag tgcccctgga agagttcaac accaatatcg ccagcgtgac cgtgaacaag 420
ctgatctcta accccggcga ggtggaacgg aagaagggca tcttcgccaa cctgatcatc 480
ttcggccctg gacctgtgct gaacgagaac gagacaatcg acatcggcat ccagaaccac 540
ttcgccagca gagaaggctt cggcggcatc atgcagatga agttctgccc cgagtacgtg 600
tccgtgttca acaacgtgca agagaacaag ggcgccagca tctttaacag acggggctac 660
ttcagcgacc ccgctctgat tctgatgcac gagctgatcc acgtgctgca cggcctgtat 720
ggcatcaagg tggacgacct gcctatcgtg cccaacgaga agaaattctt catgcagtcc 780
accgacgcca tccaggccga ggaactgtac acatttggcg gacaggaccc cagcatcatc 840
acccctagca ccgacaagag catctacgac aaggtgctgc agaatttccg gggcatcgtg 900
gaccggctga acaaagtgct cgtgtgcatc agcgatccca acatcaatat caacatctac 960
aagaacaagt tcaaggataa gtacaagttc gtcgaggaca gcgagggcaa gtacagcatc 1020
gacgtggaaa gcttcgacaa gctgtacaag agcctgatgt tcggcttcac cgagacaaat 1080
atcgccgaga actacaagat caagacccgg gccagctact tctccgactc tctgcctcct 1140
gtgaagatta agaacctgct ggacaacgag atctacacca tcgaggaagg cttcaacatc 1200
agcgacaagg acatggaaaa agagtaccgg ggccagaaca aggccattaa caagcaggcc 1260
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aacagcttta gcgacgacct gagcaagaac gagcggatcg agtacaacac ccagagcaac 1440
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atcgagctgc ccagcgagaa caccgagagc ctgaccgact tcaatgtgga cgtgcccgtg 1560
tacgagaagc agcccgccat caagaagatc tttaccgacg agaataccat cttccagtac 1620
ctgtacagcc agacctttcc tctggacatc cgggacatca gcctgacctc cagcttcgat 1680
gatgccctgc tgttcagcaa caaggtctac agcttcttca gcatggacta catcaagacc 1740
gccaacaagg tggtggaagc cggcctgttt gccggctggg ttaagcagat cgtgaacgat 1800
ttcgtgatcg aggccaacaa gtccaacacc atggacaaga tcgccgatat ctccctgatc 1860
gtgccctaca tcggactggc cctgaacgtg ggaaacgaga cagccaaggg caacttcgag 1920
aatgccttcg agattgccgg cgctagcatc ctgctcgagt tcatccctga gctgctgatc 1980
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<210> 53
<211> 2477
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 53
Met Leu Arg Gly Pro Gly Pro Gly Leu Leu Leu Leu Ala Val Gln Cys
1 5 10 15
Leu Gly Thr Ala Val Pro Ser Thr Gly Ala Ser Lys Ser Lys Arg Gln
20 25 30
Ala Gln Gln Met Val Gln Pro Gln Ser Pro Val Ala Val Ser Gln Ser
35 40 45
Lys Pro Gly Cys Tyr Asp Asn Gly Lys His Tyr Gln Ile Asn Gln Gln
50 55 60
Trp Glu Arg Thr Tyr Leu Gly Asn Ala Leu Val Cys Thr Cys Tyr Gly
65 70 75 80
Gly Ser Arg Gly Phe Asn Cys Glu Ser Lys Pro Glu Ala Glu Glu Thr
85 90 95
Cys Phe Asp Lys Tyr Thr Gly Asn Thr Tyr Arg Val Gly Asp Thr Tyr
100 105 110
Glu Arg Pro Lys Asp Ser Met Ile Trp Asp Cys Thr Cys Ile Gly Ala
115 120 125
Gly Arg Gly Arg Ile Ser Cys Thr Ile Ala Asn Arg Cys His Glu Gly
130 135 140
Gly Gln Ser Tyr Lys Ile Gly Asp Thr Trp Arg Arg Pro His Glu Thr
145 150 155 160
Gly Gly Tyr Met Leu Glu Cys Val Cys Leu Gly Asn Gly Lys Gly Glu
165 170 175
Trp Thr Cys Lys Pro Ile Ala Glu Lys Cys Phe Asp His Ala Ala Gly
180 185 190
Thr Ser Tyr Val Val Gly Glu Thr Trp Glu Lys Pro Tyr Gln Gly Trp
195 200 205
Met Met Val Asp Cys Thr Cys Leu Gly Glu Gly Ser Gly Arg Ile Thr
210 215 220
Cys Thr Ser Arg Asn Arg Cys Asn Asp Gln Asp Thr Arg Thr Ser Tyr
225 230 235 240
Arg Ile Gly Asp Thr Trp Ser Lys Lys Asp Asn Arg Gly Asn Leu Leu
245 250 255
Gln Cys Ile Cys Thr Gly Asn Gly Arg Gly Glu Trp Lys Cys Glu Arg
260 265 270
His Thr Ser Val Gln Thr Thr Ser Ser Gly Ser Gly Pro Phe Thr Asp
275 280 285
Val Arg Ala Ala Val Tyr Gln Pro Gln Pro His Pro Gln Pro Pro Pro
290 295 300
Tyr Gly His Cys Val Thr Asp Ser Gly Val Val Tyr Ser Val Gly Met
305 310 315 320
Gln Trp Leu Lys Thr Gln Gly Asn Lys Gln Met Leu Cys Thr Cys Leu
325 330 335
Gly Asn Gly Val Ser Cys Gln Glu Thr Ala Val Thr Gln Thr Tyr Gly
340 345 350
Gly Asn Ser Asn Gly Glu Pro Cys Val Leu Pro Phe Thr Tyr Asn Gly
355 360 365
Arg Thr Phe Tyr Ser Cys Thr Thr Glu Gly Arg Gln Asp Gly His Leu
370 375 380
Trp Cys Ser Thr Thr Ser Asn Tyr Glu Gln Asp Gln Lys Tyr Ser Phe
385 390 395 400
Cys Thr Asp His Thr Val Leu Val Gln Thr Arg Gly Gly Asn Ser Asn
405 410 415
Gly Ala Leu Cys His Phe Pro Phe Leu Tyr Asn Asn His Asn Tyr Thr
420 425 430
Asp Cys Thr Ser Glu Gly Arg Arg Asp Asn Met Lys Trp Cys Gly Thr
435 440 445
Thr Gln Asn Tyr Asp Ala Asp Gln Lys Phe Gly Phe Cys Pro Met Ala
450 455 460
Ala His Glu Glu Ile Cys Thr Thr Asn Glu Gly Val Met Tyr Arg Ile
465 470 475 480
Gly Asp Gln Trp Asp Lys Gln His Asp Met Gly His Met Met Arg Cys
485 490 495
Thr Cys Val Gly Asn Gly Arg Gly Glu Trp Thr Cys Ile Ala Tyr Ser
500 505 510
Gln Leu Arg Asp Gln Cys Ile Val Asp Asp Ile Thr Tyr Asn Val Asn
515 520 525
Asp Thr Phe His Lys Arg His Glu Glu Gly His Met Leu Asn Cys Thr
530 535 540
Cys Phe Gly Gln Gly Arg Gly Arg Trp Lys Cys Asp Pro Val Asp Gln
545 550 555 560
Cys Gln Asp Ser Glu Thr Gly Thr Phe Tyr Gln Ile Gly Asp Ser Trp
565 570 575
Glu Lys Tyr Val His Gly Val Arg Tyr Gln Cys Tyr Cys Tyr Gly Arg
580 585 590
Gly Ile Gly Glu Trp His Cys Gln Pro Leu Gln Thr Tyr Pro Ser Ser
595 600 605
Ser Gly Pro Val Glu Val Phe Ile Thr Glu Thr Pro Ser Gln Pro Asn
610 615 620
Ser His Pro Ile Gln Trp Asn Ala Pro Gln Pro Ser His Ile Ser Lys
625 630 635 640
Tyr Ile Leu Arg Trp Arg Pro Lys Asn Ser Val Gly Arg Trp Lys Glu
645 650 655
Ala Thr Ile Pro Gly His Leu Asn Ser Tyr Thr Ile Lys Gly Leu Lys
660 665 670
Pro Gly Val Val Tyr Glu Gly Gln Leu Ile Ser Ile Gln Gln Tyr Gly
675 680 685
His Gln Glu Val Thr Arg Phe Asp Phe Thr Thr Thr Ser Thr Ser Thr
690 695 700
Pro Val Thr Ser Asn Thr Val Thr Gly Glu Thr Thr Pro Phe Ser Pro
705 710 715 720
Leu Val Ala Thr Ser Glu Ser Val Thr Glu Ile Thr Ala Ser Ser Phe
725 730 735
Val Val Ser Trp Val Ser Ala Ser Asp Thr Val Ser Gly Phe Arg Val
740 745 750
Glu Tyr Glu Leu Ser Glu Glu Gly Asp Glu Pro Gln Tyr Leu Asp Leu
755 760 765
Pro Ser Thr Ala Thr Ser Val Asn Ile Pro Asp Leu Leu Pro Gly Arg
770 775 780
Lys Tyr Ile Val Asn Val Tyr Gln Ile Ser Glu Asp Gly Glu Gln Ser
785 790 795 800
Leu Ile Leu Ser Thr Ser Gln Thr Thr Ala Pro Asp Ala Pro Pro Asp
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Pro Thr Val Asp Gln Val Asp Asp Thr Ser Ile Val Val Arg Trp Ser
820 825 830
Arg Pro Gln Ala Pro Ile Thr Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Ser Pro Ser
835 840 845
Val Glu Gly Ser Ser Thr Glu Leu Asn Leu Pro Glu Thr Ala Asn Ser
850 855 860
Val Thr Leu Ser Asp Leu Gln Pro Gly Val Gln Tyr Asn Ile Thr Ile
865 870 875 880
Tyr Ala Val Glu Glu Asn Gln Glu Ser Thr Pro Val Val Ile Gln Gln
885 890 895
Glu Thr Thr Gly Thr Pro Arg Ser Asp Thr Val Pro Ser Pro Arg Asp
900 905 910
Leu Gln Phe Val Glu Val Thr Asp Val Lys Val Thr Ile Met Trp Thr
915 920 925
Pro Pro Glu Ser Ala Val Thr Gly Tyr Arg Val Asp Val Ile Pro Val
930 935 940
Asn Leu Pro Gly Glu His Gly Gln Arg Leu Pro Ile Ser Arg Asn Thr
945 950 955 960
Phe Ala Glu Val Thr Gly Leu Ser Pro Gly Val Thr Tyr Tyr Phe Lys
965 970 975
Val Phe Ala Val Ser His Gly Arg Glu Ser Lys Pro Leu Thr Ala Gln
980 985 990
Gln Thr Thr Lys Leu Asp Ala Pro Thr Asn Leu Gln Phe Val Asn Glu
995 1000 1005
Thr Asp Ser Thr Val Leu Val Arg Trp Thr Pro Pro Arg Ala Gln Ile
1010 1015 1020
Thr Gly Tyr Arg Leu Thr Val Gly Leu Thr Arg Arg Gly Gln Pro Arg
1025 1030 1035 1040
Gln Tyr Asn Val Gly Pro Ser Val Ser Lys Tyr Pro Leu Arg Asn Leu
1045 1050 1055
Gln Pro Ala Ser Glu Tyr Thr Val Ser Leu Val Ala Ile Lys Gly Asn
1060 1065 1070
Gln Glu Ser Pro Lys Ala Thr Gly Val Phe Thr Thr Leu Gln Pro Gly
1075 1080 1085
Ser Ser Ile Pro Pro Tyr Asn Thr Glu Val Thr Glu Thr Thr Ile Val
1090 1095 1100
Ile Thr Trp Thr Pro Ala Pro Arg Ile Gly Phe Lys Leu Gly Val Arg
1105 1110 1115 1120
Pro Ser Gln Gly Gly Glu Ala Pro Arg Glu Val Thr Ser Asp Ser Gly
1125 1130 1135
Ser Ile Val Val Ser Gly Leu Thr Pro Gly Val Glu Tyr Val Tyr Thr
1140 1145 1150
Ile Gln Val Leu Arg Asp Gly Gln Glu Arg Asp Ala Pro Ile Val Asn
1155 1160 1165
Lys Val Val Thr Pro Leu Ser Pro Pro Thr Asn Leu His Leu Glu Ala
1170 1175 1180
Asn Pro Asp Thr Gly Val Leu Thr Val Ser Trp Glu Arg Ser Thr Thr
1185 1190 1195 1200
Pro Asp Ile Thr Gly Tyr Arg Ile Thr Thr Thr Pro Thr Asn Gly Gln
1205 1210 1215
Gln Gly Asn Ser Leu Glu Glu Val Val His Ala Asp Gln Ser Ser Cys
1220 1225 1230
Thr Phe Asp Asn Leu Ser Pro Gly Leu Glu Tyr Asn Val Ser Val Tyr
1235 1240 1245
Thr Val Lys Asp Asp Lys Glu Ser Val Pro Ile Ser Asp Thr Ile Ile
1250 1255 1260
Pro Glu Val Pro Gln Leu Thr Asp Leu Ser Phe Val Asp Ile Thr Asp
1265 1270 1275 1280
Ser Ser Ile Gly Leu Arg Trp Thr Pro Leu Asn Ser Ser Thr Ile Ile
1285 1290 1295
Gly Tyr Arg Ile Thr Val Val Ala Ala Gly Glu Gly Ile Pro Ile Phe
1300 1305 1310
Glu Asp Phe Val Asp Ser Ser Val Gly Tyr Tyr Thr Val Thr Gly Leu
1315 1320 1325
Glu Pro Gly Ile Asp Tyr Asp Ile Ser Val Ile Thr Leu Ile Asn Gly
1330 1335 1340
Gly Glu Ser Ala Pro Thr Thr Leu Thr Gln Gln Thr Ala Val Pro Pro
1345 1350 1355 1360
Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg Val
1365 1370 1375
Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu Val Arg
1380 1385 1390
Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu Ser Ile Ser
1395 1400 1405
Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu Pro Gly Thr Glu
1410 1415 1420
Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln His Glu Ser Thr Pro
1425 1430 1435 1440
Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp Ser Pro Thr Gly Ile Asp
1445 1450 1455
Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe Thr Val His Trp Ile Ala Pro
1460 1465 1470
Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg Ile Arg His His Pro Glu His Phe
1475 1480 1485
Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile
1490 1495 1500
Thr Leu Thr Asn Leu Thr Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val
1505 1510 1515 1520
Ala Leu Asn Gly Arg Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser
1525 1530 1535
Thr Val Ser Asp Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro
1540 1545 1550
Thr Ser Leu Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr
1555 1560 1565
Tyr Arg Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu
1570 1575 1580
Phe Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys
1585 1590 1595 1600
Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg Gly
1605 1610 1615
Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg Thr Glu
1620 1625 1630
Ile Asp Lys Pro Ser Gln Met Gln Val Thr Asp Val Gln Asp Asn Ser
1635 1640 1645
Ile Ser Val Lys Trp Leu Pro Ser Ser Ser Pro Val Thr Gly Tyr Arg
1650 1655 1660
Val Thr Thr Thr Pro Lys Asn Gly Pro Gly Pro Thr Lys Thr Lys Thr
1665 1670 1675 1680
Ala Gly Pro Asp Gln Thr Glu Met Thr Ile Glu Gly Leu Gln Pro Thr
1685 1690 1695
Val Glu Tyr Val Val Ser Val Tyr Ala Gln Asn Pro Ser Gly Glu Ser
1700 1705 1710
Gln Pro Leu Val Gln Thr Ala Val Thr Asn Ile Asp Arg Pro Lys Gly
1715 1720 1725
Leu Ala Phe Thr Asp Val Asp Val Asp Ser Ile Lys Ile Ala Trp Glu
1730 1735 1740
Ser Pro Gln Gly Gln Val Ser Arg Tyr Arg Val Thr Tyr Ser Ser Pro
1745 1750 1755 1760
Glu Asp Gly Ile His Glu Leu Phe Pro Ala Pro Asp Gly Glu Glu Asp
1765 1770 1775
Thr Ala Glu Leu Gln Gly Leu Arg Pro Gly Ser Glu Tyr Thr Val Ser
1780 1785 1790
Val Val Ala Leu His Asp Asp Met Glu Ser Gln Pro Leu Ile Gly Thr
1795 1800 1805
Gln Ser Thr Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val
1810 1815 1820
Thr Pro Thr Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu
1825 1830 1835 1840
Thr Gly Tyr Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met
1845 1850 1855
Lys Glu Ile Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly
1860 1865 1870
Leu Met Val Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp
1875 1880 1885
Thr Leu Thr Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn
1890 1895 1900
Val Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr
1905 1910 1915 1920
Ile Thr Ile Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln
1925 1930 1935
Val Asp Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile
1940 1945 1950
Lys Pro Asp Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr
1955 1960 1965
Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser
1970 1975 1980
Pro Val Val Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu
1985 1990 1995 2000
Arg Phe Leu Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro
2005 2010 2015
Pro Arg Ala Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Lys Pro Gly
2020 2025 2030
Ser Pro Pro Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu
2035 2040 2045
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2050 2055 2060
Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys
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Lys Thr Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu
2085 2090 2095
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Phe Val Thr His Pro Gly Tyr Asp Thr Gly Asn Gly Ile Gln Leu Pro
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Arg His Arg Pro Arg Pro Tyr Pro Pro Asn Val Gly Glu Glu Ile Gln
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<210> 54
<211> 786
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
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<400> 56
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<400> 57
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Lys Gln Leu Glu Glu Ile Lys Arg Asn Ala Ser Gly Asp Glu Leu Val
545 550 555 560
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<210> 58
<211> 1172
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 58
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Leu Val Gly Arg Thr Arg Phe Leu Arg Ala Ser Ser Thr Cys Gly
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50 55 60
Lys Cys Cys Lys Cys Asp Ser Arg Gln Pro His Asn Tyr Tyr Ser His
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Val Ser Gln Leu Arg Leu Gln Gly Ser Cys Phe Cys His Gly His Ala
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Asp Arg Cys Ala Pro Lys Pro Gly Ala Ser Ala Gly Pro Ser Thr Ala
260 265 270
Val Gln Val His Asp Val Cys Val Cys Gln His Asn Thr Ala Gly Pro
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 59
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<210> 60
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<213> Clostridium botulinum
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<210> 61
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<400> 61
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210 215 220
Ala Leu Ile Leu Met His Glu Leu Ile His Val Leu His Gly Leu Tyr
225 230 235 240
Gly Ile Lys Val Asp Asp Leu Pro Ile Val Pro Asn Glu Lys Lys Phe
245 250 255
Phe Met Gln Ser Thr Asp Ala Ile Gln Ala Glu Glu Leu Tyr Thr Phe
260 265 270
Gly Gly Gln Asp Pro Ser Ile Ile Thr Pro Ser Thr Asp Lys Ser Ile
275 280 285
Tyr Asp Lys Val Leu Gln Asn Phe Arg Gly Ile Val Asp Arg Leu Asn
290 295 300
Lys Val Leu Val Cys Ile Ser Asp Pro Asn Ile Asn Ile Asn Ile Tyr
305 310 315 320
Lys Asn Lys Phe Lys Asp Lys Tyr Lys Phe Val Glu Asp Ser Glu Gly
325 330 335
Lys Tyr Ser Ile Asp Val Glu Ser Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Ser Leu
340 345 350
Met Phe Gly Phe Thr Glu Thr Asn Ile Ala Glu Asn Tyr Lys Ile Lys
355 360 365
Thr Arg Ala Ser Tyr Phe Ser Asp Ser Leu Pro Pro Val Lys Ile Lys
370 375 380
Asn Leu Leu Asp Asn Glu Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Gly Phe Asn Ile
385 390 395 400
Ser Asp Lys Asp Met Glu Lys Glu Tyr Arg Gly Gln Asn Lys Ala Ile
405 410 415
Asn Lys Gln Ala Tyr Glu Glu Ile Ser Lys Glu His Leu Ala Val Tyr
420 425 430
Lys Ile Gln Met Cys Lys Ser Val Lys Ala Pro Gly Ile Cys Ile Asp
435 440 445
Val Asp Asn Glu Asp Leu Phe Phe Ile Ala Asp Lys Asn Ser Phe Ser
450 455 460
Asp Asp Leu Ser Lys Asn Glu Arg Ile Glu Tyr Asn Thr Gln Ser Asn
465 470 475 480
Tyr Ile Glu Asn Asp Phe Pro Ile Asn Glu Leu Ile Leu Asp Thr Asp
485 490 495
Leu Ile Ser Lys Ile Glu Leu Pro Ser Glu Asn Thr Glu Ser Leu Thr
500 505 510
Asp Phe Asn Val Asp Val Pro Val Tyr Glu Lys Gln Pro Ala Ile Lys
515 520 525
Lys Ile Phe Thr Asp Glu Asn Thr Ile Phe Gln Tyr Leu Tyr Ser Gln
530 535 540
Thr Phe Pro Leu Asp Ile Arg Asp Ile Ser Leu Thr Ser Ser Phe Asp
545 550 555 560
Asp Ala Leu Leu Phe Ser Asn Lys Val Tyr Ser Phe Phe Ser Met Asp
565 570 575
Tyr Ile Lys Thr Ala Asn Lys Val Val Glu Ala Gly Leu Phe Ala Gly
580 585 590
Trp Val Lys Gln Ile Val Asn Asp Phe Val Ile Glu Ala Asn Lys Ser
595 600 605
Asn Thr Met Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Leu Ile Val Pro Tyr Ile
610 615 620
Gly Leu Ala Leu Asn Val Gly Asn Glu Thr Ala Lys Gly Asn Phe Glu
625 630 635 640
Asn Ala Phe Glu Ile Ala Gly Ala Ser Ile Leu Leu Glu Phe Ile Pro
645 650 655
Glu Leu Leu Ile Pro Val Val Gly Ala Phe Leu Leu Glu Ser Tyr Ile
660 665 670
Asp Asn Lys Asn Lys Ile Ile Lys Thr Ile Asp Asn Ala Leu Thr Lys
675 680 685
Arg Asn Glu Lys Trp Ser Asp Met Tyr Gly Leu Ile Val Ala Gln Trp
690 695 700
Leu Ser Thr Val Asn Thr Gln Phe Tyr Thr Ile Lys Glu Gly Met Tyr
705 710 715 720
Lys Ala Leu Asn Tyr Gln Ala Gln Ala Leu Glu Glu Ile Ile Lys Tyr
725 730 735
Arg Tyr Asn Ile Tyr Ser Glu Lys Glu Lys Ser Asn Ile Asn Ile Asp
740 745 750
Phe Asn Asp Ile Asn Ser Lys Leu Asn Glu Gly Ile Asn Gln Ala Ile
755 760 765
Asp Asn Ile Asn Asn Phe Ile Asn Gly Cys Ser Val Ser Tyr Leu Met
770 775 780
Lys Lys Met Ile Pro Leu Ala Val Glu Lys Leu Leu Asp Phe Asp Asn
785 790 795 800
Thr Leu Lys Lys Asn Leu Leu Asn Tyr Ile Asp Glu Asn Lys Leu Tyr
805 810 815
Leu Ile Gly Ser Ala Glu Tyr Glu Lys Ser Lys Val Asn Lys Tyr Leu
820 825 830
Lys Thr Ile Met Pro Phe Asp Leu Ser Ile Tyr Thr Asn Asp Thr Ile
835 840 845
Leu Ile Glu Met Phe Asn Lys Tyr Asn Ser Glu Ile Leu Asn Asn Ile
850 855 860
Ile Leu Asn Leu Arg Tyr Lys Asp Asn Asn Leu Ile Asp Leu Ser Gly
865 870 875 880
Tyr Gly Ala Lys Val Glu Val Tyr Asp Gly Val Glu Leu Asn Asp Lys
885 890 895
Asn Gln Phe Lys Leu Thr Ser Ser Ala Asn Ser Lys Ile Arg Val Thr
900 905 910
Gln Asn Gln Asn Ile Ile Phe Asn Ser Val Phe Leu Asp Phe Ser Val
915 920 925
Ser Phe Trp Ile Arg Ile Pro Lys Tyr Lys Asn Asp Gly Ile Gln Asn
930 935 940
Tyr Ile His Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Lys Asn Asn Ser
945 950 955 960
Gly Trp Lys Ile Ser Ile Arg Gly Asn Arg Ile Ile Trp Thr Leu Ile
965 970 975
Asp Ile Asn Gly Lys Thr Lys Ser Val Phe Phe Glu Tyr Asn Ile Arg
980 985 990
Glu Asp Ile Ser Glu Tyr Ile Asn Arg Trp Phe Phe Val Thr Ile Thr
995 1000 1005
Asn Asn Leu Asn Asn Ala Lys Ile Tyr Ile Asn Gly Lys Leu Glu Ser
1010 1015 1020
Asn Thr Asp Ile Lys Asp Ile Arg Glu Val Ile Ala Asn Gly Glu Ile
1025 1030 1035 1040
Ile Phe Lys Leu Asp Gly Asp Ile Asp Arg Thr Gln Phe Ile Trp Met
1045 1050 1055
Lys Tyr Phe Ser Ile Phe Asn Thr Glu Leu Ser Gln Ser Asn Ile Glu
1060 1065 1070
Glu Arg Tyr Lys Ile Gln Ser Tyr Ser Glu Tyr Leu Lys Asp Phe Trp
1075 1080 1085
Gly Asn Pro Leu Met Tyr Asn Lys Glu Tyr Tyr Met Phe Asn Ala Gly
1090 1095 1100
Asn Lys Asn Ser Tyr Ile Lys Leu Lys Lys Asp Ser Pro Val Gly Glu
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Ile Leu Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Gln Asn Ser Lys Tyr Ile Asn Tyr
1125 1130 1135
Arg Asp Leu Tyr Ile Gly Glu Lys Phe Ile Ile Arg Arg Lys Ser Asn
1140 1145 1150
Ser Gln Ser Ile Asn Asp Asp Ile Val Arg Lys Glu Asp Tyr Ile Tyr
1155 1160 1165
Leu Asp Phe Phe Asn Leu Asn Gln Glu Trp Arg Val Tyr Thr Tyr Lys
1170 1175 1180
Tyr Phe Lys Lys Glu Glu Glu Lys Leu Phe Leu Ala Pro Ile Ser Asp
1185 1190 1195 1200
Ser Asp Glu Phe Tyr Asn Thr Ile Gln Ile Lys Glu Tyr Asp Glu Gln
1205 1210 1215
Pro Thr Tyr Ser Cys Gln Leu Leu Phe Lys Lys Asp Glu Glu Ser Thr
1220 1225 1230
Asp Glu Ile Gly Leu Ile Gly Ile His Arg Phe Tyr Glu Ser Gly Ile
1235 1240 1245
Val Phe Glu Glu Tyr Lys Asp Tyr Phe Cys Ile Ser Lys Trp Tyr Leu
1250 1255 1260
Lys Glu Val Lys Arg Lys Pro Tyr Asn Leu Lys Leu Gly Cys Asn Trp
1265 1270 1275 1280
Gln Phe Ile Pro Lys Asp Glu Gly Trp Thr Glu
1285 1290

<210> 62
<211> 2871
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Arg Arg Gly Arg Leu Leu Glu Ile Ala Leu Gly Phe Thr Val Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ser Tyr Thr Ser His Gly Ala Asp Ala Asn Leu Glu Ala Gly
20 25 30
Asn Val Lys Glu Thr Arg Ala Ser Arg Ala Lys Arg Arg Gly Gly Gly
35 40 45
Gly His Asp Ala Leu Lys Gly Pro Asn Val Cys Gly Ser Arg Tyr Asn
50 55 60
Ala Tyr Cys Cys Pro Gly Trp Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Gln Cys
65 70 75 80
Ile Val Pro Ile Cys Arg His Ser Cys Gly Asp Gly Phe Cys Ser Arg
85 90 95
Pro Asn Met Cys Thr Cys Pro Ser Gly Gln Ile Ala Pro Ser Cys Gly
100 105 110
Ser Arg Ser Ile Gln His Cys Asn Ile Arg Cys Met Asn Gly Gly Ser
115 120 125
Cys Ser Asp Asp His Cys Leu Cys Gln Lys Gly Tyr Ile Gly Thr His
130 135 140
Cys Gly Gln Pro Val Cys Glu Ser Gly Cys Leu Asn Gly Gly Arg Cys
145 150 155 160
Val Ala Pro Asn Arg Cys Ala Cys Thr Tyr Gly Phe Thr Gly Pro Gln
165 170 175
Cys Glu Arg Asp Tyr Arg Thr Gly Pro Cys Phe Thr Val Ile Ser Asn
180 185 190
Gln Met Cys Gln Gly Gln Leu Ser Gly Ile Val Cys Thr Lys Thr Leu
195 200 205
Cys Cys Ala Thr Val Gly Arg Ala Trp Gly His Pro Cys Glu Met Cys
210 215 220
Pro Ala Gln Pro His Pro Cys Arg Arg Gly Phe Ile Pro Asn Ile Arg
225 230 235 240
Thr Gly Ala Cys Gln Asp Val Asp Glu Cys Gln Ala Ile Pro Gly Leu
245 250 255
Cys Gln Gly Gly Asn Cys Ile Asn Thr Val Gly Ser Phe Glu Cys Lys
260 265 270
Cys Pro Ala Gly His Lys Leu Asn Glu Val Ser Gln Lys Cys Glu Asp
275 280 285
Ile Asp Glu Cys Ser Thr Ile Pro Gly Ile Cys Glu Gly Gly Glu Cys
290 295 300
Thr Asn Thr Val Ser Ser Tyr Phe Cys Lys Cys Pro Pro Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Thr Ser Pro Asp Gly Thr Arg Cys Ile Asp Val Arg Pro Gly Tyr Cys
325 330 335
Tyr Thr Ala Leu Thr Asn Gly Arg Cys Ser Asn Gln Leu Pro Gln Ser
340 345 350
Ile Thr Lys Met Gln Cys Cys Cys Asp Ala Gly Arg Cys Trp Ser Pro
355 360 365
Gly Val Thr Val Ala Pro Glu Met Cys Pro Ile Arg Ala Thr Glu Asp
370 375 380
Phe Asn Lys Leu Cys Ser Val Pro Met Val Ile Pro Gly Arg Pro Glu
385 390 395 400
Tyr Pro Pro Pro Pro Leu Gly Pro Ile Pro Pro Val Leu Pro Val Pro
405 410 415
Pro Gly Phe Pro Pro Gly Pro Gln Ile Pro Val Pro Arg Pro Pro Val
420 425 430
Glu Tyr Leu Tyr Pro Ser Arg Glu Pro Pro Arg Val Leu Pro Val Asn
435 440 445
Val Thr Asp Tyr Cys Gln Leu Val Arg Tyr Leu Cys Gln Asn Gly Arg
450 455 460
Cys Ile Pro Thr Pro Gly Ser Tyr Arg Cys Glu Cys Asn Lys Gly Phe
465 470 475 480
Gln Leu Asp Leu Arg Gly Glu Cys Ile Asp Val Asp Glu Cys Glu Lys
485 490 495
Asn Pro Cys Ala Gly Gly Glu Cys Ile Asn Asn Gln Gly Ser Tyr Thr
500 505 510
Cys Gln Cys Arg Ala Gly Tyr Gln Ser Thr Leu Thr Arg Thr Glu Cys
515 520 525
Arg Asp Ile Asp Glu Cys Leu Gln Asn Gly Arg Ile Cys Asn Asn Gly
530 535 540
Arg Cys Ile Asn Thr Asp Gly Ser Phe His Cys Val Cys Asn Ala Gly
545 550 555 560
Phe His Val Thr Arg Asp Gly Lys Asn Cys Glu Asp Met Asp Glu Cys
565 570 575
Ser Ile Arg Asn Met Cys Leu Asn Gly Met Cys Ile Asn Glu Asp Gly
580 585 590
Ser Phe Lys Cys Ile Cys Lys Pro Gly Phe Gln Leu Ala Ser Asp Gly
595 600 605
Arg Tyr Cys Lys Asp Ile Asn Glu Cys Glu Thr Pro Gly Ile Cys Met
610 615 620
Asn Gly Arg Cys Val Asn Thr Asp Gly Ser Tyr Arg Cys Glu Cys Phe
625 630 635 640
Pro Gly Leu Ala Val Gly Leu Asp Gly Arg Val Cys Val Asp Thr His
645 650 655
Met Arg Ser Thr Cys Tyr Gly Gly Tyr Lys Arg Gly Gln Cys Ile Lys
660 665 670
Pro Leu Phe Gly Ala Val Thr Lys Ser Glu Cys Cys Cys Ala Ser Thr
675 680 685
Glu Tyr Ala Phe Gly Glu Pro Cys Gln Pro Cys Pro Ala Gln Asn Ser
690 695 700
Ala Glu Tyr Gln Ala Leu Cys Ser Ser Gly Pro Gly Met Thr Ser Ala
705 710 715 720
Gly Ser Asp Ile Asn Glu Cys Ala Leu Asp Pro Asp Ile Cys Pro Asn
725 730 735
Gly Ile Cys Glu Asn Leu Arg Gly Thr Tyr Lys Cys Ile Cys Asn Ser
740 745 750
Gly Tyr Glu Val Asp Ser Thr Gly Lys Asn Cys Val Asp Ile Asn Glu
755 760 765
Cys Val Leu Asn Ser Leu Leu Cys Asp Asn Gly Gln Cys Arg Asn Thr
770 775 780
Pro Gly Ser Phe Val Cys Thr Cys Pro Lys Gly Phe Ile Tyr Lys Pro
785 790 795 800
Asp Leu Lys Thr Cys Glu Asp Ile Asp Glu Cys Glu Ser Ser Pro Cys
805 810 815
Ile Asn Gly Val Cys Lys Asn Ser Pro Gly Ser Phe Ile Cys Glu Cys
820 825 830
Ser Ser Glu Ser Thr Leu Asp Pro Thr Lys Thr Ile Cys Ile Glu Thr
835 840 845
Ile Lys Gly Thr Cys Trp Gln Thr Val Ile Asp Gly Arg Cys Glu Ile
850 855 860
Asn Ile Asn Gly Ala Thr Leu Lys Ser Gln Cys Cys Ser Ser Leu Gly
865 870 875 880
Ala Ala Trp Gly Ser Pro Cys Thr Leu Cys Gln Val Asp Pro Ile Cys
885 890 895
Gly Lys Gly Tyr Ser Arg Ile Lys Gly Thr Gln Cys Glu Asp Ile Asp
900 905 910
Glu Cys Glu Val Phe Pro Gly Val Cys Lys Asn Gly Leu Cys Val Asn
915 920 925
Thr Arg Gly Ser Phe Lys Cys Gln Cys Pro Ser Gly Met Thr Leu Asp
930 935 940
Ala Thr Gly Arg Ile Cys Leu Asp Ile Arg Leu Glu Thr Cys Phe Leu
945 950 955 960
Arg Tyr Glu Asp Glu Glu Cys Thr Leu Pro Ile Ala Gly Arg His Arg
965 970 975
Met Asp Ala Cys Cys Cys Ser Val Gly Ala Ala Trp Gly Thr Glu Glu
980 985 990
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995 1000 1005
Pro Arg Gly Pro Gly Phe Ala Thr Lys Glu Ile Thr Asn Gly Lys Pro
1010 1015 1020
Phe Phe Lys Asp Ile Asn Glu Cys Lys Met Ile Pro Ser Leu Cys Thr
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His Gly Lys Cys Arg Asn Thr Ile Gly Ser Phe Lys Cys Arg Cys Asp
1045 1050 1055
Ser Gly Phe Ala Leu Asp Ser Glu Glu Arg Asn Cys Thr Asp Ile Asp
1060 1065 1070
Glu Cys Arg Ile Ser Pro Asp Leu Cys Gly Arg Gly Gln Cys Val Asn
1075 1080 1085
Thr Pro Gly Asp Phe Glu Cys Lys Cys Asp Glu Gly Tyr Glu Ser Gly
1090 1095 1100
Phe Met Met Met Lys Asn Cys Met Asp Ile Asp Glu Cys Gln Arg Asp
1105 1110 1115 1120
Pro Leu Leu Cys Arg Gly Gly Val Cys His Asn Thr Glu Gly Ser Tyr
1125 1130 1135
Arg Cys Glu Cys Pro Pro Gly His Gln Leu Ser Pro Asn Ile Ser Ala
1140 1145 1150
Cys Ile Asp Ile Asn Glu Cys Glu Leu Ser Ala His Leu Cys Pro Asn
1155 1160 1165
Gly Arg Cys Val Asn Leu Ile Gly Lys Tyr Gln Cys Ala Cys Asn Pro
1170 1175 1180
Gly Tyr His Ser Thr Pro Asp Arg Leu Phe Cys Val Asp Ile Asp Glu
1185 1190 1195 1200
Cys Ser Ile Met Asn Gly Gly Cys Glu Thr Phe Cys Thr Asn Ser Glu
1205 1210 1215
Gly Ser Tyr Glu Cys Ser Cys Gln Pro Gly Phe Ala Leu Met Pro Asp
1220 1225 1230
Gln Arg Ser Cys Thr Asp Ile Asp Glu Cys Glu Asp Asn Pro Asn Ile
1235 1240 1245
Cys Asp Gly Gly Gln Cys Thr Asn Ile Pro Gly Glu Tyr Arg Cys Leu
1250 1255 1260
Cys Tyr Asp Gly Phe Met Ala Ser Glu Asp Met Lys Thr Cys Val Asp
1265 1270 1275 1280
Val Asn Glu Cys Asp Leu Asn Pro Asn Ile Cys Leu Ser Gly Thr Cys
1285 1290 1295
Glu Asn Thr Lys Gly Ser Phe Ile Cys His Cys Asp Met Gly Tyr Ser
1300 1305 1310
Gly Lys Lys Gly Lys Thr Gly Cys Thr Asp Ile Asn Glu Cys Glu Ile
1315 1320 1325
Gly Ala His Asn Cys Gly Lys His Ala Val Cys Thr Asn Thr Ala Gly
1330 1335 1340
Ser Phe Lys Cys Ser Cys Ser Pro Gly Trp Ile Gly Asp Gly Ile Lys
1345 1350 1355 1360
Cys Thr Asp Leu Asp Glu Cys Ser Asn Gly Thr His Met Cys Ser Gln
1365 1370 1375
His Ala Asp Cys Lys Asn Thr Met Gly Ser Tyr Arg Cys Leu Cys Lys
1380 1385 1390
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1410 1415 1420
Gly Gly Tyr Arg Cys Glu Cys Asp Met Gly Phe Val Pro Ser Ala Asp
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Gly Lys Ala Cys Glu Asp Ile Asp Glu Cys Ser Leu Pro Asn Ile Cys
1445 1450 1455
Val Phe Gly Thr Cys His Asn Leu Pro Gly Leu Phe Arg Cys Glu Cys
1460 1465 1470
Glu Ile Gly Tyr Glu Leu Asp Arg Ser Gly Gly Asn Cys Thr Asp Val
1475 1480 1485
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1490 1495 1500
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Pro Thr Arg Val Gly Cys Val Asp Thr Arg Ser Gly Asn Cys Tyr Leu
1525 1530 1535
Asp Ile Arg Pro Arg Gly Asp Asn Gly Asp Thr Ala Cys Ser Asn Glu
1540 1545 1550
Ile Gly Val Gly Val Ser Lys Ala Ser Cys Cys Cys Ser Leu Gly Lys
1555 1560 1565
Ala Trp Gly Thr Pro Cys Glu Met Cys Pro Ala Val Asn Thr Ser Glu
1570 1575 1580
Tyr Lys Ile Leu Cys Pro Gly Gly Glu Gly Phe Arg Pro Asn Pro Ile
1585 1590 1595 1600
Thr Val Ile Leu Glu Asp Ile Asp Glu Cys Gln Glu Leu Pro Gly Leu
1605 1610 1615
Cys Gln Gly Gly Lys Cys Ile Asn Thr Phe Gly Ser Phe Gln Cys Arg
1620 1625 1630
Cys Pro Thr Gly Tyr Tyr Leu Asn Glu Asp Thr Arg Val Cys Asp Asp
1635 1640 1645
Val Asn Glu Cys Glu Thr Pro Gly Ile Cys Gly Pro Gly Thr Cys Tyr
1650 1655 1660
Asn Thr Val Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Cys Pro Pro Asp Tyr Met Gln
1665 1670 1675 1680
Val Asn Gly Gly Asn Asn Cys Met Asp Met Arg Arg Ser Leu Cys Tyr
1685 1690 1695
Arg Asn Tyr Tyr Ala Asp Asn Gln Thr Cys Asp Gly Glu Leu Leu Phe
1700 1705 1710
Asn Met Thr Lys Lys Met Cys Cys Cys Ser Tyr Asn Ile Gly Arg Ala
1715 1720 1725
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1730 1735 1740
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1940 1945 1950
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1955 1960 1965
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2020 2025 2030
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2035 2040 2045
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2050 2055 2060
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2085 2090 2095
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2100 2105 2110
Tyr Gly Ser Gly Ile Ile Val Gly Pro Asp Asp Ser Ala Val Asp Met
2115 2120 2125
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2130 2135 2140
Thr Asp Gly Ser Tyr Arg Cys Glu Cys Pro Phe Gly Tyr Ile Leu Ala
2145 2150 2155 2160
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2165 2170 2175
Gly Asn Gly Thr Cys Lys Asn Val Ile Gly Gly Phe Glu Cys Thr Cys
2180 2185 2190
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2195 2200 2205
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2210 2215 2220
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Asp Arg Arg Met Cys Lys Asp Glu Asp Glu Cys Glu Glu Gly Lys His
2245 2250 2255
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2290 2295 2300
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2340 2345 2350
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2355 2360 2365
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2370 2375 2380
Ala Phe Lys Lys Leu Cys Pro His Gly Arg Gly Phe Met Thr Asn Gly
2385 2390 2395 2400
Ala Asp Ile Asp Glu Cys Lys Val Ile His Asp Val Cys Arg Asn Gly
2405 2410 2415
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2420 2425 2430
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2610 2615 2620
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2645 2650 2655
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Leu Cys Pro Ala Lys Asp Ser Ala Glu Phe Gln Ala Leu Cys Ser Ser
660 665 670
Gly Leu Gly Ile Thr Thr Asp Gly Arg Asp Ile Asn Glu Cys Ala Leu
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Asp Pro Glu Val Cys Ala Asn Gly Val Cys Glu Asn Leu Arg Gly Ser
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Tyr Arg Cys Val Cys Asn Leu Gly Tyr Glu Ala Gly Ala Ser Gly Lys
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Asp Cys Thr Asp Val Asp Glu Cys Ala Leu Asn Ser Leu Leu Cys Asp
725 730 735
Asn Gly Trp Cys Gln Asn Ser Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Ser Cys Pro
740 745 750
Pro Gly Phe His Phe Trp Gln Asp Thr Glu Ile Cys Lys Asp Val Asp
755 760 765
Glu Cys Leu Ser Ser Pro Cys Val Ser Gly Val Cys Arg Asn Leu Ala
770 775 780
Gly Ser Tyr Thr Cys Lys Cys Gly Pro Gly Ser Arg Leu Asp Pro Ser
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850 855 860
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865 870 875 880
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885 890 895
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1025 1030 1035 1040
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Pro Gly Tyr Glu Ser Gly Phe Met Leu Met Lys Asn Cys Met Asp Val
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Gln Cys Ser Cys His Ala Gly Phe Gln Ser Thr Pro Asp Arg Gln Gly
1140 1145 1150
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1155 1160 1165
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1185 1190 1195 1200
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1205 1210 1215
Gly Gly His Arg Cys Leu Cys Tyr Asp Gly Phe Met Ala Thr Pro Asp
1220 1225 1230
Met Arg Thr Cys Val Asp Val Asp Glu Cys Asp Leu Asn Pro His Ile
1235 1240 1245
Cys Leu His Gly Asp Cys Glu Asn Thr Lys Gly Ser Phe Val Cys His
1250 1255 1260
Cys Gln Leu Gly Tyr Met Val Arg Lys Gly Ala Thr Gly Cys Ser Asp
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1365 1370 1375
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1940 1945 1950
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Gly Ser Phe Arg Cys Asp Cys Asp Glu Gly Phe Gln Pro Ser Pro Thr
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2805

Claims (1)

  1. この出願の明細書に記載された発明。
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